Nature.com 'ਤੇ ਜਾਣ ਲਈ ਤੁਹਾਡਾ ਧੰਨਵਾਦ।ਤੁਹਾਡੇ ਦੁਆਰਾ ਵਰਤੇ ਜਾ ਰਹੇ ਬ੍ਰਾਊਜ਼ਰ ਸੰਸਕਰਣ ਸੀਮਿਤ CSS ਸਮਰਥਨ ਹੈ।ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਅਨੁਭਵ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਸਿਫ਼ਾਰਿਸ਼ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਤੁਸੀਂ ਇੱਕ ਅੱਪਡੇਟ ਕੀਤੇ ਬ੍ਰਾਊਜ਼ਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ (ਜਾਂ ਇੰਟਰਨੈੱਟ ਐਕਸਪਲੋਰਰ ਵਿੱਚ ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਮੋਡ ਨੂੰ ਅਯੋਗ ਕਰੋ)।ਇਸ ਦੌਰਾਨ, ਨਿਰੰਤਰ ਸਮਰਥਨ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਸਟਾਈਲ ਅਤੇ ਜਾਵਾ ਸਕ੍ਰਿਪਟ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਾਈਟ ਨੂੰ ਰੈਂਡਰ ਕਰਾਂਗੇ।
ਇੱਕ ਭਰੋਸੇਮੰਦ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਜ਼ਰੂਰਤ ਹੈ ਜੋ ਡਰੱਗ ਦੀ ਜਾਂਚ ਲਈ ਦਿਲ ਦੇ ਸਰੀਰਕ ਵਾਤਾਵਰਣ ਨੂੰ ਸਹੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਦੁਬਾਰਾ ਤਿਆਰ ਕਰ ਸਕੇ।ਮਨੁੱਖੀ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਕਲਚਰ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਦੀ ਸੀਮਤ ਉਪਲਬਧਤਾ ਨੇ ਕਾਰਡੀਅਕ ਡਰੱਗ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦੀ ਗਲਤ ਵਿਆਖਿਆ ਕੀਤੀ ਹੈ।ਇੱਥੇ, ਅਸੀਂ ਇੱਕ ਕਾਰਡੀਆਕ ਟਿਸ਼ੂ ਕਲਚਰ ਮਾਡਲ (CTCM) ਵਿਕਸਿਤ ਕੀਤਾ ਹੈ ਜੋ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਮਕੈਨੀਕਲ ਤੌਰ 'ਤੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਕਾਰਡੀਅਕ ਚੱਕਰ ਦੇ ਸਿਸਟੋਲਿਕ ਅਤੇ ਡਾਇਸਟੋਲਿਕ ਪੜਾਵਾਂ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਸਰੀਰਕ ਤਣਾਅ ਤੋਂ ਗੁਜ਼ਰਦਾ ਹੈ।ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਦੇ 12 ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਬਾਅਦ, ਇਸ ਪਹੁੰਚ ਨੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਵਿਹਾਰਕਤਾ ਵਿੱਚ ਅੰਸ਼ਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੁਧਾਰ ਕੀਤਾ, ਪਰ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਢਾਂਚਾਗਤ ਅਖੰਡਤਾ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਨਹੀਂ ਰੱਖਿਆ।ਇਸ ਲਈ, ਛੋਟੇ ਅਣੂ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ ਸਾਡੇ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ 100 nM ਟ੍ਰਾਈਓਡੋਥਾਇਰੋਨਾਈਨ (T3) ਅਤੇ 1 μM ਡੈਕਸਮੇਥਾਸੋਨ (ਡੈਕਸ) ਦੇ ਜੋੜ ਨੇ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਟ੍ਰਕਚਰ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਿਆ।ਟੀ.ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਵਿੱਚ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦਾ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਖਿੱਚਣਾ ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫਿਕ ਕਾਰਡੀਅਕ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਕਾਰਡੀਅਕ ਸਟ੍ਰੈਚ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫਿਕ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਨ ਲਈ ਸੀਟੀਸੀਐਮ ਦੀ ਯੋਗਤਾ ਦਾ ਸਬੂਤ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਸਿੱਟੇ ਵਜੋਂ, ਸੀਟੀਸੀਐਮ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਵਿੱਚ ਦਿਲ ਦੇ ਸਰੀਰ ਵਿਗਿਆਨ ਅਤੇ ਪੈਥੋਫਿਜ਼ੀਓਲੋਜੀ ਦਾ ਮਾਡਲ ਬਣਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਭਰੋਸੇਯੋਗ ਡਰੱਗ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਨੂੰ ਸਮਰੱਥ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਕਲੀਨਿਕਲ ਖੋਜ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ, ਭਰੋਸੇਮੰਦ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਜੋ ਮਨੁੱਖੀ ਦਿਲ ਦੇ ਸਰੀਰਕ ਵਾਤਾਵਰਣ ਨੂੰ ਸਹੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਦੁਬਾਰਾ ਪੈਦਾ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ.ਅਜਿਹੀਆਂ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਨੂੰ ਬਦਲੇ ਹੋਏ ਮਕੈਨੀਕਲ ਸਟ੍ਰੈਚ, ਦਿਲ ਦੀ ਗਤੀ, ਅਤੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫਿਜ਼ੀਓਲੋਜੀਕਲ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਨੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ।ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਮਾਡਲਾਂ ਨੂੰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਨੁੱਖੀ ਦਿਲ ਵਿੱਚ ਨਸ਼ਿਆਂ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਣ ਵਿੱਚ ਸੀਮਤ ਭਰੋਸੇਯੋਗਤਾ ਦੇ ਨਾਲ ਕਾਰਡੀਆਕ ਫਿਜ਼ੀਓਲੋਜੀ ਲਈ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਪਲੇਟਫਾਰਮ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ1,2।ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਆਦਰਸ਼ ਕਾਰਡੀਆਕ ਟਿਸ਼ੂ ਕਲਚਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਮਾਡਲ (ਸੀਟੀਸੀਐਮ) ਇੱਕ ਮਾਡਲ ਹੈ ਜੋ ਮਨੁੱਖੀ ਦਿਲ ਦੇ ਸਰੀਰ ਵਿਗਿਆਨ ਅਤੇ ਪੈਥੋਫਿਜ਼ੀਓਲੋਜੀ ਨੂੰ ਸਹੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਪੁਨਰ-ਨਿਰਮਾਣ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਇਲਾਜ ਅਤੇ ਫਾਰਮਾਕੋਲੋਜੀਕਲ ਦਖਲਅੰਦਾਜ਼ੀ ਲਈ ਬਹੁਤ ਹੀ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਅਤੇ ਖਾਸ ਹੈ।ਅਜਿਹੀ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਅਣਹੋਂਦ ਦਿਲ ਦੀ ਅਸਫਲਤਾ 4,5 ਲਈ ਨਵੇਂ ਇਲਾਜਾਂ ਦੀ ਖੋਜ ਨੂੰ ਸੀਮਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਮਾਰਕੀਟ ਤੋਂ ਬਾਹਰ ਨਿਕਲਣ ਦੇ ਇੱਕ ਵੱਡੇ ਕਾਰਨ ਵਜੋਂ ਡਰੱਗ ਕਾਰਡੀਓਟੌਕਸਿਟੀ ਨੂੰ ਅਗਵਾਈ ਕਰਦੀ ਹੈ।
ਪਿਛਲੇ ਦਹਾਕੇ ਵਿੱਚ, ਅੱਠ ਗੈਰ-ਕਾਰਡੀਓਵੈਸਕੁਲਰ ਦਵਾਈਆਂ ਨੂੰ ਕਲੀਨਿਕਲ ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਵਾਪਸ ਲੈ ਲਿਆ ਗਿਆ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਉਹ QT ਅੰਤਰਾਲ ਨੂੰ ਲੰਮਾ ਕਰਨ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦੇ ਹਨ ਜਿਸ ਨਾਲ ਵੈਂਟ੍ਰਿਕੂਲਰ ਐਰੀਥਮੀਆ ਅਤੇ ਅਚਾਨਕ ਮੌਤ ਹੁੰਦੀ ਹੈ7।ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਕਾਰਡੀਓਵੈਸਕੁਲਰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਜ਼ਹਿਰੀਲੇਪਣ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ ਭਰੋਸੇਮੰਦ ਪ੍ਰੀ-ਕਲੀਨਿਕਲ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਰਣਨੀਤੀਆਂ ਦੀ ਵੱਧਦੀ ਲੋੜ ਹੈ।ਨਸ਼ੀਲੇ ਪਦਾਰਥਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਅਤੇ ਜ਼ਹਿਰੀਲੇਪਣ ਦੀ ਜਾਂਚ ਵਿੱਚ ਮਨੁੱਖੀ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਪਲੂਰੀਪੋਟੈਂਟ ਸਟੈਮ ਸੈੱਲ-ਉਤਪੰਨ ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟਸ (hiPS-CM) ਦੀ ਤਾਜ਼ਾ ਵਰਤੋਂ ਇਸ ਸਮੱਸਿਆ ਦਾ ਅੰਸ਼ਕ ਹੱਲ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੀ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, hiPS-CMs ਦੀ ਅਪੂਰਣ ਪ੍ਰਕਿਰਤੀ ਅਤੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਬਹੁ-ਸੈਲੂਲਰ ਗੁੰਝਲਤਾ ਦੀ ਘਾਟ ਇਸ ਵਿਧੀ ਦੀਆਂ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਸੀਮਾਵਾਂ ਹਨ।ਹਾਲੀਆ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਇਸ ਸੀਮਾ ਨੂੰ ਆਪਣੇ ਆਪ ਸੁੰਗੜਨ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਤੋਂ ਥੋੜ੍ਹੀ ਦੇਰ ਬਾਅਦ ਅਤੇ ਸਮੇਂ ਦੇ ਨਾਲ ਹੌਲੀ ਹੌਲੀ ਬਿਜਲਈ ਉਤੇਜਨਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦੇ ਹੋਏ ਕਾਰਡੀਅਕ ਟਿਸ਼ੂ ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਲ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ hiPS-CM ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਅੰਸ਼ਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਦੂਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਹਨਾਂ hiPS-CM ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਬਾਲਗ ਮਾਇਓਕਾਰਡੀਅਮ ਦੇ ਪਰਿਪੱਕ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫਿਜ਼ੀਓਲੋਜੀਕਲ ਅਤੇ ਸੰਕੁਚਿਤ ਗੁਣਾਂ ਦੀ ਘਾਟ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਮਨੁੱਖੀ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਇੱਕ ਵਧੇਰੇ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਬਣਤਰ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੈੱਲ ਕਿਸਮਾਂ ਦਾ ਇੱਕ ਵਿਪਰੀਤ ਮਿਸ਼ਰਣ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਐਂਡੋਥੈਲੀਅਲ ਸੈੱਲ, ਨਿਊਰੋਨਸ ਅਤੇ ਸਟ੍ਰੋਮਲ ਫਾਈਬਰੋਬਲਾਸਟ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਕਿ ਐਕਸਟਰਸੈਲੂਲਰ ਮੈਟਰਿਕਸ ਪ੍ਰੋਟੀਨਾਂ ਦੇ ਖਾਸ ਸੈੱਟਾਂ ਦੁਆਰਾ ਆਪਸ ਵਿੱਚ ਜੁੜੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਬਾਲਗ ਥਣਧਾਰੀ ਦਿਲ ਵਿੱਚ ਗੈਰ-ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟ ਆਬਾਦੀ 11,12,13 ਦੀ ਇਹ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਵਿਅਕਤੀਗਤ ਸੈੱਲ ਕਿਸਮਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਕਾਰਡੀਆਕ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਮਾਡਲਿੰਗ ਲਈ ਇੱਕ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਰੁਕਾਵਟ ਹੈ।ਇਹ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਸੀਮਾਵਾਂ ਸਰੀਰਕ ਅਤੇ ਰੋਗ ਸੰਬੰਧੀ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਅਧੀਨ ਬਰਕਰਾਰ ਮਾਇਓਕਾਰਡਿਅਲ ਟਿਸ਼ੂ ਨੂੰ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਦੇ ਮਹੱਤਵ 'ਤੇ ਜ਼ੋਰ ਦਿੰਦੀਆਂ ਹਨ।
ਮਨੁੱਖੀ ਦਿਲ ਦੇ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਪਤਲੇ (300 µm) ਭਾਗ ਬਰਕਰਾਰ ਮਨੁੱਖੀ ਮਾਇਓਕਾਰਡੀਅਮ ਦਾ ਇੱਕ ਸ਼ਾਨਦਾਰ ਮਾਡਲ ਸਾਬਤ ਹੋਏ ਹਨ।ਇਹ ਵਿਧੀ ਮਨੁੱਖੀ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਸਮਾਨ ਇੱਕ ਸੰਪੂਰਨ 3D ਬਹੁ-ਸੈਲੂਲਰ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੀ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, 2019 ਤੱਕ, ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਛੋਟੇ (24 ਘੰਟੇ) ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਬਚਾਅ ਦੁਆਰਾ ਸੀਮਿਤ ਸੀ।ਇਹ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਕਾਰਕਾਂ ਦੇ ਕਾਰਨ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਭੌਤਿਕ-ਮਕੈਨੀਕਲ ਖਿਚਾਅ ਦੀ ਘਾਟ, ਹਵਾ-ਤਰਲ ਇੰਟਰਫੇਸ, ਅਤੇ ਸਧਾਰਨ ਮੀਡੀਆ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ ਜੋ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀਆਂ ਲੋੜਾਂ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਨਹੀਂ ਕਰਦੇ ਹਨ।2019 ਵਿੱਚ, ਕਈ ਖੋਜ ਸਮੂਹਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਕਾਰਡੀਅਕ ਟਿਸ਼ੂ ਕਲਚਰ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਵਿੱਚ ਮਕੈਨੀਕਲ ਕਾਰਕਾਂ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਨ ਨਾਲ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਜੀਵਨ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਦਿਲ ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਕਾਰਡੀਅਕ ਪੈਥੋਲੋਜੀ ਦੀ ਨਕਲ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਦੋ ਸ਼ਾਨਦਾਰ ਅਧਿਐਨਾਂ 17 ਅਤੇ 18 ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਅਨਿਅਕਸ਼ੀਅਲ ਮਕੈਨੀਕਲ ਲੋਡਿੰਗ ਦਾ ਕਾਰਡੀਆਕ ਫੀਨੋਟਾਈਪ 'ਤੇ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਪ੍ਰਭਾਵ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਹਨਾਂ ਅਧਿਐਨਾਂ ਵਿੱਚ ਕਾਰਡੀਆਕ ਚੱਕਰ ਦੀ ਗਤੀਸ਼ੀਲ ਤਿੰਨ-ਅਯਾਮੀ ਭੌਤਿਕ-ਮਕੈਨੀਕਲ ਲੋਡਿੰਗ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਨਹੀਂ ਕੀਤੀ ਗਈ, ਕਿਉਂਕਿ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਜਾਂ ਤਾਂ ਆਈਸੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਟੈਂਸਿਲ ਫੋਰਸ 17 ਜਾਂ ਲੀਨੀਅਰ ਆਕਸੋਟੋਨਿਕ ਲੋਡਿੰਗ 18 ਨਾਲ ਲੋਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਟਿਸ਼ੂ ਖਿੱਚਣ ਦੇ ਇਹਨਾਂ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਦਿਲ ਦੇ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਦਬਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਅਸਧਾਰਨ ਤਣਾਅ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਜੀਨਾਂ ਦੀ ਓਵਰਪ੍ਰੈਸ਼ਨ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਪਿਟੌਲਿਸ ਐਟ ਅਲ.19 ਨੇ ਫੋਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਡਿਊਸਰ ਫੀਡਬੈਕ ਅਤੇ ਟੈਂਸ਼ਨ ਡਰਾਈਵ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਕਾਰਡੀਅਕ ਚੱਕਰ ਦੇ ਪੁਨਰ ਨਿਰਮਾਣ ਲਈ ਇੱਕ ਡਾਇਨਾਮਿਕ ਹਾਰਟ ਸਲਾਈਸ ਕਲਚਰ ਬਾਥ ਵਿਕਸਿਤ ਕੀਤਾ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ ਇਹ ਸਿਸਟਮ ਵਿਟਰੋ ਕਾਰਡੀਆਕ ਚੱਕਰ ਮਾਡਲਿੰਗ ਵਿੱਚ ਵਧੇਰੇ ਸਟੀਕਤਾ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਵਿਧੀ ਦੀ ਗੁੰਝਲਤਾ ਅਤੇ ਘੱਟ ਥ੍ਰੁਪੁੱਟ ਇਸ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੇ ਉਪਯੋਗ ਨੂੰ ਸੀਮਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ।ਸਾਡੀ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਨੇ ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ 6 ਦਿਨਾਂ ਤੱਕ 20,21 ਤੱਕ ਪੋਰਸੀਨ ਅਤੇ ਮਨੁੱਖੀ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਲਈ ਇਲੈਕਟ੍ਰੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਅਤੇ ਇੱਕ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਮਾਧਿਅਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਇੱਕ ਸਰਲ ਕਲਚਰ ਸਿਸਟਮ ਵਿਕਸਿਤ ਕੀਤਾ ਹੈ।
ਮੌਜੂਦਾ ਹੱਥ-ਲਿਖਤ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਪੋਰਸੀਨ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਇੱਕ ਕਾਰਡੀਆਕ ਟਿਸ਼ੂ ਕਲਚਰ ਮਾਡਲ (CTCM) ਦਾ ਵਰਣਨ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਜੋ ਕਿ ਦਿਲ ਦੇ ਚੱਕਰ ਦੌਰਾਨ ਤਿੰਨ-ਅਯਾਮੀ ਕਾਰਡੀਆਕ ਫਿਜ਼ੀਓਲੋਜੀ ਅਤੇ ਪੈਥੋਫਿਜ਼ੀਓਲੋਜੀਕਲ ਡਿਸਟੈਂਸ਼ਨ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਹਾਸੋਹੀਣੀ ਸੰਕੇਤਾਂ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਇਹ CTCM ਪੂਰਵ-ਕਲੀਨਿਕਲ ਡਰੱਗ ਪੂਰਵ-ਅਨੁਮਾਨ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਨੂੰ ਇੱਕ ਲਾਗਤ-ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ, ਮੱਧ-ਥਰੂਪੁਟ ਕਾਰਡਿਅਕ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਕੇ ਪਹਿਲਾਂ ਕਦੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਨਹੀਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਪੱਧਰ ਤੱਕ ਵਧਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜੋ ਪ੍ਰੀ-ਕਲੀਨਿਕਲ ਡਰੱਗ ਟੈਸਟਿੰਗ ਲਈ ਥਣਧਾਰੀ ਦਿਲ ਦੇ ਸਰੀਰ ਵਿਗਿਆਨ/ਪੈਥੋਫਿਜ਼ੀਓਲੋਜੀ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਹੈਮੋਡਾਇਨਾਮਿਕ ਮਕੈਨੀਕਲ ਸਿਗਨਲ ਵਿਟਰੋ 22,23,24 ਵਿੱਚ ਕਾਰਡੀਓਮਾਈਸਾਈਟ ਫੰਕਸ਼ਨ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਣ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਮੌਜੂਦਾ ਹੱਥ-ਲਿਖਤ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਇੱਕ CTCM (ਚਿੱਤਰ 1a) ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ ਹੈ ਜੋ ਸਰੀਰਕ ਫ੍ਰੀਕੁਐਂਸੀ (1.2 Hz, 72 ਬੀਟਸ ਪ੍ਰਤੀ ਮਿੰਟ) 'ਤੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੀਕਲ ਅਤੇ ਮਕੈਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਕੇ ਬਾਲਗ ਦਿਲ ਦੇ ਵਾਤਾਵਰਣ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਡਾਇਸਟੋਲ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਟਿਸ਼ੂ ਖਿੱਚਣ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ, ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਆਕਾਰ ਨੂੰ 25% (ਚਿੱਤਰ 1b) ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਇੱਕ 3D ਪ੍ਰਿੰਟਿੰਗ ਯੰਤਰ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।C-PACE ਸਿਸਟਮ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਇਲੈਕਟ੍ਰੀਕਲ ਪੇਸਿੰਗ ਨੂੰ ਕਾਰਡੀਅਕ ਚੱਕਰ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਦੁਬਾਰਾ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਡਾਟਾ ਪ੍ਰਾਪਤੀ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਸਿਸਟੋਲ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ 100 ms ਸ਼ੁਰੂ ਕਰਨ ਦਾ ਸਮਾਂ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਟਿਸ਼ੂ ਕਲਚਰ ਸਿਸਟਮ ਉੱਪਰੀ ਚੈਂਬਰ ਵਿੱਚ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦਾ ਵਿਸਤਾਰ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਲਚਕਦਾਰ ਸਿਲੀਕੋਨ ਝਿੱਲੀ ਨੂੰ ਚੱਕਰਵਰਤੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਫੈਲਾਉਣ ਲਈ ਇੱਕ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮੇਬਲ ਨਿਊਮੈਟਿਕ ਐਕਟੁਏਟਰ (LB ਇੰਜੀਨੀਅਰਿੰਗ, ਜਰਮਨੀ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਸਿਸਟਮ ਨੂੰ ਇੱਕ ਦਬਾਅ ਟ੍ਰਾਂਸਡਿਊਸਰ ਦੁਆਰਾ ਇੱਕ ਬਾਹਰੀ ਏਅਰ ਲਾਈਨ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਦਬਾਅ (± 1 mmHg) ਅਤੇ ਸਮਾਂ (± 1 ms) (ਚਿੱਤਰ 1c) ਨੂੰ ਸਹੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਅਨੁਕੂਲ ਕਰਨਾ ਸੰਭਵ ਹੋ ਗਿਆ ਸੀ।
a ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨ ਨੂੰ ਡਿਵਾਈਸ ਦੇ ਕਲਚਰ ਚੈਂਬਰ ਦੇ ਅੰਦਰ, ਨੀਲੇ ਰੰਗ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ 7 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਸਪੋਰਟ ਰਿੰਗ ਨਾਲ ਨੱਥੀ ਕਰੋ।ਕਲਚਰ ਚੈਂਬਰ ਨੂੰ ਏਅਰ ਚੈਂਬਰ ਤੋਂ ਇੱਕ ਪਤਲੀ ਲਚਕਦਾਰ ਸਿਲੀਕੋਨ ਝਿੱਲੀ ਦੁਆਰਾ ਵੱਖ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਲੀਕ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਹਰੇਕ ਚੈਂਬਰ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਇੱਕ ਗੈਸਕੇਟ ਰੱਖੋ।ਡਿਵਾਈਸ ਦੇ ਢੱਕਣ ਵਿੱਚ ਗ੍ਰਾਫਾਈਟ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਬਿਜਲੀ ਦੀ ਉਤੇਜਨਾ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੇ ਹਨ।b ਵੱਡੇ ਟਿਸ਼ੂ ਯੰਤਰ, ਗਾਈਡ ਰਿੰਗ ਅਤੇ ਸਪੋਰਟ ਰਿੰਗ ਦੀ ਯੋਜਨਾਬੱਧ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧਤਾ।ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨ (ਭੂਰੇ) ਨੂੰ ਡਿਵਾਈਸ ਦੇ ਬਾਹਰੀ ਕਿਨਾਰੇ 'ਤੇ ਗਾਈਡ ਰਿੰਗ ਦੇ ਨਾਲ ਵੱਡੇ ਆਕਾਰ ਦੇ ਡਿਵਾਈਸ 'ਤੇ ਰੱਖਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਗਾਈਡ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਹਿੱਸੇ 'ਤੇ ਟਿਸ਼ੂ ਐਕਰੀਲਿਕ ਅਡੈਸਿਵ ਨਾਲ ਕੋਟ ਕੀਤੇ ਸਪੋਰਟ ਰਿੰਗ ਨੂੰ ਧਿਆਨ ਨਾਲ ਰੱਖੋ।c ਇੱਕ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮੇਬਲ ਨਿਊਮੈਟਿਕ ਐਕਚੂਏਟਰ (PPD) ਦੁਆਰਾ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਏਅਰ ਚੈਂਬਰ ਪ੍ਰੈਸ਼ਰ ਦੇ ਇੱਕ ਫੰਕਸ਼ਨ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਬਿਜਲੀ ਦੇ ਉਤੇਜਨਾ ਦਾ ਸਮਾਂ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਗ੍ਰਾਫ਼।ਪ੍ਰੈਸ਼ਰ ਸੈਂਸਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਬਿਜਲਈ ਉਤੇਜਨਾ ਨੂੰ ਸਮਕਾਲੀ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਡਾਟਾ ਪ੍ਰਾਪਤੀ ਯੰਤਰ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਜਦੋਂ ਕਲਚਰ ਚੈਂਬਰ ਵਿੱਚ ਦਬਾਅ ਨਿਰਧਾਰਤ ਥ੍ਰੈਸ਼ਹੋਲਡ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਇੱਕ ਨਬਜ਼ ਸਿਗਨਲ C-PACE-EM ਨੂੰ ਬਿਜਲੀ ਦੇ ਉਤੇਜਨਾ ਨੂੰ ਚਾਲੂ ਕਰਨ ਲਈ ਭੇਜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।d ਇਨਕਿਊਬੇਟਰ ਸ਼ੈਲਫ 'ਤੇ ਰੱਖੇ ਗਏ ਚਾਰ CTCM ਦੀ ਤਸਵੀਰ।ਚਾਰ ਯੰਤਰ ਇੱਕ PPD ਨਾਲ ਇੱਕ ਨਯੂਮੈਟਿਕ ਸਰਕਟ ਦੁਆਰਾ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਹਨ, ਅਤੇ ਦਬਾਅ ਸੈਂਸਰ ਨਯੂਮੈਟਿਕ ਸਰਕਟ ਵਿੱਚ ਦਬਾਅ ਦੀ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕਰਨ ਲਈ ਹੀਮੋਸਟੈਟਿਕ ਵਾਲਵ ਵਿੱਚ ਪਾਏ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।ਹਰੇਕ ਯੰਤਰ ਵਿੱਚ ਛੇ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।
ਇੱਕ ਸਿੰਗਲ ਨਿਊਮੈਟਿਕ ਐਕਟੁਏਟਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਅਸੀਂ 4 CTCM ਯੰਤਰਾਂ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰਨ ਦੇ ਯੋਗ ਸੀ, ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਹਰ ਇੱਕ 6 ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨ (ਚਿੱਤਰ 1d) ਨੂੰ ਰੱਖ ਸਕਦਾ ਸੀ।CTCM ਵਿੱਚ, ਹਵਾ ਦੇ ਚੈਂਬਰ ਵਿੱਚ ਹਵਾ ਦੇ ਦਬਾਅ ਨੂੰ ਤਰਲ ਚੈਂਬਰ ਵਿੱਚ ਸਮਕਾਲੀ ਦਬਾਅ ਵਿੱਚ ਬਦਲਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜੇ (ਚਿੱਤਰ 2a ਅਤੇ ਸਪਲੀਮੈਂਟਰੀ ਮੂਵੀ 1) ਦੇ ਸਰੀਰਕ ਵਿਸਤਾਰ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।80 mm Hg 'ਤੇ ਟਿਸ਼ੂ ਸਟ੍ਰੈਚ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ।ਕਲਾ।25% (ਚਿੱਤਰ 2b) ਦੁਆਰਾ ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨਾਂ ਨੂੰ ਖਿੱਚਿਆ ਗਿਆ.ਇਹ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤਤਾ ਖਿਚਾਅ 17,19,25 ਦੇ ਆਮ ਦਿਲ ਦੇ ਸੈਕਸ਼ਨ ਦੀ ਸੰਕੁਚਨਤਾ ਲਈ 2.2–2.3 µm ਦੀ ਸਰੀਰਕ ਸਾਰਕੋਮੇਰ ਲੰਬਾਈ ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦਾ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ।ਕਸਟਮ ਕੈਮਰਾ ਸੈਟਿੰਗਾਂ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 1) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਟਿਸ਼ੂ ਅੰਦੋਲਨ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਟਿਸ਼ੂ ਅੰਦੋਲਨ ਦਾ ਐਪਲੀਟਿਊਡ ਅਤੇ ਵੇਗ (ਚਿੱਤਰ 2c, d) ਸਿਸਟੋਲ ਅਤੇ ਡਾਇਸਟੋਲ (ਚਿੱਤਰ 2b) ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਕਾਰਡੀਅਕ ਚੱਕਰ ਅਤੇ ਸਮੇਂ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਖਿੱਚਣ ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦਾ ਹੈ।ਸੰਕੁਚਨ ਅਤੇ ਆਰਾਮ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਖਿਰਦੇ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਖਿੱਚ ਅਤੇ ਗਤੀ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਵਿੱਚ 12 ਦਿਨਾਂ ਤੱਕ ਸਥਿਰ ਰਹੀ (ਚਿੱਤਰ 2f)।ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਸੰਕੁਚਨਤਾ 'ਤੇ ਬਿਜਲਈ ਉਤੇਜਨਾ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਇੱਕ ਸ਼ੈਡਿੰਗ ਐਲਗੋਰਿਦਮ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 2a,b) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਵਿਗਾੜ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਵਿਧੀ ਵਿਕਸਿਤ ਕੀਤੀ ਹੈ ਅਤੇ ਬਿਜਲਈ ਉਤੇਜਨਾ ਦੇ ਨਾਲ ਅਤੇ ਬਿਨਾਂ ਵਿਗਾੜਾਂ ਵਿੱਚ ਫਰਕ ਕਰਨ ਦੇ ਯੋਗ ਸੀ।ਦਿਲ ਦਾ ਉਹੀ ਭਾਗ (ਚਿੱਤਰ 2f)।ਕੱਟ (R6-9) ਦੇ ਚਲਣਯੋਗ ਖੇਤਰ ਵਿੱਚ, ਬਿਜਲਈ ਉਤੇਜਨਾ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਵੋਲਟੇਜ ਬਿਜਲਈ ਉਤੇਜਨਾ ਦੀ ਅਣਹੋਂਦ ਨਾਲੋਂ 20% ਵੱਧ ਸੀ, ਜੋ ਕਿ ਕੰਟਰੈਕਟਾਈਲ ਫੰਕਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਬਿਜਲਈ ਉਤੇਜਨਾ ਦੇ ਯੋਗਦਾਨ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਹਵਾ ਚੈਂਬਰ ਪ੍ਰੈਸ਼ਰ, ਤਰਲ ਚੈਂਬਰ ਪ੍ਰੈਸ਼ਰ, ਅਤੇ ਟਿਸ਼ੂ ਅੰਦੋਲਨ ਮਾਪ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਟਰੇਸ ਇਸ ਗੱਲ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਚੈਂਬਰ ਪ੍ਰੈਸ਼ਰ ਤਰਲ ਚੈਂਬਰ ਦੇ ਦਬਾਅ ਨੂੰ ਬਦਲਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਦੀ ਅਨੁਸਾਰੀ ਗਤੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।b ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਖਿਚਾਅ (ਸੰਤਰੀ) ਦੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਖਿੱਚ (ਨੀਲੇ) ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਨਿਸ਼ਾਨ।c ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਦੀ ਮਾਪੀ ਗਤੀ ਗਤੀ ਦੀ ਮਾਪੀ ਗਤੀ ਦੇ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।(d) ਦਿਲ ਦੇ ਇੱਕ ਟੁਕੜੇ ਵਿੱਚ ਚੱਕਰੀ ਗਤੀ (ਨੀਲੀ ਰੇਖਾ) ਅਤੇ ਵੇਗ (ਸੰਤਰੀ ਬਿੰਦੀ ਵਾਲੀ ਰੇਖਾ) ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਟ੍ਰੈਜੈਕਟਰੀਜ਼।e ਚੱਕਰ ਦੇ ਸਮੇਂ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (n = 19 ਟੁਕੜੇ ਪ੍ਰਤੀ ਸਮੂਹ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ), ਸੰਕੁਚਨ ਸਮਾਂ (n = 19 ਟੁਕੜੇ ਪ੍ਰਤੀ ਸਮੂਹ), ਆਰਾਮ ਦਾ ਸਮਾਂ (n = 19 ਟੁਕੜੇ ਪ੍ਰਤੀ ਸਮੂਹ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ), ਟਿਸ਼ੂ ਅੰਦੋਲਨ (n = 25)।ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ ਟੁਕੜੇ)/ਸਮੂਹ), ਪੀਕ ਸਿਸਟੋਲਿਕ ਵੇਗ (n = 24(D0), 25(D12) ਟੁਕੜੇ/ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ ਸਮੂਹ) ਅਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ ਪੀਕ ਆਰਾਮ ਦਰ (n=24(D0), 25 (D12) ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ)।ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੇ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਨੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਮਾਪਦੰਡ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਨਹੀਂ ਦਿਖਾਇਆ।f (ਲਾਲ) ਅਤੇ ਬਿਨਾਂ (ਨੀਲੇ) ਬਿਜਲਈ ਉਤੇਜਨਾ ਦੇ ਨਾਲ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਤਣਾਅ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਟਰੇਸ, ਉਸੇ ਭਾਗ ਤੋਂ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਦਸ ਖੇਤਰੀ ਖੇਤਰ।ਹੇਠਲੇ ਪੈਨਲ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਦਸ ਖੇਤਰਾਂ ਵਿੱਚ ਬਿਜਲਈ ਉਤੇਜਨਾ ਦੇ ਨਾਲ ਅਤੇ ਬਿਨਾਂ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ ਤਣਾਅ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਅੰਤਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। (n = 8 ਟੁਕੜੇ/ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ ਸਮੂਹ, ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦਾ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ****p <0.0001, **p <0.01, *p <0.05)। (n = 8 ਟੁਕੜੇ/ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ ਸਮੂਹ, ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦਾ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ****p <0.0001, **p <0.01, *p <0.05)। (n = 8 срезов/группу от разных свиней, проводится двусторонний t-критерий Стьюдента; ****p<0,0001, **p<0,01, *p<0,05)। (n = ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ 8 ਭਾਗ/ਸਮੂਹ, ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦਾ ਟੀ-ਟੈਸਟ; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05)। （n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验；**p <0.0001，**p <0.01,*p <0.05）. （n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验；**p <0.0001，**p <0.01,*p <0.05）. (n = 8 срезов/группу, от разных свиней, двусторонний критерий Стьюдента; ****p <0,0001, **p <0,01, *p <0,05)। (n = 8 ਭਾਗ/ਸਮੂਹ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ, ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦਾ ਟੀ-ਟੈਸਟ; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05)।ਗਲਤੀ ਪੱਟੀਆਂ ਮੱਧਮਾਨ ± ਮਿਆਰੀ ਵਿਵਹਾਰ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀਆਂ ਹਨ।
ਸਾਡੀ ਪਿਛਲੀ ਸਥਿਰ ਬਾਇਓਮੀਮੈਟਿਕ ਹਾਰਟ ਸਲਾਈਸ ਕਲਚਰ ਸਿਸਟਮ [20, 21] ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਬਿਜਲਈ ਉਤੇਜਨਾ ਨੂੰ ਲਾਗੂ ਕਰਕੇ ਅਤੇ ਮੱਧਮ ਰਚਨਾ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾ ਕੇ 6 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਵਿਹਾਰਕਤਾ, ਕਾਰਜ ਅਤੇ ਢਾਂਚਾਗਤ ਅਖੰਡਤਾ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਿਆ।ਹਾਲਾਂਕਿ, 10 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ, ਇਹ ਅੰਕੜੇ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਘਟ ਗਏ।ਅਸੀਂ ਸਾਡੀ ਪਿਛਲੀ ਸਥਿਰ ਬਾਇਓਮੀਮੈਟਿਕ ਕਲਚਰ ਸਿਸਟਮ 20, 21 ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਥਿਤੀਆਂ (Ctrl) ਵਿੱਚ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਭਾਗਾਂ ਦਾ ਹਵਾਲਾ ਦੇਵਾਂਗੇ ਅਤੇ ਅਸੀਂ MC ਹਾਲਤਾਂ ਅਤੇ ਸਮਕਾਲੀ ਮਕੈਨੀਕਲ ਅਤੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੀਕਲ ਸਟੀਮੂਲੇਸ਼ਨ (CTCM) ਦੇ ਤਹਿਤ ਆਪਣੇ ਪਹਿਲਾਂ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਮਾਧਿਅਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਾਂਗੇ।ਬੁਲਾਇਆ .ਪਹਿਲਾਂ, ਅਸੀਂ ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕੀਤਾ ਕਿ ਬਿਜਲਈ ਉਤੇਜਨਾ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਮਕੈਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ 6 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਵਿਹਾਰਕਤਾ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਲਈ ਨਾਕਾਫ਼ੀ ਸੀ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 3a,b)।ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ, STCM ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਫਿਜ਼ੀਓ-ਮਕੈਨੀਕਲ ਅਤੇ ਬਿਜਲਈ ਉਤੇਜਨਾ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਦੇ ਨਾਲ, 12-ਦਿਨ ਦੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ MS ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਤਹਿਤ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਵਾਂਗ ਹੀ ਰਹੀ, ਪਰ Ctrl ਹਾਲਤਾਂ ਦੇ ਅਧੀਨ ਨਹੀਂ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ MTT ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ (ਚਿੱਤਰ 1) ਦੁਆਰਾ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ।3a)ਇਹ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਕਾਰਡੀਅਕ ਚੱਕਰ ਦਾ ਮਕੈਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਅਤੇ ਸਿਮੂਲੇਸ਼ਨ ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨਾਂ ਨੂੰ ਸਾਡੀ ਪਿਛਲੀ ਸਥਿਰ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਦੁੱਗਣੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਵਿਹਾਰਕ ਰੱਖ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਕਾਰਡੀਆਕ ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ ਟੀ ਅਤੇ ਕਨੈਕਸਿਨ 43 ਦੀ ਇਮਯੂਨੋਲੇਬਲਿੰਗ ਦੁਆਰਾ ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨਾਂ ਦੀ ਸੰਰਚਨਾਤਮਕ ਅਖੰਡਤਾ ਦੇ ਮੁਲਾਂਕਣ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਕਨੈਕਸੀਨ 43 ਸਮੀਕਰਨ ਉਸੇ ਦਿਨ ਨਿਯੰਤਰਣਾਂ ਨਾਲੋਂ 12ਵੇਂ ਦਿਨ ਐਮਸੀ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੀ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਯੂਨੀਫਾਰਮ ਕਨੈਕਸਿਨ 43 ਸਮੀਕਰਨ ਅਤੇ Z- ਡਿਸਕ ਦੇ ਗਠਨ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਕਾਇਮ ਨਹੀਂ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ (ਚਿੱਤਰ 3b).ਅਸੀਂ ਟਿਸ਼ੂ ਸਟ੍ਰਕਚਰਲ ਅਖੰਡਤਾ ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਲਈ ਇੱਕ ਆਰਟੀਫਿਸ਼ੀਅਲ ਇੰਟੈਲੀਜੈਂਸ (AI) ਫਰੇਮਵਰਕ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹਾਂ, ਇੱਕ ਚਿੱਤਰ-ਆਧਾਰਿਤ ਡੂੰਘੀ ਸਿਖਲਾਈ ਪਾਈਪਲਾਈਨ ਜੋ ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-ਟੀ ਅਤੇ ਕਨੈਕਸਿਨ ਸਟੈਨਿੰਗ 43 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਸਥਾਨਕਕਰਨ ਦੀ ਤਾਕਤ ਦੇ ਮਾਮਲੇ ਵਿੱਚ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਢਾਂਚਾਗਤ ਅਖੰਡਤਾ ਅਤੇ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਨੂੰ ਸਵੈਚਲਿਤ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਾਪਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਵਿਧੀ ਇੱਕ ਸਵੈਚਲਿਤ ਅਤੇ ਨਿਰਪੱਖ ਢੰਗ ਨਾਲ ਕਾਰਡਿਕ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਢਾਂਚਾਗਤ ਅਖੰਡਤਾ ਨੂੰ ਭਰੋਸੇਯੋਗ ਢੰਗ ਨਾਲ ਮਾਪਣ ਲਈ ਇੱਕ ਕਨਵੋਲਿਊਸ਼ਨਲ ਨਿਊਰਲ ਨੈੱਟਵਰਕ (ਸੀਐਨਐਨ) ਅਤੇ ਇੱਕ ਡੂੰਘੇ ਸਿਖਲਾਈ ਢਾਂਚੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਸੰਦਰਭ ਵਿੱਚ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ।26. MC ਟਿਸ਼ੂ ਨੇ ਸਥਿਰ ਨਿਯੰਤਰਣ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਦਿਨ 0 ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰੀ ਢਾਂਚਾਗਤ ਸਮਾਨਤਾ ਦਿਖਾਈ.ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਮੈਸਨ ਦੇ ਟ੍ਰਾਈਕ੍ਰੋਮ ਸਟੈਨਿੰਗ ਨੇ ਕਲਚਰ ਦੇ ਦਿਨ 12 (ਚਿੱਤਰ 3c) 'ਤੇ ਨਿਯੰਤਰਣ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਐਮਐਸ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਦੀ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਘੱਟ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤਤਾ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤੀ।ਜਦੋਂ ਕਿ CTCM ਨੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨਾਂ ਦੀ ਵਿਹਾਰਕਤਾ ਨੂੰ ਦਿਨ 12 'ਤੇ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਸਮਾਨ ਪੱਧਰ ਤੱਕ ਵਧਾਇਆ, ਇਸ ਨੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਢਾਂਚਾਗਤ ਅਖੰਡਤਾ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਸੁਧਾਰ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ।
ਇੱਕ ਬਾਰ ਗ੍ਰਾਫ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ (D0) ਜਾਂ ਹਾਰਟ ਸਲਾਈਸ ਕਲਚਰ ਦੀ MTT ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਤਾਂ ਸਟੈਟਿਕ ਕਲਚਰ (D12 Ctrl) ਵਿੱਚ ਜਾਂ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 Ctrl), 12 (D12 pigs, 12 ਤਰੀਕਿਆਂ ਤੋਂ ਵੱਖਰਾ ਹੈ; A-12 pigs, 12. ##p <0.0001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ **p <0.01 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। ਇੱਕ ਬਾਰ ਗ੍ਰਾਫ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ (D0) ਜਾਂ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਕਲਚਰ ਦੀ MTT ਵਿਹਾਰਕਤਾ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਤਾਂ ਸਟੈਟਿਕ ਕਲਚਰ (D12 Ctrl) ਵਿੱਚ ਜਾਂ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 Ctrl), 12 (D12) ਟੈਸਟ #sNOVGs ਤੋਂ ਵੱਖਰਾ ਹੈ; ###p <0.0001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ **p <0.01 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)।ਹਿਸਟੋਗ੍ਰਾਮ ਸਟੈਟਿਕ ਕਲਚਰ (D12 ਨਿਯੰਤਰਣ) ਜਾਂ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 ਨਿਯੰਤਰਣ), 12 (D12 MC) ਵਿੱਚ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ MTT ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ (D0) ਜਾਂ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਕਲਚਰ ਦੀ ਵਿਹਾਰਕਤਾ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ, 12 (D12 MC) ਵੱਖ-ਵੱਖ ਭਾਗਾਂ ਤੋਂ Agroup-VA ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ;####p <0,0001 по сравнению с D0 ਅਤੇ **p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl)। ####p <0.0001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ **p <0.01 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏切片(或新鲜心脏切片) 12 天的MTT 活力的量化)，来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA，进行单向ANOVA，D0r0p#01#测试；与D0 縔#0#0. l 相比,**p <0.01)। a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心的 中新鲜心的12，切片 (D02，坪猫鲜心脏切片) 12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；与D0 相比,####p <0.0001，与D12 Ctrl 相比，**p.)ਹਿਸਟੋਗ੍ਰਾਮ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ (D0) ਵਿੱਚ MTT ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਸਥਿਰ ਕਲਚਰ (D12 ਨਿਯੰਤਰਣ) ਜਾਂ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 ਕੰਟਰੋਲ)), 12 (D12 MC) ਭਾਗ/ਸਮੂਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ANOVA ਟੈਸਟਾਂ ਤੋਂ ਵਨਵੇਅ-ਸਮੂਹ;####p <0,0001 по сравнению с D0, **p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl)। ####p <0.0001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, **p <0.01 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)।b Troponin-T (ਹਰਾ), connexin 43 (ਲਾਲ) ਅਤੇ DAPI (ਨੀਲਾ) ਤਾਜ਼ੇ ਅਲੱਗ ਕੀਤੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ (D0) ਜਾਂ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ ਸਥਿਰ ਸਥਿਤੀਆਂ (Ctrl) ਜਾਂ CTCM ਸਥਿਤੀਆਂ (MC) ਵਿੱਚ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਇਮਯੂਨੋਫਲੋਰੇਸੈਂਸ ਚਿੱਤਰਾਂ (ਖਾਲੀ ਸਕੇਲ = 100 µm) ਦੇ ਅਧੀਨ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ। ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਸੰਰਚਨਾਤਮਕ ਅਖੰਡਤਾ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੀ ਆਰਟੀਫੀਸ਼ੀਅਲ ਇੰਟੈਲੀਜੈਂਸ ਮਾਪਦੰਡ, ਇੱਕ ਤਰਫਾ ਅਨੋਵਾ ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ####p <0.0001 D0 ਅਤੇ D0t. ***0p ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ <0.0001 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ D0 ਅਤੇ D0*** ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਢਾਂਚਾਗਤ ਅਖੰਡਤਾ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਹਰ ਇੱਕ ਦੀ ਨਕਲੀ ਬੁੱਧੀ ਦੀ ਮਾਤਰਾ, ਇੱਕ ਤਰਫਾ ਅਨੋਵਾ ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ####p <0.0001 D0 ਅਤੇ D0r. ***0p ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ <0.0001 ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ D0 ਅਤੇ D0r ***0)। Количественная оценка структурной целостности селостности сердечной ткани искусственным интеллектом (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5/12 MC х свиней, проводится однофакторный тест ANOVA; ####p < 0,0001 по сравнению с D0 и ****p < 0,0001 по сравнению Crl D12)। ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ ਆਰਟੀਫੀਸ਼ੀਅਲ ਇੰਟੈਲੀਜੈਂਸ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ਭਾਗਾਂ/ਸਮੂਹਾਂ ਦੁਆਰਾ ਕਾਰਡੀਅਕ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਸੰਰਚਨਾਤਮਕ ਅਖੰਡਤਾ ਦੀ ਮਾਤਰਾ, ਇੱਕ ਤਰਫਾ ਅਨੋਵਾ ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ; ####p <0.0001 ਬਨਾਮ D0t00 ਦੇ ਨਾਲ D0t00 ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ******人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ, ਇੱਕ-ਤਰਫ਼ਾ.比,****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）।人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ, ਇੱਕ-ਤਰਫ਼ਾ ANOVA.##縛0p0 <##丛縛D0p0.比,****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）। Искусственный интеллект для количественной оценки структурной целостности сердечной ткани (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl/D12MC), й из разных свиней, односторонний тест ANOVA; ####p <0,0001 ਬਨਾਮ D0 Для сравнения ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl)। ਕਾਰਡੀਅਕ ਟਿਸ਼ੂ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ਸੈਕਸ਼ਨ/ਸਮੂਹ ਹਰੇਕ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੀ ਸੰਰਚਨਾਤਮਕ ਅਖੰਡਤਾ ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਲਈ ਨਕਲੀ ਬੁੱਧੀ, ਇੱਕ ਤਰਫਾ ਅਨੋਵਾ ਟੈਸਟ; ####p<0.0001 ਬਨਾਮ .D0***d0p0 <1 ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਕਰਨ ਲਈ D0r00)। c ਮੈਸਨ ਦੇ ਟ੍ਰਾਈਕ੍ਰੋਮ ਸਟੈਨ (ਸਕੇਲ ਬੇਅਰ = 500 µm) ਨਾਲ ਧੱਬੇ ਹੋਏ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਚਿੱਤਰ (ਖੱਬੇ) ਅਤੇ ਮਾਤਰਾ (ਸੱਜੇ) (n = 10 ਟੁਕੜੇ/ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ ਹਰੇਕ ਦਾ ਸਮੂਹ, ਇੱਕ ਤਰਫਾ ਅਨੋਵਾ ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ####p. ***1 ਦੀ ਤੁਲਨਾ D0 0 <1 0 ਦੇ ਨਾਲ ਡੀ. rl). c ਮੈਸਨ ਦੇ ਟ੍ਰਾਈਕ੍ਰੋਮ ਸਟੈਨ (ਸਕੇਲ ਬੇਅਰ = 500 µm) ਨਾਲ ਧੱਬੇ ਹੋਏ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਚਿੱਤਰ (ਖੱਬੇ) ਅਤੇ ਮਾਤਰਾ (ਸੱਜੇ) (n = 10 ਟੁਕੜੇ/ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ ਹਰੇਕ ਦਾ ਸਮੂਹ, ਇਕ ਤਰਫਾ ਅਨੋਵਾ ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; #### p. 0 ਦੀ ਤੁਲਨਾ C ***1 <1 <0 0 ਅਤੇ ਡੀ.0. rl). c Репрезентативные изображения (слева) и количественная оценка (справа) срезов сердца, окрашенных трихромным красибатебаслева тия = 500 мкм) (n = 10 срезов/группу от разных свиней, выполняется односторонний тест ANOVA; #### p < 0,00001 ਡੀ.ਪੀ. равнению с D12 Ctrl)। c ਮੈਸਨ ਦੇ ਟ੍ਰਾਈਕ੍ਰੋਮ ਸਟੈਨ (ਅਨਕੋਏਟਿਡ ਸਕੇਲ = 500 µm) (n = 10 ਸੈਕਸ਼ਨ/ਸਮੂਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ, ਇੱਕ ਤਰਫਾ ਅਨੋਵਾ ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ; #### p <0 .0001 ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਡੀ.0001 ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ; #### p <0 .0001) ਨਾਲ ਮੈਸਨ ਦੇ ਟ੍ਰਾਈਕ੍ਰੋਮ ਸਟੈਨ (ਅਨਕੋਏਟਿਡ ਸਕੇਲ = 500 µm) ਨਾਲ ਧੱਬੇ ਹੋਏ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਚਿੱਤਰ (ਖੱਬੇ) ਅਤੇ ਮਾਤਰਾ (ਸੱਜੇ)। c 用ਮੈਸਨ 三色染料染色的心脏切片的代表性图像（左）和量化（右）（裸尺度=1¼n0m0片/组，每组来自不同的猪，进行单向ANOVA 测试；#### p < 0.0001 与D0 相比,***p <0.001 C.D.L.2ﯛ1. ਸੀ 用 ਮੈਸਨ 三色染料的心脏切片的代表性（左左）量化（右） 裸尺度度度带裸尺度裸带. ***p <0.001 与D12 Ctrl 相比）। c Репрезентативные изображения (слева) и количественный анализ (справа) срезов сердца, окрашенных трихромным (слева) = краситкатеслева км) (n = 10 срезов/группа, каждый от другой свиньи, протестировано с помощью однофакторного дисперсионного дисперсионного , <#10p00p0#позов#; нию с D0, ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl)। c ਮੈਸਨ ਦੇ ਟ੍ਰਾਈਕ੍ਰੋਮ ਸਟੈਨ (ਖਾਲੀ = 500 µm) (ਖਾਲੀ = 500 µm) (n = 10 ਭਾਗ/ਸਮੂਹ, ਹਰ ਇੱਕ ਵੱਖਰੇ ਸੂਰ ਤੋਂ, ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਦੇ ਇੱਕ-ਤਰਫਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੁਆਰਾ ਪਰਖਿਆ ਗਿਆ, ;### # p. <0 d0 ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ C;### # p <0. ***1 <0 0 ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ;### # p <0. rl).ਗਲਤੀ ਪੱਟੀਆਂ ਮੱਧਮਾਨ ± ਮਿਆਰੀ ਵਿਵਹਾਰ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀਆਂ ਹਨ।
ਅਸੀਂ ਇਹ ਅਨੁਮਾਨ ਲਗਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਛੋਟੇ ਅਣੂਆਂ ਨੂੰ ਜੋੜ ਕੇ, ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟ ਦੀ ਇਕਸਾਰਤਾ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਸੀਟੀਸੀਐਮ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਘਟਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਲਈ ਅਸੀਂ ਥੋੜ੍ਹੇ ਜਿਹੇ ਉਲਝਣ ਵਾਲੇ ਕਾਰਕਾਂ ਦੇ ਕਾਰਨ ਸਾਡੇ ਸਥਿਰ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਭਿਆਚਾਰਾਂ 20,21 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਛੋਟੇ ਅਣੂਆਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ।ਇਸ ਸਕਰੀਨ ਲਈ Dexamethasone (Dex), triiodothyronine (T3), ਅਤੇ SB431542 (SB) ਨੂੰ ਚੁਣਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਹ ਛੋਟੇ ਅਣੂ ਪਹਿਲਾਂ hiPSC-CM ਸਭਿਆਚਾਰਾਂ ਵਿੱਚ sarcomere ਲੰਬਾਈ, T-ਟਿਊਬਲਾਂ, ਅਤੇ ਸੰਚਾਲਨ ਵੇਗ ਨੂੰ ਵਧਾ ਕੇ ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟਸ ਦੀ ਪਰਿਪੱਕਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੇ ਗਏ ਹਨ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਦੋਨੋ ਡੇਕਸ (ਇੱਕ ਗਲੂਕੋਕਾਰਟੀਕੋਇਡ) ਅਤੇ ਐਸਬੀ ਸੋਜਸ਼ 29,30 ਨੂੰ ਦਬਾਉਣ ਲਈ ਜਾਣੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਕਿ ਕੀ ਇਹਨਾਂ ਛੋਟੇ ਅਣੂਆਂ ਦੇ ਇੱਕ ਜਾਂ ਇੱਕ ਸੁਮੇਲ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਨ ਨਾਲ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਸੰਰਚਨਾਤਮਕ ਅਖੰਡਤਾ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਹੋਵੇਗਾ।ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਲਈ, ਹਰੇਕ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੀ ਖੁਰਾਕ ਦੀ ਚੋਣ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੈੱਲ ਕਲਚਰ ਮਾਡਲਾਂ (1 μM Dex27, 100 nM T327, ਅਤੇ 2.5 μM SB31) ਵਿੱਚ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਦੇ 12 ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਬਾਅਦ, T3 ਅਤੇ Dex ਦੇ ਸੁਮੇਲ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਅਨੁਕੂਲ ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟ ਢਾਂਚਾਗਤ ਇਕਸਾਰਤਾ ਅਤੇ ਨਿਊਨਤਮ ਰੇਸ਼ੇਦਾਰ ਰੀਮਡਲਿੰਗ (ਪੂਰਕ ਅੰਕੜੇ 4 ਅਤੇ 5) ਵਿੱਚ ਵਾਧਾ ਹੋਇਆ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, T3 ਅਤੇ Dex ਦੀ ਇਹਨਾਂ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੀ ਦੁੱਗਣੀ ਜਾਂ ਦੁੱਗਣੀ ਵਰਤੋਂ ਨੇ ਆਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 6a,b) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਨੁਕਸਾਨਦੇਹ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪੈਦਾ ਕੀਤੇ।
ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਅਸੀਂ 4 ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਸਥਿਤੀਆਂ (ਚਿੱਤਰ 4a) ਦੀ ਇੱਕ ਸਿਰ-ਤੋਂ-ਸਿਰ ਤੁਲਨਾ ਕੀਤੀ: Ctrl: ਸਾਡੇ ਅਨੁਕੂਲ ਮਾਧਿਅਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਸਾਡੇ ਪਹਿਲਾਂ ਵਰਣਿਤ ਸਥਿਰ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਵਿੱਚ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗ;20.21 TD: T3 ਅਤੇ Ctrl s ਬੁੱਧਵਾਰ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਡੈਕਸ;MC: ਸਾਡੇ ਪਹਿਲਾਂ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਮਾਧਿਅਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ CTCM ਵਿੱਚ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗ;ਅਤੇ MT: T3 ਅਤੇ Dex ਦੇ ਨਾਲ CTCM ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ।12 ਦਿਨਾਂ ਦੀ ਕਾਸ਼ਤ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, MS ਅਤੇ MT ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਦੀ ਵਿਹਾਰਕਤਾ MTT ਪਰਖ (Fig. 4b) ਦੁਆਰਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤੇ ਤਾਜ਼ੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਾਂਗ ਹੀ ਰਹੀ।ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ, T3 ਅਤੇ Dex ਨੂੰ ਟ੍ਰਾਂਸਵੈਲ ਕਲਚਰ (TD) ਵਿੱਚ ਜੋੜਨ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ Ctrl ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਵਿਹਾਰਕਤਾ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਸੁਧਾਰ ਨਹੀਂ ਹੋਇਆ, ਜੋ ਕਿ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਵਿੱਚ ਮਕੈਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਦੀ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਇੱਕ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਚਿੱਤਰ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਮਾਧਿਅਮ 'ਤੇ ਮਕੈਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਅਤੇ T3/Dex ਪੂਰਕ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੀਆਂ ਜਾਂਦੀਆਂ ਚਾਰ ਸਭਿਆਚਾਰ ਸਥਿਤੀਆਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। b ਬਾਰ ਗ੍ਰਾਫ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ਅਤੇ D12 MT), 12 (D12 pigs, 12 (D12 pigs, MC, 12 MT), 12 (D12 pigs, 12 ਤੋਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਟੈਸਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ, 12 (D12 pigs, MT) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਸਾਰੀਆਂ 4 ਸਭਿਆਚਾਰ ਸਥਿਤੀਆਂ (Ctrl, TD, MC, ਅਤੇ MT) ਵਿੱਚ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 12 ਦਿਨਾਂ ਦੀ ਵਿਹਾਰਕਤਾ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ##p <0.0001, ###p <0.001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ **p <0.01 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। b ਬਾਰ ਗ੍ਰਾਫ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ਅਤੇ D12 MT), 12 (D12 pigs, 12 (D12 pigs, MC, 12 MT), 12 (D12 pigs, 12 ਤੋਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਟੈਸਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ, 12 (D12 pigs, MT) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਸਾਰੀਆਂ 4 ਸਭਿਆਚਾਰ ਸਥਿਤੀਆਂ (Ctrl, TD, MC, ਅਤੇ MT) ਵਿੱਚ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 12 ਦਿਨਾਂ ਦੀ ਵਿਹਾਰਕਤਾ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ##p <0.0001, ###p <0.001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ **p <0.01 D12 ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। b Гистограмма показывает количественную оценку жизнеспособности через 12 дней после культивирования во всех 4, усенку TD, MC и MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ਅਤੇ D12 MT), 12 (D12 MC/срезами сердца) й, проводится односторонний тест ANOVA; ####p <0,0001, ###p <0,001 по сравнению с D0 и **p <0,01 по сравнению сrl2)। b ਬਾਰ ਗ੍ਰਾਫ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਸੈਕਸ਼ਨਾਂ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, ਅਤੇ D12 MT), 12 (D12 Ctrl, D12 TD, ਅਤੇ D12 MT), 12 (D12 Ctrl, D12 TD, ਅਤੇ D12 MT), 12 (D12 ਐੱਮ.ਟੀ., 12 (D12 ਐੱਮ.ਟੀ.), 12 (D12 ਐੱਮ. ਟੀ. ਐੱਨ. ਐੱਮ.ਸੀ. ਤੋਂ ਵੱਖਰਾ ਸੈਕਸ਼ਨ ## #pgs, ਐੱਮ.ਸੀ. ਤੋਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ 4 ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਸਥਿਤੀਆਂ (ਨਿਯੰਤਰਣ, TD, MC, ਅਤੇ MT) ਵਿੱਚ 12 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ ਵਿਹਾਰਕਤਾ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। 0.0001, ###p <0.001 ਬਨਾਮ D0 ਅਤੇ **p <0.01 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। b 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片、D0) (n = 18 (D1lD18)和D12 MT)，来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；####p < 0.0001，##1p <0.0D12 <0.0D0** 2 控制).b 4 12 (D12 MC) b Гистограмма, показывающая все 4 условия культивирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению со свежими (со свежими со со свежими (срезами) =10D1 (серзами) 2 Ctrl, D12 TD и D12 MT), от разных свиней 12 (D12 MC) срезы/группа, односторонний тест ANOVA; ####p <0,0001, ###p <0,00,00** по сравнению с контролем D12). b ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ 12 (D12 MC) ਸੈਕਸ਼ਨ/ਗਰੁੱਪ, ਇੱਕ ਤਰਫਾ ਅਨੋਵਾ ਟੈਸਟ; #0#0p<#0p<#0p<#0p<#0p<#0p;#00p<##12 (D12 MC) ਸੈਕਸ਼ਨ/ਗਰੁੱਪ ਤੋਂ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ਅਤੇ D12 MT) ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਸਾਰੀਆਂ 4 ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਸਥਿਤੀਆਂ (ਨਿਯੰਤਰਣ, TD, MC ਅਤੇ MT) ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹਿਸਟੋਗ੍ਰਾਮ। 0, **p<0.01 ਬਨਾਮ ਕੰਟਰੋਲ D12)। c ਬਾਰ ਗ੍ਰਾਫ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ (D0) (n = 6 ਟੁਕੜੇ/ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ ਸਮੂਹ, ਇੱਕ ਤਰਫਾ ਅਨੋਵਾ ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; Ctrl, TD, MC, ਅਤੇ MT) ਸਾਰੀਆਂ 4 ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਸਥਿਤੀਆਂ (Ctrl, TD, MC, ਅਤੇ MT) ਵਿੱਚ ਕਲਚਰ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 12 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ ਗਲੂਕੋਜ਼ ਦੇ ਪ੍ਰਵਾਹ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ; ). c ਬਾਰ ਗ੍ਰਾਫ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ (D0) (n = 6 ਟੁਕੜੇ/ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ ਸਮੂਹ, ਇੱਕ ਤਰਫਾ ਅਨੋਵਾ ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; Ctrl, TD, MC, ਅਤੇ MT) ਸਾਰੀਆਂ 4 ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਸਥਿਤੀਆਂ (Ctrl, TD, MC, ਅਤੇ MT) ਵਿੱਚ ਕਲਚਰ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 12 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ ਗਲੂਕੋਜ਼ ਦੇ ਪ੍ਰਵਾਹ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ; ). c Гистограмма показывает количественную оценку потока глюкозы через 12 дней после культивирования во всех, 4 усех, усехаловирования MC и MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 6 срезов/груптпу от разных свиней, односторонний свиней, односторонной со свежими срезами сердца (D0) по сравнению с D0 ਅਤੇ ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl)। c ਹਿਸਟੋਗ੍ਰਾਮ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ (D0) ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਸਾਰੀਆਂ 4 ਸਭਿਆਚਾਰ ਸਥਿਤੀਆਂ (ਨਿਯੰਤਰਣ, TD, MC ਅਤੇ MT) (ਨਿਯੰਤਰਣ, TD, MC ਅਤੇ MT) ਦੇ ਅਧੀਨ 12 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ ਗਲੂਕੋਜ਼ ਦੇ ਪ੍ਰਵਾਹ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ (ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ n = 6 ਭਾਗ/ਸਮੂਹ, ਇੱਕ ਤਰਫਾ ਅਨੋਵਾ ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ; ###p <0.001 D0 ਅਤੇ D0r ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ C ***1 <0.001)। c 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片的(D0) 相比平养切 片通量定量（n = 6 片/组，来自不同猪，单向执行ANOVA 测试；###p < 0.001，与D0 相比 <0.001，与D0 相比 0.0.0.0.0. ). ਸੀ 条形图 显示 所有 4 种 条件 （（ctrl 、 td 、 mc 和 mt） 新鲜 心脏 切片 心脏 切片 切片切片后 后 12 天 的 通量 定量 （n = 6 片/组 ， 来自 猪 ， ， ， ， ， 猪 猪单 ， ， 猪 猪单向执行 0 # D 0 . 0 相比, ***p < 0.001 与D12 Ctrl 相比）। c Гистограмма, показывающая количественную оценку потока глюкозы через 12 дней после культивирования для всественную для всественную TD, MC и MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 6 срезов/группа, от разных свиней, одностороных свиней, односторонный со свежими срезами сердца (D0) 0,001 по сравнению с D0, ***p < 0,001 по сравнению с D12 (контроль)। c ਹਿਸਟੋਗ੍ਰਾਮ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ (D0) (n = 6 ਭਾਗ/ਸਮੂਹ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ, ਇਕਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ, ###p <0.0, ***1 p <0.0.0, ***1 ਦੀ ਤੁਲਨਾ D00, ***1 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ D00, ***1) ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਸਾਰੀਆਂ 4 ਸਭਿਆਚਾਰ ਸਥਿਤੀਆਂ (ਨਿਯੰਤਰਣ, TD, MC, ਅਤੇ MT) ਲਈ 12 ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਪੋਸਟ-ਕਲਚਰ ਵਿੱਚ ਗਲੂਕੋਜ਼ ਦੇ ਪ੍ਰਵਾਹ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।d ਤਾਜ਼ੇ (ਨੀਲਾ), ਦਿਨ 12 MC (ਹਰਾ), ਅਤੇ ਦਿਨ 12 MT (ਲਾਲ) ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਦੇ 12 ਖੇਤਰੀ ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨ ਪੁਆਇੰਟਾਂ 'ਤੇ ਸਟ੍ਰੇਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਪਲਾਟ (n = 4 ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ, ਇਕ ਤਰਫਾ ਅਨੋਵਾ ਟੈਸਟ; ਸਮੂਹਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਕੋਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਨਹੀਂ ਸੀ)।e ਜਵਾਲਾਮੁਖੀ ਪਲਾਟ 10-12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਸਥਿਰ ਸਥਿਤੀਆਂ (Ctrl) ਜਾਂ MT ਹਾਲਤਾਂ (MT) ਅਧੀਨ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ (D0) ਵਿੱਚ ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤੇ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।f ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਲਈ ਸਰਕੋਮੇਰ ਜੀਨਾਂ ਦਾ ਹੀਟਮੈਪ ਹਰ ਇੱਕ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਗਲਤੀ ਪੱਟੀਆਂ ਮੱਧਮਾਨ ± ਮਿਆਰੀ ਵਿਵਹਾਰ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀਆਂ ਹਨ।
ਫੈਟੀ ਐਸਿਡ ਆਕਸੀਕਰਨ ਤੋਂ ਗਲਾਈਕੋਲਾਈਸਿਸ ਤੱਕ ਸਵਿੱਚ 'ਤੇ ਪਾਚਕ ਨਿਰਭਰਤਾ ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਦੀ ਪਛਾਣ ਹੈ।ਪਰਿਪੱਕ ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟਸ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਏਟੀਪੀ ਉਤਪਾਦਨ ਲਈ ਗਲੂਕੋਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਕੁਝ ਕ੍ਰਿਸਟੇ 5,32 ਦੇ ਨਾਲ ਹਾਈਪੋਪਲਾਸਟਿਕ ਮਾਈਟੋਚੌਂਡਰੀਆ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਗਲੂਕੋਜ਼ ਉਪਯੋਗਤਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ MC ਅਤੇ MT ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ, ਗਲੂਕੋਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਦਿਨ 0 ਟਿਸ਼ੂਆਂ (ਚਿੱਤਰ 4c) ਵਿੱਚ ਸਮਾਨ ਸੀ।ਹਾਲਾਂਕਿ, Ctrl ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੇ ਤਾਜ਼ੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਗਲੂਕੋਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਵਾਧਾ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ।ਇਹ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ CTCM ਅਤੇ T3/Dex ਦਾ ਸੁਮੇਲ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਵਿਹਾਰਕਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ 12-ਦਿਨ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਪਾਚਕ ਫੀਨੋਟਾਈਪ ਨੂੰ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਰੱਖਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਤਣਾਅ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ MT ਅਤੇ MS ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ (ਚਿੱਤਰ 4d) ਦੇ ਅਧੀਨ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਵਿੱਚ ਤਣਾਅ ਦਾ ਪੱਧਰ ਉਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ ਹੀ ਰਿਹਾ।
ਕਾਰਡੀਅਕ ਸਲਾਈਸ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਗਲੋਬਲ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਲੈਂਡਸਕੇਪ 'ਤੇ CTCM ਅਤੇ T3/Dex ਦੇ ਸਮੁੱਚੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਸਾਰੀਆਂ ਚਾਰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਸਥਿਤੀਆਂ (ਪੂਰਕ ਡੇਟਾ 1) ਤੋਂ ਕਾਰਡੀਆਕ ਸਲਾਈਸ 'ਤੇ RNAseq ਕੀਤਾ।ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ, MT ਭਾਗਾਂ ਨੇ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਨਾਲ ਉੱਚ ਪ੍ਰਤੀਲਿਪੀ ਸਮਾਨਤਾ ਦਿਖਾਈ, 13,642 ਜੀਨਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਸਿਰਫ 16 ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਅਸੀਂ ਪਹਿਲਾਂ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ, Ctrl ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਵਿੱਚ 10-12 ਦਿਨਾਂ (ਚਿੱਤਰ 4e) ਦੇ ਬਾਅਦ 1229 ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤੇ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਇਹ ਡੇਟਾ ਦਿਲ ਅਤੇ ਫਾਈਬਰੋਬਲਾਸਟ ਜੀਨਾਂ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 7a-c) ਦੇ qRT-PCR ਦੁਆਰਾ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ, Ctrl ਭਾਗਾਂ ਨੇ ਕਾਰਡੀਅਕ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਚੱਕਰ ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਨਿਯੰਤਰਣ ਅਤੇ ਸੋਜਸ਼ ਵਾਲੇ ਜੀਨ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮਾਂ ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ ਨੂੰ ਦਿਖਾਇਆ।ਇਹ ਅੰਕੜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਵਿਭਿੰਨਤਾ, ਜੋ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਦੀ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ MT ਹਾਲਤਾਂ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 8a,b) ਦੇ ਅਧੀਨ ਘੱਟ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਸਾਰਕੋਮੇਰ ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਧਿਆਨ ਨਾਲ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਸਿਰਫ MT ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਹੀ sarcomere (Fig. 4f) ਅਤੇ ਆਇਨ ਚੈਨਲ (ਸਪਲੀਮੈਂਟਰੀ ਚਿੱਤਰ 9) ਨੂੰ ਏਨਕੋਡਿੰਗ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਰੱਖਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ Ctrl, TD, ਅਤੇ MC ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਦਮਨ ਤੋਂ ਬਚਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਅੰਕੜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਮਕੈਨੀਕਲ ਅਤੇ ਹਿਊਮੋਰਲ ਸਟੀਮੂਲੇਸ਼ਨ (T3/Dex) ਦੇ ਸੁਮੇਲ ਨਾਲ, ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਲਿਪੀ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਵਿੱਚ 12 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ ਦਿਲ ਦੇ ਤਾਜ਼ੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਵਾਂਗ ਹੀ ਰਹਿ ਸਕਦੀ ਹੈ।
ਇਹ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਖੋਜਾਂ ਇਸ ਤੱਥ ਦੁਆਰਾ ਸਮਰਥਤ ਹਨ ਕਿ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟਸ ਦੀ ਢਾਂਚਾਗਤ ਅਖੰਡਤਾ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ MT ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਬਰਕਰਾਰ ਅਤੇ ਸਥਾਨਿਕ ਕਨੈਕਸੀਨ 43 (ਚਿੱਤਰ 5a) ਦੁਆਰਾ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, MT ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਅਧੀਨ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਨੂੰ Ctrl ਅਤੇ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ (ਚਿੱਤਰ 5b) ਦੇ ਸਮਾਨ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਘੱਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਹ ਅੰਕੜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਮਕੈਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਅਤੇ T3/Dex ਇਲਾਜ ਦਾ ਸੁਮੇਲ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਵਿੱਚ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ ਦਿਲ ਦੀ ਬਣਤਰ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਰੱਖਦਾ ਹੈ।
ਦਿਲ ਦੇ ਤਾਜ਼ੇ ਅਲੱਗ-ਥਲੱਗ ਭਾਗਾਂ (D0) ਵਿੱਚ ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-ਟੀ (ਹਰਾ), ਕਨੈਕਸੀਨ 43 (ਲਾਲ), ਅਤੇ ਡੀਏਪੀਆਈ (ਨੀਲਾ) ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਇਮਯੂਨੋਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਚਿੱਤਰ ਜਾਂ ਦਿਲ ਦੇ ਚਾਰੇ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਸਭਿਆਚਾਰ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ (ਸਕੇਲ ਬਾਰ = 100 µm) ਵਿੱਚ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ।). ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਢਾਂਚਾਗਤ ਅਖੰਡਤਾ (n = 7 (D0 ਅਤੇ D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ਅਤੇ D12 MT) ਦੇ ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ ਦੀ ਆਰਟੀਫੀਸ਼ੀਅਲ ਇੰਟੈਲੀਜੈਂਸ ਮਾਪਣਾ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ, ਇੱਕ ਤਰਫਾ ਅਨੋਵਾ ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ####p <0.000 ਅਤੇ ***1 ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ <*0.000 ਅਤੇ ***1. D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ 01)। ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਸੰਰਚਨਾਤਮਕ ਅਖੰਡਤਾ (n = 7 (D0 ਅਤੇ D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ਅਤੇ D12 MT) ਦੇ ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ ਦੀ ਆਰਟੀਫੀਸ਼ੀਅਲ ਇੰਟੈਲੀਜੈਂਸ ਮਾਪਣਾ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ, ਇੱਕ ਤਰਫਾ ਅਨੋਵਾ ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; #### p <0.000 ਅਤੇ ***1 <*000 ਅਤੇ <*000 ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ। D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ 01)। Количественная оценка структурной целостности ткани сердца с помощью искусственного интеллекта (n = 7 (D0 и D12) DMCTD12, MCTD12, MCTD12, резов/группу от разных свиней, проведен однофакторный тест ANOVA; #### p < 0,0001 по сравнению с D0 и *p < 0,005, D0015 2 Ctrl)। ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ ਆਰਟੀਫਿਸ਼ੀਅਲ ਇੰਟੈਲੀਜੈਂਸ (n = 7 (D0 ਅਤੇ D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ਅਤੇ D12 MT) ਸੈਕਸ਼ਨ/ਸਮੂਹ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਸੰਰਚਨਾਤਮਕ ਅਖੰਡਤਾ ਦੀ ਮਾਤਰਾ, ਇਕ ਤਰਫਾ ਅਨੋਵਾ ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ; #### p < 0.000 ਅਤੇ ***0.001 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ <*0001 ****0. D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)।对不同猪的心脏组织结构完整性（n = 7（D0 和D12 Ctrl）、5（D12 TD、D12 MC工智能量化，进行单向ANOVA 测试；#### p < 0.0001 与D0 和*p < 0.05 相比，或****p <0.0001 Ct.2.0001对 不同 猪 的 心脏 结构 完整性 （n = 7 （d0 和 d12 ctrl） （5 （d12 td 、 d12 mc（d12 td （d12 mc智能量 化 进行 单向 单向 单向 测试 ； ########## p < 0.0001 与D0 和*p < 0.05 相比 和*p < 0.05 相比 0.05相比).ਇੱਕ ਤਰਫਾ ਅਨੋਵਾ ਟੈਸਟ ਦੇ ਨਾਲ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ (n = 7 (D0 ਅਤੇ D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ਅਤੇ D12 MT) ਭਾਗ/ਸਮੂਹ) ਵਿੱਚ ਨਕਲੀ ਬੁੱਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਕਾਰਡੀਅਕ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਸੰਰਚਨਾਤਮਕ ਅਖੰਡਤਾ ਦੀ ਮਾਤਰਾ;#### p < 0,0001 по сравнению с D0 ਅਤੇ *p < 0,05 ਜਾਂ ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl)। #### p <0.0001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ *p <0.05 ਜਾਂ ****p <0.0001 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। b ਮੈਸਨ ਦੇ ਟ੍ਰਾਈਕ੍ਰੋਮ ਸਟੈਨ (ਸਕੇਲ ਬਾਰ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, ਅਤੇ D12 MC), 9 (D12 MT) ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨਾਲ ਧੱਬੇ ਹੋਏ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਚਿੱਤਰ ਅਤੇ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਨ, 9 (D12 MT) ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਕੀਤੇ ਗਏ #pgs/group ਤੋਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ #pgs/group. 0001 ਦੀ ਤੁਲਨਾ D0 ਅਤੇ ***p <0.001, ਜਾਂ ****p <0.0001 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। b ਮੈਸਨ ਦੇ ਟ੍ਰਾਈਕ੍ਰੋਮ ਸਟੈਨ (ਸਕੇਲ ਬਾਰ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, ਅਤੇ D12 MC), 9 (D12 MT) ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨਾਲ ਧੱਬੇ ਹੋਏ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਚਿੱਤਰ ਅਤੇ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਨ, 9 (D12 MT) ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਕੀਤੇ ਗਏ #pgs/group ਤੋਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ #pgs/group. 0001 ਦੀ ਤੁਲਨਾ D0 ਅਤੇ ***p <0.001, ਜਾਂ ****p <0.0001 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। b Репрезентативные изображения и количественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромным красителем Массона (массона =00майнай) = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD и D12 MC), 9 (D12 MT) срезов/группу от разных свиней, выполняется односторонний# тест ANOVA, #0012 # <p00сюсе; D0 ਅਤੇ ***p < 0,001 ਜਾਂ ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl)। b ਮੈਸਨ ਦੇ ਟ੍ਰਾਈਕ੍ਰੋਮ ਸਟੈਨ (ਸਕੇਲ ਬਾਰ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ਅਤੇ D12 MC), 9 (D12 MT) ਭਾਗ/ਸਮੂਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਦਾਗ਼ੇ ਹੋਏ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਚਿੱਤਰ ਅਤੇ ਮਾਪਣਾ। < # VA. 0 ਅਤੇ ***p <0.001 ਜਾਂ ****p <0.0001 ਬਨਾਮ D12 Ctrl)। b 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像和量化（比例尺= 500 µm）（n = 10D2 µm）（n = 10D和D12 MC），来自不同猪的9 个（D12 MT）切片/组，进行单因素方差分曠素方差分析；####p <0.001** <0.0001**或****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）। b 用 ਮੈਸਨ 三 色 染料 的 心脏 切片 的 代表性 和 量化 （比例 尺 尺 尺 = 500 µm） 1 d00d = 500 µm） 、 d12 td 和 d12 mc） 来自 不同 的 9 个 d12 mt 切片 切片 切片 切片 切片 切片切片切片( 001,或****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）। b Репрезентативные изображения и количественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромом Массона (масштабная =10менка =10менка) Ctrl, D12 TD и D12 MC), 9 (D12 MT) срезов от разных свиней / группы, один- способ ANOVA; ####p < 0,0001 по <сравней, ***p <сравиней ***p <0,0001*** 0001 по сравнению с D12 Ctrl)। b ਮੈਸਨ ਦੇ ਟ੍ਰਾਈਕ੍ਰੋਮ (ਸਕੇਲ ਬਾਰ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ਅਤੇ D12 MC), 9 (D12 MT) ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ/ਸਮੂਹ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਨਾਲ ਧੱਬੇ ਹੋਏ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਚਿੱਤਰ ਅਤੇ ਮਾਤਰਾ ਦਾ ਨਿਰਧਾਰਨ; ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰ/ਸਮੂਹ ਦੇ 9 (D12 MT) ਭਾਗ; <##0p0, <##0p0, ਇੱਕ ANOVA ਦੀ ਤੁਲਨਾ, <##0p0, <##0p0, <##0p. .001 ਜਾਂ ****p <0.0001 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)।ਗਲਤੀ ਪੱਟੀਆਂ ਮੱਧਮਾਨ ± ਮਿਆਰੀ ਵਿਵਹਾਰ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀਆਂ ਹਨ।
ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਕਾਰਡੀਆਕ ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫੀ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਨ ਲਈ ਸੀਟੀਸੀਐਮ ਦੀ ਯੋਗਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਾਰਡੀਆਕ ਟਿਸ਼ੂ ਸਟ੍ਰੈਚ ਨੂੰ ਵਧਾ ਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।CTCM ਵਿੱਚ, ਪੀਕ ਏਅਰ ਚੈਂਬਰ ਪ੍ਰੈਸ਼ਰ 80 mmHg ਤੋਂ 80 mmHg ਤੱਕ ਵਧ ਗਿਆ ਹੈ।ਕਲਾ।(ਆਮ ਸਟ੍ਰੈਚ) 140 mmHg ਕਲਾ ਤੱਕ।(ਚਿੱਤਰ 6a)।ਇਹ ਖਿਚਾਅ (ਚਿੱਤਰ 6b) ਵਿੱਚ 32% ਵਾਧੇ ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਪਹਿਲਾਂ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਲਈ ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫੀ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਈ ਦੇਣ ਵਾਲੀ ਸਰਕੋਮੇਰ ਲੰਬਾਈ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤਤਾ ਦੇ ਤੌਰ ਤੇ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਸੰਕੁਚਨ ਅਤੇ ਆਰਾਮ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਖਿਰਦੇ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਖਿੱਚ ਅਤੇ ਗਤੀ ਛੇ ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਸੱਭਿਆਚਾਰ (ਚਿੱਤਰ 6c) ਦੌਰਾਨ ਸਥਿਰ ਰਹੀ।MT ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਤੋਂ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਨੂੰ ਛੇ ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਸਧਾਰਣ ਖਿੱਚ (MT (ਨਾਰਮਲ)) ਜਾਂ ਓਵਰਸਟਰੈਚ ਹਾਲਤਾਂ (MT (OS)) ਦੇ ਅਧੀਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਪਹਿਲਾਂ ਹੀ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਵਿੱਚ ਚਾਰ ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ, ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫਿਕ ਬਾਇਓਮਾਰਕਰ NT-ProBNP ਨੂੰ MT (ਆਮ) ਹਾਲਤਾਂ (Fig. 7a) ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ MT (OS) ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਉੱਚਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਛੇ ਦਿਨਾਂ ਦੀ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, MT (OS) (Fig. 7b) ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਦਾ ਆਕਾਰ MT ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ (ਆਮ) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਕਾਫ਼ੀ ਵਧ ਗਿਆ ਹੈ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, NFATC4 ਪਰਮਾਣੂ ਟ੍ਰਾਂਸਲੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਓਵਰਸਟ੍ਰੇਚਡ ਟਿਸ਼ੂਆਂ (ਚਿੱਤਰ 7c) ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਵਾਧਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ.ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਹਾਈਪਰਡੈਸਟੈਨਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਪੈਥੋਲੋਜੀਕਲ ਰੀਮਡਲਿੰਗ ਦੇ ਪ੍ਰਗਤੀਸ਼ੀਲ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਇਸ ਧਾਰਨਾ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕਰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਸੀਟੀਸੀਐਮ ਡਿਵਾਈਸ ਨੂੰ ਸਟ੍ਰੈਚ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਾਰਡੀਆਕ ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫੀ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਪਲੇਟਫਾਰਮ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਹਵਾ ਚੈਂਬਰ ਪ੍ਰੈਸ਼ਰ, ਤਰਲ ਚੈਂਬਰ ਪ੍ਰੈਸ਼ਰ, ਅਤੇ ਟਿਸ਼ੂ ਅੰਦੋਲਨ ਮਾਪ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਟਰੇਸ ਇਸ ਗੱਲ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਚੈਂਬਰ ਪ੍ਰੈਸ਼ਰ ਤਰਲ ਚੈਂਬਰ ਦੇ ਦਬਾਅ ਨੂੰ ਬਦਲਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਦੀ ਅਨੁਸਾਰੀ ਗਤੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।b ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਖਿੱਚੇ ਗਏ (ਸੰਤਰੀ) ਅਤੇ ਜ਼ਿਆਦਾ ਖਿੱਚੇ ਹੋਏ (ਨੀਲੇ) ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਸਟ੍ਰੈਚ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਅਤੇ ਸਟ੍ਰੈਚ ਰੇਟ ਵਕਰ।c ਬਾਰ ਗ੍ਰਾਫ਼ ਚੱਕਰ ਦਾ ਸਮਾਂ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ (n = 19 ਟੁਕੜੇ ਪ੍ਰਤੀ ਸਮੂਹ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ), ਸੰਕੁਚਨ ਸਮਾਂ (n = 18-19 ਟੁਕੜੇ ਪ੍ਰਤੀ ਸਮੂਹ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ), ਆਰਾਮ ਦਾ ਸਮਾਂ (n = 19 ਟੁਕੜੇ ਪ੍ਰਤੀ ਸਮੂਹ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ), ਟਿਸ਼ੂ ਅੰਦੋਲਨ ਦਾ ਐਪਲੀਟਿਊਡ (n = 14 ਟੁਕੜਿਆਂ ਤੋਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ), ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ n = 14 ਟੁਕੜੇ, ਸੈਕਲਿਕ ਪੇਗਸਟੋਕ 4, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ. es/ਗਰੁੱਪ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ) ਅਤੇ ਪੀਕ ਆਰਾਮ ਦਰ (n = 14 (D0), 15 (D6) ) ਭਾਗ/ਸਮੂਹ) ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ), ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੇ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਨੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਮਾਪਦੰਡ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਨਹੀਂ ਦਿਖਾਇਆ, ਇਹ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਓਵਰਵੋਲਟੇਜ ਦੇ ਨਾਲ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਦੇ 6 ਦਿਨਾਂ ਦੌਰਾਨ ਇਹ ਮਾਪਦੰਡ ਸਥਿਰ ਰਹੇ।ਗਲਤੀ ਪੱਟੀਆਂ ਮੱਧਮਾਨ ± ਮਿਆਰੀ ਵਿਵਹਾਰ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀਆਂ ਹਨ।
MT ਸਾਧਾਰਨ ਸਟ੍ਰੈਚ (ਨਾਰਮ) ਜਾਂ ਓਵਰਸਟਰੈਚਿੰਗ (OS) ਸਥਿਤੀਆਂ (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, ਅਤੇ D4 MTOS) ਦੇ ਅਧੀਨ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਤੋਂ ਕਲਚਰ ਮੀਡੀਆ ਵਿੱਚ NT-ProBNP ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦਾ ਬਾਰ ਗ੍ਰਾਫ ਮਾਪਣਾ। ਆਮ ਖਿੱਚ ਤੱਕ). MT ਸਾਧਾਰਨ ਸਟ੍ਰੈਚ (ਨਾਰਮ) ਜਾਂ ਓਵਰਸਟਰੈਚਿੰਗ (OS) ਸਥਿਤੀਆਂ (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, ਅਤੇ D4 MTOS) ਦੇ ਅਧੀਨ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਤੋਂ ਕਲਚਰ ਮੀਡੀਆ ਵਿੱਚ NT-ProBNP ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦਾ ਬਾਰ ਗ੍ਰਾਫ ਮਾਪਣਾ, ਦੋ ਟੁਕੜਿਆਂ ਤੋਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪਾਇਜ-00/ਪੀ.ਐੱਨ.ਓ.ਵੀ.ਏ. **, **ਪਗ0, ਗ੍ਰੋ. ਆਮ ਖਿੱਚ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ).ਆਮ MT ਸਟ੍ਰੈਚ (ਆਦਰਸ਼) ਜਾਂ ਓਵਰਸਟਰੈਚ (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, ਅਤੇ D4) ਦੀਆਂ ਸ਼ਰਤਾਂ ਅਧੀਨ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਤੋਂ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ NT-ProBNP ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦਾ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਹਿਸਟੋਗ੍ਰਾਮ।**p < 0,01 по сравнению с нормальным растяжением)। **ਪੀ <0.01 ਆਮ ਖਿੱਚ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। a 在MT 正常拉伸(Norm) 或过度拉伸(OS) 条件下培养的心脏切片培养基中n4n-ProBNP 浓度離坡離MTNorm)、3（D2 MTOS、D4 MTNorm 和D4 MTOS）来自不同猪的切片/组，进行双向方差分析＋減中0p0差分析＋減中0p0 ). ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਵਿੱਚ NT-ProBNP ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੀ ਮਾਤਰਾ MT ਸਧਾਰਣ ਸਟ੍ਰੈਚ (ਨਾਰਮ) ਜਾਂ ਓਵਰਸਟਰੈਚ (OS) ਸਥਿਤੀਆਂ (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm和D4 MTOS) ਦੇ ਅਧੀਨ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਵੱਖ-ਵੱਖ 猪的切切片猪的切片湄湄滥片发发动; **ਆਮ ਖਿੱਚਣ ਦੇ ਨਾਲ ਤੁਲਨਾ, p <0.01)।ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਵਿੱਚ NT-ProBNP ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੀ ਹਿਸਟੋਗ੍ਰਾਮ ਮਾਪਦੰਡ ਆਮ MT ਸਟ੍ਰੈਚ (ਆਦਰਸ਼) ਜਾਂ ਓਵਰਸਟਰੈਚ (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm) ਅਤੇ D4 MTOS) ਦੇ ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ ਦੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਅਧੀਨ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ;**p < 0,01 по сравнению с нормальным растяжением)। **ਪੀ <0.01 ਆਮ ਖਿੱਚ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। b ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-T ਅਤੇ WGA (ਖੱਬੇ) ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਚਿੱਤਰ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਆਕਾਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (ਸੱਜੇ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ਸੈੱਲ/ਸਮੂਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ 10 ਵੱਖੋ-ਵੱਖਰੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਤੋਂ, ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੀ ਤੁਲਨਾ t-t-0 st00 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਆਮ ਹੈ। b ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-T ਅਤੇ WGA (ਖੱਬੇ) ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਚਿੱਤਰ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਆਕਾਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (ਸੱਜੇ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ਸੈੱਲ/ਸਮੂਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ 10 ਵੱਖ-ਵੱਖ ਟੁਕੜਿਆਂ ਤੋਂ, ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਸਟੂਡੈਂਟ ਦੀ ਤੁਲਨਾ t-t-0 ਸਧਾਰਣ ਨਾਲ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ। b Репрезентативные изображения срезов сердца, окрашенных тропонином-Т и АЗП (слева) и количественного определения (разображения = разображения срезов сердца) MTOS), 369 (D6 MTNorm) клеток/группу из 10 разных срезов от разных свиней, два- проводится хвостовой t-критерий, два- проводится хвостовой t-критерий , ***0p00тюд* ению с нормальным растяжением). b ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-ਟੀ ਅਤੇ AZP (ਖੱਬੇ) ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਆਕਾਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (ਸੱਜੇ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ਸੈੱਲ/ਸਮੂਹ ਦੇ 10 ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ ਵੱਖੋ-ਵੱਖਰੇ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਧੱਬੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਚਿੱਤਰ, ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ t-0p0 ਨਾਲ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। b 用肌钙蛋白-T 和ਡਬਲਯੂਜੀਏ来自不同猪的10 个不同切片的369（D6 MTNorm）细胞/组，两进行有尾学生t* 01). b ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀਆਂ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਤਸਵੀਰਾਂ ਕੈਲਕੇਰਿਨ-ਟੀ ਅਤੇ ਡਬਲਯੂ.ਜੀ.ਏ. (ਖੱਬੇ) ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਆਕਾਰ (ਸੱਜੇ) (n = 330 (D6 MTOS), 10 ਵੱਖ-ਵੱਖ ਟੁਕੜਿਆਂ ਤੋਂ 369 (D6 MTNorm)) ਸੈੱਲਾਂ/组，两方法歕有 ਸਧਾਰਣ ਟੈਸਟ ਦੇ ਨਾਲ ਸੈੱਲਾਂ/组，两方法歕有 ਦੇ ਨਾਲ ਦਾਗਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ* p <0.0001)। b Репрезентативные изображения срезов сердца, окрашенных тропонином-Т и АЗП (слева) и количественная оценка размева (33MT), 369 (D6 MTNorm) из 10 различных срезов от разных свиней Клетки/группа, двусторонние критерий Стьюдента; ****p < 0, 0,0,0,00,000 стяжением)। b ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-ਟੀ ਅਤੇ AZP (ਖੱਬੇ) ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਹੋਏ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀਆਂ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਤਸਵੀਰਾਂ ਅਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ 10 ਵੱਖ-ਵੱਖ ਭਾਗਾਂ ਤੋਂ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਆਕਾਰ (ਸੱਜੇ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ਦੀ ਮਾਪਦੰਡ) ਸੈੱਲ/ਸਮੂਹ, ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਮਾਪਦੰਡ;****ਪੀ <0.0001 ਆਮ ਤਣਾਅ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। c ਦਿਨ 0 ਅਤੇ ਦਿਨ 6 MTOS ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਚਿੱਤਰ ਜੋ ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-T ਅਤੇ NFATC4 ਲਈ ਇਮਯੂਨੋਲੇਬਲ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ ਅਤੇ NFATC4 ਦੇ CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ਦੇ ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ ਦੇ ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਲੋਕੇਸ਼ਨ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। c ਦਿਨ 0 ਅਤੇ ਦਿਨ 6 MTOS ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਚਿੱਤਰ ਜੋ ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-T ਅਤੇ NFATC4 ਲਈ ਇਮਯੂਨੋਲੇਬਲ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ ਅਤੇ NFATC4 ਦੇ CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ਦੇ ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ ਦੇ ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਲੋਕੇਸ਼ਨ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ ਦੋ-ਪੱਛੇ ਵਾਲੇ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। c Репрезентативные изображения для срезов сердца 0 и 6 дней MTOS, иммуномеченых для тропонина-Т и NFATC4, и невцинканечная срезов сердца FATC4 в ядра кавернозных клеток (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срезов/группу от разных свиней , выполняется двусторонний; c 0 ਅਤੇ 6 ਦਿਨਾਂ ਦੇ MTOS 'ਤੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਚਿੱਤਰ, ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-T ਅਤੇ NFATC4 ਲਈ ਇਮਯੂਨੋਲੇਬਲ, ਅਤੇ ਕੈਵਰਨਸ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਵਿੱਚ NFATC4 ਟ੍ਰਾਂਸਲੋਕੇਸ਼ਨ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ਦੇ ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ ਦੋ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ;*ਪੀ <0.05)। c 用于肌钙蛋白-T 和NFATC4 免疫标记的第0 天和第6 天MTOS 心脏切片的代表的代表的片的代表性图像，把表性图像，代表的代表的片的代表性图像，䌻疫标记的第0易位至CM 细胞核的量化（n = 4 (D0)、3 (D6 MTOS) 切片/组, 进行双尾学生t 检验；*p <.0.0. c ਵੱਖ-ਵੱਖ NFATC4 易位至CM ਸੈੱਲ ਨਿਊਕਲੀਅਸ 的 ਮਾਤਰਾ 化 (n = 4 (D0) 化 (n = 4 (D0) 化 (n = 4 (D0) 化 (n = 4 (D0)) 化 (n = 4 (D0) 化 (n = 4 (D0)) ਤੋਂ 第0天和第6天MTOS ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜੇ, ਅਤੇ NFATC4 ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਚਿੱਤਰ间双尾学生et 电影；*p <0.05)। c Репрезентативные изображения срезов сердца MTOS на 0 и 6 день для иммуномаркировки тропонином-Т и NFATC4 и конличев сердца MTOS в ядра CM от разных свиней (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срез/группа, два- хвостатый t-критерий Стьюдента; *p <0,05). c ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ/ਸਮੂਹ, 2-ਪੱਤਰ ਵਾਲੇ ਵਿਦਿਆਰਥੀ, 3 (D6 MTOS) ਟੁਕੜਿਆਂ/ਸਮੂਹ ਤੋਂ ਟਰੋਪੋਨਿਨ-ਟੀ ਅਤੇ NFATC4 ਇਮਯੂਨੋਲੇਬਲਿੰਗ ਅਤੇ NFATC4 ਟ੍ਰਾਂਸਲੋਕੇਸ਼ਨ ਦੇ ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਵਿੱਚ 0 ਅਤੇ 6 ਦਿਨ ਵਿੱਚ MTOS ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਚਿੱਤਰ।ਗਲਤੀ ਪੱਟੀਆਂ ਮਤਲਬ ± ਮਿਆਰੀ ਵਿਵਹਾਰ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀਆਂ ਹਨ।
ਟ੍ਰਾਂਸਲੇਸ਼ਨਲ ਕਾਰਡੀਓਵੈਸਕੁਲਰ ਖੋਜ ਲਈ ਸੈਲੂਲਰ ਮਾਡਲਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਜੋ ਦਿਲ ਦੇ ਵਾਤਾਵਰਣ ਨੂੰ ਸਹੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਦੁਬਾਰਾ ਪੈਦਾ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਇੱਕ CTCM ਯੰਤਰ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਦਿੱਤੀ ਗਈ ਸੀ ਜੋ ਦਿਲ ਦੇ ਅਲਟਰਾਥਿਨ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ।CTCM ਸਿਸਟਮ ਵਿੱਚ ਸਰੀਰਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਮਕਾਲੀ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਮੈਕਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਅਤੇ T3 ਅਤੇ Dex ਤਰਲ ਸੰਸ਼ੋਧਨ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।ਜਦੋਂ ਪੋਰਸੀਨ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਇਹਨਾਂ ਕਾਰਕਾਂ ਦੇ ਸੰਪਰਕ ਵਿੱਚ ਲਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਤਾਂ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਵਿਹਾਰਕਤਾ, ਢਾਂਚਾਗਤ ਅਖੰਡਤਾ, ਪਾਚਕ ਗਤੀਵਿਧੀ, ਅਤੇ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ 12 ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਦੇ ਬਾਅਦ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਵਿੱਚ ਵਾਂਗ ਹੀ ਰਹੇ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਕਾਰਡੀਅਕ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਖਿੱਚਣ ਨਾਲ ਹਾਈਪਰਟੈਨਸ਼ਨ ਕਾਰਨ ਦਿਲ ਦੀ ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫੀ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਕੁੱਲ ਮਿਲਾ ਕੇ, ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਇੱਕ ਸਧਾਰਣ ਕਾਰਡੀਅਕ ਫੀਨੋਟਾਈਪ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਵਿੱਚ ਸਰੀਰਕ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੀ ਮਹੱਤਵਪੂਰਣ ਭੂਮਿਕਾ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਡਰੱਗ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਲਈ ਇੱਕ ਪਲੇਟਫਾਰਮ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੇ ਹਨ।
ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਕਾਰਕ ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟਸ ਦੇ ਕੰਮਕਾਜ ਅਤੇ ਬਚਾਅ ਲਈ ਇੱਕ ਅਨੁਕੂਲ ਵਾਤਾਵਰਣ ਬਣਾਉਣ ਵਿੱਚ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਇਹਨਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਸਭ ਤੋਂ ਸਪੱਸ਼ਟ ਕਾਰਕ (1) ਅੰਤਰ-ਸੈਲੂਲਰ ਪਰਸਪਰ ਕ੍ਰਿਆਵਾਂ, (2) ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਮੈਕਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ, (3) ਹਿਊਮਰਲ ਕਾਰਕ, ਅਤੇ (4) ਪਾਚਕ ਸਬਸਟਰੇਟਸ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਹਨ।ਸਰੀਰਕ ਸੈੱਲ-ਤੋਂ-ਸੈੱਲ ਪਰਸਪਰ ਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਲਈ ਇੱਕ ਐਕਸਟਰਸੈਲੂਲਰ ਮੈਟਰਿਕਸ ਦੁਆਰਾ ਸਮਰਥਿਤ ਮਲਟੀਪਲ ਸੈੱਲ ਕਿਸਮਾਂ ਦੇ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਤਿੰਨ-ਅਯਾਮੀ ਨੈੱਟਵਰਕਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਅਜਿਹੇ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਸੈਲੂਲਰ ਪਰਸਪਰ ਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਵਿਅਕਤੀਗਤ ਸੈੱਲ ਕਿਸਮਾਂ ਦੇ ਸਹਿ-ਸਭਿਆਚਾਰ ਦੁਆਰਾ ਵਿਟਰੋ ਵਿੱਚ ਪੁਨਰਗਠਨ ਕਰਨਾ ਮੁਸ਼ਕਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਆਰਗਨੋਟਾਈਪਿਕ ਪ੍ਰਕਿਰਤੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਕਾਰਡੀਅਕ ਫੀਨੋਟਾਈਪ 33,34,35 ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਲਈ ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟਸ ਦੀ ਮਕੈਨੀਕਲ ਖਿੱਚ ਅਤੇ ਬਿਜਲੀ ਦੀ ਉਤੇਜਨਾ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹਨ।ਜਦੋਂ ਕਿ ਮਕੈਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਨੂੰ ਹਾਈਪੀਐਸਸੀ-ਸੀਐਮ ਕੰਡੀਸ਼ਨਿੰਗ ਅਤੇ ਪਰਿਪੱਕਤਾ ਲਈ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਕਈ ਸ਼ਾਨਦਾਰ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ ਅਨਿਅਕਸ਼ੀਅਲ ਲੋਡਿੰਗ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਵਿੱਚ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਮਕੈਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਦੀ ਕੋਸ਼ਿਸ਼ ਕੀਤੀ ਹੈ।ਇਹ ਅਧਿਐਨ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ 2D uniaxial ਮਕੈਨੀਕਲ ਲੋਡਿੰਗ ਦਾ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਦਿਲ ਦੇ ਫੀਨੋਟਾਈਪ 'ਤੇ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪੈਂਦਾ ਹੈ।ਇਹਨਾਂ ਅਧਿਐਨਾਂ ਵਿੱਚ, ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਜਾਂ ਤਾਂ ਆਈਸੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਟੈਂਸਿਲ ਫੋਰਸ 17, ਲੀਨੀਅਰ ਆਕਸੋਟੋਨਿਕ ਲੋਡਿੰਗ 18 ਨਾਲ ਲੋਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਾਂ ਫੋਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਡਿਊਸਰ ਫੀਡਬੈਕ ਅਤੇ ਤਣਾਅ ਡਰਾਈਵਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕਾਰਡੀਅਕ ਚੱਕਰ ਨੂੰ ਮੁੜ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਹ ਵਿਧੀਆਂ ਵਾਤਾਵਰਣ ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਦੇ ਬਿਨਾਂ ਇਕ-ਅੈਕਸੀਅਲ ਟਿਸ਼ੂ ਸਟ੍ਰੈਚ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਕਾਰਡੀਅਕ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਦਬਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਅਸਧਾਰਨ ਤਣਾਅ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਜੀਨਾਂ ਦੀ ਓਵਰਪ੍ਰੈਸ਼ਨ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਇੱਥੇ ਵਰਣਿਤ CTCM ਇੱਕ 3D ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਮੈਕਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਚੱਕਰ ਦੇ ਸਮੇਂ ਅਤੇ ਸਰੀਰਕ ਖਿੱਚ (25% ਸਟ੍ਰੈਚ, 40% ਸਿਸਟੋਲ, 60% ਡਾਇਸਟੋਲ, ਅਤੇ 72 ਬੀਟਸ ਪ੍ਰਤੀ ਮਿੰਟ) ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਕੁਦਰਤੀ ਕਾਰਡੀਅਕ ਚੱਕਰ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ ਇਹ ਤਿੰਨ-ਅਯਾਮੀ ਮਕੈਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਇਕੱਲੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਇਕਸਾਰਤਾ ਨੂੰ ਬਰਕਰਾਰ ਰੱਖਣ ਲਈ ਕਾਫੀ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਵਿਹਾਰਕਤਾ, ਕਾਰਜਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਅਖੰਡਤਾ ਨੂੰ ਢੁਕਵੇਂ ਢੰਗ ਨਾਲ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਲਈ T3/Dex ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਹਾਸੋਹੀਣ ਅਤੇ ਮਕੈਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਦੇ ਸੁਮੇਲ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
ਹਾਸੋਹੀਣੀ ਕਾਰਕ ਬਾਲਗ ਦਿਲ ਦੇ ਫੀਨੋਟਾਈਪ ਨੂੰ ਸੰਚਾਲਿਤ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਣ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਇਹ HiPS-CM ਅਧਿਐਨਾਂ ਵਿੱਚ ਉਜਾਗਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਪਰਿਪੱਕਤਾ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ ਕਰਨ ਲਈ ਕਲਚਰ ਮੀਡੀਆ ਵਿੱਚ T3 ਅਤੇ Dex ਨੂੰ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।T3 ਸੈੱਲ ਝਿੱਲੀ ਵਿੱਚ ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ, ਸ਼ੱਕਰ ਅਤੇ ਕੈਲਸ਼ੀਅਮ ਦੀ ਆਵਾਜਾਈ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, T3 MHC-α ਸਮੀਕਰਨ ਅਤੇ MHC-β ਡਾਊਨਰੇਗੂਲੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਭਰੂਣ CM ਵਿੱਚ ਹੌਲੀ ਟਵਿਚ ਮਾਈਓਫਿਬ੍ਰਿਲਸ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਪਰਿਪੱਕ ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟਸ ਵਿੱਚ ਤੇਜ਼ ਮਰੋੜ ਮਾਇਓਫਿਬਰਿਲਜ਼ ਦੇ ਗਠਨ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਹਾਈਪੋਥਾਇਰਾਇਡ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ T3 ਦੀ ਕਮੀ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਮਾਇਓਫਿਬਰਿਲਰ ਬੈਂਡਾਂ ਦਾ ਨੁਕਸਾਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਟੋਨ ਵਿਕਾਸ ਦੀ ਦਰ ਘਟ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਡੇਕਸ ਗਲੂਕੋਕਾਰਟੀਕੋਇਡ ਰੀਸੈਪਟਰਾਂ 'ਤੇ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਵੱਖਰੇ ਪਰਫਿਊਜ਼ਡ ਦਿਲਾਂ ਵਿੱਚ ਮਾਇਓਕਾਰਡੀਅਲ ਸੰਕੁਚਨਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ;38 ਇਹ ਸੁਧਾਰ ਕੈਲਸ਼ੀਅਮ ਡਿਪਾਜ਼ਿਟ-ਡਰਾਇਵ ਐਂਟਰੀ (SOCE) 39,40 'ਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਡੈਕਸ ਇਸਦੇ ਰੀਸੈਪਟਰਾਂ ਨਾਲ ਜੁੜਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਇੱਕ ਵਿਆਪਕ ਅੰਦਰੂਨੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪੈਦਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਜੋ ਇਮਿਊਨ ਫੰਕਸ਼ਨ ਅਤੇ ਸੋਜਸ਼ ਨੂੰ ਦਬਾਉਂਦੀ ਹੈ30।
ਸਾਡੇ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਭੌਤਿਕ ਮਕੈਨੀਕਲ ਸਟੀਮੂਲੇਸ਼ਨ (MS) ਨੇ Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਸਮੁੱਚੀ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਦੀ ਕਾਰਗੁਜ਼ਾਰੀ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਕੀਤਾ ਹੈ, ਪਰ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਵਿੱਚ 12 ਦਿਨਾਂ ਵਿੱਚ ਵਿਹਾਰਕਤਾ, ਢਾਂਚਾਗਤ ਅਖੰਡਤਾ, ਅਤੇ ਦਿਲ ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਕਾਇਮ ਰੱਖਣ ਵਿੱਚ ਅਸਫਲ ਰਿਹਾ ਹੈ।Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, CTCM (MT) ਸਭਿਆਚਾਰਾਂ ਵਿੱਚ T3 ਅਤੇ Dex ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਨਾਲ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਹੋਇਆ ਹੈ ਅਤੇ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਨਾਲ ਸਮਾਨ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲਾਂ, ਢਾਂਚਾਗਤ ਅਖੰਡਤਾ ਅਤੇ ਪਾਚਕ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਕਾਇਮ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਹੈ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਟਿਸ਼ੂ ਸਟ੍ਰੈਚ ਦੀ ਡਿਗਰੀ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰਕੇ, STCM ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਇੱਕ ਹਾਈਪਰਐਕਸਟੇਂਸ਼ਨ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਾਰਡੀਆਕ ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫੀ ਮਾਡਲ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਜੋ STCM ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਬਹੁਪੱਖੀਤਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਨੋਟ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਕਿ ਹਾਲਾਂਕਿ ਕਾਰਡੀਅਕ ਰੀਮੋਡਲਿੰਗ ਅਤੇ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਵਿੱਚ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਅਜਿਹੇ ਅੰਗ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਦੇ ਸੰਚਾਰ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਸੈੱਲ ਢੁਕਵੇਂ ਸਾਇਟੋਕਿਨਸ ਦੇ ਨਾਲ-ਨਾਲ ਫੈਗੋਸਾਈਟੋਸਿਸ ਅਤੇ ਹੋਰ ਰੀਮੋਡਲਿੰਗ ਕਾਰਕ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗ ਅਜੇ ਵੀ ਤਣਾਅ ਅਤੇ ਸਦਮੇ ਦੇ ਜਵਾਬ ਵਿੱਚ ਫਾਈਬਰੋਟਿਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ।myofibroblasts ਵਿੱਚ.ਇਸ ਦਾ ਪਹਿਲਾਂ ਕਾਰਡੀਆਕ ਸਲਾਈਸ ਮਾਡਲ ਵਿੱਚ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।ਇਹ ਨੋਟ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਕਿ CTCM ਪੈਰਾਮੀਟਰਾਂ ਨੂੰ ਟੈਚੀਕਾਰਡਿਆ, ਬ੍ਰੈਡੀਕਾਰਡਿਆ, ਅਤੇ ਮਕੈਨੀਕਲ ਸੰਚਾਰੀ ਸਹਾਇਤਾ (ਮਕੈਨੀਕਲ ਅਨਲੋਡਡ ਦਿਲ) ਵਰਗੀਆਂ ਕਈ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਨ ਲਈ ਦਬਾਅ/ਬਿਜਲੀ ਦੇ ਐਪਲੀਟਿਊਡ ਅਤੇ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ ਨੂੰ ਬਦਲ ਕੇ ਮੋਡਿਊਲੇਟ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਸਿਸਟਮ ਨੂੰ ਡਰੱਗ ਟੈਸਟਿੰਗ ਲਈ ਇੱਕ ਮਾਧਿਅਮ ਥ੍ਰੋਪੁੱਟ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਸੀਟੀਸੀਐਮ ਦੀ ਸਮਰੱਥਾ ਓਵਰਐਕਸਰਸ਼ਨ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਾਰਡੀਆਕ ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫੀ ਨੂੰ ਮਾਡਲ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਵਿਅਕਤੀਗਤ ਥੈਰੇਪੀ ਲਈ ਇਸ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਦਾ ਰਾਹ ਪੱਧਰਾ ਕਰਦੀ ਹੈ।ਸਿੱਟੇ ਵਜੋਂ, ਮੌਜੂਦਾ ਅਧਿਐਨ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਮਕੈਨੀਕਲ ਖਿੱਚ ਅਤੇ ਹਾਸੋਹੀਣੀ ਉਤੇਜਨਾ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹਨ।
ਹਾਲਾਂਕਿ ਇੱਥੇ ਪੇਸ਼ ਕੀਤੇ ਗਏ ਅੰਕੜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ CTCM ਬਰਕਰਾਰ ਮਾਇਓਕਾਰਡੀਅਮ ਮਾਡਲਿੰਗ ਲਈ ਇੱਕ ਬਹੁਤ ਹੀ ਵਧੀਆ ਪਲੇਟਫਾਰਮ ਹੈ, ਇਸ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਵਿਧੀ ਦੀਆਂ ਕੁਝ ਸੀਮਾਵਾਂ ਹਨ।ਸੀਟੀਸੀਐਮ ਕਲਚਰ ਦੀ ਮੁੱਖ ਸੀਮਾ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਇਹ ਟੁਕੜਿਆਂ 'ਤੇ ਨਿਰੰਤਰ ਗਤੀਸ਼ੀਲ ਮਕੈਨੀਕਲ ਤਣਾਅ ਨੂੰ ਲਾਗੂ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਹਰੇਕ ਚੱਕਰ ਦੌਰਾਨ ਕਾਰਡੀਅਕ ਸਲਾਈਸ ਸੰਕੁਚਨ ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ ਨਾਲ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕਰਨ ਦੀ ਸਮਰੱਥਾ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ (7 ਮਿਲੀਮੀਟਰ) ਦੇ ਛੋਟੇ ਆਕਾਰ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਰਵਾਇਤੀ ਫੋਰਸ ਸੈਂਸਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਦੇ ਬਾਹਰ ਸਿਸਟੋਲਿਕ ਫੰਕਸ਼ਨ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਦੀ ਸਮਰੱਥਾ ਸੀਮਤ ਹੈ.ਮੌਜੂਦਾ ਹੱਥ-ਲਿਖਤ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਕੰਟਰੈਕਟਾਈਲ ਫੰਕਸ਼ਨ ਦੇ ਇੱਕ ਸੂਚਕ ਵਜੋਂ ਆਪਟੀਕਲ ਵੋਲਟੇਜ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਕੇ ਇਸ ਸੀਮਾ ਨੂੰ ਅੰਸ਼ਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਦੂਰ ਕਰਦੇ ਹਾਂ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਸ ਸੀਮਾ ਲਈ ਹੋਰ ਕੰਮ ਦੀ ਲੋੜ ਹੋਵੇਗੀ ਅਤੇ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਵਿੱਚ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਕਾਰਜਾਂ ਦੀ ਆਪਟੀਕਲ ਨਿਗਰਾਨੀ ਲਈ ਵਿਧੀਆਂ ਨੂੰ ਪੇਸ਼ ਕਰਕੇ ਭਵਿੱਖ ਵਿੱਚ ਹੱਲ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਕੈਲਸ਼ੀਅਮ ਅਤੇ ਵੋਲਟੇਜ-ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਰੰਗਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਆਪਟੀਕਲ ਮੈਪਿੰਗ।ਸੀਟੀਸੀਐਮ ਦੀ ਇੱਕ ਹੋਰ ਸੀਮਾ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਕਾਰਜਸ਼ੀਲ ਮਾਡਲ ਸਰੀਰਕ ਤਣਾਅ (ਪ੍ਰੀਲੋਡ ਅਤੇ ਆਫਟਰਲੋਡ) ਵਿੱਚ ਹੇਰਾਫੇਰੀ ਨਹੀਂ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਸੀਟੀਸੀਐਮ ਵਿੱਚ, ਬਹੁਤ ਵੱਡੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਡਾਇਸਟੋਲ (ਪੂਰੀ ਖਿੱਚ) ਅਤੇ ਸਿਸਟੋਲ (ਬਿਜਲੀ ਉਤੇਜਨਾ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਸੰਕੁਚਨ ਦੀ ਲੰਬਾਈ) ਵਿੱਚ 25% ਸਰੀਰਕ ਖਿੱਚ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਉਲਟ ਦਿਸ਼ਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਦਬਾਅ ਪੈਦਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਸ ਸੀਮਾ ਨੂੰ ਭਵਿੱਖ ਦੇ CTCM ਡਿਜ਼ਾਈਨਾਂ ਵਿੱਚ ਦੋਵਾਂ ਪਾਸਿਆਂ ਤੋਂ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ 'ਤੇ ਲੋੜੀਂਦੇ ਦਬਾਅ ਦੁਆਰਾ ਅਤੇ ਦਿਲ ਦੇ ਚੈਂਬਰਾਂ ਵਿੱਚ ਹੋਣ ਵਾਲੇ ਸਹੀ ਦਬਾਅ-ਆਵਾਜ਼ ਸਬੰਧਾਂ ਨੂੰ ਲਾਗੂ ਕਰਕੇ ਹਟਾ ਦਿੱਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
ਇਸ ਖਰੜੇ ਵਿੱਚ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਗਈ ਓਵਰਸਟਰੈਚ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਰੀਮਡਲਿੰਗ ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫਿਕ ਹਾਈਪਰਸਟਰੈਚ ਸਿਗਨਲਾਂ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਨ ਤੱਕ ਸੀਮਿਤ ਹੈ।ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਇਹ ਮਾਡਲ ਹਿਊਮੋਰਲ ਜਾਂ ਨਿਊਰਲ ਕਾਰਕਾਂ (ਜੋ ਇਸ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਨਹੀਂ ਹਨ) ਦੀ ਲੋੜ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਖਿੱਚ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫਿਕ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਦੇ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।CTCM ਦੀ ਬਹੁਲਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਹੋਰ ਅਧਿਐਨਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ, ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਇਮਿਊਨ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਸਹਿ-ਸਭਿਆਚਾਰ, ਪਲਾਜ਼ਮਾ ਹਿਊਮੋਰਲ ਕਾਰਕਾਂ ਨੂੰ ਸਰਕੂਲੇਟ ਕਰਨਾ, ਅਤੇ ਨਿਊਰੋਨਲ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਸਹਿ-ਸਭਿਆਚਾਰ ਜਦੋਂ ਸੀਟੀਸੀਐਮ ਨਾਲ ਰੋਗ ਮਾਡਲਿੰਗ ਦੀਆਂ ਸੰਭਾਵਨਾਵਾਂ ਨੂੰ ਸੁਧਾਰਦਾ ਹੈ।
ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ 13 ਸੂਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੀਆਂ ਸਾਰੀਆਂ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਸੰਸਥਾਗਤ ਦਿਸ਼ਾ-ਨਿਰਦੇਸ਼ਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ ਅਤੇ ਯੂਨੀਵਰਸਿਟੀ ਆਫ਼ ਲੂਇਸਵਿਲ ਸੰਸਥਾਗਤ ਪਸ਼ੂ ਦੇਖਭਾਲ ਅਤੇ ਵਰਤੋਂ ਕਮੇਟੀ ਦੁਆਰਾ ਮਨਜ਼ੂਰ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ।ਐਓਰਟਿਕ ਆਰਕ ਨੂੰ ਕਲੈਂਪ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਦਿਲ ਨੂੰ 1 L ਨਿਰਜੀਵ ਕਾਰਡੀਓਪਲੇਜੀਆ (110 mM NaCl, 1.2 mM CaCl2, 16 mM KCl, 16 mM MgCl2, 10 mM NaHCO3, 5 U/mL ਹੈਪਰੀਨ, pH ਤੱਕ) ਨਾਲ ਪਰਫਿਊਜ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ; ਦਿਲਾਂ ਨੂੰ ਬਰਫ਼-ਠੰਡੇ ਕਾਰਡੀਓਪਲੇਜਿਕ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਲੈਬ ਵਿੱਚ ਲਿਜਾਇਆ ਨਹੀਂ ਜਾਂਦਾ ਜੋ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ <10 ਮਿੰਟ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਦਿਲਾਂ ਨੂੰ ਬਰਫ਼-ਠੰਡੇ ਕਾਰਡੀਓਪਲੇਜਿਕ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਲੈਬ ਵਿੱਚ ਲਿਜਾਇਆ ਨਹੀਂ ਜਾਂਦਾ ਜੋ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ <10 ਮਿੰਟ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। сердца хранили в ледяном кардиоплегическом растворе до транспортировки в лабораторию на льду, что обычно занимает <10 мин. ਦਿਲਾਂ ਨੂੰ ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਤੱਕ ਲਿਜਾਣ ਤੱਕ ਬਰਫ਼-ਠੰਡੇ ਕਾਰਡੀਓਪਲੇਜਿਕ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਸੀ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ <10 ਮਿੰਟ ਲੱਗਦੇ ਹਨ।将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室,通常<10分钟.将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室,通常<10分钟. Держите сердца в ледяной кардиоплегии до транспортировки в лабораторию на льду, обычно <10 мин. ਦਿਲ ਨੂੰ ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਤੱਕ ਲਿਜਾਣ ਤੱਕ ਬਰਫ਼ ਦੇ ਕਾਰਡੀਓਪਲੇਜੀਆ 'ਤੇ ਰੱਖੋ, ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ <10 ਮਿੰਟ।
CTCM ਡਿਵਾਈਸ ਨੂੰ SolidWorks ਕੰਪਿਊਟਰ-ਏਡਿਡ ਡਿਜ਼ਾਈਨ (CAD) ਸਾਫਟਵੇਅਰ ਵਿੱਚ ਵਿਕਸਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਕਲਚਰ ਚੈਂਬਰ, ਡਿਵਾਈਡਰ ਅਤੇ ਏਅਰ ਚੈਂਬਰ CNC ਕਲੀਅਰ ਐਕਰੀਲਿਕ ਪਲਾਸਟਿਕ ਦੇ ਬਣੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।7mm ਵਿਆਸ ਵਾਲੀ ਬੈਕ-ਅੱਪ ਰਿੰਗ ਕੇਂਦਰ ਵਿੱਚ ਉੱਚ ਘਣਤਾ ਵਾਲੀ ਪੋਲੀਥੀਨ (HDPE) ਦੀ ਬਣੀ ਹੋਈ ਹੈ ਅਤੇ ਹੇਠਾਂ ਮੀਡੀਆ ਨੂੰ ਸੀਲ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਸਿਲੀਕੋਨ ਓ-ਰਿੰਗ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਓ-ਰਿੰਗ ਗਰੋਵ ਹੈ।ਇੱਕ ਪਤਲੀ ਸਿਲਿਕਾ ਝਿੱਲੀ ਕਲਚਰ ਚੈਂਬਰ ਨੂੰ ਵਿਭਾਜਨ ਪਲੇਟ ਤੋਂ ਵੱਖ ਕਰਦੀ ਹੈ।ਸਿਲੀਕੋਨ ਝਿੱਲੀ 0.02″ ਮੋਟੀ ਸਿਲੀਕੋਨ ਸ਼ੀਟ ਤੋਂ ਲੇਜ਼ਰ ਕੱਟੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸਦੀ ਕਠੋਰਤਾ 35A ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਹੇਠਲੇ ਅਤੇ ਉੱਪਰਲੇ ਸਿਲੀਕੋਨ ਗੈਸਕੇਟ 1/16″ ਮੋਟੀ ਸਿਲੀਕੋਨ ਸ਼ੀਟ ਤੋਂ ਲੇਜ਼ਰ ਕੱਟੇ ਹੋਏ ਹਨ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਕਠੋਰਤਾ 50A ਹੈ।316L ਸਟੇਨਲੈਸ ਸਟੀਲ ਦੇ ਪੇਚਾਂ ਅਤੇ ਵਿੰਗ ਨਟਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਬਲਾਕ ਨੂੰ ਬੰਨ੍ਹਣ ਅਤੇ ਏਅਰਟਾਈਟ ਸੀਲ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
ਇੱਕ ਸਮਰਪਿਤ ਪ੍ਰਿੰਟਿਡ ਸਰਕਟ ਬੋਰਡ (PCB) ਨੂੰ C-PACE-EM ਸਿਸਟਮ ਨਾਲ ਜੋੜਨ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।ਪੀਸੀਬੀ 'ਤੇ ਸਵਿਸ ਮਸ਼ੀਨ ਕਨੈਕਟਰ ਸਾਕਟ ਗ੍ਰੇਫਾਈਟ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡ ਨਾਲ ਸਿਲਵਰ-ਪਲੇਟੇਡ ਤਾਂਬੇ ਦੀਆਂ ਤਾਰਾਂ ਅਤੇ ਕਾਂਸੀ ਦੇ 0-60 ਪੇਚਾਂ ਦੁਆਰਾ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡਾਂ ਵਿੱਚ ਪੇਚ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ।ਪ੍ਰਿੰਟਿਡ ਸਰਕਟ ਬੋਰਡ 3D ਪ੍ਰਿੰਟਰ ਦੇ ਕਵਰ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਹੈ।
CTCM ਯੰਤਰ ਨੂੰ ਇੱਕ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮੇਬਲ ਨਿਊਮੈਟਿਕ ਐਕਟੁਏਟਰ (PPD) ਦੁਆਰਾ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜੋ ਇੱਕ ਕਾਰਡਿਕ ਚੱਕਰ ਵਾਂਗ ਇੱਕ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਸੰਚਾਰ ਦਬਾਅ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਏਅਰ ਚੈਂਬਰ ਦੇ ਅੰਦਰ ਦਬਾਅ ਵਧਦਾ ਹੈ, ਲਚਕਦਾਰ ਸਿਲੀਕੋਨ ਝਿੱਲੀ ਉੱਪਰ ਵੱਲ ਫੈਲਦੀ ਹੈ, ਟਿਸ਼ੂ ਸਾਈਟ ਦੇ ਹੇਠਾਂ ਮਾਧਿਅਮ ਨੂੰ ਮਜਬੂਰ ਕਰਦੀ ਹੈ।ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਖੇਤਰ ਨੂੰ ਫਿਰ ਤਰਲ ਦੇ ਇਸ ਨਿਕਾਸੀ ਦੁਆਰਾ ਖਿੱਚਿਆ ਜਾਵੇਗਾ, ਡਾਇਸਟੋਲ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਦਿਲ ਦੇ ਸਰੀਰਕ ਵਿਸਤਾਰ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਦਾ ਹੈ.ਆਰਾਮ ਦੇ ਸਿਖਰ 'ਤੇ, ਗ੍ਰਾਫਾਈਟ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡਸ ਦੁਆਰਾ ਬਿਜਲਈ ਉਤੇਜਨਾ ਨੂੰ ਲਾਗੂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਹਵਾ ਦੇ ਚੈਂਬਰ ਵਿੱਚ ਦਬਾਅ ਘਟਿਆ ਅਤੇ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਸੰਕੁਚਨ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਿਆ।ਪਾਈਪ ਦੇ ਅੰਦਰ ਹਵਾ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਦਬਾਅ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਇੱਕ ਪ੍ਰੈਸ਼ਰ ਸੈਂਸਰ ਵਾਲਾ ਇੱਕ ਹੇਮੋਸਟੈਟਿਕ ਵਾਲਵ ਹੈ।ਪ੍ਰੈਸ਼ਰ ਸੈਂਸਰ ਦੁਆਰਾ ਮਹਿਸੂਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਦਬਾਅ ਲੈਪਟਾਪ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਡੇਟਾ ਕੁਲੈਕਟਰ 'ਤੇ ਲਾਗੂ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਗੈਸ ਚੈਂਬਰ ਦੇ ਅੰਦਰ ਦਬਾਅ ਦੀ ਨਿਰੰਤਰ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕਰਨ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ.ਜਦੋਂ ਅਧਿਕਤਮ ਚੈਂਬਰ ਪ੍ਰੈਸ਼ਰ (ਸਟੈਂਡਰਡ 80 mmHg, 140 mmHg OS) 'ਤੇ ਪਹੁੰਚ ਗਿਆ ਸੀ, ਤਾਂ ਡਾਟਾ ਪ੍ਰਾਪਤੀ ਯੰਤਰ ਨੂੰ 2 ms ਲਈ ਬਾਇਫਾਸਿਕ ਵੋਲਟੇਜ ਸਿਗਨਲ ਬਣਾਉਣ ਲਈ C-PACE-EM ਸਿਸਟਮ ਨੂੰ ਸਿਗਨਲ ਭੇਜਣ ਦਾ ਆਦੇਸ਼ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, 4 V 'ਤੇ ਸੈੱਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ 6 ਖੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਨੂੰ ਹੇਠ ਲਿਖੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ: ਕਟਾਈ ਵਾਲੇ ਦਿਲਾਂ ਨੂੰ ਟਰਾਂਸਫਰ ਭਾਂਡੇ ਤੋਂ ਇੱਕ ਟਰੇ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰੋ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਠੰਡੇ (4° C.) ਕਾਰਡੀਓਪਲੇਜੀਆ ਹੈ।ਖੱਬੀ ਵੈਂਟ੍ਰਿਕਲ ਨੂੰ ਇੱਕ ਨਿਰਜੀਵ ਬਲੇਡ ਨਾਲ ਅਲੱਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ 1-2 cm3 ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਵਿੱਚ ਕੱਟਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਹ ਟਿਸ਼ੂ ਬਲਾਕ ਟਿਸ਼ੂ ਅਡੈਸਿਵ ਦੇ ਨਾਲ ਟਿਸ਼ੂ ਸਪੋਰਟ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਸਨ ਅਤੇ ਟਾਇਰੋਡ ਦੇ ਘੋਲ ਵਾਲੇ ਇੱਕ ਵਾਈਬ੍ਰੇਟਿੰਗ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟੋਮ ਟਿਸ਼ੂ ਬਾਥ ਵਿੱਚ ਰੱਖੇ ਗਏ ਸਨ ਅਤੇ ਲਗਾਤਾਰ ਆਕਸੀਜਨ ਵਾਲੇ (3 g/L 2,3-butanedione ਮੋਨੋਆਕਸਾਈਮ (BDM), 140 mM NaCl (8.18 g), m.6M4 (m.18 g), m.6M4. lucose (1.86 g), 10 mM HEPES (2.38 g), 1 mM MgCl2 (1 ml 1 M ਘੋਲ), 1.8 mM CaCl2 ( 1.8 ml 1 M ਘੋਲ), 1 L ddH2O ਤੱਕ)।ਵਾਈਬ੍ਰੇਟਿੰਗ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟੋਮ ਨੂੰ 80 Hz ਦੀ ਫ੍ਰੀਕੁਐਂਸੀ 'ਤੇ 300 µm ਮੋਟੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਕੱਟਣ ਲਈ ਸੈੱਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, 2 mm ਦੀ ਹਰੀਜੱਟਲ ਵਾਈਬ੍ਰੇਸ਼ਨ ਐਪਲੀਟਿਊਡ, ਅਤੇ 0.03 mm/s ਦੀ ਅਗਾਊਂ ਦਰ।ਘੋਲ ਨੂੰ ਠੰਡਾ ਰੱਖਣ ਲਈ ਟਿਸ਼ੂ ਬਾਥ ਨੂੰ ਬਰਫ਼ ਨਾਲ ਘਿਰਿਆ ਹੋਇਆ ਸੀ ਅਤੇ ਤਾਪਮਾਨ 4 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਬਰਕਰਾਰ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਮਾਈਕ੍ਰੋਟੋਮ ਬਾਥ ਤੋਂ ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਇਨਕਿਊਬੇਸ਼ਨ ਬਾਥ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰੋ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਲਗਾਤਾਰ ਆਕਸੀਜਨ ਵਾਲਾ ਟਾਇਰੋਡ ਘੋਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਇੱਕ ਕਲਚਰ ਪਲੇਟ ਲਈ ਕਾਫ਼ੀ ਭਾਗ ਪ੍ਰਾਪਤ ਨਹੀਂ ਹੋ ਜਾਂਦੇ।ਟ੍ਰਾਂਸਵੈਲ ਕਲਚਰ ਲਈ, ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨਾਂ ਨੂੰ ਨਿਰਜੀਵ 6 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਚੌੜਾ ਪੌਲੀਯੂਰੀਥੇਨ ਸਪੋਰਟ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਮਾਧਿਅਮ (199 ਮੀਡੀਅਮ, 1x ਆਈਟੀਐਸ ਸਪਲੀਮੈਂਟ, 10% FBS, 5 ng/ml VEGF, 10 ng/ml FGF-ਅਲਕਲੀਨ ਅਤੇ -2) ਦੇ 6 ਮਿ.ਲੀ. ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਲੈਕਟ੍ਰੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ (10 V, ਫ੍ਰੀਕੁਐਂਸੀ 1.2 Hz) ਨੂੰ ਸੀ-ਪੇਸ ਦੁਆਰਾ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ 'ਤੇ ਲਾਗੂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।TD ਹਾਲਤਾਂ ਲਈ, ਤਾਜ਼ਾ T3 ਅਤੇ Dex ਨੂੰ 100 nM ਅਤੇ 1 μM 'ਤੇ ਹਰੇਕ ਮੱਧਮ ਤਬਦੀਲੀ 'ਤੇ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਦਿਨ ਵਿੱਚ 3 ਵਾਰ ਬਦਲਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਮਾਧਿਅਮ ਆਕਸੀਜਨ ਨਾਲ ਸੰਤ੍ਰਿਪਤ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਇਨਕਿਊਬੇਟਰ ਵਿੱਚ 37 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਅਤੇ 5% CO2 ਵਿੱਚ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
CTCM ਕਲਚਰ ਲਈ, ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਕਸਟਮ-ਮੇਡ 3D ਪ੍ਰਿੰਟਰ ਉੱਤੇ ਇੱਕ ਪੈਟਰੀ ਡਿਸ਼ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਸੋਧਿਆ ਗਿਆ ਟਾਇਰੋਡ ਦਾ ਹੱਲ ਹੈ।ਡਿਵਾਈਸ ਨੂੰ ਸਪੋਰਟ ਰਿੰਗ ਦੇ ਖੇਤਰ ਦੇ 25% ਦੁਆਰਾ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਦੇ ਆਕਾਰ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।ਇਹ ਇਸ ਲਈ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਟਾਇਰੋਡ ਦੇ ਘੋਲ ਤੋਂ ਮਾਧਿਅਮ ਤੱਕ ਅਤੇ ਡਾਇਸਟੋਲ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਖਿੱਚਿਆ ਨਾ ਜਾਵੇ.ਹਿਸਟੋਐਕਰੀਲਿਕ ਗੂੰਦ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਸੈਕਸ਼ਨ 300 µm ਮੋਟੀ ਇੱਕ ਸਪੋਰਟ ਰਿੰਗ 'ਤੇ 7 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਵਿਆਸ ਵਿੱਚ ਫਿਕਸ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨਾਂ ਨੂੰ ਸਪੋਰਟ ਰਿੰਗ ਨਾਲ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਵਾਧੂ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਕੱਟ ਦਿਓ ਅਤੇ ਜੁੜੇ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਬਰਫ਼ (4°C) 'ਤੇ ਟਾਇਰੋਡ ਘੋਲ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਵਿੱਚ ਵਾਪਸ ਰੱਖੋ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਇੱਕ ਡਿਵਾਈਸ ਲਈ ਕਾਫ਼ੀ ਭਾਗ ਤਿਆਰ ਨਹੀਂ ਹੋ ਜਾਂਦੇ।ਸਾਰੀਆਂ ਡਿਵਾਈਸਾਂ ਲਈ ਕੁੱਲ ਪ੍ਰੋਸੈਸਿੰਗ ਸਮਾਂ 2 ਘੰਟਿਆਂ ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਹੀਂ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।6 ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਸਪੋਰਟ ਰਿੰਗਾਂ ਨਾਲ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, CTCM ਡਿਵਾਈਸ ਨੂੰ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।CTCM ਕਲਚਰ ਚੈਂਬਰ 21 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਪ੍ਰੀ-ਆਕਸੀਜਨ ਵਾਲੇ ਮਾਧਿਅਮ ਨਾਲ ਪਹਿਲਾਂ ਤੋਂ ਭਰਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ।ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਕਲਚਰ ਚੈਂਬਰ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰੋ ਅਤੇ ਪਾਈਪੇਟ ਨਾਲ ਕਿਸੇ ਵੀ ਹਵਾ ਦੇ ਬੁਲਬੁਲੇ ਨੂੰ ਧਿਆਨ ਨਾਲ ਹਟਾਓ।ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨ ਨੂੰ ਫਿਰ ਮੋਰੀ ਵਿੱਚ ਨਿਰਦੇਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਥਾਂ 'ਤੇ ਦਬਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਡਿਵਾਈਸ ਉੱਤੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡ ਕੈਪ ਲਗਾਓ ਅਤੇ ਡਿਵਾਈਸ ਨੂੰ ਇਨਕਿਊਬੇਟਰ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰੋ।ਫਿਰ CTCM ਨੂੰ ਏਅਰ ਟਿਊਬ ਅਤੇ C-PACE-EM ਸਿਸਟਮ ਨਾਲ ਕਨੈਕਟ ਕਰੋ।ਨਿਊਮੈਟਿਕ ਐਕਟੁਏਟਰ ਖੁੱਲ੍ਹਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਏਅਰ ਵਾਲਵ CTCM ਨੂੰ ਖੋਲ੍ਹਦਾ ਹੈ।C-PACE-EM ਸਿਸਟਮ ਨੂੰ 2 ms ਲਈ ਬਾਇਫਾਸਿਕ ਪੇਸਿੰਗ ਦੌਰਾਨ 1.2 Hz 'ਤੇ 4 V ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਨ ਲਈ ਸੰਰਚਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਮਾਧਿਅਮ ਨੂੰ ਦਿਨ ਵਿਚ ਦੋ ਵਾਰ ਬਦਲਿਆ ਜਾਂਦਾ ਸੀ ਅਤੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡਾਂ 'ਤੇ ਗ੍ਰੈਫਾਈਟ ਦੇ ਇਕੱਠੇ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ ਦਿਨ ਵਿਚ ਇਕ ਵਾਰ ਬਦਲਿਆ ਜਾਂਦਾ ਸੀ।ਜੇ ਜਰੂਰੀ ਹੋਵੇ, ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਕਲਚਰ ਖੂਹਾਂ ਤੋਂ ਹਟਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਹੇਠਾਂ ਡਿੱਗੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਹਵਾ ਦੇ ਬੁਲਬੁਲੇ ਨੂੰ ਬਾਹਰ ਕੱਢਿਆ ਜਾ ਸਕੇ।MT ਇਲਾਜ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਲਈ, T3/Dex ਨੂੰ 100 nM T3 ਅਤੇ 1 μM Dex ਦੇ ਨਾਲ ਹਰੇਕ ਮੱਧਮ ਤਬਦੀਲੀ ਨਾਲ ਤਾਜ਼ਾ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।CTCM ਯੰਤਰਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਇਨਕਿਊਬੇਟਰ ਵਿੱਚ 37°C ਅਤੇ 5% CO2 'ਤੇ ਕਲਚਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਖਿੱਚੇ ਹੋਏ ਟ੍ਰੈਜੈਕਟਰੀਜ਼ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ, ਇੱਕ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਕੈਮਰਾ ਸਿਸਟਮ ਵਿਕਸਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਇੱਕ SLR ਕੈਮਰਾ (Canon Rebel T7i, Canon, Tokyo, Japan) ਇੱਕ Navitar Zoom 7000 18-108mm ਮੈਕਰੋ ਲੈਂਸ (Navitar, San Francisco, CA) ਨਾਲ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਤਾਜ਼ੇ ਮਾਧਿਅਮ ਨਾਲ ਮਾਧਿਅਮ ਨੂੰ ਬਦਲਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਵਿਜ਼ੂਅਲਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਕੈਮਰਾ 51° ਕੋਣ 'ਤੇ ਸਥਿਤ ਹੈ ਅਤੇ ਵੀਡੀਓ 30 ਫਰੇਮ ਪ੍ਰਤੀ ਸਕਿੰਟ 'ਤੇ ਰਿਕਾਰਡ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਪਹਿਲਾਂ, ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਗਤੀ ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਲਈ ਚਿੱਤਰ-ਜੇ ਨਾਲ ਓਪਨ ਸੋਰਸ ਸੌਫਟਵੇਅਰ (MUSCLEMOTION43) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਸ਼ੋਰ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ ਧੜਕਣ ਵਾਲੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਲਈ ਦਿਲਚਸਪੀ ਵਾਲੇ ਖੇਤਰਾਂ ਨੂੰ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਮਾਸਕ MATLAB (MathWorks, Natick, MA, USA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਹੱਥੀਂ ਖੰਡਿਤ ਮਾਸਕ ਇੱਕ ਫਰੇਮ ਕ੍ਰਮ ਵਿੱਚ ਸਾਰੀਆਂ ਤਸਵੀਰਾਂ 'ਤੇ ਲਾਗੂ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਫਿਰ MUSCLEMOTION ਪਲੱਗ-ਇਨ ਨੂੰ ਪਾਸ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।ਮਾਸਪੇਸ਼ੀ ਮੋਸ਼ਨ ਸੰਦਰਭ ਫ੍ਰੇਮ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਇਸਦੀ ਗਤੀ ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਲਈ ਹਰੇਕ ਫਰੇਮ ਵਿੱਚ ਪਿਕਸਲ ਦੀ ਔਸਤ ਤੀਬਰਤਾ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਡੇਟਾ ਨੂੰ ਰਿਕਾਰਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਫਿਲਟਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਚੱਕਰ ਦੇ ਸਮੇਂ ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਅਤੇ ਕਾਰਡੀਅਕ ਚੱਕਰ ਦੌਰਾਨ ਟਿਸ਼ੂ ਖਿੱਚ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।ਰਿਕਾਰਡ ਕੀਤੇ ਵੀਡੀਓ ਨੂੰ ਪਹਿਲੇ ਆਰਡਰ ਜ਼ੀਰੋ-ਫੇਜ਼ ਡਿਜੀਟਲ ਫਿਲਟਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪੋਸਟ-ਪ੍ਰੋਸੈਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਟਿਸ਼ੂ ਸਟ੍ਰੈਚ (ਪੀਕ-ਟੂ-ਪੀਕ) ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਲਈ, ਰਿਕਾਰਡ ਕੀਤੇ ਸਿਗਨਲ ਵਿੱਚ ਚੋਟੀਆਂ ਅਤੇ ਖੁਰਲੀਆਂ ਵਿਚਕਾਰ ਫਰਕ ਕਰਨ ਲਈ ਪੀਕ-ਟੂ-ਪੀਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਸਿਗਨਲ ਡ੍ਰਾਈਫਟ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰਨ ਲਈ 6ਵੇਂ ਆਰਡਰ ਪੋਲੀਨੌਮੀਅਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਡੀਟ੍ਰੇਂਡਿੰਗ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਗਲੋਬਲ ਟਿਸ਼ੂ ਮੋਸ਼ਨ, ਚੱਕਰ ਸਮਾਂ, ਆਰਾਮ ਦਾ ਸਮਾਂ, ਅਤੇ ਸੰਕੁਚਨ ਸਮਾਂ (ਪੂਰਕ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਕੋਡ 44) ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ MATLAB ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਕੋਡ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਤਣਾਅ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ, ਮਕੈਨੀਕਲ ਸਟ੍ਰੈਚ ਅਸੈਸਮੈਂਟ ਲਈ ਬਣਾਏ ਗਏ ਉਹੀ ਵੀਡੀਓਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਅਸੀਂ ਸਭ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ MUSCLEMOTION ਸੌਫਟਵੇਅਰ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਮੋਸ਼ਨ ਪੀਕ (ਉੱਚੇ (ਉੱਚੇ) ਅਤੇ ਸਭ ਤੋਂ ਹੇਠਲੇ (ਹੇਠਲੇ) ਮੋਸ਼ਨ ਬਿੰਦੂਆਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਦੋ ਚਿੱਤਰਾਂ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਇਆ।ਅਸੀਂ ਫਿਰ ਟਿਸ਼ੂ ਖੇਤਰਾਂ ਨੂੰ ਖੰਡਿਤ ਕੀਤਾ ਅਤੇ ਖੰਡਿਤ ਟਿਸ਼ੂ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 2a) ਲਈ ਸ਼ੈਡਿੰਗ ਐਲਗੋਰਿਦਮ ਦਾ ਇੱਕ ਰੂਪ ਲਾਗੂ ਕੀਤਾ।ਖੰਡਿਤ ਟਿਸ਼ੂ ਨੂੰ ਫਿਰ ਦਸ ਉਪ ਸਤਹਾਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਹਰੇਕ ਸਤਹ 'ਤੇ ਤਣਾਅ ਨੂੰ ਹੇਠਾਂ ਦਿੱਤੇ ਸਮੀਕਰਨਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਗਿਣਿਆ ਗਿਆ ਸੀ: ਸਟ੍ਰੇਨ = (Sup-Sdown)/Sdown, ਜਿੱਥੇ Sup ਅਤੇ Sdown ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਫੈਬਰਿਕ ਦੇ ਉੱਪਰ ਅਤੇ ਹੇਠਲੇ ਪਰਛਾਵੇਂ ਤੋਂ ਆਕਾਰ ਦੀਆਂ ਦੂਰੀਆਂ ਹਨ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ .2b)।
ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ 4% ਪੈਰਾਫਾਰਮਲਡੀਹਾਈਡ ਵਿੱਚ 48 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਫਿਕਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਸਥਿਰ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਨੂੰ 1 ਘੰਟੇ ਲਈ 10% ਅਤੇ 20% ਸੁਕਰੋਜ਼ ਵਿੱਚ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਫਿਰ ਰਾਤੋ ਰਾਤ 30% ਸੁਕਰੋਜ਼ ਵਿੱਚ।ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਫਿਰ ਸਰਵੋਤਮ ਕਟਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਮਿਸ਼ਰਣ (OCT ਮਿਸ਼ਰਣ) ਵਿੱਚ ਏਮਬੇਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਹੌਲੀ ਹੌਲੀ ਇੱਕ ਆਈਸੋਪੇਂਟੇਨ/ਸੁੱਕੀ ਬਰਫ਼ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਵਿੱਚ ਫ੍ਰੀਜ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।OCT ਏਮਬੈਡਿੰਗ ਬਲਾਕਾਂ ਨੂੰ ਵੱਖ ਹੋਣ ਤੱਕ -80 °C 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕਰੋ।ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ 8 μm ਦੀ ਮੋਟਾਈ ਵਾਲੇ ਭਾਗਾਂ ਵਜੋਂ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਤੋਂ OCT ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ, ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਹੀਟਿੰਗ ਬਲਾਕ 'ਤੇ 95 °C 'ਤੇ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ ਗਰਮ ਕਰੋ।ਹਰ ਇੱਕ ਸਲਾਈਡ ਵਿੱਚ 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਪੀਬੀਐਸ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ ਅਤੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ, ਫਿਰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 15 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਪੀਬੀਐਸ ਵਿੱਚ 0.1% ਟ੍ਰਾਈਟਨ-ਐਕਸ ਸੈੱਟ ਕਰਕੇ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਪਾਰ ਕਰੋ।ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਨੂੰ ਨਮੂਨੇ ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹਣ ਤੋਂ ਰੋਕਣ ਲਈ, ਸਲਾਈਡਾਂ ਵਿੱਚ 3% BSA ਘੋਲ ਦਾ 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਪਾਓ ਅਤੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 1 ਘੰਟੇ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।BSA ਨੂੰ ਫਿਰ ਹਟਾ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ PBS ਨਾਲ ਧੋ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਹਰੇਕ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਪੈਨਸਿਲ ਨਾਲ ਚਿੰਨ੍ਹਿਤ ਕਰੋ।ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ (1% BSA ਵਿੱਚ 1:200 ਨੂੰ ਪਤਲਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ) (connexin 43 (Abcam; #AB11370), NFATC4 (Abcam; #AB99431) ਅਤੇ ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-ਟੀ (ਥਰਮੋ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ; #MA5-12960) ਨੂੰ 90 ਮਿੰਟਾਂ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ, ਫਿਰ ਅਲੈਕਸਾ 1% ਵਿੱਚ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ (BSA2001%) ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਦੂਜੀ ਵਾਰ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ। ਫਲੋਰ 488 (ਥਰਮੋ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ; #A16079), ਖਰਗੋਸ਼ ਅਲੈਕਸਾ ਫਲੋਰ 594 (ਥਰਮੋ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ; #T6391) ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ 90 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਪੀਬੀਐਸ ਨਾਲ 3 ਵਾਰ ਧੋਤੇ ਗਏ ਟੀਚੇ ਦੇ ਧੱਬੇ ਨੂੰ ਪਿਛੋਕੜ ਤੋਂ ਵੱਖ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਨਿਯੰਤਰਣ ਦੇ ਤੌਰ ਤੇ ਸਿਰਫ ਸੈਕੰਡਰੀ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਸੀ। ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਇੱਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਿੱਚ ਇੱਕ vsield VIDESTA (vindieldesc) ਥਾਂ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾਵਾਂ) ਅਤੇ ਨੇਲ ਪਾਲਿਸ਼ ਨਾਲ ਸੀਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। -x ਵਿਸਤਾਰ) ਅਤੇ 40x ਵਿਸਤਾਰ ਨਾਲ ਕੀਏਂਸ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ।
WGA-Alexa Fluor 555 (Thermo Scientific; #W32464) PBS ਵਿੱਚ 5 μg/ml ਤੇ WGA ਸਟੈਨਿੰਗ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਫਿਕਸਡ ਸੈਕਸ਼ਨਾਂ 'ਤੇ ਲਾਗੂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਫਿਰ ਪੀਬੀਐਸ ਨਾਲ ਧੋਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਹਰ ਇੱਕ ਸਲਾਈਡ ਵਿੱਚ ਸੂਡਾਨ ਬਲੈਕ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਅਤੇ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਫਿਰ ਪੀਬੀਐਸ ਨਾਲ ਧੋਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਵੈਕਟਸ਼ੀਲਡ ਏਮਬੈਡਿੰਗ ਮਾਧਿਅਮ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ 40x ਵਿਸਤਾਰ 'ਤੇ ਕੀਏਂਸ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ 'ਤੇ ਵਿਜ਼ੁਅਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
OCT ਨੂੰ ਉੱਪਰ ਦੱਸੇ ਅਨੁਸਾਰ ਨਮੂਨਿਆਂ ਤੋਂ ਹਟਾ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਓਸੀਟੀ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਬੋਇਨ ਦੇ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਰਾਤ ਭਰ ਡੁਬੋ ਦਿਓ।ਫਿਰ ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ 1 ਘੰਟੇ ਲਈ ਡਿਸਟਿਲ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਕੁਰਲੀ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਫਿਰ 10 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਬਿਬਰੀਚ ਐਲੋ ਐਸਿਡ ਫੁਚਸਿਨ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ।ਫਿਰ ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਡਿਸਟਿਲ ਕੀਤੇ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਧੋਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ 5% ਫਾਸਫੋਮੋਲਿਬਡੇਨਮ/5% ਫਾਸਫੋਟੰਗਸਟਿਕ ਐਸਿਡ ਦੇ ਘੋਲ ਵਿੱਚ 10 ਮਿੰਟ ਲਈ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ।ਕੁਰਲੀ ਕੀਤੇ ਬਿਨਾਂ, ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ 15 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਐਨੀਲਿਨ ਨੀਲੇ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਸਿੱਧਾ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰੋ।ਫਿਰ ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਡਿਸਟਿਲ ਕੀਤੇ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਧੋਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ 1% ਐਸੀਟਿਕ ਐਸਿਡ ਦੇ ਘੋਲ ਵਿੱਚ 2 ਮਿੰਟ ਲਈ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ।ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ 200 N ਈਥਾਨੌਲ ਵਿੱਚ ਸੁਕਾਇਆ ਗਿਆ ਅਤੇ ਜ਼ਾਇਲੀਨ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।10x ਉਦੇਸ਼ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਕੀਏਂਸ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਦਾਗ ਵਾਲੀਆਂ ਸਲਾਈਡਾਂ ਦੀ ਕਲਪਨਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਕੀਏਂਸ ਐਨਾਲਾਈਜ਼ਰ ਸੌਫਟਵੇਅਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਖੇਤਰ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤਤਾ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।
ਕੁਝ ਸੋਧਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੇ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, CyQUANT™ MTT ਸੈੱਲ ਵਿਹਾਰਕਤਾ ਅਸੇ (ਇਨਵਿਟ੍ਰੋਜਨ, ਕਾਰਲਸਬੈਡ, CA), ਕੈਟਾਲਾਗ ਨੰਬਰ V13154।ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਐਮਟੀਟੀ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਇਕਸਾਰ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਆਕਾਰ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ 6 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਦੇ ਵਿਆਸ ਵਾਲਾ ਇੱਕ ਸਰਜੀਕਲ ਪੰਚ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਨੂੰ ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੇ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ MTT ਸਬਸਟਰੇਟ ਵਾਲੀ 12-ਖੂਹ ਵਾਲੀ ਪਲੇਟ ਦੇ ਖੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪਲੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ 37 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 3 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਜੀਵਤ ਟਿਸ਼ੂ ਇੱਕ ਜਾਮਨੀ ਫਾਰਮਾਜ਼ਾਨ ਮਿਸ਼ਰਣ ਬਣਾਉਣ ਲਈ MTT ਸਬਸਟਰੇਟ ਨੂੰ ਮੈਟਾਬੌਲਾਈਜ਼ ਕਰਦਾ ਹੈ।MTT ਘੋਲ ਨੂੰ 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ DMSO ਨਾਲ ਬਦਲੋ ਅਤੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਤੋਂ ਜਾਮਨੀ ਫਾਰਮਾਜ਼ਾਨ ਕੱਢਣ ਲਈ 15 ਮਿੰਟ ਲਈ 37 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।ਨਮੂਨੇ 1:10 DMSO ਵਿੱਚ 96-ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸਾਫ਼ ਹੇਠਲੇ ਪਲੇਟਾਂ ਵਿੱਚ ਅਤੇ ਜਾਮਨੀ ਰੰਗ ਦੀ ਤੀਬਰਤਾ ਨੂੰ ਇੱਕ ਸਾਇਟੇਸ਼ਨ ਪਲੇਟ ਰੀਡਰ (ਬਾਇਓਟੈਕ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ 570 nm 'ਤੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਰੀਡਿੰਗਾਂ ਨੂੰ ਦਿਲ ਦੇ ਹਰੇਕ ਟੁਕੜੇ ਦੇ ਭਾਰ ਲਈ ਆਮ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਹਾਰਟ ਸਲਾਈਸ ਮੀਡੀਆ ਨੂੰ 1 μCi/ml [5-3H]-ਗਲੂਕੋਜ਼ (ਮੋਰਾਵੇਕ ਬਾਇਓਕੈਮੀਕਲਸ, ਬ੍ਰੀਆ, CA, USA) ਵਾਲੇ ਮੀਡੀਆ ਨਾਲ ਬਦਲਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ।ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਹੋਣ ਦੇ 4 ਘੰਟੇ ਬਾਅਦ, 100 µl 0.2 N HCl ਦੇ 100 µl ਵਾਲੀ ਖੁੱਲੀ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸੈਂਟਰੀਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ 100 µl ਮਾਧਿਅਮ ਪਾਓ।ਫਿਰ ਟਿਊਬ ਨੂੰ 37 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 72 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ [3H]2O ਦੇ ਭਾਫ਼ ਬਣਨ ਲਈ 500 μl dH2O ਵਾਲੀ ਇੱਕ ਸਿੰਟੀਲੇਸ਼ਨ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਫਿਰ ਸਿੰਟੀਲੇਸ਼ਨ ਟਿਊਬ ਤੋਂ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸੈਂਟਰੀਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਨੂੰ ਹਟਾਓ ਅਤੇ 10 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਸਿੰਟੀਲੇਸ਼ਨ ਤਰਲ ਪਾਓ।ਟ੍ਰਾਈ-ਕਾਰਬ 2900TR ਤਰਲ ਸਿੰਟੀਲੇਸ਼ਨ ਐਨਾਲਾਈਜ਼ਰ (ਪੈਕਾਰਡ ਬਾਇਓਸਾਇੰਸ ਕੰਪਨੀ, ਮੈਰੀਡੇਨ, ਸੀਟੀ, ਯੂਐਸਏ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਸਿੰਟੀਲੇਸ਼ਨ ਗਿਣਤੀਆਂ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ।ਫਿਰ ਗਲੂਕੋਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਦੀ ਗਣਨਾ [5-3H]-ਗਲੂਕੋਜ਼ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ, ਅਧੂਰਾ ਸੰਤੁਲਨ ਅਤੇ ਪਿਛੋਕੜ, [5-3H] - ਬਿਨਾਂ ਲੇਬਲ ਰਹਿਤ ਗਲੂਕੋਜ਼ ਲਈ ਪਤਲਾ ਕਰਨ, ਅਤੇ ਸਿੰਟੀਲੇਸ਼ਨ ਕਾਊਂਟਰ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਧਿਆਨ ਵਿੱਚ ਰੱਖਦੇ ਹੋਏ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਡੇਟਾ ਨੂੰ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਪੁੰਜ ਤੱਕ ਸਧਾਰਣ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਟ੍ਰਾਈਜ਼ੋਲ ਵਿੱਚ ਟਿਸ਼ੂ ਸਮਰੂਪੀਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੇ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕਿਆਗੇਨ miRNeasy ਮਾਈਕ੍ਰੋ ਕਿੱਟ #210874 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ RNA ਨੂੰ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਤੋਂ ਅਲੱਗ ਕਰ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।RNAsec ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਦੀ ਤਿਆਰੀ, ਕ੍ਰਮ ਅਤੇ ਡਾਟਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਹੇਠ ਲਿਖੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ:
RNA ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਦੀ ਤਿਆਰੀ ਲਈ 1 μg RNA ਪ੍ਰਤੀ ਨਮੂਨਾ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਸਮੱਗਰੀ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੀਆਂ ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼ਾਂ ਦੇ ਬਾਅਦ NEBNext UltraTM RNA ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਤਿਆਰੀ ਕਿੱਟ (NEB, USA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕ੍ਰਮਬੱਧ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀਆਂ ਤਿਆਰ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ, ਅਤੇ ਹਰੇਕ ਨਮੂਨੇ ਲਈ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਕ੍ਰਮਾਂ ਵਿੱਚ ਸੂਚਕਾਂਕ ਕੋਡ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, ਪੌਲੀ-ਟੀ ਓਲੀਗੋਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡਸ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਚੁੰਬਕੀ ਮਣਕਿਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ mRNA ਨੂੰ ਕੁੱਲ RNA ਤੋਂ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।NEBNext First Strand Synthesis Reaction Buffer (5X) ਵਿੱਚ ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਡਿਵੈਲੈਂਟ ਕੈਸ਼ਨਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟੇਸ਼ਨ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਪਹਿਲੀ ਸਟ੍ਰੈਂਡ cDNA ਨੂੰ ਬੇਤਰਤੀਬ ਹੈਕਸਾਮਰ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ M-MuLV ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੇਜ (RNase H-) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਦੂਜੀ ਸਟ੍ਰੈਂਡ cDNA ਨੂੰ ਫਿਰ DNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ I ਅਤੇ RNase H ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਬਾਕੀ ਬਚੇ ਓਵਰਹੈਂਗਜ਼ ਨੂੰ ਐਕਸੋਨੁਕਲੀਜ਼/ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੁਆਰਾ ਧੁੰਦਲੇ ਸਿਰਿਆਂ ਵਿੱਚ ਬਦਲ ਦਿੱਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਡੀਐਨਏ ਟੁਕੜੇ ਦੇ 3′ ਸਿਰੇ ਦੇ ਅਡੈਨਿਲੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਇਸ ਨੂੰ ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਹੇਅਰਪਿਨ ਲੂਪ ਬਣਤਰ ਵਾਲਾ NEBNext ਅਡਾਪਟਰ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ।ਤਰਜੀਹੀ ਲੰਬਾਈ ਦੇ cDNA ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਚੋਣ ਲਈ 150-200 bp.ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ AMPure XP ਸਿਸਟਮ (ਬੇਕਮੈਨ ਕੁਲਟਰ, ਬੇਵਰਲੀ, ਯੂਐਸਏ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਫਿਰ, 3 μl USER ਐਨਜ਼ਾਈਮ (NEB, USA) ਨੂੰ ਇੱਕ ਅਡਾਪਟਰ ਨਾਲ ਲੀਗੇਟਿਡ ਆਕਾਰ-ਚੁਣਿਆ cDNA ਨਾਲ 37°C 'ਤੇ 15 ਮਿੰਟ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਫਿਰ PCR ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ 95°C 'ਤੇ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਪੀਸੀਆਰ ਨੂੰ ਫਿਰ ਫਿਊਜ਼ਨ ਹਾਈ-ਫਾਈਡੇਲਿਟੀ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼, ਯੂਨੀਵਰਸਲ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਾਈਮਰ, ਅਤੇ ਇੰਡੈਕਸ (ਐਕਸ) ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਅੰਤ ਵਿੱਚ, PCR ਉਤਪਾਦਾਂ ਨੂੰ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ (AMPure XP ਸਿਸਟਮ) ਅਤੇ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਇੱਕ Agilent Bioanalyzer 2100 ਸਿਸਟਮ ਉੱਤੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।ਸੀਡੀਐਨਏ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਨੂੰ ਫਿਰ ਨੋਵਾਸੇਕ ਸੀਕੁਏਂਸਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕ੍ਰਮਬੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।Illumina ਤੋਂ ਕੱਚੀਆਂ ਚਿੱਤਰ ਫਾਈਲਾਂ ਨੂੰ CASAVA ਬੇਸ ਕਾਲਿੰਗ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੱਚੇ ਰੀਡਜ਼ ਵਿੱਚ ਬਦਲਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਕੱਚਾ ਡੇਟਾ FASTQ(fq) ਫਾਰਮੈਟ ਫਾਈਲਾਂ ਵਿੱਚ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਰੀਡ ਕ੍ਰਮ ਅਤੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਅਧਾਰ ਗੁਣ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।Sscrofa11.1 ਸੰਦਰਭ ਜੀਨੋਮ ਨਾਲ ਫਿਲਟਰ ਕੀਤੇ ਅਨੁਕ੍ਰਮ ਰੀਡਸ ਨਾਲ ਮੇਲ ਕਰਨ ਲਈ HISAT2 ਨੂੰ ਚੁਣੋ।ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, HISAT2 ਕਿਸੇ ਵੀ ਆਕਾਰ ਦੇ ਜੀਨੋਮ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ 4 ਬਿਲੀਅਨ ਬੇਸ ਤੋਂ ਵੱਡੇ ਜੀਨੋਮ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ, ਅਤੇ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਪੈਰਾਮੀਟਰਾਂ ਲਈ ਡਿਫੌਲਟ ਮੁੱਲ ਸੈੱਟ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।RNA Seq ਡੇਟਾ ਤੋਂ ਰੀਡਸ ਨੂੰ ਵੰਡਣ ਨੂੰ HISAT2 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਵਰਤਮਾਨ ਵਿੱਚ ਉਪਲਬਧ ਸਭ ਤੋਂ ਤੇਜ਼ ਸਿਸਟਮ ਹੈ, ਕਿਸੇ ਵੀ ਹੋਰ ਵਿਧੀ ਨਾਲੋਂ ਸਮਾਨ ਜਾਂ ਬਿਹਤਰ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਨਾਲ।
ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ ਦੀ ਬਹੁਤਾਤ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜੀਨ ਸਮੀਕਰਨ ਦੇ ਪੱਧਰ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ।ਜੀਨ ਸਮੀਕਰਨ ਪੱਧਰਾਂ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਜੀਨੋਮ ਜਾਂ ਐਕਸੌਨ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ (ਕ੍ਰਮ ਗਿਣਤੀ) ਦੀ ਭਰਪੂਰਤਾ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਰੀਡਜ਼ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਜੀਨ ਸਮੀਕਰਨ ਪੱਧਰ, ਜੀਨ ਦੀ ਲੰਬਾਈ, ਅਤੇ ਕ੍ਰਮ ਦੀ ਡੂੰਘਾਈ ਦੇ ਅਨੁਪਾਤੀ ਹੈ।FPKM (ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀ ਹਜ਼ਾਰ ਅਧਾਰ ਜੋੜਿਆਂ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਪ੍ਰਤੀ ਮਿਲੀਅਨ ਬੇਸ ਜੋੜਿਆਂ ਦੇ ਕ੍ਰਮ ਅਨੁਸਾਰ) ਦੀ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਅਤੇ DESeq2 ਪੈਕੇਜ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਵਿਭਿੰਨ ਸਮੀਕਰਨ ਦੇ P-ਮੁੱਲ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਗਏ।ਅਸੀਂ ਫਿਰ ਬਿਲਟ-ਇਨ ਆਰ-ਫੰਕਸ਼ਨ "ਪੀ. ਐਡਜਸਟ" ਦੇ ਅਧਾਰ 'ਤੇ ਬੈਂਜਾਮਿਨੀ-ਹੋਚਬਰਗ ਵਿਧੀ9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਹਰੇਕ P ਮੁੱਲ ਲਈ ਗਲਤ ਖੋਜ ਦਰ (FDR) ਦੀ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ।
ਥਰਮੋ (ਥਰਮੋ, ਬਿੱਲੀ ਨੰ. 11756050) ਤੋਂ ਸੁਪਰਸਕ੍ਰਿਪਟ IV ਵਿਲੋ ਮਾਸਟਰ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਤੋਂ ਅਲੱਗ RNA ਨੂੰ 200 ng/μl ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ 'ਤੇ cDNA ਵਿੱਚ ਬਦਲਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਮਾਤਰਾਤਮਕ RT-PCR ਇੱਕ ਅਪਲਾਈਡ ਬਾਇਓਸਿਸਟਮ ਐਂਡੁਰਾ ਪਲੇਟ ਮਾਈਕ੍ਰੋਐਂਪ 384-ਵਧੀਆ ਪਾਰਦਰਸ਼ੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪਲੇਟ (ਥਰਮੋ, ਬਿੱਲੀ ਨੰ. 4483319) ਅਤੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਐਂਪ ਆਪਟੀਕਲ ਅਡੈਸਿਵ (ਥਰਮੋ, ਬਿੱਲੀ ਨੰ. 4311971) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਮਿਸ਼ਰਣ ਵਿੱਚ 5 µl ਟਾਕਮੈਨ ਫਾਸਟ ਐਡਵਾਂਸਡ ਮਾਸਟਰ ਮਿਕਸ (ਥਰਮੋ, ਕੈਟ # 4444557), 0.5 µl ਟਾਕਮੈਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ 3.5 µl H2O ਪ੍ਰਤੀ ਖੂਹ ਮਿਕਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਸਟੈਂਡਰਡ qPCR ਚੱਕਰ ਚਲਾਏ ਗਏ ਸਨ ਅਤੇ CT ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਅਪਲਾਈਡ ਬਾਇਓਸਿਸਟਮ Quantstudio 5 ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ PCR ਯੰਤਰ (384-ਵੈਲ ਮੋਡੀਊਲ; ਉਤਪਾਦ # A28135) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।Taqman ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਥਰਮੋ (GAPDH (Ss03375629_u1), PARP12 (Ss06908795_m1), PKDCC (Ss06903874_m1), CYGB (Ss06900188_m1), RGL1 (Ss08018188_m1), RGL1 (Ss081095_ACT) ਤੋਂ ਖਰੀਦੇ ਗਏ ਸਨ। 8_mH), GATA4 (Ss03383805_u1), GJA1 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1), COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss042415) ਘਰ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਸਾਰੇ ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ ਆਮ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। e GAPDH.
NT-ProBNP ਦੀ ਮੀਡੀਆ ਰੀਲੀਜ਼ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੇ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ NT-ProBNP ਕਿੱਟ (ਸੂਰ) (ਕੈਟ ਨੰ. MBS2086979, MyBioSource) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, ਹਰੇਕ ਨਮੂਨੇ ਦੇ 250 μl ਅਤੇ ਮਿਆਰ ਨੂੰ ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ ਡੁਪਲੀਕੇਟ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਨਮੂਨਾ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਤੁਰੰਤ ਬਾਅਦ, ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 50 µl Assay Reagent A ਪਾਓ।ਹੌਲੀ ਹੌਲੀ ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਹਿਲਾਓ ਅਤੇ ਸੀਲੈਂਟ ਨਾਲ ਸੀਲ ਕਰੋ.ਫਿਰ ਗੋਲੀਆਂ ਨੂੰ 1 ਘੰਟੇ ਲਈ 37 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਫਿਰ ਘੋਲ ਨੂੰ ਐਸਪੀਰੇਟ ਕਰੋ ਅਤੇ ਖੂਹ ਨੂੰ 4 ਵਾਰ 350 µl 1X ਵਾਸ਼ ਘੋਲ ਨਾਲ ਧੋਵੋ, ਹਰ ਵਾਰ 1-2 ਮਿੰਟ ਲਈ ਵਾਸ਼ ਘੋਲ ਨੂੰ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ।ਫਿਰ ਪ੍ਰਤੀ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 100 µl ਅਸੇ ਰੀਐਜੈਂਟ ਬੀ ਪਾਓ ਅਤੇ ਪਲੇਟ ਸੀਲੈਂਟ ਨਾਲ ਸੀਲ ਕਰੋ।ਗੋਲੀ ਨੂੰ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਹਿਲਾ ਕੇ 37 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਪਕਾਇਆ ਗਿਆ।ਘੋਲ ਨੂੰ ਐਸਪੀਰੇਟ ਕਰੋ ਅਤੇ 1X ਵਾਸ਼ ਘੋਲ ਦੇ 350 μl ਨਾਲ ਖੂਹਾਂ ਨੂੰ 5 ਵਾਰ ਧੋਵੋ।ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 90 µl ਸਬਸਟਰੇਟ ਘੋਲ ਪਾਓ ਅਤੇ ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਸੀਲ ਕਰੋ।ਪਲੇਟ ਨੂੰ 37 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ 10-20 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਉਬਾਲੋ।ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 50 µl ਸਟਾਪ ਹੱਲ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਤੁਰੰਤ 450 nm 'ਤੇ ਸੈਟੇਸ਼ਨ (BioTek) ਪਲੇਟ ਰੀਡਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਸਮੂਹ ਆਕਾਰਾਂ ਨੂੰ ਚੁਣਨ ਲਈ ਪਾਵਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਜੋ 5% ਟਾਈਪ I ਗਲਤੀ ਦਰ ਦੇ ਨਾਲ ਪੈਰਾਮੀਟਰ ਵਿੱਚ 10% ਸੰਪੂਰਨ ਤਬਦੀਲੀ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ >80% ਸ਼ਕਤੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਨਗੇ। ਸਮੂਹ ਆਕਾਰਾਂ ਨੂੰ ਚੁਣਨ ਲਈ ਪਾਵਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਜੋ 5% ਟਾਈਪ I ਗਲਤੀ ਦਰ ਦੇ ਨਾਲ ਪੈਰਾਮੀਟਰ ਵਿੱਚ 10% ਸੰਪੂਰਨ ਤਬਦੀਲੀ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ >80% ਸ਼ਕਤੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਨਗੇ। Анализ мощности был выполнен для выбора размеров групп, которые обеспечат >80% мощности для обнаружемония 10% абнаружемония с 5% частотой ошибок типа I. ਪਾਵਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਗਰੁੱਪ ਅਕਾਰ ਦੀ ਚੋਣ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜੋ 5% ਟਾਈਪ I ਗਲਤੀ ਦਰ ਨਾਲ 10% ਸੰਪੂਰਨ ਪੈਰਾਮੀਟਰ ਤਬਦੀਲੀ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ >80% ਪਾਵਰ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰੇਗਾ।进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I将枯变化和5％I将提供.进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I将枯变化和5％I将提供. Был проведен анализ мощности для выбора размера группы, который обеспечил бы > 80% мощности для обнаружения 10% етров и 5% частоты ошибок типа I. ਇੱਕ ਸਮੂਹ ਆਕਾਰ ਚੁਣਨ ਲਈ ਇੱਕ ਪਾਵਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜੋ 10% ਸੰਪੂਰਨ ਪੈਰਾਮੀਟਰ ਤਬਦੀਲੀ ਅਤੇ 5% ਕਿਸਮ I ਗਲਤੀ ਦਰ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ >80% ਪਾਵਰ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰੇਗਾ।ਪ੍ਰਯੋਗ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗ ਬੇਤਰਤੀਬੇ ਚੁਣੇ ਗਏ ਸਨ।ਸਾਰੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੰਡੀਸ਼ਨ ਅੰਨ੍ਹੇ ਸਨ ਅਤੇ ਸਾਰੇ ਡੇਟਾ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਹੀ ਨਮੂਨੇ ਡੀਕੋਡ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।ਗ੍ਰਾਫਪੈਡ ਪ੍ਰਿਜ਼ਮ ਸੌਫਟਵੇਅਰ (ਸੈਨ ਡਿਏਗੋ, CA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਸਾਰੇ ਅੰਕੜਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਸਾਰੇ ਅੰਕੜਿਆਂ ਲਈ, p-ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ <0.05 ਮੁੱਲਾਂ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਸੀ। ਸਾਰੇ ਅੰਕੜਿਆਂ ਲਈ, ਮੁੱਲ <0.05 'ਤੇ p-ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਮੰਨਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. ਸਾਰੇ ਅੰਕੜਿਆਂ ਲਈ, ਮੁੱਲ <0.05 'ਤੇ p-ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਮੰਨਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।对于所有统计数据,p 值在值<0.05 时被认为是显着的.对于所有统计数据,p 值在值<0.05 时被认为是显着的. Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. ਸਾਰੇ ਅੰਕੜਿਆਂ ਲਈ, ਮੁੱਲ <0.05 'ਤੇ p-ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਮੰਨਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦਾ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਡੇਟਾ 'ਤੇ ਸਿਰਫ਼ 2 ਤੁਲਨਾਵਾਂ ਨਾਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ਜਾਂ ਦੋ-ਪਾਸੀ ਅਨੋਵਾ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਈ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਮਹੱਤਤਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਪੋਸਟ-ਹਾਕ ਟੈਸਟਾਂ ਨੂੰ ਕਰਨ ਵੇਲੇ, ਕਈ ਤੁਲਨਾਵਾਂ ਲਈ ਟੂਕੀ ਦੇ ਸੁਧਾਰ ਨੂੰ ਲਾਗੂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।FDR ਅਤੇ p.adjust ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ RNAsec ਡੇਟਾ ਵਿੱਚ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਵਿਚਾਰ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਢੰਗ ਭਾਗ ਵਿੱਚ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ।
ਅਧਿਐਨ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਬਾਰੇ ਵਧੇਰੇ ਜਾਣਕਾਰੀ ਲਈ, ਇਸ ਲੇਖ ਨਾਲ ਲਿੰਕ ਕੀਤੀ ਕੁਦਰਤ ਖੋਜ ਰਿਪੋਰਟ ਐਬਸਟਰੈਕਟ ਦੇਖੋ।