Nature.com 'ਤੇ ਜਾਣ ਲਈ ਧੰਨਵਾਦ। ਤੁਹਾਡੇ ਦੁਆਰਾ ਵਰਤੇ ਜਾ ਰਹੇ ਬ੍ਰਾਊਜ਼ਰ ਸੰਸਕਰਣ ਵਿੱਚ ਸੀਮਤ CSS ਸਹਾਇਤਾ ਹੈ। ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਅਨੁਭਵ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਸਿਫ਼ਾਰਿਸ਼ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਤੁਸੀਂ ਇੱਕ ਅੱਪਡੇਟ ਕੀਤੇ ਬ੍ਰਾਊਜ਼ਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ (ਜਾਂ ਇੰਟਰਨੈੱਟ ਐਕਸਪਲੋਰਰ ਵਿੱਚ ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਮੋਡ ਨੂੰ ਅਯੋਗ ਕਰੋ)। ਇਸ ਦੌਰਾਨ, ਨਿਰੰਤਰ ਸਹਾਇਤਾ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਸਾਈਟ ਨੂੰ ਸਟਾਈਲ ਅਤੇ JavaScript ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਰੈਂਡਰ ਕਰਾਂਗੇ।
ਇੱਕ ਭਰੋਸੇਮੰਦ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਸਿਸਟਮ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ ਜੋ ਡਰੱਗ ਟੈਸਟਿੰਗ ਲਈ ਦਿਲ ਦੇ ਸਰੀਰਕ ਵਾਤਾਵਰਣ ਨੂੰ ਸਹੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਦੁਬਾਰਾ ਪੈਦਾ ਕਰ ਸਕੇ। ਮਨੁੱਖੀ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਕਲਚਰ ਸਿਸਟਮਾਂ ਦੀ ਸੀਮਤ ਉਪਲਬਧਤਾ ਨੇ ਕਾਰਡੀਅਕ ਡਰੱਗ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦੀ ਗਲਤ ਵਿਆਖਿਆ ਕੀਤੀ ਹੈ। ਇੱਥੇ, ਅਸੀਂ ਇੱਕ ਕਾਰਡੀਅਕ ਟਿਸ਼ੂ ਕਲਚਰ ਮਾਡਲ (CTCM) ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ ਹੈ ਜੋ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਮੈਕਨੀਕਲ ਤੌਰ 'ਤੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਕਾਰਡੀਅਕ ਚੱਕਰ ਦੇ ਸਿਸਟੋਲਿਕ ਅਤੇ ਡਾਇਸਟੋਲਿਕ ਪੜਾਵਾਂ ਦੌਰਾਨ ਸਰੀਰਕ ਖਿੱਚ ਤੋਂ ਗੁਜ਼ਰਦਾ ਹੈ। 12 ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਕਲਚਰ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਇਸ ਪਹੁੰਚ ਨੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਨੂੰ ਅੰਸ਼ਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੁਧਾਰਿਆ, ਪਰ ਉਨ੍ਹਾਂ ਦੀ ਸੰਰਚਨਾਤਮਕ ਅਖੰਡਤਾ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਨਹੀਂ ਰੱਖਿਆ। ਇਸ ਲਈ, ਛੋਟੇ ਅਣੂ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ ਸਾਡੇ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ 100 nM ਟ੍ਰਾਈਓਡੋਥਾਈਰੋਨਾਈਨ (T3) ਅਤੇ 1 μM ਡੈਕਸਾਮੇਥਾਸੋਨ (Dex) ਦੇ ਜੋੜ ਨੇ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਸੂਖਮ ਢਾਂਚੇ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਿਆ। T3/Dex ਇਲਾਜ ਦੇ ਨਾਲ, CTCM ਸਿਸਟਮ ਨੇ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਪੱਧਰ 'ਤੇ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲਾਂ, ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ, ਪਾਚਕ ਗਤੀਵਿਧੀ ਅਤੇ ਸੰਰਚਨਾਤਮਕ ਅਖੰਡਤਾ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਿਆ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਕਲਚਰ ਵਿੱਚ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਖਿੱਚ ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫਿਕ ਕਾਰਡੀਅਕ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਦਿਲ ਦੇ ਖਿੱਚ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫਿਕ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਨ ਲਈ CTCM ਦੀ ਯੋਗਤਾ ਦਾ ਸਬੂਤ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਸਿੱਟੇ ਵਜੋਂ, CTCM ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਕਲਚਰ ਵਿੱਚ ਦਿਲ ਦੇ ਸਰੀਰ ਵਿਗਿਆਨ ਅਤੇ ਪੈਥੋਫਿਜ਼ੀਓਲੋਜੀ ਨੂੰ ਮਾਡਲ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਭਰੋਸੇਯੋਗ ਡਰੱਗ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਨੂੰ ਸਮਰੱਥ ਬਣਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਕਲੀਨਿਕਲ ਖੋਜ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ, ਭਰੋਸੇਯੋਗ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਜੋ ਮਨੁੱਖੀ ਦਿਲ ਦੇ ਸਰੀਰਕ ਵਾਤਾਵਰਣ ਨੂੰ ਸਹੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਦੁਬਾਰਾ ਪੈਦਾ ਕਰ ਸਕਣ। ਅਜਿਹੇ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਨੂੰ ਬਦਲੇ ਹੋਏ ਮਕੈਨੀਕਲ ਸਟ੍ਰੈਚ, ਦਿਲ ਦੀ ਗਤੀ, ਅਤੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫਿਜ਼ੀਓਲੋਜੀਕਲ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਨੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ। ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਮਾਡਲਾਂ ਨੂੰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਨੁੱਖੀ ਦਿਲ ਵਿੱਚ ਦਵਾਈਆਂ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਣ ਵਿੱਚ ਸੀਮਤ ਭਰੋਸੇਯੋਗਤਾ ਦੇ ਨਾਲ ਕਾਰਡੀਅਕ ਫਿਜ਼ੀਓਲੋਜੀ ਲਈ ਇੱਕ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਪਲੇਟਫਾਰਮ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ1,2। ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਆਦਰਸ਼ ਕਾਰਡੀਅਕ ਟਿਸ਼ੂ ਕਲਚਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਮਾਡਲ (CTCM) ਇੱਕ ਮਾਡਲ ਹੈ ਜੋ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਇਲਾਜ ਅਤੇ ਫਾਰਮਾਕੋਲੋਜੀਕਲ ਦਖਲਅੰਦਾਜ਼ੀ ਲਈ ਬਹੁਤ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਅਤੇ ਖਾਸ ਹੈ, ਮਨੁੱਖੀ ਦਿਲ ਦੇ ਸਰੀਰ ਵਿਗਿਆਨ ਅਤੇ ਪੈਥੋਫਿਜ਼ੀਓਲੋਜੀ ਨੂੰ ਸਹੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਦੁਬਾਰਾ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ3। ਅਜਿਹੀ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਅਣਹੋਂਦ ਦਿਲ ਦੀ ਅਸਫਲਤਾ ਲਈ ਨਵੇਂ ਇਲਾਜਾਂ ਦੀ ਖੋਜ ਨੂੰ ਸੀਮਤ ਕਰਦੀ ਹੈ4,5 ਅਤੇ ਮਾਰਕੀਟ ਤੋਂ ਬਾਹਰ ਨਿਕਲਣ ਦੇ ਇੱਕ ਮੁੱਖ ਕਾਰਨ ਵਜੋਂ ਡਰੱਗ ਕਾਰਡੀਓਟੌਕਸਿਟੀ ਵੱਲ ਲੈ ਜਾਂਦੀ ਹੈ6।
ਪਿਛਲੇ ਦਹਾਕੇ ਦੌਰਾਨ, ਅੱਠ ਗੈਰ-ਕਾਰਡੀਓਵੈਸਕੁਲਰ ਦਵਾਈਆਂ ਨੂੰ ਕਲੀਨਿਕਲ ਵਰਤੋਂ ਤੋਂ ਵਾਪਸ ਲੈ ਲਿਆ ਗਿਆ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਉਹ QT ਅੰਤਰਾਲ ਨੂੰ ਲੰਮਾ ਕਰਨ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦੀਆਂ ਹਨ ਜਿਸ ਨਾਲ ਵੈਂਟ੍ਰਿਕੂਲਰ ਐਰੀਥਮੀਆ ਅਤੇ ਅਚਾਨਕ ਮੌਤ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਕਾਰਡੀਓਵੈਸਕੁਲਰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਜ਼ਹਿਰੀਲੇਪਣ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ ਭਰੋਸੇਯੋਗ ਪ੍ਰੀ-ਕਲੀਨਿਕਲ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਰਣਨੀਤੀਆਂ ਦੀ ਵੱਧਦੀ ਲੋੜ ਹੈ। ਡਰੱਗ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਅਤੇ ਜ਼ਹਿਰੀਲੇਪਣ ਦੀ ਜਾਂਚ ਵਿੱਚ ਮਨੁੱਖੀ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਪਲੂਰੀਪੋਟੈਂਟ ਸਟੈਮ ਸੈੱਲ-ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟਸ (hiPS-CM) ਦੀ ਹਾਲੀਆ ਵਰਤੋਂ ਇਸ ਸਮੱਸਿਆ ਦਾ ਅੰਸ਼ਕ ਹੱਲ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, hiPS-CM ਦੀ ਅਪਰਿਪਕ ਪ੍ਰਕਿਰਤੀ ਅਤੇ ਕਾਰਡੀਓਕ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਬਹੁ-ਸੈਲੂਲਰ ਜਟਿਲਤਾ ਦੀ ਘਾਟ ਇਸ ਵਿਧੀ ਦੀਆਂ ਮੁੱਖ ਸੀਮਾਵਾਂ ਹਨ। ਹਾਲੀਆ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਇਸ ਸੀਮਾ ਨੂੰ ਅੰਸ਼ਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ hiPS-CM ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕਾਰਡੀਓਕ ਟਿਸ਼ੂ ਹਾਈਡ੍ਰੋਜੇਲ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਸਵੈ-ਚਾਲਤ ਸੰਕੁਚਨ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਤੋਂ ਥੋੜ੍ਹੀ ਦੇਰ ਬਾਅਦ ਅਤੇ ਸਮੇਂ ਦੇ ਨਾਲ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਬਿਜਲੀ ਉਤੇਜਨਾ ਵਧਾ ਕੇ ਦੂਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਹਨਾਂ hiPS-CM ਸੂਖਮ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਬਾਲਗ ਮਾਇਓਕਾਰਡੀਅਮ ਦੇ ਪਰਿਪੱਕ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫਿਜ਼ੀਓਲੋਜੀਕਲ ਅਤੇ ਸੰਕੁਚਨਸ਼ੀਲ ਗੁਣਾਂ ਦੀ ਘਾਟ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਮਨੁੱਖੀ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਇੱਕ ਵਧੇਰੇ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਬਣਤਰ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੈੱਲ ਕਿਸਮਾਂ ਦਾ ਇੱਕ ਵਿਭਿੰਨ ਮਿਸ਼ਰਣ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਐਂਡੋਥੈਲੀਅਲ ਸੈੱਲ, ਨਿਊਰੋਨਸ ਅਤੇ ਸਟ੍ਰੋਮਲ ਫਾਈਬਰੋਬਲਾਸਟਸ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ, ਜੋ ਕਿ ਐਕਸਟਰਸੈਲੂਲਰ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਖਾਸ ਸੈੱਟਾਂ ਦੁਆਰਾ ਆਪਸ ਵਿੱਚ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਹਨ। ਬਾਲਗ ਥਣਧਾਰੀ ਦਿਲ ਵਿੱਚ ਗੈਰ-ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟ ਆਬਾਦੀ 11,12,13 ਦੀ ਇਹ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਵਿਅਕਤੀਗਤ ਸੈੱਲ ਕਿਸਮਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕਾਰਡੀਅਕ ਟਿਸ਼ੂ ਨੂੰ ਮਾਡਲਿੰਗ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਵੱਡੀ ਰੁਕਾਵਟ ਹੈ। ਇਹ ਮੁੱਖ ਸੀਮਾਵਾਂ ਸਰੀਰਕ ਅਤੇ ਰੋਗ ਸੰਬੰਧੀ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਅਧੀਨ ਬਰਕਰਾਰ ਮਾਇਓਕਾਰਡੀਅਲ ਟਿਸ਼ੂ ਨੂੰ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਤਰੀਕਿਆਂ ਨੂੰ ਵਿਕਸਤ ਕਰਨ ਦੀ ਮਹੱਤਤਾ 'ਤੇ ਜ਼ੋਰ ਦਿੰਦੀਆਂ ਹਨ।
ਮਨੁੱਖੀ ਦਿਲ ਦੇ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਪਤਲੇ (300 µm) ਭਾਗਾਂ ਨੇ ਮਨੁੱਖੀ ਮਾਇਓਕਾਰਡੀਅਮ ਦੇ ਇੱਕ ਵਾਅਦਾ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਮਾਡਲ ਵਜੋਂ ਸਾਬਤ ਕੀਤਾ ਹੈ। ਇਹ ਵਿਧੀ ਮਨੁੱਖੀ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਸਮਾਨ ਇੱਕ ਸੰਪੂਰਨ 3D ਬਹੁ-ਸੈਲੂਲਰ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, 2019 ਤੱਕ, ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਛੋਟੇ (24 ਘੰਟੇ) ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਬਚਾਅ ਦੁਆਰਾ ਸੀਮਤ ਸੀ। ਇਹ ਭੌਤਿਕ-ਮਕੈਨੀਕਲ ਖਿੱਚ ਦੀ ਘਾਟ, ਹਵਾ-ਤਰਲ ਇੰਟਰਫੇਸ, ਅਤੇ ਸਧਾਰਨ ਮੀਡੀਆ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਸਮੇਤ ਕਈ ਕਾਰਕਾਂ ਦੇ ਕਾਰਨ ਹੈ ਜੋ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀਆਂ ਜ਼ਰੂਰਤਾਂ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਨਹੀਂ ਕਰਦੇ ਹਨ। 2019 ਵਿੱਚ, ਕਈ ਖੋਜ ਸਮੂਹਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਵਿੱਚ ਮਕੈਨੀਕਲ ਕਾਰਕਾਂ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਨ ਨਾਲ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਜੀਵਨ ਵਧ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਦਿਲ ਦੀ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਦਿਲ ਦੀ ਬਿਮਾਰੀ ਦੀ ਨਕਲ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ। ਦੋ ਸ਼ਾਨਦਾਰ ਅਧਿਐਨ 17 ਅਤੇ 18 ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਯੂਨੀਐਕਸੀਅਲ ਮਕੈਨੀਕਲ ਲੋਡਿੰਗ ਦਾ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਦੌਰਾਨ ਦਿਲ ਦੇ ਫੀਨੋਟਾਈਪ 'ਤੇ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪੈਂਦਾ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਹਨਾਂ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਲ ਦੇ ਚੱਕਰ ਦੇ ਗਤੀਸ਼ੀਲ ਤਿੰਨ-ਅਯਾਮੀ ਭੌਤਿਕ-ਮਕੈਨੀਕਲ ਲੋਡਿੰਗ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਨਹੀਂ ਕੀਤੀ, ਕਿਉਂਕਿ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਆਈਸੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਟੈਨਸਾਈਲ ਫੋਰਸ 17 ਜਾਂ ਲੀਨੀਅਰ ਆਕਸੋਟੋਨਿਕ ਲੋਡਿੰਗ 18 ਨਾਲ ਲੋਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਟਿਸ਼ੂ ਸਟ੍ਰੈਚਿੰਗ ਦੇ ਇਹਨਾਂ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਕਾਰਡੀਅਕ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਦਬਾਇਆ ਗਿਆ ਜਾਂ ਅਸਧਾਰਨ ਸਟ੍ਰੈਚ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਜੀਨਾਂ ਦਾ ਓਵਰਐਕਸਪ੍ਰੈਸ਼ਨ ਹੋਇਆ। ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਪਿਟੌਲਿਸ ਐਟ ਅਲ. 19 ਨੇ ਫੋਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਡਿਊਸਰ ਫੀਡਬੈਕ ਅਤੇ ਟੈਂਸ਼ਨ ਡਰਾਈਵਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਕਾਰਡੀਅਕ ਚੱਕਰ ਪੁਨਰ ਨਿਰਮਾਣ ਲਈ ਇੱਕ ਗਤੀਸ਼ੀਲ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਕਲਚਰ ਬਾਥ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ। ਹਾਲਾਂਕਿ ਇਹ ਸਿਸਟਮ ਵਧੇਰੇ ਸਟੀਕ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਕਾਰਡੀਅਕ ਚੱਕਰ ਮਾਡਲਿੰਗ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ, ਵਿਧੀ ਦੀ ਗੁੰਝਲਤਾ ਅਤੇ ਘੱਟ ਥਰੂਪੁੱਟ ਇਸ ਸਿਸਟਮ ਦੇ ਉਪਯੋਗ ਨੂੰ ਸੀਮਤ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਸਾਡੀ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਨੇ ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ ਇਲੈਕਟ੍ਰੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਅਤੇ ਇੱਕ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਮਾਧਿਅਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਇੱਕ ਸਰਲ ਕਲਚਰ ਸਿਸਟਮ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ 6 ਦਿਨਾਂ ਤੱਕ ਸੂਰ ਅਤੇ ਮਨੁੱਖੀ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਿਆ ਜਾ ਸਕੇ20,21।
ਮੌਜੂਦਾ ਹੱਥ-ਲਿਖਤ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਇੱਕ ਕਾਰਡੀਅਕ ਟਿਸ਼ੂ ਕਲਚਰ ਮਾਡਲ (CTCM) ਦਾ ਵਰਣਨ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਜੋ ਪੋਰਸਾਈਨ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਦਿਲ ਦੇ ਚੱਕਰ ਦੌਰਾਨ ਤਿੰਨ-ਅਯਾਮੀ ਕਾਰਡੀਅਕ ਫਿਜ਼ੀਓਲੋਜੀਕਲ ਡਿਸਟੈਂਸ਼ਨ ਨੂੰ ਦੁਹਰਾਉਣ ਲਈ ਹਿਊਮਰਲ ਸੰਕੇਤਾਂ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਹ CTCM ਪ੍ਰੀ-ਕਲੀਨਿਕਲ ਡਰੱਗ ਪ੍ਰੀਡੀਕਸ਼ਨ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਨੂੰ ਇੱਕ ਅਜਿਹੇ ਪੱਧਰ ਤੱਕ ਵਧਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜੋ ਪਹਿਲਾਂ ਕਦੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਇੱਕ ਲਾਗਤ-ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ, ਮੱਧ-ਥਰੂਪੁੱਟ ਕਾਰਡੀਅਕ ਸਿਸਟਮ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਕੇ ਜੋ ਪ੍ਰੀ-ਕਲੀਨਿਕਲ ਡਰੱਗ ਟੈਸਟਿੰਗ ਲਈ ਥਣਧਾਰੀ ਦਿਲ ਦੇ ਫਿਜ਼ੀਓਲੋਜੀ/ਪੈਥੋਫਿਜ਼ੀਓਲੋਜੀ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਹੀਮੋਡਾਇਨਾਮਿਕ ਮਕੈਨੀਕਲ ਸਿਗਨਲ ਵਿਟਰੋ 22,23,24 ਵਿੱਚ ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟ ਫੰਕਸ਼ਨ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਮੌਜੂਦਾ ਹੱਥ-ਲਿਖਤ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਇੱਕ CTCM (ਚਿੱਤਰ 1a) ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ ਹੈ ਜੋ ਸਰੀਰਕ ਫ੍ਰੀਕੁਐਂਸੀ (1.2 Hz, 72 ਬੀਟਸ ਪ੍ਰਤੀ ਮਿੰਟ) 'ਤੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੀਕਲ ਅਤੇ ਮਕੈਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਦੋਵਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਕੇ ਬਾਲਗ ਦਿਲ ਦੇ ਵਾਤਾਵਰਣ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਡਾਇਸਟੋਲ ਦੌਰਾਨ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਟਿਸ਼ੂ ਖਿੱਚ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ, ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਆਕਾਰ ਨੂੰ 25% ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਇੱਕ 3D ਪ੍ਰਿੰਟਿੰਗ ਡਿਵਾਈਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ (ਚਿੱਤਰ 1b)। C-PACE ਸਿਸਟਮ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਇਲੈਕਟ੍ਰੀਕਲ ਪੇਸਿੰਗ ਨੂੰ ਕਾਰਡੀਅਕ ਚੱਕਰ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਦੁਬਾਰਾ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਡੇਟਾ ਪ੍ਰਾਪਤੀ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਸਿਸਟੋਲ ਤੋਂ 100 ms ਸ਼ੁਰੂ ਕਰਨ ਲਈ ਸਮਾਂ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਟਿਸ਼ੂ ਕਲਚਰ ਸਿਸਟਮ ਇੱਕ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮੇਬਲ ਨਿਊਮੈਟਿਕ ਐਕਟੁਏਟਰ (LB ਇੰਜੀਨੀਅਰਿੰਗ, ਜਰਮਨੀ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਉੱਪਰਲੇ ਚੈਂਬਰ ਵਿੱਚ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਵਿਸਥਾਰ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਨ ਲਈ ਇੱਕ ਲਚਕਦਾਰ ਸਿਲੀਕੋਨ ਝਿੱਲੀ ਨੂੰ ਚੱਕਰੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਫੈਲਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ। ਸਿਸਟਮ ਨੂੰ ਇੱਕ ਪ੍ਰੈਸ਼ਰ ਟ੍ਰਾਂਸਡਿਊਸਰ ਰਾਹੀਂ ਇੱਕ ਬਾਹਰੀ ਏਅਰ ਲਾਈਨ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਦਬਾਅ (± 1 mmHg) ਅਤੇ ਸਮਾਂ (± 1 ms) (ਚਿੱਤਰ 1c) ਨੂੰ ਸਹੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਐਡਜਸਟ ਕਰਨਾ ਸੰਭਵ ਹੋ ਗਿਆ।
a ਡਿਵਾਈਸ ਦੇ ਕਲਚਰ ਚੈਂਬਰ ਦੇ ਅੰਦਰ, ਨੀਲੇ ਰੰਗ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਏ ਗਏ 7 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਸਪੋਰਟ ਰਿੰਗ ਨਾਲ ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨ ਜੋੜੋ। ਕਲਚਰ ਚੈਂਬਰ ਨੂੰ ਇੱਕ ਪਤਲੀ ਲਚਕਦਾਰ ਸਿਲੀਕੋਨ ਝਿੱਲੀ ਦੁਆਰਾ ਏਅਰ ਚੈਂਬਰ ਤੋਂ ਵੱਖ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਲੀਕ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਹਰੇਕ ਚੈਂਬਰ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਇੱਕ ਗੈਸਕੇਟ ਰੱਖੋ। ਡਿਵਾਈਸ ਦੇ ਢੱਕਣ ਵਿੱਚ ਗ੍ਰਾਫਾਈਟ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਬਿਜਲੀ ਉਤੇਜਨਾ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੇ ਹਨ। b ਵੱਡੇ ਟਿਸ਼ੂ ਡਿਵਾਈਸ, ਗਾਈਡ ਰਿੰਗ ਅਤੇ ਸਹਾਇਤਾ ਰਿੰਗ ਦੀ ਯੋਜਨਾਬੱਧ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧਤਾ। ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨ (ਭੂਰੇ) ਵੱਡੇ ਆਕਾਰ ਦੇ ਡਿਵਾਈਸ 'ਤੇ ਰੱਖੇ ਗਏ ਹਨ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਗਾਈਡ ਰਿੰਗ ਡਿਵਾਈਸ ਦੇ ਬਾਹਰੀ ਕਿਨਾਰੇ 'ਤੇ ਗਰੂਵ ਵਿੱਚ ਰੱਖੀ ਗਈ ਹੈ। ਗਾਈਡ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਸਹਾਇਤਾ ਰਿੰਗ ਨੂੰ ਧਿਆਨ ਨਾਲ ਕਾਰਡੀਅਕ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਸੈਕਸ਼ਨ 'ਤੇ ਟਿਸ਼ੂ ਐਕਰੀਲਿਕ ਅਡੈਸਿਵ ਨਾਲ ਲੇਪਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ। c ਪ੍ਰੋਗਰਾਮੇਬਲ ਨਿਊਮੈਟਿਕ ਐਕਟੁਏਟਰ (PPD) ਦੁਆਰਾ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਏਅਰ ਚੈਂਬਰ ਪ੍ਰੈਸ਼ਰ ਦੇ ਫੰਕਸ਼ਨ ਵਜੋਂ ਇਲੈਕਟ੍ਰੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਦੇ ਸਮੇਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਗ੍ਰਾਫ। ਪ੍ਰੈਸ਼ਰ ਸੈਂਸਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਨੂੰ ਸਿੰਕ੍ਰੋਨਾਈਜ਼ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਡੇਟਾ ਪ੍ਰਾਪਤੀ ਡਿਵਾਈਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਜਦੋਂ ਕਲਚਰ ਚੈਂਬਰ ਵਿੱਚ ਦਬਾਅ ਸੈੱਟ ਥ੍ਰੈਸ਼ਹੋਲਡ 'ਤੇ ਪਹੁੰਚ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਲੈਕਟ੍ਰੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਨੂੰ ਚਾਲੂ ਕਰਨ ਲਈ C-PACE-EM ਨੂੰ ਇੱਕ ਪਲਸ ਸਿਗਨਲ ਭੇਜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। d ਇੱਕ ਇਨਕਿਊਬੇਟਰ ਸ਼ੈਲਫ 'ਤੇ ਰੱਖੇ ਗਏ ਚਾਰ CTCM ਦੀ ਤਸਵੀਰ। ਚਾਰ ਯੰਤਰ ਇੱਕ PPD ਨਾਲ ਇੱਕ ਨਿਊਮੈਟਿਕ ਸਰਕਟ ਰਾਹੀਂ ਜੁੜੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਨਿਊਮੈਟਿਕ ਸਰਕਟ ਵਿੱਚ ਦਬਾਅ ਦੀ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕਰਨ ਲਈ ਹੀਮੋਸਟੈਟਿਕ ਵਾਲਵ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੈਸ਼ਰ ਸੈਂਸਰ ਪਾਏ ਜਾਂਦੇ ਹਨ। ਹਰੇਕ ਯੰਤਰ ਵਿੱਚ ਛੇ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।
ਇੱਕ ਸਿੰਗਲ ਨਿਊਮੈਟਿਕ ਐਕਚੁਏਟਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਅਸੀਂ 4 CTCM ਯੰਤਰਾਂ ਨੂੰ ਕੰਟਰੋਲ ਕਰਨ ਦੇ ਯੋਗ ਸੀ, ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਹਰ ਇੱਕ 6 ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਰੱਖ ਸਕਦਾ ਸੀ (ਚਿੱਤਰ 1d)। CTCM ਵਿੱਚ, ਹਵਾ ਚੈਂਬਰ ਵਿੱਚ ਹਵਾ ਦਾ ਦਬਾਅ ਤਰਲ ਚੈਂਬਰ ਵਿੱਚ ਸਮਕਾਲੀ ਦਬਾਅ ਵਿੱਚ ਬਦਲ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਦੇ ਸਰੀਰਕ ਵਿਸਥਾਰ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ (ਚਿੱਤਰ 2a ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਫਿਲਮ 1)। 80 mm Hg 'ਤੇ ਟਿਸ਼ੂ ਸਟ੍ਰੈਚ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ। ਆਰਟ. ਨੇ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ 25% (ਚਿੱਤਰ 2b) ਦੁਆਰਾ ਖਿੱਚਿਆ ਦਿਖਾਇਆ। ਇਹ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਖਿੱਚ ਆਮ ਕਾਰਡੀਅਕ ਸੈਕਸ਼ਨ ਸੰਕੁਚਨਤਾ ਲਈ 2.2–2.3 µm ਦੀ ਸਰੀਰਕ ਸਾਰਕੋਮੇਰ ਲੰਬਾਈ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਦਿਖਾਈ ਗਈ ਹੈ17,19,25। ਕਸਟਮ ਕੈਮਰਾ ਸੈਟਿੰਗਾਂ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 1) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਗਤੀ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਗਤੀ ਦਾ ਐਪਲੀਟਿਊਡ ਅਤੇ ਵੇਗ (ਚਿੱਤਰ 2c, d) ਕਾਰਡੀਅਕ ਚੱਕਰ ਦੌਰਾਨ ਖਿੱਚ ਅਤੇ ਸਿਸਟੋਲ ਅਤੇ ਡਾਇਸਟੋਲ (ਚਿੱਤਰ 2b) ਦੌਰਾਨ ਸਮੇਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਸੀ। ਸੰਕੁਚਨ ਅਤੇ ਆਰਾਮ ਦੌਰਾਨ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਖਿੱਚ ਅਤੇ ਵੇਗ ਕਲਚਰ ਵਿੱਚ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਸਥਿਰ ਰਿਹਾ (ਚਿੱਤਰ 2f)। ਕਲਚਰ ਦੌਰਾਨ ਸੰਕੁਚਨ 'ਤੇ ਬਿਜਲਈ ਉਤੇਜਨਾ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਇੱਕ ਸ਼ੇਡਿੰਗ ਐਲਗੋਰਿਦਮ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 2a,b) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਵਿਕਾਰ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਵਿਧੀ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤੀ ਅਤੇ ਬਿਜਲਈ ਉਤੇਜਨਾ ਦੇ ਨਾਲ ਅਤੇ ਬਿਨਾਂ ਵਿਕਾਰ ਵਿੱਚ ਫਰਕ ਕਰਨ ਦੇ ਯੋਗ ਹੋਏ। ਦਿਲ ਦਾ ਉਹੀ ਭਾਗ (ਚਿੱਤਰ 2f)। ਕੱਟ ਦੇ ਗਤੀਸ਼ੀਲ ਖੇਤਰ (R6-9) ਵਿੱਚ, ਬਿਜਲਈ ਉਤੇਜਨਾ ਦੌਰਾਨ ਵੋਲਟੇਜ ਬਿਜਲਈ ਉਤੇਜਨਾ ਦੀ ਅਣਹੋਂਦ ਨਾਲੋਂ 20% ਵੱਧ ਸੀ, ਜੋ ਕਿ ਸੰਕੁਚਨ ਫੰਕਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਬਿਜਲਈ ਉਤੇਜਨਾ ਦੇ ਯੋਗਦਾਨ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਹਵਾ ਚੈਂਬਰ ਦੇ ਦਬਾਅ, ਤਰਲ ਚੈਂਬਰ ਦੇ ਦਬਾਅ, ਅਤੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਗਤੀ ਦੇ ਮਾਪਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਨਿਸ਼ਾਨ ਇਸ ਗੱਲ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਚੈਂਬਰ ਦਾ ਦਬਾਅ ਤਰਲ ਚੈਂਬਰ ਦੇ ਦਬਾਅ ਨੂੰ ਬਦਲਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਦੀ ਅਨੁਸਾਰੀ ਗਤੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। b ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਖਿੱਚ (ਸੰਤਰੀ) ਦੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਖਿੱਚ (ਨੀਲੇ) ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਨਿਸ਼ਾਨ। c ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਦੀ ਮਾਪੀ ਗਈ ਗਤੀ ਗਤੀ ਦੀ ਮਾਪੀ ਗਈ ਗਤੀ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਹੈ। (d) ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਵਿੱਚ ਚੱਕਰੀ ਗਤੀ (ਨੀਲੀ ਰੇਖਾ) ਅਤੇ ਵੇਗ (ਸੰਤਰੀ ਬਿੰਦੀ ਵਾਲੀ ਰੇਖਾ) ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਟ੍ਰੈਜੈਕਟਰੀ। e ਚੱਕਰ ਸਮੇਂ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (n = 19 ਟੁਕੜੇ ਪ੍ਰਤੀ ਸਮੂਹ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ), ਸੁੰਗੜਨ ਦਾ ਸਮਾਂ (n = 19 ਟੁਕੜੇ ਪ੍ਰਤੀ ਸਮੂਹ), ਆਰਾਮ ਸਮਾਂ (n = 19 ਟੁਕੜੇ ਪ੍ਰਤੀ ਸਮੂਹ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ), ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਗਤੀ (n = 25)। ਟੁਕੜੇ)/ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ ਸਮੂਹ), ਪੀਕ ਸਿਸਟੋਲਿਕ ਵੇਗ (n = 24(D0), 25(D12) ਟੁਕੜੇ/ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ ਸਮੂਹ) ਅਤੇ ਪੀਕ ਆਰਾਮ ਦਰ (n=24(D0), 25(D12) ਟੁਕੜੇ/ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ ਸਮੂਹ)। ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੇ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਨੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਪੈਰਾਮੀਟਰ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਨਹੀਂ ਦਿਖਾਇਆ। f ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਤਣਾਅ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ (ਲਾਲ) ਅਤੇ (ਨੀਲੇ) ਬਿਜਲਈ ਉਤੇਜਨਾ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਨਿਸ਼ਾਨ, ਉਸੇ ਭਾਗ ਤੋਂ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਦਸ ਖੇਤਰੀ ਖੇਤਰ। ਹੇਠਲੇ ਪੈਨਲ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਭਾਗਾਂ ਤੋਂ ਦਸ ਖੇਤਰਾਂ ਵਿੱਚ ਬਿਜਲਈ ਉਤੇਜਨਾ ਦੇ ਨਾਲ ਅਤੇ ਬਿਨਾਂ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ ਤਣਾਅ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਅੰਤਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। (n = ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ 8 ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ, ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲਾ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05)। (n = ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ 8 ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ, ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲਾ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05)। (n = 8 срезов/группу от разных свиней, проводится двусторонний t-критерий Стьюдента; ****p<0,0001, **p<0,01, *p<0,05)। (n = ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ 8 ਭਾਗ/ਸਮੂਹ, ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦਾ ਟੀ-ਟੈਸਟ; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05)। （n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验；**p <0.0001，**p <0.01,*p <0.05）. （n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验；**p <0.0001，**p <0.01,*p <0.05）. (n = 8 срезов/группу, от разных свиней, двусторонний критерий Стьюдента; ****p <0,0001, **p <0,01, *p <0,05)। (n = 8 ਭਾਗ/ਸਮੂਹ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ, ਦੋ-ਪੂਛਾਂ ਵਾਲਾ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦਾ ਟੀ-ਟੈਸਟ; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05)।ਗਲਤੀ ਬਾਰ ਔਸਤ ± ਮਿਆਰੀ ਭਟਕਣ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।
ਸਾਡੇ ਪਿਛਲੇ ਸਟੈਟਿਕ ਬਾਇਓਮੀਮੈਟਿਕ ਹਾਰਟ ਸਲਾਈਸ ਕਲਚਰ ਸਿਸਟਮ [20, 21] ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਇਲੈਕਟ੍ਰੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਲਾਗੂ ਕਰਕੇ ਅਤੇ ਮਾਧਿਅਮ ਰਚਨਾ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾ ਕੇ 6 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ, ਕਾਰਜ ਅਤੇ ਢਾਂਚਾਗਤ ਅਖੰਡਤਾ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਿਆ। ਹਾਲਾਂਕਿ, 10 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ, ਇਹ ਅੰਕੜੇ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਡਿੱਗ ਗਏ। ਅਸੀਂ ਆਪਣੇ ਪਿਛਲੇ ਸਟੈਟਿਕ ਬਾਇਓਮੀਮੈਟਿਕ ਕਲਚਰ ਸਿਸਟਮ 20, 21 ਕੰਟਰੋਲ ਸਥਿਤੀਆਂ (Ctrl) ਵਿੱਚ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਭਾਗਾਂ ਦਾ ਹਵਾਲਾ ਦੇਵਾਂਗੇ ਅਤੇ ਅਸੀਂ ਆਪਣੇ ਪਹਿਲਾਂ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਮਾਧਿਅਮ ਨੂੰ ਸਮਕਾਲੀ ਮਕੈਨੀਕਲ ਅਤੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ (CTCM) ਦੇ ਅਧੀਨ MC ਸਥਿਤੀਆਂ ਅਤੇ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਵਜੋਂ ਵਰਤਾਂਗੇ। ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਪਹਿਲਾਂ, ਅਸੀਂ ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਕਿ ਬਿਜਲਈ ਉਤੇਜਨਾ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਮਕੈਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ 6 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਟਿਸ਼ੂ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਲਈ ਨਾਕਾਫ਼ੀ ਸੀ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 3a,b)। ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ STCM ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਫਿਜ਼ੀਓ-ਮਕੈਨੀਕਲ ਅਤੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਦੇ ਨਾਲ, 12-ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ MS ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਅਧੀਨ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਵਾਂਗ ਹੀ ਰਹੀ, ਪਰ Ctrl ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਅਧੀਨ ਨਹੀਂ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ MTT ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ (ਚਿੱਤਰ 1) ਦੁਆਰਾ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। 3a)। ਇਹ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਮਕੈਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਅਤੇ ਕਾਰਡੀਅਕ ਚੱਕਰ ਦਾ ਸਿਮੂਲੇਸ਼ਨ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਸਾਡੇ ਪਿਛਲੇ ਸਟੈਟਿਕ ਕਲਚਰ ਸਿਸਟਮ ਵਿੱਚ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਮੇਂ ਨਾਲੋਂ ਦੁੱਗਣੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਵਿਹਾਰਕ ਰੱਖ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਕਾਰਡੀਅਕ ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ ਟੀ ਅਤੇ ਕਨੈਕਸਿਨ 43 ਦੇ ਇਮਯੂਨੋਲੇਬਲਿੰਗ ਦੁਆਰਾ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਢਾਂਚਾਗਤ ਇਕਸਾਰਤਾ ਦੇ ਮੁਲਾਂਕਣ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਕਨੈਕਸਿਨ 43 ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਉਸੇ ਦਿਨ ਨਿਯੰਤਰਣਾਂ ਨਾਲੋਂ ਦਿਨ 12 ਨੂੰ MC ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੀ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਕਸਾਰ ਕਨੈਕਸਿਨ 43 ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਅਤੇ Z-ਡਿਸਕ ਗਠਨ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਬਣਾਈ ਨਹੀਂ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ (ਚਿੱਤਰ 3b)। ਅਸੀਂ ਟਿਸ਼ੂ ਸਟ੍ਰਕਚਰਲ ਇਕਸਾਰਤਾ26 ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਲਈ ਇੱਕ ਆਰਟੀਫੀਸ਼ੀਅਲ ਇੰਟੈਲੀਜੈਂਸ (AI) ਫਰੇਮਵਰਕ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹਾਂ, ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-ਟੀ ਅਤੇ ਕਨੈਕਸਿਨ ਸਟੇਨਿੰਗ43 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਇੱਕ ਚਿੱਤਰ-ਅਧਾਰਤ ਡੂੰਘੀ ਸਿਖਲਾਈ ਪਾਈਪਲਾਈਨ ਜੋ ਸਥਾਨਕਕਰਨ ਦੀ ਤਾਕਤ ਦੇ ਮਾਮਲੇ ਵਿੱਚ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਢਾਂਚਾਗਤ ਇਕਸਾਰਤਾ ਅਤੇ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਨੂੰ ਸਵੈਚਲਿਤ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਾਪਣ ਲਈ ਹੈ। ਇਹ ਵਿਧੀ ਇੱਕ ਕਨਵੋਲਿਊਸ਼ਨਲ ਨਿਊਰਲ ਨੈੱਟਵਰਕ (CNN) ਅਤੇ ਇੱਕ ਡੂੰਘੀ ਸਿਖਲਾਈ ਫਰੇਮਵਰਕ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੀ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਕਾਰਡੀਅਕ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਢਾਂਚਾਗਤ ਇਕਸਾਰਤਾ ਨੂੰ ਭਰੋਸੇਯੋਗ ਢੰਗ ਨਾਲ ਮਾਪਿਆ ਜਾ ਸਕੇ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਹਵਾਲੇ ਵਿੱਚ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ। 26. MC ਟਿਸ਼ੂ ਨੇ ਸਥਿਰ ਨਿਯੰਤਰਣ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਦਿਨ 0 ਨਾਲ ਬਿਹਤਰ ਢਾਂਚਾਗਤ ਸਮਾਨਤਾ ਦਿਖਾਈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਮੈਸਨ ਦੇ ਟ੍ਰਾਈਕ੍ਰੋਮ ਸਟੈਨਿੰਗ ਨੇ ਕਲਚਰ ਦੇ 12ਵੇਂ ਦਿਨ (ਚਿੱਤਰ 3c) 'ਤੇ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਐਮਐਸ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਅਧੀਨ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤਤਾ ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਘੱਟ ਦਰਸਾਇਆ। ਜਦੋਂ ਕਿ ਸੀਟੀਸੀਐਮ ਨੇ 12ਵੇਂ ਦਿਨ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਨੂੰ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਸਮਾਨ ਪੱਧਰ ਤੱਕ ਵਧਾ ਦਿੱਤਾ, ਇਸਨੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਸੰਰਚਨਾਤਮਕ ਇਕਸਾਰਤਾ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਸੁਧਾਰ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ।
ਇੱਕ ਬਾਰ ਗ੍ਰਾਫ਼ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ (D0) ਜਾਂ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਕਲਚਰ ਦੀ MTT ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਤਾਂ ਸਥਿਰ ਕਲਚਰ (D12 Ctrl) ਵਿੱਚ ਜਾਂ CTCM (D12 MC) ਵਿੱਚ (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ, ਇੱਕ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ANOVA ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ####p < 0.0001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ **p < 0.01 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। ਇੱਕ ਬਾਰ ਗ੍ਰਾਫ਼ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ (D0) ਜਾਂ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਕਲਚਰ ਦੀ MTT ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਤਾਂ ਸਥਿਰ ਕਲਚਰ (D12 Ctrl) ਵਿੱਚ ਜਾਂ CTCM (D12 MC) ਵਿੱਚ (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ, ਇੱਕ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ANOVA ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ####p < 0.0001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ **p < 0.01 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)।ਹਿਸਟੋਗ੍ਰਾਮ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ ਸਟੈਟਿਕ ਕਲਚਰ (D12 ਕੰਟਰੋਲ) ਜਾਂ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 ਕੰਟਰੋਲ)), 12 (D12 MC) ਭਾਗਾਂ/ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ MTT ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ (D0) ਜਾਂ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਕਲਚਰ ਦੀ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ;####p <0,0001 по сравнению с D0 ਅਤੇ **p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl)। ####d0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ p < 0.0001 ਅਤੇ **d12 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ p < 0.01 Ctrl)। a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏切)片或心脏切片培养12 天的MTT 活力的量化)，来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单启曯丕DNOVA相比，####p < 0.0001,与D12 Ctrl 相比,**p <0.01)। a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏切)片，来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；与D0 相比，###p < 0.0001，Ctrl.2.**ਹਿਸਟੋਗ੍ਰਾਮ ਜੋ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ (D0) ਜਾਂ ਸਥਿਰ ਕਲਚਰ (D12 ਨਿਯੰਤਰਣ) ਜਾਂ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 ਨਿਯੰਤਰਣ)), 12 (D12 MC) ਭਾਗਾਂ/ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ MTT ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ;####p <0,0001 по сравнению с D0, **p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl)। ####p < 0.0001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, **p < 0.01 D12 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ Ctrl)।b ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-ਟੀ (ਹਰਾ), ਕਨੈਕਸਿਨ 43 (ਲਾਲ) ਅਤੇ DAPI (ਨੀਲਾ) ਤਾਜ਼ੇ ਅਲੱਗ ਕੀਤੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ (D0) ਜਾਂ ਸਥਿਰ ਸਥਿਤੀਆਂ (Ctrl) ਜਾਂ CTCM ਸਥਿਤੀਆਂ (MC) ਦੇ ਅਧੀਨ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਕਲਚਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ) ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਇਮਯੂਨੋਫਲੋਰੇਸੈਂਸ ਚਿੱਤਰਾਂ (ਖਾਲੀ ਸਕੇਲ = 100 µm) ਦੇ। ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਦੀ ਢਾਂਚਾਗਤ ਇਕਸਾਰਤਾ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ਦੇ ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ ਹਰੇਕ ਦਾ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰ ਤੋਂ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ####p < 0.0001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ ****p < 0.0001 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਦੀ ਢਾਂਚਾਗਤ ਇਕਸਾਰਤਾ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ਦੇ ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ####p < 0.0001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ ****p < 0.0001 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। Количественная оценка структурной целостности сердечной ткани искусственным интеллектом (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5/12 MC разных свиней, проводится однофакторный тест ANOVA; ####p < 0,0001 по сравнению с D0 и ****p < 0,0001 по сравнению)। ਆਰਟੀਫੀਸ਼ੀਅਲ ਇੰਟੈਲੀਜੈਂਸ ਦੁਆਰਾ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਢਾਂਚਾਗਤ ਇਕਸਾਰਤਾ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ ਭਾਗ/ਸਮੂਹ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ; ####p < 0.0001 ਬਨਾਮ D0 ਅਤੇ ****p < 0.0001 ਦੇ ਨਾਲ D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)।人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ ਹਰੇਕ, ਇੱਕ-ਤਰਫ਼ਾ ANOVA ਟੈਸਟ।相比,****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）।人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ, ਇੱਕ ਤਰਫਾ ANOVA ਟੈਸਟ।与D0相比，****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）। Искусственный интеллект для количественной оценки структурной целостности сердечной ткани (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl/D055), каждой из разных свиней, односторонний тест ANOVA; ####p <0,0001 ਬਨਾਮ D0 Для сравнения ****p < 0,0001 по сравнению сrl12). ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਢਾਂਚਾਗਤ ਇਕਸਾਰਤਾ ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਲਈ ਨਕਲੀ ਬੁੱਧੀ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ਭਾਗ/ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ ਸਮੂਹ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ; ####p<0.0001 ਬਨਾਮ .D0 ਤੁਲਨਾ ਲਈ ****p < 0.0001 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। c ਮੈਸਨ ਦੇ ਟ੍ਰਾਈਕ੍ਰੋਮ ਸਟੈਨ (ਸਕੇਲ ਬੇਅਰ = 500 µm) ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਚਿੱਤਰ (ਖੱਬੇ) ਅਤੇ ਮਾਤਰਾ (ਸੱਜੇ) (n = ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰ ਤੋਂ 10 ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ####p < 0.0001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ ***p < 0.001 D12 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ Ctrl)। c ਮੈਸਨ ਦੇ ਟ੍ਰਾਈਕ੍ਰੋਮ ਸਟੈਨ (ਸਕੇਲ ਬੇਅਰ = 500 µm) ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਚਿੱਤਰ (ਖੱਬੇ) ਅਤੇ ਮਾਤਰਾ (ਸੱਜੇ) (n = ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ 10 ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; #### p < 0.0001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ ***p < 0.001 D12 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ Ctrl)। c Репрезентативные изображения (слева) и количественная оценка (справа) срезов сердца, окрашенных трихромным красибаслева покрытия = 500 мкм) (n = 10 срезов/группу от разных свиней, выполняется односторонний тест ANOVA; #### p < 0,000p *** D 0,000p 0,001 PO сравнению с D12 Ctrl)। c ਮੈਸਨ ਦੇ ਟ੍ਰਾਈਕ੍ਰੋਮ ਸਟੈਨ (ਬਿਨ-ਕੋਟੇਡ ਸਕੇਲ = 500 µm) ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਦਿਲ ਦੇ ਹਿੱਸਿਆਂ ਦੀਆਂ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਤਸਵੀਰਾਂ (ਖੱਬੇ) ਅਤੇ ਮਾਤਰਾ (ਸੱਜੇ) (n = ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ 10 ਭਾਗ/ਸਮੂਹ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ; #### p < 0 .0001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ ***p < 0.001 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। c 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像（左）和量化（右）（裸尺度=0¼n0m0个切片/组，每组来自不同的猪，进行单向ANOVA 测试；#### p < 0.0001 与D0 相比，***d0r1 <0.0.相比). C 用 masson 三色染料的心脏切片的代表性（左左）量化（右）裸尺度度度尸小ਹੈ 0.0001 与D0 相比,***p <0.001 与D12 Ctrl 相比）। c Репрезентативные изображения (слева) и количественный анализ (справа) срезов сердца, окрашенных трихромным (слева) 500 мкм) (n = 10 срезов/группа, каждый от другой свиньи, протестировано с помощью однофакторного однофакторного дисперсиов/группа, ###### 0,0001 PO сравнению с D0, ***p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl)। c ਮੈਸਨ ਦੇ ਟ੍ਰਾਈਕ੍ਰੋਮ ਸਟੈਨ (ਖਾਲੀ = 500 µm) ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਹੋਏ ਦਿਲ ਦੇ ਹਿੱਸਿਆਂ ਦੀਆਂ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਤਸਵੀਰਾਂ (ਖੱਬੇ) ਅਤੇ ਮਾਤਰਾ (ਸੱਜੇ) (n = 10 ਭਾਗ/ਸਮੂਹ, ਹਰੇਕ ਇੱਕ ਵੱਖਰੇ ਸੂਰ ਤੋਂ, ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਦੇ ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੁਆਰਾ ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ;### # p < 0.0001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, ***p < 0.001 D12 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ Ctrl)।ਗਲਤੀ ਬਾਰ ਔਸਤ ± ਮਿਆਰੀ ਭਟਕਣ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।
ਅਸੀਂ ਇਹ ਅਨੁਮਾਨ ਲਗਾਇਆ ਕਿ ਕਲਚਰ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਛੋਟੇ ਅਣੂਆਂ ਨੂੰ ਜੋੜ ਕੇ, ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟ ਇਕਸਾਰਤਾ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ CTCM ਕਲਚਰ ਦੌਰਾਨ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਘਟਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ ਅਸੀਂ ਆਪਣੇ ਸਥਿਰ ਨਿਯੰਤਰਣ ਕਲਚਰ 20,21 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਛੋਟੇ ਅਣੂਆਂ ਲਈ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਕੀਤੀ ਕਿਉਂਕਿ ਉਲਝਣ ਵਾਲੇ ਕਾਰਕਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਘੱਟ ਸੀ। ਇਸ ਸਕ੍ਰੀਨ ਲਈ ਡੈਕਸਾਮੇਥਾਸੋਨ (ਡੈਕਸ), ਟ੍ਰਾਈਓਡੋਥਾਈਰੋਨਾਈਨ (T3), ਅਤੇ SB431542 (SB) ਨੂੰ ਚੁਣਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਹਨਾਂ ਛੋਟੇ ਅਣੂਆਂ ਨੂੰ ਪਹਿਲਾਂ hiPSC-CM ਕਲਚਰ ਵਿੱਚ ਸਰਕੋਮੇਰ ਲੰਬਾਈ, ਟੀ-ਟਿਊਬਿਊਲ ਅਤੇ ਸੰਚਾਲਨ ਵੇਗ ਨੂੰ ਵਧਾ ਕੇ ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟਸ ਦੀ ਪਰਿਪੱਕਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, Dex (ਇੱਕ ਗਲੂਕੋਕਾਰਟੀਕੋਇਡ) ਅਤੇ SB ਦੋਵੇਂ ਸੋਜਸ਼ ਨੂੰ ਦਬਾਉਣ ਲਈ ਜਾਣੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ29,30। ਇਸ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਕਿ ਕੀ ਇਹਨਾਂ ਛੋਟੇ ਅਣੂਆਂ ਦੇ ਇੱਕ ਜਾਂ ਸੁਮੇਲ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਨ ਨਾਲ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਢਾਂਚਾਗਤ ਇਕਸਾਰਤਾ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਹੋਵੇਗਾ। ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਲਈ, ਹਰੇਕ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੀ ਖੁਰਾਕ ਸੈੱਲ ਕਲਚਰ ਮਾਡਲਾਂ (1 μM Dex27, 100 nM T327, ਅਤੇ 2.5 μM SB31) ਵਿੱਚ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੇ ਅਧਾਰ ਤੇ ਚੁਣੀ ਗਈ ਸੀ। 12 ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਕਲਚਰ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, T3 ਅਤੇ Dex ਦੇ ਸੁਮੇਲ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਅਨੁਕੂਲ ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟ ਢਾਂਚਾਗਤ ਇਕਸਾਰਤਾ ਅਤੇ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਰੇਸ਼ੇਦਾਰ ਰੀਮਾਡਲਿੰਗ ਹੋਇਆ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 4 ਅਤੇ 5)। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, T3 ਅਤੇ Dex ਦੀ ਇਹਨਾਂ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣਾਂ ਨੂੰ ਦੁੱਗਣਾ ਜਾਂ ਦੁੱਗਣਾ ਕਰਨ ਨਾਲ ਆਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਨੁਕਸਾਨਦੇਹ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪੈਦਾ ਹੋਏ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 6a,b)।
ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਅਸੀਂ 4 ਕਲਚਰ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੀ ਇੱਕ ਸਿਰ-ਤੋਂ-ਸਿਰ ਤੁਲਨਾ ਕੀਤੀ (ਚਿੱਤਰ 4a): Ctrl: ਸਾਡੇ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਮਾਧਿਅਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਸਾਡੇ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸੇ ਗਏ ਸਥਿਰ ਕਲਚਰ ਵਿੱਚ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ; 20.21 TD: T3 ਅਤੇ Ctrl ਬੁੱਧਵਾਰ ਨੂੰ Dex ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ; MC: ਸਾਡੇ ਪਹਿਲਾਂ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਮਾਧਿਅਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ CTCM ਵਿੱਚ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ; ਅਤੇ MT: T3 ਅਤੇ Dex ਦੇ ਨਾਲ CTCM ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ। 12 ਦਿਨਾਂ ਦੀ ਕਾਸ਼ਤ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, MS ਅਤੇ MT ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਦੀ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ MTT ਪਰਖ (ਚਿੱਤਰ 4b) ਦੁਆਰਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤੇ ਗਏ ਤਾਜ਼ੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਾਂਗ ਹੀ ਰਹੀ। ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ, ਟ੍ਰਾਂਸਵੈੱਲ ਕਲਚਰ (TD) ਵਿੱਚ T3 ਅਤੇ Dex ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਨਾਲ Ctrl ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਸੁਧਾਰ ਨਹੀਂ ਹੋਇਆ, ਜੋ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਵਿੱਚ ਮਕੈਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਦੀ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਇੱਕ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਚਿੱਤਰ ਜੋ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਮਾਧਿਅਮ 'ਤੇ ਮਕੈਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਅਤੇ T3/Dex ਪੂਰਕ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੀਆਂ ਜਾਂਦੀਆਂ ਚਾਰ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਸਥਿਤੀਆਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। b ਬਾਰ ਗ੍ਰਾਫ਼ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ਅਤੇ D12 MT), ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ 12 (D12 MC) ਟੁਕੜਿਆਂ/ਸਮੂਹ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਸਾਰੀਆਂ 4 ਕਲਚਰ ਸਥਿਤੀਆਂ (Ctrl, TD, MC, ਅਤੇ MT) ਵਿੱਚ ਕਲਚਰ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 12 ਦਿਨਾਂ ਦੀ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ####p < 0.0001, ###p < 0.001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ **p < 0.01 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। b ਬਾਰ ਗ੍ਰਾਫ਼ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ਅਤੇ D12 MT), ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ 12 (D12 MC) ਟੁਕੜਿਆਂ/ਸਮੂਹ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਸਾਰੀਆਂ 4 ਕਲਚਰ ਸਥਿਤੀਆਂ (Ctrl, TD, MC, ਅਤੇ MT) ਵਿੱਚ ਕਲਚਰ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 12 ਦਿਨਾਂ ਦੀ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ####p < 0.0001, ###p < 0.001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ **p < 0.01 D12 ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। b Гистограмма показывает количественную оценку жизнеспособности через 12 дней после культивирования во всех 4 усеховирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD и D12 MT), 12 (12) разных свиней, проводится односторонний тест ANOVA; ####p <0,0001, ###p <0,001 по сравнению с D0 ਅਤੇ **p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl)। b ਬਾਰ ਗ੍ਰਾਫ਼ ਸਾਰੇ 4 ਕਲਚਰ ਹਾਲਤਾਂ (ਨਿਯੰਤਰਣ, TD, MC, ਅਤੇ MT) ਵਿੱਚ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, ਅਤੇ D12 MT), 12 (D12 MC) ਭਾਗਾਂ/ਸਮੂਹ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ; ####p < 0.0001, ###p < 0.001 ਬਨਾਮ D0 ਅਤੇ **p < 0.01 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ) ਵਿੱਚ ਕਲਚਰ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 12 ਦਿਨਾਂ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। b 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片(D0) (n = 18 (D1l18 (D1rD0) TD 和D12 MT)，来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；####p <0.0001，###p <0p <0.0**,###p <0.0** 0.01 与D12控制)।ਬੀ 4 12 (ਡੀ 12 ਐਮਸੀ) b Гистограмма, показывающая все 4 условия культивирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению со свежими срезами (серзами) (10D) =10D 15 (D12 Ctrl, D12 TD и D12 MT), от разных свиней 12 (D12 MC) срезы/группа, односторонний тест ANOVA ####p <0,0001,0001, D0, **p <0,01 по сравнению (ਕੰਟਰੋਲੇਮ D12 ਨਾਲ)। b ਹਿਸਟੋਗ੍ਰਾਮ ਜੋ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ 12 (D12 MC) ਭਾਗ/ਸਮੂਹ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ ਤੋਂ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ਅਤੇ D12 MT) ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਸਾਰੀਆਂ 4 ਕਲਚਰ ਸਥਿਤੀਆਂ (ਨਿਯੰਤਰਣ, TD, MC ਅਤੇ MT) ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ; ####p<0.0001, ###p<0.001 ਬਨਾਮ D0, **p<0.01 ਬਨਾਮ ਕੰਟਰੋਲ D12)। c ਬਾਰ ਗ੍ਰਾਫ਼ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ (D0) (n = ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ 6 ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ###p < 0.001, D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ ***p < 0.001 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਸਾਰੀਆਂ 4 ਕਲਚਰ ਸਥਿਤੀਆਂ (Ctrl, TD, MC, ਅਤੇ MT) ਵਿੱਚ ਕਲਚਰ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 12 ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਗਲੂਕੋਜ਼ ਫਲਕਸ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। c ਬਾਰ ਗ੍ਰਾਫ਼ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ (D0) (n = ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ 6 ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ###p < 0.001, D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ ***p < 0.001 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਸਾਰੀਆਂ 4 ਕਲਚਰ ਸਥਿਤੀਆਂ (Ctrl, TD, MC, ਅਤੇ MT) ਵਿੱਚ ਕਲਚਰ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 12 ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਗਲੂਕੋਜ਼ ਫਲਕਸ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। c Гистограмма показывает количественную оценку потока глюкозы через 12 дней после культивирования во всех 4 усех усеховирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 6 срезов/группу от разных свиней, одонолянстой свиней, однолями ਅਨੋਵਾ; ###p <0,001 по сравнению с D0 ਅਤੇ ***p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl)। c ਹਿਸਟੋਗ੍ਰਾਮ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ (D0) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਸਾਰੀਆਂ 4 ਕਲਚਰ ਸਥਿਤੀਆਂ (ਨਿਯੰਤਰਣ, TD, MC ਅਤੇ MT) ਦੇ ਅਧੀਨ 12 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ ਗਲੂਕੋਜ਼ ਫਲਕਸ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ (n = ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ 6 ਭਾਗ/ਸਮੂਹ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ; ###p < 0.001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ ***p < 0.001 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। c 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片(D0) 相比养切片(D0)天的葡萄糖通量定量（n = 6 片/组，来自不同猪，单向执行ANOVA 测试；###p <0.001,00p <0.001，D0*毛 **与D12 Ctrl 相比）। C 条形图 显示 所有 4 种 条件 （（ctrl 、 td 、 mc 和 mt） 新鲜 心脏 切片切片戇片培养 后 12 天 的 通量 定量 （n = 6 片/组 ，来自 猪 ， ， ， ， ， ， ， 猪 猪单单吡 VA .测试；###p <0.001，与D0 相比,***p <0.001 与D12 Ctrl 相比）। c Гистограмма, показывающая количественную оценку потока глюкозы через 12 дней после культивирования для всеховирования для всественную 4 (контроль, TD, MC и MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 6 срезов/группа, от разных свиней, одроных свиней, одновесть свиней. тесты ANOVA; ###p <0,001 по сравнению с D0, ***p < 0,001 по сравнению с D12 (контроль)। c ਹਿਸਟੋਗ੍ਰਾਮ ਜੋ ਕਿ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ (D0) (n = 6 ਭਾਗ/ਸਮੂਹ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ, ਇੱਕਪਾਸੜ) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਸਾਰੀਆਂ 4 ਕਲਚਰ ਸਥਿਤੀਆਂ (ਨਿਯੰਤਰਣ, TD, MC, ਅਤੇ MT) ਲਈ 12 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ ਕਲਚਰ 'ਤੇ ਗਲੂਕੋਜ਼ ਫਲਕਸ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ANOVA ਟੈਸਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ, ###p < 0.001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, ***p < 0.001 D12 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ (ਨਿਯੰਤਰਣ)।d ਦਸ ਖੇਤਰੀ ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨ ਪੁਆਇੰਟਾਂ 'ਤੇ ਤਾਜ਼ੇ (ਨੀਲੇ), ਦਿਨ 12 MC (ਹਰੇ), ਅਤੇ ਦਿਨ 12 MT (ਲਾਲ) ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਦੇ ਸਟ੍ਰੇਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਪਲਾਟ (n = 4 ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ; ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਨਹੀਂ ਸੀ)। e ਜਵਾਲਾਮੁਖੀ ਪਲਾਟ 10-12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਸਥਿਰ ਸਥਿਤੀਆਂ (Ctrl) ਜਾਂ MT ਸਥਿਤੀਆਂ (MT) ਦੇ ਅਧੀਨ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ (D0) ਵਿੱਚ ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤੇ ਜੀਨ ਦਿਖਾ ਰਿਹਾ ਹੈ। f ਹਰੇਕ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਅਧੀਨ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਲਈ ਸਰਕੋਮੇਰ ਜੀਨਾਂ ਦਾ ਹੀਟਮੈਪ। ਗਲਤੀ ਬਾਰ ਔਸਤ ± ਮਿਆਰੀ ਭਟਕਣਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।
ਫੈਟੀ ਐਸਿਡ ਆਕਸੀਕਰਨ ਤੋਂ ਗਲਾਈਕੋਲਾਈਸਿਸ ਵਿੱਚ ਸਵਿੱਚ 'ਤੇ ਮੈਟਾਬੋਲਿਕ ਨਿਰਭਰਤਾ ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟ ਡੀਡਿਫਰੈਂਸ਼ੀਏਸ਼ਨ ਦੀ ਇੱਕ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਹੈ। ਅਪਰਿਪੱਕ ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ATP ਉਤਪਾਦਨ ਲਈ ਗਲੂਕੋਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਹਾਈਪੋਪਲਾਸਟਿਕ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਵਿੱਚ ਕੁਝ ਕ੍ਰਿਸਟੀ5,32 ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਗਲੂਕੋਜ਼ ਵਰਤੋਂ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ MC ਅਤੇ MT ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਅਧੀਨ, ਗਲੂਕੋਜ਼ ਵਰਤੋਂ ਦਿਨ 0 ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਦੇ ਸਮਾਨ ਸੀ (ਚਿੱਤਰ 4c)। ਹਾਲਾਂਕਿ, Ctrl ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੇ ਤਾਜ਼ੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਗਲੂਕੋਜ਼ ਵਰਤੋਂ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਵਾਧਾ ਦਿਖਾਇਆ। ਇਹ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ CTCM ਅਤੇ T3/Dex ਦਾ ਸੁਮੇਲ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ 12-ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਦਿਲ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਮੈਟਾਬੋਲਿਕ ਫੀਨੋਟਾਈਪ ਨੂੰ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਰੱਖਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਸਟ੍ਰੇਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ MT ਅਤੇ MS ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਅਧੀਨ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਸਟ੍ਰੇਨ ਪੱਧਰ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਸਮਾਨ ਰਹੇ (ਚਿੱਤਰ 4d)।
ਕਾਰਡੀਅਕ ਸਲਾਈਸ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਗਲੋਬਲ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਲੈਂਡਸਕੇਪ 'ਤੇ CTCM ਅਤੇ T3/Dex ਦੇ ਸਮੁੱਚੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਚਾਰੋਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਕਲਚਰ ਸਥਿਤੀਆਂ (ਪੂਰਕ ਡੇਟਾ 1) ਤੋਂ ਕਾਰਡੀਅਕ ਟੁਕੜਿਆਂ 'ਤੇ RNAseq ਕੀਤਾ। ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ, MT ਭਾਗਾਂ ਨੇ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਨਾਲ ਉੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਸਮਾਨਤਾ ਦਿਖਾਈ, 13,642 ਜੀਨਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਸਿਰਫ਼ 16 ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤੇ ਗਏ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਅਸੀਂ ਪਹਿਲਾਂ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ, Ctrl ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੇ 10-12 ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਕਲਚਰ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 1229 ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤੇ ਜੀਨ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕੀਤੇ (ਚਿੱਤਰ 4e)। ਇਹਨਾਂ ਡੇਟਾ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਦਿਲ ਅਤੇ ਫਾਈਬਰੋਬਲਾਸਟ ਜੀਨਾਂ ਦੇ qRT-PCR ਦੁਆਰਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 7a-c)। ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ Ctrl ਭਾਗਾਂ ਨੇ ਕਾਰਡੀਅਕ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਚੱਕਰ ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਡਾਊਨਰੇਗੂਲੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਸੋਜਸ਼ ਜੀਨ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮਾਂ ਦੀ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ ਦਿਖਾਈ। ਇਹ ਡੇਟਾ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਡੀਡਿਫਰੈਂਸ਼ੀਏਸ਼ਨ, ਜੋ ਕਿ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਦੇ ਕਲਚਰਿੰਗ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, MT ਸਥਿਤੀਆਂ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 8a,b) ਦੇ ਅਧੀਨ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਘੱਟ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਸਾਰਕੋਮੇਰ ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਧਿਆਨ ਨਾਲ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਸਿਰਫ਼ MT ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਹੀ ਸਾਰਕੋਮੇਰ (ਚਿੱਤਰ 4f) ਅਤੇ ਆਇਨ ਚੈਨਲ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 9) ਨੂੰ ਏਨਕੋਡ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਜੀਨ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਹਨ, ਜੋ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ Ctrl, TD, ਅਤੇ MC ਹਾਲਤਾਂ ਦੇ ਅਧੀਨ ਦਮਨ ਤੋਂ ਬਚਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਇਹ ਅੰਕੜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਮਕੈਨੀਕਲ ਅਤੇ ਹਿਊਮਰਲ ਉਤੇਜਨਾ (T3/Dex) ਦੇ ਸੁਮੇਲ ਨਾਲ, ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੋਮ 12 ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਕਲਚਰ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਸਮਾਨ ਰਹਿ ਸਕਦੇ ਹਨ।
ਇਹਨਾਂ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਖੋਜਾਂ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਇਸ ਤੱਥ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟਸ ਦੀ ਢਾਂਚਾਗਤ ਇਕਸਾਰਤਾ MT ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਢੰਗ ਨਾਲ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਰੱਖੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਬਰਕਰਾਰ ਅਤੇ ਸਥਾਨਕ ਕਨੈਕਸਿਨ 43 (ਚਿੱਤਰ 5a) ਦੁਆਰਾ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, MT ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਕਾਫ਼ੀ ਘੱਟ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਸਮਾਨ ਸੀ (ਚਿੱਤਰ 5b)। ਇਹ ਡੇਟਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਮਕੈਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਅਤੇ T3/Dex ਇਲਾਜ ਦਾ ਸੁਮੇਲ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਵਿੱਚ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ ਦਿਲ ਦੀ ਬਣਤਰ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਰੱਖਦਾ ਹੈ।
a ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-ਟੀ (ਹਰਾ), ਕਨੈਕਸਿਨ 43 (ਲਾਲ), ਅਤੇ DAPI (ਨੀਲਾ) ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਇਮਯੂਨੋਫਲੋਰੇਸੈਂਸ ਚਿੱਤਰ ਜੋ ਤਾਜ਼ੇ ਅਲੱਗ ਕੀਤੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ (D0) ਵਿੱਚ ਜਾਂ ਚਾਰਾਂ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗ ਕਲਚਰ ਸਥਿਤੀਆਂ (ਸਕੇਲ ਬਾਰ = 100 µm) ਵਿੱਚ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਕਲਚਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ। ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਦੀ ਢਾਂਚਾਗਤ ਇਕਸਾਰਤਾ (n = 7 (D0 ਅਤੇ D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ਅਤੇ D12 MT) ਦੇ ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ ਦਾ ਆਰਟੀਫੀਸ਼ੀਅਲ ਇੰਟੈਲੀਜੈਂਸ ਕੁਆਂਟੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ####p < 0.0001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ *p < 0.05, ਜਾਂ ****p < 0.0001 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਦੀ ਢਾਂਚਾਗਤ ਇਕਸਾਰਤਾ (n = 7 (D0 ਅਤੇ D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ਅਤੇ D12 MT) ਦੇ ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ ਦਾ ਆਰਟੀਫੀਸ਼ੀਅਲ ਇੰਟੈਲੀਜੈਂਸ ਕੁਆਂਟੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; #### p < 0.0001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ *p < 0.05, ਜਾਂ ****p < 0.0001 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। Количественная оценка структурной целостности ткани сердца с помощью искусственного интеллекта (n = 7 (D0 и D12 Ctrl12, DMCTD12), MT) срезов/группу от разных свиней, проведен однофакторный тест ANOVA; #### p < 0,0001 по сравнению с D0 и *p <05,***00,* сравнению с D12 Ctrl)। ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ ਆਰਟੀਫੀਸ਼ੀਅਲ ਇੰਟੈਲੀਜੈਂਸ (n = 7 (D0 ਅਤੇ D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ਅਤੇ D12 MT) ਭਾਗ/ਸਮੂਹ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਸੰਰਚਨਾਤਮਕ ਇਕਸਾਰਤਾ ਦੀ ਮਾਤਰਾ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ; #### p < 0.0001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ *p < 0.05 ਜਾਂ ****p < 0.0001 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)।对不同猪的心脏组织结构完整性（n = 7（D0 和D12 Ctrl）、5（D12 TD、D12 MC 和D12 MT）切片/组）进行人工智能量化，进行单向ANOVA 测试；#### p < 0.0001 与D0 和*p <0.0001 与D0 和*p <0.0. 0.0001 与D12 Ctrl 相比）।对 不同 猪 的 心脏 结构 完整性 （n = 7 （d0 和 d12 ctrl） （5 （d12 td 、 d12 mc）） td 、 d12 mc 廉 12 mc人工 智能量 化 进行 单向 单向 单向 测试 ； ######### p < 0.0001 与D0 和*p <0.0001 与D0 和*p <0.05 0.0001 与D12 Ctrl 相比）।ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ ਦੇ ਨਾਲ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ (n = 7 (D0 ਅਤੇ D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ਅਤੇ D12 MT) ਭਾਗਾਂ/ਸਮੂਹ) ਵਿੱਚ ਆਰਟੀਫੀਸ਼ੀਅਲ ਇੰਟੈਲੀਜੈਂਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਸੰਰਚਨਾਤਮਕ ਇਕਸਾਰਤਾ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨਾ;#### p < 0,0001 по сравнению с D0 ਅਤੇ *p < 0,05 ਜਾਂ ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl)। #### p < 0.0001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ *p < 0.05 ਜਾਂ ****p < 0.0001 D12 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ Ctrl)। b ਮੈਸਨ ਦੇ ਟ੍ਰਾਈਕ੍ਰੋਮ ਸਟੈਨ (ਸਕੇਲ ਬਾਰ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, ਅਤੇ D12 MC), ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ 9 (D12 MT) ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਚਿੱਤਰ ਅਤੇ ਮਾਤਰਾਕਰਨ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ####p < 0.0001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ ***p < 0.001, ਜਾਂ ****p < 0.0001 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। b ਮੈਸਨ ਦੇ ਟ੍ਰਾਈਕ੍ਰੋਮ ਸਟੈਨ (ਸਕੇਲ ਬਾਰ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, ਅਤੇ D12 MC), ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ 9 (D12 MT) ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਚਿੱਤਰ ਅਤੇ ਮਾਤਰਾਕਰਨ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ####p < 0.0001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਅਤੇ ***p < 0.001, ਜਾਂ ****p < 0.0001 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। b Репрезентативные изображения и количественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромным красителем Массона = красителем Массона ( мкм) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD и D12 MC), 9 (D12 MT) срезов/группу от разных свиней, выполняется односторон, выполняется односторон; по сравнению с D0 ਅਤੇ ***p < 0,001 ਜਾਂ ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl)। b ਮੈਸਨ ਦੇ ਟ੍ਰਾਈਕ੍ਰੋਮ ਸਟੈਨ (ਸਕੇਲ ਬਾਰ = 500 µm) ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਹੋਏ ਦਿਲ ਦੇ ਹਿੱਸਿਆਂ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਤਸਵੀਰਾਂ ਅਤੇ ਮਾਤਰਾਕਰਨ (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ਅਤੇ D12 MC), ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ 9 (D12 MT) ਭਾਗ/ਸਮੂਹ, ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਕੀਤਾ ਗਿਆ; ####p < 0.0001 ਬਨਾਮ D0 ਅਤੇ ***p < 0.001 ਜਾਂ ****p < 0.0001 ਬਨਾਮ D12 Ctrl)। b 用ਮੈਸਨ 三色染料染色的心脏切片的代表性图像和量化（比例尺=500 µm）（n = 10D Ctrl、D12 TD 和D12 MC），来自不同猪的9 个（D12 MT）切片/组，进行单因素方差分渞00##D0p相比，***p <0.001，或****p < 0.0001 与D12 Ctrl 相比）। b 用 ਮੈਸਨ 三 色 染料 的 心脏 切片 的 代表性 和 量化 （比例 尺 尺 尺 = 500 µm） = 0 d0m） d12 ctrl 、 d12 td 和 d12 mc） 来自 不同 的 9 个 d12 mt 切片 切片 切片 切片 切片切片切片切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片/组，进行单因素方差分析；####p <0.0001** 0.001,或****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）। b Репрезентативные изображения и количественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромом Массона (масштабная =10менка =0менка) (D0, D12 Ctrl, D12 TD и D12 MC), 9 (D12 MT) срезов от разных свиней / группы, один- способ ANOVA ####p <0,000p <повраюс *** 0,001 ਜਾਂ ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl)। b ਮੈਸਨ ਦੇ ਟ੍ਰਾਈਕ੍ਰੋਮ (ਸਕੇਲ ਬਾਰ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ਅਤੇ D12 MC), ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ/ਸਮੂਹ ਤੋਂ 9 (D12 MT) ਭਾਗਾਂ, ਇੱਕ ANOVA ਵਿਧੀ; ####p < 0.0001 D0 ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, ***p < 0.001 ਜਾਂ ****p < 0.0001 D12 Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ) ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਤਸਵੀਰਾਂ ਅਤੇ ਮਾਤਰਾਕਰਨ।ਗਲਤੀ ਬਾਰ ਔਸਤ ± ਮਿਆਰੀ ਭਟਕਣ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।
ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਕਾਰਡੀਅਕ ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫੀ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਨ ਲਈ CTCM ਦੀ ਯੋਗਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਾਰਡੀਅਕ ਟਿਸ਼ੂ ਸਟ੍ਰੈਚ ਨੂੰ ਵਧਾ ਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। CTCM ਵਿੱਚ, ਪੀਕ ਏਅਰ ਚੈਂਬਰ ਪ੍ਰੈਸ਼ਰ 80 mmHg ਤੋਂ 80 mmHg ਤੱਕ ਵਧਿਆ। ਆਰਟ. (ਆਮ ਸਟ੍ਰੈਚ) 140 mmHg ਤੱਕ ਆਰਟ. (ਚਿੱਤਰ 6a)। ਇਹ ਸਟ੍ਰੈਚ (ਚਿੱਤਰ 6b) ਵਿੱਚ 32% ਵਾਧੇ ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦਾ ਹੈ, ਜਿਸਨੂੰ ਪਹਿਲਾਂ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਲਈ ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫੀ ਵਿੱਚ ਦੇਖੇ ਗਏ ਸਮਾਨ ਸਾਰਕੋਮੇਰ ਲੰਬਾਈ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਸਟ੍ਰੈਚ ਵਜੋਂ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਸੰਕੁਚਨ ਅਤੇ ਆਰਾਮ ਦੌਰਾਨ ਕਾਰਡੀਅਕ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਸਟ੍ਰੈਚ ਅਤੇ ਵੇਗ ਛੇ ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਕਲਚਰ (ਚਿੱਤਰ 6c) ਦੌਰਾਨ ਸਥਿਰ ਰਿਹਾ। MT ਸਥਿਤੀਆਂ ਤੋਂ ਕਾਰਡੀਅਕ ਟਿਸ਼ੂ ਨੂੰ ਛੇ ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਆਮ ਸਟ੍ਰੈਚ (MT (ਆਮ)) ਜਾਂ ਓਵਰਸਟ੍ਰੈਚ ਸਥਿਤੀਆਂ (MT (OS)) ਦੇ ਅਧੀਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਪਹਿਲਾਂ ਹੀ ਚਾਰ ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਕਲਚਰ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫਿਕ ਬਾਇਓਮਾਰਕਰ NT-ProBNP ਨੂੰ MT (ਆਮ) ਸਥਿਤੀਆਂ (ਚਿੱਤਰ 7a) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ MT (OS) ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਅਧੀਨ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਉੱਚਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਛੇ ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਕਲਚਰਿੰਗ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, MT (OS) (ਚਿੱਤਰ 7b) ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਦਾ ਆਕਾਰ MT ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ (ਆਮ) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਕਾਫ਼ੀ ਵਧ ਗਿਆ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, NFATC4 ਨਿਊਕਲੀਅਰ ਟ੍ਰਾਂਸਲੋਕੇਸ਼ਨ ਓਵਰਸਟ੍ਰੈਚਡ ਟਿਸ਼ੂਆਂ (ਚਿੱਤਰ 7c) ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਵਧਿਆ ਸੀ। ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਹਾਈਪਰਡਿਸਟੈਂਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਪੈਥੋਲੋਜੀਕਲ ਰੀਮਾਡਲਿੰਗ ਦੇ ਪ੍ਰਗਤੀਸ਼ੀਲ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਇਸ ਧਾਰਨਾ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕਰਦੇ ਹਨ ਕਿ CTCM ਡਿਵਾਈਸ ਨੂੰ ਸਟ੍ਰੈਚ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਾਰਡੀਅਕ ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫੀ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਪਲੇਟਫਾਰਮ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਹਵਾ ਚੈਂਬਰ ਦੇ ਦਬਾਅ, ਤਰਲ ਚੈਂਬਰ ਦੇ ਦਬਾਅ, ਅਤੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਗਤੀ ਮਾਪ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਨਿਸ਼ਾਨ ਇਸ ਗੱਲ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਚੈਂਬਰ ਦਾ ਦਬਾਅ ਤਰਲ ਚੈਂਬਰ ਦੇ ਦਬਾਅ ਨੂੰ ਬਦਲਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਦੀ ਅਨੁਸਾਰੀ ਗਤੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। b ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਖਿੱਚੇ ਹੋਏ (ਸੰਤਰੀ) ਅਤੇ ਓਵਰਸਟ੍ਰੈਚਡ (ਨੀਲੇ) ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਖਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤਤਾ ਅਤੇ ਖਿੱਚ ਦਰ ਵਕਰ। c ਚੱਕਰ ਸਮਾਂ (n = 19 ਟੁਕੜੇ ਪ੍ਰਤੀ ਸਮੂਹ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ), ਸੁੰਗੜਨ ਦਾ ਸਮਾਂ (n = 18-19 ਟੁਕੜੇ ਪ੍ਰਤੀ ਸਮੂਹ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ), ਆਰਾਮ ਸਮਾਂ (n = 19 ਟੁਕੜੇ ਪ੍ਰਤੀ ਸਮੂਹ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ) ), ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਗਤੀ ਦਾ ਐਪਲੀਟਿਊਡ (n = 14 ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ), ਪੀਕ ਸਿਸਟੋਲਿਕ ਵੇਗ (n = 14 ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ) ਅਤੇ ਪੀਕ ਆਰਾਮ ਦਰ (n = 14 (D0), 15 (D6) ) ਭਾਗ/ਸਮੂਹ) ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ), ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੇ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਨੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਪੈਰਾਮੀਟਰ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਨਹੀਂ ਦਿਖਾਇਆ, ਇਹ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਇਹ ਮਾਪਦੰਡ ਓਵਰਵੋਲਟੇਜ ਦੇ ਨਾਲ 6 ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਦੌਰਾਨ ਸਥਿਰ ਰਹੇ। ਗਲਤੀ ਬਾਰ ਔਸਤ ± ਮਿਆਰੀ ਭਟਕਣਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।
ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ MT ਆਮ ਸਟ੍ਰੈਚ (Norm) ਜਾਂ ਓਵਰਸਟ੍ਰੈਚਿੰਗ (OS) ਸਥਿਤੀਆਂ (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, ਅਤੇ D4 MTOS) ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ/ਸਮੂਹ ਦੇ ਅਧੀਨ ਕਲਚਰ ਕੀਤੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਤੋਂ ਕਲਚਰ ਮੀਡੀਆ ਵਿੱਚ NT-ProBNP ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦਾ ਬਾਰ ਗ੍ਰਾਫ ਕੁਆਂਟੀਫਿਕੇਸ਼ਨ, ਦੋ-ਪੱਖੀ ANOVA ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; **p < 0.01 ਆਮ ਸਟ੍ਰੈਚ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ MT ਆਮ ਸਟ੍ਰੈਚ (Norm) ਜਾਂ ਓਵਰਸਟ੍ਰੈਚਿੰਗ (OS) ਸਥਿਤੀਆਂ (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, ਅਤੇ D4 MTOS) ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ/ਸਮੂਹ ਦੇ ਅਧੀਨ ਕਲਚਰ ਕੀਤੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਤੋਂ ਕਲਚਰ ਮੀਡੀਆ ਵਿੱਚ NT-ProBNP ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦਾ ਬਾਰ ਗ੍ਰਾਫ ਮਾਤਰਾਕਰਨ, ਦੋ-ਪੱਖੀ ANOVA ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; **p < 0.01 ਆਮ ਸਟ੍ਰੈਚ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)।ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ ਆਮ MT ਸਟ੍ਰੈਚ (ਆਦਰਸ਼) ਜਾਂ ਓਵਰਸਟ੍ਰੈਚ (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, ਅਤੇ D4).MTOS) ਟੁਕੜਿਆਂ/ਸਮੂਹ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਅਧੀਨ ਕਲਚਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਤੋਂ ਕਲਚਰ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ NT-ProBNP ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦਾ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਹਿਸਟੋਗ੍ਰਾਮ, ਪਰਿਵਰਤਨ ਦਾ ਦੋ-ਕਾਰਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ;**p < 0,01 по сравнению с нормальным растяжением)। **p < 0.01 ਆਮ ਖਿੱਚ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। a 在MT 正常拉伸(Norm) 或过度拉伸(OS) 条件下培养的心脏切片培养基中NT-ProBNP 浓度離坡離4 (D2 MTNorm) 、3（D2 MTOS、D4 MTNorm 和D4 MTOS）来自不同猪的切片/组，进行双向方差分析；**与正常拉伸相比,p < 0.01)। ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਵਿੱਚ NT-ProBNP ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੀ ਮਾਤਰਾ MT ਆਮ ਸਟ੍ਰੈਚ (ਨਾਰਮ) ਜਾਂ ਓਵਰਸਟਰੈਚ (OS) ਸਥਿਤੀਆਂ (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm和D4 MTOS) ਦੇ ਅਧੀਨ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ।猪的切片/组，可以双向方方发发动;ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ ਆਮ MT ਸਟ੍ਰੈਚ (ਆਦਰਸ਼) ਜਾਂ ਓਵਰਸਟ੍ਰੈਚ (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm) ਅਤੇ D4 MTOS) ਟੁਕੜਿਆਂ/ਸਮੂਹ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਅਧੀਨ ਕਲਚਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਵਿੱਚ NT-ProBNP ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੀ ਮਾਤਰਾ, ਪਰਿਵਰਤਨ ਦਾ ਦੋ-ਪੱਖੀ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ;**p < 0,01 по сравнению с нормальным растяжением)। **p < 0.01 ਆਮ ਖਿੱਚ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। b ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਚਿੱਤਰ ਜੋ ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-ਟੀ ਅਤੇ WGA (ਖੱਬੇ) ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਹੋਏ ਹਨ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਆਕਾਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (ਸੱਜੇ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ਸੈੱਲ/ਸਮੂਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ 10 ਵੱਖ-ਵੱਖ ਟੁਕੜਿਆਂ ਤੋਂ, ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲਾ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ****p < 0.0001 ਆਮ ਖਿੱਚ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। b ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਚਿੱਤਰ ਜੋ ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-ਟੀ ਅਤੇ WGA (ਖੱਬੇ) ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਹੋਏ ਹਨ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਆਕਾਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (ਸੱਜੇ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ਸੈੱਲ/ਸਮੂਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ 10 ਵੱਖ-ਵੱਖ ਟੁਕੜਿਆਂ ਤੋਂ, ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; ****p < 0.0001 ਆਮ ਖਿੱਚ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। b Репрезентативные изображения срезов сердца, окрашенных тропонином-Т и АЗП (слева) и количественного определения (расления) 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) клеток/группу из 10 разных срезов от разных свиней, два- проводится хвостовой t-*дится хвостовой;*** 0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b ਦਿਲ ਦੇ ਹਿੱਸਿਆਂ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਚਿੱਤਰ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-ਟੀ ਅਤੇ AZP (ਖੱਬੇ) ਨਾਲ ਰੰਗਿਆ ਗਿਆ ਹੈ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਆਕਾਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (ਸੱਜੇ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ਸੈੱਲ/ਸਮੂਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ 10 ਵੱਖ-ਵੱਖ ਭਾਗਾਂ ਤੋਂ, ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦਾ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ; ****p < 0.0001 ਆਮ ਸਟ੍ਰੇਨ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। b 用肌钙蛋白-T 和WGA（左）和细胞大小量化（右）染色的心脏切片的心脏切片的代表性图n=3） MTOS），来自不同猪的10 个不同切片的369（D6 MTNorm）细胞/组，两进行有尾学生t检验；与正常拉伸相比,****p <0.0001）। b ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਚਿੱਤਰ ਜੋ ਕੈਲਕੇਰੀਨ-ਟੀ ਅਤੇ ਡਬਲਯੂਜੀਏ (ਖੱਬੇ) ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਆਕਾਰ (ਸੱਜੇ) ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਹੋਏ ਹਨ (n = 330 (D6 MTOS), 10 ਵੱਖ-ਵੱਖ ਟੁਕੜਿਆਂ ਤੋਂ 369 (D6 MTNorm)) ਸੈੱਲ/ਸਿਰਲੇਖ, ਆਮ ਖਿੱਚਣ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, ****p < 0.0001)। b Репрезентативные изображения срезов сердца, окрашенных тропонином-Т и АЗП (слева) и количественная оценка размева (36) MTOS), 369 (D6 MTNorm) из 10 различных срезов от разных свиней Клетки/группа, двусторонние критерий Стьюдента, ***0*p00p нормальным (ਰੈਸਟਿਆਜਨੀਅਮ)। b ਦਿਲ ਦੇ ਹਿੱਸਿਆਂ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਚਿੱਤਰ ਜੋ ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-ਟੀ ਅਤੇ AZP (ਖੱਬੇ) ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਹੋਏ ਹਨ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਦੇ ਆਕਾਰ (ਸੱਜੇ) ਦੀ ਮਾਤਰਾ (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਦੇ 10 ਵੱਖ-ਵੱਖ ਹਿੱਸਿਆਂ ਤੋਂ) ਸੈੱਲ/ਸਮੂਹ, ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲਾ ਮਾਪਦੰਡ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦਾ t; ****p < 0.0001 ਆਮ ਸਟ੍ਰੇਨ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ)। c ਦਿਨ 0 ਅਤੇ ਦਿਨ 6 MTOS ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਚਿੱਤਰ ਜੋ ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-T ਅਤੇ NFATC4 ਲਈ ਇਮਯੂਨੋਲੇਬਲ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ ਅਤੇ NFATC4 ਦੇ CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ/ਸਮੂਹ ਦੇ ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਲੋਕੇਸ਼ਨ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ, ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲਾ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; *p < 0.05)। c ਦਿਨ 0 ਅਤੇ ਦਿਨ 6 MTOS ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਚਿੱਤਰ ਜੋ ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-T ਅਤੇ NFATC4 ਲਈ ਇਮਯੂਨੋਲੇਬਲ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ ਅਤੇ NFATC4 ਦੇ CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ/ਸਮੂਹ ਦੇ ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਲੋਕੇਸ਼ਨ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ, ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲਾ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ; *p < 0.05)। c Репрезентативные изображения для срезов сердца 0 и 6 дней MTOS, иммуномеченых для тропонина-Т и NFATC4, и конолиначена. транслокации NFATC4 в ядра кавернозных клеток (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ਸਟੂਡੈਂਟਾ; *ਪੀ <0,05)। c 0 ਅਤੇ 6 ਦਿਨਾਂ ਦੇ MTOS 'ਤੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਚਿੱਤਰ, ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-T ਅਤੇ NFATC4 ਲਈ ਇਮਯੂਨੋਲੇਬਲ ਕੀਤੇ ਗਏ, ਅਤੇ ਕੈਵਰਨਸ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਵਿੱਚ NFATC4 ਟ੍ਰਾਂਸਲੋਕੇਸ਼ਨ ਦੀ ਮਾਤਰਾ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ ਤੋਂ) ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦਾ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ; *p < 0.05)। c 用于肌钙蛋白-T 和NFATC4 免疫标记的第0 天和第6 天MTOS心脏切片的代表性图像，以及来自不同猪的NFATC4 易位至CM 细胞核的量化（n = 4 (D0) , 3 (D0)进行双尾学生t 检验；*p <0.05)। c ਵੱਖ-ਵੱਖ NFATC4 易位至CM ਸੈੱਲ ਨਿਊਕਲੀਅਸ 的 ਮਾਤਰਾ 化 (n = 4 (D0) 化 (n = 4 (D0) 化 (n = 4 (D0) 化 (n = 4 (D0)) 第0天和第6天MTOS ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜੇ, ਅਤੇ NFATC4 ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਚਿੱਤਰ时间双尾学生et 电影；*p <0.05)। c Репрезентативные изображения срезов сердца MTOS на 0 и 6 день для иммуномаркировки тропонином-Т и NFATC4 и конличецевкастет. транслокации NFATC4 в ядра CM от разных свиней (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срез/группа, два- хвостатый t-критерий Сть;0pюдей. c ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੂਰਾਂ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ਦੇ ਟੁਕੜੇ/ਸਮੂਹ, ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਟੀ-ਮਾਪਦੰਡ ਵਿਦਿਆਰਥੀਆਂ ਦੇ; *p < 0.05) ਤੋਂ CM ਦੇ ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-T ਅਤੇ NFATC4 ਇਮਯੂਨੋਲੇਬਲਿੰਗ ਅਤੇ NFATC4 ਟ੍ਰਾਂਸਲੋਕੇਸ਼ਨ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਲਈ ਦਿਨ 0 ਅਤੇ 6 'ਤੇ MTOS ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀਆਂ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਤਸਵੀਰਾਂ।ਗਲਤੀ ਬਾਰ ਔਸਤ ± ਮਿਆਰੀ ਭਟਕਣ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।
ਟ੍ਰਾਂਸਲੇਸ਼ਨਲ ਕਾਰਡੀਓਵੈਸਕੁਲਰ ਖੋਜ ਲਈ ਸੈਲੂਲਰ ਮਾਡਲਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਜੋ ਦਿਲ ਦੇ ਵਾਤਾਵਰਣ ਨੂੰ ਸਹੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਪ੍ਰਜਨਨ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਇੱਕ CTCM ਯੰਤਰ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਇਸਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਜੋ ਦਿਲ ਦੇ ਅਲਟਰਾਥਿਨ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। CTCM ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਸਰੀਰਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਮਕਾਲੀ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਮੈਕਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਅਤੇ T3 ਅਤੇ Dex ਤਰਲ ਸੰਸ਼ੋਧਨ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ। ਜਦੋਂ ਸੂਰ ਦੇ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਇਹਨਾਂ ਕਾਰਕਾਂ ਦੇ ਸੰਪਰਕ ਵਿੱਚ ਲਿਆਂਦਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਤਾਂ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ, ਢਾਂਚਾਗਤ ਅਖੰਡਤਾ, ਪਾਚਕ ਗਤੀਵਿਧੀ, ਅਤੇ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਪ੍ਰਗਟਾਵਾ 12 ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਵਾਂਗ ਹੀ ਰਿਹਾ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਖਿੱਚ ਹਾਈਪਰਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਕਾਰਨ ਦਿਲ ਦੀ ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫੀ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦੀ ਹੈ। ਕੁੱਲ ਮਿਲਾ ਕੇ, ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਇੱਕ ਆਮ ਦਿਲ ਦੇ ਫੀਨੋਟਾਈਪ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਵਿੱਚ ਸਰੀਰਕ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੀ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਡਰੱਗ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਲਈ ਇੱਕ ਪਲੇਟਫਾਰਮ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੇ ਹਨ।
ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟਸ ਦੇ ਕੰਮਕਾਜ ਅਤੇ ਬਚਾਅ ਲਈ ਇੱਕ ਅਨੁਕੂਲ ਵਾਤਾਵਰਣ ਬਣਾਉਣ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਕਾਰਕ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਇਹਨਾਂ ਕਾਰਕਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਸਭ ਤੋਂ ਸਪੱਸ਼ਟ ਕਾਰਕ (1) ਇੰਟਰਸੈਲੂਲਰ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ, (2) ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਮੈਕਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ, (3) ਹਿਊਮਰਲ ਕਾਰਕ, ਅਤੇ (4) ਮੈਟਾਬੋਲਿਕ ਸਬਸਟਰੇਟਸ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਹਨ। ਸਰੀਰਕ ਸੈੱਲ-ਤੋਂ-ਸੈੱਲ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਲਈ ਇੱਕ ਐਕਸਟਰਸੈਲੂਲਰ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ ਦੁਆਰਾ ਸਮਰਥਤ ਕਈ ਸੈੱਲ ਕਿਸਮਾਂ ਦੇ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਤਿੰਨ-ਅਯਾਮੀ ਨੈਟਵਰਕ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਅਜਿਹੇ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਸੈਲੂਲਰ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਵਿਅਕਤੀਗਤ ਸੈੱਲ ਕਿਸਮਾਂ ਦੇ ਸਹਿ-ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਦੁਆਰਾ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਵਿੱਚ ਪੁਨਰਗਠਨ ਕਰਨਾ ਮੁਸ਼ਕਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਪਰ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੀ ਆਰਗੈਨੋਟਾਈਪਿਕ ਪ੍ਰਕਿਰਤੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟਸ ਦਾ ਮਕੈਨੀਕਲ ਸਟ੍ਰੈਚ ਅਤੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੀਕਲ ਸਟ੍ਰੈਚਿਊਮ ਕਾਰਡੀਓਕ ਫੀਨੋਟਾਈਪ 33,34,35 ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹਨ। ਜਦੋਂ ਕਿ ਮਕੈਨੀਕਲ ਸਟ੍ਰੈਚਿਊਮ ਨੂੰ hiPSC-CM ਕੰਡੀਸ਼ਨਿੰਗ ਅਤੇ ਪਰਿਪੱਕਤਾ ਲਈ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਕਈ ਸ਼ਾਨਦਾਰ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ ਯੂਨੀਐਕਸੀਅਲ ਲੋਡਿੰਗ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕਲਚਰ ਵਿੱਚ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਮਕੈਨੀਕਲ ਸਟ੍ਰੈਚਿਊਮ ਦੀ ਕੋਸ਼ਿਸ਼ ਕੀਤੀ ਹੈ। ਇਹ ਅਧਿਐਨ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ 2D ਯੂਨੀਐਕਸੀਅਲ ਮਕੈਨੀਕਲ ਲੋਡਿੰਗ ਦਾ ਕਲਚਰ ਦੌਰਾਨ ਦਿਲ ਦੇ ਫੀਨੋਟਾਈਪ 'ਤੇ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪੈਂਦਾ ਹੈ। ਇਹਨਾਂ ਅਧਿਐਨਾਂ ਵਿੱਚ, ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਜਾਂ ਤਾਂ ਆਈਸੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਟੈਂਸਿਲ ਫੋਰਸ 17, ਲੀਨੀਅਰ ਆਕਸੋਟੋਨਿਕ ਲੋਡਿੰਗ 18 ਨਾਲ ਲੋਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਾਂ ਫੋਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਡਿਊਸਰ ਫੀਡਬੈਕ ਅਤੇ ਟੈਂਸ਼ਨ ਡਰਾਈਵਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕਾਰਡੀਓਕ ਚੱਕਰ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਹ ਢੰਗ ਵਾਤਾਵਰਣ ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਯੂਨੀਐਕਸੀਅਲ ਟਿਸ਼ੂ ਸਟ੍ਰੈਚ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਕਾਰਡੀਓਕ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਦਬਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਅਸਧਾਰਨ ਸਟ੍ਰੈਚ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਜੀਨਾਂ ਦਾ ਓਵਰਐਕਸਪ੍ਰੈਸ਼ਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਇੱਥੇ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ CTCM ਇੱਕ 3D ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਮੈਕਨੀਕਲ ਸਟ੍ਰੈਚਿਊਮ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਚੱਕਰ ਸਮੇਂ ਅਤੇ ਸਰੀਰਕ ਸਟ੍ਰੈਚ (25% ਸਟ੍ਰੈਚ, 40% ਸਿਸਟੋਲ, 60% ਡਾਇਸਟੋਲ, ਅਤੇ 72 ਬੀਟਸ ਪ੍ਰਤੀ ਮਿੰਟ) ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਕੁਦਰਤੀ ਕਾਰਡੀਓਕ ਚੱਕਰ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ ਇਹ ਤਿੰਨ-ਅਯਾਮੀ ਮਕੈਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਇਕੱਲੀ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਇਕਸਾਰਤਾ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਲਈ ਕਾਫ਼ੀ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ, ਕਾਰਜਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਇਕਸਾਰਤਾ ਨੂੰ ਢੁਕਵੇਂ ਢੰਗ ਨਾਲ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਲਈ T3/Dex ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਹਿਊਮਰਲ ਅਤੇ ਮਕੈਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ ਦੇ ਸੁਮੇਲ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
ਬਾਲਗ ਦਿਲ ਦੇ ਫੀਨੋਟਾਈਪ ਨੂੰ ਸੰਚਾਲਿਤ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਹਾਸੋਹੀਣੇ ਕਾਰਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਇਸ ਨੂੰ HiPS-CM ਅਧਿਐਨਾਂ ਵਿੱਚ ਉਜਾਗਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਪਰਿਪੱਕਤਾ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ ਕਰਨ ਲਈ T3 ਅਤੇ Dex ਨੂੰ ਕਲਚਰ ਮੀਡੀਆ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। T3 ਸੈੱਲ ਝਿੱਲੀ ਵਿੱਚ ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ, ਸ਼ੱਕਰ ਅਤੇ ਕੈਲਸ਼ੀਅਮ ਦੀ ਆਵਾਜਾਈ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ36। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, T3 MHC-α ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਅਤੇ MHC-β ਡਾਊਨਰੇਗੂਲੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਭਰੂਣ CM ਵਿੱਚ ਹੌਲੀ ਟਵਿੱਚ ਮਾਇਓਫਿਬਰਿਲਾਂ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਪਰਿਪੱਕ ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟਸ ਵਿੱਚ ਤੇਜ਼ ਟਵਿੱਚ ਮਾਇਓਫਿਬਰਿਲਾਂ ਦੇ ਗਠਨ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਹਾਈਪੋਥਾਈਰੋਇਡ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ T3 ਦੀ ਘਾਟ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਮਾਇਓਫਿਬਰਿਲਰ ਬੈਂਡਾਂ ਦਾ ਨੁਕਸਾਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਟੋਨ ਵਿਕਾਸ ਦੀ ਦਰ ਘੱਟ ਜਾਂਦੀ ਹੈ37। Dex ਗਲੂਕੋਕਾਰਟੀਕੋਇਡ ਰੀਸੈਪਟਰਾਂ 'ਤੇ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਅਲੱਗ-ਥਲੱਗ ਪਰਫਿਊਜ਼ਡ ਦਿਲਾਂ ਵਿੱਚ ਮਾਇਓਕਾਰਡੀਅਲ ਸੰਕੁਚਨਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ; 38 ਇਸ ਸੁਧਾਰ ਨੂੰ ਕੈਲਸ਼ੀਅਮ ਡਿਪਾਜ਼ਿਟ-ਚਾਲਿਤ ਐਂਟਰੀ (SOCE) 39,40 'ਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਮੰਨਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, Dex ਆਪਣੇ ਰੀਸੈਪਟਰਾਂ ਨਾਲ ਜੁੜਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਇੱਕ ਵਿਆਪਕ ਇੰਟਰਾਸੈਲੂਲਰ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਜੋ ਇਮਿਊਨ ਫੰਕਸ਼ਨ ਅਤੇ ਸੋਜਸ਼30 ਨੂੰ ਦਬਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਸਾਡੇ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਭੌਤਿਕ ਮਕੈਨੀਕਲ ਉਤੇਜਨਾ (MS) ਨੇ Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਸਮੁੱਚੇ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਕੀਤਾ, ਪਰ ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਵਿੱਚ 12 ਦਿਨਾਂ ਤੱਕ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ, ਢਾਂਚਾਗਤ ਇਕਸਾਰਤਾ ਅਤੇ ਦਿਲ ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਵਿੱਚ ਅਸਫਲ ਰਿਹਾ। Ctrl ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, CTCM (MT) ਸੱਭਿਆਚਾਰਾਂ ਵਿੱਚ T3 ਅਤੇ Dex ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਨਾਲ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਹੋਇਆ ਅਤੇ 12 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਤਾਜ਼ੇ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਨਾਲ ਸਮਾਨ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲਾਂ, ਢਾਂਚਾਗਤ ਇਕਸਾਰਤਾ ਅਤੇ ਪਾਚਕ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਟਿਸ਼ੂ ਸਟ੍ਰੈਚ ਦੀ ਡਿਗਰੀ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰਕੇ, STCM ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਇੱਕ ਹਾਈਪਰਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਾਰਡੀਅਕ ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫੀ ਮਾਡਲ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਜੋ STCM ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੀ ਬਹੁਪੱਖੀਤਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਨੋਟ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਕਿ ਹਾਲਾਂਕਿ ਕਾਰਡੀਅਕ ਰੀਮਾਡਲਿੰਗ ਅਤੇ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਵਿੱਚ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਬਰਕਰਾਰ ਅੰਗ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਦੇ ਸੰਚਾਰ ਸੈੱਲ ਢੁਕਵੇਂ ਸਾਈਟੋਕਾਈਨ ਦੇ ਨਾਲ-ਨਾਲ ਫੈਗੋਸਾਈਟੋਸਿਸ ਅਤੇ ਹੋਰ ਰੀਮਾਡਲਿੰਗ ਕਾਰਕ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗ ਅਜੇ ਵੀ ਤਣਾਅ ਅਤੇ ਸਦਮੇ ਦੇ ਜਵਾਬ ਵਿੱਚ ਫਾਈਬਰੋਟਿਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ। ਮਾਇਓਫਾਈਬਰੋਬਲਾਸਟਸ ਵਿੱਚ। ਇਸਦਾ ਪਹਿਲਾਂ ਇਸ ਕਾਰਡੀਅਕ ਸਲਾਈਸ ਮਾਡਲ ਵਿੱਚ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਇਹ ਨੋਟ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਕਿ CTCM ਪੈਰਾਮੀਟਰਾਂ ਨੂੰ ਦਬਾਅ/ਇਲੈਕਟ੍ਰੀਕਲ ਐਪਲੀਟਿਊਡ ਅਤੇ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ ਨੂੰ ਬਦਲ ਕੇ ਟੈਚੀਕਾਰਡੀਆ, ਬ੍ਰੈਡੀਕਾਰਡੀਆ, ਅਤੇ ਮਕੈਨੀਕਲ ਸੰਚਾਰ ਸਹਾਇਤਾ (ਮਕੈਨੀਕਲ ਅਨਲੋਡਡ ਦਿਲ) ਵਰਗੀਆਂ ਕਈ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਨ ਲਈ ਮੋਡਿਊਲੇਟ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਸਿਸਟਮ ਨੂੰ ਡਰੱਗ ਟੈਸਟਿੰਗ ਲਈ ਇੱਕ ਮੱਧਮ ਥਰੂਪੁੱਟ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਸੀਟੀਸੀਐਮ ਦੀ ਓਵਰਐਕਸਰਸ਼ਨ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਾਰਡੀਅਕ ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫੀ ਨੂੰ ਮਾਡਲ ਕਰਨ ਦੀ ਯੋਗਤਾ ਇਸ ਸਿਸਟਮ ਨੂੰ ਵਿਅਕਤੀਗਤ ਥੈਰੇਪੀ ਲਈ ਟੈਸਟ ਕਰਨ ਦਾ ਰਾਹ ਪੱਧਰਾ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਸਿੱਟੇ ਵਜੋਂ, ਮੌਜੂਦਾ ਅਧਿਐਨ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਮਕੈਨੀਕਲ ਸਟ੍ਰੈਚ ਅਤੇ ਹਿਊਮਰਲ ਉਤੇਜਨਾ ਕਾਰਡੀਅਕ ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨਾਂ ਦੇ ਕਲਚਰ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹਨ।
ਹਾਲਾਂਕਿ ਇੱਥੇ ਪੇਸ਼ ਕੀਤੇ ਗਏ ਡੇਟਾ ਤੋਂ ਪਤਾ ਚੱਲਦਾ ਹੈ ਕਿ CTCM ਅਟੁੱਟ ਮਾਇਓਕਾਰਡੀਅਮ ਮਾਡਲਿੰਗ ਲਈ ਇੱਕ ਬਹੁਤ ਹੀ ਵਾਅਦਾ ਕਰਨ ਵਾਲਾ ਪਲੇਟਫਾਰਮ ਹੈ, ਇਸ ਕਲਚਰ ਵਿਧੀ ਦੀਆਂ ਕੁਝ ਸੀਮਾਵਾਂ ਹਨ। CTCM ਕਲਚਰ ਦੀ ਮੁੱਖ ਸੀਮਾ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਇਹ ਟੁਕੜਿਆਂ 'ਤੇ ਨਿਰੰਤਰ ਗਤੀਸ਼ੀਲ ਮਕੈਨੀਕਲ ਤਣਾਅ ਲਗਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਹਰੇਕ ਚੱਕਰ ਦੌਰਾਨ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਦੇ ਸੁੰਗੜਨ ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ ਨਾਲ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕਰਨ ਦੀ ਯੋਗਤਾ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਛੋਟੇ ਆਕਾਰ (7 ਮਿਲੀਮੀਟਰ) ਦੇ ਕਾਰਨ, ਪਰੰਪਰਾਗਤ ਫੋਰਸ ਸੈਂਸਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਕਲਚਰ ਸਿਸਟਮਾਂ ਤੋਂ ਬਾਹਰ ਸਿਸਟੋਲਿਕ ਫੰਕਸ਼ਨ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਦੀ ਯੋਗਤਾ ਸੀਮਤ ਹੈ। ਮੌਜੂਦਾ ਹੱਥ-ਲਿਖਤ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਸੰਕੁਚਨ ਫੰਕਸ਼ਨ ਦੇ ਸੂਚਕ ਵਜੋਂ ਆਪਟੀਕਲ ਵੋਲਟੇਜ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਕੇ ਇਸ ਸੀਮਾ ਨੂੰ ਅੰਸ਼ਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਦੂਰ ਕਰਦੇ ਹਾਂ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਸ ਸੀਮਾ ਲਈ ਹੋਰ ਕੰਮ ਦੀ ਲੋੜ ਹੋਵੇਗੀ ਅਤੇ ਭਵਿੱਖ ਵਿੱਚ ਕਲਚਰ ਵਿੱਚ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਫੰਕਸ਼ਨ ਦੀ ਆਪਟੀਕਲ ਨਿਗਰਾਨੀ ਲਈ ਤਰੀਕਿਆਂ ਨੂੰ ਪੇਸ਼ ਕਰਕੇ ਇਸਨੂੰ ਸੰਬੋਧਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਕੈਲਸ਼ੀਅਮ ਅਤੇ ਵੋਲਟੇਜ-ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਰੰਗਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਆਪਟੀਕਲ ਮੈਪਿੰਗ। CTCM ਦੀ ਇੱਕ ਹੋਰ ਸੀਮਾ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਕਾਰਜਸ਼ੀਲ ਮਾਡਲ ਸਰੀਰਕ ਤਣਾਅ (ਪ੍ਰੀਲੋਡ ਅਤੇ ਆਫਟਰਲੋਡ) ਵਿੱਚ ਹੇਰਾਫੇਰੀ ਨਹੀਂ ਕਰਦਾ ਹੈ। CTCM ਵਿੱਚ, ਬਹੁਤ ਵੱਡੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਡਾਇਸਟੋਲ (ਪੂਰਾ ਖਿੱਚ) ਅਤੇ ਸਿਸਟੋਲ (ਬਿਜਲੀ ਉਤੇਜਨਾ ਦੌਰਾਨ ਸੰਕੁਚਨ ਦੀ ਲੰਬਾਈ) ਵਿੱਚ 25% ਸਰੀਰਕ ਖਿੱਚ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਉਲਟ ਦਿਸ਼ਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਦਬਾਅ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਭਵਿੱਖ ਦੇ CTCM ਡਿਜ਼ਾਈਨਾਂ ਵਿੱਚ ਇਸ ਸੀਮਾ ਨੂੰ ਦੋਵਾਂ ਪਾਸਿਆਂ ਤੋਂ ਦਿਲ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ 'ਤੇ ਢੁਕਵਾਂ ਦਬਾਅ ਪਾ ਕੇ ਅਤੇ ਦਿਲ ਦੇ ਚੈਂਬਰਾਂ ਵਿੱਚ ਹੋਣ ਵਾਲੇ ਸਹੀ ਦਬਾਅ-ਆਵਾਜ਼ ਸਬੰਧਾਂ ਨੂੰ ਲਾਗੂ ਕਰਕੇ ਦੂਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।
ਇਸ ਹੱਥ-ਲਿਖਤ ਵਿੱਚ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਗਈ ਓਵਰਸਟ੍ਰੈਚ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਰੀਮਾਡਲਿੰਗ ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫਿਕ ਹਾਈਪਰਸਟ੍ਰੈਚ ਸਿਗਨਲਾਂ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਨ ਤੱਕ ਸੀਮਿਤ ਹੈ। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਇਹ ਮਾਡਲ ਹਿਊਮਰਲ ਜਾਂ ਨਿਊਰਲ ਕਾਰਕਾਂ (ਜੋ ਕਿ ਇਸ ਸਿਸਟਮ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਨਹੀਂ ਹਨ) ਦੀ ਲੋੜ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਟ੍ਰੈਚ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਹਾਈਪਰਟ੍ਰੋਫਿਕ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਦੇ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। CTCM ਦੀ ਬਹੁਲਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਹੋਰ ਅਧਿਐਨਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ, ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਇਮਿਊਨ ਸੈੱਲਾਂ ਨਾਲ ਸਹਿ-ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ, ਸਰਕੂਲੇਟਿੰਗ ਪਲਾਜ਼ਮਾ ਹਿਊਮਰਲ ਕਾਰਕ, ਅਤੇ ਨਿਊਰੋਨਲ ਸੈੱਲਾਂ ਨਾਲ ਸਹਿ-ਸੰਸਕ੍ਰਿਤੀ ਕਰਨ 'ਤੇ ਇਨਰਵੇਸ਼ਨ CTCM ਨਾਲ ਬਿਮਾਰੀ ਮਾਡਲਿੰਗ ਦੀਆਂ ਸੰਭਾਵਨਾਵਾਂ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾਏਗਾ।
ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਤੇਰਾਂ ਸੂਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ। ਸਾਰੀਆਂ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੀਆਂ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਸੰਸਥਾਗਤ ਦਿਸ਼ਾ-ਨਿਰਦੇਸ਼ਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ ਅਤੇ ਲੂਈਸਵਿਲ ਯੂਨੀਵਰਸਿਟੀ ਦੀ ਸੰਸਥਾਗਤ ਜਾਨਵਰ ਦੇਖਭਾਲ ਅਤੇ ਵਰਤੋਂ ਕਮੇਟੀ ਦੁਆਰਾ ਮਨਜ਼ੂਰ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ। ਏਓਰਟਿਕ ਆਰਚ ਨੂੰ ਕਲੈਂਪ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਦਿਲ ਨੂੰ 1 ਲੀਟਰ ਸਟਰਾਈਲ ਕਾਰਡੀਓਪਲੇਜੀਆ (110 mM NaCl, 1.2 mM CaCl2, 16 mM KCl, 16 mM MgCl2, 10 mM NaHCO3, 5 U/mL ਹੈਪਰੀਨ, pH 7.4 ਤੱਕ) ਨਾਲ ਪਰਫਿਊਜ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ; ਦਿਲਾਂ ਨੂੰ ਬਰਫ਼-ਠੰਡੇ ਕਾਰਡੀਓਪਲੇਜਿਕ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਉਦੋਂ ਤੱਕ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਵਿੱਚ ਨਹੀਂ ਲਿਜਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਸੀ ਜੋ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ <10 ਮਿੰਟ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਦਿਲਾਂ ਨੂੰ ਬਰਫ਼-ਠੰਡੇ ਕਾਰਡੀਓਪਲੇਜਿਕ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਉਦੋਂ ਤੱਕ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਵਿੱਚ ਨਹੀਂ ਲਿਜਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਸੀ ਜੋ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ <10 ਮਿੰਟ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। сердца хранили в ледяном кардиоплегическом растворе до транспортировки в лабораторию на льду, что обычно занимает <10 мин. ਦਿਲਾਂ ਨੂੰ ਬਰਫ਼-ਠੰਡੇ ਕਾਰਡੀਓਪਲੇਜਿਕ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਉਦੋਂ ਤੱਕ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਸੀ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਕਿ ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਵਿੱਚ ਨਹੀਂ ਲਿਜਾਇਆ ਜਾਂਦਾ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ <10 ਮਿੰਟ ਲੱਗਦੇ ਹਨ।将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室,通常<10分钟.将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室,通常<10分钟. Держите сердца в ледяной кардиоплегии до транспортировки в лабораторию на льду, обычно <10 мин. ਦਿਲਾਂ ਨੂੰ ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਵਿੱਚ ਲਿਜਾਣ ਤੱਕ ਬਰਫ਼ ਦੇ ਕਾਰਡੀਓਪਲੇਜੀਆ 'ਤੇ ਰੱਖੋ, ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ <10 ਮਿੰਟ।
CTCM ਡਿਵਾਈਸ ਨੂੰ ਸਾਲਿਡਵਰਕਸ ਕੰਪਿਊਟਰ-ਏਡਿਡ ਡਿਜ਼ਾਈਨ (CAD) ਸਾਫਟਵੇਅਰ ਵਿੱਚ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਕਲਚਰ ਚੈਂਬਰ, ਡਿਵਾਈਡਰ ਅਤੇ ਏਅਰ ਚੈਂਬਰ CNC ਕਲੀਅਰ ਐਕ੍ਰੀਲਿਕ ਪਲਾਸਟਿਕ ਦੇ ਬਣੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। 7mm ਵਿਆਸ ਵਾਲਾ ਬੈਕ-ਅੱਪ ਰਿੰਗ ਕੇਂਦਰ ਵਿੱਚ ਉੱਚ ਘਣਤਾ ਵਾਲਾ ਪੋਲੀਥੀਲੀਨ (HDPE) ਤੋਂ ਬਣਿਆ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸ ਵਿੱਚ ਮੀਡੀਆ ਨੂੰ ਸੀਲ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਸਿਲੀਕੋਨ ਓ-ਰਿੰਗ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਓ-ਰਿੰਗ ਗਰੂਵ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਇੱਕ ਪਤਲੀ ਸਿਲਿਕਾ ਝਿੱਲੀ ਕਲਚਰ ਚੈਂਬਰ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰਨ ਵਾਲੀ ਪਲੇਟ ਤੋਂ ਵੱਖ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਸਿਲੀਕੋਨ ਝਿੱਲੀ 0.02″ ਮੋਟੀ ਸਿਲੀਕੋਨ ਸ਼ੀਟ ਤੋਂ ਲੇਜ਼ਰ ਕੱਟੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸਦੀ ਕਠੋਰਤਾ 35A ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਹੇਠਾਂ ਅਤੇ ਉੱਪਰਲੇ ਸਿਲੀਕੋਨ ਗੈਸਕੇਟ 1/16″ ਮੋਟੀ ਸਿਲੀਕੋਨ ਸ਼ੀਟ ਤੋਂ ਲੇਜ਼ਰ ਕੱਟੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਇਸਦੀ ਕਠੋਰਤਾ 50A ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਬਲਾਕ ਨੂੰ ਬੰਨ੍ਹਣ ਅਤੇ ਏਅਰਟਾਈਟ ਸੀਲ ਬਣਾਉਣ ਲਈ 316L ਸਟੇਨਲੈਸ ਸਟੀਲ ਦੇ ਪੇਚ ਅਤੇ ਵਿੰਗ ਨਟ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।
ਇੱਕ ਸਮਰਪਿਤ ਪ੍ਰਿੰਟਿਡ ਸਰਕਟ ਬੋਰਡ (PCB) ਨੂੰ C-PACE-EM ਸਿਸਟਮ ਨਾਲ ਜੋੜਨ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। PCB 'ਤੇ ਸਵਿਸ ਮਸ਼ੀਨ ਕਨੈਕਟਰ ਸਾਕਟ ਸਿਲਵਰ-ਪਲੇਟੇਡ ਤਾਂਬੇ ਦੀਆਂ ਤਾਰਾਂ ਅਤੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡਾਂ ਵਿੱਚ ਕਾਂਸੀ ਦੇ 0-60 ਪੇਚਾਂ ਦੁਆਰਾ ਗ੍ਰੇਫਾਈਟ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡਾਂ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਹਨ। ਪ੍ਰਿੰਟਿਡ ਸਰਕਟ ਬੋਰਡ ਨੂੰ 3D ਪ੍ਰਿੰਟਰ ਦੇ ਕਵਰ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਹੈ।
CTCM ਯੰਤਰ ਨੂੰ ਇੱਕ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮੇਬਲ ਨਿਊਮੈਟਿਕ ਐਕਚੁਏਟਰ (PPD) ਦੁਆਰਾ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜੋ ਇੱਕ ਕਾਰਡੀਅਕ ਚੱਕਰ ਦੇ ਸਮਾਨ ਇੱਕ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਸੰਚਾਰ ਦਬਾਅ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਜਿਵੇਂ-ਜਿਵੇਂ ਹਵਾ ਚੈਂਬਰ ਦੇ ਅੰਦਰ ਦਬਾਅ ਵਧਦਾ ਹੈ, ਲਚਕਦਾਰ ਸਿਲੀਕੋਨ ਝਿੱਲੀ ਉੱਪਰ ਵੱਲ ਫੈਲਦੀ ਹੈ, ਟਿਸ਼ੂ ਸਾਈਟ ਦੇ ਹੇਠਾਂ ਮਾਧਿਅਮ ਨੂੰ ਮਜਬੂਰ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਫਿਰ ਟਿਸ਼ੂ ਦਾ ਖੇਤਰ ਤਰਲ ਦੇ ਇਸ ਨਿਕਾਸ ਦੁਆਰਾ ਖਿੱਚਿਆ ਜਾਵੇਗਾ, ਜੋ ਡਾਇਸਟੋਲ ਦੌਰਾਨ ਦਿਲ ਦੇ ਸਰੀਰਕ ਵਿਸਥਾਰ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਆਰਾਮ ਦੇ ਸਿਖਰ 'ਤੇ, ਗ੍ਰਾਫਾਈਟ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡ ਦੁਆਰਾ ਬਿਜਲੀ ਉਤੇਜਨਾ ਲਾਗੂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਹਵਾ ਚੈਂਬਰ ਵਿੱਚ ਦਬਾਅ ਘੱਟ ਗਿਆ ਅਤੇ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਦਾ ਸੁੰਗੜਨ ਹੋਇਆ। ਪਾਈਪ ਦੇ ਅੰਦਰ ਇੱਕ ਹੀਮੋਸਟੈਟਿਕ ਵਾਲਵ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਹਵਾ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵਿੱਚ ਦਬਾਅ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਇੱਕ ਦਬਾਅ ਸੈਂਸਰ ਹੈ। ਦਬਾਅ ਸੈਂਸਰ ਦੁਆਰਾ ਮਹਿਸੂਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਦਬਾਅ ਲੈਪਟਾਪ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਇੱਕ ਡੇਟਾ ਕੁਲੈਕਟਰ 'ਤੇ ਲਾਗੂ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਗੈਸ ਚੈਂਬਰ ਦੇ ਅੰਦਰ ਦਬਾਅ ਦੀ ਨਿਰੰਤਰ ਨਿਗਰਾਨੀ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ। ਜਦੋਂ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਚੈਂਬਰ ਦਬਾਅ (ਮਿਆਰੀ 80 mmHg, 140 mmHg OS) ਤੱਕ ਪਹੁੰਚ ਗਿਆ, ਤਾਂ ਡੇਟਾ ਪ੍ਰਾਪਤੀ ਯੰਤਰ ਨੂੰ 2 ms ਲਈ ਇੱਕ ਬਾਈਫਾਸਿਕ ਵੋਲਟੇਜ ਸਿਗਨਲ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ C-PACE-EM ਸਿਸਟਮ ਨੂੰ ਇੱਕ ਸਿਗਨਲ ਭੇਜਣ ਦਾ ਆਦੇਸ਼ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜੋ ਕਿ 4 V 'ਤੇ ਸੈੱਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਅਤੇ 6 ਖੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਕਲਚਰ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ: ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਵੇਸਲ ਤੋਂ ਕੱਟੇ ਹੋਏ ਦਿਲਾਂ ਨੂੰ ਠੰਡੇ (4° C.) ਕਾਰਡੀਓਪਲੇਜੀਆ ਵਾਲੀ ਟ੍ਰੇ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰੋ। ਖੱਬੇ ਵੈਂਟ੍ਰਿਕਲ ਨੂੰ ਇੱਕ ਨਿਰਜੀਵ ਬਲੇਡ ਨਾਲ ਅਲੱਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ 1-2 cm3 ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਵਿੱਚ ਕੱਟਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਹਨਾਂ ਟਿਸ਼ੂ ਬਲਾਕਾਂ ਨੂੰ ਟਿਸ਼ੂ ਐਡਸਿਵ ਨਾਲ ਟਿਸ਼ੂ ਸਪੋਰਟ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਟਾਇਰੋਡ ਦੇ ਘੋਲ ਵਾਲੇ ਇੱਕ ਵਾਈਬ੍ਰੇਟਿੰਗ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟੋਮ ਟਿਸ਼ੂ ਬਾਥ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਲਗਾਤਾਰ ਆਕਸੀਜਨ (3 g/L 2,3-ਬਿਊਟੇਨੇਡੀਓਨ ਮੋਨੋਆਕਸਾਈਮ (BDM), 140 mM NaCl (8.18 g) . ), 6 mM KCl (0.447 g), 10 mM D-ਗਲੂਕੋਜ਼ (1.86 g), 10 mM HEPES (2.38 g), 1 mM MgCl2 (1 ml 1 M ਘੋਲ), 1.8 mM CaCl2 (1.8 ml 1 M ਘੋਲ), 1 L ddH2O ਤੱਕ। ਵਾਈਬ੍ਰੇਟਿੰਗ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟੋਮ ਨੂੰ 80 Hz ਦੀ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ, 2 mm ਦੀ ਖਿਤਿਜੀ ਵਾਈਬ੍ਰੇਸ਼ਨ ਐਪਲੀਟਿਊਡ, ਅਤੇ 0.03 mm/s ਦੀ ਐਡਵਾਂਸ ਰੇਟ 'ਤੇ 300 µm ਮੋਟੇ ਟੁਕੜੇ ਕੱਟਣ ਲਈ ਸੈੱਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਘੋਲ ਨੂੰ ਠੰਡਾ ਰੱਖਣ ਲਈ ਟਿਸ਼ੂ ਬਾਥ ਨੂੰ ਬਰਫ਼ ਨਾਲ ਘਿਰਿਆ ਹੋਇਆ ਸੀ ਅਤੇ ਤਾਪਮਾਨ 4°C 'ਤੇ ਬਣਾਈ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਮਾਈਕ੍ਰੋਟੋਮ ਬਾਥ ਤੋਂ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਇਨਕਿਊਬੇਸ਼ਨ ਬਾਥ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰੋ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਲਗਾਤਾਰ ਆਕਸੀਜਨ ਵਾਲੇ ਟਾਇਰੋਡ ਘੋਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਇੱਕ ਕਲਚਰ ਪਲੇਟ ਲਈ ਕਾਫ਼ੀ ਭਾਗ ਪ੍ਰਾਪਤ ਨਹੀਂ ਹੋ ਜਾਂਦੇ। ਟ੍ਰਾਂਸਵੈੱਲ ਕਲਚਰ ਲਈ, ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਨਿਰਜੀਵ 6 mm ਚੌੜੇ ਪੌਲੀਯੂਰੀਥੇਨ ਸਪੋਰਟ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ 6 ml ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਮਾਧਿਅਮ (199 ਮਾਧਿਅਮ, 1x ITS ਪੂਰਕ, 10% FBS, 5 ng/ml VEGF, 10 ng/ml FGF-ਅਲਕਲਾਈਨ ਅਤੇ 2X ਐਂਟੀਬਾਇਓਟਿਕ-ਐਂਟੀਫੰਗਲ) ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। C-Pace ਰਾਹੀਂ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ 'ਤੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੀਕਲ ਸਟੀਮੂਲੇਸ਼ਨ (10 V, ਫ੍ਰੀਕੁਐਂਸੀ 1.2 Hz) ਲਾਗੂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਟੀਡੀ ਸਥਿਤੀਆਂ ਲਈ, ਹਰੇਕ ਮਾਧਿਅਮ ਤਬਦੀਲੀ 'ਤੇ 100 nM ਅਤੇ 1 μM 'ਤੇ ਤਾਜ਼ਾ T3 ਅਤੇ Dex ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਦਿਨ ਵਿੱਚ 3 ਵਾਰ ਬਦਲਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਮਾਧਿਅਮ ਨੂੰ ਆਕਸੀਜਨ ਨਾਲ ਸੰਤ੍ਰਿਪਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਇਨਕਿਊਬੇਟਰ ਵਿੱਚ 37°C ਅਤੇ 5% CO2 'ਤੇ ਕਲਚਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
CTCM ਕਲਚਰ ਲਈ, ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਕਸਟਮ-ਮੇਡ 3D ਪ੍ਰਿੰਟਰ 'ਤੇ ਇੱਕ ਪੈਟਰੀ ਡਿਸ਼ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਸੋਧਿਆ ਹੋਇਆ ਟਾਇਰੋਡ ਦਾ ਘੋਲ ਸੀ। ਇਹ ਡਿਵਾਈਸ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਦੇ ਆਕਾਰ ਨੂੰ ਸਪੋਰਟ ਰਿੰਗ ਦੇ ਖੇਤਰ ਦੇ 25% ਤੱਕ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ। ਇਹ ਇਸ ਲਈ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਟਾਇਰੋਡ ਦੇ ਘੋਲ ਤੋਂ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਅਤੇ ਡਾਇਸਟੋਲ ਦੌਰਾਨ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗ ਨਾ ਖਿੱਚਣ। ਹਿਸਟੋਐਕ੍ਰਿਲਿਕ ਗੂੰਦ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, 300 µm ਮੋਟੇ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ 7 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਵਿਆਸ ਵਾਲੀ ਸਪੋਰਟ ਰਿੰਗ 'ਤੇ ਫਿਕਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨਾਂ ਨੂੰ ਸਪੋਰਟ ਰਿੰਗ ਨਾਲ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਵਾਧੂ ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨਾਂ ਨੂੰ ਕੱਟ ਦਿਓ ਅਤੇ ਜੁੜੇ ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨਾਂ ਨੂੰ ਬਰਫ਼ (4°C) 'ਤੇ ਟਾਇਰੋਡ ਘੋਲ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਵਿੱਚ ਵਾਪਸ ਰੱਖੋ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਇੱਕ ਡਿਵਾਈਸ ਲਈ ਕਾਫ਼ੀ ਭਾਗ ਤਿਆਰ ਨਹੀਂ ਹੋ ਜਾਂਦੇ। ਸਾਰੇ ਡਿਵਾਈਸਾਂ ਲਈ ਕੁੱਲ ਪ੍ਰੋਸੈਸਿੰਗ ਸਮਾਂ 2 ਘੰਟਿਆਂ ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਹੀਂ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ। 6 ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨਾਂ ਨੂੰ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਸਪੋਰਟ ਰਿੰਗਾਂ ਨਾਲ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, CTCM ਡਿਵਾਈਸ ਨੂੰ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। CTCM ਕਲਚਰ ਚੈਂਬਰ 21 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਪ੍ਰੀ-ਆਕਸੀਜਨੇਟਿਡ ਮਾਧਿਅਮ ਨਾਲ ਪਹਿਲਾਂ ਤੋਂ ਭਰਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ। ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨਾਂ ਨੂੰ ਕਲਚਰ ਚੈਂਬਰ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰੋ ਅਤੇ ਪਾਈਪੇਟ ਨਾਲ ਕਿਸੇ ਵੀ ਹਵਾ ਦੇ ਬੁਲਬੁਲੇ ਨੂੰ ਧਿਆਨ ਨਾਲ ਹਟਾਓ। ਫਿਰ ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨ ਨੂੰ ਛੇਕ ਵਿੱਚ ਭੇਜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਜਗ੍ਹਾ 'ਤੇ ਦਬਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਡਿਵਾਈਸ 'ਤੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡ ਕੈਪ ਰੱਖੋ ਅਤੇ ਡਿਵਾਈਸ ਨੂੰ ਇਨਕਿਊਬੇਟਰ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰੋ। ਫਿਰ CTCM ਨੂੰ ਏਅਰ ਟਿਊਬ ਅਤੇ C-PACE-EM ਸਿਸਟਮ ਨਾਲ ਜੋੜੋ। ਨਿਊਮੈਟਿਕ ਐਕਚੁਏਟਰ ਖੁੱਲ੍ਹਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਏਅਰ ਵਾਲਵ CTCM ਖੋਲ੍ਹਦਾ ਹੈ। C-PACE-EM ਸਿਸਟਮ ਨੂੰ 2 ms ਲਈ ਬਾਇਫਾਸਿਕ ਪੇਸਿੰਗ ਦੌਰਾਨ 1.2 Hz 'ਤੇ 4 V ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਨ ਲਈ ਕੌਂਫਿਗਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਮਾਧਿਅਮ ਨੂੰ ਦਿਨ ਵਿੱਚ ਦੋ ਵਾਰ ਬਦਲਿਆ ਜਾਂਦਾ ਸੀ ਅਤੇ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡਾਂ 'ਤੇ ਗ੍ਰੇਫਾਈਟ ਦੇ ਇਕੱਠੇ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਡਾਂ ਨੂੰ ਦਿਨ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਵਾਰ ਬਦਲਿਆ ਜਾਂਦਾ ਸੀ। ਜੇ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੋਵੇ, ਤਾਂ ਟਿਸ਼ੂ ਸੈਕਸ਼ਨਾਂ ਨੂੰ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਕਲਚਰ ਵੈੱਲਾਂ ਤੋਂ ਹਟਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਹੇਠਾਂ ਡਿੱਗੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਹਵਾ ਦੇ ਬੁਲਬੁਲੇ ਨੂੰ ਬਾਹਰ ਕੱਢਿਆ ਜਾ ਸਕੇ। MT ਇਲਾਜ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਲਈ, T3/Dex ਨੂੰ 100 nM T3 ਅਤੇ 1 μM Dex ਦੇ ਨਾਲ ਹਰੇਕ ਮਾਧਿਅਮ ਬਦਲਾਅ ਦੇ ਨਾਲ ਤਾਜ਼ਾ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। CTCM ਡਿਵਾਈਸਾਂ ਨੂੰ 37°C ਅਤੇ 5% CO2 'ਤੇ ਇੱਕ ਇਨਕਿਊਬੇਟਰ ਵਿੱਚ ਕਲਚਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਖਿੱਚੇ ਹੋਏ ਟ੍ਰੈਜੈਕਟਰੀਆਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ, ਇੱਕ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਕੈਮਰਾ ਸਿਸਟਮ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇੱਕ SLR ਕੈਮਰਾ (ਕੈਨਨ ਰੈਬਲ T7i, ਕੈਨਨ, ਟੋਕੀਓ, ਜਾਪਾਨ) ਨੂੰ Navitar Zoom 7000 18-108mm ਮੈਕਰੋ ਲੈਂਸ (Navitar, San Francisco, CA) ਨਾਲ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਮਾਧਿਅਮ ਨੂੰ ਤਾਜ਼ੇ ਮਾਧਿਅਮ ਨਾਲ ਬਦਲਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਵਿਜ਼ੂਅਲਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਕੈਮਰਾ 51° ਕੋਣ 'ਤੇ ਸਥਿਤ ਹੈ ਅਤੇ ਵੀਡੀਓ 30 ਫਰੇਮ ਪ੍ਰਤੀ ਸਕਿੰਟ 'ਤੇ ਰਿਕਾਰਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਪਹਿਲਾਂ, ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਗਤੀ ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਲਈ ਇਮੇਜ-J ਨਾਲ ਓਪਨ ਸੋਰਸ ਸੌਫਟਵੇਅਰ (MUSCLEMOTION43) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਮਾਸਕ ਨੂੰ MATLAB (MathWorks, Natick, MA, USA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ ਤਾਂ ਜੋ ਸ਼ੋਰ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਧੜਕਣ ਲਈ ਦਿਲਚਸਪੀ ਵਾਲੇ ਖੇਤਰਾਂ ਨੂੰ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕੇ। ਹੱਥੀਂ ਖੰਡਿਤ ਮਾਸਕ ਇੱਕ ਫਰੇਮ ਕ੍ਰਮ ਵਿੱਚ ਸਾਰੀਆਂ ਤਸਵੀਰਾਂ 'ਤੇ ਲਾਗੂ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਫਿਰ MUSCLEMOTION ਪਲੱਗ-ਇਨ ਨੂੰ ਪਾਸ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਮਾਸਪੇਸ਼ੀ ਗਤੀ ਸੰਦਰਭ ਫਰੇਮ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਇਸਦੀ ਗਤੀ ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਲਈ ਹਰੇਕ ਫਰੇਮ ਵਿੱਚ ਪਿਕਸਲ ਦੀ ਔਸਤ ਤੀਬਰਤਾ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੀ ਹੈ। ਡੇਟਾ ਨੂੰ ਰਿਕਾਰਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਫਿਲਟਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਕਾਰਡੀਅਕ ਚੱਕਰ ਦੌਰਾਨ ਚੱਕਰ ਸਮੇਂ ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਅਤੇ ਟਿਸ਼ੂ ਖਿੱਚ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ। ਰਿਕਾਰਡ ਕੀਤੇ ਵੀਡੀਓ ਨੂੰ ਪਹਿਲੇ-ਕ੍ਰਮ ਦੇ ਜ਼ੀਰੋ-ਫੇਜ਼ ਡਿਜੀਟਲ ਫਿਲਟਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪੋਸਟ-ਪ੍ਰੋਸੈਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਟਿਸ਼ੂ ਸਟ੍ਰੈਚ (ਪੀਕ-ਟੂ-ਪੀਕ) ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ, ਰਿਕਾਰਡ ਕੀਤੇ ਸਿਗਨਲ ਵਿੱਚ ਪੀਕ ਅਤੇ ਟ੍ਰੌਫ ਵਿਚਕਾਰ ਫਰਕ ਕਰਨ ਲਈ ਪੀਕ-ਟੂ-ਪੀਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਸਿਗਨਲ ਡ੍ਰਿਫਟ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰਨ ਲਈ 6ਵੇਂ ਆਰਡਰ ਪੋਲੀਨੌਮੀਅਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਡੀਟ੍ਰੇਂਡਿੰਗ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਗਲੋਬਲ ਟਿਸ਼ੂ ਗਤੀ, ਚੱਕਰ ਸਮਾਂ, ਆਰਾਮ ਸਮਾਂ, ਅਤੇ ਸੰਕੁਚਨ ਸਮਾਂ (ਸਪਲੀਮੈਂਟਰੀ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਕੋਡ 44) ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ MATLAB ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਕੋਡ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਸਟ੍ਰੇਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ, ਮਕੈਨੀਕਲ ਸਟ੍ਰੈਚ ਅਸੈਸਮੈਂਟ ਲਈ ਬਣਾਏ ਗਏ ਉਹੀ ਵੀਡੀਓਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਅਸੀਂ ਪਹਿਲਾਂ MUSCLEMOTION ਸੌਫਟਵੇਅਰ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਗਤੀ ਸਿਖਰਾਂ (ਸਭ ਤੋਂ ਉੱਚੇ (ਉੱਪਰਲੇ) ਅਤੇ ਸਭ ਤੋਂ ਹੇਠਲੇ (ਹੇਠਲੇ) ਬਿੰਦੂਆਂ) ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਦੋ ਚਿੱਤਰਾਂ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਇਆ। ਫਿਰ ਅਸੀਂ ਟਿਸ਼ੂ ਖੇਤਰਾਂ ਨੂੰ ਵੰਡਿਆ ਅਤੇ ਖੰਡਿਤ ਟਿਸ਼ੂ 'ਤੇ ਸ਼ੇਡਿੰਗ ਐਲਗੋਰਿਦਮ ਦਾ ਇੱਕ ਰੂਪ ਲਾਗੂ ਕੀਤਾ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 2a)। ਫਿਰ ਖੰਡਿਤ ਟਿਸ਼ੂ ਨੂੰ ਦਸ ਉਪ-ਸਤਹਾਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਗਿਆ, ਅਤੇ ਹਰੇਕ ਸਤਹ 'ਤੇ ਤਣਾਅ ਦੀ ਗਣਨਾ ਹੇਠ ਦਿੱਤੇ ਸਮੀਕਰਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤੀ ਗਈ: ਸਟ੍ਰੇਨ = (ਸੁਪ-ਐਸਡਾਊਨ)/ਐਸਡਾਊਨ, ਜਿੱਥੇ ਸੁਪ ਅਤੇ ਐਸਡਾਊਨ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਫੈਬਰਿਕ ਦੇ ਉੱਪਰ ਅਤੇ ਹੇਠਲੇ ਪਰਛਾਵੇਂ ਤੋਂ ਆਕਾਰ ਦੀਆਂ ਦੂਰੀਆਂ ਹਨ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ .2b)।
ਦਿਲ ਦੇ ਹਿੱਸਿਆਂ ਨੂੰ 48 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 4% ਪੈਰਾਫਾਰਮਲਡੀਹਾਈਡ ਵਿੱਚ ਫਿਕਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸਥਿਰ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਨੂੰ 1 ਘੰਟੇ ਲਈ 10% ਅਤੇ 20% ਸੁਕਰੋਜ਼ ਵਿੱਚ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਫਿਰ ਰਾਤ ਭਰ 30% ਸੁਕਰੋਜ਼ ਵਿੱਚ। ਫਿਰ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਕੱਟਣ ਵਾਲੇ ਤਾਪਮਾਨ ਮਿਸ਼ਰਣ (OCT ਮਿਸ਼ਰਣ) ਵਿੱਚ ਏਮਬੈਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਹੌਲੀ ਹੌਲੀ ਇੱਕ ਆਈਸੋਪੈਂਟੇਨ/ਸੁੱਕੇ ਬਰਫ਼ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਵਿੱਚ ਫ੍ਰੀਜ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। OCT ਏਮਬੈਡਿੰਗ ਬਲਾਕਾਂ ਨੂੰ ਵੱਖ ਹੋਣ ਤੱਕ -80 °C 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕਰੋ। ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ 8 μm ਦੀ ਮੋਟਾਈ ਵਾਲੇ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਦਿਲ ਦੇ ਹਿੱਸਿਆਂ ਤੋਂ OCT ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ, ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਹੀਟਿੰਗ ਬਲਾਕ 'ਤੇ 95 °C 'ਤੇ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ ਗਰਮ ਕਰੋ। ਹਰੇਕ ਸਲਾਈਡ ਵਿੱਚ 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ PBS ਪਾਓ ਅਤੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 30 ਮਿੰਟ ਲਈ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕਰੋ, ਫਿਰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 15 ਮਿੰਟ ਲਈ PBS ਵਿੱਚ 0.1% ਟ੍ਰਾਈਟਨ-X ਸੈੱਟ ਕਰਕੇ ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਵੇਸ਼ ਕਰੋ। ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਨੂੰ ਨਮੂਨੇ ਨਾਲ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਰੋਕਣ ਲਈ, ਸਲਾਈਡਾਂ ਵਿੱਚ 3% BSA ਘੋਲ ਦਾ 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਪਾਓ ਅਤੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 1 ਘੰਟੇ ਲਈ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕਰੋ। ਫਿਰ BSA ਨੂੰ ਹਟਾ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ PBS ਨਾਲ ਧੋਤਾ ਗਿਆ। ਹਰੇਕ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਪੈਨਸਿਲ ਨਾਲ ਨਿਸ਼ਾਨ ਲਗਾਓ। ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ (1% BSA ਵਿੱਚ 1:200 ਪਤਲਾ) (ਕਨੈਕਸਿਨ 43 (Abcam; #AB11370), NFATC4 (Abcam; #AB99431) ਅਤੇ ਟ੍ਰੋਪੋਨਿਨ-ਟੀ (ਥਰਮੋ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ; #MA5-12960) ਨੂੰ 90 ਮਿੰਟਾਂ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ, ਫਿਰ ਸੈਕੰਡਰੀ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ (1% BSA ਵਿੱਚ 1:200 ਪਤਲਾ) ਮਾਊਸ ਅਲੈਕਸਾ ਫਲੋਰ 488 (ਥਰਮੋ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ; #A16079), ਖਰਗੋਸ਼ ਅਲੈਕਸਾ ਫਲੋਰ 594 (ਥਰਮੋ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ; #T6391) ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਵਾਧੂ 90 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ PBS ਨਾਲ 3 ਵਾਰ ਧੋਤਾ ਗਿਆ। ਟਾਰਗੇਟ ਸਟੈਨਿੰਗ ਨੂੰ ਬੈਕਗ੍ਰਾਉਂਡ ਤੋਂ ਵੱਖ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਸਿਰਫ ਸੈਕੰਡਰੀ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ। ਅੰਤ ਵਿੱਚ, DAPI ਨਿਊਕਲੀਅਰ ਸਟੈਨ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਅਤੇ ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਵੈਕਟਾਸ਼ੀਲਡ (ਵੈਕਟਰ ਲੈਬਾਰਟਰੀਜ਼) ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਅਤੇ ਨੇਲ ਪਾਲਿਸ਼ ਨਾਲ ਸੀਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। -x ਵੱਡਦਰਸ਼ੀ) ਅਤੇ ਕੀਏਂਸ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ 40x ਵੱਡਦਰਸ਼ੀ ਨਾਲ।
WGA-Alexa Fluor 555 (ਥਰਮੋ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ; #W32464) ਨੂੰ PBS ਵਿੱਚ 5 μg/ml 'ਤੇ WGA ਸਟੇਨਿੰਗ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਸਥਿਰ ਭਾਗਾਂ 'ਤੇ ਲਾਗੂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਫਿਰ ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ PBS ਨਾਲ ਧੋਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਹਰੇਕ ਸਲਾਈਡ ਵਿੱਚ ਸੁਡਾਨ ਬਲੈਕ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਅਤੇ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਫਿਰ ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ PBS ਨਾਲ ਧੋਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਵੈਕਟਾਸ਼ੀਲਡ ਏਮਬੈਡਿੰਗ ਮਾਧਿਅਮ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ। ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਕੀਨਸ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ 'ਤੇ 40x ਵਿਸਤਾਰ 'ਤੇ ਵਿਜ਼ੂਅਲਾਈਜ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।
ਉੱਪਰ ਦੱਸੇ ਅਨੁਸਾਰ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚੋਂ OCT ਹਟਾ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। OCT ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਰਾਤ ਭਰ ਬੋਇਨ ਦੇ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਡੁਬੋ ਦਿਓ। ਫਿਰ ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ 1 ਘੰਟੇ ਲਈ ਡਿਸਟਿਲਡ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਧੋਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਫਿਰ 10 ਮਿੰਟ ਲਈ ਬਿਬ੍ਰਿਕ ਐਲੋ ਐਸਿਡ ਫੂਚਸਿਨ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ। ਫਿਰ ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਡਿਸਟਿਲਡ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਧੋਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ 5% ਫਾਸਫੋਮੋਲੀਬਡੇਨਮ/5% ਫਾਸਫੋਟੰਗਸਟਿਕ ਐਸਿਡ ਦੇ ਘੋਲ ਵਿੱਚ 10 ਮਿੰਟ ਲਈ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ। ਧੋਏ ਬਿਨਾਂ, ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਸਿੱਧੇ 15 ਮਿੰਟ ਲਈ ਐਨੀਲਿਨ ਨੀਲੇ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰੋ। ਫਿਰ ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਡਿਸਟਿਲਡ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਧੋਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ 2 ਮਿੰਟ ਲਈ 1% ਐਸੀਟਿਕ ਐਸਿਡ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ। ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ 200 N ਈਥੇਨੌਲ ਵਿੱਚ ਸੁਕਾਇਆ ਗਿਆ ਅਤੇ ਜ਼ਾਈਲੀਨ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਰੰਗੀਨ ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ 10x ਉਦੇਸ਼ ਨਾਲ ਕੀਨਸ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਵਿਜ਼ੂਅਲਾਈਜ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਕੀਨਸ ਐਨਾਲਾਈਜ਼ਰ ਸੌਫਟਵੇਅਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਖੇਤਰ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤਤਾ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੀ ਗਈ।
ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੇ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, ਕੁਝ ਸੋਧਾਂ ਦੇ ਨਾਲ, CyQUANT™ MTT ਸੈੱਲ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ ਅਸੇ (ਇਨਵਿਟ੍ਰੋਜਨ, ਕਾਰਲਸਬੈਡ, CA), ਕੈਟਾਲਾਗ ਨੰਬਰ V13154। ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ, MTT ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੌਰਾਨ ਇੱਕਸਾਰ ਟਿਸ਼ੂ ਆਕਾਰ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ 6 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਦੇ ਵਿਆਸ ਵਾਲੇ ਇੱਕ ਸਰਜੀਕਲ ਪੰਚ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੇ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਨੂੰ MTT ਸਬਸਟਰੇਟ ਵਾਲੀ 12-ਖੂਹ ਪਲੇਟ ਦੇ ਖੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪਲੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ 3 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 37° C 'ਤੇ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਜੀਵਤ ਟਿਸ਼ੂ MTT ਸਬਸਟਰੇਟ ਨੂੰ ਜਾਮਨੀ ਫੋਰਮਾਜ਼ਾਨ ਮਿਸ਼ਰਣ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਜ਼ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਤੋਂ ਜਾਮਨੀ ਫੋਰਮਾਜ਼ਾਨ ਕੱਢਣ ਲਈ MTT ਘੋਲ ਨੂੰ 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ DMSO ਨਾਲ ਬਦਲੋ ਅਤੇ 15 ਮਿੰਟ ਲਈ 37°C 'ਤੇ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕਰੋ। ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ 96-ਖੂਹ ਸਾਫ਼ ਤਲ ਪਲੇਟਾਂ ਵਿੱਚ DMSO ਵਿੱਚ 1:10 ਪਤਲਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਇੱਕ ਸਾਇਟੇਸ਼ਨ ਪਲੇਟ ਰੀਡਰ (ਬਾਇਓਟੈਕ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਜਾਮਨੀ ਰੰਗ ਦੀ ਤੀਬਰਤਾ 570 nm 'ਤੇ ਮਾਪੀ ਗਈ ਸੀ। ਰੀਡਿੰਗਾਂ ਨੂੰ ਦਿਲ ਦੇ ਹਰੇਕ ਟੁਕੜੇ ਦੇ ਭਾਰ ਅਨੁਸਾਰ ਆਮ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਗਲੂਕੋਜ਼ ਉਪਯੋਗਤਾ ਪਰਖ ਲਈ ਦਿਲ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਵਾਲੇ ਮੀਡੀਆ ਨੂੰ 1 μCi/ml [5-3H]-ਗਲੂਕੋਜ਼ (ਮੋਰਾਵੇਕ ਬਾਇਓਕੈਮੀਕਲਜ਼, ਬ੍ਰੀਆ, CA, USA) ਵਾਲੇ ਮੀਡੀਆ ਨਾਲ ਬਦਲ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। 4 ਘੰਟਿਆਂ ਦੇ ਇਨਕਿਊਬੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, 100 μl ਮਾਧਿਅਮ ਇੱਕ ਖੁੱਲ੍ਹੀ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸੈਂਟਰੀਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਪਾਓ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 100 μl 0.2 N HCl ਹੋਵੇ। ਫਿਰ ਟਿਊਬ ਨੂੰ ਇੱਕ ਸਿੰਟੀਲੇਸ਼ਨ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 500 μl dH2O ਹੋਵੇ ਤਾਂ ਜੋ 37°C 'ਤੇ 72 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ [3H]2O ਭਾਫ਼ ਬਣ ਸਕੇ। ਫਿਰ ਸਿੰਟੀਲੇਸ਼ਨ ਟਿਊਬ ਤੋਂ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸੈਂਟਰੀਫਿਊਜ ਟਿਊਬ ਨੂੰ ਹਟਾਓ ਅਤੇ 10 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਸਿੰਟੀਲੇਸ਼ਨ ਤਰਲ ਪਾਓ। ਸਿੰਟੀਲੇਸ਼ਨ ਗਿਣਤੀ ਟ੍ਰਾਈ-ਕਾਰਬ 2900TR ਤਰਲ ਸਿੰਟੀਲੇਸ਼ਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਕ (ਪੈਕਾਰਡ ਬਾਇਓਸਾਇੰਸ ਕੰਪਨੀ, ਮੈਰੀਡੇਨ, CT, USA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤੀ ਗਈ। ਫਿਰ ਗਲੂਕੋਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਦੀ ਗਣਨਾ [5-3H]-ਗਲੂਕੋਜ਼ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ, ਅਧੂਰਾ ਸੰਤੁਲਨ ਅਤੇ ਪਿਛੋਕੜ, [5-3H]-ਨੂੰ ਬਿਨਾਂ ਲੇਬਲ ਵਾਲੇ ਗਲੂਕੋਜ਼ ਵਿੱਚ ਪਤਲਾ ਕਰਨ, ਅਤੇ ਸਿੰਟੀਲੇਸ਼ਨ ਕਾਊਂਟਰ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਧਿਆਨ ਵਿੱਚ ਰੱਖਦੇ ਹੋਏ ਕੀਤੀ ਗਈ। ਡੇਟਾ ਨੂੰ ਦਿਲ ਦੇ ਭਾਗਾਂ ਦੇ ਪੁੰਜ ਤੱਕ ਆਮ ਬਣਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਟ੍ਰਾਈਜ਼ੋਲ ਵਿੱਚ ਟਿਸ਼ੂ ਸਮਰੂਪੀਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੇ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕਿਆਗੇਨ miRNeasy ਮਾਈਕ੍ਰੋ ਕਿੱਟ #210874 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਦਿਲ ਦੇ ਹਿੱਸਿਆਂ ਤੋਂ RNA ਨੂੰ ਅਲੱਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। RNAsec ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਦੀ ਤਿਆਰੀ, ਕ੍ਰਮ ਅਤੇ ਡੇਟਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਹੇਠ ਲਿਖੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ:
RNA ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਦੀ ਤਿਆਰੀ ਲਈ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਸਮੱਗਰੀ ਵਜੋਂ ਪ੍ਰਤੀ ਨਮੂਨਾ 1 μg RNA ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੀਆਂ ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼ਾਂ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, NEBNext UltraTM RNA ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਤਿਆਰੀ ਕਿੱਟ ਫਾਰ ਇਲੂਮਿਨਾ (NEB, USA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਸੀਕੁਐਂਸਿੰਗ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀਆਂ ਤਿਆਰ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ, ਅਤੇ ਹਰੇਕ ਨਮੂਨੇ ਲਈ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਕ੍ਰਮਾਂ ਵਿੱਚ ਸੂਚਕਾਂਕ ਕੋਡ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, mRNA ਨੂੰ ਪੌਲੀ-T ਓਲੀਗੋਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡਸ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਚੁੰਬਕੀ ਮਣਕਿਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੁੱਲ RNA ਤੋਂ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। NEBNext ਫਸਟ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਸਿੰਥੇਸਿਸ ਰਿਐਕਸ਼ਨ ਬਫਰ (5X) ਵਿੱਚ ਉੱਚ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਡਾਇਵੈਲੈਂਟ ਕੈਸ਼ਨਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟੇਸ਼ਨ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਪਹਿਲੇ ਸਟ੍ਰੈਂਡ cDNA ਨੂੰ ਰੈਂਡਮ ਹੈਕਸਾਮਰ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ M-MuLV ਰਿਵਰਸ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੇਸ (RNase H-) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਫਿਰ ਦੂਜੇ ਸਟ੍ਰੈਂਡ cDNA ਨੂੰ DNA ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ I ਅਤੇ RNase H ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਬਾਕੀ ਓਵਰਹੈਂਗਾਂ ਨੂੰ ਐਕਸੋਨਿਊਕਲੀਜ਼/ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੁਆਰਾ ਬਲੰਟ ਐਂਡ ਵਿੱਚ ਬਦਲਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। DNA ਟੁਕੜੇ ਦੇ 3′ ਸਿਰੇ ਦੇ ਐਡੀਨਾਈਲੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਇੱਕ ਹੇਅਰਪਿਨ ਲੂਪ ਢਾਂਚੇ ਵਾਲਾ ਇੱਕ NEBNext ਅਡਾਪਟਰ ਇਸਨੂੰ ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਲਈ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਲਈ ਇਸ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। 150-200 bp ਦੀ ਪਸੰਦੀਦਾ ਲੰਬਾਈ ਵਾਲੇ cDNA ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਚੋਣ ਲਈ। AMPure XP ਸਿਸਟਮ (Beckman Coulter, Beverly, USA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਫਿਰ, 3 μl USER Enzyme (NEB, USA) ਨੂੰ ਇੱਕ ਅਡੈਪਟਰ ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹੇ ਹੋਏ ਆਕਾਰ-ਚੁਣੇ cDNA ਦੇ ਨਾਲ 37°C 'ਤੇ 15 ਮਿੰਟ ਲਈ ਅਤੇ ਫਿਰ PCR ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ 95°C 'ਤੇ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ। ਫਿਰ PCR ਨੂੰ Fusion High-Fidelity DNA polymerase, ਯੂਨੀਵਰਸਲ PCR ਪ੍ਰਾਈਮਰ, ਅਤੇ ਇੰਡੈਕਸ (X) ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਅੰਤ ਵਿੱਚ, PCR ਉਤਪਾਦਾਂ ਨੂੰ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ (AMPure XP ਸਿਸਟਮ) ਅਤੇ ਇੱਕ Agilent Bioanalyzer 2100 ਸਿਸਟਮ 'ਤੇ ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। cDNA ਲਾਇਬ੍ਰੇਰੀ ਨੂੰ ਫਿਰ Novaseq sequencer ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕ੍ਰਮਬੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। Illumina ਤੋਂ ਕੱਚੀਆਂ ਚਿੱਤਰ ਫਾਈਲਾਂ ਨੂੰ CASAVA ਬੇਸ ਕਾਲਿੰਗ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੱਚੀਆਂ ਰੀਡਾਂ ਵਿੱਚ ਬਦਲਿਆ ਗਿਆ। ਕੱਚਾ ਡੇਟਾ FASTQ(fq) ਫਾਰਮੈਟ ਫਾਈਲਾਂ ਵਿੱਚ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਪੜ੍ਹਨ ਦੇ ਕ੍ਰਮ ਅਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਅਧਾਰ ਗੁਣ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਫਿਲਟਰ ਕੀਤੇ ਕ੍ਰਮ ਵਾਲੇ ਰੀਡਾਂ ਨੂੰ Sscrofa11.1 ਸੰਦਰਭ ਜੀਨੋਮ ਨਾਲ ਮੇਲਣ ਲਈ HISAT2 ਦੀ ਚੋਣ ਕਰੋ। ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, HISAT2 ਕਿਸੇ ਵੀ ਆਕਾਰ ਦੇ ਜੀਨੋਮ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ 4 ਬਿਲੀਅਨ ਬੇਸਾਂ ਤੋਂ ਵੱਡੇ ਜੀਨੋਮ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ, ਅਤੇ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਪੈਰਾਮੀਟਰਾਂ ਲਈ ਡਿਫਾਲਟ ਮੁੱਲ ਸੈੱਟ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ। RNA Seq ਡੇਟਾ ਤੋਂ ਸਪਲਾਈਸਿੰਗ ਰੀਡਿੰਗ ਨੂੰ HISAT2 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਵਰਤਮਾਨ ਵਿੱਚ ਉਪਲਬਧ ਸਭ ਤੋਂ ਤੇਜ਼ ਸਿਸਟਮ ਹੈ, ਕਿਸੇ ਵੀ ਹੋਰ ਵਿਧੀ ਨਾਲੋਂ ਸਮਾਨ ਜਾਂ ਬਿਹਤਰ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਨਾਲ।
ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ ਦੀ ਭਰਪੂਰਤਾ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜੀਨ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੇ ਪੱਧਰ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੀ ਹੈ। ਜੀਨ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੇ ਪੱਧਰਾਂ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਜੀਨੋਮ ਜਾਂ ਐਕਸੋਨ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ (ਕ੍ਰਮ ਗਿਣਤੀ) ਦੀ ਭਰਪੂਰਤਾ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਪੜ੍ਹਨ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਜੀਨ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੇ ਪੱਧਰਾਂ, ਜੀਨ ਲੰਬਾਈ ਅਤੇ ਕ੍ਰਮ ਡੂੰਘਾਈ ਦੇ ਅਨੁਪਾਤੀ ਹੈ। FPKM (ਪ੍ਰਤੀ ਮਿਲੀਅਨ ਬੇਸ ਜੋੜਿਆਂ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀ ਹਜ਼ਾਰ ਬੇਸ ਜੋੜਿਆਂ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਪ੍ਰਤੀ ਮਿਲੀਅਨ ਬੇਸ ਜੋੜਿਆਂ ਦੇ ਕ੍ਰਮ ਅਨੁਸਾਰ) ਦੀ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਅਤੇ DESeq2 ਪੈਕੇਜ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਵਿਭਿੰਨ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੇ P-ਮੁੱਲ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਫਿਰ ਅਸੀਂ ਬਿਲਟ-ਇਨ R-ਫੰਕਸ਼ਨ "p.adjust" ਦੇ ਅਧਾਰ ਤੇ ਬੈਂਜਾਮਿਨੀ-ਹੋਚਬਰਗ ਵਿਧੀ9 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਹਰੇਕ P ਮੁੱਲ ਲਈ ਗਲਤ ਖੋਜ ਦਰ (FDR) ਦੀ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ।
ਦਿਲ ਦੇ ਹਿੱਸਿਆਂ ਤੋਂ ਅਲੱਗ ਕੀਤੇ ਗਏ RNA ਨੂੰ ਥਰਮੋ (ਥਰਮੋ, ਕੈਟ. ਨੰ. 11756050) ਤੋਂ ਸੁਪਰਸਕ੍ਰਿਪਟ IV ਵਿਲੋ ਮਾਸਟਰ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ 200 ng/μl ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ cDNA ਵਿੱਚ ਬਦਲਿਆ ਗਿਆ। ਕੁਆਂਟੀਟੇਟਿਵ RT-PCR ਇੱਕ ਅਪਲਾਈਡ ਬਾਇਓਸਿਸਟਮ ਐਂਡੁਰਾ ਪਲੇਟ ਮਾਈਕ੍ਰੋਐਂਪ 384-ਵੈੱਲ ਪਾਰਦਰਸ਼ੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪਲੇਟ (ਥਰਮੋ, ਕੈਟ. ਨੰ. 4483319) ਅਤੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਐਂਪ ਆਪਟੀਕਲ ਅਡੈਸਿਵ (ਥਰਮੋ, ਕੈਟ. ਨੰ. 4311971) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਮਿਸ਼ਰਣ ਵਿੱਚ 5 µl ਟਾਕਮੈਨ ਫਾਸਟ ਐਡਵਾਂਸਡ ਮਾਸਟਰ ਮਿਸ਼ਰਣ (ਥਰਮੋ, ਕੈਟ # 4444557), 0.5 µl ਟਾਕਮੈਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ 3.5 µl H2O ਪ੍ਰਤੀ ਖੂਹ ਮਿਸ਼ਰਤ ਸੀ। ਸਟੈਂਡਰਡ qPCR ਚੱਕਰ ਚਲਾਏ ਗਏ ਸਨ ਅਤੇ CT ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਅਪਲਾਈਡ ਬਾਇਓਸਿਸਟਮ ਕੁਆਂਟਸਟੂਡੀਓ 5 ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ PCR ਯੰਤਰ (384-ਵੈੱਲ ਮੋਡੀਊਲ; ਉਤਪਾਦ # A28135) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਟਾਕਮੈਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਥਰਮੋ (GAPDH (Ss03375629_u1), PARP12 (Ss06908795_m1), PKDCC (Ss06903874_m1), CYGB (Ss06900188_m1), RGL1 (Ss06868890_m1), ACTN1 (Ss01009508_mH), GATA4 (Ss03383805_u1), GJA1 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1), COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss04245588_m1) ਤੋਂ ਖਰੀਦੇ ਗਏ ਸਨ। ਸਾਰੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੇ CT ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ ਹਾਊਸਕੀਪਿੰਗ ਜੀਨ GAPDH ਵਿੱਚ ਆਮ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।
NT-ProBNP ਦੀ ਮੀਡੀਆ ਰਿਲੀਜ਼ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੇ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ NT-ProBNP ਕਿੱਟ (ਸੂਰ) (ਬਿੱਲੀ ਨੰ. MBS2086979, ਮਾਈਬਾਇਓਸੋਰਸ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, ਹਰੇਕ ਨਮੂਨੇ ਅਤੇ ਮਿਆਰ ਦਾ 250 µl ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ ਡੁਪਲੀਕੇਟ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਨਮੂਨਾ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਤੁਰੰਤ ਬਾਅਦ, ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 50 µl ਅਸੇ ਰੀਐਜੈਂਟ A ਪਾਓ। ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਹਿਲਾਓ ਅਤੇ ਸੀਲੈਂਟ ਨਾਲ ਸੀਲ ਕਰੋ। ਫਿਰ ਗੋਲੀਆਂ ਨੂੰ 1 ਘੰਟੇ ਲਈ 37°C 'ਤੇ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਫਿਰ ਘੋਲ ਨੂੰ ਐਸਪੀਰੇਟ ਕਰੋ ਅਤੇ ਖੂਹਾਂ ਨੂੰ 350 µl 1X ਵਾਸ਼ ਘੋਲ ਨਾਲ 4 ਵਾਰ ਧੋਵੋ, ਹਰ ਵਾਰ 1-2 ਮਿੰਟ ਲਈ ਵਾਸ਼ ਘੋਲ ਨੂੰ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕਰੋ। ਫਿਰ ਪ੍ਰਤੀ ਖੂਹ 100 µl ਅਸੇ ਰੀਐਜੈਂਟ B ਪਾਓ ਅਤੇ ਪਲੇਟ ਸੀਲੈਂਟ ਨਾਲ ਸੀਲ ਕਰੋ। ਟੈਬਲੇਟ ਨੂੰ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਹਿਲਾ ਕੇ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ 37°C 'ਤੇ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਘੋਲ ਨੂੰ ਐਸਪੀਰੇਟ ਕਰੋ ਅਤੇ ਖੂਹਾਂ ਨੂੰ 350 µl 1X ਵਾਸ਼ ਘੋਲ ਨਾਲ 5 ਵਾਰ ਧੋਵੋ। ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 90 µl ਸਬਸਟ੍ਰੇਟ ਘੋਲ ਪਾਓ ਅਤੇ ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਸੀਲ ਕਰੋ। ਪਲੇਟ ਨੂੰ 37°C 'ਤੇ 10-20 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਇਨਕਿਊਬ ਕਰੋ। ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 50 µl ਸਟਾਪ ਘੋਲ ਪਾਓ। ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਤੁਰੰਤ 450 nm 'ਤੇ ਸੈੱਟ ਕੀਤੇ ਸਾਇਟੇਸ਼ਨ (ਬਾਇਓਟੈਕ) ਪਲੇਟ ਰੀਡਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ।
ਸਮੂਹ ਆਕਾਰਾਂ ਦੀ ਚੋਣ ਕਰਨ ਲਈ ਪਾਵਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਜੋ 5% ਕਿਸਮ I ਗਲਤੀ ਦਰ ਦੇ ਨਾਲ ਪੈਰਾਮੀਟਰ ਵਿੱਚ 10% ਸੰਪੂਰਨ ਤਬਦੀਲੀ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ 80% ਤੋਂ ਵੱਧ ਸ਼ਕਤੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਨਗੇ। ਸਮੂਹ ਆਕਾਰਾਂ ਦੀ ਚੋਣ ਕਰਨ ਲਈ ਪਾਵਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਜੋ 5% ਕਿਸਮ I ਗਲਤੀ ਦਰ ਦੇ ਨਾਲ ਪੈਰਾਮੀਟਰ ਵਿੱਚ 10% ਸੰਪੂਰਨ ਤਬਦੀਲੀ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ 80% ਤੋਂ ਵੱਧ ਸ਼ਕਤੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਨਗੇ। Анализ мощности был выполнен для выбора размеров групп, которые обеспечат >80% мощности для обнаружения 10% абнаружения параметра с 5% частотой ошибок типа I. ਪਾਵਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਉਹਨਾਂ ਸਮੂਹ ਆਕਾਰਾਂ ਦੀ ਚੋਣ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜੋ 5% ਕਿਸਮ I ਗਲਤੀ ਦਰ ਦੇ ਨਾਲ 10% ਸੰਪੂਰਨ ਪੈਰਾਮੀਟਰ ਤਬਦੀਲੀ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ 80% ਤੋਂ ਵੱਧ ਸ਼ਕਤੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਨਗੇ।进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I将枯变化和5％I将提供.进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I将枯变化和5％I将提供. Был проведен анализ мощности для выбора размера группы, который обеспечил бы > 80% мощности для обнаружения 10% параметров и 5% частоты ошибок типа I. ਇੱਕ ਸਮੂਹ ਆਕਾਰ ਦੀ ਚੋਣ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਪਾਵਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜੋ 10% ਸੰਪੂਰਨ ਪੈਰਾਮੀਟਰ ਤਬਦੀਲੀ ਅਤੇ 5% ਕਿਸਮ I ਗਲਤੀ ਦਰ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ 80% ਤੋਂ ਵੱਧ ਸ਼ਕਤੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰੇਗਾ।ਪ੍ਰਯੋਗ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਨੂੰ ਬੇਤਰਤੀਬ ਢੰਗ ਨਾਲ ਚੁਣਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਸਾਰੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੰਡੀਸ਼ਨ ਬਲਾਈਂਡ ਸਨ ਅਤੇ ਸਾਰੇ ਡੇਟਾ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਹੀ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਡੀਕੋਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸਾਰੇ ਅੰਕੜਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕਰਨ ਲਈ ਗ੍ਰਾਫਪੈਡ ਪ੍ਰਿਜ਼ਮ ਸੌਫਟਵੇਅਰ (ਸੈਨ ਡਿਏਗੋ, ਸੀਏ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਸਾਰੇ ਅੰਕੜਿਆਂ ਲਈ, p-ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ <0.05 ਮੁੱਲਾਂ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਮੰਨਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਸਾਰੇ ਅੰਕੜਿਆਂ ਲਈ, p-ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ <0.05 ਮੁੱਲਾਂ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਮੰਨਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. ਸਾਰੇ ਅੰਕੜਿਆਂ ਲਈ, p-ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ <0.05 ਮੁੱਲਾਂ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਮੰਨਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।对于所有统计数据,p 值在值<0.05 时被认为是显着的.对于所有统计数据,p 值在值<0.05 时被认为是显着的. Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. ਸਾਰੇ ਅੰਕੜਿਆਂ ਲਈ, p-ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ <0.05 ਮੁੱਲਾਂ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਮੰਨਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਦੋ-ਪੂਛ ਵਾਲੇ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦਾ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਸਿਰਫ਼ 2 ਤੁਲਨਾਵਾਂ ਨਾਲ ਡੇਟਾ 'ਤੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ਜਾਂ ਦੋ-ਪਾਸੜ ANOVA ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਈ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਮਹੱਤਤਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਪੋਸਟਹਾਕ ਟੈਸਟ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ, ਟੂਕੀ ਦੇ ਸੁਧਾਰ ਨੂੰ ਕਈ ਤੁਲਨਾਵਾਂ ਲਈ ਖਾਤੇ ਵਿੱਚ ਲਾਗੂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਵਿਧੀਆਂ ਭਾਗ ਵਿੱਚ ਦੱਸੇ ਅਨੁਸਾਰ FDR ਅਤੇ p.adjust ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ RNAsec ਡੇਟਾ ਵਿੱਚ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਵਿਚਾਰ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।
ਅਧਿਐਨ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਬਾਰੇ ਵਧੇਰੇ ਜਾਣਕਾਰੀ ਲਈ, ਇਸ ਲੇਖ ਨਾਲ ਲਿੰਕ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਕੁਦਰਤ ਖੋਜ ਰਿਪੋਰਟ ਸਾਰ ਵੇਖੋ।