Nature.com ಗೆ ಭೇಟಿ ನೀಡಿದ್ದಕ್ಕಾಗಿ ಧನ್ಯವಾದಗಳು. ನೀವು ಬಳಸುತ್ತಿರುವ ಬ್ರೌಸರ್ ಆವೃತ್ತಿಯು ಸೀಮಿತ CSS ಬೆಂಬಲವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಉತ್ತಮ ಅನುಭವಕ್ಕಾಗಿ, ನೀವು ನವೀಕರಿಸಿದ ಬ್ರೌಸರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಬೇಕೆಂದು ನಾವು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡುತ್ತೇವೆ (ಅಥವಾ ಇಂಟರ್ನೆಟ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ಲೋರರ್‌ನಲ್ಲಿ ಹೊಂದಾಣಿಕೆ ಮೋಡ್ ಅನ್ನು ನಿಷ್ಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಿ). ಈ ಮಧ್ಯೆ, ನಿರಂತರ ಬೆಂಬಲವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು, ನಾವು ಶೈಲಿಗಳು ಮತ್ತು ಜಾವಾಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸೈಟ್ ಅನ್ನು ರೆಂಡರ್ ಮಾಡುತ್ತೇವೆ.
ಔಷಧ ಪರೀಕ್ಷೆಗಾಗಿ ಹೃದಯದ ಶಾರೀರಿಕ ಪರಿಸರವನ್ನು ನಿಖರವಾಗಿ ಪುನರುತ್ಪಾದಿಸಬಲ್ಲ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಅವಶ್ಯಕತೆಯಿದೆ. ಮಾನವ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳ ಸೀಮಿತ ಲಭ್ಯತೆಯು ಹೃದಯ ಔಷಧ ಪರಿಣಾಮಗಳ ತಪ್ಪಾದ ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಗಳಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗಿದೆ. ಇಲ್ಲಿ, ನಾವು ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾದರಿಯನ್ನು (CTCM) ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದ್ದೇವೆ, ಇದು ಹೃದಯದ ಚೂರುಗಳನ್ನು ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಕಾನಿಕಲ್ ಆಗಿ ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಹೃದಯ ಚಕ್ರದ ಸಿಸ್ಟೊಲಿಕ್ ಮತ್ತು ಡಯಾಸ್ಟೊಲಿಕ್ ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ ಶಾರೀರಿಕ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆಗೆ ಒಳಗಾಗುತ್ತದೆ. 12 ದಿನಗಳ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ನಂತರ, ಈ ವಿಧಾನವು ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಭಾಗಶಃ ಸುಧಾರಿಸಿತು, ಆದರೆ ಅವುಗಳ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಸಂರಕ್ಷಿಸಲಿಲ್ಲ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಸಣ್ಣ ಅಣುಗಳ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ನಂತರ, ನಮ್ಮ ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ 100 nM ಟ್ರೈಯೋಡೋಥೈರೋನಿನ್ (T3) ಮತ್ತು 1 μM ಡೆಕ್ಸಾಮೆಥಾಸೊನ್ (Dex) ಅನ್ನು ಸೇರಿಸುವುದರಿಂದ ವಿಭಾಗಗಳ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ರಚನೆಯನ್ನು 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ. T3/Dex ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಸಂಯೋಜನೆಯಲ್ಲಿ, CTCM ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ತಾಜಾ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದಂತೆಯೇ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನಲ್ ಪ್ರೊಫೈಲ್‌ಗಳು, ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆ, ಚಯಾಪಚಯ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಿತು. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಹೃದಯದ ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ಅತಿಯಾಗಿ ವಿಸ್ತರಿಸುವುದರಿಂದ ಹೈಪರ್ಟ್ರೋಫಿಕ್ ಹೃದಯ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಉಂಟಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಹೃದಯದ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆಯಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಹೈಪರ್ಟ್ರೋಫಿಕ್ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಅನುಕರಿಸುವ CTCM ಸಾಮರ್ಥ್ಯಕ್ಕೆ ಪುರಾವೆಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ. ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ, CTCM ದೀರ್ಘಕಾಲದವರೆಗೆ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ ಹೃದಯದ ಶರೀರಶಾಸ್ತ್ರ ಮತ್ತು ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರವನ್ನು ಮಾದರಿಯಾಗಿ ಮಾಡಬಹುದು, ಇದು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಔಷಧ ತಪಾಸಣೆಯನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ.
ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಸಂಶೋಧನೆಗೆ ಮೊದಲು, ಮಾನವ ಹೃದಯದ ಶಾರೀರಿಕ ಪರಿಸರವನ್ನು ನಿಖರವಾಗಿ ಪುನರುತ್ಪಾದಿಸಬಲ್ಲ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳು ಅಗತ್ಯವಿದೆ. ಅಂತಹ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳು ಬದಲಾದ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆ, ಹೃದಯ ಬಡಿತ ಮತ್ತು ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫಿಸಿಯೋಲಾಜಿಕಲ್ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಅನುಕರಿಸಬೇಕು. ಪ್ರಾಣಿಗಳ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಹೃದಯ ಶರೀರಶಾಸ್ತ್ರಕ್ಕೆ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ವೇದಿಕೆಯಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಮಾನವ ಹೃದಯದಲ್ಲಿ ಔಷಧಗಳ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿಬಿಂಬಿಸುವಲ್ಲಿ ಸೀಮಿತ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹತೆಯೊಂದಿಗೆ. ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಐಡಿಯಲ್ ಕಾರ್ಡಿಯಾಕ್ ಟಿಶ್ಯೂ ಕಲ್ಚರ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪೆರಿಮೆಂಟಲ್ ಮಾಡೆಲ್ (CTCM) ಒಂದು ಮಾದರಿಯಾಗಿದ್ದು, ಇದು ವಿವಿಧ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಮತ್ತು ಔಷಧೀಯ ಮಧ್ಯಸ್ಥಿಕೆಗಳಿಗೆ ಹೆಚ್ಚು ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಮತ್ತು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿದೆ, ಇದು ಮಾನವ ಹೃದಯದ ಶರೀರಶಾಸ್ತ್ರ ಮತ್ತು ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರವನ್ನು ನಿಖರವಾಗಿ ಪುನರುತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ3. ಅಂತಹ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಅನುಪಸ್ಥಿತಿಯು ಹೃದಯ ವೈಫಲ್ಯಕ್ಕೆ ಹೊಸ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಳ ಆವಿಷ್ಕಾರವನ್ನು ಮಿತಿಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ4,5 ಮತ್ತು ಮಾರುಕಟ್ಟೆಯಿಂದ ನಿರ್ಗಮಿಸಲು ಪ್ರಮುಖ ಕಾರಣವಾಗಿ ಔಷಧ ಕಾರ್ಡಿಯೋಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗಿದೆ6.
ಕಳೆದ ದಶಕದಲ್ಲಿ, ಎಂಟು ಹೃದಯರಕ್ತನಾಳೀಯವಲ್ಲದ ಔಷಧಿಗಳನ್ನು ವೈದ್ಯಕೀಯ ಬಳಕೆಯಿಂದ ಹಿಂತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳಲಾಗಿದೆ ಏಕೆಂದರೆ ಅವು QT ಮಧ್ಯಂತರದ ದೀರ್ಘಾವಧಿಯನ್ನು ಕುಹರದ ಆರ್ಹೆತ್ಮಿಯಾ ಮತ್ತು ಹಠಾತ್ ಸಾವಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತವೆ. ಹೀಗಾಗಿ, ಹೃದಯರಕ್ತನಾಳದ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವ ಮತ್ತು ವಿಷತ್ವವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಪೂರ್ವಭಾವಿ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ತಂತ್ರಗಳ ಅಗತ್ಯ ಹೆಚ್ಚುತ್ತಿದೆ. ಔಷಧ ತಪಾಸಣೆ ಮತ್ತು ವಿಷತ್ವ ಪರೀಕ್ಷೆಯಲ್ಲಿ ಮಾನವ-ಪ್ರೇರಿತ ಪ್ಲುರಿಪೊಟೆಂಟ್ ಕಾಂಡಕೋಶ-ಪಡೆದ ಕಾರ್ಡಿಯೊಮಯೊಸೈಟ್‌ಗಳ (hiPS-CM) ಇತ್ತೀಚಿನ ಬಳಕೆಯು ಈ ಸಮಸ್ಯೆಗೆ ಭಾಗಶಃ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, hiPS-CM ಗಳ ಅಪಕ್ವ ಸ್ವಭಾವ ಮತ್ತು ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ಬಹುಕೋಶೀಯ ಸಂಕೀರ್ಣತೆಯ ಕೊರತೆಯು ಈ ವಿಧಾನದ ಪ್ರಮುಖ ಮಿತಿಗಳಾಗಿವೆ. ಇತ್ತೀಚಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಸ್ವಾಭಾವಿಕ ಸಂಕೋಚನಗಳು ಪ್ರಾರಂಭವಾದ ಸ್ವಲ್ಪ ಸಮಯದ ನಂತರ ಮತ್ತು ಕಾಲಾನಂತರದಲ್ಲಿ ಕ್ರಮೇಣ ಹೆಚ್ಚುತ್ತಿರುವ ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ನಂತರ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶ ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್‌ಗಳನ್ನು ರೂಪಿಸಲು ಆರಂಭಿಕ hiPS-CM ಅನ್ನು ಬಳಸುವ ಮೂಲಕ ಈ ಮಿತಿಯನ್ನು ಭಾಗಶಃ ನಿವಾರಿಸಬಹುದು ಎಂದು ತೋರಿಸಿವೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಈ hiPS-CM ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಅಂಗಾಂಶಗಳು ವಯಸ್ಕ ಮಯೋಕಾರ್ಡಿಯಂನ ಪ್ರಬುದ್ಧ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫಿಸಿಯೋಲಾಜಿಕಲ್ ಮತ್ತು ಸಂಕೋಚಕ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದಿಲ್ಲ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಮಾನವ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶವು ಹೆಚ್ಚು ಸಂಕೀರ್ಣವಾದ ರಚನೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಇದು ಎಂಡೋಥೀಲಿಯಲ್ ಕೋಶಗಳು, ನರಕೋಶಗಳು ಮತ್ತು ಸ್ಟ್ರೋಮಲ್ ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳು ಸೇರಿದಂತೆ ವಿವಿಧ ಜೀವಕೋಶ ಪ್ರಕಾರಗಳ ವೈವಿಧ್ಯಮಯ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ಬಾಹ್ಯಕೋಶೀಯ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸೆಟ್‌ಗಳಿಂದ ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿದೆ. ವಯಸ್ಕ ಸಸ್ತನಿ ಹೃದಯದಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಡಿಯೋಮಯೊಸೈಟ್ ಅಲ್ಲದ ಜನಸಂಖ್ಯೆಯ ಈ ವೈವಿಧ್ಯತೆಯು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಜೀವಕೋಶ ಪ್ರಕಾರಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ಮಾಡೆಲಿಂಗ್ ಮಾಡಲು ಪ್ರಮುಖ ತಡೆಗೋಡೆಯಾಗಿದೆ. ಈ ಪ್ರಮುಖ ಮಿತಿಗಳು ಶಾರೀರಿಕ ಮತ್ತು ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಅಖಂಡ ಹೃದಯ ಸ್ನಾಯುವಿನ ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ಬೆಳೆಸುವ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸುವ ಮಹತ್ವವನ್ನು ಒತ್ತಿಹೇಳುತ್ತವೆ.
ಮಾನವ ಹೃದಯದ ಕಲ್ಚರ್ಡ್ ತೆಳುವಾದ (300 µm) ವಿಭಾಗಗಳು ಅಖಂಡ ಮಾನವ ಮಯೋಕಾರ್ಡಿಯಂನ ಭರವಸೆಯ ಮಾದರಿ ಎಂದು ಸಾಬೀತಾಗಿದೆ. ಈ ವಿಧಾನವು ಮಾನವ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ಹೋಲುವ ಸಂಪೂರ್ಣ 3D ಬಹುಕೋಶೀಯ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗೆ ಪ್ರವೇಶವನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, 2019 ರವರೆಗೆ, ಕಲ್ಚರ್ಡ್ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಬಳಕೆಯು ಕಡಿಮೆ (24 ಗಂಟೆ) ಕಲ್ಚರ್ ಬದುಕುಳಿಯುವಿಕೆಯಿಂದ ಸೀಮಿತವಾಗಿತ್ತು. ಭೌತಿಕ-ಯಾಂತ್ರಿಕ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆಯ ಕೊರತೆ, ಗಾಳಿ-ದ್ರವ ಇಂಟರ್ಫೇಸ್ ಮತ್ತು ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ಅಗತ್ಯಗಳನ್ನು ಬೆಂಬಲಿಸದ ಸರಳ ಮಾಧ್ಯಮಗಳ ಬಳಕೆ ಸೇರಿದಂತೆ ಹಲವಾರು ಅಂಶಗಳಿಂದಾಗಿ ಇದು ಸಂಭವಿಸಿದೆ. 2019 ರಲ್ಲಿ, ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳಲ್ಲಿ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಅಂಶಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸುವುದರಿಂದ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಜೀವಿತಾವಧಿಯನ್ನು ವಿಸ್ತರಿಸಬಹುದು, ಹೃದಯ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಹೃದಯ ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರವನ್ನು ಅನುಕರಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಹಲವಾರು ಸಂಶೋಧನಾ ಗುಂಪುಗಳು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿದವು. ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಏಕಾಕ್ಷೀಯ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಲೋಡಿಂಗ್ ಹೃದಯ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಮೇಲೆ ಸಕಾರಾತ್ಮಕ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬೀರುತ್ತದೆ ಎಂದು ಎರಡು ಸೊಗಸಾದ ಅಧ್ಯಯನಗಳು 17 ಮತ್ತು 18 ತೋರಿಸುತ್ತವೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಈ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಹೃದಯ ಚಕ್ರದ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಮೂರು ಆಯಾಮದ ಭೌತ-ಯಾಂತ್ರಿಕ ಲೋಡಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲಿಲ್ಲ, ಏಕೆಂದರೆ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳು ಐಸೊಮೆಟ್ರಿಕ್ ಕರ್ಷಕ ಬಲಗಳು 17 ಅಥವಾ ರೇಖೀಯ ಆಕ್ಸೋಟೋನಿಕ್ ಲೋಡಿಂಗ್ 18 ನೊಂದಿಗೆ ಲೋಡ್ ಆಗಿದ್ದವು. ಅಂಗಾಂಶ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆಯ ಈ ವಿಧಾನಗಳು ಅನೇಕ ಹೃದಯ ಜೀನ್‌ಗಳ ನಿಗ್ರಹಕ್ಕೆ ಅಥವಾ ಅಸಹಜ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಜೀನ್‌ಗಳ ಅತಿಯಾದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು. ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ, ಪಿಟೌಲಿಸ್ ಮತ್ತು ಇತರರು 19 ಬಲ ಸಂಜ್ಞಾಪರಿವರ್ತಕ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮತ್ತು ಒತ್ತಡದ ಡ್ರೈವ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹೃದಯ ಚಕ್ರ ಪುನರ್ನಿರ್ಮಾಣಕ್ಕಾಗಿ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಹೃದಯ ಸ್ಲೈಸ್ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಸ್ನಾನವನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದರು. ಈ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಹೆಚ್ಚು ನಿಖರವಾದ ಇನ್ ವಿಟ್ರೊ ಹೃದಯ ಚಕ್ರ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆಯಾದರೂ, ವಿಧಾನದ ಸಂಕೀರ್ಣತೆ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ಥ್ರೋಪುಟ್ ಈ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಅನ್ವಯವನ್ನು ಮಿತಿಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ನಮ್ಮ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯವು ಇತ್ತೀಚೆಗೆ ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆ ಮತ್ತು ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸರಳೀಕೃತ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದೆ, ಇದು ಹಂದಿ ಮತ್ತು ಮಾನವ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ವಿಭಾಗಗಳ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು 6 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ನಿರ್ವಹಿಸಲು 20,21.
ಪ್ರಸ್ತುತ ಹಸ್ತಪ್ರತಿಯಲ್ಲಿ, ಹೃದಯ ಚಕ್ರದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಮೂರು ಆಯಾಮದ ಹೃದಯ ಶರೀರಶಾಸ್ತ್ರ ಮತ್ತು ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆಯನ್ನು ಮರುಸೃಷ್ಟಿಸಲು ಹ್ಯೂಮರಲ್ ಸೂಚನೆಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಹಂದಿ ಹೃದಯದ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾದರಿ (CTCM) ಅನ್ನು ನಾವು ವಿವರಿಸುತ್ತೇವೆ. ಈ CTCM ಪೂರ್ವ-ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಔಷಧ ಪರೀಕ್ಷೆಗಾಗಿ ಸಸ್ತನಿ ಹೃದಯದ ಶರೀರಶಾಸ್ತ್ರ/ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರವನ್ನು ಅನುಕರಿಸುವ ವೆಚ್ಚ-ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ, ಮಧ್ಯಮ-ಥ್ರೂಪುಟ್ ಹೃದಯ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪೂರ್ವ-ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಔಷಧ ಮುನ್ಸೂಚನೆಯ ನಿಖರತೆಯನ್ನು ಹಿಂದೆಂದೂ ಸಾಧಿಸದ ಮಟ್ಟಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚಿಸಬಹುದು.
22,23,24 ರಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಡಿಯೋಮಯೋಸೈಟ್ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವಲ್ಲಿ ಹಿಮೋಡೈನಮಿಕ್ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಸಂಕೇತಗಳು ನಿರ್ಣಾಯಕ ಪಾತ್ರ ವಹಿಸುತ್ತವೆ. ಪ್ರಸ್ತುತ ಹಸ್ತಪ್ರತಿಯಲ್ಲಿ, ನಾವು CTCM (ಚಿತ್ರ 1a) ಅನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದ್ದೇವೆ, ಇದು ಶಾರೀರಿಕ ಆವರ್ತನಗಳಲ್ಲಿ (1.2 Hz, ನಿಮಿಷಕ್ಕೆ 72 ಬೀಟ್ಸ್) ವಿದ್ಯುತ್ ಮತ್ತು ಯಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುವ ಮೂಲಕ ವಯಸ್ಕ ಹೃದಯ ಪರಿಸರವನ್ನು ಅನುಕರಿಸಬಲ್ಲದು. ಡಯಾಸ್ಟೋಲ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಅಂಗಾಂಶದ ಅತಿಯಾದ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆಯನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು, ಅಂಗಾಂಶದ ಗಾತ್ರವನ್ನು 25% ಹೆಚ್ಚಿಸಲು 3D ಮುದ್ರಣ ಸಾಧನವನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು (ಚಿತ್ರ 1b). ಹೃದಯ ಚಕ್ರವನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಪುನರುತ್ಪಾದಿಸಲು ಡೇಟಾ ಸ್ವಾಧೀನ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಿಸ್ಟೋಲ್‌ಗೆ 100 ms ಮೊದಲು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಲು C-PACE ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಿಂದ ಪ್ರೇರಿತವಾದ ವಿದ್ಯುತ್ ವೇಗವನ್ನು ನಿಗದಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ. ಮೇಲಿನ ಕೋಣೆಯಲ್ಲಿ ಹೃದಯದ ಚೂರುಗಳ ವಿಸ್ತರಣೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಲು ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುವ ಸಿಲಿಕೋನ್ ಪೊರೆಯನ್ನು ಚಕ್ರದಂತೆ ವಿಸ್ತರಿಸಲು ಅಂಗಾಂಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಪ್ರೋಗ್ರಾಮೆಬಲ್ ನ್ಯೂಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಆಕ್ಟಿವೇಟರ್ (LB ಎಂಜಿನಿಯರಿಂಗ್, ಜರ್ಮನಿ) ಅನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ. ಒತ್ತಡ ಸಂಜ್ಞಾಪರಿವರ್ತಕದ ಮೂಲಕ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಾಹ್ಯ ಗಾಳಿಯ ಮಾರ್ಗಕ್ಕೆ ಸಂಪರ್ಕಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಒತ್ತಡ (± 1 mmHg) ಮತ್ತು ಸಮಯವನ್ನು (± 1 ms) ನಿಖರವಾಗಿ ಹೊಂದಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸಿತು (ಚಿತ್ರ 1c).
a ಸಾಧನದ ಕಲ್ಚರ್ ಕೊಠಡಿಯ ಒಳಗೆ, ನೀಲಿ ಬಣ್ಣದಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವ 7 mm ಬೆಂಬಲ ಉಂಗುರಕ್ಕೆ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗವನ್ನು ಜೋಡಿಸಿ. ಕಲ್ಚರ್ ಕೊಠಡಿಯನ್ನು ಗಾಳಿ ಕೋಣೆಯಿಂದ ತೆಳುವಾದ ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುವ ಸಿಲಿಕೋನ್ ಪೊರೆಯಿಂದ ಬೇರ್ಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ. ಸೋರಿಕೆಯನ್ನು ತಡೆಗಟ್ಟಲು ಪ್ರತಿ ಕೋಣೆಯ ನಡುವೆ ಗ್ಯಾಸ್ಕೆಟ್ ಇರಿಸಿ. ಸಾಧನದ ಮುಚ್ಚಳವು ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸುವ ಗ್ರ್ಯಾಫೈಟ್ ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ. b ದೊಡ್ಡ ಅಂಗಾಂಶ ಸಾಧನ, ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿ ಉಂಗುರ ಮತ್ತು ಬೆಂಬಲ ಉಂಗುರದ ಸ್ಕೀಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಪ್ರಾತಿನಿಧ್ಯ. ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು (ಕಂದು) ಸಾಧನದ ಹೊರ ಅಂಚಿನಲ್ಲಿರುವ ತೋಡಿನಲ್ಲಿ ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿ ಉಂಗುರದೊಂದಿಗೆ ದೊಡ್ಡ ಸಾಧನದ ಮೇಲೆ ಇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮಾರ್ಗದರ್ಶಿಯನ್ನು ಬಳಸಿ, ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ವಿಭಾಗದ ಮೇಲೆ ಅಂಗಾಂಶ ಅಕ್ರಿಲಿಕ್ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯಿಂದ ಲೇಪಿತವಾದ ಬೆಂಬಲ ಉಂಗುರವನ್ನು ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ಇರಿಸಿ. c ಪ್ರೋಗ್ರಾಮೆಬಲ್ ನ್ಯೂಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಆಕ್ಯೂವೇಟರ್ (PPD) ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ಗಾಳಿಯ ಕೋಣೆಯ ಒತ್ತಡದ ಕಾರ್ಯವಾಗಿ ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಸಮಯವನ್ನು ತೋರಿಸುವ ಗ್ರಾಫ್. ಒತ್ತಡ ಸಂವೇದಕಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ಸಿಂಕ್ರೊನೈಸ್ ಮಾಡಲು ಡೇಟಾ ಸ್ವಾಧೀನ ಸಾಧನವನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಕೊಠಡಿಯಲ್ಲಿನ ಒತ್ತಡವು ನಿಗದಿತ ಮಿತಿಯನ್ನು ತಲುಪಿದಾಗ, ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ಪ್ರಚೋದಿಸಲು C-PACE-EM ಗೆ ಪಲ್ಸ್ ಸಿಗ್ನಲ್ ಅನ್ನು ಕಳುಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. d ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್ ಶೆಲ್ಫ್‌ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾದ ನಾಲ್ಕು CTCM ಗಳ ಚಿತ್ರ. ನಾಲ್ಕು ಸಾಧನಗಳನ್ನು ನ್ಯೂಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಸರ್ಕ್ಯೂಟ್ ಮೂಲಕ ಒಂದು PPD ಗೆ ಸಂಪರ್ಕಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ನ್ಯೂಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಸರ್ಕ್ಯೂಟ್‌ನಲ್ಲಿನ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡಲು ಒತ್ತಡ ಸಂವೇದಕಗಳನ್ನು ಹೆಮೋಸ್ಟಾಟಿಕ್ ಕವಾಟಕ್ಕೆ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಸಾಧನವು ಆರು ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ.
ಒಂದೇ ನ್ಯೂಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಆಕ್ಯೂವೇಟರ್ ಬಳಸಿ, ನಾವು 4 CTCM ಸಾಧನಗಳನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಯಿತು, ಪ್ರತಿಯೊಂದೂ 6 ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಹಿಡಿದಿಟ್ಟುಕೊಳ್ಳಬಹುದು (ಚಿತ್ರ 1d). CTCM ನಲ್ಲಿ, ಗಾಳಿಯ ಕೊಠಡಿಯಲ್ಲಿನ ಗಾಳಿಯ ಒತ್ತಡವನ್ನು ದ್ರವ ಕೊಠಡಿಯಲ್ಲಿ ಸಿಂಕ್ರೊನಸ್ ಒತ್ತಡಕ್ಕೆ ಪರಿವರ್ತಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ನ ಶಾರೀರಿಕ ವಿಸ್ತರಣೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸುತ್ತದೆ (ಚಿತ್ರ 2a ಮತ್ತು ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 1). 80 mm Hg ನಲ್ಲಿ ಅಂಗಾಂಶದ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆಯ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ. ಕಲೆ. ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು 25% ರಷ್ಟು ವಿಸ್ತರಿಸುವುದನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ (ಚಿತ್ರ 2b). ಈ ಶೇಕಡಾವಾರು ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆಯು ಸಾಮಾನ್ಯ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗದ ಸಂಕೋಚನಕ್ಕಾಗಿ 2.2–2.3 µm ನ ಶಾರೀರಿಕ ಸಾರ್ಕೊಮೆರ್ ಉದ್ದಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿರುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಕಸ್ಟಮ್ ಕ್ಯಾಮೆರಾ ಸೆಟ್ಟಿಂಗ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಅಂಗಾಂಶ ಚಲನೆಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಗಿದೆ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 1). ಅಂಗಾಂಶ ಚಲನೆಯ ವೈಶಾಲ್ಯ ಮತ್ತು ವೇಗ (ಚಿತ್ರ 2c, d) ಹೃದಯ ಚಕ್ರದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಮತ್ತು ಸಿಸ್ಟೋಲ್ ಮತ್ತು ಡಯಾಸ್ಟೋಲ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ (ಚಿತ್ರ 2b) ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆಗೆ ಅನುರೂಪವಾಗಿದೆ. ಸಂಕೋಚನ ಮತ್ತು ವಿಶ್ರಾಂತಿ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆ ಮತ್ತು ವೇಗವು ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುತ್ತದೆ (ಚಿತ್ರ 2f). ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಸಂಕೋಚನದ ಮೇಲೆ ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲು, ನಾವು ಛಾಯೆ ಅಲ್ಗಾರಿದಮ್ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 2a,b) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಕ್ರಿಯ ವಿರೂಪತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸುವ ವಿಧಾನವನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯೊಂದಿಗೆ ಮತ್ತು ಇಲ್ಲದೆ ವಿರೂಪಗಳ ನಡುವೆ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಯಿತು. ಹೃದಯದ ಅದೇ ವಿಭಾಗ (ಚಿತ್ರ 2f). ಕಟ್ನ ಚಲಿಸಬಲ್ಲ ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿ (R6-9), ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ವೋಲ್ಟೇಜ್ ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಅನುಪಸ್ಥಿತಿಗಿಂತ 20% ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ, ಇದು ಸಂಕೋಚನ ಕಾರ್ಯಕ್ಕೆ ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಕೊಡುಗೆಯನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
ಗಾಳಿಯ ಕೋಣೆಯ ಒತ್ತಡ, ದ್ರವ ಕೋಣೆಯ ಒತ್ತಡ ಮತ್ತು ಅಂಗಾಂಶ ಚಲನೆಯ ಮಾಪನಗಳ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಕುರುಹುಗಳು ಕೋಣೆಯ ಒತ್ತಡವು ದ್ರವ ಕೋಣೆಯ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ದೃಢಪಡಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಅಂಗಾಂಶದ ತುಂಡಿನ ಅನುಗುಣವಾದ ಚಲನೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ. b ಶೇಕಡಾ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆ (ಕಿತ್ತಳೆ) ಗೆ ಅನುಗುಣವಾದ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳ ಶೇಕಡಾ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆಯ (ನೀಲಿ) ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಕುರುಹುಗಳು. c ಹೃದಯದ ತುಂಡಿನ ಅಳತೆ ಮಾಡಿದ ಚಲನೆಯು ಚಲನೆಯ ಅಳತೆ ಮಾಡಿದ ವೇಗಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿರುತ್ತದೆ. (d) ಹೃದಯದ ತುಂಡಿನಲ್ಲಿ ಚಕ್ರ ಚಲನೆ (ನೀಲಿ ರೇಖೆ) ಮತ್ತು ವೇಗ (ಕಿತ್ತಳೆ ಚುಕ್ಕೆಗಳ ರೇಖೆ) ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಪಥಗಳು. e ಚಕ್ರ ಸಮಯದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (n = 19 ಚೂರುಗಳು, ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳಿಂದ, ಸಂಕೋಚನ ಸಮಯ (n = 19 ಚೂರುಗಳು ಪ್ರತಿ ಗುಂಪಿಗೆ), ವಿಶ್ರಾಂತಿ ಸಮಯ (n = 19 ಚೂರುಗಳು ಪ್ರತಿ ಗುಂಪಿಗೆ, ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳಿಂದ), ಅಂಗಾಂಶ ಚಲನೆ (n = 25). ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ಚೂರುಗಳು)/ಗುಂಪು), ಗರಿಷ್ಠ ಸಿಸ್ಟೊಲಿಕ್ ವೇಗ (n = 24(D0), 25(D12) ಚೂರುಗಳು/ಗುಂಪು ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ) ಮತ್ತು ಗರಿಷ್ಠ ವಿಶ್ರಾಂತಿ ದರ (n=24(D0), 25(D12) ಚೂರುಗಳು/ಗುಂಪು ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ). ಎರಡು ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಯ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯು ಯಾವುದೇ ನಿಯತಾಂಕದಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ತೋರಿಸಲಿಲ್ಲ. ಎಫ್ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ (ಕೆಂಪು) ಮತ್ತು (ನೀಲಿ) ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯೊಂದಿಗೆ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳ ಕುರುಹುಗಳು, ಒಂದೇ ವಿಭಾಗದಿಂದ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳ ಹತ್ತು ಪ್ರಾದೇಶಿಕ ಪ್ರದೇಶಗಳು. ಕೆಳಗಿನ ಫಲಕಗಳು ವಿವಿಧ ವಿಭಾಗಗಳಿಂದ ಹತ್ತು ಪ್ರದೇಶಗಳಲ್ಲಿ ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯೊಂದಿಗೆ ಮತ್ತು ಇಲ್ಲದೆ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿನ ಸ್ಟ್ರೈನ್‌ನಲ್ಲಿನ ಶೇಕಡಾವಾರು ವ್ಯತ್ಯಾಸದ ಪರಿಮಾಣೀಕರಣವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ. (n = ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 8 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು, ಎರಡು ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05). (n = ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 8 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು, ಎರಡು ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05). (n = 8 срезов/группу от разных свиней, проводится двусторонний t-критерий Стьюдента; **p<0,0001, **,p *<001, **5<00). (n = ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 8 ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪು, ಎರಡು ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆ; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05). n = 8 片/组,来自不同的猪,进行双尾学生t 检验；****p <0.0001,**p <0.01,*p <0.05） n = 8 片/组,来自不同的猪,进行双尾学生t 检验；****p <0.0001,**p <0.01,*p <0.05） (n = 8 срезов/grouppu, от разных свиней, двусторонний критерий Стьюдента; ****p <0,0001, **p <0,01, *p <0,05). (n = 8 ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪು, ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳಿಂದ, ಎರಡು ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆ; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05).ದೋಷ ಪಟ್ಟಿಗಳು ಸರಾಸರಿ ± ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನವನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತವೆ.
ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಸ್ಟ್ಯಾಟಿಕ್ ಬಯೋಮಿಮೆಟಿಕ್ ಹಾರ್ಟ್ ಸ್ಲೈಸ್ ಕಲ್ಚರ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ [20, 21], ನಾವು ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸುವ ಮೂಲಕ ಮತ್ತು ಮಾಧ್ಯಮ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾಗಿಸುವ ಮೂಲಕ 6 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಹೃದಯ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆ, ಕಾರ್ಯ ಮತ್ತು ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಕಾಯ್ದುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, 10 ದಿನಗಳ ನಂತರ, ಈ ಅಂಕಿಅಂಶಗಳು ತೀವ್ರವಾಗಿ ಕುಸಿದವು. ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಸ್ಟ್ಯಾಟಿಕ್ ಬಯೋಮಿಮೆಟಿಕ್ ಕಲ್ಚರ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ 20, 21 ನಿಯಂತ್ರಣ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (Ctrl) ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಲಾದ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ನಾವು ಉಲ್ಲೇಖಿಸುತ್ತೇವೆ ಮತ್ತು ನಾವು ನಮ್ಮ ಹಿಂದೆ ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ ಮಾಡಿದ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು MC ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು ಮತ್ತು ಏಕಕಾಲದಲ್ಲಿ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಮತ್ತು ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆ (CTCM) ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಾಗಿ ಬಳಸುತ್ತೇವೆ. ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮೊದಲನೆಯದಾಗಿ, ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯಿಲ್ಲದೆ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರಚೋದನೆಯು 6 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಅಂಗಾಂಶ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಸಾಕಾಗುವುದಿಲ್ಲ ಎಂದು ನಾವು ನಿರ್ಧರಿಸಿದ್ದೇವೆ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 3a,b). ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, STCM ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಭೌತ-ಯಾಂತ್ರಿಕ ಮತ್ತು ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಪರಿಚಯದೊಂದಿಗೆ, 12-ದಿನಗಳ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯು MS ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ತಾಜಾ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಂತೆಯೇ ಉಳಿಯಿತು, ಆದರೆ MTT ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ತೋರಿಸಲ್ಪಟ್ಟಂತೆ Ctrl ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಅಲ್ಲ (ಚಿತ್ರ 1). 3a). ಹೃದಯ ಚಕ್ರದ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರಚೋದನೆ ಮತ್ತು ಸಿಮ್ಯುಲೇಶನ್ ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಸ್ಥಿರ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ ವರದಿ ಮಾಡಿದ್ದಕ್ಕಿಂತ ಎರಡು ಪಟ್ಟು ಹೆಚ್ಚು ಕಾಲ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯವಾಗಿಡಬಹುದು ಎಂದು ಇದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಹೃದಯ ಟ್ರೋಪೋನಿನ್ ಟಿ ಮತ್ತು ಕನೆಕ್ಸಿನ್ 43 ರ ಇಮ್ಯುನೊಲೇಬಲಿಂಗ್ ಮೂಲಕ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನವು ಅದೇ ದಿನದ ನಿಯಂತ್ರಣಗಳಿಗಿಂತ 12 ನೇ ದಿನದಂದು MC ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ ಕನೆಕ್ಸಿನ್ 43 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಏಕರೂಪದ ಕನೆಕ್ಸಿನ್ 43 ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮತ್ತು Z- ಡಿಸ್ಕ್ ರಚನೆಯನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ (ಚಿತ್ರ 3b). ಅಂಗಾಂಶ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ನಾವು ಕೃತಕ ಬುದ್ಧಿಮತ್ತೆ (AI) ಚೌಕಟ್ಟನ್ನು ಬಳಸುತ್ತೇವೆ26, ಸ್ಥಳೀಕರಣದ ಬಲದ ದೃಷ್ಟಿಯಿಂದ ಹೃದಯ ಚೂರುಗಳ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿದೀಪಕತೆಯನ್ನು ಸ್ವಯಂಚಾಲಿತವಾಗಿ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ಟ್ರೋಪೋನಿನ್-ಟಿ ಮತ್ತು ಕನೆಕ್ಸಿನ್ ಸ್ಟೇನಿಂಗ್43 ಆಧಾರಿತ ಚಿತ್ರ ಆಧಾರಿತ ಆಳವಾದ ಕಲಿಕೆಯ ಪೈಪ್‌ಲೈನ್. ಉಲ್ಲೇಖದಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ, ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಸ್ವಯಂಚಾಲಿತ ಮತ್ತು ಪಕ್ಷಪಾತವಿಲ್ಲದ ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹವಾಗಿ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ಈ ವಿಧಾನವು ಕನ್ವಲ್ಯೂಷನಲ್ ನ್ಯೂರಲ್ ನೆಟ್‌ವರ್ಕ್ (CNN) ಮತ್ತು ಆಳವಾದ ಕಲಿಕೆಯ ಚೌಕಟ್ಟನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ. 26. ಸ್ಥಿರ ನಿಯಂತ್ರಣ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ MC ಅಂಗಾಂಶವು ದಿನ 0 ಕ್ಕೆ ಸುಧಾರಿತ ರಚನಾತ್ಮಕ ಹೋಲಿಕೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಮ್ಯಾಸನ್‌ನ ಟ್ರೈಕ್ರೋಮ್ ಸ್ಟೇನಿಂಗ್ MS ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್‌ನ ಶೇಕಡಾವಾರು ಪ್ರಮಾಣವು ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ 12 ನೇ ದಿನದ ನಿಯಂತ್ರಣ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ ಎಂದು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿತು (ಚಿತ್ರ 3c). CTCM ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು 12 ನೇ ದಿನದಂದು ತಾಜಾ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದಂತೆಯೇ ಮಟ್ಟಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚಿಸಿದರೂ, ಅದು ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಸುಧಾರಿಸಲಿಲ್ಲ.
ಒಂದು ಬಾರ್ ಗ್ರಾಫ್ 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ತಾಜಾ ಹೃದಯ ಚೂರುಗಳು (D0) ಅಥವಾ ಹೃದಯ ಚೂರುಗಳು ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ MTT ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಪರಿಮಾಣೀಕರಣವನ್ನು ಸ್ಥಿರ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ (D12 Ctrl) ಅಥವಾ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ಬಂದ ಚೂರುಗಳು/ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ, ಒಂದು ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ####p < 0.0001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು **p < 0.01 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). ಒಂದು ಬಾರ್ ಗ್ರಾಫ್ 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ತಾಜಾ ಹೃದಯ ಚೂರುಗಳು (D0) ಅಥವಾ ಹೃದಯ ಚೂರುಗಳು ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ MTT ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಪರಿಮಾಣೀಕರಣವನ್ನು ಸ್ಥಿರ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ (D12 Ctrl) ಅಥವಾ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ಬಂದ ಚೂರುಗಳು/ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ, ಒಂದು ರೀತಿಯಲ್ಲಿ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ####p < 0.0001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು **p < 0.01 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ).ಹಿಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್ 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಸ್ಟ್ಯಾಟಿಕ್ ಕಲ್ಚರ್ (D12 ಕಂಟ್ರೋಲ್) ಅಥವಾ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 ಕಂಟ್ರೋಲ್) ನಲ್ಲಿ MTT ತಾಜಾ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ (D0) ಅಥವಾ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಕಲ್ಚರ್‌ನ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ) ), 12 (D12 MC) ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪಿನಿಂದ ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ;####p <0,0001 по сравнению с D0 и **p < 0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p < 0.0001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು **p < 0.01 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心(形心脏)或心脏切片培养12 天的MTT 活力的量化),来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行测试；与D0 相比,####p < 0.0001,与D12 Ctrl 相比,**p <0.01)。 a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心(形心脏) ，来自不同猪的12 (D12 ಎಮ್‌ಸಿ)ತಾಜಾ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ (D0) ಅಥವಾ ಸ್ಥಿರ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ (D12 ನಿಯಂತ್ರಣ) ಅಥವಾ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 ನಿಯಂತ್ರಣ)), 12 (D12 MC) ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪಿನಲ್ಲಿ ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಬೆಳೆಸಿದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ MTT ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಪರಿಮಾಣೀಕರಣವನ್ನು ತೋರಿಸುವ ಹಿಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆ;####p <0,0001 по сравнению с D0, **p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p < 0.0001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, **p < 0.01 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ).b ಹೊಸದಾಗಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ (D0) ಅಥವಾ ಸ್ಥಿರ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (Ctrl) ಅಥವಾ CTCM ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (MC) 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ (ಖಾಲಿ ಮಾಪಕ = 100 µm) ಟ್ರೋಪೋನಿನ್-ಟಿ (ಹಸಿರು), ಕನೆಕ್ಸಿನ್ 43 (ಕೆಂಪು) ಮತ್ತು DAPI (ನೀಲಿ). ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯ ಕೃತಕ ಬುದ್ಧಿಮತ್ತೆಯ ಪರಿಮಾಣೀಕರಣ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ಪ್ರತಿಯೊಂದೂ ಚೂರುಗಳು/ಗುಂಪಿನ, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ####p < 0.0001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು ****p < 0.0001 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯ ಕೃತಕ ಬುದ್ಧಿಮತ್ತೆಯ ಪರಿಮಾಣೀಕರಣ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ಪ್ರತಿಯೊಂದೂ ಚೂರುಗಳು/ಗುಂಪಿನ, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ####p < 0.0001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು ****p < 0.0001 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). ಕೊಲಿಚೆಸ್ಟ್ವೆನ್ನಯ ಆಸ್ಸೆಂಕಾ ರಚನೆ MC) ಸ್ರೇಝೋವ್/ಗ್ರೂಪ್ ಆಫ್ ರಾಝ್ನಿಹ್ ಸ್ವಿನೇಯ್, ಪ್ರೊವೊಡಿಟ್ಸ್ ಒಡ್ನೋಫಾಕ್ಟೋರ್ನಿ ಟೆಸ್ಟ್ ಅನೋವಾ; с D12 Ctrl). ಕೃತಕ ಬುದ್ಧಿಮತ್ತೆಯಿಂದ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪುಗಳು ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗಿದೆ; ####p < 0.0001 vs. D0 ಮತ್ತು ****p < 0.0001 ನೊಂದಿಗೆ D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ).人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಪ್ರತಿಯೊಂದು ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳು, ಒಂದು-ಮಾರ್ಗ 与 1#00.00 ಪರೀಕ್ಷೆ;相比,****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）。人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಪ್ರತಿಯೊಂದು ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳು, ಒನ್-ವೇ.#00 ಪರೀಕ್ಷೆ;与D0相比,**p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）。 ಇಸ್ಕೂಸ್ಟ್ವೆನ್ ಇಂಟೆಲೆಕ್ಟ್ ಡ್ಲೈ ಕೋಲಿಚೆಸ್ಟ್ವೆನ್ನೊಯ್ ಒಸ್ಸೆಂಕಿ ಸ್ಟ್ರಕ್ಟೂರ್ನೊಯ್ ಸೆಲೋಸ್ಟ್ನೋಸ್ಟಿ ಸೆರ್ಡೆಚ್ನೊಯ್ ಟಿಕಾನಿ (120 ಎಲ್ ಡಿಡಿ), (ಎನ್ = 7ಎಲ್ (D12 MC) срезов/группу каждой из разных свиней, односторонний тест ANOVA; ###p <0,0001 vs. D0 в с D12 Ctrl). ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ಕೃತಕ ಬುದ್ಧಿಮತ್ತೆ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪುಗಳು ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳು, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆ; ####p<0.0001 vs .D0 ಹೋಲಿಕೆಗಾಗಿ ****p < 0.0001 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). c ಮ್ಯಾಸನ್‌ನ ಟ್ರೈಕ್ರೋಮ್ ಸ್ಟೇನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಕಲೆ ಹಾಕಿದ ಹೃದಯದ ಚೂರುಗಳಿಗೆ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು (ಎಡ) ಮತ್ತು ಪರಿಮಾಣೀಕರಣ (ಬಲ) (ಸ್ಕೇಲ್ ಬೇರ್ = 500 µm) (n = 10 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು ಪ್ರತಿಯೊಂದೂ ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳಿಂದ, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ####p < 0.0001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು ***p < 0.001 D12 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ Ctrl). c ಮ್ಯಾಸನ್‌ನ ಟ್ರೈಕ್ರೋಮ್ ಸ್ಟೇನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಕಲೆ ಹಾಕಿದ ಹೃದಯದ ಚೂರುಗಳಿಗೆ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು (ಎಡ) ಮತ್ತು ಪರಿಮಾಣೀಕರಣ (ಬಲ) (ಸ್ಕೇಲ್ ಬೇರ್ = 500 µm) (n = ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ತಲಾ 10 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; #### p < 0.0001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು ***p < 0.001 D12 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ Ctrl). ಸಿ ರೆಪ್ರೆಜೆಂಟೈವ್ನ್ಯ ಇಸೊಬ್ರಜೆನಿಯಾ (ಸ್ಲೇವಾ) ಮತ್ತು ಕೊಲಿಚೆಸ್ಟ್ವೆನ್ನ ಒಸೆಂಕಾ (ಸ್ಪ್ರವಾ) ಸ್ರೆಸೊವ್ ಸರ್ಡ್ಸಾ, ಒಕ್ರ್ಯಾಶ್‌ನೆನ್ಸ್ ಕ್ರಾಸಿಟೆಲೆಮ್ ಮಸ್ಸೋನ (ಮಾಸಿತಬ್ ಬೇಸ್ ಪೊಕ್ರಿಟಿಯ = 500 ಎಮ್‌ಕೆಎಮ್) (n = 10 ಸ್ಟ್ರೇಜೋವ್/ಗ್ರುಪ್ಪು ಅಥವಾ ರಾಝ್ನಿಹ್ ಸ್ವಿನಿಯಸ್, ವಿಪೋಲಿನ್ тест ANOVA; #### p < 0,0001 по сравнению с D0 и ***p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c ಮ್ಯಾಸನ್‌ನ ಟ್ರೈಕ್ರೋಮ್ ಸ್ಟೇನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಕಲೆ ಹಾಕಿದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು (ಎಡ) ಮತ್ತು ಪರಿಮಾಣೀಕರಣ (ಬಲ) (ಲೇಪಿತವಲ್ಲದ ಮಾಪಕ = 500 µm) (n = 10 ವಿಭಾಗಗಳು/ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ಗುಂಪು, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗಿದೆ; #### p < 0 .0001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು ***p < 0.001 D12 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ Ctrl). c 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像（左）和量化（右）（裸=5 10 个切片/组，每组来自不同的猪，进行单向ANOVA 测试；#### p <0.0001 与D0 相比, 0.0001 与D0 相比, 20 相比). C 用 ಮ್ಯಾಸನ್ 三 色 染料 的 心脏 切片 的 代 表性 （左 左） 量化 （右裸尺度 = 500 µm） （n = 10 个 切片 组 每 组 来自 不同 猪 , 进行 单向 单文0.0001 与D0 相比，***p <0.001 与D12 Ctrl 相比）。 ಸಿ ರೆಪ್ರೆಸೆಂಟೈವ್ನ್ಯ ಇಸೊಬ್ರಜೆನಿಯಾ (ಸ್ಲೇವಾ) ಮತ್ತು ಕೊಲಿಚೆಸ್ಟ್ವೆನ್ನಿ ಅನಾಲಿಸ್ (ಸ್ಪ್ರವಾ) ಸ್ರೆಸೊವ್ ಸರ್ಡ್ಸಾ, ಒಕ್ರ್ಯಾಶನ್ಸ್ ಕ್ರ್ಯಾಸಿಟೆಲೆಮ್ ಮಸ್ಸೋನ (ಚಿಸ್ತಯಾ ಸ್ಕಲಾ = 500 ಎಮ್‌ಕೆಎಮ್) (n = 10 ಸ್ಟ್ರೇಜೋವ್/ಗ್ರೂಪ್ಪಾ, ಡ್ರೂಗೊಯ್ ಸ್ವಿನಿಕ್ಸ್, ಪ್ರೊಸೆಟ್‌ಗಳು ಒಡ್ನೊಫ್ಯಾಕ್ಟೋರ್ನೊಗೊ дисперсионного анализа ;### #p < 0,0001 по сравнению с D0, ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c ಮ್ಯಾಸನ್‌ನ ಟ್ರೈಕ್ರೋಮ್ ಸ್ಟೇನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಕಲೆ ಹಾಕಿದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು (ಎಡ) ಮತ್ತು ಪ್ರಮಾಣ (ಬಲ) (ಖಾಲಿ = 500 µm) (n = 10 ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪು, ಪ್ರತಿಯೊಂದೂ ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಯಿಂದ, ವ್ಯತ್ಯಾಸದ ಏಕಮುಖ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ ;### # p < 0.0001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ***p < 0.001 D12 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ Ctrl).ದೋಷ ಪಟ್ಟಿಗಳು ಸರಾಸರಿ ± ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನವನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತವೆ.
CTCM ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಸಣ್ಣ ಅಣುಗಳನ್ನು ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ, ಕಾರ್ಡಿಯೋಮಯೋಸೈಟ್ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದು ಎಂದು ನಾವು ಊಹಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಕಡಿಮೆ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಗೊಂದಲಕಾರಿ ಅಂಶಗಳಿಂದಾಗಿ ನಮ್ಮ ಸ್ಥಿರ ನಿಯಂತ್ರಣ ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳನ್ನು 20,21 ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಣ್ಣ ಅಣುಗಳಿಗಾಗಿ ನಾವು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಡೆಕ್ಸಮೆಥಾಸೊನ್ (ಡೆಕ್ಸ್), ಟ್ರಯೋಡೋಥೈರೋನಿನ್ (T3), ಮತ್ತು SB431542 (SB) ಗಳನ್ನು ಈ ಪರದೆಗೆ ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ಸಾರ್ಕೊಮೆರ್ ಉದ್ದ, ಟಿ-ಟ್ಯೂಬ್ಯೂಲ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ವಹನ ವೇಗವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುವ ಮೂಲಕ ಕಾರ್ಡಿಯೋಮಯೋಸೈಟ್‌ಗಳ ಪಕ್ವತೆಯನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಲು ಈ ಸಣ್ಣ ಅಣುಗಳನ್ನು ಹಿಂದೆ ಹೈಪಿಎಸ್‌ಸಿ-ಸಿಎಂ ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಡೆಕ್ಸ್ (ಗ್ಲುಕೊಕಾರ್ಟಿಕಾಯ್ಡ್) ಮತ್ತು SB ಎರಡೂ ಉರಿಯೂತವನ್ನು ನಿಗ್ರಹಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ತಿಳಿದುಬಂದಿದೆ29,30. ಆದ್ದರಿಂದ, ಈ ಸಣ್ಣ ಅಣುಗಳ ಒಂದು ಅಥವಾ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಸೇರಿಸುವುದರಿಂದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆಯೇ ಎಂದು ನಾವು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಆರಂಭಿಕ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್‌ಗಾಗಿ, ಕೋಶ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಪ್ರತಿ ಸಂಯುಕ್ತದ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ (1 μM ಡೆಕ್ಸ್27, 100 nM T327, ಮತ್ತು 2.5 μM SB31). 12 ದಿನಗಳ ಕೃಷಿಯ ನಂತರ, T3 ಮತ್ತು Dex ನ ಸಂಯೋಜನೆಯು ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಕಾರ್ಡಿಯೋಮಯೊಸೈಟ್ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆ ಮತ್ತು ಕನಿಷ್ಠ ನಾರಿನ ಮರುರೂಪಿಸುವಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರಗಳು 4 ಮತ್ತು 5). ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, T3 ಮತ್ತು Dex ನ ಈ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳನ್ನು ಎರಡು ಅಥವಾ ಎರಡು ಪಟ್ಟು ಹೆಚ್ಚಿಸುವುದರಿಂದ ಸಾಮಾನ್ಯ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಹಾನಿಕಾರಕ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡಿತು (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 6a,b).
ಆರಂಭಿಕ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್ ನಂತರ, ನಾವು 4 ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳ ಹೆಡ್-ಟು-ಹೆಡ್ ಹೋಲಿಕೆಯನ್ನು ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ (ಚಿತ್ರ 4a): Ctrl: ನಮ್ಮ ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ನಮ್ಮ ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದ ಸ್ಥಿರ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಿದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳು; ಬುಧವಾರ 20.21 TD: T3 ಮತ್ತು Ctrl s ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆ ಡೆಕ್ಸ್; MC: ನಮ್ಮ ಹಿಂದೆ ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು CTCM ನಲ್ಲಿ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಿದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳು; ಮತ್ತು MT: ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ T3 ಮತ್ತು ಡೆಕ್ಸ್ ಸೇರಿಸಲಾದ CTCM. 12 ದಿನಗಳ ಕೃಷಿಯ ನಂತರ, MS ಮತ್ತು MT ಅಂಗಾಂಶಗಳ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯು MTT ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾದ ತಾಜಾ ಅಂಗಾಂಶಗಳಂತೆಯೇ ಇತ್ತು (ಚಿತ್ರ 4b). ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ವೆಲ್ ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳಿಗೆ (TD) T3 ಮತ್ತು ಡೆಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸುವುದರಿಂದ Ctrl ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ಸುಧಾರಣೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗಲಿಲ್ಲ, ಇದು ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳುವಲ್ಲಿ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ.
12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಮಾಧ್ಯಮದ ಮೇಲೆ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರಚೋದನೆ ಮತ್ತು T3/Dex ಪೂರಕದ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲು ಬಳಸಲಾಗುವ ನಾಲ್ಕು ಕೃಷಿ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಚಿತ್ರಿಸುವ ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ವಿನ್ಯಾಸ ರೇಖಾಚಿತ್ರ. b ಬಾರ್ ಗ್ರಾಫ್ ಎಲ್ಲಾ 4 ಕೃಷಿ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (Ctrl, TD, MC, ಮತ್ತು MT) 12 ದಿನಗಳ ನಂತರದ ಕೃಷಿ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ತಾಜಾ ಹೃದಯದ ಹೋಳುಗಳು (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ಮತ್ತು D12 MT), 12 (D12 MC) ಹೋಳುಗಳು/ಗುಂಪಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ####p < 0.0001, ###p < 0.001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು **p < 0.01 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). b ಬಾರ್ ಗ್ರಾಫ್ ಎಲ್ಲಾ 4 ಕೃಷಿ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (Ctrl, TD, MC, ಮತ್ತು MT) 12 ದಿನಗಳ ನಂತರದ ಕೃಷಿ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ತಾಜಾ ಹೃದಯದ ಹೋಳುಗಳು (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ಮತ್ತು D12 MT), 12 (D12 MC) ಹೋಳುಗಳು/ಗುಂಪಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ###p < 0.0001, ###p < 0.001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು **p < 0.01 D12 ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). b ಗೀಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್ಮಾ ಪೋಕಾಝಿವೇಟ್ ಕೊಲಿಚೆಸ್ಟ್ವೆನ್ನುಯು ಒಸೆಂಕು ಜಿಜ್ನೆಸ್ಪೋಸೊಬ್ನೋಸ್ಟಿ ಚೆರಸ್ 12 ದಿನ ಪೋಸ್ಲೇಟ್ ಕ್ಯುಲ್ಟಿವಿಂಗ್ 4 условиях культивирования (ಕಾಂಟ್ರೊಲ್, TD, MC ಮತ್ತು MT) по сравнению со со свежими срезами сердца (D0) (n = 185 ಮತ್ತು D12 MT), 12 (D12 MC) ಸ್ರೇಝೋವ್/ಗ್ರುಪ್ಪು ಆಫ್ ರಾಝ್ನಿಹ್ ಸ್ವಿನೇಯ್, ಪ್ರೊವೊಡಿಟ್ಯಾ ಒಡ್ನೋಸ್ಟೋರೋನಿ ಟೆಸ್ಟ್ ಅನೋವಾ; ####p <0,0001, ###p <0,001 по сравнению с D0 и **p < 0,01 по сравнению с D12 Ctrl). b ಬಾರ್ ಗ್ರಾಫ್ 12 ದಿನಗಳ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ನಂತರದ ಎಲ್ಲಾ 4 ಕೃಷಿ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (ನಿಯಂತ್ರಣ, TD, MC, ಮತ್ತು MT) ತಾಜಾ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳು (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, ಮತ್ತು D12 MT), 12 (D12 MC) ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ; ####p < 0.0001, ###p < 0.001 vs. D0 ಮತ್ತು **p < 0.01 by D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). b 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片(D0) (D0) (150) 18 (150) Ctrl、D12 TD 和D12 MT), 来自不同猪的12 (D12 MC)相比，**p <0.01 与D12控制).ಬಿ 4 12 (ಡಿ 12 ಎಂಸಿ) b ಗೀಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್ಮಾ, ಪೋಕಸೈವಯಸ್ 4 ನೇ ತರಗತಿಯಲ್ಲಿನ ಕುಲ್ಟಿವಿರೋವಾನಿಯ (ಕಾಂಟ್ರೋಲ್, ಟಿಡಿ, ಎಂಸಿ ಮತ್ತು ಎಂಟಿ) ಸರ್ಡಾ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ಮತ್ತು D12 MT), ರಾಝ್ನಿಹ್ ಸ್ವಿನಿ 12 (D12 MC) ರಿಂದ <0,0001, ###p <0,001 по сравнению с D0, **p <0,01 по сравнению с контролем D12). b ಹಿಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್ ಎಲ್ಲಾ 4 ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು (ನಿಯಂತ್ರಣ, TD, MC ಮತ್ತು MT) ತಾಜಾ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ (D0) ಹೋಲಿಸಿದರೆ (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ಮತ್ತು D12 MT), ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 12 (D12 MC) ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪು, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆ; ####p<0.0001, ###p<0.001 vs. D0, **p<0.01 vs. ನಿಯಂತ್ರಣ D12). c ಬಾರ್ ಗ್ರಾಫ್ ಎಲ್ಲಾ 4 ಕಲ್ಚರ್ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (Ctrl, TD, MC, ಮತ್ತು MT) ಕಲ್ಚರ್ ನಂತರ 12 ದಿನಗಳ ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಫ್ಲಕ್ಸ್‌ನ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ತಾಜಾ ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಿಗೆ (D0) ಹೋಲಿಸಿದರೆ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ (n = ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 6 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪಿಗೆ, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ###p < 0.001, D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು ***p < 0.001 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). c ಬಾರ್ ಗ್ರಾಫ್ ಎಲ್ಲಾ 4 ಕಲ್ಚರ್ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (Ctrl, TD, MC, ಮತ್ತು MT) ಕಲ್ಚರ್ ನಂತರ 12 ದಿನಗಳ ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಫ್ಲಕ್ಸ್‌ನ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ತಾಜಾ ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಿಗೆ (D0) ಹೋಲಿಸಿದರೆ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ (n = ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 6 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪಿಗೆ, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ###p < 0.001, D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು ***p < 0.001 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). c ಗೀಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್ಮಾ ಪೋಕಾಝಿವಾಟ್ ಕೋಲಿಚೆಸ್ಟ್ವೆನ್ಯು ಒಸೆಂಕು ಪೋಟೋ ಗ್ಲುಕೋಸ್ ಚೆರೆಸ್ 12 ದಿನ ಪೋಸ್ಲೆ ಕ್ಯೂಲ್ಟಿವಿರೋವ್4 условиях культивирования (ಕಾಂಟ್ರೊಲ್, TD, MC ಮತ್ತು MT) PO ಸ್ರವನೆನಿಯು ಮೂಲಕ ಸ್ವೇಜಿಮಿ ಸರ್ಜಾಮಿ ಸರ್ಡ್ಸಾ (D0) (n = 6 ರಾಝಿನ್ ಸ್ವೀನಿ, ಅನೋವಾ ###p < 0,001 по сравнению с D0 и ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c ಹಿಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್ ತಾಜಾ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ (D0) ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಎಲ್ಲಾ 4 ಕೃಷಿ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (ನಿಯಂತ್ರಣ, TD, MC ಮತ್ತು MT) 12 ದಿನಗಳ ಕೃಷಿ ನಂತರದ ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಹರಿವಿನ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ (n = ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 6 ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪು, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗಿದೆ; ###p < 0.001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು ***p < 0.001 D12 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ Ctrl). c 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片(D0) 廎比天的葡萄糖通量定量（n = 6 片/组，来自不同猪，单向执行ANOVA 测试0.001 与D12 Ctrl 相比). C 条形图 显示 所有 4 种 条件 （ctrl 、 td , mc 和 mt） 新鲜 心脏 切片 切 示 切 燇 切 示ಚಿತ್ರ 12测试；###p < 0.001, 与D0 相比，***p <0.001 与D12 Ctrl 相比）。 c ಗೀಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್ಮಾ, ಪೋಕಸೈವಯಸ್ ಕೋಲಿಚೆಸ್ಟ್ವೆನ್ನುಯು ಒಸ್ಸೆಂಕು ಪೋಟೋಕಾ ಗ್ಲುಕೋಸಿ ಚೆರೆಜ್ 12 ನೇ ಪೋಸ್ಟ್ ಕ್ಯುಲ್ಟ್4 условий культивирования (ಕಾಂಟ್ರೊಲ್, TD, MC ಮತ್ತು MT) PO ಸ್ರವನೆನಿಯು ಮೂಲಕ ಸ್ವೇಜಿಮಿ ಸರ್ಜಾಮಿ ಸರ್ಡಾಸ್ (D0) (n = 6 ರಾಝಿನ್ ಸ್ವೀನಿ, ಅನೋವಾ ###p < 0,001 по сравнению с D0, ***p < 0,001 по сравнению с D12 (контроль). c ತಾಜಾ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ (D0) ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಎಲ್ಲಾ 4 ಕೃಷಿ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಗೆ (ನಿಯಂತ್ರಣ, TD, MC, ಮತ್ತು MT) 12 ದಿನಗಳ ಕೃಷಿ ನಂತರದ ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಹರಿವಿನ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣವನ್ನು ತೋರಿಸುವ ಹಿಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್ (n = 6 ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪು, ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ, ಏಕಪಕ್ಷೀಯ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗಿದೆಯೇ, ###p < 0.001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ***p < 0.001 D12 (ನಿಯಂತ್ರಣ) ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ.d ಹತ್ತು ಪ್ರಾದೇಶಿಕ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗ ಬಿಂದುಗಳಲ್ಲಿ ತಾಜಾ (ನೀಲಿ), ದಿನ 12 MC (ಹಸಿರು), ಮತ್ತು ದಿನ 12 MT (ಕೆಂಪು) ಅಂಗಾಂಶಗಳ ತಳಿ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಪ್ಲಾಟ್‌ಗಳು (n = 4 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆ; ಗುಂಪುಗಳ ನಡುವೆ ಯಾವುದೇ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸವಿರಲಿಲ್ಲ). e 10-12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಸ್ಥಿರ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (Ctrl) ಅಥವಾ MT ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (MT) ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಿದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ತಾಜಾ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ (D0) ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಿದ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ತೋರಿಸುವ ಜ್ವಾಲಾಮುಖಿ ಪ್ಲಾಟ್. f ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಿದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ ಸಾರ್ಕೊಮೆರ್ ಜೀನ್‌ಗಳ ಹೀಟ್‌ಮ್ಯಾಪ್. ದೋಷ ಪಟ್ಟಿಗಳು ಸರಾಸರಿ ± ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನವನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತವೆ.
ಕೊಬ್ಬಿನಾಮ್ಲ ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಣದಿಂದ ಗ್ಲೈಕೋಲಿಸಿಸ್‌ಗೆ ಬದಲಾಯಿಸುವಿಕೆಯ ಮೇಲಿನ ಚಯಾಪಚಯ ಅವಲಂಬನೆಯು ಕಾರ್ಡಿಯೊಮಯೊಸೈಟ್ ಡಿಡಿಫರೆನ್ಷಿಯೇಶನ್‌ನ ವಿಶಿಷ್ಟ ಲಕ್ಷಣವಾಗಿದೆ. ಅಪಕ್ವ ಕಾರ್ಡಿಯೊಮಯೊಸೈಟ್‌ಗಳು ಪ್ರಾಥಮಿಕವಾಗಿ ATP ಉತ್ಪಾದನೆಗೆ ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ಕ್ರಿಸ್ಟೇ5,32 ನೊಂದಿಗೆ ಹೈಪೋಪ್ಲಾಸ್ಟಿಕ್ ಮೈಟೋಕಾಂಡ್ರಿಯಾವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ. ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಬಳಕೆಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳು MC ಮತ್ತು MT ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ, ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಬಳಕೆಯು ದಿನ 0 ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿರುವಂತೆಯೇ ಇತ್ತು ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ (ಚಿತ್ರ 4c). ಆದಾಗ್ಯೂ, Ctrl ಮಾದರಿಗಳು ತಾಜಾ ಅಂಗಾಂಶಕ್ಕೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಬಳಕೆಯಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹ ಹೆಚ್ಚಳವನ್ನು ತೋರಿಸಿವೆ. CTCM ಮತ್ತು T3/Dex ಸಂಯೋಜನೆಯು ಅಂಗಾಂಶದ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 12-ದಿನಗಳ ಕಲ್ಚರ್ಡ್ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಮೆಟಾಬಾಲಿಕ್ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಅನ್ನು ಸಂರಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಇದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, MT ಮತ್ತು MS ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ತಾಜಾ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದಲ್ಲಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ ಮಟ್ಟಗಳು ಒಂದೇ ಆಗಿರುತ್ತವೆ ಎಂದು ಸ್ಟ್ರೈನ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ತೋರಿಸಿದೆ (ಚಿತ್ರ 4d).
ಹೃದಯ ಸ್ಲೈಸ್ ಅಂಗಾಂಶದ ಜಾಗತಿಕ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಭೂದೃಶ್ಯದ ಮೇಲೆ CTCM ಮತ್ತು T3/Dex ನ ಒಟ್ಟಾರೆ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲು, ನಾವು ನಾಲ್ಕು ವಿಭಿನ್ನ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಂದ ಹೃದಯದ ಚೂರುಗಳ ಮೇಲೆ RNAseq ಅನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಿದ್ದೇವೆ (ಪೂರಕ ದತ್ತಾಂಶ 1). ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, MT ವಿಭಾಗಗಳು ತಾಜಾ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಹೋಲಿಕೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿವೆ, 13,642 ಜೀನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಕೇವಲ 16 ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ನಾವು ಮೊದಲೇ ತೋರಿಸಿದಂತೆ, Ctrl ಚೂರುಗಳು ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ 10-12 ದಿನಗಳ ನಂತರ 1229 ವಿಭಿನ್ನವಾಗಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಿದ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿವೆ (ಚಿತ್ರ 4e). ಈ ಡೇಟಾವನ್ನು ಹೃದಯ ಮತ್ತು ಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್ ಜೀನ್‌ಗಳ qRT-PCR ನಿಂದ ದೃಢಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 7a-c). ಕುತೂಹಲಕಾರಿಯಾಗಿ, Ctrl ವಿಭಾಗಗಳು ಹೃದಯ ಮತ್ತು ಕೋಶ ಚಕ್ರ ಜೀನ್‌ಗಳ ಡೌನ್‌ರೆಗ್ಯುಲೇಷನ್ ಮತ್ತು ಉರಿಯೂತದ ಜೀನ್ ಕಾರ್ಯಕ್ರಮಗಳ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿವೆ. ಈ ದತ್ತಾಂಶಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ದೀರ್ಘಕಾಲೀನ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ನಂತರ ಸಂಭವಿಸುವ ಡಿಡಿಫರೆನ್ಷಿಯೇಶನ್ ಅನ್ನು MT ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 8a,b). ಸಾರ್ಕೊಮೆರ್ ಜೀನ್‌ಗಳ ಎಚ್ಚರಿಕೆಯ ಅಧ್ಯಯನವು MT ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಮಾತ್ರ ಸಾರ್ಕೊಮೆರ್ (ಚಿತ್ರ 4f) ಮತ್ತು ಅಯಾನ್ ಚಾನಲ್ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 9) ಅನ್ನು ಎನ್‌ಕೋಡ್ ಮಾಡುವ ಜೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಸಂರಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ, Ctrl, TD ಮತ್ತು MC ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಅವುಗಳನ್ನು ನಿಗ್ರಹದಿಂದ ರಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ. ಯಾಂತ್ರಿಕ ಮತ್ತು ಹ್ಯೂಮರಲ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯ (T3/Dex) ಸಂಯೋಜನೆಯೊಂದಿಗೆ, ಹಾರ್ಟ್ ಸ್ಲೈಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೋಮ್ 12 ದಿನಗಳ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ನಂತರ ತಾಜಾ ಹಾರ್ಟ್ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಂತೆಯೇ ಉಳಿಯಬಹುದು ಎಂದು ಈ ಡೇಟಾ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.
ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿನ ಕಾರ್ಡಿಯೋಮಯೊಸೈಟ್‌ಗಳ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು MT ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಉತ್ತಮವಾಗಿ ಸಂರಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ ಎಂಬ ಅಂಶದಿಂದ ಈ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಸಂಶೋಧನೆಗಳು ಬೆಂಬಲಿತವಾಗಿವೆ, ಇದನ್ನು ಅಖಂಡ ಮತ್ತು ಸ್ಥಳೀಯ ಕನೆಕ್ಸಿನ್ 43 (ಚಿತ್ರ 5a) ತೋರಿಸಿದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, MT ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿನ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ತಾಜಾ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ ಹೋಲುತ್ತದೆ (ಚಿತ್ರ 5b). ಯಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರಚೋದನೆ ಮತ್ತು T3/Dex ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಸಂಯೋಜನೆಯು ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ ಹೃದಯ ರಚನೆಯನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಸಂರಕ್ಷಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಈ ಡೇಟಾ ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.
ಹೊಸದಾಗಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಲ್ಲಿ (D0) ಅಥವಾ ನಾಲ್ಕು ಹೃದಯ ವಿಭಾಗ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಿದ ಟ್ರೋಪೋನಿನ್-ಟಿ (ಹಸಿರು), ಕನೆಕ್ಸಿನ್ 43 (ಕೆಂಪು), ಮತ್ತು DAPI (ನೀಲಿ) ಗಳ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಇಮ್ಯುನೊಫ್ಲೋರೊಸೆನ್ಸ್ ಚಿತ್ರಗಳು (ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 100 µm). ). ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯ (n = 7 (D0 ಮತ್ತು D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ಮತ್ತು D12 MT) ಚೂರುಗಳು/ಗುಂಪಿನ ಕೃತಕ ಬುದ್ಧಿಮತ್ತೆಯ ಪರಿಮಾಣೀಕರಣ, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ####p < 0.0001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು *p < 0.05, ಅಥವಾ ****p < 0.0001 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯ (n = 7 (D0 ಮತ್ತು D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ಮತ್ತು D12 MT) ಚೂರುಗಳು/ಗುಂಪಿನ ಕೃತಕ ಬುದ್ಧಿಮತ್ತೆಯ ಪರಿಮಾಣೀಕರಣ, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; #### p < 0.0001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು *p < 0.05, ಅಥವಾ ****p < 0.0001 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). ಕೊಲಿಚೆಸ್ಟ್ವೆನ್ನಯಾ ಒಸೆಂಕಾ ರಚನೆ Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ಮತ್ತು D12 MT) срезов/групу от разных свиней, ಪ್ರೊವೆಡೆನ್ ಒಡ್ನೊಫ್ಯಾಕ್ಟರ್ ಟೆಸ್ಟ್ ANOVA <#,#00; сравнению с D0 и *p < 0,05 или ****p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ಕೃತಕ ಬುದ್ಧಿಮತ್ತೆ (n = 7 (D0 ಮತ್ತು D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ಮತ್ತು D12 MT) ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗಿದೆ; #### p < 0.0001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು *p < 0.05 ಅಥವಾ ****p < 0.0001 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ).对不同猪的心脏组织结构完整性（n = 7（D0 和D12 Ctrl）、5（D12 TD,D12 MC 和D12 ಎಮ್‌ಟಿ. 0.0001 与D12 Ctrl 相比）。对 不同 猪 ಸುಮಾರು人工 智能量 化 进行 单向 单向 单向 测试 ； ########### p <0.0001 与D0 和*p <0.001 与D0 和*p <0.0.0 0.0001 与D12 Ctrl 相比).ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಲ್ಲಿ (n = 7 (D0 ಮತ್ತು D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ಮತ್ತು D12 MT) ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪು) ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯೊಂದಿಗೆ ಕೃತಕ ಬುದ್ಧಿಮತ್ತೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆಯ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ;#### p < 0,0001 по сравнению с D0 и *p < 0,05 или ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). #### p < 0.0001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಮತ್ತು *p < 0.05 ಅಥವಾ ****p < 0.0001 D12 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ Ctrl). b ಮ್ಯಾಸನ್‌ನ ಟ್ರೈಕ್ರೋಮ್ ಸ್ಟೇನ್ (ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, ಮತ್ತು D12 MC), 9 (D12 MT) ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪಿನಿಂದ ಕಲೆ ಹಾಕಿದ ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಿಗೆ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು ಮತ್ತು ಪರಿಮಾಣೀಕರಣ ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ###p < 0.0001 D0 ಮತ್ತು ***p < 0.001 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಅಥವಾ ****p < 0.0001 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). b ಮ್ಯಾಸನ್‌ನ ಟ್ರೈಕ್ರೋಮ್ ಸ್ಟೇನ್ (ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, ಮತ್ತು D12 MC), 9 (D12 MT) ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪಿನಿಂದ ಕಲೆ ಹಾಕಿದ ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಿಗೆ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು ಮತ್ತು ಪರಿಮಾಣೀಕರಣ ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ, ಏಕಮುಖ ANOVA ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ###p < 0.0001 D0 ಮತ್ತು ***p < 0.001 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಅಥವಾ ****p < 0.0001 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). b ರೆಪ್ರೆಸೆಂಟೈವ್ನ್ಯ ಐಸೊಬ್ರಾಜೆನಿಯಾ ಮತ್ತು ಕೊಲಿಚೆಸ್ಟ್ವೆನ್ನ ಒಸೆಂಕಾ ಸ್ರೆಸೊವ್ ಸರ್ಡ್ಸಾ, ಒಕ್ರಾಶೆನ್ಯಮ್ ಟ್ರಿಮ್ಸ್ನಾಮ್ (ಮಾಸಿಕ ಲೈನಿಕಾ = 500 ಎಮ್‌ಕೆಎಮ್) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ಮತ್ತು D12 MC), 9 (D12 MT) ಒಡ್ನೋಸ್ಟೋರೋನಿ ಟೆಸ್ಟ್ ANOVA; ####p < 0,0001 по сравнению с D0 и ***p < 0,001 или ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). b ಮ್ಯಾಸನ್‌ನ ಟ್ರೈಕ್ರೋಮ್ ಸ್ಟೇನ್‌ನಿಂದ ಕಲೆ ಹಾಕಿದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು ಮತ್ತು ಪರಿಮಾಣೀಕರಣ (ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ಮತ್ತು D12 MC), 9 (D12 MT) ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪು ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ, ಏಕಮುಖ ANOVA ಅನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗಿದೆ; ####p < 0.0001 vs. D0 ಮತ್ತು ***p < 0.001 ಅಥವಾ ****p < 0.0001 vs. D12 Ctrl). b 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像和量化（比例尺= 500 µm（n =2010（n Ctrl.与D0 相比，***p < 0.001，或****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）。 b 用 ಮಾಸನ್ 三 色 染料 的 心脏 切片 的 代表性 和 量化 （比 ಉದಾ 尺 尺 剼 = 500 µm 、 d12 ctrl , d12 td 和 d12 mc） 来自 不同 的 9 个 d12 mt 切片 切片 切片 切片切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片/组 ， ， 进行单因素方差分析； #### p <0.0001 与 d0相比,***p <0.001,或****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）。 b ರೆಪ್ರೆಜೆಂಟೈವ್ನ್ಯ ಇಸೊಬ್ರಜೆನಿಯಾ ಮತ್ತು ಕೊಲಿಚೆಸ್ಟ್ವೆನ್ನ ಒಸೆಂಕಾ ಸ್ರೆಸೊವ್ ಸೆರ್ಡಿಸಾ, ಒಕ್ರಾಶೆನ್ ಟ್ರಿಮ್ಸ್ನಾಮ್ (ಜಬ್ಸಾಮ್ линейка = 500 ಎಮ್‌ಕೆಎಮ್) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ಮತ್ತು D12 MC), 9 (D12 MT) ರಜಾನಿಕ ಸ್ವೀನಿ / ಗ್ರೂಪ್‌ಗಳು, # ಸೂಚನೆ, # ಸೂಚನೆ 0,0001 ಪೋ сравнению с D0, ***p < 0,001 или ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). b ಮ್ಯಾಸನ್‌ನ ಟ್ರೈಕ್ರೋಮ್ (ಸ್ಕೇಲ್ ಬಾರ್ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ಮತ್ತು D12 MC), ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳು/ಗುಂಪಿನಿಂದ 9 (D12 MT) ವಿಭಾಗಗಳಿಂದ ಕಲೆ ಹಾಕಿದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು ಮತ್ತು ಪರಿಮಾಣೀಕರಣ, ಒಂದು ANOVA ವಿಧಾನ; ####p < 0.0001 D0 ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ***p < 0.001 ಅಥವಾ ****p < 0.0001 D12 Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ).ದೋಷ ಪಟ್ಟಿಗಳು ಸರಾಸರಿ ± ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನವನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತವೆ.
ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಹೃದಯದ ಅಂಗಾಂಶದ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುವ ಮೂಲಕ ಹೃದಯದ ಹೈಪರ್ಟ್ರೋಫಿಯನ್ನು ಅನುಕರಿಸುವ CTCM ನ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಯಿತು. CTCM ನಲ್ಲಿ, ಗರಿಷ್ಠ ಗಾಳಿಯ ಕೋಣೆಯ ಒತ್ತಡವು 80 mmHg ನಿಂದ 80 mmHg ಗೆ ಏರಿತು. ಕಲೆ. (ಸಾಮಾನ್ಯ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆ) 140 mmHg ವರೆಗೆ ಕಲೆ. (ಚಿತ್ರ 6a). ಇದು ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆಯಲ್ಲಿ 32% ಹೆಚ್ಚಳಕ್ಕೆ ಅನುರೂಪವಾಗಿದೆ (ಚಿತ್ರ 6b), ಇದನ್ನು ಹೈಪರ್ಟ್ರೋಫಿಯಲ್ಲಿ ಕಂಡುಬರುವಂತೆಯೇ ಸಾರ್ಕೊಮೆರ್ ಉದ್ದವನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಅನುಗುಣವಾದ ಶೇಕಡಾವಾರು ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆ ಎಂದು ಹಿಂದೆ ತೋರಿಸಲಾಗಿತ್ತು. ಆರು ದಿನಗಳ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಸಂಕೋಚನ ಮತ್ತು ವಿಶ್ರಾಂತಿ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆ ಮತ್ತು ವೇಗ ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುತ್ತದೆ (ಚಿತ್ರ 6c). MT ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಂದ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ಆರು ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಸಾಮಾನ್ಯ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆ (MT (ಸಾಮಾನ್ಯ)) ಅಥವಾ ಓವರ್‌ಸ್ಟ್ರೆಚ್ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಗೆ (MT (OS)) ಒಳಪಡಿಸಲಾಯಿತು. ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ ಈಗಾಗಲೇ ನಾಲ್ಕು ದಿನಗಳ ನಂತರ, MT (ಸಾಮಾನ್ಯ) ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಗೆ (ಚಿತ್ರ 7a) ಹೋಲಿಸಿದರೆ MT (OS) ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಹೈಪರ್ಟ್ರೋಫಿಕ್ ಬಯೋಮಾರ್ಕರ್ NT-ProBNP ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಆರು ದಿನಗಳ ಕಲ್ಚರ್ ನಂತರ, MT (OS) (ಚಿತ್ರ 7b) ನಲ್ಲಿನ ಜೀವಕೋಶದ ಗಾತ್ರವು MT ಹೃದಯದ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ (ಸಾಮಾನ್ಯ) ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಅತಿಯಾಗಿ ವಿಸ್ತರಿಸಿದ ಅಂಗಾಂಶಗಳಲ್ಲಿ NFATC4 ಪರಮಾಣು ಸ್ಥಳಾಂತರವು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ (ಚಿತ್ರ 7c). ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಹೈಪರ್‌ಡಿಸ್ಟೆನ್ಶನ್ ನಂತರ ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಮರುರೂಪಿಸುವಿಕೆಯ ಪ್ರಗತಿಶೀಲ ಬೆಳವಣಿಗೆಯನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು CTCM ಸಾಧನವನ್ನು ಸ್ಟ್ರೆಚ್-ಪ್ರೇರಿತ ಹೃದಯ ಹೈಪರ್ಟ್ರೋಫಿ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ವೇದಿಕೆಯಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು ಎಂಬ ಪರಿಕಲ್ಪನೆಯನ್ನು ಬೆಂಬಲಿಸುತ್ತವೆ.
ಗಾಳಿಯ ಕೋಣೆಯ ಒತ್ತಡ, ದ್ರವ ಕೋಣೆಯ ಒತ್ತಡ ಮತ್ತು ಅಂಗಾಂಶ ಚಲನೆಯ ಅಳತೆಗಳ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಕುರುಹುಗಳು ಕೋಣೆಯ ಒತ್ತಡವು ದ್ರವ ಕೋಣೆಯ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ದೃಢಪಡಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಅಂಗಾಂಶದ ತುಣುಕಿನ ಅನುಗುಣವಾದ ಚಲನೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ. b ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ವಿಸ್ತರಿಸಿದ (ಕಿತ್ತಳೆ) ಮತ್ತು ಅತಿಯಾಗಿ ವಿಸ್ತರಿಸಿದ (ನೀಲಿ) ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಹಿಗ್ಗಿಸಲಾದ ಶೇಕಡಾವಾರು ಮತ್ತು ಹಿಗ್ಗಿಸಲಾದ ದರ ವಕ್ರಾಕೃತಿಗಳು. c ಸೈಕಲ್ ಸಮಯವನ್ನು ತೋರಿಸುವ ಬಾರ್ ಗ್ರಾಫ್ (n = 19 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು, ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳಿಂದ), ಸಂಕೋಚನ ಸಮಯ (n = 18-19 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು, ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳಿಂದ), ವಿಶ್ರಾಂತಿ ಸಮಯ (n = 19 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು, ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳಿಂದ) ), ಅಂಗಾಂಶ ಚಲನೆಯ ವೈಶಾಲ್ಯ (n = 14 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು, ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳಿಂದ), ಗರಿಷ್ಠ ಸಿಸ್ಟೊಲಿಕ್ ವೇಗ (n = 14 ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು, ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳಿಂದ) ಮತ್ತು ಗರಿಷ್ಠ ವಿಶ್ರಾಂತಿ ದರ (n = 14 (D0), 15 (D6) ) ವಿಭಾಗಗಳು/ಗುಂಪುಗಳು) ವಿಭಿನ್ನ ಹಂದಿಗಳಿಂದ), ಎರಡು ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಯ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯು ಯಾವುದೇ ನಿಯತಾಂಕದಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ತೋರಿಸಲಿಲ್ಲ, ಈ ನಿಯತಾಂಕಗಳು ಓವರ್‌ವೋಲ್ಟೇಜ್‌ನೊಂದಿಗೆ 6 ದಿನಗಳ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುತ್ತವೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ದೋಷ ಬಾರ್‌ಗಳು ಸರಾಸರಿ ± ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನವನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತವೆ.
ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ MT ಸಾಮಾನ್ಯ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆ (ನಾರ್ಮ್) ಅಥವಾ ಓವರ್‌ಸ್ಟ್ರೆಚಿಂಗ್ (OS) ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, ಮತ್ತು D4 MTOS) ಚೂರುಗಳು/ಗುಂಪಿನ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಿದ ಹೃದಯ ಚೂರುಗಳಿಂದ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ NT-ProBNP ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಬಾರ್ ಗ್ರಾಫ್ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ, ದ್ವಿಮುಖ ANOVA ಅನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; **p < ಸಾಮಾನ್ಯ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ 0.01). ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ MT ಸಾಮಾನ್ಯ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆ (ನಾರ್ಮ್) ಅಥವಾ ಓವರ್‌ಸ್ಟ್ರೆಚಿಂಗ್ (OS) ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, ಮತ್ತು D4 MTOS) ಚೂರುಗಳು/ಗುಂಪಿನ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಿದ ಹೃದಯ ಚೂರುಗಳಿಂದ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ NT-ProBNP ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಬಾರ್ ಗ್ರಾಫ್ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ, ದ್ವಿಮುಖ ANOVA ಅನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; **p < ಸಾಮಾನ್ಯ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ 0.01).ಸಾಮಾನ್ಯ MT ಸ್ಟ್ರೆಚ್ (ನಾರ್ಮ್) ಅಥವಾ ಓವರ್‌ಸ್ಟ್ರೆಚ್ (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, ಮತ್ತು D4).MTOS) ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು / ಗುಂಪಿನ ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಲಾದ ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಿಂದ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ NT-ProBNP ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ ಹಿಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್, ವ್ಯತ್ಯಾಸದ ಎರಡು-ಅಂಶ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ;**p <0,01 по сравнению с нормальным растяжением). **p < 0.01 ಸಾಮಾನ್ಯ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). ಎ浓度的条形图量化（n = 4 (D2 MTNorm)、3（D2 MTOS,D4 MTNorm 和D4 MTOS 0.01). MT ನಾರ್ಮಲ್ ಸ್ಟ್ರೆಚ್ (ನಾರ್ಮ್) ಅಥವಾ ಓವರ್‌ಸ್ಟ್ರೆಚ್ (ಓಎಸ್) ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm和D4 MTOS) ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಲಾದ ಹೃದಯ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಲ್ಲಿ NT-ProBNP ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ猪的切片/组，可以双向方方发发动; ಸಾಮಾನ್ಯ ವಿಸ್ತರಣೆಯೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, p <0.01).ಹಿಸ್ಟೋಗ್ರಾಮ್ ಸಾಮಾನ್ಯ MT ಸ್ಟ್ರೆಚ್ (ನಾರ್ಮ್) ಅಥವಾ ಓವರ್‌ಸ್ಟ್ರೆಚ್ (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm) ಮತ್ತು D4 MTOS) ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪಿನ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಲಾದ ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳಲ್ಲಿ NT-ProBNP ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ, ವ್ಯತ್ಯಾಸದ ದ್ವಿಮುಖ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ;**p <0,01 по сравнению с нормальным растяжением). **p < 0.01 ಸಾಮಾನ್ಯ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). b ಟ್ರೋಪೋನಿನ್-T ಮತ್ತು WGA (ಎಡ) ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ಗಾತ್ರದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (ಬಲ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ಜೀವಕೋಶಗಳು/ಗುಂಪಿನಿಂದ ಕಲೆ ಹಾಕಿದ ಹೃದಯದ ಚೂರುಗಳ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 10 ವಿಭಿನ್ನ ಚೂರುಗಳಿಂದ, ಎರಡು ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ****p < 0.0001 ಸಾಮಾನ್ಯ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). b ಟ್ರೋಪೋನಿನ್-T ಮತ್ತು WGA (ಎಡ) ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ಗಾತ್ರದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (ಬಲ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ಜೀವಕೋಶಗಳು/ಗುಂಪಿನಿಂದ ಕಲೆ ಹಾಕಿದ ಹೃದಯದ ಚೂರುಗಳ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 10 ವಿಭಿನ್ನ ಚೂರುಗಳಿಂದ, ಎರಡು ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ****p < 0.0001 ಸಾಮಾನ್ಯ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). b ರೆಪ್ರೆಜೆಂಟೈವ್ನಿ ಇಸೊಬ್ರಜೆನಿಯಾ ಸ್ರೆಜೋವ್ ಸರ್ಡಿಸ್ಯಾ, ಒಕ್ರಾಶೆನ್ ಟ್ರೋಪೋನಿಮ್-ಟಿ ಮತ್ತು ಅಗಾಗ್ (ಸ್ಲೇವಾ) ಮತ್ತು ಕೋಲ್ ಒಪ್ರೆಡೆಲೆನಿಯ ರಝ್ಮೇರಾ ಕ್ಲೆಟೊಕ್ (ಸ್ಪ್ರವಾ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ಕ್ಲೆಟೋಕ್/ಗ್ರುಪ್ಪು 10 ರ ಅವಧಿಯ ಶ್ರೇಣಿಗಳು ಪ್ರೊವೊಡಿಟ್ಸ್ಯಾ ಹ್ವೊಸ್ಟೊವೊಯ್ t-ಕ್ರಿಟೇರಿ ಸ್ಟ್ಯೂಡೆಂಟಾ; ****p <0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b ಟ್ರೋಪೋನಿನ್-T ಮತ್ತು AZP (ಎಡ) ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ಗಾತ್ರದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (ಬಲ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ಜೀವಕೋಶಗಳು/ಗುಂಪಿನಿಂದ ಕಲೆ ಹಾಕಿದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 10 ವಿಭಿನ್ನ ವಿಭಾಗಗಳಿಂದ, ಎರಡು ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು; ****p < 0.0001 ಸಾಮಾನ್ಯ ತಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). ಬೌ MTOS）,来自不同猪的10 个不同切片的369（D6 MTNorm）细胞/组,两进行有尾学生t 检验；与正常拉伸相比,****p <0.0001）。 b ಕ್ಯಾಲ್ಕೇರಿನ್-ಟಿ ಮತ್ತು ಡಬ್ಲ್ಯೂಜಿಎ (ಎಡ) ಮತ್ತು ಕೋಶ ಗಾತ್ರ (ಬಲ) (n = 330 (D6 MTOS), 10 ವಿಭಿನ್ನ ಚೂರುಗಳಿಂದ 369 (D6 MTNorm)) ನೊಂದಿಗೆ ಕಲೆ ಹಾಕಿದ ಹೃದಯದ ಚೂರುಗಳ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು ಜೀವಕೋಶಗಳು/ಪರೀಕ್ಷೆಗಳು; ಸಾಮಾನ್ಯ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ，****p < 0.0001). b ರೆಪ್ರೆಸೆಂಟೈವ್ನ್ಯ ಇಸೊಬ್ರಜೆನಿಯಾ ಸ್ರೆಸೊವ್ ಸೆರ್ಡಿಸಾ, ಒಕ್ರಾಶೆನ್ನಿಹ್ ಟ್ರೊಪೊನಿಮ್-ಟಿ ಮತ್ತು ಎಗ್ಗ್ (ಸ್ಲೇವಾ) ಮತ್ತು ಕೋಲ್ವಿಂಗ್ ರ್ಯಾಜ್ಮೇರಾ ಕ್ಲೆಟೊಕ್ (ಸ್ಪ್ರಾವ್ಯಾ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ಅಂದರೆ 10 ರ್ಯಾಝ್ಲಿಚ್ ಸ್ಟ್ರೇಜೋವ್‌ನಿಂದ ರಾಝ್ಮೀರಾ ಸ್ವಿನಿಕ್ಸ್/ಗ್ಲೇಟ್‌ಕ್ಸ್, ಕ್ರಿಟೇರಿ ಸ್ಟ್ಯೂಡೆಂಟಾ; ****p <0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b ಟ್ರೋಪೋನಿನ್-T ಮತ್ತು AZP (ಎಡ) ದಿಂದ ಕಲೆ ಹಾಕಿದ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶದ ಗಾತ್ರದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ (ಬಲ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ 10 ವಿಭಿನ್ನ ವಿಭಾಗಗಳಿಂದ) ಜೀವಕೋಶಗಳು/ಗುಂಪು, ಎರಡು-ಬಾಲದ ಮಾನದಂಡ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ t; ****p < 0.0001 ಸಾಮಾನ್ಯ ತಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ). c ಟ್ರೋಪೋನಿನ್-T ಮತ್ತು NFATC4 ಗಾಗಿ ಇಮ್ಯುನೊಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ದಿನ 0 ಮತ್ತು 6 ನೇ ದಿನದ MTOS ಹೃದಯ ಚೂರುಗಳಿಗೆ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು ಮತ್ತು ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ CM ಗಳ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳಿಗೆ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ಚೂರುಗಳು/ಗುಂಪಿಗೆ NFATC4 ನ ಸ್ಥಳಾಂತರದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ, ಎರಡು ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; *p < 0.05). c ಟ್ರೋಪೋನಿನ್-T ಮತ್ತು NFATC4 ಗಾಗಿ ಇಮ್ಯುನೊಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾದ ದಿನ 0 ಮತ್ತು 6 ನೇ ದಿನದ MTOS ಹೃದಯ ಚೂರುಗಳಿಗೆ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು ಮತ್ತು ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ CM ಗಳ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ಗಳಿಗೆ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ಚೂರುಗಳು/ಗುಂಪಿಗೆ NFATC4 ನ ಸ್ಥಳಾಂತರದ ಪ್ರಮಾಣೀಕರಣ, ಎರಡು ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ; *p < 0.05). ಸಿ ರೆಪ್ರೆಜೆಂಟೈವ್ನ್ಯ ಐಸೊಬ್ರಜೆನಿಯ ಸ್ರೆಸೊವ್ ಸರ್ಡಿಸಾ 0 ಮತ್ತು 6 ದಿನ MTOS, ಇಮ್ಮುನೊಮೆಚೆನಿಕ್ಸ್ ಟ್ರೊಪೊನಿನಾ-TCT4, ಕೋಲಿಚೆಸ್ಟ್ವೆನ್ನಯ ಒಸೆಂಕಾ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಲೊಕಾಸಿಗಳು NFATC4 ಮತ್ತು ಯಾಡ್ರಾ ಕಾವರ್ನೋಝ್ನಿಹ್ ಕ್ಲೆಟೋಕ್ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ಸ್ಟ್ರೀಝೋವ್/ಗ್ರೂಪ್ಸ್ ವೈಪೋಲ್ನ್ಯಾತ್ಸ್ಯಾ двусторонний t-ಕ್ರಿಟೇರಿ ಸ್ಟ್ಯೂಡೆಂಟಾ; *p <0,05). c 0 ಮತ್ತು 6 ದಿನಗಳ MTOS ನಲ್ಲಿ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಚಿತ್ರಗಳು, ಟ್ರೋಪೋನಿನ್-T ಮತ್ತು NFATC4 ಗಾಗಿ ಇಮ್ಯುನೊಲೇಬಲ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು ಗುಹೆಯ ಕೋಶಗಳ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ನಲ್ಲಿ NFATC4 ಸ್ಥಳಾಂತರದ ಪರಿಮಾಣೀಕರಣ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ ಚೂರುಗಳು/ಗುಂಪು) ಎರಡು ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು; *p < 0.05). c 用于肌钙蛋白-T 和NFATC4心脏切片的代表性图像，以及来自不同猪的NFATC4 易位至CM 细胞核的量化切片/组, 进行双尾学生t 检验；*p <0.05)。 c ಕ್ಯಾಲ್ಕನಿನ್-T ಮತ್ತು NFATC4 ಇಮ್ಯುನೊಲೇಬಲಿಂಗ್ 第0天和第6天MTOS ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳ ಪ್ರತಿನಿಧಿ ಚಿತ್ರಗಳು, ಮತ್ತು NFATC4 ವಿವಿಧ NFATC4 易位至CM ಸೆಲ್ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ನಿಂದ 的quantity化 (n = 3 (D0TOS)切礼/组, 时间双尾学生et 电影；*p <0.05). c ರೆಪ್ರೆಸೆಂಟೈವ್ನ್ಯ ಐಸೊಬ್ರಜೆನಿಯ ಸ್ರೆಜೋವ್ ಸರ್ಡಿಶಾ MTOS ನಲ್ಲಿ 0 ಮತ್ತು 6 ದಿನದಲ್ಲಿ ಇಮ್ಮುನೊಮಾರ್ಕಿರೋವ್ಕಿ ಟ್ರೋಪೋನಿಕ್ಸ್ ಎನ್ಎಫ್ಎ-4 ಕೋಲಿಚೆಸ್ಟ್ವೆನ್ನಯ ಆಸ್ಸೆಂಕಾ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಲೊಕಾಸಿಗಳು NFATC4 ಯಡ್ರಾ CM ನಿಂದ ರಾಜ್ನಿಹ್ ಸ್ವಿನೇಯ್ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ಶ್ರೇಣಿ/ಗ್ರೂಪ್, t-критерий Стьюдента *p < 0,05). c ವಿವಿಧ ಹಂದಿಗಳಿಂದ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳು/ಗುಂಪು, ಎರಡು-ಬಾಲದ ಟಿ -ಮಾನದಂಡ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ; *p < 0.05) CM ನ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಟ್ರೋಪೋನಿನ್-T ಮತ್ತು NFATC4 ಇಮ್ಯುನೊಲೇಬಲಿಂಗ್ ಮತ್ತು NFATC4 ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಲೊಕೇಶನ್‌ನ ಪರಿಮಾಣೀಕರಣಕ್ಕಾಗಿ ದಿನ 0 ಮತ್ತು 6 ರಲ್ಲಿ MTOS ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳ ಪ್ರಾತಿನಿಧಿಕ ಚಿತ್ರಗಳು.ದೋಷ ಪಟ್ಟಿಗಳು ಸರಾಸರಿ ± ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನವನ್ನು ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುತ್ತವೆ.
ಅನುವಾದ ಹೃದಯರಕ್ತನಾಳ ಸಂಶೋಧನೆಗೆ ಹೃದಯ ಪರಿಸರವನ್ನು ನಿಖರವಾಗಿ ಪುನರುತ್ಪಾದಿಸುವ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಮಾದರಿಗಳು ಬೇಕಾಗುತ್ತವೆ. ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಹೃದಯದ ಅತಿ ತೆಳುವಾದ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುವ CTCM ಸಾಧನವನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ನಿರೂಪಿಸಲಾಗಿದೆ. CTCM ವ್ಯವಸ್ಥೆಯು ಶಾರೀರಿಕವಾಗಿ ಸಿಂಕ್ರೊನೈಸ್ ಮಾಡಲಾದ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಕಾನಿಕಲ್ ಪ್ರಚೋದನೆ ಮತ್ತು T3 ಮತ್ತು ಡೆಕ್ಸ್ ದ್ರವ ಪುಷ್ಟೀಕರಣವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ. ಹಂದಿ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳು ಈ ಅಂಶಗಳಿಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಂಡಾಗ, ಅವುಗಳ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆ, ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆ, ಚಯಾಪಚಯ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಲೇಖನದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ 12 ದಿನಗಳ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ನಂತರ ತಾಜಾ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದಲ್ಲಿರುವಂತೆಯೇ ಇರುತ್ತವೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದ ಅತಿಯಾದ ವಿಸ್ತರಣೆಯು ಹೈಪರ್‌ಎಕ್ಸ್‌ಟೆನ್ಶನ್‌ನಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಹೃದಯದ ಹೈಪರ್ಟ್ರೋಫಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು. ಒಟ್ಟಾರೆಯಾಗಿ, ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯ ಹೃದಯ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಅನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳುವಲ್ಲಿ ಶಾರೀರಿಕ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳ ನಿರ್ಣಾಯಕ ಪಾತ್ರವನ್ನು ಬೆಂಬಲಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಔಷಧ ತಪಾಸಣೆಗೆ ವೇದಿಕೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತವೆ.
ಕಾರ್ಡಿಯೋಮಯೊಸೈಟ್‌ಗಳ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಣೆ ಮತ್ತು ಉಳಿವಿಗೆ ಸೂಕ್ತವಾದ ವಾತಾವರಣವನ್ನು ಸೃಷ್ಟಿಸಲು ಹಲವು ಅಂಶಗಳು ಕೊಡುಗೆ ನೀಡುತ್ತವೆ. ಈ ಅಂಶಗಳಲ್ಲಿ ಅತ್ಯಂತ ಸ್ಪಷ್ಟವಾದವು (1) ಅಂತರಕೋಶೀಯ ಸಂವಹನಗಳು, (2) ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಕಾನಿಕಲ್ ಪ್ರಚೋದನೆ, (3) ಹ್ಯೂಮರಲ್ ಅಂಶಗಳು ಮತ್ತು (4) ಚಯಾಪಚಯ ತಲಾಧಾರಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿವೆ. ಶಾರೀರಿಕ ಕೋಶದಿಂದ ಕೋಶಕ್ಕೆ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗೆ ಬಾಹ್ಯಕೋಶೀಯ ಮ್ಯಾಟ್ರಿಕ್ಸ್‌ನಿಂದ ಬೆಂಬಲಿತವಾದ ಬಹು ಕೋಶ ಪ್ರಕಾರಗಳ ಸಂಕೀರ್ಣ ಮೂರು ಆಯಾಮದ ಜಾಲಗಳು ಬೇಕಾಗುತ್ತವೆ. ಅಂತಹ ಸಂಕೀರ್ಣ ಕೋಶೀಯ ಸಂವಹನಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಕೋಶ ಪ್ರಕಾರಗಳ ಸಹ-ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಿಂದ ವಿಟ್ರೊದಲ್ಲಿ ಪುನರ್ನಿರ್ಮಿಸುವುದು ಕಷ್ಟ, ಆದರೆ ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಆರ್ಗನೋಟೈಪಿಕ್ ಸ್ವರೂಪವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸುಲಭವಾಗಿ ಸಾಧಿಸಬಹುದು.
ಕಾರ್ಡಿಯೋಮಯೊಸೈಟ್‌ಗಳ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯು ಹೃದಯ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲು ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ33,34,35. ಹೈಪಿಎಸ್‌ಸಿ-ಸಿಎಮ್ ಕಂಡೀಷನಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಪಕ್ವತೆಗೆ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗಿದ್ದರೂ, ಹಲವಾರು ಸೊಗಸಾದ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಇತ್ತೀಚೆಗೆ ಏಕಾಕ್ಷೀಯ ಲೋಡಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ ಹೃದಯದ ಚೂರುಗಳ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ಪ್ರಯತ್ನಿಸಿವೆ. ಈ ಅಧ್ಯಯನಗಳು 2D ಏಕಾಕ್ಷೀಯ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಲೋಡಿಂಗ್ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹೃದಯದ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಮೇಲೆ ಸಕಾರಾತ್ಮಕ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಅಧ್ಯಯನಗಳಲ್ಲಿ, ಹೃದಯದ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಐಸೊಮೆಟ್ರಿಕ್ ಕರ್ಷಕ ಬಲಗಳು17, ರೇಖೀಯ ಆಕ್ಸೋಟೋನಿಕ್ ಲೋಡಿಂಗ್18, ಅಥವಾ ಫೋರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಡ್ಯೂಸರ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಮತ್ತು ಒತ್ತಡದ ಡ್ರೈವ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹೃದಯ ಚಕ್ರವನ್ನು ಮರುಸೃಷ್ಟಿಸಲಾಗಿದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಈ ವಿಧಾನಗಳು ಪರಿಸರ ಆಪ್ಟಿಮೈಸೇಶನ್ ಇಲ್ಲದೆ ಏಕಾಕ್ಷೀಯ ಅಂಗಾಂಶ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಬಳಸುತ್ತವೆ, ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಅನೇಕ ಹೃದಯ ಜೀನ್‌ಗಳ ನಿಗ್ರಹ ಅಥವಾ ಅಸಹಜ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಜೀನ್‌ಗಳ ಅತಿಯಾದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಉಂಟಾಗುತ್ತದೆ. ಇಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಿದ CTCM ಚಕ್ರ ಸಮಯ ಮತ್ತು ಶಾರೀರಿಕ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆ (25% ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆ, 40% ಸಿಸ್ಟೋಲ್, 60% ಡಯಾಸ್ಟೋಲ್ ಮತ್ತು ನಿಮಿಷಕ್ಕೆ 72 ಬಡಿತಗಳು) ವಿಷಯದಲ್ಲಿ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಹೃದಯ ಚಕ್ರವನ್ನು ಅನುಕರಿಸುವ 3D ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಕಾನಿಕಲ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ. ಅಂಗಾಂಶದ ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಈ ಮೂರು ಆಯಾಮದ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರಚೋದನೆ ಮಾತ್ರ ಸಾಕಾಗುವುದಿಲ್ಲವಾದರೂ, ಅಂಗಾಂಶದ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆ, ಕಾರ್ಯ ಮತ್ತು ಸಮಗ್ರತೆಯನ್ನು ಸಮರ್ಪಕವಾಗಿ ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು T3/Dex ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹ್ಯೂಮರಲ್ ಮತ್ತು ಯಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಸಂಯೋಜನೆಯ ಅಗತ್ಯವಿದೆ.
ವಯಸ್ಕ ಹೃದಯ ಫಿನೋಟೈಪ್ ಅನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸುವಲ್ಲಿ ಹಾಸ್ಯ ಅಂಶಗಳು ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರವಹಿಸುತ್ತವೆ. ಜೀವಕೋಶದ ಪಕ್ವತೆಯನ್ನು ವೇಗಗೊಳಿಸಲು ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ T3 ಮತ್ತು ಡೆಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾದ HiPS-CM ಅಧ್ಯಯನಗಳಲ್ಲಿ ಇದನ್ನು ಹೈಲೈಟ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ಜೀವಕೋಶ ಪೊರೆಗಳಾದ್ಯಂತ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳು, ಸಕ್ಕರೆಗಳು ಮತ್ತು ಕ್ಯಾಲ್ಸಿಯಂ ಸಾಗಣೆಯ ಮೇಲೆ T3 ಪ್ರಭಾವ ಬೀರಬಹುದು36. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, T3 MHC-α ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮತ್ತು MHC-β ಡೌನ್‌ರೆಗ್ಯುಲೇಷನ್ ಅನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ, ಭ್ರೂಣದ CM ನಲ್ಲಿ ನಿಧಾನವಾದ ಸೆಳೆತ ಮೈಯೋಫಿಬ್ರಿಲ್‌ಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಪ್ರಬುದ್ಧ ಕಾರ್ಡಿಯೋಮಯೊಸೈಟ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ವೇಗದ ಸೆಳೆತ ಮೈಯೋಫಿಬ್ರಿಲ್‌ಗಳ ರಚನೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ. ಹೈಪೋಥೈರಾಯ್ಡ್ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ T3 ಕೊರತೆಯು ಮೈಯೋಫಿಬ್ರಿಲ್ಲರ್ ಬ್ಯಾಂಡ್‌ಗಳ ನಷ್ಟಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಟೋನ್ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ದರ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ37. ಡೆಕ್ಸ್ ಗ್ಲುಕೊಕಾರ್ಟಿಕಾಯ್ಡ್ ಗ್ರಾಹಕಗಳ ಮೇಲೆ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾದ ಪರ್ಫ್ಯೂಸ್ಡ್ ಹೃದಯಗಳಲ್ಲಿ ಮಯೋಕಾರ್ಡಿಯಲ್ ಸಂಕೋಚನವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ;38 ಈ ಸುಧಾರಣೆಯು ಕ್ಯಾಲ್ಸಿಯಂ ಠೇವಣಿ-ಚಾಲಿತ ಪ್ರವೇಶ (SOCE) 39,40 ಮೇಲಿನ ಪರಿಣಾಮಕ್ಕೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ ಎಂದು ಭಾವಿಸಲಾಗಿದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಡೆಕ್ಸ್ ಅದರ ಗ್ರಾಹಕಗಳಿಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ರೋಗನಿರೋಧಕ ಕಾರ್ಯ ಮತ್ತು ಉರಿಯೂತವನ್ನು ನಿಗ್ರಹಿಸುವ ವಿಶಾಲವಾದ ಅಂತರ್ಜೀವಕೋಶ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ30.
ನಮ್ಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಭೌತಿಕ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಪ್ರಚೋದನೆ (MS) ಒಟ್ಟಾರೆ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ, ಆದರೆ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ 12 ದಿನಗಳಲ್ಲಿ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆ, ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆ ಮತ್ತು ಹೃದಯ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ವಿಫಲವಾಗಿದೆ. Ctrl ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, CTCM (MT) ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳಿಗೆ T3 ಮತ್ತು Dex ಅನ್ನು ಸೇರಿಸುವುದರಿಂದ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆ ಸುಧಾರಿಸಿತು ಮತ್ತು ತಾಜಾ ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶದೊಂದಿಗೆ 12 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಇದೇ ರೀತಿಯ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಪ್ರೊಫೈಲ್‌ಗಳು, ರಚನಾತ್ಮಕ ಸಮಗ್ರತೆ ಮತ್ತು ಚಯಾಪಚಯ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಿತು. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಅಂಗಾಂಶದ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆಯ ಮಟ್ಟವನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ಮೂಲಕ, STCM ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಬಹುಮುಖತೆಯನ್ನು ವಿವರಿಸುವ STCM ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹೈಪರ್‌ಎಕ್ಸ್‌ಟೆನ್ಶನ್-ಪ್ರೇರಿತ ಹೃದಯ ಹೈಪರ್ಟ್ರೋಫಿ ಮಾದರಿಯನ್ನು ರಚಿಸಲಾಗಿದೆ. ಹೃದಯ ಮರುರೂಪಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಸೂಕ್ತವಾದ ಸೈಟೊಕಿನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಫಾಗೊಸೈಟೋಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಇತರ ಮರುರೂಪಿಸುವ ಅಂಶಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸಬಲ್ಲ ಪರಿಚಲನೆಯ ಕೋಶಗಳು ಅಖಂಡ ಅಂಗಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದ್ದರೂ, ಹೃದಯದ ವಿಭಾಗಗಳು ಒತ್ತಡ ಮತ್ತು ಆಘಾತಕ್ಕೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಾಗಿ ಫೈಬ್ರೊಟಿಕ್ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಇನ್ನೂ ಅನುಕರಿಸಬಲ್ಲವು ಎಂಬುದನ್ನು ಗಮನಿಸಬೇಕು. ಮೈಯೋಫೈಬ್ರೊಬ್ಲಾಸ್ಟ್‌ಗಳಾಗಿ. ಇದನ್ನು ಈ ಹಿಂದೆ ಈ ಹೃದಯ ಸ್ಲೈಸ್ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ಟ್ಯಾಕಿಕಾರ್ಡಿಯಾ, ಬ್ರಾಡಿಕಾರ್ಡಿಯಾ ಮತ್ತು ಯಾಂತ್ರಿಕ ರಕ್ತಪರಿಚಲನಾ ಬೆಂಬಲ (ಯಾಂತ್ರಿಕ ಇಳಿಸಿದ ಹೃದಯ) ನಂತಹ ಅನೇಕ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಅನುಕರಿಸಲು ಒತ್ತಡ/ವಿದ್ಯುತ್ ವೈಶಾಲ್ಯ ಮತ್ತು ಆವರ್ತನವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುವ ಮೂಲಕ CTCM ನಿಯತಾಂಕಗಳನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸಬಹುದು ಎಂಬುದನ್ನು ಗಮನಿಸಬೇಕು. ಇದು ಈ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಔಷಧ ಪರೀಕ್ಷೆಗೆ ಮಧ್ಯಮ ಥ್ರೋಪುಟ್ ಆಗಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಅತಿಯಾದ ಒತ್ತಡದಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಹೃದಯ ಹೈಪರ್ಟ್ರೋಫಿಯನ್ನು ಮಾದರಿ ಮಾಡುವ CTCM ನ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವು ವೈಯಕ್ತಿಕಗೊಳಿಸಿದ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಾಗಿ ಈ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ದಾರಿ ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ. ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ, ಪ್ರಸ್ತುತ ಅಧ್ಯಯನವು ಹೃದಯ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಯಾಂತ್ರಿಕ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಹ್ಯೂಮರಲ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯು ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.
ಇಲ್ಲಿ ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಲಾದ ದತ್ತಾಂಶವು CTCM ಅಖಂಡ ಮಯೋಕಾರ್ಡಿಯಂ ಅನ್ನು ಮಾಡೆಲಿಂಗ್ ಮಾಡಲು ಬಹಳ ಭರವಸೆಯ ವೇದಿಕೆಯಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸಿದರೂ, ಈ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ವಿಧಾನವು ಕೆಲವು ಮಿತಿಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. CTCM ಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ಮುಖ್ಯ ಮಿತಿಯೆಂದರೆ ಅದು ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ನಿರಂತರ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಒತ್ತಡಗಳನ್ನು ಹೇರುತ್ತದೆ, ಇದು ಪ್ರತಿ ಚಕ್ರದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್ ಸಂಕೋಚನಗಳನ್ನು ಸಕ್ರಿಯವಾಗಿ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳ ಸಣ್ಣ ಗಾತ್ರದ ಕಾರಣ (7 ಮಿಮೀ), ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಬಲ ಸಂವೇದಕಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಂಸ್ಕೃತಿ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳ ಹೊರಗೆ ಸಿಸ್ಟೊಲಿಕ್ ಕಾರ್ಯವನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯ ಸೀಮಿತವಾಗಿದೆ. ಪ್ರಸ್ತುತ ಹಸ್ತಪ್ರತಿಯಲ್ಲಿ, ಸಂಕೋಚನ ಕ್ರಿಯೆಯ ಸೂಚಕವಾಗಿ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ವೋಲ್ಟೇಜ್ ಅನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ನಾವು ಈ ಮಿತಿಯನ್ನು ಭಾಗಶಃ ನಿವಾರಿಸುತ್ತೇವೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಈ ಮಿತಿಗೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಕೆಲಸದ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕ್ಯಾಲ್ಸಿಯಂ ಮತ್ತು ವೋಲ್ಟೇಜ್-ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಬಣ್ಣಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಮ್ಯಾಪಿಂಗ್‌ನಂತಹ ಸಂಸ್ಕೃತಿಯಲ್ಲಿ ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ಗಳ ಕಾರ್ಯದ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆಗಾಗಿ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಪರಿಚಯಿಸುವ ಮೂಲಕ ಭವಿಷ್ಯದಲ್ಲಿ ಇದನ್ನು ಪರಿಹರಿಸಬಹುದು. CTCM ನ ಮತ್ತೊಂದು ಮಿತಿಯೆಂದರೆ, ಕೆಲಸದ ಮಾದರಿಯು ಶಾರೀರಿಕ ಒತ್ತಡವನ್ನು (ಪೂರ್ವ ಲೋಡ್ ಮತ್ತು ನಂತರದ ಲೋಡ್) ಕುಶಲತೆಯಿಂದ ನಿರ್ವಹಿಸುವುದಿಲ್ಲ. CTCM ನಲ್ಲಿ, ಡಯಾಸ್ಟೋಲ್ (ಪೂರ್ಣ ವಿಸ್ತರಣೆ) ಮತ್ತು ಸಿಸ್ಟೋಲ್ (ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಸಂಕೋಚನದ ಉದ್ದ) ನಲ್ಲಿ 25% ಶಾರೀರಿಕ ವಿಸ್ತರಣೆಯನ್ನು ಪುನರುತ್ಪಾದಿಸಲು ವಿರುದ್ಧ ದಿಕ್ಕಿನಲ್ಲಿ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಪ್ರೇರೇಪಿಸಲಾಯಿತು. ಭವಿಷ್ಯದ CTCM ವಿನ್ಯಾಸಗಳಲ್ಲಿ ಹೃದಯದ ಅಂಗಾಂಶದ ಮೇಲೆ ಎರಡೂ ಬದಿಗಳಿಂದ ಸಾಕಷ್ಟು ಒತ್ತಡ ಹೇರುವ ಮೂಲಕ ಮತ್ತು ಹೃದಯದ ಕೋಣೆಗಳಲ್ಲಿ ಸಂಭವಿಸುವ ನಿಖರವಾದ ಒತ್ತಡ-ಪರಿಮಾಣದ ಸಂಬಂಧಗಳನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸುವ ಮೂಲಕ ಈ ಮಿತಿಯನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಬೇಕು.
ಈ ಹಸ್ತಪ್ರತಿಯಲ್ಲಿ ವರದಿಯಾಗಿರುವ ಓವರ್‌ಸ್ಟ್ರೆಚ್-ಪ್ರೇರಿತ ಮರುರೂಪಿಸುವಿಕೆಯು ಹೈಪರ್‌ಟ್ರೋಫಿಕ್ ಹೈಪರ್‌ಸ್ಟ್ರೆಚ್ ಸಿಗ್ನಲ್‌ಗಳನ್ನು ಅನುಕರಿಸುವುದಕ್ಕೆ ಸೀಮಿತವಾಗಿದೆ. ಹೀಗಾಗಿ, ಈ ಮಾದರಿಯು ಹ್ಯೂಮರಲ್ ಅಥವಾ ನರ ಅಂಶಗಳ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲದೆಯೇ (ಈ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿಲ್ಲ) ಸ್ಟ್ರೆಚ್-ಪ್ರೇರಿತ ಹೈಪರ್‌ಟ್ರೋಫಿಕ್ ಸಿಗ್ನಲಿಂಗ್‌ನ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ಸಹಾಯ ಮಾಡುತ್ತದೆ. CTCM ನ ಗುಣಾಕಾರವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಅಗತ್ಯವಿದೆ, ಉದಾಹರಣೆಗೆ, ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ಕೋಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಹ-ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಡುವುದು, ಪ್ಲಾಸ್ಮಾ ಹ್ಯೂಮರಲ್ ಅಂಶಗಳನ್ನು ಪರಿಚಲನೆ ಮಾಡುವುದು ಮತ್ತು ನರಕೋಶ ಕೋಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಹ-ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಡುವಾಗ ನರಗಳ ಒಳನೋಟವು CTCM ನೊಂದಿಗೆ ರೋಗ ಮಾದರಿಯ ಸಾಧ್ಯತೆಗಳನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ.
ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ಹದಿಮೂರು ಹಂದಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಎಲ್ಲಾ ಪ್ರಾಣಿಗಳ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಸಾಂಸ್ಥಿಕ ಮಾರ್ಗಸೂಚಿಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಲೂಯಿಸ್‌ವಿಲ್ಲೆ ವಿಶ್ವವಿದ್ಯಾಲಯದ ಸಾಂಸ್ಥಿಕ ಪ್ರಾಣಿ ಆರೈಕೆ ಮತ್ತು ಬಳಕೆ ಸಮಿತಿಯಿಂದ ಅನುಮೋದಿಸಲಾಯಿತು. ಮಹಾಪಧಮನಿಯ ಕಮಾನನ್ನು ಬಿಗಿಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಹೃದಯವನ್ನು 1 ಲೀ ಸ್ಟೆರೈಲ್ ಕಾರ್ಡಿಯೋಪ್ಲೆಜಿಯಾದಿಂದ (110 mM NaCl, 1.2 mM CaCl2, 16 mM KCl, 16 mM MgCl2, 10 mM NaHCO3, 5 U/mL ಹೆಪಾರಿನ್, pH 7.4 ವರೆಗೆ) ಪರ್ಫ್ಯೂಸ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು; ಹೃದಯಗಳನ್ನು ಐಸ್-ಕೋಲ್ಡ್ ಕಾರ್ಡಿಯೋಪ್ಲೆಜಿಕ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಐಸ್ ಮೇಲೆ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಕ್ಕೆ ಸಾಗಿಸುವವರೆಗೆ ಸಂರಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ <10 ನಿಮಿಷಗಳು. ಹೃದಯಗಳನ್ನು ಐಸ್-ಕೋಲ್ಡ್ ಕಾರ್ಡಿಯೋಪ್ಲೆಜಿಕ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಐಸ್ ಮೇಲೆ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಕ್ಕೆ ಸಾಗಿಸುವವರೆಗೆ ಸಂರಕ್ಷಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ <10 ನಿಮಿಷಗಳು. ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಪೋರ್ಟಿರೋವ್ಕಿ ಮತ್ತು ಲ್ಯಾಬೋರಾಟೋರಿಸ್‌ನ ಲುಡ್ಯೂ, ಲೆಡಿಯನಮ್ ಕಾರ್ಡಿಯೊಪ್ಲೆಗಿಚೆಸ್ಕೋಮ್ ರಾಸ್ಟ್‌ವೊರೆಯಲ್ಲಿ ಸೆರ್ಡಾ ಕ್ರಾನಿಲಿ <10 ನಿಮಿಷಗಳು. ಹೃದಯಗಳನ್ನು ಐಸ್-ಕೋಲ್ಡ್ ಕಾರ್ಡಿಯೋಪ್ಲೆಜಿಕ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಐಸ್ ಮೇಲೆ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಕ್ಕೆ ಸಾಗಿಸುವವರೆಗೆ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ <10 ನಿಮಿಷಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟。将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟。 ಡೇರ್ಜೈಟ್ ಸೆರ್ಡಾದಲ್ಲಿ ಲೆಡಿಯಾನೋಯ್ ಕಾರ್ಡಿಯೋಪ್ಲೆಗಿ ಡೋ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಪೋರ್ಟಿರೋವ್ಕಿ ಮತ್ತು ಲ್ಯಾಬೋರಾಟೋರಿಯಲ್ಲಿ ಲುಡು, ಒಬಿಚ್ನೋ <10 ನಿಮಿಷಗಳು. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 10 ನಿಮಿಷಗಳಿಗಿಂತಲೂ ಕಡಿಮೆ ಅವಧಿಯವರೆಗೆ, ಹೃದಯಗಳನ್ನು ಐಸ್ ಕಾರ್ಡಿಯೋಪ್ಲೆಜಿಯಾದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ, ನಂತರ ಐಸ್ ಮೇಲೆ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯಕ್ಕೆ ಸಾಗಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
CTCM ಸಾಧನವನ್ನು ಸಾಲಿಡ್‌ವರ್ಕ್ಸ್ ಕಂಪ್ಯೂಟರ್-ಸಹಾಯದ ವಿನ್ಯಾಸ (CAD) ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್‌ನಲ್ಲಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ. ಕಲ್ಚರ್ ಚೇಂಬರ್‌ಗಳು, ವಿಭಾಜಕಗಳು ಮತ್ತು ಗಾಳಿ ಕೋಣೆಗಳನ್ನು CNC ಕ್ಲಿಯರ್ ಅಕ್ರಿಲಿಕ್ ಪ್ಲಾಸ್ಟಿಕ್‌ನಿಂದ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. 7mm ವ್ಯಾಸದ ಬ್ಯಾಕ್-ಅಪ್ ರಿಂಗ್ ಮಧ್ಯದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಪಾಲಿಥಿಲೀನ್ (HDPE) ನಿಂದ ಮಾಡಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ ಮತ್ತು ಕೆಳಗಿರುವ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಮುಚ್ಚಲು ಬಳಸುವ ಸಿಲಿಕೋನ್ ಒ-ರಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಸರಿಹೊಂದಿಸಲು ಒ-ರಿಂಗ್ ಗ್ರೂವ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ತೆಳುವಾದ ಸಿಲಿಕಾ ಮೆಂಬರೇನ್ ಕಲ್ಚರ್ ಚೇಂಬರ್ ಅನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಕೆ ಪ್ಲೇಟ್‌ನಿಂದ ಬೇರ್ಪಡಿಸುತ್ತದೆ. ಸಿಲಿಕೋನ್ ಮೆಂಬರೇನ್ ಅನ್ನು 0.02″ ದಪ್ಪ ಸಿಲಿಕೋನ್ ಹಾಳೆಯಿಂದ ಲೇಸರ್ ಕತ್ತರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 35A ಗಡಸುತನವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ. ಕೆಳಭಾಗ ಮತ್ತು ಮೇಲ್ಭಾಗದ ಸಿಲಿಕೋನ್ ಗ್ಯಾಸ್ಕೆಟ್‌ಗಳನ್ನು 1/16″ ದಪ್ಪ ಸಿಲಿಕೋನ್ ಹಾಳೆಯಿಂದ ಲೇಸರ್ ಕತ್ತರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 50A ಗಡಸುತನವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ. ಬ್ಲಾಕ್ ಅನ್ನು ಜೋಡಿಸಲು ಮತ್ತು ಗಾಳಿಯಾಡದ ಸೀಲ್ ಅನ್ನು ರಚಿಸಲು 316L ಸ್ಟೇನ್‌ಲೆಸ್ ಸ್ಟೀಲ್ ಸ್ಕ್ರೂಗಳು ಮತ್ತು ರೆಕ್ಕೆ ನಟ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
C-PACE-EM ವ್ಯವಸ್ಥೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಲು ಮೀಸಲಾದ ಮುದ್ರಿತ ಸರ್ಕ್ಯೂಟ್ ಬೋರ್ಡ್ (PCB) ಅನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ. PCB ಯಲ್ಲಿರುವ ಸ್ವಿಸ್ ಯಂತ್ರ ಕನೆಕ್ಟರ್ ಸಾಕೆಟ್‌ಗಳನ್ನು ಬೆಳ್ಳಿ ಲೇಪಿತ ತಾಮ್ರದ ತಂತಿಗಳು ಮತ್ತು ಕಂಚಿನ 0-60 ಸ್ಕ್ರೂಗಳನ್ನು ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್‌ಗಳಿಗೆ ಸ್ಕ್ರೂ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಗ್ರ್ಯಾಫೈಟ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್‌ಗಳಿಗೆ ಸಂಪರ್ಕಿಸಲಾಗಿದೆ. ಮುದ್ರಿತ ಸರ್ಕ್ಯೂಟ್ ಬೋರ್ಡ್ ಅನ್ನು 3D ಪ್ರಿಂಟರ್‌ನ ಕವರ್‌ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
CTCM ಸಾಧನವನ್ನು ಪ್ರೋಗ್ರಾಮೆಬಲ್ ನ್ಯೂಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಆಕ್ಯೂವೇಟರ್ (PPD) ನಿಯಂತ್ರಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಹೃದಯ ಚಕ್ರದಂತೆಯೇ ನಿಯಂತ್ರಿತ ರಕ್ತಪರಿಚಲನಾ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಸೃಷ್ಟಿಸುತ್ತದೆ. ಗಾಳಿಯ ಕೋಣೆಯೊಳಗಿನ ಒತ್ತಡ ಹೆಚ್ಚಾದಂತೆ, ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುವ ಸಿಲಿಕೋನ್ ಪೊರೆಯು ಮೇಲಕ್ಕೆ ವಿಸ್ತರಿಸುತ್ತದೆ, ಅಂಗಾಂಶ ಸ್ಥಳದ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಒತ್ತಾಯಿಸುತ್ತದೆ. ನಂತರ ಅಂಗಾಂಶದ ಪ್ರದೇಶವು ದ್ರವದ ಈ ಹೊರಹಾಕುವಿಕೆಯಿಂದ ವಿಸ್ತರಿಸಲ್ಪಡುತ್ತದೆ, ಡಯಾಸ್ಟೋಲ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹೃದಯದ ಶಾರೀರಿಕ ವಿಸ್ತರಣೆಯನ್ನು ಅನುಕರಿಸುತ್ತದೆ. ವಿಶ್ರಾಂತಿಯ ಉತ್ತುಂಗದಲ್ಲಿ, ಗ್ರ್ಯಾಫೈಟ್ ವಿದ್ಯುದ್ವಾರಗಳ ಮೂಲಕ ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸಲಾಯಿತು, ಇದು ಗಾಳಿಯ ಕೋಣೆಯಲ್ಲಿನ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು ಮತ್ತು ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳ ಸಂಕೋಚನಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು. ಪೈಪ್ ಒಳಗೆ ಗಾಳಿಯ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿನ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು ಒತ್ತಡ ಸಂವೇದಕವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಹೆಮೋಸ್ಟಾಟಿಕ್ ಕವಾಟವಿದೆ. ಒತ್ತಡ ಸಂವೇದಕದಿಂದ ಗ್ರಹಿಸಲ್ಪಟ್ಟ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಲ್ಯಾಪ್‌ಟಾಪ್‌ಗೆ ಸಂಪರ್ಕಗೊಂಡಿರುವ ಡೇಟಾ ಸಂಗ್ರಾಹಕಕ್ಕೆ ಅನ್ವಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಇದು ಅನಿಲ ಕೋಣೆಯೊಳಗಿನ ಒತ್ತಡದ ನಿರಂತರ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆಯನ್ನು ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ. ಗರಿಷ್ಠ ಕೋಣೆಯ ಒತ್ತಡವನ್ನು ತಲುಪಿದಾಗ (ಪ್ರಮಾಣಿತ 80 mmHg, 140 mmHg OS), ಡೇಟಾ ಸ್ವಾಧೀನ ಸಾಧನವನ್ನು 4 V ಗೆ ಹೊಂದಿಸಲಾದ 2 ms ಗೆ ಬೈಫಾಸಿಕ್ ವೋಲ್ಟೇಜ್ ಸಿಗ್ನಲ್ ಅನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು C-PACE-EM ವ್ಯವಸ್ಥೆಗೆ ಸಂಕೇತವನ್ನು ಕಳುಹಿಸಲು ಆದೇಶಿಸಲಾಯಿತು.
ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 6 ಬಾವಿಗಳಲ್ಲಿ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನಂತೆ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಯಿತು: ಕೊಯ್ಲು ಮಾಡಿದ ಹೃದಯಗಳನ್ನು ವರ್ಗಾವಣೆ ಪಾತ್ರೆಯಿಂದ ಶೀತ (4° C.) ಕಾರ್ಡಿಯೋಪ್ಲೆಜಿಯಾ ಹೊಂದಿರುವ ಟ್ರೇಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ. ಎಡ ಕುಹರವನ್ನು ಬರಡಾದ ಬ್ಲೇಡ್‌ನಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಿ 1-2 ಸೆಂ.ಮೀ. 3 ತುಂಡುಗಳಾಗಿ ಕತ್ತರಿಸಲಾಯಿತು. ಈ ಅಂಗಾಂಶ ಬ್ಲಾಕ್‌ಗಳನ್ನು ಅಂಗಾಂಶ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ ಅಂಗಾಂಶ ಬೆಂಬಲಗಳಿಗೆ ಜೋಡಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಟೈರೋಡ್‌ನ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಕಂಪಿಸುವ ಮೈಕ್ರೋಟೋಮ್ ಅಂಗಾಂಶ ಸ್ನಾನದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನಿರಂತರವಾಗಿ ಆಮ್ಲಜನಕೀಕರಣಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು (3 ಗ್ರಾಂ/ಲೀ 2,3-ಬ್ಯುಟನೆಡಿಯೋನ್ ಮೊನೊಆಕ್ಸಿಮ್ (ಬಿಡಿಎಂ), 140 ಎಂಎಂ ನಾಕ್ಸೈಡ್ (8.18 ಗ್ರಾಂ). , 6 ಎಂಎಂ ಕೆಸಿಎಲ್ (0.447 ಗ್ರಾಂ), 10 ಎಂಎಂ ಡಿ-ಗ್ಲೂಕೋಸ್ (1.86 ಗ್ರಾಂ), 10 ಎಂಎಂ ಹೆಪ್ಸ್ (2.38 ಗ್ರಾಂ), 1 ಎಂಎಂ ಎಂಜಿಸಿಎಲ್ 2 (1 ಮಿಲಿ 1 ಎಂ ದ್ರಾವಣ), 1.8 ಎಂಎಂ ಸಿಎಸಿಎಲ್ 2 (1.8 ಮಿಲಿ 1 ಎಂ ದ್ರಾವಣ), 1 ಎಲ್ ಡಿಡಿಎಚ್ 2 ಒ ವರೆಗೆ). ಕಂಪಿಸುವ ಮೈಕ್ರೋಟೋಮ್ ಅನ್ನು 80 Hz ಆವರ್ತನದಲ್ಲಿ 300 µm ದಪ್ಪದ ಹೋಳುಗಳನ್ನು ಕತ್ತರಿಸಲು, 2 mm ನ ಸಮತಲ ಕಂಪನ ವೈಶಾಲ್ಯ ಮತ್ತು 0.03 mm/s ಮುಂಗಡ ದರವನ್ನು ಹೊಂದಲು ಹೊಂದಿಸಲಾಗಿದೆ. ದ್ರಾವಣವನ್ನು ತಂಪಾಗಿಡಲು ಅಂಗಾಂಶ ಸ್ನಾನವನ್ನು ಮಂಜುಗಡ್ಡೆಯಿಂದ ಸುತ್ತುವರೆದಿದೆ ಮತ್ತು ತಾಪಮಾನವನ್ನು 4 ° C ನಲ್ಲಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗಿದೆ. ಒಂದು ಕಲ್ಚರ್ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗೆ ಸಾಕಷ್ಟು ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಪಡೆಯುವವರೆಗೆ ಮೈಕ್ರೋಟೋಮ್ ಸ್ನಾನದಿಂದ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಮಂಜುಗಡ್ಡೆಯ ಮೇಲೆ ನಿರಂತರವಾಗಿ ಆಮ್ಲಜನಕಯುಕ್ತ ಟೈರೋಡ್ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಇನ್‌ಕ್ಯುಬೇಶನ್ ಸ್ನಾನಕ್ಕೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ. ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ವೆಲ್ ಕಲ್ಚರ್‌ಗಳಿಗಾಗಿ, ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಸ್ಟೆರೈಲ್ 6 mm ಅಗಲದ ಪಾಲಿಯುರೆಥೇನ್ ಬೆಂಬಲಗಳಿಗೆ ಜೋಡಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು 6 ಮಿಲಿ ಆಪ್ಟಿಮೈಸ್ಡ್ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗಿದೆ (199 ಮಧ್ಯಮ, 1x ITS ಪೂರಕ, 10% FBS, 5 ng/ml VEGF, 10 ng/ml FGF-ಕ್ಷಾರೀಯ ಮತ್ತು 2X ಪ್ರತಿಜೀವಕ-ಆಂಟಿಫಂಗಲ್). ವಿದ್ಯುತ್ ಪ್ರಚೋದನೆ (10 V, ಆವರ್ತನ 1.2 Hz) ಅನ್ನು C-ಪೇಸ್ ಮೂಲಕ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ ಅನ್ವಯಿಸಲಾಗಿದೆ. TD ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಗಾಗಿ, ಪ್ರತಿ ಮಾಧ್ಯಮ ಬದಲಾವಣೆಯಲ್ಲಿ 100 nM ಮತ್ತು 1 μM ನಲ್ಲಿ ತಾಜಾ T3 ಮತ್ತು Dex ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು. ದಿನಕ್ಕೆ 3 ಬಾರಿ ಬದಲಾಯಿಸುವ ಮೊದಲು ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಆಮ್ಲಜನಕದೊಂದಿಗೆ ಸ್ಯಾಚುರೇಟೆಡ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು 37°C ಮತ್ತು 5% CO2 ನಲ್ಲಿ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್‌ನಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
CTCM ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳಿಗಾಗಿ, ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಟೈರೋಡ್ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಪೆಟ್ರಿ ಡಿಶ್‌ನಲ್ಲಿ ಕಸ್ಟಮ್-ನಿರ್ಮಿತ 3D ಮುದ್ರಕದ ಮೇಲೆ ಇರಿಸಲಾಗಿತ್ತು. ಹೃದಯದ ಸ್ಲೈಸ್‌ನ ಗಾತ್ರವನ್ನು ಬೆಂಬಲ ಉಂಗುರದ ಪ್ರದೇಶದ 25% ರಷ್ಟು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಸಾಧನವನ್ನು ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ. ಟೈರೋಡ್ ದ್ರಾವಣದಿಂದ ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿದ ನಂತರ ಮತ್ತು ಡಯಾಸ್ಟೋಲ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹೃದಯದ ವಿಭಾಗಗಳು ಹಿಗ್ಗದಂತೆ ಇದನ್ನು ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಹಿಸ್ಟೋಆಕ್ರಿಲಿಕ್ ಅಂಟು ಬಳಸಿ, 300 µm ದಪ್ಪವಿರುವ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು 7 ಮಿಮೀ ವ್ಯಾಸದ ಬೆಂಬಲ ಉಂಗುರದ ಮೇಲೆ ಸರಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ. ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಬೆಂಬಲ ಉಂಗುರಕ್ಕೆ ಜೋಡಿಸಿದ ನಂತರ, ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಕತ್ತರಿಸಿ ಮತ್ತು ಲಗತ್ತಿಸಲಾದ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಒಂದು ಸಾಧನಕ್ಕೆ ಸಾಕಷ್ಟು ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಸಿದ್ಧಪಡಿಸುವವರೆಗೆ ಐಸ್ (4 ° C) ಮೇಲೆ ಟೈರೋಡ್ ದ್ರಾವಣದ ಸ್ನಾನಕ್ಕೆ ಇರಿಸಿ. ಎಲ್ಲಾ ಸಾಧನಗಳಿಗೆ ಒಟ್ಟು ಸಂಸ್ಕರಣಾ ಸಮಯ 2 ಗಂಟೆಗಳನ್ನು ಮೀರಬಾರದು. 6 ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಅವುಗಳ ಬೆಂಬಲ ಉಂಗುರಗಳಿಗೆ ಜೋಡಿಸಿದ ನಂತರ, CTCM ಸಾಧನವನ್ನು ಜೋಡಿಸಲಾಗಿದೆ. CTCM ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಕೊಠಡಿಯನ್ನು 21 ಮಿಲಿ ಪೂರ್ವ-ಆಮ್ಲಜನಕಯುಕ್ತ ಮಾಧ್ಯಮದಿಂದ ಮೊದಲೇ ತುಂಬಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಕಲ್ಚರ್ ಚೇಂಬರ್‌ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ ಮತ್ತು ಯಾವುದೇ ಗಾಳಿಯ ಗುಳ್ಳೆಗಳನ್ನು ಪೈಪೆಟ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ತೆಗೆದುಹಾಕಿ. ನಂತರ ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗವನ್ನು ರಂಧ್ರಕ್ಕೆ ಮಾರ್ಗದರ್ಶನ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಸ್ಥಳದಲ್ಲಿ ಒತ್ತಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅಂತಿಮವಾಗಿ, ಸಾಧನದ ಮೇಲೆ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್ ಕ್ಯಾಪ್ ಅನ್ನು ಇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಸಾಧನವನ್ನು ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್‌ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಿ. ನಂತರ CTCM ಅನ್ನು ಏರ್ ಟ್ಯೂಬ್ ಮತ್ತು C-PACE-EM ವ್ಯವಸ್ಥೆಗೆ ಸಂಪರ್ಕಪಡಿಸಿ. ನ್ಯೂಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಆಕ್ಯೂವೇಟರ್ ತೆರೆಯುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಗಾಳಿಯ ಕವಾಟವು CTCM ಅನ್ನು ತೆರೆಯುತ್ತದೆ. 2 ms ಗಾಗಿ ಬೈಫಾಸಿಕ್ ಪೇಸಿಂಗ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ 1.2 Hz ನಲ್ಲಿ 4 V ಅನ್ನು ತಲುಪಿಸಲು C-PACE-EM ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಕಾನ್ಫಿಗರ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ದಿನಕ್ಕೆ ಎರಡು ಬಾರಿ ಬದಲಾಯಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಗ್ರ್ಯಾಫೈಟ್ ಸಂಗ್ರಹವಾಗುವುದನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಡ್‌ಗಳನ್ನು ದಿನಕ್ಕೆ ಒಮ್ಮೆ ಬದಲಾಯಿಸಲಾಯಿತು. ಅಗತ್ಯವಿದ್ದರೆ, ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಅವುಗಳ ಕಲ್ಚರ್ ಬಾವಿಗಳಿಂದ ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ಬಿದ್ದಿರಬಹುದಾದ ಯಾವುದೇ ಗಾಳಿಯ ಗುಳ್ಳೆಗಳನ್ನು ಹೊರಹಾಕಬಹುದು. MT ಚಿಕಿತ್ಸಾ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಗಾಗಿ, 100 nM T3 ಮತ್ತು 1 μM ಡೆಕ್ಸ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಪ್ರತಿ ಮಧ್ಯಮ ಬದಲಾವಣೆಯೊಂದಿಗೆ T3/Dex ಅನ್ನು ಹೊಸದಾಗಿ ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು. CTCM ಸಾಧನಗಳನ್ನು 37°C ಮತ್ತು 5% CO2 ನಲ್ಲಿ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟರ್‌ನಲ್ಲಿ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು.
ಹೃದಯದ ಚೂರುಗಳ ಹಿಗ್ಗಿಸಲಾದ ಪಥಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲು, ವಿಶೇಷ ಕ್ಯಾಮೆರಾ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಯಿತು. ನ್ಯಾವಿಟಾರ್ ಜೂಮ್ 7000 18-108mm ಮ್ಯಾಕ್ರೋ ಲೆನ್ಸ್ (ನ್ಯಾವಿಟಾರ್, ಸ್ಯಾನ್ ಫ್ರಾನ್ಸಿಸ್ಕೋ, CA) ನೊಂದಿಗೆ SLR ಕ್ಯಾಮೆರಾವನ್ನು (ಕ್ಯಾನನ್ ರೆಬೆಲ್ T7i, ಕ್ಯಾನನ್, ಟೋಕಿಯೊ, ಜಪಾನ್) ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ತಾಜಾ ಮಾಧ್ಯಮದೊಂದಿಗೆ ಬದಲಾಯಿಸಿದ ನಂತರ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ದೃಶ್ಯೀಕರಣವನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಕ್ಯಾಮೆರಾವನ್ನು 51° ಕೋನದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ವೀಡಿಯೊವನ್ನು ಸೆಕೆಂಡಿಗೆ 30 ಫ್ರೇಮ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ರೆಕಾರ್ಡ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮೊದಲನೆಯದಾಗಿ, ಹೃದಯದ ಚೂರುಗಳ ಚಲನೆಯನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ಇಮೇಜ್-ಜೆ ಯೊಂದಿಗೆ ಮುಕ್ತ ಮೂಲ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ (MUSCLEMOTION43) ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಶಬ್ದವನ್ನು ತಪ್ಪಿಸಲು ಹೃದಯದ ಚೂರುಗಳನ್ನು ಹೊಡೆಯಲು ಆಸಕ್ತಿಯ ಪ್ರದೇಶಗಳನ್ನು ವ್ಯಾಖ್ಯಾನಿಸಲು MATLAB (MathWorks, Natick, MA, USA) ಬಳಸಿ ಮುಖವಾಡವನ್ನು ರಚಿಸಲಾಯಿತು. ಹಸ್ತಚಾಲಿತವಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾದ ಮುಖವಾಡಗಳನ್ನು ಫ್ರೇಮ್ ಅನುಕ್ರಮದಲ್ಲಿ ಎಲ್ಲಾ ಚಿತ್ರಗಳಿಗೆ ಅನ್ವಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಂತರ MUSCLEMOTION ಪ್ಲಗ್-ಇನ್‌ಗೆ ರವಾನಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಸ್ನಾಯು ಚಲನೆಯು ಉಲ್ಲೇಖ ಚೌಕಟ್ಟಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದಂತೆ ಅದರ ಚಲನೆಯನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ಪ್ರತಿ ಚೌಕಟ್ಟಿನಲ್ಲಿನ ಪಿಕ್ಸೆಲ್‌ಗಳ ಸರಾಸರಿ ತೀವ್ರತೆಯನ್ನು ಬಳಸುತ್ತದೆ. ಡೇಟಾವನ್ನು ದಾಖಲಿಸಲಾಗಿದೆ, ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಹೃದಯ ಚಕ್ರದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಸೈಕಲ್ ಸಮಯವನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲು ಮತ್ತು ಅಂಗಾಂಶ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ರೆಕಾರ್ಡ್ ಮಾಡಿದ ವೀಡಿಯೊವನ್ನು ಮೊದಲ-ಕ್ರಮಾಂಕದ ಶೂನ್ಯ-ಹಂತದ ಡಿಜಿಟಲ್ ಫಿಲ್ಟರ್ ಬಳಸಿ ಪೋಸ್ಟ್-ಪ್ರೊಸೆಸ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ಅಂಗಾಂಶದ ಹಿಗ್ಗುವಿಕೆಯನ್ನು (ಪೀಕ್-ಟು-ಪೀಕ್) ಪರಿಮಾಣೀಕರಿಸಲು, ರೆಕಾರ್ಡ್ ಮಾಡಿದ ಸಿಗ್ನಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಶಿಖರಗಳು ಮತ್ತು ತೊಟ್ಟಿಗಳ ನಡುವೆ ವ್ಯತ್ಯಾಸವನ್ನು ಗುರುತಿಸಲು ಪೀಕ್-ಟು-ಪೀಕ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ಸಿಗ್ನಲ್ ಡ್ರಿಫ್ಟ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು 6 ನೇ ಕ್ರಮಾಂಕದ ಬಹುಪದೋಕ್ತಿಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಡಿಟ್ರೆಂಡಿಂಗ್ ಅನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಜಾಗತಿಕ ಅಂಗಾಂಶ ಚಲನೆ, ಚಕ್ರ ಸಮಯ, ವಿಶ್ರಾಂತಿ ಸಮಯ ಮತ್ತು ಸಂಕೋಚನ ಸಮಯವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು MATLAB ನಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಗ್ರಾಂ ಕೋಡ್ ಅನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ (ಪೂರಕ ಪ್ರೋಗ್ರಾಂ ಕೋಡ್ 44).
ಯಾಂತ್ರಿಕ ಹಿಗ್ಗಿಸುವಿಕೆ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನಕ್ಕಾಗಿ ರಚಿಸಲಾದ ಅದೇ ವೀಡಿಯೊಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು, ಸ್ಟ್ರೈನ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ, ನಾವು ಮೊದಲು MUSCLEMOTION ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಪ್ರಕಾರ ಚಲನೆಯ ಶಿಖರಗಳನ್ನು (ಚಲನೆಯ ಅತ್ಯುನ್ನತ (ಮೇಲಿನ) ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ (ಕೆಳಗಿನ) ಬಿಂದುಗಳು) ಪ್ರತಿನಿಧಿಸುವ ಎರಡು ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಿದ್ದೇವೆ. ನಂತರ ನಾವು ಅಂಗಾಂಶ ಪ್ರದೇಶಗಳನ್ನು ವಿಂಗಡಿಸಿದ್ದೇವೆ ಮತ್ತು ವಿಭಜಿತ ಅಂಗಾಂಶಕ್ಕೆ ಛಾಯೆ ಅಲ್ಗಾರಿದಮ್‌ನ ರೂಪವನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸಿದ್ದೇವೆ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ 2a). ನಂತರ ವಿಭಜಿತ ಅಂಗಾಂಶವನ್ನು ಹತ್ತು ಉಪಮೇಲ್ಮೈಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿ ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿನ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಸಮೀಕರಣವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗಿದೆ: ಸ್ಟ್ರೈನ್ = (ಮೇಲ್-ಕೆಳಗೆ)/ಕೆಳಗೆ, ಇಲ್ಲಿ ಸಪ್ ಮತ್ತು ಸಪ್ ಕ್ರಮವಾಗಿ ಬಟ್ಟೆಯ ಮೇಲಿನ ಮತ್ತು ಕೆಳಗಿನ ನೆರಳುಗಳಿಂದ ಆಕಾರದ ಅಂತರಗಳಾಗಿವೆ (ಪೂರಕ ಚಿತ್ರ .2b).
ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು 48 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 4% ಪ್ಯಾರಾಫಾರ್ಮಲ್ಡಿಹೈಡ್‌ನಲ್ಲಿ ಸರಿಪಡಿಸಲಾಯಿತು. ಸ್ಥಿರ ಅಂಗಾಂಶಗಳನ್ನು 10% ಮತ್ತು 20% ಸುಕ್ರೋಸ್‌ನಲ್ಲಿ 1 ಗಂಟೆಯವರೆಗೆ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು, ನಂತರ ರಾತ್ರಿಯಿಡೀ 30% ಸುಕ್ರೋಸ್‌ನಲ್ಲಿ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು. ನಂತರ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಸೂಕ್ತ ಕತ್ತರಿಸುವ ತಾಪಮಾನ ಸಂಯುಕ್ತದಲ್ಲಿ (OCT ಸಂಯುಕ್ತ) ಹುದುಗಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಕ್ರಮೇಣ ಐಸೊಪೆಂಟೇನ್/ಡ್ರೈ ಐಸ್ ಸ್ನಾನದಲ್ಲಿ ಫ್ರೀಜ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಬೇರ್ಪಡಿಸುವವರೆಗೆ -80 °C ನಲ್ಲಿ OCT ಎಂಬೆಡಿಂಗ್ ಬ್ಲಾಕ್‌ಗಳನ್ನು ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ. ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು 8 μm ದಪ್ಪವಿರುವ ವಿಭಾಗಗಳಾಗಿ ತಯಾರಿಸಲಾಯಿತು.
ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಂದ OCT ಯನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲು, ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು 95 °C ನಲ್ಲಿ 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಹೀಟಿಂಗ್ ಬ್ಲಾಕ್‌ನಲ್ಲಿ ಬಿಸಿ ಮಾಡಿ. ಪ್ರತಿ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗೆ 1 ಮಿಲಿ PBS ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಿ, ನಂತರ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ PBS ನಲ್ಲಿ 0.1% ಟ್ರೈಟಾನ್-X ಅನ್ನು ಹೊಂದಿಸುವ ಮೂಲಕ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ವ್ಯಾಪಿಸಿ. ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಲ್ಲದ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳು ಮಾದರಿಗೆ ಬಂಧಿಸುವುದನ್ನು ತಡೆಯಲು, ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳಿಗೆ 1 ಮಿಲಿ 3% BSA ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 1 ಗಂಟೆ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಿ. ನಂತರ BSA ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು PBS ನಿಂದ ತೊಳೆಯಲಾಯಿತು. ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಪೆನ್ಸಿಲ್‌ನಿಂದ ಗುರುತಿಸಿ. ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳು (1% BSA ನಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ 1:200) (ಕನೆಕ್ಸಿನ್ 43 (Abcam; #AB11370), NFATC4 (Abcam; #AB99431) ಮತ್ತು ಟ್ರೋಪೋನಿನ್-T (ಥರ್ಮೋ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್; #MA5-12960) ಅನ್ನು 90 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು, ನಂತರ ದ್ವಿತೀಯ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳು (1% BSA ನಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ 1:200) ಮೌಸ್ ಅಲೆಕ್ಸಾ ಫ್ಲೂರ್ 488 (ಥರ್ಮೋ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್; #A16079), ಮೊಲ ಅಲೆಕ್ಸಾ ಫ್ಲೂರ್ 594 (ಥರ್ಮೋ ಸೈಂಟಿಫಿಕ್; #T6391) ವಿರುದ್ಧ ಹೆಚ್ಚುವರಿ 90 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ PBS ನೊಂದಿಗೆ 3 ಬಾರಿ ತೊಳೆಯಲಾಯಿತು ಗುರಿ ಕಲೆಗಳನ್ನು ಹಿನ್ನೆಲೆಯಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು, ನಾವು ದ್ವಿತೀಯ ಪ್ರತಿಕಾಯವನ್ನು ಮಾತ್ರ ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ ಬಳಸಿದ್ದೇವೆ. ಅಂತಿಮವಾಗಿ, DAPI ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯರ್ ಸ್ಟೇನ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ವೆಕ್ಟಾಶೀಲ್ಡ್‌ನಲ್ಲಿ (ವೆಕ್ಟರ್ ಲ್ಯಾಬೋರೇಟರೀಸ್) ಇರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಉಗುರು ಬಣ್ಣದಿಂದ ಮುಚ್ಚಲಾಯಿತು. -x ವರ್ಧನೆ) ಮತ್ತು 40x ವರ್ಧನೆಯೊಂದಿಗೆ ಕೀಯೆನ್ಸ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್.
PBS ನಲ್ಲಿ 5 μg/ml ನಲ್ಲಿ WGA-Alexa Fluor 555 (Thermo Scientific; #W32464) ಅನ್ನು WGA ಸ್ಟೇನಿಂಗ್‌ಗಾಗಿ ಬಳಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಸ್ಥಿರ ವಿಭಾಗಗಳಿಗೆ ಅನ್ವಯಿಸಲಾಯಿತು. ನಂತರ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು PBS ನಿಂದ ತೊಳೆಯಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಸುಡಾನ್ ಕಪ್ಪು ಬಣ್ಣವನ್ನು ಪ್ರತಿ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ನಂತರ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು PBS ನಿಂದ ತೊಳೆಯಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ವೆಕ್ಟಾಶೀಲ್ಡ್ ಎಂಬೆಡಿಂಗ್ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು. ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಕೀಯೆನ್ಸ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪ್‌ನಲ್ಲಿ 40x ವರ್ಧನೆಯಲ್ಲಿ ದೃಶ್ಯೀಕರಿಸಲಾಯಿತು.
ಮೇಲೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಮಾದರಿಗಳಿಂದ OCT ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಯಿತು. OCT ಅನ್ನು ತೆಗೆದ ನಂತರ, ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ರಾತ್ರಿಯಿಡೀ ಬೌಯಿನ್ಸ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಮುಳುಗಿಸಿ. ನಂತರ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು 1 ಗಂಟೆ ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರಿನಿಂದ ತೊಳೆಯಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನಂತರ 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಬಿಬ್ರಿಚ್ ಅಲೋ ಆಸಿಡ್ ಫ್ಯೂಸಿನ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಯಿತು. ನಂತರ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರಿನಿಂದ ತೊಳೆದು 5% ಫಾಸ್ಫೋಮೋಲಿಬ್ಡಿನಮ್/5% ಫಾಸ್ಫೋಟಂಗ್ಸ್ಟಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಇರಿಸಲಾಯಿತು. ತೊಳೆಯದೆ, ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ನೇರವಾಗಿ ಅನಿಲೀನ್ ನೀಲಿ ದ್ರಾವಣಕ್ಕೆ 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಯಿತು. ನಂತರ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರಿನಿಂದ ತೊಳೆದು 1% ಅಸಿಟಿಕ್ ಆಮ್ಲ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ 2 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಇರಿಸಲಾಯಿತು. ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು 200 N ಎಥೆನಾಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಒಣಗಿಸಿ ಕ್ಸೈಲೀನ್‌ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಯಿತು. 10x ಉದ್ದೇಶದೊಂದಿಗೆ ಕೀಯೆನ್ಸ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಕಲೆ ಹಾಕಿದ ಸ್ಲೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ದೃಶ್ಯೀಕರಿಸಲಾಯಿತು. ಕೀಯೆನ್ಸ್ ವಿಶ್ಲೇಷಕ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಬಳಸಿ ಫೈಬ್ರೋಸಿಸ್ ಪ್ರದೇಶದ ಶೇಕಡಾವಾರು ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಪ್ರಮಾಣೀಕರಿಸಲಾಯಿತು.
CyQUANT™ MTT ಕೋಶ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತಾ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ (ಇನ್ವಿಟ್ರೋಜೆನ್, ಕಾರ್ಲ್ಸ್‌ಬಾದ್, CA), ಕ್ಯಾಟಲಾಗ್ ಸಂಖ್ಯೆ V13154, ತಯಾರಕರ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ಪ್ರಕಾರ ಕೆಲವು ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳೊಂದಿಗೆ. ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಹೇಳುವುದಾದರೆ, MTT ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಏಕರೂಪದ ಅಂಗಾಂಶ ಗಾತ್ರವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು 6 ಮಿಮೀ ವ್ಯಾಸವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಶಸ್ತ್ರಚಿಕಿತ್ಸಾ ಪಂಚ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ತಯಾರಕರ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ಪ್ರಕಾರ ಅಂಗಾಂಶಗಳನ್ನು MTT ತಲಾಧಾರವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 12-ಬಾವಿ ತಟ್ಟೆಯ ಬಾವಿಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ಲೇಪಿಸಲಾಯಿತು. ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು 37° C ನಲ್ಲಿ 3 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಜೀವಂತ ಅಂಗಾಂಶವು MTT ತಲಾಧಾರವನ್ನು ಚಯಾಪಚಯಗೊಳಿಸಿ ನೇರಳೆ ಫಾರ್ಮಾಜಾನ್ ಸಂಯುಕ್ತವನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ. MTT ದ್ರಾವಣವನ್ನು 1 ಮಿಲಿ DMSO ನೊಂದಿಗೆ ಬದಲಾಯಿಸಿ ಮತ್ತು ಹೃದಯ ವಿಭಾಗಗಳಿಂದ ನೇರಳೆ ಫಾರ್ಮಾಜಾನ್ ಅನ್ನು ಹೊರತೆಗೆಯಲು 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 37°C ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮಾದರಿಗಳನ್ನು DMSO ನಲ್ಲಿ 96-ಬಾವಿ ಸ್ಪಷ್ಟವಾದ ಕೆಳಭಾಗದ ಫಲಕಗಳಲ್ಲಿ 1:10 ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಸೈಟೇಶನ್ ಪ್ಲೇಟ್ ರೀಡರ್ (ಬಯೋಟೆಕ್) ಬಳಸಿ 570 nm ನಲ್ಲಿ ಅಳೆಯಲಾದ ನೇರಳೆ ಬಣ್ಣದ ತೀವ್ರತೆಯನ್ನು ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಹೃದಯದ ಪ್ರತಿಯೊಂದು ಸ್ಲೈಸ್‌ನ ತೂಕಕ್ಕೆ ವಾಚನಗಳನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯೀಕರಿಸಲಾಯಿತು.
ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಬಳಕೆಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ ಹಾರ್ಟ್ ಸ್ಲೈಸ್ ಮೀಡಿಯಾವನ್ನು 1 μCi/ml [5-3H]-ಗ್ಲೂಕೋಸ್ (ಮೊರಾವೆಕ್ ಬಯೋಕೆಮಿಕಲ್ಸ್, ಬ್ರಿಯಾ, CA, USA) ಹೊಂದಿರುವ ಮಾಧ್ಯಮದೊಂದಿಗೆ ಬದಲಾಯಿಸಲಾಯಿತು. 4 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾವು ನಂತರ, 0.2 N HCl ನ 100 µl ಹೊಂದಿರುವ ತೆರೆದ ಮೈಕ್ರೋಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ಗೆ 100 µl ಮಧ್ಯಮವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ. ನಂತರ ಟ್ಯೂಬ್ ಅನ್ನು 500 μl dH2O ಹೊಂದಿರುವ ಸಿಂಟಿಲೇಷನ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ನಲ್ಲಿ 37°C ನಲ್ಲಿ 72 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಆವಿಯಾಗುವಂತೆ [3H]2O ಅನ್ನು ಇರಿಸಲಾಯಿತು. ನಂತರ ಸಿಂಟಿಲೇಷನ್ ಟ್ಯೂಬ್‌ನಿಂದ ಮೈಕ್ರೋಸೆಂಟ್ರಿಫ್ಯೂಜ್ ಟ್ಯೂಬ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು 10 ಮಿಲಿ ಸಿಂಟಿಲೇಷನ್ ದ್ರವವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ. ಟ್ರೈ-ಕಾರ್ಬ್ 2900TR ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಸಿಂಟಿಲೇಷನ್ ವಿಶ್ಲೇಷಕವನ್ನು (ಪ್ಯಾಕರ್ಡ್ ಬಯೋಸೈನ್ಸ್ ಕಂಪನಿ, ಮೆರಿಡೆನ್, CT, USA) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಿಂಟಿಲೇಷನ್ ಎಣಿಕೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ನಂತರ [5-3H]-ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಚಟುವಟಿಕೆ, ಅಪೂರ್ಣ ಸಮತೋಲನ ಮತ್ತು ಹಿನ್ನೆಲೆ, [5-3H]-ಲೇಬಲ್ ಮಾಡದ ಗ್ಲೂಕೋಸ್‌ಗೆ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಸಿಂಟಿಲೇಷನ್ ಕೌಂಟರ್ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಗಣನೆಗೆ ತೆಗೆದುಕೊಂಡು ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಬಳಕೆಯನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಯಿತು. ಡೇಟಾವನ್ನು ಹೃದಯದ ವಿಭಾಗಗಳ ದ್ರವ್ಯರಾಶಿಗೆ ಸಾಮಾನ್ಯೀಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಟ್ರೈಜೋಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಅಂಗಾಂಶ ಏಕರೂಪೀಕರಣದ ನಂತರ, ತಯಾರಕರ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ಪ್ರಕಾರ Qiagen miRNeasy ಮೈಕ್ರೋ ಕಿಟ್ #210874 ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹೃದಯ ಭಾಗಗಳಿಂದ RNA ಅನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಯಿತು. RNAsec ಗ್ರಂಥಾಲಯ ತಯಾರಿಕೆ, ಅನುಕ್ರಮ ಮತ್ತು ಡೇಟಾ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನಂತೆ ನಡೆಸಲಾಯಿತು:
ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಲೈಬ್ರರಿಯ ತಯಾರಿಕೆಗೆ ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿಗೆ 1 μg ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಆರಂಭಿಕ ವಸ್ತುವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಯಿತು. ತಯಾರಕರ ಶಿಫಾರಸುಗಳನ್ನು ಅನುಸರಿಸಿ ಇಲ್ಯುಮಿನಾ (ಎನ್‌ಇಬಿ, ಯುಎಸ್‌ಎ) ಗಾಗಿ ಎನ್‌ಇಬಿ ನೆಕ್ಸ್ಟ್ ಅಲ್ಟ್ರಾಟಿಎಂ ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ ಲೈಬ್ರರಿ ತಯಾರಿ ಕಿಟ್ ಬಳಸಿ ಅನುಕ್ರಮ ಲೈಬ್ರರಿಗಳನ್ನು ರಚಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿಗೆ ಸೂಚ್ಯಂಕ ಕೋಡ್‌ಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು. ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ, ಪಾಲಿ-ಟಿ ಆಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಜೋಡಿಸಲಾದ ಮ್ಯಾಗ್ನೆಟಿಕ್ ಮಣಿಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಒಟ್ಟು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯಿಂದ ಎಂಆರ್‌ಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಯಿತು. ಎನ್‌ಇಬಿ ನೆಕ್ಸ್ಟ್ ಫಸ್ಟ್ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಸಿಂಥೆಸಿಸ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಬಫರ್ (5X) ನಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಡೈವೇಲೆಂಟ್ ಕ್ಯಾಟಯಾನ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ವಿಘಟನೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮೊದಲ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಸಿಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಯಾದೃಚ್ಛಿಕ ಹೆಕ್ಸಾಮರ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಎಂ-ಮುಲ್ವಿ ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ (ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಎಸ್ ಎಚ್-) ಬಳಸಿ ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಯಿತು. ನಂತರ ಎರಡನೇ ಸ್ಟ್ರಾಂಡ್ ಸಿಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಡಿಎನ್‌ಎ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ I ಮತ್ತು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಎಸ್ ಎಚ್ ಬಳಸಿ ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಉಳಿದ ಓವರ್‌ಹ್ಯಾಂಗ್‌ಗಳನ್ನು ಎಕ್ಸೋನ್ಯೂಕ್ಲೀಸ್/ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯಿಂದ ಮೊಂಡಾದ ತುದಿಗಳಾಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕಿನ 3′ ತುದಿಯ ಅಡೆನೈಲೇಷನ್ ನಂತರ, ಹೈಬ್ರಿಡೈಸೇಶನ್‌ಗೆ ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಲು ಹೇರ್‌ಪಿನ್ ಲೂಪ್ ರಚನೆಯೊಂದಿಗೆ ಎನ್‌ಇಬಿ ನೆಕ್ಸ್ಟ್ ಅಡಾಪ್ಟರ್ ಅನ್ನು ಅದಕ್ಕೆ ಜೋಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಆದ್ಯತೆಯ ಉದ್ದ 150-200 bp ಯ cDNA ತುಣುಕುಗಳ ಆಯ್ಕೆಗಾಗಿ. AMPure XP ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು (ಬೆಕ್‌ಮನ್ ಕೌಲ್ಟರ್, ಬೆವರ್ಲಿ, USA) ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಲೈಬ್ರರಿ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಯಿತು. ನಂತರ, ಅಡಾಪ್ಟರ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಲಿಗೇಟ್ ಮಾಡಲಾದ ಗಾತ್ರ-ಆಯ್ದ cDNA ಯೊಂದಿಗೆ 3 μl USER ಕಿಣ್ವವನ್ನು (NEB, USA) PCR ಮೊದಲು 37°C ನಲ್ಲಿ 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಮತ್ತು ನಂತರ 95°C ನಲ್ಲಿ 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಬಳಸಲಾಯಿತು. ನಂತರ PCR ಅನ್ನು ಫ್ಯೂಷನ್ ಹೈ-ಫಿಡೆಲಿಟಿ DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್, ಸಾರ್ವತ್ರಿಕ PCR ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಇಂಡೆಕ್ಸ್ (X) ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಅಂತಿಮವಾಗಿ, PCR ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಯಿತು (AMPure XP ವ್ಯವಸ್ಥೆ) ಮತ್ತು ಅಜಿಲೆಂಟ್ ಬಯೋಅನಾಲೈಜರ್ 2100 ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ ಗ್ರಂಥಾಲಯದ ಗುಣಮಟ್ಟವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಯಿತು. ನಂತರ cDNA ಗ್ರಂಥಾಲಯವನ್ನು ನೊವಾಸೆಕ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸರ್ ಬಳಸಿ ಅನುಕ್ರಮಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು. ಇಲ್ಯುಮಿನಾದಿಂದ ಕಚ್ಚಾ ಇಮೇಜ್ ಫೈಲ್‌ಗಳನ್ನು CASAVA ಬೇಸ್ ಕಾಲಿಂಗ್ ಬಳಸಿ ಕಚ್ಚಾ ರೀಡ್‌ಗಳಾಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸಲಾಯಿತು. ಕಚ್ಚಾ ಡೇಟಾವನ್ನು FASTQ(fq) ಸ್ವರೂಪದ ಫೈಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅದು ಓದುವ ಅನುಕ್ರಮಗಳು ಮತ್ತು ಅನುಗುಣವಾದ ಮೂಲ ಗುಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ. ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಿದ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ರೀಡ್‌ಗಳನ್ನು Sscrofa11.1 ಉಲ್ಲೇಖ ಜೀನೋಮ್‌ಗೆ ಹೊಂದಿಸಲು HISAT2 ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿ. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, HISAT2 4 ಬಿಲಿಯನ್ ಬೇಸ್‌ಗಳಿಗಿಂತ ದೊಡ್ಡದಾದ ಜೀನೋಮ್‌ಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ ಯಾವುದೇ ಗಾತ್ರದ ಜೀನೋಮ್‌ಗಳನ್ನು ಬೆಂಬಲಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿಯತಾಂಕಗಳಿಗೆ ಡೀಫಾಲ್ಟ್ ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿಸಲಾಗಿದೆ. RNA Seq ಡೇಟಾದಿಂದ ಸ್ಪ್ಲೈಸಿಂಗ್ ರೀಡ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರಸ್ತುತ ಲಭ್ಯವಿರುವ ವೇಗದ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಾದ HISAT2 ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಜೋಡಿಸಬಹುದು, ಇದು ಯಾವುದೇ ಇತರ ವಿಧಾನಕ್ಕಿಂತ ಅದೇ ಅಥವಾ ಉತ್ತಮ ನಿಖರತೆಯೊಂದಿಗೆ ಇರುತ್ತದೆ.
ಪ್ರತಿಲಿಪಿಗಳ ಸಮೃದ್ಧಿಯು ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ ಮಟ್ಟವನ್ನು ನೇರವಾಗಿ ಪ್ರತಿಬಿಂಬಿಸುತ್ತದೆ. ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಜೀನೋಮ್ ಅಥವಾ ಎಕ್ಸಾನ್‌ಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದ ಪ್ರತಿಲಿಪಿಗಳ ಸಮೃದ್ಧಿಯಿಂದ (ಅನುಕ್ರಮ ಎಣಿಕೆ) ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಓದುವಿಕೆಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯು ಜೀನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟಗಳು, ಜೀನ್ ಉದ್ದ ಮತ್ತು ಅನುಕ್ರಮ ಆಳಕ್ಕೆ ಅನುಪಾತದಲ್ಲಿರುತ್ತದೆ. FPKM (ಪ್ರತಿ ಮಿಲಿಯನ್ ಬೇಸ್ ಜೋಡಿಗಳಿಗೆ ಅನುಕ್ರಮಗೊಳಿಸಲಾದ ಪ್ರತಿಲಿಪಿಯ ಸಾವಿರ ಬೇಸ್ ಜೋಡಿಗಳಿಗೆ ತುಣುಕುಗಳು) ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಯಿತು ಮತ್ತು DESeq2 ಪ್ಯಾಕೇಜ್ ಬಳಸಿ ಡಿಫರೆನ್ಷಿಯಲ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ P- ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು. ನಂತರ ನಾವು ಅಂತರ್ನಿರ್ಮಿತ R-ಫಂಕ್ಷನ್ "p.adjust" ಅನ್ನು ಆಧರಿಸಿ ಬೆಂಜಮಿನಿ-ಹೋಚ್‌ಬರ್ಗ್ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪ್ರತಿ P ಮೌಲ್ಯಕ್ಕೆ ತಪ್ಪು ಆವಿಷ್ಕಾರ ದರವನ್ನು (FDR) ಲೆಕ್ಕ ಹಾಕಿದ್ದೇವೆ.
ಹೃದಯ ಭಾಗಗಳಿಂದ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾದ RNA ಅನ್ನು ಥರ್ಮೋದಿಂದ ಸೂಪರ್‌ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟ್ IV ವಿಲೋ ಮಾಸ್ಟರ್ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು 200 ng/μl ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ cDNA ಆಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸಲಾಯಿತು (ಥರ್ಮೋ, ಕ್ಯಾಟ್. ಸಂಖ್ಯೆ. 11756050). ಅಪ್ಲೈಡ್ ಬಯೋಸಿಸ್ಟಮ್ಸ್ ಎಂಡುರಾ ಪ್ಲೇಟ್ ಮೈಕ್ರೋಆಂಪ್ 384-ವೆಲ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಪರೆಂಟ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಪ್ಲೇಟ್ (ಥರ್ಮೋ, ಕ್ಯಾಟ್. ಸಂಖ್ಯೆ. 4483319) ಮತ್ತು ಮೈಕ್ರೋಆಂಪ್ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಅಂಟು (ಥರ್ಮೋ, ಕ್ಯಾಟ್. ಸಂಖ್ಯೆ. 4311971) ಬಳಸಿ ಪರಿಮಾಣಾತ್ಮಕ RT-PCR ಅನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾ ಮಿಶ್ರಣವು 5 µl ತಕ್ಮನ್ ಫಾಸ್ಟ್ ಅಡ್ವಾನ್ಸ್ಡ್ ಮಾಸ್ಟರ್ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು (ಥರ್ಮೋ, ಕ್ಯಾಟ್ # 4444557), 0.5 µl ತಕ್ಮನ್ ಪ್ರೈಮರ್ ಮತ್ತು 3.5 µl H2O ಅನ್ನು ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ ಬೆರೆಸಲಾಯಿತು. ಪ್ರಮಾಣಿತ qPCR ಚಕ್ರಗಳನ್ನು ಚಲಾಯಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು CT ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಅಪ್ಲೈಡ್ ಬಯೋಸಿಸ್ಟಮ್ಸ್ ಕ್ವಾಂಟ್‌ಸ್ಟುಡಿಯೋ 5 ನೈಜ-ಸಮಯದ PCR ಉಪಕರಣವನ್ನು (384-ವೆಲ್ ಮಾಡ್ಯೂಲ್; ಉತ್ಪನ್ನ # A28135) ಬಳಸಿ ಅಳೆಯಲಾಯಿತು. ತಕ್ಮನ್ ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಥರ್ಮೋ (GAPDH (Ss03375629_u1), PARP12 (Ss06908795_m1), PKDCC (Ss06903874_m1), CYGB (Ss06900188_m1), RGL1 (Ss06868890_m1), ACTN1 (Ss01009508_mH), GATA4 (Ss03383805_u1), GJA1 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1), COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss04245588_m1) ನಿಂದ ಖರೀದಿಸಲಾಗಿದೆ. ಎಲ್ಲಾ ಮಾದರಿಗಳ CT ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಹೌಸ್‌ಕೀಪಿಂಗ್ ಜೀನ್ GAPDH ಗೆ ಸಾಮಾನ್ಯೀಕರಿಸಲಾಗಿದೆ.
ತಯಾರಕರ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್ ಪ್ರಕಾರ NT-ProBNP ಕಿಟ್ (ಹಂದಿ) (ಕ್ಯಾಟ್. ಸಂಖ್ಯೆ. MBS2086979, MyBioSource) ಬಳಸಿ NT-ProBNP ಯ ಮಾಧ್ಯಮ ಬಿಡುಗಡೆಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಯಿತು. ಸಂಕ್ಷಿಪ್ತವಾಗಿ, ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿ ಮತ್ತು ಮಾನದಂಡದ 250 µl ಅನ್ನು ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ ನಕಲಿನಲ್ಲಿ ಸೇರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಮಾದರಿಯನ್ನು ಸೇರಿಸಿದ ತಕ್ಷಣ, ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 50 µl ಅಸ್ಸೇ ರಿಯಾಜೆಂಟ್ A ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ. ತಟ್ಟೆಯನ್ನು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಅಲ್ಲಾಡಿಸಿ ಮತ್ತು ಸೀಲಾಂಟ್‌ನಿಂದ ಮುಚ್ಚಿ. ನಂತರ ಮಾತ್ರೆಗಳನ್ನು 37°C ನಲ್ಲಿ 1 ಗಂಟೆ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು. ನಂತರ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಆಸ್ಪಿರೇಟ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು ಬಾವಿಗಳನ್ನು 350 µl 1X ವಾಶ್ ದ್ರಾವಣದಿಂದ 4 ಬಾರಿ ತೊಳೆಯಿರಿ, ಪ್ರತಿ ಬಾರಿ 1-2 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ವಾಶ್ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟ್ ಮಾಡಿ. ನಂತರ ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 100 µl ಅಸ್ಸೇ ರಿಯಾಜೆಂಟ್ B ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಪ್ಲೇಟ್ ಸೀಲಾಂಟ್‌ನಿಂದ ಮುಚ್ಚಿ. ಟ್ಯಾಬ್ಲೆಟ್ ಅನ್ನು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಅಲ್ಲಾಡಿಸಿ 37°C ನಲ್ಲಿ 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು. ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಆಸ್ಪಿರೇಟ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು 350 µl 1X ವಾಶ್ ದ್ರಾವಣದಿಂದ ಬಾವಿಗಳನ್ನು 5 ಬಾರಿ ತೊಳೆಯಿರಿ. ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 90 µl ತಲಾಧಾರ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ಮುಚ್ಚಿ. ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು 37°C ನಲ್ಲಿ 10-20 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಇನ್ಕ್ಯುಬೇಟ್ ಮಾಡಿ. ಪ್ರತಿ ಬಾವಿಗೆ 50 µl ಸ್ಟಾಪ್ ಸೊಲ್ಯೂಷನ್ ಸೇರಿಸಿ. 450 nm ನಲ್ಲಿ ಸೈಟೇಶನ್ (ಬಯೋಟೆಕ್) ಪ್ಲೇಟ್ ರೀಡರ್ ಸೆಟ್ ಬಳಸಿ ಪ್ಲೇಟ್ ಅನ್ನು ತಕ್ಷಣವೇ ಅಳೆಯಲಾಯಿತು.
5% ಟೈಪ್ I ದೋಷ ದರದೊಂದಿಗೆ ನಿಯತಾಂಕದಲ್ಲಿ 10% ಸಂಪೂರ್ಣ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು 80% ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಶಕ್ತಿಯನ್ನು ಒದಗಿಸುವ ಗುಂಪು ಗಾತ್ರಗಳನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲು ವಿದ್ಯುತ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. 5% ಟೈಪ್ I ದೋಷ ದರದೊಂದಿಗೆ ನಿಯತಾಂಕದಲ್ಲಿ 10% ಸಂಪೂರ್ಣ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು 80% ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಶಕ್ತಿಯನ್ನು ಒದಗಿಸುವ ಗುಂಪು ಗಾತ್ರಗಳನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲು ವಿದ್ಯುತ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಅನಾಲಿಸ್ ಮೊಸ್ನೋಸ್ಟಿ ಬೈಲ್ ವೈಪೋಲ್ನೆನ್ ಡ್ಲ್ಯಾ ವೈಬೋರಾ ರಾಜ್ಮೆರೋವ್ ಗ್ರೂಪ್, ಕೋಟೋರಿ ಒಬೆಸ್ಪೆಚಾಟ್ >80% ಮಾಸ್ನೋಸ್ಟಿ ಡ್ಯೂಲ್ 1000 ಅಬ್ಸೊಲ್ಯೂಟ್ನೋಗೊ ಇಸ್ಮೆನೆನಿಯಸ್ ಪ್ಯಾರಾಮೆಟ್ರ 5% ಚಾಸ್ಟೋಯ್ ಓಷಿಬಾಕ್ ಟಿಪಾ I. 5% ಟೈಪ್ I ದೋಷ ದರದೊಂದಿಗೆ 10% ಸಂಪೂರ್ಣ ಪ್ಯಾರಾಮೀಟರ್ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು 80% ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಶಕ್ತಿಯನ್ನು ಒದಗಿಸುವ ಗುಂಪು ಗಾತ್ರಗಳನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲು ಪವರ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中 10进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中 10 ಬೈಲ್ ಪ್ರೊವೆಡೆನ್ ಅನಾಲಿಸ್ ಮೊಸ್ನೋಸ್ಟಿ ಡ್ಲಿಯಾ ವೈಬೋರಾ ರಜ್ಮೇರಾ ಗ್ರೂಪ್ಪಿ, ಕೋಟೋರಿ ಒಬೆಸ್ಪೆಚಿಲ್ ಬಿ > 80% ಮಾಸ್ನೋಸ್ಟಿ %000 ಅಬ್ಸೊಲ್ಯೂಟ್ನೋಗೊ ಇಸ್ಮೆನೆನಿಯಾ ಪ್ಯಾರಾಮೆಟ್ರೋವ್ ಮತ್ತು 5% ಚಾಸ್ಟೋಟ್ ಒಷಿಬಾಕ್ ಟಿಪಾ I. 10% ಸಂಪೂರ್ಣ ಪ್ಯಾರಾಮೀಟರ್ ಬದಲಾವಣೆ ಮತ್ತು 5% ಟೈಪ್ I ದೋಷ ದರವನ್ನು ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು 80% ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಶಕ್ತಿಯನ್ನು ಒದಗಿಸುವ ಗುಂಪಿನ ಗಾತ್ರವನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲು ವಿದ್ಯುತ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು.ಪ್ರಯೋಗದ ಮೊದಲು ಅಂಗಾಂಶ ವಿಭಾಗಗಳನ್ನು ಯಾದೃಚ್ಛಿಕವಾಗಿ ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಎಲ್ಲಾ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು ಸ್ಥಿತಿ ಕುರುಡಾಗಿ ಮಾಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಎಲ್ಲಾ ಡೇಟಾವನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಿದ ನಂತರವೇ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಡಿಕೋಡ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಎಲ್ಲಾ ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಳನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲು ಗ್ರಾಫ್‌ಪ್ಯಾಡ್ ಪ್ರಿಸ್ಮ್ ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ (ಸ್ಯಾನ್ ಡಿಯಾಗೋ, CA) ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಎಲ್ಲಾ ಅಂಕಿಅಂಶಗಳಿಗೆ, <0.05 ಮೌಲ್ಯಗಳಲ್ಲಿ p-ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಮಹತ್ವದ್ದಾಗಿ ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ. ಎಲ್ಲಾ ಅಂಕಿಅಂಶಗಳಿಗೆ, <0.05 ಮೌಲ್ಯಗಳಲ್ಲಿ p-ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಮಹತ್ವದ್ದಾಗಿ ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ. Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. ಎಲ್ಲಾ ಅಂಕಿಅಂಶಗಳಿಗೆ, <0.05 ಮೌಲ್ಯಗಳಲ್ಲಿ p-ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಮಹತ್ವದ್ದಾಗಿ ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ.对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的。对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的。 Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. ಎಲ್ಲಾ ಅಂಕಿಅಂಶಗಳಿಗೆ, <0.05 ಮೌಲ್ಯಗಳಲ್ಲಿ p-ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಮಹತ್ವದ್ದಾಗಿ ಪರಿಗಣಿಸಲಾಗಿದೆ.ಕೇವಲ 2 ಹೋಲಿಕೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಡೇಟಾದ ಮೇಲೆ ಎರಡು ಬಾಲದ ವಿದ್ಯಾರ್ಥಿಗಳ ಟಿ-ಪರೀಕ್ಷೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಬಹು ಗುಂಪುಗಳ ನಡುವಿನ ಮಹತ್ವವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಏಕಮುಖ ಅಥವಾ ಎರಡು-ಮಾರ್ಗ ANOVA ಅನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಪೋಸ್ಟ್ ಹಾಕ್ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವಾಗ, ಬಹು ಹೋಲಿಕೆಗಳನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲು ಟುಕಿಯ ತಿದ್ದುಪಡಿಯನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸಲಾಯಿತು. ವಿಧಾನಗಳ ವಿಭಾಗದಲ್ಲಿ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ FDR ಮತ್ತು p.adjust ಅನ್ನು ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ ಮಾಡುವಾಗ RNAsec ಡೇಟಾವು ವಿಶೇಷ ಸಂಖ್ಯಾಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಪರಿಗಣನೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.
ಅಧ್ಯಯನ ವಿನ್ಯಾಸದ ಕುರಿತು ಹೆಚ್ಚಿನ ಮಾಹಿತಿಗಾಗಿ, ಈ ಲೇಖನಕ್ಕೆ ಲಿಂಕ್ ಮಾಡಲಾದ ನೇಚರ್ ರಿಸರ್ಚ್ ರಿಪೋರ್ಟ್ ಸಾರಾಂಶವನ್ನು ನೋಡಿ.