សូមអរគុណសម្រាប់ការចូលមើល Nature.com.កំណែកម្មវិធីរុករកតាមអ៊ីនធឺណិតដែលអ្នកកំពុងប្រើមានកម្រិតគាំទ្រសម្រាប់ CSS។ សម្រាប់បទពិសោធន៍ដ៏ល្អបំផុត យើងសូមណែនាំឱ្យអ្នកប្រើកម្មវិធីរុករកតាមអ៊ីនធឺណិតដែលបានអាប់ដេត (ឬបិទមុខងារដែលត្រូវគ្នានៅក្នុង Internet Explorer)។ ក្នុងពេលជាមួយគ្នានេះ ដើម្បីធានាបាននូវការគាំទ្របន្ត យើងនឹងបង្ហាញគេហទំព័រដោយគ្មានរចនាប័ទ្ម និង JavaScript ។
វ៉ិចទ័រហ្សែនសម្រាប់ការព្យាបាលជំងឺសួត cystic fibrosis គួរតែកំណត់គោលដៅនៃផ្លូវដង្ហើមដែលដំណើរការ ពីព្រោះការចម្លងសួតផ្នែកខាងក្រៅមិនផ្តល់អត្ថប្រយោជន៍ព្យាបាលទេ។ ប្រសិទ្ធភាពនៃការចម្លងមេរោគគឺទាក់ទងដោយផ្ទាល់ទៅនឹងពេលវេលារស់នៅរបស់វ៉ិចទ័រ។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ សារធាតុរាវចែកចាយដូចជាអ្នកដឹកជញ្ជូនហ្សែនតាមធម្មជាតិបានសាយភាយចូលទៅក្នុង alveoli អំឡុងពេលបំផុសគំនិត ហើយការដឹកជញ្ជូនត្រូវបានជម្រះដោយភាគល្អិតនៃ mucoli យ៉ាងឆាប់រហ័ស។ ពេលវេលាស្នាក់នៅរបស់អ្នកផ្ទុកហ្សែននៅក្នុងផ្លូវដង្ហើមមានសារៈសំខាន់ ប៉ុន្តែពិបាកក្នុងការសម្រេចបាន។ ភាគល្អិតម៉ាញេទិកដែលផ្សំពីក្រុមហ៊ុនបញ្ជូនហ្សែន ដែលអាចតម្រង់ទៅផ្ទៃផ្លូវដង្ហើមអាចកែលម្អការកំណត់គោលដៅក្នុងតំបន់។ ដោយសារតែបញ្ហាប្រឈមនៃការមើលឃើញនៅក្នុង vivo ឥរិយាបថនៃភាគល្អិតម៉ាញេទិកតូចបែបនេះនៅលើផ្ទៃផ្លូវដង្ហើមនៅក្នុងវត្តមាននៃការអនុលោមតាមដែនម៉ាញេទិក ដើម្បីធ្វើសមកាលកម្មនៃដែនម៉ាញេទិចនេះ ត្រូវបានគេយល់តិចតួច។ ចលនានៅក្នុង vivo នៃស៊េរីនៃភាគល្អិតម៉ាញេទិកនៅក្នុងបំពង់ករបស់កណ្តុរដែលត្រូវបានចាក់ថ្នាំស្ពឹក ដើម្បីពិនិត្យមើលថាមវន្ត និងលំនាំនៃឥរិយាបទនៃភាគល្អិតបុគ្គល និងភាគច្រើននៅក្នុង vivo។ បន្ទាប់មកយើងក៏បានវាយតម្លៃថាតើការបញ្ជូនភាគល្អិតម៉ាញេទិច lentiviral នៅក្នុងវត្តមាននៃដែនម៉ាញេទិកនឹងបង្កើនប្រសិទ្ធភាពនៃការបញ្ជូននៅក្នុង Synchrray magnetic trachea ដែរឬទេ។ ភាគល្អិតនៅក្នុងដែនម៉ាញេទិចនៅស្ថានី និងផ្លាស់ទីក្នុង vitro និងនៅក្នុង vivo។ ភាគល្អិតមិនអាចអូសបានយ៉ាងងាយស្រួលតាមបណ្តោយផ្ទៃនៃផ្លូវដង្ហើមដែលមានមេដែកនោះទេ ប៉ុន្តែក្នុងអំឡុងពេលដឹកជញ្ជូន ប្រាក់បញ្ញើត្រូវបានប្រមូលផ្តុំនៅក្នុងទិដ្ឋភាពដែលវាលម៉ាញេទិកខ្លាំងបំផុត។ ប្រសិទ្ធភាពផ្ទេរក៏ត្រូវបានកើនឡើង 6 ដងផងដែរ នៅពេលដែលភាគល្អិតម៉ាញេទិក lentiviral ត្រូវបានបញ្ជូននៅក្នុងវត្តមាននៃវាលម៉ាញេទិក លទ្ធផលនៃវាលម៉ាញេទិក។ អាចជាវិធីសាស្រ្តដ៏មានតម្លៃក្នុងការកែលម្អការកំណត់គោលដៅវ៉ិចទ័រហ្សែន និងបង្កើនកម្រិតបញ្ជូនបន្តក្នុងការដឹកនាំផ្លូវដង្ហើមនៅក្នុង vivo ។
Cystic fibrosis (CF) ត្រូវបានបង្កឡើងដោយការប្រែប្រួលនៃហ្សែនតែមួយដែលហៅថា CF transmembrane conductance regulator (CFTR)។ប្រូតេអ៊ីន CFTR គឺជាឆានែលអ៊ីយ៉ុងដែលមាននៅក្នុងកោសិកា epithelial ជាច្រើននៅទូទាំងរាងកាយ រួមទាំងផ្លូវដកដង្ហើម ដែលជាកន្លែងសំខាន់នៃជំរៅ CF pathogenesis។ CFTR defects នាំទៅដល់ការដឹកជញ្ជូនទឹកមិនប្រក្រតីនៃផ្លូវខ្យល់ និងកាត់បន្ថយសំណើមលើផ្ទៃ។ layer.This ក៏ធ្វើឱ្យខូចសមត្ថភាពនៃប្រព័ន្ធដឹកជញ្ជូន mucociliary (MCT) ដើម្បីជម្រះភាគល្អិតដែលស្រូបចូល និងធាតុបង្កជំងឺចេញពីផ្លូវដង្ហើម។ គោលដៅរបស់យើងគឺដើម្បីបង្កើតការព្យាបាលដោយហ្សែន lentiviral (LV) ដើម្បីផ្តល់ច្បាប់ចម្លងត្រឹមត្រូវនៃហ្សែន CFTR និងកែលម្អ ASL, MCT និងសុខភាពសួត និងបន្តអភិវឌ្ឍបច្ចេកវិទ្យាថ្មីដែលមានសមត្ថភាពអាចវាស់ស្ទង់បាន។
វ៉ិចទ័រ LV គឺជាបេក្ខភាពឈានមុខគេមួយសម្រាប់ការព្យាបាលហ្សែនផ្លូវដង្ហើម CF ជាចម្បងដោយសារតែពួកគេអាចបញ្ចូលហ្សែនព្យាបាលជាអចិន្ត្រៃយ៍ទៅក្នុងកោសិកា basal ផ្លូវដង្ហើម (កោសិកាដើមផ្លូវដង្ហើម)។ វាសំខាន់ណាស់ព្រោះវាអាចស្ដារឡើងវិញនូវជាតិទឹកធម្មតា និងការបញ្ចេញទឹករំអិលដោយបែងចែកទៅជាហ្សែនមុខងារដែលត្រូវបានកែតម្រូវដោយ CF ដែលទាក់ទងនឹងកោសិកាផ្ទៃផ្លូវខ្យល់ដែលនាំឱ្យ V ទទួលបានអត្ថប្រយោជន៍។ ផ្លូវដង្ហើម ដោយសារនេះជាកន្លែងដែលជំងឺសួត CF ចាប់ផ្តើម។ ការបញ្ជូនវ៉ិចទ័រកាន់តែជ្រៅទៅក្នុងសួតអាចបណ្តាលឱ្យមានការផ្លាស់ប្តូរ alveolar ប៉ុន្តែនេះមិនមានអត្ថប្រយោជន៍ព្យាបាលនៅក្នុង CF នោះទេ។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ សារធាតុរាវដូចជាអ្នកដឹកជញ្ជូនហ្សែនធម្មជាតិធ្វើចំណាកស្រុកទៅ alveoli តាមការបំផុសគំនិតបន្ទាប់ពីការសម្រាល 3,4 និងប្រសិទ្ធភាពព្យាបាលដោយផ្ទាល់ទៅក្នុងរន្ធ CTL យ៉ាងច្បាស់លាស់។ រយៈពេលដែលវ៉ិចទ័រនៅតែនៅជាប់នឹងកោសិកាគោលដៅ ដើម្បីអនុញ្ញាតឱ្យមានការស្រូបយកកោសិកា - "ពេលវេលាស្នាក់នៅ" 5 - ដែលត្រូវបានកាត់បន្ថយយ៉ាងងាយស្រួលដោយលំហូរខ្យល់ក្នុងតំបន់ធម្មតា ក៏ដូចជាការចាប់យកទឹករំអិលដែលបានសម្របសម្រួល និង MCT ។ សម្រាប់ CF សមត្ថភាពក្នុងការពន្យារពេលវេលារស់នៅរបស់ LV នៅក្នុងផ្លូវដង្ហើមមានសារៈសំខាន់ក្នុងការសម្រេចបានកម្រិតខ្ពស់នៃការបញ្ជូនក្នុងតំបន់នេះ ប៉ុន្តែរហូតមកដល់ពេលនេះមានការប្រឈម។
ដើម្បីជម្នះឧបសគ្គនេះ យើងស្នើថា ភាគល្អិតម៉ាញេទិក LV (MPs) អាចជួយក្នុងវិធីពីរយ៉ាងបំពេញបន្ថែម។ ទីមួយ ពួកវាអាចត្រូវបានដឹកនាំដោយមេដែកទៅលើផ្ទៃផ្លូវដង្ហើម ដើម្បីកែលម្អការកំណត់គោលដៅ និងជួយឱ្យភាគល្អិតនៃក្រុមហ៊ុនដឹកជញ្ជូនហ្សែនរស់នៅក្នុងតំបន់ផ្លូវដង្ហើមដែលចង់បាន។ និង ASL) ដើម្បីផ្លាស់ទីទៅស្រទាប់កោសិកា 6.MPs ត្រូវបានគេប្រើប្រាស់យ៉ាងទូលំទូលាយជាយានចែកចាយថ្នាំគោលដៅ នៅពេលដែលពួកវាភ្ជាប់ទៅនឹងអង្គបដិប្រាណ ថ្នាំព្យាបាលដោយគីមី ឬម៉ូលេគុលតូចៗផ្សេងទៀតដែលភ្ជាប់ទៅនឹងភ្នាសកោសិកា ឬភ្ជាប់ទៅនឹងអ្នកទទួលផ្ទៃក្រឡាដែលពាក់ព័ន្ធ និងកកកុញនៅកន្លែងដុំសាច់ក្នុងវត្តមាននៃចរន្តអគ្គិសនីឋិតិវន្ត។ វាលម៉ាញេទិកសម្រាប់ការព្យាបាលជំងឺមហារីក 7. បច្ចេកទេស "កំដៅខ្ពស់" ផ្សេងទៀតមានគោលបំណងធ្វើឱ្យ MPs ឡើងកំដៅនៅពេលដែលពួកគេត្រូវបានប៉ះពាល់នឹងវាលម៉ាញេទិកយោល ដោយហេតុនេះបំផ្លាញកោសិកាដុំសាច់។ គោលការណ៍នៃការផ្ទេរម៉ាញេទិក ដែលក្នុងនោះដែនម៉ាញេទិកត្រូវបានប្រើជាភ្នាក់ងារចម្លងដើម្បីបង្កើនការផ្ទេរ DNA ទៅកាន់កោសិកា ត្រូវបានគេប្រើជាទូទៅនៅក្នុង vitro ដោយប្រើកោសិកាមិនឆ្លងមេរោគ និងពិបាកចម្លងនៃកោសិកា។ ប្រសិទ្ធភាពនៃ LV magnetotransfection ត្រូវបានបង្កើតឡើង ជាមួយនឹងការបញ្ជូន LV-MPs ទៅក្នុង vitro ទៅកាន់បន្ទាត់កោសិកា epithelial bronchial របស់មនុស្សនៅក្នុងវត្តមាននៃវាលម៉ាញេទិកឋិតិវន្ត បង្កើនប្រសិទ្ធភាពនៃការបញ្ជូនដោយ 186 ដងបើប្រៀបធៀបទៅនឹងវ៉ិចទ័រ LV តែឯង។LV-MP ក៏ត្រូវបានអនុវត្តចំពោះគំរូ in vitro CF ដែលការផ្ទេរម៉ាញេទិកនៅក្នុងខ្យល់ - 2 ​​ដងនៃទំនាក់ទំនង LVquid ។ CF sputum10.ទោះជាយ៉ាងណា នៅក្នុង vivo magnetotransfection នៃសរីរាង្គបានទទួលការយកចិត្តទុកដាក់តិចតួច ហើយត្រូវបានវាយតម្លៃតែនៅក្នុងការសិក្សាសត្វមួយចំនួនប៉ុណ្ណោះ 11,12,13,14,15 ជាពិសេសនៅក្នុងសួត 16,17។យ៉ាងណាក៏ដោយ ឱកាសសម្រាប់ការបញ្ជូនម៉ាញេទិកក្នុងការព្យាបាលដោយប្រើសួត CF គឺច្បាស់ណាស់ថា (0.2Tan)។ ការសិក្សាភ័ស្តុតាងនៃគំនិតនៃការចែកចាយសួត pulmonary nanoparticle ដ៏មានប្រសិទ្ធិភាពនឹងត្រួសត្រាយផ្លូវសម្រាប់យុទ្ធសាស្រ្តស្រូបចូល CFTR នាពេលអនាគតដើម្បីកែលម្អលទ្ធផលព្យាបាលនៅក្នុងអ្នកជំងឺ CF"6.
ឥរិយាបទនៃភាគល្អិតម៉ាញេទិចតូចៗលើផ្ទៃផ្លូវខ្យល់នៅក្នុងវត្តមាននៃដែនម៉ាញេទិកដែលអនុវត្តគឺពិបាកក្នុងការមើលឃើញ និងសិក្សា ដូច្នេះហើយទើបយល់បានតិចតួច។ នៅក្នុងការសិក្សាផ្សេងទៀត យើងបានបង្កើតវិធីសាស្ត្រថតកាំរស្មីអ៊ិចតាមដំណាក់កាលផ្ទុយគ្នារវាង synchrotron-propagation-based (PB-PCXI) ដើម្បីវាស់ស្ទង់ជម្រៅដែលមិនមានការរាតត្បាត និងកំណត់បរិមាណនាទីនៅក្នុង vivo 18 និងការផ្លាស់ប្តូរផ្ទៃ M20 នៃឧស្ម័ន។ ការផ្តល់ជាតិទឹក និងប្រើជាសូចនាករដំបូងនៃប្រសិទ្ធភាពនៃការព្យាបាល។ លើសពីនេះ វិធីសាស្ត្រវាយតម្លៃ MCT របស់យើងប្រើភាគល្អិតអង្កត់ផ្ចិត 10-35 µm ដែលផ្សំឡើងដោយ alumina ឬកញ្ចក់សន្ទស្សន៍ចំណាំងបែរខ្ពស់ ជាសញ្ញាសម្គាល់ MCT ដែលអាចមើលឃើញដោយប្រើ PB-PCXI21។ បច្ចេកទេសទាំងពីរគឺសមរម្យសម្រាប់ការមើលឃើញនៃប្រភេទភាគល្អិតជាច្រើន រួមទាំង MP ។
ដោយសារតែគុណភាពបង្ហាញទំហំខ្ពស់ និងបណ្ដោះអាសន្នរបស់វា បច្ចេកទេសវិភាគ ASL និង MCT ដែលមានមូលដ្ឋានលើ PB-PCXI របស់យើងគឺសមល្អសម្រាប់ការពិនិត្យមើលថាមវន្ត និងលំនាំនៃឥរិយាបទនៃភាគល្អិតតែមួយ និងច្រើននៅក្នុង vivo ដើម្បីជួយយើងយល់ និងបង្កើនប្រសិទ្ធភាពបច្ចេកទេសបញ្ជូនហ្សែន MP ។ វិធីសាស្រ្តដែលយើងប្រើនៅទីនេះបានមកពីការសិក្សារបស់យើងដោយប្រើវ៉ិចទ័រ flu SPring-8 beamline 20 ។ ការផ្តល់កម្រិតថ្នាំទៅក្នុងផ្លូវដង្ហើមច្រមុះ និងសួតរបស់សត្វកណ្ដុរ ដើម្បីជួយពន្យល់អំពីគំរូនៃការបញ្ចេញហ្សែនមិនឯកសណ្ឋានរបស់យើង ដែលបានសង្កេតឃើញនៅក្នុងការសិក្សាអំពីសត្វកណ្ដុរ 3,4 ។
គោលបំណងនៃការសិក្សានេះគឺដើម្បីប្រើប្រាស់ synchrotron PB-PCXI ដើម្បីស្រមៃមើលចលនានៅក្នុង vivo នៃ MPs ស៊េរីនៅក្នុង trachea នៃសត្វកណ្តុរដែលកំពុងរស់នៅ។ ការសិក្សារូបភាព PB-PCXI ទាំងនេះត្រូវបានរចនាឡើងដើម្បីសាកល្បងជួរនៃ MPs កម្លាំងដែនម៉ាញេទិក និងទីតាំងដើម្បីកំណត់ពីឥទ្ធិពលរបស់វាទៅលើចលនា MP ។ យើងសន្មតថា ដែនម៉ាញេទិកនឹងស្ថិតនៅផ្នែកខាងក្រៅ។ ការសិក្សាទាំងនេះក៏បានអនុញ្ញាតឱ្យយើងកំណត់ការកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធមេដែកដែលបង្កើនចំនួនភាគល្អិតដែលរក្សាទុកក្នុង trachea បន្ទាប់ពីការបន្ទោរបង់។ នៅក្នុងស៊េរីទីពីរនៃការសិក្សា យើងបានព្យាយាមប្រើការកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធដ៏ល្អប្រសើរនេះ ដើម្បីបង្ហាញពីគំរូ transduction ដែលកើតចេញពីការបញ្ជូន vivo នៃ LV-MPs ទៅកាន់ផ្លូវខ្យល់របស់កណ្តុរ ដោយផ្អែកលើការសន្មត់នៃលទ្ធផលនៃ LV-MP ក្នុងការបញ្ជូនតាមខ្យល់។ ធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងនូវប្រសិទ្ធភាពនៃការបញ្ជូន LV ។
ការសិក្សាសត្វទាំងអស់ត្រូវបានអនុវត្តដោយអនុលោមតាមពិធីការដែលត្រូវបានអនុម័តដោយសាកលវិទ្យាល័យ Adelaide (M-2019-060 និង M-2020-022) និងគណៈកម្មាធិការសីលធម៌សត្វ SPring-8 Synchrotron។ ការពិសោធន៍ត្រូវបានអនុវត្តតាមការណែនាំរបស់ ARRIVE ។
ការថតកាំរស្មី X ទាំងអស់ត្រូវបានអនុវត្តនៅ BL20XU beamline នៅ SPring-8 synchrotron ក្នុងប្រទេសជប៉ុន ដោយប្រើការរៀបចំស្រដៀងនឹងអ្វីដែលបានពិពណ៌នាពីមុន 21,22។ និយាយដោយសង្ខេប ប្រអប់ពិសោធន៍ស្ថិតនៅចម្ងាយ 245 ម៉ែត្រពីសង្វៀនផ្ទុក synchrotron ។ ចម្ងាយគំរូទៅឧបករណ៍ចាប់សញ្ញានៃ 0.6 magingim 3 ត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការសិក្សា particle បង្កើតបែបផែនកម្រិតពណ៌ដំណាក់កាល។ ថាមពលធ្នឹម monochromatic នៃ 25 keV ត្រូវបានប្រើប្រាស់។ រូបភាពត្រូវបានថតដោយប្រើឧបករណ៍បំប្លែងកាំរស្មីអ៊ិចដែលមានគុណភាពបង្ហាញខ្ពស់ (SPring-8 BM3) ភ្ជាប់ជាមួយឧបករណ៍ចាប់ sCMOS។ កម្មវិធីបំប្លែងកាំរស្មីអ៊ិចទៅជាពន្លឺដែលអាចមើលឃើញដោយប្រើឧបករណ៍ស្កែនទ័រក្រាស់ 10 µm (Gd3O1CMOS) បន្ទាប់មកជាឧបករណ៍ចាប់សញ្ញាដោយផ្ទាល់ទៅ គោលបំណងមីក្រូទស្សន៍ចំនួន 10 (NA 0.3)។ឧបករណ៍ចាប់ sCMOS គឺ Orca-Flash4.0 (Hamamatsu Photonics, Japan) ដែលមានទំហំអារេ 2048 × 2048 ភីកសែល និងទំហំភីកសែលឆៅប្រហែល 6.5 × 6.5 µm. ការរៀបចំនេះផ្តល់ផលជាទីគាប់ចិត្តនៃទំហំ អ៊ីសូត្រូពិច × 1 មីលីម៉ែត្រ និងទំហំភីកសែល 1µm ។ 1.1 mm.ប្រវែងនៃការប៉ះពាល់ 100 ms ត្រូវបានជ្រើសរើសដើម្បីបង្កើនអនុបាតសញ្ញា-សំឡេងរំខាននៃភាគល្អិតម៉ាញេទិកនៅខាងក្នុង និងខាងក្រៅផ្លូវដង្ហើម ខណៈពេលដែលកាត់បន្ថយវត្ថុបុរាណចលនាដែលបណ្ដាលមកពីការដកដង្ហើម។ សម្រាប់ការសិក្សា vivo ឧបករណ៍បិទកាំរស្មីអ៊ិចលឿនត្រូវបានដាក់ក្នុងផ្លូវកាំរស្មីអ៊ិចដើម្បីកំណត់កម្រិតវិទ្យុសកម្មដោយរារាំងការបញ្ចោញកាំរស្មីអ៊ិច។
ក្រុមហ៊ុនដឹកជញ្ជូន LV មិនត្រូវបានប្រើនៅក្នុងការសិក្សារូបភាព SPring-8 PB-PCXI ណាមួយទេ ដោយសារអង្គជំនុំជម្រះរូបភាព BL20XU មិនត្រូវបានបញ្ជាក់កម្រិត Biosafety កម្រិត 2។ ជំនួសមកវិញ យើងបានជ្រើសរើសសមាជិកសភាដែលមានលក្ខណៈសម្បត្តិគ្រប់គ្រាន់ពីអ្នកផ្គត់ផ្គង់ពាណិជ្ជកម្មពីរ ដែលគ្របដណ្តប់លើទំហំ សម្ភារៈ ការប្រមូលផ្តុំជាតិដែក និងការយល់ដឹងពីកម្រិតនៃចលនា និងសមត្ថភាពនៃកញ្ចក់ជាមុនសិន។ នៅក្នុងផ្លូវដង្ហើម។ លើផ្ទៃ.MPs មានទំហំចាប់ពី 0.25 ដល់ 18 μm និងត្រូវបានផលិតចេញពីវត្ថុធាតុជាច្រើនប្រភេទ (សូមមើលតារាងទី 1) ប៉ុន្តែសមាសធាតុនៃគំរូនីមួយៗ រួមទាំងទំហំនៃភាគល្អិតម៉ាញេទិចនៅក្នុង MP គឺមិនត្រូវបានគេដឹងនោះទេ។ ដោយផ្អែកលើការសិក្សា MCT ដ៏ទូលំទូលាយរបស់យើង 19, 20, 21, 23, 24µ យើងអាចរំពឹងថានឹងមានខ្យល់អាកាសតិចបំផុតចំនួន 5 ។ ផ្ទៃ ជាឧទាហរណ៍ ដោយដកស៊ុមជាប់គ្នា ដើម្បីមើលការមើលឃើញប្រសើរឡើងនៃចលនា MP ។ MP ទំហំ 0.25 μm តែមួយមានទំហំតូចជាងគុណភាពបង្ហាញរបស់ឧបករណ៍រូបភាព ប៉ុន្តែ PB-PCXI ត្រូវបានគេរំពឹងថានឹងរកឃើញកម្រិតសំឡេងរបស់ពួកគេ និងចលនានៃអង្គធាតុរាវលើផ្ទៃដែលពួកវាត្រូវបានដាក់បន្ទាប់ពីការដាក់ប្រាក់។
សំណាកសម្រាប់ MP នីមួយៗក្នុងតារាងទី 1 ត្រូវបានរៀបចំក្នុង 20 μl កែវ capillaries (Drummond Microcaps, PA, USA) ដែលមានអង្កត់ផ្ចិតខាងក្នុង 0.63 mm. ភាគល្អិតនៃ Corpuscular មាននៅក្នុងទឹក ខណៈដែលភាគល្អិត CombiMag មាននៅក្នុងវត្ថុរាវដែលមានកម្មសិទ្ធិរបស់អ្នកផលិត។ បំពង់នីមួយៗត្រូវបានបំពេញដោយវត្ថុរាវពាក់កណ្តាល (ប្រហែល 1 μl) ។ រូបភាពទី 1) សរសៃកញ្ចក់ត្រូវបានដាក់ផ្ដេកនៅលើដំណាក់កាលគំរូនៅក្នុងប្រអប់រូបភាពរៀងៗខ្លួន ហើយដាក់គែមរបស់សារធាតុរាវ។A អង្កត់ផ្ចិត 19 mm (ប្រវែង 28 mm) សែលនីកែលកម្រមានជាតិដែក neodymium boron (NdFeB) magnet (N35, cat. no. LM1652, Jaycaret) របស់អូស្ត្រាលី។ Tesla ត្រូវបានភ្ជាប់ទៅដំណាក់កាលបកប្រែដាច់ដោយឡែកមួយ ដើម្បីសម្រេចបាននូវការផ្លាស់ប្តូរទីតាំងរបស់វាពីចម្ងាយកំឡុងពេលថតរូបភាព។ ការទទួលបានរូបភាពកាំរស្មីអ៊ិចចាប់ផ្តើមនៅពេលដែលមេដែកស្ថិតនៅចម្ងាយប្រហែល 30 មីលីម៉ែត្រពីលើគំរូ ហើយរូបភាពត្រូវបានទទួលក្នុងអត្រា 4 ហ្វ្រេមក្នុងមួយវិនាទី។ អំឡុងពេលថតរូបភាព មេដែកត្រូវបាននាំមកជិតបំពង់កែវ (ប្រហែល 1 ម.ម. ទីតាំងនៃផលប៉ះពាល់) ហើយបន្ទាប់មកត្រូវបានបកប្រែជាផ្នែក។
ការរៀបចំរូបភាពនៅក្នុង vitro ដែលមានសំណាក MP នៅក្នុងកញ្ចក់ capillaries នៅលើដំណាក់កាលបកប្រែគំរូ xy។ ផ្លូវនៃកាំរស្មី X ត្រូវបានសម្គាល់ដោយបន្ទាត់ដាច់ ៗ ពណ៌ក្រហម។
នៅពេលដែលការមើលឃើញនៅក្នុង vitro នៃសមាជិកសភាត្រូវបានបង្កើតឡើង សំណុំរងនៃពួកគេត្រូវបានធ្វើតេស្តនៅក្នុង vivo នៅក្នុងសត្វកណ្តុរ albino Wistar ញីប្រភេទព្រៃ (~12 សប្តាហ៍, ~200 ក្រាម) 0.24 mg/kg medetomidine (Domitor®, Zenoaq, Japan), 3.2 mg/kg midazolam (Dormicumr®, Japan/Astellas) (Vetorphale®, Meiji Seika) សត្វកណ្ដុរត្រូវបានចាក់ថ្នាំស្ពឹកជាមួយល្បាយនៃ Pharma ប្រទេសជប៉ុន) ដោយការចាក់បញ្ចូលតាមរន្ធគូថ។ បន្ទាប់ពីការប្រើថ្នាំសន្លប់ ពួកគេត្រូវបានរៀបចំសម្រាប់ការថតរូបភាពដោយយករោមនៅជុំវិញបំពង់ខ្យល់ បញ្ចូលបំពង់ endotracheal (ET; 16 Ga iv cannula, Terumo BCT) មានថង់កម្ដៅដើម្បីរក្សាសីតុណ្ហភាពរាងកាយ 22 .បន្ទះរូបភាពត្រូវបានភ្ជាប់ទៅដំណាក់កាលបកប្រែគំរូនៅក្នុងប្រអប់រូបភាពនៅមុំបន្តិច ដើម្បីតម្រឹមបំពង់ខ្យល់ផ្ដេកក្នុងរូបភាព X-ray ដូចបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 2a ។
(a) នៅក្នុងការរៀបចំរូបភាព vivo នៅក្នុងប្រអប់រូបភាព SPring-8 ផ្លូវនៃកាំរស្មី X ត្រូវបានសម្គាល់ដោយបន្ទាត់ដាច់ៗពណ៌ក្រហម។(b,c) ការធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្មមេដែកនៅលើ trachea ត្រូវបានអនុវត្តពីចម្ងាយដោយប្រើកាមេរ៉ា IP ពីរដែលបានតំឡើងតាមទិស។ នៅផ្នែកខាងឆ្វេងនៃរូបភាពអេក្រង់ រង្វិលជុំលួសដែលដាក់ក្បាលចែកចាយអាចត្រូវបានគេមើលឃើញ ហើយនៅក្នុង tube ។
ប្រព័ន្ធបូមសឺរាុំងដែលគ្រប់គ្រងពីចម្ងាយ (UMP2, World Precision Instruments, Sarasota, FL) ដោយប្រើសឺរាុំងកែវ 100 μl ត្រូវបានភ្ជាប់ទៅបំពង់ PE10 (OD 0.61 mm, ID 0.28 mm) តាមរយៈម្ជុល 30 Ga ។ micropump, សឺរាុំង plunger ត្រូវបានដកចេញ ខណៈពេលដែលចុងបំពង់ត្រូវបានជ្រមុជនៅក្នុងគំរូ MP ដែលត្រូវចែកចាយ។ បំពង់ចែកចាយដែលបានផ្ទុកត្រូវបានបញ្ចូលទៅក្នុងបំពង់ endotracheal ដោយដាក់ចុងនៅក្នុងផ្នែកខ្លាំងបំផុតនៃដែនម៉ាញេទិកដែលបានអនុវត្តដែលយើងរំពឹងទុក។ ការទិញរូបភាពត្រូវបានគ្រប់គ្រងដោយប្រើឧបករណ៍ចាប់ដង្ហើម ការកំណត់ពេលវេលា និងសញ្ញានៃការដកដង្ហើមរបស់យើងទាំងអស់ ការបើក/បិទ និងការទទួលរូបភាព) ត្រូវបានថតដោយប្រើ Powerlab និង LabChart ( AD Instruments, Sydney, Australia) 22. នៅពេលដែលរូបភាព នៅពេលដែលឯករភជប់មិនអាចចូលប្រើបាន កាមេរ៉ា IP ពីរ (Panasonic BB-SC382) ត្រូវបានដាក់នៅមុំប្រហែល 90° ពីគ្នាទៅវិញទៅមក ហើយត្រូវបានគេប្រើដើម្បីតាមដានទីតាំងរបស់ trachea ។ 2b,c)) ដើម្បីកាត់បន្ថយវត្ថុបុរាណដែលមានចលនា រូបភាពមួយត្រូវបានទទួលក្នុងមួយដង្ហើម អំឡុងពេលលំហូរទឹកទន្លេបញ្ចប់។
មេដែកមួយត្រូវបានភ្ជាប់ទៅដំណាក់កាលទីពីរ ដែលអាចស្ថិតនៅពីចម្ងាយពីខាងក្រៅលំនៅដ្ឋានរូបភាព។ ទីតាំងមេដែក និងការកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធផ្សេងៗត្រូវបានសាកល្បង រួមទាំង៖ បានម៉ោននៅមុំប្រហែល 30° ពីលើបំពង់ខ្យល់ (ការកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធបង្ហាញក្នុងរូបភាព 2a និង 3a); មេដែកមួយនៅពីលើសត្វ និងមួយទៀតនៅខាងក្រោមដោយមានបង្គោលកំណត់ដើម្បីទាក់ទាញ (រូបភាពទី 3b ); មេដែកមួយនៅពីលើសត្វ និងមួយទៀតនៅខាងក្រោម ដោយមានបង្គោលកំណត់ដើម្បីរុញ (រូបភាពទី 3 គ); និងមេដែកមួយខាងលើ និងកាត់កែងទៅនឹងបំពង់ខ្យល់ (រូបភាពទី 3 ឃ)។ នៅពេលដែលសត្វ និងមេដែកត្រូវបានកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធ ហើយ MP ដែលត្រូវធ្វើតេស្តត្រូវបានផ្ទុកទៅក្នុងស្នប់សឺរាុំង ផ្តល់កម្រិតថ្នាំ 50 μl ក្នុងអត្រា 4 μl/sec ខណៈពេលដែលទទួលបានរូបភាព។ បន្ទាប់មកមេដែកត្រូវបានផ្លាស់ទីទៅក្រោយ និងបន្តទៅខាងមុខ។ ខណៈពេលក្រោយ។
ការកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធម៉ាញេទិកសម្រាប់ការថតរូបភាព vivo (a) មេដែកតែមួយនៅពីលើ trachea នៅមុំប្រហែល 30°, (b) មេដែកពីរដែលកំណត់ដើម្បីទាក់ទាញ (c) មេដែកពីរដែលកំណត់ដើម្បីរុញ (d) មេដែកតែមួយខាងលើ និងកាត់កែងនៅក្នុង trachea។ អ្នកសង្កេតមើលចុះពីមាត់ទៅសួតតាមរយៈ trachea ហើយឆ្លងកាត់ផ្នែកខាងឆ្វេង។ ផ្នែកខាងស្តាំ។ មេដែកត្រូវបានផ្លាស់ប្តូរតាមបណ្តោយប្រវែងនៃផ្លូវដង្ហើម ឬខាងឆ្វេង និងខាងស្តាំខាងលើ trachea ក្នុងទិសដៅនៃកាំរស្មី X ។
យើងក៏បានស្វែងរកដើម្បីកំណត់ភាពមើលឃើញ និងអាកប្បកិរិយានៃភាគល្អិតនៅក្នុងផ្លូវដង្ហើម ក្នុងករណីមិនមានការដកដង្ហើម និងចលនាបេះដូង។ ដូច្នេះហើយ នៅចុងបញ្ចប់នៃរយៈពេលនៃការថតរូបភាព សត្វត្រូវបានសម្លាប់ដោយមនុស្សជាតិសម្រាប់ការប្រើជ្រុល pentobarbital (Somnopentil, Pitman-Moore, Washington Crossing, USA; ~ 65 mg/kg ពេលដែលសត្វកំពុងដកដង្ហើម និង ip) ។ ចង្វាក់បេះដូងឈប់ដំណើរការ ដំណើរការរូបភាពត្រូវបានធ្វើម្តងទៀត ដោយបន្ថែមកម្រិតថ្នាំ MP បន្ថែម ប្រសិនបើគ្មាន MP អាចមើលឃើញនៅលើផ្ទៃផ្លូវដង្ហើម។
រូបភាពដែលទទួលបានគឺមានលក្ខណៈរាបស្មើ និងវាលងងឹតត្រូវបានកែដំរូវ ហើយបន្ទាប់មកបញ្ចូលទៅក្នុងភាពយន្ត (20 ហ្វ្រេមក្នុងមួយវិនាទី; 15-25 × ល្បឿនធម្មតាអាស្រ័យលើអត្រាផ្លូវដង្ហើម) ដោយប្រើស្គ្រីបផ្ទាល់ខ្លួនដែលសរសេរក្នុង MATLAB (R2020a, The Mathworks)។
ការសិក្សាលើការបញ្ជូនហ្សែន LV ទាំងអស់ត្រូវបានធ្វើឡើងនៅមន្ទីរពិសោធន៍សត្វស្រាវជ្រាវនៅសាកលវិទ្យាល័យ Adelaide ហើយមានគោលបំណងប្រើលទ្ធផលនៃការពិសោធន៍ SPring-8 ដើម្បីវាយតម្លៃថាតើការចែកចាយ LV-MP នៅក្នុងវត្តមាននៃដែនម៉ាញេទិកអាចបង្កើនការផ្ទេរហ្សែននៅក្នុង vivo ។ ដើម្បីវាយតម្លៃផលប៉ះពាល់នៃ MP និងដែនម៉ាញេទិក សត្វពីរក្រុមត្រូវបានព្យាបាល៖ មួយក្រុមទៀតត្រូវបានផ្តល់ដោយមេដែក និងក្រុមត្រួតពិនិត្យ LV LV-MP ដោយគ្មានមេដែក។
វ៉ិចទ័រហ្សែន LV ត្រូវបានបង្កើតដោយប្រើវិធីសាស្រ្តដែលបានពិពណ៌នាពីមុន 25, 26 .វ៉ិចទ័រ LacZ បង្ហាញពីហ្សែន beta-galactosidase ដែលកំណត់មូលដ្ឋានដោយនុយក្លេអ៊ែរដែលត្រូវបានជំរុញដោយអ្នកផ្សព្វផ្សាយ MPSV តំណាង (LV-LacZ) ដែលផលិតផលិតផលប្រតិកម្មពណ៌ខៀវនៅក្នុងកោសិកាប្តូរ ដែលអាចមើលឃើញនៅក្នុងផ្នែកខាងមុខនៃជាលិកាសួត និងផ្នែកជាលិកាដែលអនុវត្តដោយចំនួននៃកោសិកា។ កោសិកាវិជ្ជមានជាមួយឧបករណ៍វាស់ hemocytometer ដើម្បីគណនា titer ក្នុង TU/ml.Carriers ត្រូវបានរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព -80 °C រលាយមុនពេលប្រើ ហើយចងភ្ជាប់ជាមួយ CombiMag ដោយលាយក្នុងសមាមាត្រ 1: 1 និង incubating នៅលើទឹកកកយ៉ាងហោចណាស់ 30 នាទីមុនពេលសម្រាល។
កណ្តុរ Sprague Dawley ធម្មតា (n = 3/group, ~2-3 ត្រូវបានគេចាក់ថ្នាំស្ពឹកតាមរន្ធគូថជាមួយនឹងល្បាយនៃ 0.4 mg/kg medetomidine (Domitor, Ilium, Australia) និង 60 mg/kg ketamine (Ilium, Australia) ដែលមានអាយុមួយខែ) ip) និងមិនវះកាត់ដើម្បីធានាបាននូវការចាក់ថ្នាំតាមមាត់ 6 គ្រាប់។ ជាលិកាផ្លូវដង្ហើម tracheal ទទួលបានការបញ្ជូន LV វាត្រូវបានធ្វើឱ្យមានលក្ខខណ្ឌដោយប្រើពិធីការរំខានមេកានិចដែលបានពិពណ៌នាពីមុនរបស់យើង ដែលក្នុងនោះផ្ទៃផ្លូវដង្ហើម tracheal ត្រូវបានជូតតាមអ័ក្សជាមួយនឹងកន្ត្រកខ្សែ (N-Circle, Nitinol Tipless Stone Extractor NTSE-022115) -UDH, Cook Medical, USA) 30s Tracheal28 ការគ្រប់គ្រងដោយសុវត្ថិភាព។ គណៈរដ្ឋមន្ត្រីប្រហែល 10 នាទីបន្ទាប់ពីការរំខាន។
ដែនម៉ាញេទិកដែលប្រើក្នុងការពិសោធន៍នេះត្រូវបានកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធក្នុងលក្ខណៈស្រដៀងគ្នាទៅនឹងការសិក្សារូបភាពកាំរស្មីអ៊ិចនៅក្នុង vivo ជាមួយនឹងមេដែកដូចគ្នានៅខាងលើបំពង់ខ្យល់ដោយប្រើក្លីប stent distillation (រូបភាពទី 4)។ បរិមាណ 50 μl (2 × 25 μl aliquots) នៃ LV-MP ត្រូវបានបញ្ជូនទៅក្នុង trachea ដូចសត្វពាហនៈពីមុន (n = 3) described.A ក្រុមត្រួតពិនិត្យ (n = 3 សត្វ) បានទទួល LV-MPs ដូចគ្នាដោយមិនប្រើមេដែក។ បន្ទាប់ពីការ infusion បានបញ្ចប់ cannula ត្រូវបានយកចេញពីបំពង់ ET ហើយសត្វត្រូវបាន extubated ។ មេដែកនៅនឹងកន្លែងរយៈពេល 10 នាទីបន្ទាប់មកវាត្រូវបានដកចេញ។ កណ្តុរបានទទួលកម្រិត subcutaneous នៃ meloxicam (Ilium/kg) អូស្ត្រាលី (Ilium/kg) ការចាក់ ip នៃ 1 mg/kg atipamazole hydrochloride (Antisedan, Zoetis, Australia)) កណ្តុរត្រូវបានរក្សាកំដៅ និងតាមដានរហូតដល់ការជាសះស្បើយពេញលេញពីការប្រើថ្នាំសន្លប់។
ឧបករណ៍ចែកចាយ LV-MP នៅក្នុងគណៈរដ្ឋមន្ត្រីសុវត្ថិភាពជីវសាស្រ្ត។ មជ្ឈមណ្ឌល Luer ពណ៌ប្រផេះស្រាលនៃបំពង់ ET អាចត្រូវបានគេមើលឃើញថាលេចចេញពីមាត់ ហើយចុងជែលនៃបំពង់ដែលបង្ហាញក្នុងរូបភាពត្រូវបានបញ្ចូលតាមបំពង់ ET ទៅជម្រៅដែលចង់បានទៅក្នុងបំពង់ខ្យល់។
មួយសប្តាហ៍បន្ទាប់ពីនីតិវិធីចាក់ថ្នាំ LV-MP សត្វត្រូវបានសម្លាប់ដោយមនុស្សដោយការស្រូបចូល CO2 100% ហើយការបញ្ចេញមតិ LacZ ត្រូវបានគេវាយតម្លៃដោយប្រើវិធីព្យាបាល X-gal ស្តង់ដាររបស់យើង។ ចិញ្ចៀនឆ្អឹងខ្ចីបំផុតចំនួនបីត្រូវបានដកចេញ ដើម្បីធានាថាការខូចខាតមេកានិក ឬការរក្សាសារធាតុរាវចេញពីការដាក់បំពង់ endotracheal មិនត្រូវបានរាប់បញ្ចូលក្នុងការវិភាគទេ។ ពួកវានីមួយៗត្រូវបានកាត់ចេញជាសរសៃវែងៗ។ បានម៉ោននៅក្នុងចានដែលមានជ័រស៊ីលីកុន (Sylgard, Dow Inc) ដោយប្រើម្ជុល Minutien (ឧបករណ៍វិទ្យាសាស្ត្រល្អ) ដើម្បីមើលឃើញផ្ទៃពន្លឺ។ ការចែកចាយ និងលំនាំនៃកោសិកាដែលបានផ្លាស់ប្តូរត្រូវបានបញ្ជាក់ដោយការថតរូបខាងមុខដោយប្រើមីក្រូទស្សន៍ Nikon (SMZ1500) ជាមួយនឹងកាមេរ៉ា DigiLite និងកម្មវិធី TCapture (Tucquire magnification នៅប្រទេសចិន 0) ។ ការកំណត់ខ្ពស់បំផុតសម្រាប់ទទឹងពេញនៃបំពង់ខ្យល់) ជាមួយនឹងប្រវែងទាំងមូលនៃ trachea រូបភាពមួយជំហានម្តងៗ ធានាបាននូវការត្រួតគ្នាគ្រប់គ្រាន់រវាងរូបភាពនីមួយៗ ដើម្បីអនុញ្ញាតឱ្យមានរូបភាព "stitching"។ បន្ទាប់មករូបភាពពី trachea នីមួយៗត្រូវបានផ្គុំទៅជារូបភាពផ្សំតែមួយដោយប្រើ Image Composite Editor v2.0.3 (Microsoft Research) ដោយប្រើផ្នែកនៃផ្នែកចលនានៃគម្រោង។ trachea ពីសត្វនីមួយៗត្រូវបានគណនាដោយប្រើស្គ្រីប MATLAB ស្វ័យប្រវត្តិ (R2020a, MathWorks) ដូចដែលបានពណ៌នាពីមុន ដោយប្រើការកំណត់ 0.35 < Hue < 0.58, Saturation > 0.15, និងតម្លៃ < 0.7. ដោយការតាមដានវណ្ឌវង្កនៃជាលិកាបង្កើត 4 v 2. របាំងនីមួយៗគឺ 1 GIos ។ រូបភាពដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណតំបន់ជាលិកា និងការពារការរកឃើញមិនពិតពីខាងក្រៅជាលិការត្រាច់។ ផ្ទៃប្រឡាក់ពីរូបភាពផ្សំទាំងអស់ពីសត្វនីមួយៗត្រូវបានបូកសរុបដើម្បីបង្កើតផ្ទៃប្រឡាក់សរុបសម្រាប់សត្វនោះ។ បន្ទាប់មកផ្ទៃប្រឡាក់ត្រូវបានបែងចែកដោយផ្ទៃរបាំងសរុបដើម្បីបង្កើតតំបន់ធម្មតា។
បំពង់ខ្យល់នីមួយៗត្រូវបានបង្កប់នៅក្នុងប្រេងប៉ារ៉ាហ្វីន ហើយផ្នែក 5 μm ត្រូវបានកាត់។ ផ្នែកត្រូវបានប្រឡាក់ដោយពណ៌ក្រហមអព្យាក្រឹតរយៈពេល 5 នាទី ហើយរូបភាពត្រូវបានទទួលដោយប្រើមីក្រូទស្សន៍ Nikon Eclipse E400 កាមេរ៉ា DS-Fi3 និងកម្មវិធីចាប់យកធាតុ NIS (កំណែ 5.20.00)។
ការវិភាគស្ថិតិទាំងអស់ត្រូវបានអនុវត្តនៅក្នុង GraphPad Prism v9 (GraphPad Software, Inc.)។ សារៈសំខាន់ស្ថិតិត្រូវបានកំណត់នៅ p ≤ 0.05។ ភាពធម្មតាត្រូវបានផ្ទៀងផ្ទាត់ដោយប្រើការធ្វើតេស្ត Shapiro-Wilk ហើយភាពខុសគ្នានៃស្នាមប្រឡាក់ LacZ ត្រូវបានវាយតម្លៃដោយប្រើ t-test ដែលមិនផ្គូផ្គង។
សមាជិកសភាទាំងប្រាំមួយរូបដែលបានពិពណ៌នានៅក្នុងតារាងទី 1 ត្រូវបានពិនិត្យដោយប្រើ PCXI ហើយភាពមើលឃើញត្រូវបានពិពណ៌នានៅក្នុងតារាង 2. ពីរ polystyrene MPs (MP1 និង MP2; 18 μm និង 0.25 μm រៀងគ្នា) មិនអាចមើលឃើញនៅក្រោម PCXI ប៉ុន្តែសំណាកដែលនៅសល់គឺអាចកំណត់អត្តសញ្ញាណបាន 5 MP (ឧទាហរណ៍ MP4) ។ (10-15% Fe3O4; 0.25 μm និង 0.9 μm រៀងគ្នា) អាចមើលឃើញតិចៗ។ ទោះបីជាមានផ្ទុកភាគល្អិតតូចបំផុតមួយចំនួនដែលត្រូវបានសាកល្បងក៏ដោយ MP5 (98% Fe3O4; 0.25 μm) គឺជាការបញ្ចេញសំឡេងច្រើនបំផុត។ សមត្ថភាពរបស់ CombiMag ដែលធ្វើអោយ MP6 កាន់តែមានភាពប្រសើរឡើង នៅក្នុងករណីទាំងអស់គឺពិបាករកឃើញណាស់។ មេដែកថយក្រោយស្របទៅនឹង capillary។ នៅពេលដែលមេដែកផ្លាស់ទីឆ្ងាយពី capillary ភាគល្អិតបានលាតសន្ធឹងជាខ្សែវែង ប៉ុន្តែនៅពេលដែលមេដែកចូលកាន់តែជិត ហើយកម្លាំងវាលម៉ាញេទិកកើនឡើង ខ្សែភាគល្អិតបានខ្លី ដោយសារភាគល្អិតធ្វើចំណាកស្រុកទៅកាន់ផ្ទៃខាងលើនៃ capillary (សូមមើលវីដេអូបន្ថែម S1 នៃផ្ទៃមេដែកនៅពេលមេដែកកើនឡើង) ។ ដកចេញពី capillary កម្លាំងនៃវាលថយចុះ ហើយ MPs រៀបចំឡើងវិញជាខ្សែវែងដែលលាតសន្ធឹងពីផ្ទៃខាងលើនៃ capillary (សូមមើលវីដេអូបន្ថែម S2:MP4)។ បន្ទាប់ពីមេដែកឈប់ផ្លាស់ទី ភាគល្អិតបន្តផ្លាស់ទីក្នុងរយៈពេលខ្លីបន្ទាប់ពីឈានដល់ទីតាំងលំនឹង។ នៅពេលដែល MP ផ្លាស់ទីឆ្ពោះទៅរក និងឆ្ងាយពីភាគល្អិតកំពូលនៃ capillary នេះ សារធាតុរាវ។
ភាពមើលឃើញរបស់ MP នៅក្រោម PCXI មានភាពខុសប្លែកគ្នាយ៉ាងខ្លាំងរវាងគំរូ។(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 និង (d) MP6. រូបភាពទាំងអស់ដែលបានបង្ហាញនៅទីនេះត្រូវបានថតដោយមេដែកដែលមានទីតាំងប្រហែល 10 មីលីម៉ែត្រដោយផ្ទាល់ពីលើ capillary ។ រង្វង់ធំជាក់ស្តែងគឺជាពពុះខ្យល់ដែលជាប់នៅក្នុង capillaries ដែលបង្ហាញយ៉ាងច្បាស់នូវប្រអប់ពណ៌ក្រហម និងគែមដែលនៅជាប់គ្នាបំផុតនៃដំណាក់កាល។ ការពង្រីក។ ចំណាំថា អង្កត់ផ្ចិតនៃរូបម៉ាញេទិកនៅក្នុងតួលេខទាំងអស់គឺមិនត្រូវធ្វើមាត្រដ្ឋានទេ ហើយមានទំហំធំជាងការបង្ហាញប្រហែល 100 ដង។
នៅពេលដែលមេដែកត្រូវបានបកប្រែទៅឆ្វេង និងស្តាំតាមបណ្តោយផ្នែកខាងលើនៃ capillary មុំនៃខ្សែ MP ផ្លាស់ប្តូរដើម្បីតម្រឹមជាមួយមេដែក (សូមមើលរូបភាពទី 6) ដូច្នេះកំណត់បន្ទាត់ដែនម៉ាញេទិក។ សម្រាប់ MP3-5 បន្ទាប់ពីអង្កត់ធ្នូឈានដល់មុំកម្រិត ភាគល្អិតត្រូវបានអូសតាមបណ្តោយផ្ទៃខាងលើនៃ capillary ។ នេះច្រើនតែបណ្តាលឱ្យមានក្រុមធំ ៗ នៅជិតគ្នាបំផុត (ដែនម៉ាញេទិកដែលនៅជិតបំផុត) ។ វីដេអូបន្ថែម S3:MP5) នេះក៏ជាភស្តុតាងជាពិសេសផងដែរ នៅពេលដែលរូបភាពនៅជិតចុង capillary ដែលបណ្តាលឱ្យ MPs ប្រមូលផ្តុំ និងប្រមូលផ្តុំនៅ fluid-air interface។ ភាគល្អិតនៅក្នុង MP6 ដែលពិបាកយល់ជាង MP3-5 មិនត្រូវបានអូសទេ ដោយសារមេដែកផ្លាស់ទីតាម ​​capillary ប៉ុន្តែ MP strings នៃភាគល្អិតនៃទិដ្ឋភាពដែលបែកខ្ញែកគ្នានៅក្នុងវីដេអូ។ S4:MP6)។ក្នុងករណីខ្លះ នៅពេលដែលដែនម៉ាញេទិកដែលបានអនុវត្តត្រូវបានកាត់បន្ថយដោយការផ្លាស់ទីមេដែកចម្ងាយដ៏ច្រើនពីទីតាំងរូបភាព សមាជិកសភាដែលនៅសេសសល់បានចុះមកយឺតៗទៅលើផ្ទៃខាងក្រោមនៃបំពង់ដោយទំនាញ ខណៈនៅសល់ក្នុងខ្សែ (សូមមើលវីដេអូបន្ថែម S5: MP3)។
មុំនៃខ្សែអក្សរ MP ផ្លាស់ប្តូរនៅពេលដែលមេដែកត្រូវបានបកប្រែទៅខាងស្តាំខាងលើ capillary ។(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 និង (d) MP6. ប្រអប់ក្រហមមានផ្ទុកការពង្រីកកម្រិតពណ៌។ ចំណាំថាវីដេអូបន្ថែមគឺផ្តល់ព័ត៌មានព្រោះវាបង្ហាញពីរចនាសម្ព័ន្ធភាគល្អិតសំខាន់ៗ និងព័ត៌មានថាមវន្តដែលមិនអាចមើលបានក្នុងរូបភាពឋិតិវន្តទាំងនេះ។
ការធ្វើតេស្តរបស់យើងបានបង្ហាញថាការរំកិលមេដែកយឺតៗទៅក្រោយតាមបំពង់ខ្យល់ជួយសម្រួលដល់ការមើលឃើញរបស់ MP ក្នុងបរិបទនៃចលនាស្មុគស្មាញនៅក្នុង vivo។ ការធ្វើតេស្តនៅក្នុង vivo មិនត្រូវបានអនុវត្តទេ ដោយសារគ្រាប់ polystyrene (MP1 និង MP2) មិនអាចមើលឃើញនៅក្នុង capillary ។ រាល់ MPs ដែលនៅសល់ចំនួន 4 ត្រូវបានធ្វើតេស្តនៅក្នុង vivo ជាមួយនឹងមេដែកប្រវែងអ័ក្ស 0° ដើម្បីកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធ។ (សូមមើលរូបភាពទី 2b និង 3a) ដោយសារតែនេះបណ្តាលឱ្យមានខ្សែសង្វាក់ MP វែងជាង និងមានប្រសិទ្ធភាពជាងការកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធមេដែកត្រូវបានបញ្ចប់។ MP3, MP4 និង MP6 មិនត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងបំពង់ខ្យល់នៃសត្វមានជីវិតណាមួយឡើយ។ នៅពេលដែលរូបភាពផ្លូវខ្យល់របស់សត្វកណ្តុរត្រូវបានថតបន្ទាប់ពីសត្វត្រូវបានសម្លាប់ដោយមនុស្ស ភាគល្អិត 5 នៅតែមើលមិនឃើញ បរិមាណដែកបន្ថែម 5 MP នៅតែមិនអាចមើលឃើញ។ ហើយជាភាគល្អិតដែលអាចមើលឃើញតែមួយគត់ ហើយដូច្នេះត្រូវបានគេប្រើដើម្បីវាយតម្លៃ និងកំណត់លក្ខណៈនៃឥរិយាបទ vivo របស់ MP ។
ការដាក់មេដែកលើ trachea កំឡុងពេលបញ្ជូន MP បណ្តាលឱ្យមានសមាជិកសភាជាច្រើន ប៉ុន្តែមិនមែនទាំងអស់ទេ សមាជិកសភាត្រូវបានប្រមូលផ្តុំនៅក្នុងទិដ្ឋភាព។ ភាគល្អិតដែលចូលទៅក្នុង trachea ត្រូវបានគេសង្កេតឃើញល្អបំផុតនៅក្នុងសត្វដែលបូជាដោយមនុស្សធម៌។ រូបភាពទី 7 និងវីដេអូបន្ថែម S6: MP5 បង្ហាញពីការចាប់យកម៉ាញេទិកយ៉ាងឆាប់រហ័ស និងការតម្រឹមនៃភាគល្អិតនៅលើផ្ទៃនៃ ventral trachea ដែលអាចតម្រង់ទៅបំពង់ខ្យល់នៃ MP5 ។ trachea.នៅពេលស្វែងរកកាន់តែឆ្ងាយនៅតាមបណ្តោយ trachea បន្ទាប់ពីការចែកចាយ MP សមាជិកសភាមួយចំនួនត្រូវបានគេរកឃើញនៅជិត carina ដោយបង្ហាញថាកម្លាំងវាលម៉ាញេទិកមិនគ្រប់គ្រាន់ក្នុងការប្រមូល និងរក្សា MPs ទាំងអស់នោះទេ ដោយសារពួកគេត្រូវបានបញ្ជូនតាមតំបន់នៃកម្លាំងដែនម៉ាញេទិចអតិបរិមាកំឡុងពេលដំណើរការសារធាតុរាវ។ យ៉ាងណាក៏ដោយ ការប្រមូលផ្តុំ MP ក្រោយសម្រាលគឺខ្ពស់ជាងជុំវិញតំបន់ដែលប្រើរូបភាព កម្លាំងដែនម៉ាញេទិកនៅតែមាន ខ្ពស់បំផុត។
រូបភាពពី (a) មុន និង (b) បន្ទាប់ពីការបញ្ជូន MP5 ទៅក្នុងបំពង់ករបស់សត្វកណ្តុរដែលទើបនឹងកើតថ្មីជាមួយនឹងមេដែកដែលដាក់ទីតាំងដោយផ្ទាល់ពីលើផ្ទៃរូបភាព។ ផ្ទៃរូបភាពស្ថិតនៅចន្លោះរង្វង់ឆ្អឹងខ្ចីទាំងពីរ។ មុននឹងបញ្ជូន MP5 មានសារធាតុរាវមួយចំនួននៅក្នុងផ្លូវដង្ហើម។ ប្រអប់ក្រហមមានផ្ទុកនូវរូបភាពដែលបង្កើនកម្រិតពណ៌ពីវីដេអូ S.P.5 ។
ការបកប្រែមេដែកតាមបណ្តោយ trachea នៅក្នុង vivo បណ្តាលឱ្យខ្សែសង្វាក់ MP ផ្លាស់ប្តូរមុំក្នុងផ្ទៃផ្លូវដង្ហើមក្នុងលក្ខណៈស្រដៀងទៅនឹងអ្វីដែលឃើញនៅក្នុង capillaries (សូមមើលរូបភាពទី 8 និងវីដេអូបន្ថែម S7:MP5)។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ នៅក្នុងការសិក្សារបស់យើង MPs មិនអាចអូសតាមបណ្តោយផ្ទៃនៃផ្លូវដង្ហើមដែលមានជីវិតដូចដែលពួកវាអាចធ្វើបានជាមួយនឹង capillaries ។ ក្នុងករណីខ្លះយូរបំផុត ខ្សែសង្វាក់ MP នឹងផ្លាស់ទីទៅស្តាំ។ បានរកឃើញថា ខ្សែភាគល្អិតហាក់ដូចជាផ្លាស់ប្តូរជម្រៅនៃស្រទាប់សារធាតុរាវលើផ្ទៃ នៅពេលដែលមេដែកត្រូវបានផ្លាស់ទីតាមបណ្ដោយតាមបណ្តោយបំពង់ខ្យល់ ហើយពង្រីកនៅពេលដែលមេដែកត្រូវបានផ្លាស់ទីដោយផ្ទាល់ពីលើក្បាល ហើយខ្សែភាគល្អិតត្រូវបានបង្វិលទៅទីតាំងបញ្ឈរ (សូមមើលវីដេអូបន្ថែម S7)។ : MP5 នៅ 0:09, បាតស្តាំ)) គំរូលក្ខណៈនៃចលនាបានផ្លាស់ប្តូរ នៅពេលដែលមេដែកត្រូវបានបកប្រែឆ្លងកាត់ផ្នែកខាងលើនៃបំពង់ខ្យល់នៅពេលក្រោយ (នោះគឺទៅខាងឆ្វេង ឬខាងស្តាំរបស់សត្វ ជាជាងនៅតាមបណ្តោយប្រវែងនៃបំពង់ខ្យល់។ ចាប់ផ្តើមនៅម៉ោង 0:08) នេះស្របនឹងឥរិយាបថរបស់ MP ដែលយើងសង្កេតឃើញនៅក្រោមវាលម៉ាញេទិកដែលបានអនុវត្តនៅក្នុង capillary កញ្ចក់មួយ។
រូបភាពឧទាហរណ៍ដែលបង្ហាញ MP5 នៅក្នុងបំពង់ករបស់សត្វកណ្តុរដែលចាក់ថ្នាំស្ពឹកផ្ទាល់។(a) មេដែកត្រូវបានប្រើដើម្បីទទួលបានរូបភាពខាងលើ និងទៅខាងឆ្វេងនៃបំពង់ខ្យល់ បន្ទាប់មក (b) បន្ទាប់ពីមេដែកត្រូវបានផ្លាស់ទីទៅខាងស្តាំ។ ប្រអប់ក្រហមមានផ្ទុកការពង្រីកកម្រិតពណ៌។ រូបភាពទាំងនេះមកពីវីដេអូដែលបង្ហាញក្នុងវីដេអូបន្ថែម S7MP៖
នៅពេលដែលបង្គោលទាំងពីរត្រូវបានកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធក្នុងទិសខាងជើងទៅខាងត្បូងខាងលើ និងខាងក្រោម trachea (ឧទាហរណ៍ការទាក់ទាញ; រូបភាពទី 3b) អង្កត់ធ្នូ MP បានលេចឡើងយូរជាងនេះ ហើយមានទីតាំងនៅចំហៀងនៃបំពង់ខ្យល់ជាជាងនៅលើផ្ទៃ tracheal dorsal (មើលវីដេអូបន្ថែម S9:MP5)។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ កំហាប់ខ្ពស់នៃភាគល្អិតមិនមែនជាទីតាំងនៃ trachea ទេ។ បានរកឃើញបន្ទាប់ពីការចែកចាយសារធាតុរាវនៅពេលដែលឧបករណ៍មេដែកពីរត្រូវបានប្រើ ដែលជាធម្មតាកើតឡើងនៅពេលដែលឧបករណ៍មេដែកតែមួយត្រូវបានប្រើប្រាស់។ បន្ទាប់មកនៅពេលដែលមេដែកមួយត្រូវបានកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធដើម្បីរុញច្រានបង្គោលបញ្ច្រាស (រូបភាព 3c) ចំនួននៃភាគល្អិតដែលមើលឃើញក្នុងទិដ្ឋភាពមិនកើនឡើងបន្ទាប់ពីការចែកចាយ។ ការដំឡើងនៃមេដែកពីរដែលកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធការទាញកម្លាំងខ្លាំងគឺការរុញច្រាន ឬកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធម៉ាញេទិក។ មេដែករៀងៗខ្លួន។ ការដំឡើងត្រូវបានប្តូរទៅជាមេដែកតែមួយស្របនឹងផ្លូវខ្យល់ ប៉ុន្តែឆ្លងកាត់ផ្លូវដង្ហើមនៅមុំ 90 ដឺក្រេ ដូច្នេះខ្សែវាលឆ្លងកាត់ជញ្ជាំង tracheal orthogonally (រូបភាព 3 ឃ) ការតំរង់ទិសដែលបានរចនាឡើងដើម្បីកំណត់ថាតើការប្រមូលផ្តុំភាគល្អិតនៅលើជញ្ជាំងចំហៀងអាចត្រូវបានគេសង្កេតឃើញដែរឬទេ។ ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយនៅក្នុងការកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធ MP នេះមិនអាចមានចលនា ឬការកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធបានទេ។ ផ្អែកលើលទ្ធផលទាំងអស់នេះ ការកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធការតំរង់ទិស 30 ដឺក្រេ មេដែកតែមួយ (រូបភាពទី 3a) ត្រូវបានជ្រើសរើសសម្រាប់ការសិក្សាអំពីក្រុមហ៊ុនដឹកជញ្ជូនហ្សែន vivo ។
នៅពេលដែលសត្វត្រូវបានគេដាក់រូបភាពម្តងហើយម្តងទៀតភ្លាមៗបន្ទាប់ពីការសម្លាប់មនុស្ស អវត្តមាននៃចលនាជាលិកាដែលច្របូកច្របល់មានន័យថា បន្ទាត់ភាគល្អិតល្អិតល្អន់ និងខ្លីជាងអាចត្រូវបានគេមើលឃើញនៅក្នុងវាល interchondral ច្បាស់លាស់ "វិលវល់" ស្របតាមចលនាបកប្រែនៃមេដែក។ ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយ នៅតែមិនអាចមើលឃើញយ៉ាងច្បាស់នូវវត្តមាន និងចលនានៃភាគល្អិត MP6 ។
LV-LacZ titer គឺ 1.8 × 108 TU/ml ហើយបន្ទាប់ពី 1: 1 លាយជាមួយ CombiMag MP (MP6) សត្វបានទទួល tracheal dose 50 μl នៃ 9 × 107 TU/ml LV រថយន្ត (ពោលគឺ 4.5 × 106 TU/rat) ។ ) .នៅក្នុងការសិក្សាទាំងនេះ ជំនួសឱ្យការបកប្រែមេដែកអំឡុងពេលពលកម្ម យើងបានជួសជុលមេដែកនៅក្នុងទីតាំងមួយដើម្បីកំណត់ថាតើការបញ្ជូន LV (a) អាចប្រសើរឡើងបើប្រៀបធៀបទៅនឹងការបញ្ជូនវ៉ិចទ័រក្នុងករណីដែលគ្មានដែនម៉ាញេទិក ហើយ (ខ) អាចត្រូវបានផ្តោតទៅលើកោសិកាផ្លូវដង្ហើមត្រូវបានបញ្ជូនទៅកាន់តំបន់គោលដៅម៉ាញេទិកនៃផ្លូវដង្ហើមខាងលើ។
វត្តមានរបស់មេដែក និងការប្រើប្រាស់ CombiMag រួមបញ្ចូលគ្នាជាមួយវ៉ិចទ័រ LV ហាក់ដូចជាមិនមានផលប៉ះពាល់អវិជ្ជមានលើសុខភាពសត្វ ដូចដែលបានធ្វើពិធីការបញ្ជូនវ៉ិចទ័រ LV ស្តង់ដាររបស់យើងទេ។ រូបភាពផ្នែកខាងមុខនៃតំបន់ tracheal ដែលទទួលរងការរំខានដោយមេកានិច (រូបភាពបន្ថែមទី 1) បានបង្ហាញថា មានកម្រិតខ្ពស់នៃការចម្លងនៅក្នុងក្រុមសត្វដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយមេដែក LV ។ មានវត្តមាន LV-MP ។ បរិមាណនៃស្នាមប្រឡាក់ LacZ ពណ៌ខៀវមានវត្តមាននៅក្នុងក្រុមត្រួតពិនិត្យ (រូបភាព 9b)។ បរិមាណនៃតំបន់ប្រឡាក់ X-Gal ធម្មតាបានបង្ហាញថា ការគ្រប់គ្រង LV-MP នៅក្នុងវត្តមាននៃដែនម៉ាញេទិកបានធ្វើឱ្យមានការកែលម្អប្រហែល 6 ដង (រូបភាព 9c) ។
ឧទាហរណ៍រូបភាពសមាសធាតុដែលបង្ហាញពីការបញ្ជូនតាមបំពង់ខ្យល់ដោយ LV-MP (a) នៅក្នុងវត្តមាននៃដែនម៉ាញេទិក និង (b) ក្នុងករណីដែលគ្មានមេដែក។(c) ការកែលម្អយ៉ាងសំខាន់តាមស្ថិតិនៅក្នុងតំបន់បញ្ជូន LacZ ដែលមានលក្ខណៈធម្មតានៅក្នុងបំពង់ខ្យល់នៅពេលប្រើមេដែក (*p = 0.029, t-test, n = 3 ក្នុងមួយក្រុម) មធ្យម ± SEM ។
ផ្នែកដែលមានស្នាមប្រឡាក់ក្រហមលឿនអព្យាក្រឹត (ឧទាហរណ៍បង្ហាញក្នុងរូបភាពបន្ថែម 2) បានបង្ហាញកោសិកាដែលមានស្នាមប្រឡាក់ LacZ មានវត្តមាននៅក្នុងគំរូ និងទីតាំងស្រដៀងគ្នាដូចដែលបានរាយការណ៍ពីមុន។
បញ្ហាប្រឈមសំខាន់សម្រាប់ការព្យាបាលដោយហ្សែនផ្លូវដង្ហើមនៅតែជាការធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្មត្រឹមត្រូវនៃភាគល្អិតក្រុមហ៊ុនបញ្ជូនទៅកាន់តំបន់ដែលចាប់អារម្មណ៍ និងសម្រេចបាននូវកម្រិតខ្ពស់នៃប្រសិទ្ធភាពនៃការផ្លាស់ប្តូរនៅក្នុងសួតដែលមានចលនានៅក្នុងវត្តមាននៃលំហូរខ្យល់ និងការបញ្ចេញទឹករំអិលសកម្ម។ សម្រាប់ក្រុមហ៊ុនដឹកជញ្ជូន LV ដែលរចនាឡើងដើម្បីព្យាបាលជំងឺផ្លូវដង្ហើម CF ការបង្កើនពេលវេលាស្នាក់នៅនៃភាគល្អិតក្រុមហ៊ុនដឹកជញ្ជូននៅក្នុងផ្លូវដង្ហើមដែលដំណើរការទៅគោលដៅត្រូវបានបញ្ចេញជាបន្តបន្ទាប់។ al., ការប្រើប្រាស់ដែនម៉ាញេទិកដើម្បីកែលម្អការបញ្ជូនមានគុណសម្បត្តិបើប្រៀបធៀបទៅនឹងវិធីសាស្ត្របញ្ជូនហ្សែនផ្សេងទៀតដូចជា electroporation ព្រោះវាអាចរួមបញ្ចូលគ្នានូវភាពសាមញ្ញ ប្រសិទ្ធភាព ការចំណាយ ការធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្មនៃការដឹកជញ្ជូន ការបង្កើនប្រសិទ្ធភាព និងរយៈពេល incubation ខ្លីជាង និងអាចជាថ្នាំដឹកជញ្ជូនតូចជាង dose10។ ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយ ការទម្លាក់នៅក្នុង vivo និងឥរិយាបទនៃឥទ្ធិពលនៃភាគល្អិតម៉ាញេទិចខ្យល់ខាងក្រៅមិនធ្លាប់មាននៅក្នុងដែនម៉ាញ៉េទិចទេ។ បានពិពណ៌នា ហើយក៏មិនមានលទ្ធភាពនៃវិធីសាស្រ្តនេះត្រូវបានបង្ហាញនៅក្នុង vivo ដើម្បីបង្កើនកម្រិតនៃការបញ្ចេញហ្សែននៅក្នុងផ្លូវដង្ហើមដែលកំពុងរស់នៅដដែល។
ការពិសោធន៍ in vitro synchrotron PCXI របស់យើងបានបង្ហាញថាភាគល្អិតទាំងអស់ដែលយើងបានសាកល្បង លើកលែងតែ polystyrene MP អាចមើលឃើញនៅក្នុងការដំឡើងរូបភាពដែលយើងបានប្រើ។ នៅក្នុងវត្តមាននៃវាលម៉ាញេទិក MPs បង្កើតជាខ្សែដែលមានប្រវែងទាក់ទងទៅនឹងប្រភេទភាគល្អិត និងកម្លាំងដែនម៉ាញេទិក (ពោលគឺ ភាពជិត និងចលនារបស់មេដែក) ដូចដែលបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 1 ខ្សែអក្សរនីមួយៗ។ ត្រូវបានបង្កើតជាដែនម៉ាញេទិក និងបង្កើតដែនម៉ាញេទិកក្នុងមូលដ្ឋានរបស់វាផ្ទាល់។ វាលដាច់ដោយឡែកទាំងនេះបណ្តាលឱ្យភាគល្អិតស្រដៀងគ្នាផ្សេងទៀតប្រមូលផ្តុំ និងភ្ជាប់គ្នា ដោយមានចលនាដូចខ្សែអក្សរជាក្រុម ដោយសារកម្លាំងក្នុងតំបន់ពីកម្លាំងទាក់ទាញក្នុងតំបន់ និងគួរឱ្យច្រណែននៃភាគល្អិតផ្សេងទៀត។
ការបង្ហាញគ្រោងការណ៍ (a,b) រថភ្លើងភាគល្អិតដែលបង្កើតនៅខាងក្នុង capillaries ពោរពេញដោយសារធាតុរាវ និង (c,d) air-filled trachea.Note that the capillaries and trachea are not drawn to scale.Panel (a) ក៏មានការពិពណ៌នាអំពី MP ដែលមានភាគល្អិត Fe3O4 រៀបចំជាខ្សែ។
នៅពេលដែលមេដែកត្រូវបានផ្លាស់ទីពីលើ capillary មុំនៃខ្សែភាគល្អិតបានឈានដល់កម្រិតសំខាន់សម្រាប់ MP3-5 ដែលមានផ្ទុក Fe3O4 បន្ទាប់មកខ្សែភាគល្អិតលែងនៅទីតាំងដើមទៀតហើយ ប៉ុន្តែបានផ្លាស់ប្តូរផ្ទៃខាងលើទៅទីតាំងថ្មីមួយ។ ឥទ្ធិពលនេះទំនងជាកើតឡើងដោយសារតែផ្ទៃ capillary កញ្ចក់មានភាពរលោងគ្រប់គ្រាន់ដើម្បីអនុញ្ញាតឱ្យមានចលនានេះកើតឡើង។ MP6 ប្រហែលជាដោយសារតែភាគល្អិតតូចជាង មានស្រទាប់ស្រោបផ្សេងគ្នា ឬបន្ទុកលើផ្ទៃ ឬវត្ថុរាវដែលមានកម្មសិទ្ធិប៉ះពាល់ដល់សមត្ថភាពក្នុងការផ្លាស់ទី។ ភាពផ្ទុយគ្នានៃរូបភាពនៃភាគល្អិត CombiMag ក៏ខ្សោយជាងមុនដែរ ដែលបង្ហាញថាអង្គធាតុរាវ និងភាគល្អិតអាចមានដង់ស៊ីតេប្រហាក់ប្រហែលគ្នា ដូច្នេះហើយមិនងាយផ្លាស់ទីទៅគ្នាទៅវិញទៅមក។ ភាគល្អិតអាចជាប់គាំងផងដែរ ប្រសិនបើដែនម៉ាញេទិកផ្លាស់ទីលឿនពេក។ ការកកិតរវាងភាគល្អិតនៅក្នុងអង្គធាតុរាវ ដែលបង្ហាញថា ប្រហែលជាវាមិនគួរឱ្យភ្ញាក់ផ្អើលទេដែលកម្លាំងដែនម៉ាញេទិក និងចម្ងាយរវាងមេដែក និងតំបន់គោលដៅមានសារៈសំខាន់ខ្លាំងណាស់។ សរុបមក លទ្ធផលទាំងនេះក៏បង្ហាញផងដែរថា ខណៈពេលដែលមេដែកអាចចាប់យក MP ជាច្រើនដែលហូរកាត់តំបន់គោលដៅ វាមិនទំនងទេដែលមេដែកអាចពឹងផ្អែកលើដើម្បីផ្លាស់ទីភាគល្អិត CombiMag តាមបណ្តោយផ្ទៃនៃវត្ថុរាវ។ ប្រើប្រាស់វាលម៉ាញេទិកឋិតិវន្ត ដើម្បីតម្រង់គោលដៅរាងកាយជាក់លាក់នៃមែកធាងផ្លូវដង្ហើម។
នៅពេលដែលភាគល្អិតត្រូវបានបញ្ជូនទៅក្នុងរាងកាយ ពួកវាពិបាកក្នុងការកំណត់អត្តសញ្ញាណនៅក្នុងបរិបទនៃជាលិការាងកាយដែលមានចលនាស្មុគស្មាញ ប៉ុន្តែសមត្ថភាពក្នុងការរកឃើញពួកវាត្រូវបានពង្រឹងដោយការបកប្រែមេដែកផ្តេកពីលើបំពង់ខ្យល់ទៅជា "កន្ត្រាក់" ខ្សែ MP ។ ទោះបីជាការថតរូបភាពផ្ទាល់អាចធ្វើទៅបានក៏ដោយ វាកាន់តែងាយស្រួលក្នុងការស្វែងយល់ពីចលនានៃភាគល្អិត នៅពេលដែលសត្វត្រូវបានសម្លាប់ដោយមនុស្សធម៌ ជាទូទៅកម្រិតកំហាប់ខ្ពស់បំផុតនេះនៅកម្រិត MPs ។ តំបន់ ទោះបីជាភាគល្អិតមួយចំនួនជាធម្មតាត្រូវបានរកឃើញបន្ថែមទៀតនៅតាមបណ្តោយបំពង់ខ្យល់ក៏ដោយ។ ផ្ទុយទៅនឹងការសិក្សានៅក្នុង vitro ភាគល្អិតមិនអាចអូសតាមបំពង់អាហារដោយការបកប្រែមេដែកនោះទេ។ ការរកឃើញនេះគឺស្របជាមួយនឹងរបៀបដែលស្លសដែលគ្របលើផ្ទៃនៃបំពង់ខ្យល់ជាធម្មតាដំណើរការភាគល្អិតដែលស្រូបចូល ដោយជាប់នៅក្នុងទឹករំអិល ហើយត្រូវបានជម្រះដោយយន្តការនៃការបញ្ចេញទឹករំអិល។
យើងបានសន្មត់ថា ការប្រើប្រាស់មេដែកសម្រាប់ការទាក់ទាញខាងលើ និងខាងក្រោម trachea (រូបភាព 3b) អាចបណ្តាលឱ្យមានវាលម៉ាញេទិកឯកសណ្ឋានជាង ជាជាងវាលម៉ាញេទិកដែលប្រមូលផ្តុំយ៉ាងខ្លាំងនៅចំណុចមួយ ដែលនាំឱ្យមានការចែកចាយភាគល្អិតឯកសណ្ឋានកាន់តែច្រើន។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការសិក្សាបឋមរបស់យើងមិនបានរកឃើញភស្តុតាងច្បាស់លាស់ដើម្បីគាំទ្រសម្មតិកម្មនេះទេ។ នៅក្នុងការទម្លាក់ភាគល្អិតកាន់តែច្រើននៅក្នុងតំបន់រូបភាព។ ការរកឃើញទាំងពីរនេះបង្ហាញថាការដំឡើងមេដែកពីរមិនធ្វើឱ្យការគ្រប់គ្រងក្នុងតំបន់នៃការកំណត់គោលដៅ MP ប្រសើរឡើងខ្លាំងនោះទេ ហើយលទ្ធផលនៃកម្លាំងម៉ាញេទិកខ្លាំងគឺពិបាកក្នុងការកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធ ដែលធ្វើឲ្យវិធីសាស្រ្តនេះមិនសូវមានការអនុវត្តជាក់ស្តែង។ ស្រដៀងគ្នាដែរ ការតំរង់ទិសមេដែកខាងលើ និងតាមរយៈបំពង់ខ្យល់ទាំងនេះ (រូបភាពទី 3d) នៃភាគល្អិតនៃភាគល្អិតក៏មិនបានបង្កើនផងដែរ ការកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធជំនួសប្រហែលជាមិនជោគជ័យទេ ព្រោះវាបណ្តាលឱ្យមានភាពរឹងមាំនៃដែនម៉ាញេទិកទាបនៅក្នុងតំបន់ដាក់បញ្ចូល។ ដូច្នេះ ការកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធមេដែកមុំ 30 ដឺក្រេតែមួយ (រូបភាពទី 3a) ត្រូវបានចាត់ទុកថាជាវិធីសាស្ត្រងាយស្រួលបំផុត និងមានប្រសិទ្ធភាពបំផុតសម្រាប់ការធ្វើតេស្ត vivo ។
ការសិក្សារបស់ LV-MP បានបង្ហាញថានៅពេលដែលវ៉ិចទ័រ LV ត្រូវបានផ្សំជាមួយ CombiMag ហើយត្រូវបានបញ្ជូនបន្ទាប់ពីការរំខានដល់រាងកាយនៅក្នុងវត្តមាននៃដែនម៉ាញេទិក កម្រិតបញ្ជូនត្រូវបានកើនឡើងយ៉ាងខ្លាំងនៅក្នុងបំពង់ខ្យល់បើធៀបទៅនឹងវត្ថុបញ្ជា។ ដោយផ្អែកលើការសិក្សារូបភាព synchrotron និងលទ្ធផល LacZ វាលម៉ាញេទិកគឺជាក់ស្តែងអាចរក្សា LV ក្នុងវ៉ិចទ័រយ៉ាងជ្រៅទៅក្នុងចំនួននៃបំពង់ខ្យល់ភ្លាមៗ។ lung.ការកែលម្អការកំណត់គោលដៅបែបនេះអាចនាំឱ្យមានប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់ ខណៈពេលដែលកាត់បន្ថយការបញ្ជូន titers ការបញ្ជូនក្រៅគោលដៅ ការរលាក និងផលប៉ះពាល់នៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំ និងការចំណាយលើក្រុមហ៊ុនដឹកជញ្ជូនហ្សែន។ សំខាន់ យោងតាមក្រុមហ៊ុនផលិត CombiMag អាចត្រូវបានប្រើដោយភ្ជាប់ជាមួយវិធីសាស្ត្រផ្ទេរហ្សែនផ្សេងទៀត រួមទាំងជាមួយវ៉ិចទ័រមេរោគផ្សេងទៀត (ដូចជា AAV) និងអាស៊ីត nucleic