ຂອບໃຈທີ່ທ່ານເຂົ້າມາຢ້ຽມຊົມ Nature.com. ໂປຣແກຣມທ່ອງເວັບລຸ້ນທີ່ທ່ານກຳລັງໃຊ້ຢູ່ມີການຮອງຮັບ CSS ທີ່ຈຳກັດ. ເພື່ອປະສົບການທີ່ດີທີ່ສຸດ, ພວກເຮົາແນະນຳໃຫ້ທ່ານໃຊ້ໂປຣແກຣມທ່ອງເວັບທີ່ອັບເດດແລ້ວ (ຫຼືປິດໂໝດຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ໃນ Internet Explorer). ໃນລະຫວ່າງນີ້, ເພື່ອຮັບປະກັນການສະໜັບສະໜູນຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ, ພວກເຮົາຈະສະແດງເວັບໄຊໂດຍບໍ່ມີຮູບແບບ ແລະ JavaScript.
ເວັກເຕີ gene ສຳລັບການປິ່ນປົວພະຍາດປອດ cystic fibrosis ຄວນແນໃສ່ທາງເດີນຫາຍໃຈເພາະວ່າການສົ່ງຕໍ່ປອດສ່ວນນອກບໍ່ໄດ້ໃຫ້ຜົນປະໂຫຍດດ້ານການປິ່ນປົວ. ປະສິດທິພາບການສົ່ງຕໍ່ໄວຣັດແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງໂດຍກົງກັບເວລາທີ່ຢູ່ອາໄສຂອງເວັກເຕີ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ນ້ຳສົ່ງເຊັ່ນ: ຕົວນຳ gene ຈະແຜ່ລາມໄປຕາມທຳມະຊາດເຂົ້າໄປໃນຖົງລົມໃນລະຫວ່າງການຫາຍໃຈເຂົ້າ, ແລະອະນຸພາກການປິ່ນປົວທຸກຮູບແບບຈະຖືກກຳຈັດອອກຢ່າງໄວວາໂດຍການຂົນສົ່ງ mucociliary. ການຍືດເວລາທີ່ຢູ່ອາໄສຂອງຕົວນຳ gene ໃນທາງເດີນຫາຍໃຈແມ່ນມີຄວາມສຳຄັນແຕ່ຍາກທີ່ຈະບັນລຸໄດ້. ອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກທີ່ເຊື່ອມຕໍ່ກັບຕົວນຳ gene ທີ່ສາມາດມຸ້ງໄປຫາໜ້າດິນຂອງທາງເດີນຫາຍໃຈສາມາດປັບປຸງການກຳນົດເປົ້າໝາຍໃນພາກພື້ນ. ເນື່ອງຈາກສິ່ງທ້າທາຍຂອງການເບິ່ງເຫັນໃນຮ່າງກາຍ, ພຶດຕິກຳຂອງອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກຂະໜາດນ້ອຍດັ່ງກ່າວຢູ່ເທິງໜ້າດິນທາງເດີນຫາຍໃຈໃນເວລາທີ່ມີສະໜາມແມ່ເຫຼັກທີ່ໃຊ້ແມ່ນເຂົ້າໃຈຍາກ. ຈຸດປະສົງຂອງການສຶກສານີ້ແມ່ນເພື່ອໃຊ້ການສະແກນພາບ synchrotron ເພື່ອເບິ່ງເຫັນການເຄື່ອນໄຫວໃນຮ່າງກາຍຂອງອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກຊຸດໜຶ່ງໃນທໍ່ລົມຂອງໜູທີ່ໄດ້ຮັບການໃຊ້ຢາສະລົບເພື່ອກວດສອບການເຄື່ອນໄຫວແລະຮູບແບບຂອງພຶດຕິກຳຂອງອະນຸພາກສ່ວນບຸກຄົນແລະອະນຸພາກຂະໜາດໃຫຍ່ໃນຮ່າງກາຍ. ຫຼັງຈາກນັ້ນພວກເຮົາຍັງໄດ້ປະເມີນວ່າການສົ່ງຕໍ່ອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກ lentiviral ໃນບ່ອນທີ່ມີສະໜາມແມ່ເຫຼັກຈະເພີ່ມປະສິດທິພາບການສົ່ງຕໍ່ໃນໜູຫຼືບໍ່. ທໍ່ລົມຫາຍໃຈ. ການຖ່າຍພາບເອັກສ໌ເຣຊິນໂຄຣຕຣອນສະແດງໃຫ້ເຫັນພຶດຕິກຳຂອງອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກໃນສະໜາມແມ່ເຫຼັກທີ່ຢຸດນິ້ງ ແລະ ເຄື່ອນທີ່ທັງໃນຫຼອດທົດລອງ ແລະ ໃນຮ່າງກາຍ. ອະນຸພາກບໍ່ສາມາດຖືກລາກໄປຕາມໜ້າດິນຂອງທາງເດີນຫາຍໃຈທີ່ມີຊີວິດໄດ້ງ່າຍດ້ວຍແມ່ເຫຼັກ, ແຕ່ໃນລະຫວ່າງການຂົນສົ່ງ, ຊັ້ນວາງຈະເຂັ້ມຂຸ້ນຢູ່ໃນມຸມມອງບ່ອນທີ່ສະໜາມແມ່ເຫຼັກແຂງແຮງທີ່ສຸດ. ປະສິດທິພາບການສົ່ງຕໍ່ຍັງເພີ່ມຂຶ້ນຫົກເທົ່າເມື່ອອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກ lentiviral ຖືກສົ່ງໄປໃນທີ່ປະທັບຂອງສະໜາມແມ່ເຫຼັກ. ຮ່ວມກັນ, ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກ lentiviral ແລະ ສະໜາມແມ່ເຫຼັກອາດເປັນວິທີການທີ່ມີຄຸນຄ່າເພື່ອປັບປຸງການກຳນົດເປົ້າໝາຍເວັກເຕີຂອງ gene ແລະ ເພີ່ມລະດັບການສົ່ງຕໍ່ໃນການນຳທາງຫາຍໃຈໃນຮ່າງກາຍ.
ພະຍາດ cystic fibrosis (CF) ແມ່ນເກີດຈາກການປ່ຽນແປງຂອງ gene ດຽວທີ່ເອີ້ນວ່າຕົວຄວບຄຸມການນຳໄຟຟ້າຜ່ານເຍື່ອຫຸ້ມຈຸລັງ CF (CFTR). ໂປຣຕີນ CFTR ແມ່ນຊ່ອງທາງໄອອອນທີ່ມີຢູ່ໃນຈຸລັງ epithelial ຫຼາຍຊະນິດທົ່ວຮ່າງກາຍ, ລວມທັງທາງເດີນຫາຍໃຈທີ່ນຳໄຟຟ້າໄດ້, ເຊິ່ງເປັນບ່ອນສຳຄັນຂອງການເກີດພະຍາດ CF. ຂໍ້ບົກຜ່ອງຂອງ CFTR ນຳໄປສູ່ການຂົນສົ່ງນ້ຳທີ່ຜິດປົກກະຕິ, ເຮັດໃຫ້ໜ້າຜິວທາງເດີນຫາຍໃຈແຫ້ງ ແລະ ຫຼຸດຄວາມເລິກຂອງຊັ້ນນ້ຳໜ້າຜິວທາງເດີນຫາຍໃຈ (ASL). ສິ່ງນີ້ຍັງເຮັດໃຫ້ຄວາມສາມາດຂອງລະບົບການຂົນສົ່ງເຍື່ອເມືອກ (MCT) ໃນການກຳຈັດອະນຸພາກ ແລະ ເຊື້ອພະຍາດທີ່ສູດດົມເຂົ້າໄປຈາກທາງເດີນຫາຍໃຈຫຼຸດລົງ. ເປົ້າໝາຍຂອງພວກເຮົາແມ່ນເພື່ອພັດທະນາການປິ່ນປົວດ້ວຍ gene lentiviral (LV) ເພື່ອສົ່ງສຳເນົາ gene CFTR ທີ່ຖືກຕ້ອງ ແລະ ປັບປຸງສຸຂະພາບຂອງ ASL, MCT, ແລະ ປອດ, ແລະ ສືບຕໍ່ພັດທະນາເຕັກໂນໂລຢີໃໝ່ທີ່ມີຄວາມສາມາດໃນການວັດແທກພາລາມິເຕີເຫຼົ່ານີ້ໃນຮ່າງກາຍ.
ເວັກເຕີ LV ແມ່ນໜຶ່ງໃນບັນດາຜູ້ສະໝັກຊັ້ນນຳສຳລັບການປິ່ນປົວດ້ວຍພັນທຸກຳທາງເດີນຫາຍໃຈ CF, ສ່ວນໃຫຍ່ແມ່ນຍ້ອນວ່າພວກມັນສາມາດປະສົມປະສານພັນທຸກຳການປິ່ນປົວເຂົ້າໃນຈຸລັງພື້ນຖານທາງເດີນຫາຍໃຈ (ຈຸລັງລຳຕົ້ນທາງເດີນຫາຍໃຈ). ນີ້ແມ່ນສິ່ງສຳຄັນເພາະວ່າພວກມັນສາມາດຟື້ນຟູຄວາມຊຸ່ມຊື່ນ ແລະ ການກຳຈັດນໍ້າເມືອກຕາມປົກກະຕິໂດຍການຈຳແນກໄປສູ່ຈຸລັງໜ້າດິນທາງເດີນຫາຍໃຈທີ່ກ່ຽວຂ້ອງກັບ CF ທີ່ຖືກແກ້ໄຂພັນທຸກຳທີ່ເຮັດວຽກໄດ້, ເຊິ່ງສົ່ງຜົນໃຫ້ຜົນປະໂຫຍດຕະຫຼອດຊີວິດ. ເວັກເຕີ LV ຄວນຈະມຸ້ງໄປຫາທາງເດີນຫາຍໃຈທີ່ນຳໄຟຟ້າ, ຍ້ອນວ່ານີ້ແມ່ນບ່ອນທີ່ພະຍາດປອດ CF ເລີ່ມຕົ້ນ. ການສົ່ງເວັກເຕີເຂົ້າໄປໃນປອດເລິກກວ່າອາດຈະສົ່ງຜົນໃຫ້ການສົ່ງສັນຍານຖົງລົມຫາຍໃຈ, ແຕ່ສິ່ງນີ້ບໍ່ມີຜົນປະໂຫຍດໃນການປິ່ນປົວໃນ CF. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ນໍ້າເຊັ່ນ: ຕົວນຳພັນທຸກຳຈະເຄື່ອນຍ້າຍໄປສູ່ຖົງລົມຫາຍໃຈຕາມທຳມະຊາດເມື່ອຫາຍໃຈເຂົ້າຫຼັງຈາກການເກີດລູກ3,4 ແລະ ອະນຸພາກການປິ່ນປົວຈະຖືກກຳຈັດອອກຢ່າງໄວວາເຂົ້າໄປໃນຊ່ອງປາກໂດຍ MCT. ປະສິດທິພາບການສົ່ງສັນຍານ LV ແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງໂດຍກົງກັບໄລຍະເວລາທີ່ເວັກເຕີຍັງຄົງຢູ່ຂ້າງຈຸລັງເປົ້າໝາຍເພື່ອໃຫ້ຈຸລັງດູດຊຶມ - "ເວລາພັກອາໄສ"5 - ເຊິ່ງຫຼຸດລົງໄດ້ງ່າຍໂດຍການໄຫຼວຽນຂອງອາກາດໃນພາກພື້ນປົກກະຕິເຊັ່ນດຽວກັນກັບການຈັບນໍ້າເມືອກຂອງອະນຸພາກທີ່ປະສານງານ ແລະ MCT. ສຳລັບ CF, ຄວາມສາມາດໃນການຍືດເວລາພັກອາໄສຂອງ LV ພາຍໃນທາງເດີນຫາຍໃຈແມ່ນມີຄວາມສຳຄັນເພື່ອບັນລຸລະດັບການສົ່ງສັນຍານໃນລະດັບສູງໃນພາກພື້ນນີ້, ແຕ່ມາຮອດປະຈຸບັນມັນເປັນສິ່ງທ້າທາຍ.
ເພື່ອເອົາຊະນະອຸປະສັກນີ້, ພວກເຮົາແນະນຳວ່າອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກ LV (MPs) ອາດຈະຊ່ວຍໄດ້ສອງວິທີທີ່ສົມບູນແບບ. ທຳອິດ, ພວກມັນສາມາດຖືກນຳທາງດ້ວຍແມ່ເຫຼັກໄປຫາໜ້າດິນທາງເດີນຫາຍໃຈເພື່ອປັບປຸງການກຳນົດເປົ້າໝາຍ ແລະ ຊ່ວຍໃຫ້ອະນຸພາກພາຫະນະ gene ຢູ່ໃນພາກພື້ນທາງເດີນຫາຍໃຈທີ່ຕ້ອງການ; ແລະ ASL) ເພື່ອເຄື່ອນຍ້າຍໄປສູ່ຊັ້ນເຊວ 6. MPs ໄດ້ຖືກນຳໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງເປັນພາຫະນະສົ່ງຢາເປົ້າໝາຍເມື່ອພວກມັນຜູກມັດກັບພູມຕ້ານທານ, ຢາເຄມີບຳບັດ, ຫຼືໂມເລກຸນຂະໜາດນ້ອຍອື່ນໆທີ່ຕິດກັບເຍື່ອຫຸ້ມເຊວ ຫຼື ຜູກມັດກັບຕົວຮັບໜ້າດິນເຊວທີ່ກ່ຽວຂ້ອງ ແລະ ສະສົມຢູ່ບໍລິເວນເນື້ອງອກໃນເວລາທີ່ມີໄຟຟ້າສະຖິດ. ສະໜາມແມ່ເຫຼັກສຳລັບການປິ່ນປົວມະເຮັງ 7. ເຕັກນິກ "ຄວາມຮ້ອນສູງ" ອື່ນໆມີຈຸດປະສົງເພື່ອເຮັດໃຫ້ MPs ຮ້ອນຂຶ້ນເມື່ອພວກມັນຖືກສຳຜັດກັບສະໜາມແມ່ເຫຼັກທີ່ສັ່ນສະເທືອນ, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງທຳລາຍຈຸລັງເນື້ອງອກ. ຫຼັກການຂອງການໂອນແມ່ເຫຼັກ, ເຊິ່ງສະໜາມແມ່ເຫຼັກຖືກນຳໃຊ້ເປັນຕົວແທນການໂອນ DNA ເພື່ອເພີ່ມການໂອນ DNA ໄປຫາຈຸລັງ, ແມ່ນຖືກນຳໃຊ້ທົ່ວໄປໃນຫຼອດທົດລອງໂດຍໃຊ້ເວັກເຕີ gene ທີ່ບໍ່ແມ່ນໄວຣັດ ແລະ ໄວຣັດຫຼາຍຊະນິດສຳລັບສາຍຈຸລັງທີ່ຍາກທີ່ຈະໂອນ. ປະສິດທິພາບຂອງການໂອນແມ່ເຫຼັກ LV ໄດ້ຖືກສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນ, ດ້ວຍການຈັດສົ່ງ LV-MPs ໃນຫຼອດທົດລອງໄປຫາສາຍຈຸລັງ epithelial ຂອງຫຼອດລົມຂອງມະນຸດໃນເວລາທີ່ມີສະໜາມແມ່ເຫຼັກຄົງທີ່, ເພີ່ມປະສິດທິພາບການໂອນໂດຍ 186 ເທົ່າເມື່ອທຽບກັບເວັກເຕີ LV ຢ່າງດຽວ. LV-MP ຍັງໄດ້ຖືກນຳໃຊ້ກັບຮູບແບບ CF ໃນຫຼອດທົດລອງ, ບ່ອນທີ່ການໂອນແມ່ເຫຼັກເພີ່ມການໂອນ LV ໃນວັດທະນະທຳການໂຕ້ຕອບລະຫວ່າງອາກາດ ແລະ ແຫຼວໂດຍ 20 ເທົ່າໃນເວລາທີ່ມີເສມຫະ CF10. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ການໂອນອະໄວຍະວະ magnetotransfection ໃນຮ່າງກາຍໄດ້ຮັບຄວາມສົນໃຈໜ້ອຍ ແລະ ໄດ້ຮັບການປະເມີນພຽງແຕ່ໃນການສຶກສາສັດບໍ່ຫຼາຍປານໃດ11,12,13,14,15, ໂດຍສະເພາະໃນ ປອດ16,17. ເຖິງຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ໂອກາດສຳລັບການຖ່າຍທອດແມ່ເຫຼັກໃນການປິ່ນປົວປອດ CF ແມ່ນຈະແຈ້ງ. Tan et al. (2020) ໄດ້ກ່າວວ່າ “ການສຶກສາຫຼັກຖານຂອງແນວຄວາມຄິດກ່ຽວກັບການສົ່ງປອດດ້ວຍອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກທີ່ມີປະສິດທິພາບຈະປູທາງໃຫ້ແກ່ຍຸດທະສາດການສູດດົມ CFTR ໃນອະນາຄົດເພື່ອປັບປຸງຜົນໄດ້ຮັບທາງດ້ານຄລີນິກໃນຄົນເຈັບ CF”6.
ພຶດຕິກຳຂອງອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກຂະໜາດນ້ອຍເທິງໜ້າດິນທາງເດີນຫາຍໃຈໃນເວລາທີ່ມີສະໜາມແມ່ເຫຼັກທີ່ໃຊ້ແມ່ນຍາກທີ່ຈະເບິ່ງເຫັນ ແລະ ສຶກສາ, ແລະ ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງເຂົ້າໃຈຍາກ. ໃນການສຶກສາອື່ນໆ, ພວກເຮົາໄດ້ພັດທະນາວິທີການຖ່າຍພາບລັງສີ X-ray ແບບກົງກັນຂ້າມໂດຍອີງໃສ່ການຂະຫຍາຍພັນ synchrotron (PB-PCXI) ເພື່ອເບິ່ງເຫັນ ແລະ ວັດແທກການປ່ຽນແປງໃນຮ່າງກາຍໃນຄວາມເລິກຂອງ ASL18 ແລະ ພຶດຕິກຳ MCT19,20 ໂດຍບໍ່ມີການຮຸກຮານ ເພື່ອວັດແທກຄວາມຊຸ່ມຊື່ນຂອງໜ້າດິນຂອງທໍ່ອາຍແກັສໂດຍກົງ ແລະ ໃຊ້ເປັນຕົວຊີ້ບອກຕົ້ນໆຂອງປະສິດທິພາບການປິ່ນປົວ. ນອກຈາກນັ້ນ, ວິທີການປະເມີນ MCT ຂອງພວກເຮົາໃຊ້ອະນຸພາກທີ່ມີເສັ້ນຜ່າສູນກາງ 10–35 µm ທີ່ປະກອບດ້ວຍອະລູມິນາ ຫຼື ແກ້ວດັດຊະນີການຫັກເຫສູງເປັນເຄື່ອງໝາຍ MCT ທີ່ເບິ່ງເຫັນໄດ້ໂດຍໃຊ້ PB-PCXI21. ທັງສອງເຕັກນິກແມ່ນເໝາະສົມສຳລັບການເບິ່ງເຫັນອະນຸພາກຫຼາກຫຼາຍຊະນິດ, ລວມທັງ MP.
ເນື່ອງຈາກຄວາມລະອຽດທາງພື້ນທີ່ ແລະ ເວລາສູງ, ເຕັກນິກການວິເຄາະ ASL ແລະ MCT ທີ່ອີງໃສ່ PB-PCXI ຂອງພວກເຮົາແມ່ນເໝາະສົມຫຼາຍສຳລັບການກວດສອບການເຄື່ອນໄຫວ ແລະ ຮູບແບບຂອງພຶດຕິກຳຂອງອະນຸພາກດ່ຽວ ແລະ ອະນຸພາກຂະໜາດໃຫຍ່ໃນຮ່າງກາຍ ເພື່ອຊ່ວຍໃຫ້ພວກເຮົາເຂົ້າໃຈ ແລະ ເພີ່ມປະສິດທິພາບເຕັກນິກການສົ່ງ gene MP. ວິທີການທີ່ພວກເຮົາໃຊ້ຢູ່ນີ້ແມ່ນມາຈາກການສຶກສາຂອງພວກເຮົາໂດຍໃຊ້ເສັ້ນແສງ SPring-8 BL20B2, ເຊິ່ງພວກເຮົາໄດ້ເຫັນການເຄື່ອນໄຫວຂອງນ້ຳຫຼັງຈາກການສົ່ງຢາເວັກເຕີປອມເຂົ້າໄປໃນທາງເດີນຫາຍໃຈດັງ ແລະ ປອດຂອງໜູເພື່ອຊ່ວຍອະທິບາຍຮູບແບບການສະແດງອອກຂອງ gene ທີ່ບໍ່ສະໝໍ່າສະເໝີຂອງພວກເຮົາທີ່ສັງເກດເຫັນໃນການສຶກສາສັດທີ່ມີຢາພາຫະນະ gene ຂອງພວກເຮົາ 3,4.
ຈຸດປະສົງຂອງການສຶກສານີ້ແມ່ນເພື່ອໃຊ້ເຄື່ອງ synchrotron PB-PCXI ເພື່ອສະແດງພາບການເຄື່ອນໄຫວໃນຮ່າງກາຍຂອງຊຸດ MPs ໃນທໍ່ລົມຂອງໜູທີ່ມີຊີວິດ. ການສຶກສາການຖ່າຍພາບ PB-PCXI ເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ຖືກອອກແບບມາເພື່ອທົດສອບ MPs, ຄວາມແຮງຂອງສະໜາມແມ່ເຫຼັກ, ແລະສະຖານທີ່ຕ່າງໆເພື່ອກຳນົດຜົນກະທົບຂອງມັນຕໍ່ການເຄື່ອນໄຫວຂອງ MP. ພວກເຮົາໄດ້ສົມມຸດຕິຖານວ່າສະໜາມແມ່ເຫຼັກທີ່ໃຊ້ພາຍນອກຈະຊ່ວຍໃຫ້ MP ທີ່ຖືກສົ່ງມາຢູ່ ຫຼື ເຄື່ອນຍ້າຍໄປຫາພື້ນທີ່ເປົ້າໝາຍ. ການສຶກສາເຫຼົ່ານີ້ຍັງຊ່ວຍໃຫ້ພວກເຮົາສາມາດລະບຸການຕັ້ງຄ່າແມ່ເຫຼັກທີ່ເພີ່ມຈຳນວນອະນຸພາກທີ່ເກັບໄວ້ໃນທໍ່ລົມຫຼັງຈາກການວາງຊັ້ນ. ໃນຊຸດການສຶກສາຄັ້ງທີສອງ, ພວກເຮົາໄດ້ພະຍາຍາມໃຊ້ການຕັ້ງຄ່າທີ່ດີທີ່ສຸດນີ້ເພື່ອສະແດງຮູບແບບການສົ່ງສັນຍານທີ່ເປັນຜົນມາຈາກການສົ່ງ LV-MPs ໄປສູ່ທາງເດີນຫາຍໃຈຂອງໜູໃນຮ່າງກາຍ, ໂດຍອີງໃສ່ສົມມຸດຕິຖານວ່າການສົ່ງ LV-MPs ໃນສະພາບການຂອງການກຳນົດເປົ້າໝາຍທາງເດີນຫາຍໃຈຈະເຮັດໃຫ້ປະສິດທິພາບການສົ່ງ LV ທີ່ດີຂຶ້ນ.
ການສຶກສາກ່ຽວກັບສັດທັງໝົດໄດ້ຖືກປະຕິບັດຕາມໂປໂຕຄອນທີ່ໄດ້ຮັບການອະນຸມັດຈາກມະຫາວິທະຍາໄລ Adelaide (M-2019-060 ແລະ M-2020-022) ແລະຄະນະກຳມະການຈັນຍາບັນສັດ Synchrotron SPring-8. ການທົດລອງໄດ້ປະຕິບັດຕາມຄຳແນະນຳຂອງ ARRIVE.
ການຖ່າຍພາບລັງສີເອັກສ໌ທັງໝົດໄດ້ຖືກປະຕິບັດຢູ່ທີ່ເສັ້ນລັງສີ BL20XU ທີ່ເຄື່ອງຖ່າຍພາບຊິນໂຄຣຕຣອນ SPring-8 ໃນປະເທດຍີ່ປຸ່ນ, ໂດຍໃຊ້ການຕັ້ງຄ່າທີ່ຄ້າຍຄືກັນກັບທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນໜ້ານີ້21,22. ໂດຍຫຍໍ້, ກ່ອງທົດລອງຕັ້ງຢູ່ຫ່າງຈາກວົງແຫວນເກັບຮັກສາຊິນໂຄຣຕຣອນ 245 ແມັດ. ໄລຍະຫ່າງລະຫວ່າງຕົວຢ່າງກັບເຄື່ອງກວດຈັບ 0.6 ແມັດແມ່ນໃຊ້ສຳລັບການສຶກສາການຖ່າຍພາບອະນຸພາກ ແລະ 0.3 ແມັດສຳລັບການສຶກສາການຖ່າຍພາບໃນຮ່າງກາຍເພື່ອສ້າງຜົນກະທົບທາງກົງກັນຂ້າມຂອງໄລຍະ. ພະລັງງານລັງສີດຽວ 25 keV ໄດ້ຖືກນຳໃຊ້. ຮູບພາບໄດ້ຖືກບັນທຶກໂດຍໃຊ້ຕົວແປງລັງສີເອັກສ໌ຄວາມລະອຽດສູງ (SPring-8 BM3) ທີ່ເຊື່ອມຕໍ່ກັບເຄື່ອງກວດຈັບ sCMOS. ຕົວແປງຈະປ່ຽນລັງສີເອັກສ໌ເປັນແສງທີ່ເບິ່ງເຫັນໄດ້ໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງສະທ້ອນແສງໜາ 10 µm (Gd3Al2Ga3O12), ເຊິ່ງຫຼັງຈາກນັ້ນຈະຖືກສົ່ງໄປຫາເຊັນເຊີ sCMOS ໂດຍໃຊ້ວັດຖຸຈຸລະທັດ × 10 (NA 0.3). ເຄື່ອງກວດຈັບ sCMOS ແມ່ນ Orca-Flash4.0 (Hamamatsu Photonics, ປະເທດຍີ່ປຸ່ນ) ທີ່ມີຂະໜາດອາເຣຂອງ 2048 × 2048 ພິກເຊວ ແລະ ຂະໜາດພິກເຊວດິບ 6.5 × 6.5 µm. ການຕັ້ງຄ່ານີ້ໃຫ້ຂະໜາດພິກເຊວ isotropic ທີ່ມີປະສິດທິພາບ 0.51 µm ແລະ ມຸມມອງປະມານ 1.1 ມມ × 1.1 ມມ. ຄວາມຍາວຂອງການຮັບແສງ 100 ms ໄດ້ຖືກເລືອກເພື່ອເພີ່ມອັດຕາສ່ວນສັນຍານຕໍ່ສຽງລົບກວນຂອງອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກພາຍໃນ ແລະ ພາຍນອກທາງເດີນຫາຍໃຈໃຫ້ສູງສຸດ ໃນຂະນະທີ່ຫຼຸດຜ່ອນສິ່ງປະດິດການເຄື່ອນໄຫວທີ່ເກີດຈາກການຫາຍໃຈ. ສຳລັບການສຶກສາໃນຮ່າງກາຍ, ຊັດເຕີລັງສີເອັກສ໌ໄວໄດ້ຖືກວາງໄວ້ໃນເສັ້ນທາງລັງສີເອັກສ໌ເພື່ອຈຳກັດປະລິມານລັງສີໂດຍການສະກັດກັ້ນລັງສີເອັກສ໌ລະຫວ່າງການຮັບແສງ.
ຕົວນຳ LV ບໍ່ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ໃນການສຶກສາການຖ່າຍພາບ SPring-8 PB-PCXI ໃດໆ ເນື່ອງຈາກຫ້ອງຖ່າຍພາບ BL20XU ບໍ່ໄດ້ຮັບການຮັບຮອງລະດັບຄວາມປອດໄພທາງຊີວະພາບ 2. ແທນທີ່ຈະ, ພວກເຮົາໄດ້ເລືອກເອົາ MPs ທີ່ມີລັກສະນະດີຈາກຜູ້ສະໜອງທາງການຄ້າສອງແຫ່ງ — ເຊິ່ງກວມເອົາຫຼາຍຂະໜາດ, ວັດສະດຸ, ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງທາດເຫຼັກ, ແລະ ການນຳໃຊ້ — ກ່ອນອື່ນໝົດເພື່ອເຂົ້າໃຈວ່າສະໜາມແມ່ເຫຼັກມີຜົນກະທົບຕໍ່ການເຄື່ອນໄຫວຂອງ MP ພາຍໃນເສັ້ນເລືອດຝອຍແກ້ວແນວໃດ, ແລະ ຫຼັງຈາກນັ້ນໃນທາງເດີນຫາຍໃຈທີ່ມີຊີວິດ. ຢູ່ເທິງໜ້າດິນ. MPs ມີຂະໜາດຕັ້ງແຕ່ 0.25 ຫາ 18 μm ແລະ ເຮັດມາຈາກວັດສະດຸຫຼາກຫຼາຍຊະນິດ (ເບິ່ງຕາຕະລາງທີ 1), ແຕ່ສ່ວນປະກອບຂອງແຕ່ລະຕົວຢ່າງ, ລວມທັງຂະໜາດຂອງອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກພາຍໃນ MP, ແມ່ນຍັງບໍ່ຮູ້ເທື່ອ. ອີງຕາມການສຶກສາ MCT ຢ່າງກວ້າງຂວາງຂອງພວກເຮົາ 19, 20, 21, 23, 24, ພວກເຮົາຄາດວ່າ MPs ທີ່ມີຂະໜາດນ້ອຍເຖິງ 5 μm ສາມາດເຫັນໄດ້ຢູ່ເທິງໜ້າດິນທາງເດີນຫາຍໃຈ, ຕົວຢ່າງໂດຍການຫັກເຟຣມຕໍ່ເນື່ອງເພື່ອເບິ່ງການເບິ່ງເຫັນທີ່ດີຂຶ້ນຂອງການເຄື່ອນໄຫວຂອງ MP. MP ຂະໜາດ 0.25 μm ດຽວມີຂະໜາດນ້ອຍກວ່າຄວາມລະອຽດຂອງອຸປະກອນການຖ່າຍພາບ, ແຕ່ PB-PCXI ຄາດວ່າຈະກວດຈັບຄວາມຄົມຊັດຂອງປະລິມານຂອງມັນ ແລະ ການເຄື່ອນໄຫວຂອງນ້ຳເທິງໜ້າດິນທີ່ພວກມັນຖືກຝາກໄວ້ຫຼັງຈາກການຝາກໄວ້.
ຕົວຢ່າງສຳລັບແຕ່ລະ MP ໃນຕາຕະລາງທີ 1 ໄດ້ຖືກກະກຽມໃນຫຼອດແກ້ວຂະໜາດ 20 μl (Drummond Microcaps, PA, USA) ທີ່ມີເສັ້ນຜ່າສູນກາງພາຍໃນ 0.63 ມມ. ອະນຸພາກໃນຮູບຊົງມີຢູ່ໃນນໍ້າ, ໃນຂະນະທີ່ອະນຸພາກ CombiMag ມີຢູ່ໃນນໍ້າຢາທີ່ຜູ້ຜະລິດເປັນເຈົ້າຂອງ. ແຕ່ລະທໍ່ຖືກເຕີມດ້ວຍນໍ້າເຄິ່ງໜຶ່ງ (ປະມານ 11 μl) ແລະວາງໄວ້ເທິງຕົວຍຶດຕົວຢ່າງ (ເບິ່ງຮູບທີ 1). ຫຼອດແກ້ວໄດ້ຖືກວາງໄວ້ຕາມແນວນອນເທິງຂັ້ນຕອນຕົວຢ່າງໃນກ່ອງຖ່າຍພາບຕາມລໍາດັບ, ແລະວາງຂອບຂອງນໍ້າຢາ. ແມ່ເຫຼັກ neodymium iron boron (NdFeB) ເປືອກນິກເກີນທີ່ຫາຍາກທີ່ມີເສັ້ນຜ່າສູນກາງ 19 ມມ (ຍາວ 28 ມມ) ເສັ້ນຜ່າສູນກາງ 19 ມມ (ຍາວ 28 ມມ) (N35, ໝາຍເລກໝວດໝູ່ LM1652, Jaycar Electronics, ອົດສະຕຣາລີ) ທີ່ມີແມ່ເຫຼັກເຫຼືອ 1.17 Tesla ໄດ້ຖືກຕິດກັບຂັ້ນຕອນການແປພາສາແຍກຕ່າງຫາກເພື່ອໃຫ້ສາມາດປ່ຽນຕຳແໜ່ງຂອງມັນໄດ້ຈາກໄລຍະໄກໃນລະຫວ່າງການຖ່າຍພາບ. ການໄດ້ຮູບພາບ X-ray ເລີ່ມຕົ້ນເມື່ອແມ່ເຫຼັກຖືກວາງໄວ້ປະມານ 30 ມມ ເໜືອຕົວຢ່າງ, ແລະຮູບພາບຈະຖືກເກັບໄວ້ໃນອັດຕາ 4 ເຟຣມຕໍ່ວິນາທີ. ໃນລະຫວ່າງການຖ່າຍພາບ, ແມ່ເຫຼັກໄດ້ຖືກ ນຳມາໃກ້ກັບທໍ່ແກ້ວ capillary (ຫ່າງອອກໄປປະມານ 1 ມມ) ແລະ ຫຼັງຈາກນັ້ນໄດ້ແຜ່ລາມໄປຕາມທໍ່ເພື່ອປະເມີນຜົນກະທົບຂອງຄວາມແຮງຂອງສະໜາມ ແລະ ຕຳແໜ່ງ.
ການຕັ້ງຄ່າການຖ່າຍພາບໃນຫຼອດທົດລອງທີ່ມີຕົວຢ່າງ MP ໃນຫຼອດແກ້ວໃນຂັ້ນຕອນການແປພາສາ xy ຂອງຕົວຢ່າງ. ເສັ້ນທາງຂອງລັງສີ X ຖືກໝາຍດ້ວຍເສັ້ນປະສີແດງ.
ເມື່ອການເບິ່ງເຫັນໃນຫຼອດທົດລອງຂອງ MPs ໄດ້ຖືກສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນ, ກຸ່ມຍ່ອຍຂອງພວກມັນໄດ້ຖືກທົດສອບໃນຮ່າງກາຍໃນໜູ Wistar ເພດຍິງຜິວຂາວຊະນິດທຳມະຊາດ (ອາຍຸປະມານ 12 ອາທິດ, ປະມານ 200 ກຣາມ). 0.24 ມກ/ກກ medetomidine (Domitor®, Zenoaq, ຍີ່ປຸ່ນ), 3.2 ມກ/ກກ midazolam (Dormicum®, Astellas Pharma, ຍີ່ປຸ່ນ) ແລະ 4 ມກ/ກກ butorphanol (Vetorphale®, Meiji Seika) ໜູໄດ້ຖືກໃຫ້ຢາສະລົບດ້ວຍສ່ວນປະສົມຂອງ Pharma), ຍີ່ປຸ່ນ) ໂດຍການສັກຢາເຂົ້າທ້ອງ. ຫຼັງຈາກການໃຫ້ຢາສະລົບ, ພວກມັນຖືກກະກຽມສຳລັບການສະແກນພາບໂດຍການເອົາຂົນອ້ອມທໍ່ລົມອອກ, ໃສ່ທໍ່ຫາຍໃຈ (ET; 16 Ga iv cannula, Terumo BCT) ແລະ ຍຶດພວກມັນໄວ້ໃນຫງາຍເທິງແຜ່ນສະແກນພາບທີ່ຜະລິດເອງທີ່ມີຖົງຄວາມຮ້ອນເພື່ອຮັກສາອຸນຫະພູມຮ່າງກາຍ 22. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ແຜ່ນສະແກນພາບໄດ້ຖືກຕິດກັບຂັ້ນຕອນການແປພາສາຕົວຢ່າງໃນກ່ອງສະແກນພາບໃນມຸມເລັກນ້ອຍເພື່ອຈັດລຽນທໍ່ລົມອອກຕາມແນວນອນໃນຮູບພາບ X-ray, ດັ່ງທີ່ສະແດງ. ໃນຮູບທີ 2a.
(ກ) ການຕັ້ງຄ່າການຖ່າຍພາບໃນຮ່າງກາຍໃນກ່ອງຖ່າຍພາບ SPring-8, ເສັ້ນທາງຂອງລັງສີເອັກສ໌ຖືກໝາຍດ້ວຍເສັ້ນປະສີແດງ. (ຂ, ຄ) ການລະບຸຕຳແໜ່ງແມ່ເຫຼັກໃນທໍ່ລົມຫາຍໃຈໄດ້ຖືກປະຕິບັດຈາກໄລຍະໄກໂດຍໃຊ້ກ້ອງຖ່າຍຮູບ IP ສອງຕົວທີ່ຕິດຕັ້ງແບບຕັ້ງສາກ. ​​ຢູ່ເບື້ອງຊ້າຍຂອງຮູບພາບໜ້າຈໍ, ວົງລວດທີ່ຖືຫົວສາມາດເຫັນໄດ້, ແລະ ທໍ່ສົ່ງຢູ່ໃນບ່ອນພາຍໃນທໍ່ ET.
ລະບົບປໍ້າເຂັມສັກຢາທີ່ຄວບຄຸມຈາກໄລຍະໄກ (UMP2, World Precision Instruments, Sarasota, FL) ໂດຍໃຊ້ເຂັມສັກຢາແກ້ວຂະໜາດ 100 μl ໄດ້ເຊື່ອມຕໍ່ກັບທໍ່ PE10 (OD 0.61 mm, ID 0.28 mm) ຜ່ານເຂັມ 30 Ga. ໝາຍທໍ່ເພື່ອຮັບປະກັນວ່າປາຍຢູ່ໃນຕຳແໜ່ງທີ່ຖືກຕ້ອງໃນທໍ່ຫາຍໃຈເມື່ອໃສ່ທໍ່ ET. ໂດຍໃຊ້ໄມໂຄຣປັ໊ມ, ກະບອກສູບເຂັມສັກຢາໄດ້ຖືກດຶງອອກໃນຂະນະທີ່ປາຍຂອງທໍ່ຖືກແຊ່ລົງໃນຕົວຢ່າງ MP ທີ່ຈະສົ່ງ. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ທໍ່ສົ່ງທີ່ໂຫຼດໄດ້ຖືກໃສ່ເຂົ້າໄປໃນທໍ່ຫາຍໃຈ, ວາງປາຍໄວ້ພາຍໃນສ່ວນທີ່ແຂງແຮງທີ່ສຸດຂອງສະໜາມແມ່ເຫຼັກທີ່ພວກເຮົາຄາດໄວ້. ການຈັບພາບໄດ້ຖືກຄວບຄຸມໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງກວດຈັບການຫາຍໃຈທີ່ເຊື່ອມຕໍ່ກັບກ່ອງກຳນົດເວລາທີ່ໃຊ້ Arduino ຂອງພວກເຮົາ, ແລະສັນຍານທັງໝົດ (ເຊັ່ນ: ອຸນຫະພູມ, ການຫາຍໃຈ, ການເປີດ/ປິດຊັດເຕີ ແລະ ການຈັບພາບ) ໄດ້ຖືກບັນທຶກໄວ້ໂດຍໃຊ້ Powerlab ແລະ LabChart (AD Instruments, Sydney, Australia) 22. ເມື່ອຖ່າຍພາບ ເມື່ອບໍ່ສາມາດເຂົ້າເຖິງບ່ອນປິດໄດ້, ກ້ອງຖ່າຍຮູບ IP ສອງຕົວ (Panasonic BB-SC382) ຖືກວາງໄວ້ທີ່ປະມານ 90° ຕໍ່ກັນ ແລະ ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອຕິດຕາມຕໍາແຫນ່ງ. ຂອງແມ່ເຫຼັກທຽບກັບທໍ່ລົມໃນລະຫວ່າງການຖ່າຍພາບ (ຮູບທີ 2b, c). ເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນສິ່ງປະດິດການເຄື່ອນໄຫວ, ຮູບພາບໜຶ່ງໄດ້ຖືກເກັບກຳຕໍ່ລົມຫາຍໃຈໃນລະຫວ່າງທີ່ຮາບພຽງຂອງກະແສນ້ຳຂຶ້ນລົງ.
ແມ່ເຫຼັກຖືກຕິດກັບຂັ້ນຕອນທີສອງທີ່ສາມາດຕັ້ງຢູ່ໄດ້ຈາກໄລຍະໄກຈາກພາຍນອກເຮືອນເກັບພາບ. ຕຳແໜ່ງ ແລະ ການຕັ້ງຄ່າແມ່ເຫຼັກຕ່າງໆໄດ້ຖືກທົດສອບ, ລວມທັງ: ຕິດຕັ້ງຢູ່ທີ່ມຸມປະມານ 30° ເໜືອທໍ່ລົມຫາຍໃຈ (ການຕັ້ງຄ່າທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 2a ແລະ 3a); ແມ່ເຫຼັກອັນໜຶ່ງຢູ່ເໜືອສັດ ແລະ ອີກອັນໜຶ່ງຢູ່ລຸ່ມ, ໂດຍມີເສົາຕັ້ງໃຫ້ດຶງດູດ (ຮູບທີ 3b); ແມ່ເຫຼັກອັນໜຶ່ງຢູ່ເໜືອສັດ ແລະ ອີກອັນໜຶ່ງຢູ່ລຸ່ມ, ໂດຍມີເສົາຕັ້ງໃຫ້ຕ້ານທານ (ຮູບທີ 3c); ແລະ ແມ່ເຫຼັກອັນໜຶ່ງຢູ່ເໜືອ ແລະ ຕັ້ງສາກກັບທໍ່ລົມຫາຍໃຈ (ຮູບທີ 3d). ເມື່ອສັດ ແລະ ແມ່ເຫຼັກຖືກຕັ້ງຄ່າ ແລະ MP ທີ່ຈະທົດສອບຖືກໂຫຼດເຂົ້າໄປໃນປັ໊ມສີດຢາ, ໃຫ້ສົ່ງຢາ 50 μl ໃນອັດຕາ 4 μl/ວິນາທີ ໃນຂະນະທີ່ຖ່າຍພາບ. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ແມ່ເຫຼັກຈະຖືກຍ້າຍໄປມາຕາມ ຫຼື ຂ້າງໆຂ້າມທໍ່ລົມຫາຍໃຈ ໃນຂະນະທີ່ສືບຕໍ່ຖ່າຍພາບ.
ການຕັ້ງຄ່າແມ່ເຫຼັກສຳລັບການຖ່າຍພາບໃນຮ່າງກາຍ (ກ) ແມ່ເຫຼັກດ່ຽວຢູ່ເໜືອທໍ່ລົມຫາຍໃຈໃນມຸມປະມານ 30°, (ຂ) ແມ່ເຫຼັກສອງອັນທີ່ຕັ້ງໄວ້ເພື່ອດຶງດູດ, (ຄ) ແມ່ເຫຼັກສອງອັນທີ່ຕັ້ງໄວ້ເພື່ອຕ້ານທານ, (ງ) ແມ່ເຫຼັກດ່ຽວຢູ່ເໜືອ ແລະ ຕັ້ງສາກກັນໃນທໍ່ລົມຫາຍໃຈ. ຜູ້ສັງເກດການເບິ່ງລົງມາຈາກປາກໄປຫາປອດຜ່ານທໍ່ລົມຫາຍໃຈ, ແລະ ລັງສີເອັກສ໌ໄດ້ຜ່ານທາງຊ້າຍຂອງໜູ ແລະ ອອກຈາກທາງຂວາ. ແມ່ເຫຼັກຖືກຍ້າຍໄປຕາມຄວາມຍາວຂອງທາງເດີນຫາຍໃຈ ຫຼື ຊ້າຍ ແລະ ຂວາຢູ່ເໜືອທໍ່ລົມຫາຍໃຈໃນທິດທາງຂອງລັງສີເອັກສ໌.
ພວກເຮົາຍັງໄດ້ພະຍາຍາມກຳນົດການເບິ່ງເຫັນ ແລະ ພຶດຕິກຳຂອງອະນຸພາກໃນເສັ້ນທາງຫາຍໃຈໃນເວລາທີ່ບໍ່ມີການຫາຍໃຈທີ່ສັບສົນ ແລະ ການເຄື່ອນໄຫວຂອງຫົວໃຈ. ດັ່ງນັ້ນ, ໃນຕອນທ້າຍຂອງໄລຍະເວລາການຖ່າຍພາບ, ສັດໄດ້ຖືກຂ້າຢ່າງໂຫດຮ້າຍຍ້ອນການໃຊ້ຢາ pentobarbital ເກີນຂະໜາດ (Somnopentil, Pitman-Moore, Washington Crossing, ອາເມລິກາ; ~65 ມກ/ກກ ip). ສັດບາງຊະນິດຖືກປະໄວ້ຢູ່ເທິງເວທີການຖ່າຍພາບ, ແລະ ເມື່ອການຫາຍໃຈ ແລະ ການເຕັ້ນຂອງຫົວໃຈຢຸດລົງ, ຂະບວນການຖ່າຍພາບໄດ້ຖືກເຮັດຊ້ຳອີກ, ໂດຍເພີ່ມປະລິມານ MP ເພີ່ມເຕີມຖ້າບໍ່ມີ MP ທີ່ເຫັນໄດ້ຢູ່ເທິງໜ້າດິນທາງເດີນຫາຍໃຈ.
ຮູບພາບທີ່ໄດ້ມາໄດ້ຖືກແກ້ໄຂພາບຮາບພຽງ ແລະ ພາບມືດ ແລະ ຫຼັງຈາກນັ້ນປະກອບເຂົ້າກັນເປັນຮູບເງົາ (20 ເຟຣມຕໍ່ວິນາທີ; ຄວາມໄວປົກກະຕິ 15-25 × ຂຶ້ນກັບອັດຕາການຫາຍໃຈ) ໂດຍໃຊ້ສະຄຣິບທີ່ກຳນົດເອງທີ່ຂຽນໃນ MATLAB (R2020a, The Mathworks).
ການສຶກສາການສົ່ງມອບ gene vector LV ທັງໝົດໄດ້ດຳເນີນຢູ່ທີ່ສະຖານທີ່ຄົ້ນຄວ້າສັດທົດລອງທີ່ມະຫາວິທະຍາໄລ Adelaide ແລະມີຈຸດປະສົງເພື່ອນຳໃຊ້ຜົນຂອງການທົດລອງ SPring-8 ເພື່ອປະເມີນວ່າການຈັດສົ່ງ LV-MP ໃນສະພາບທີ່ມີສະໜາມແມ່ເຫຼັກສາມາດເສີມຂະຫຍາຍການຖ່າຍທອດ gene ໃນຮ່າງກາຍໄດ້ຫຼືບໍ່. ເພື່ອປະເມີນຜົນກະທົບຂອງ MP ແລະສະໜາມແມ່ເຫຼັກ, ສັດສອງກຸ່ມໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວ: ກຸ່ມໜຶ່ງໄດ້ຮັບ LV-MP ທີ່ມີແມ່ເຫຼັກວາງໄວ້, ແລະອີກກຸ່ມໜຶ່ງໄດ້ຮັບກຸ່ມຄວບຄຸມທີ່ມີ LV-MP ໂດຍບໍ່ມີແມ່ເຫຼັກ.
ເວັກເຕີຂອງ gene LV ໄດ້ຖືກສ້າງຂຶ້ນໂດຍໃຊ້ວິທີການທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນໜ້ານີ້ 25, 26. ເວັກເຕີ LacZ ສະແດງອອກເຖິງ gene beta-galactosidase ທີ່ຖືກຕັ້ງຖິ່ນຖານຢູ່ໃນນິວເຄຼຍ ເຊິ່ງຂັບເຄື່ອນໂດຍໂປຣໂມເຕີ MPSV ທີ່ເປັນສ່ວນປະກອບ (LV-LacZ), ເຊິ່ງຜະລິດຜະລິດຕະພັນປະຕິກິລິຍາສີຟ້າໃນຈຸລັງທີ່ຖືກປ່ຽນຮູບ, ເຊິ່ງສາມາດເບິ່ງເຫັນໄດ້ໃນດ້ານໜ້າຂອງເນື້ອເຍື່ອປອດ ແລະ ສ່ວນຂອງເນື້ອເຍື່ອ. ການໄຕຕຣິກໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນການເພາະເລี้ยงຈຸລັງໂດຍການນັບຈຳນວນຈຸລັງ LacZ ທີ່ເປັນບວກດ້ວຍຕົນເອງດ້ວຍເຄື່ອງວັດແທກ hemocytometer ເພື່ອຄິດໄລ່ titer ໃນ TU/ml. ຕົວນຳໄດ້ຖືກແຊ່ແຂງທີ່ -80 °C, ລະລາຍກ່ອນການນຳໃຊ້, ແລະ ຜູກມັດກັບ CombiMag ໂດຍການປະສົມໃນອັດຕາສ່ວນ 1:1 ແລະ ຟັກໃນນ້ຳກ້ອນຢ່າງໜ້ອຍ 30 ນາທີກ່ອນການເກີດລູກ.
ໜູ Sprague Dawley ປົກກະຕິ (n = 3/ກຸ່ມ, ~2-3 ໂຕ ໄດ້ຖືກໃຫ້ຢາສະລົບທາງຊ່ອງທ້ອງດ້ວຍສ່ວນປະສົມຂອງຢາ medetomidine 0.4 ມກ/ກກ (Domitor, Ilium, ອົດສະຕຣາລີ) ແລະຢາ ketamine 60 ມກ/ກກ (Ilium, ອົດສະຕຣາລີ) ອາຍຸໜຶ່ງເດືອນ) ແລະ ການສອດທໍ່ທາງປາກໂດຍບໍ່ຕ້ອງຜ່າຕັດດ້ວຍທໍ່ທາງເດີນຫາຍໃຈຂະໜາດ 16 Ga. ເພື່ອຮັບປະກັນວ່າເນື້ອເຍື່ອທາງເດີນຫາຍໃຈໄດ້ຮັບການສົ່ງສັນຍານ LV, ມັນໄດ້ຖືກປັບສະພາບໂດຍໃຊ້ໂປໂຕຄອນການລົບກວນທາງກົນຈັກທີ່ພວກເຮົາໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນໜ້ານີ້, ເຊິ່ງໜ້າຜິວທາງເດີນຫາຍໃຈໄດ້ຖືກຖູດ້ວຍກະຕ່າລວດ (N-Circle, Nitinol Tipless Stone Extractor NTSE-022115) -UDH, Cook Medical, ສະຫະລັດອາເມລິກາ) 30 ວິນາທີ 28. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ການໃຫ້ຢາ LV-MP ທາງທໍ່ທາງເດີນຫາຍໃຈໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນຕູ້ຄວາມປອດໄພທາງຊີວະພາບປະມານ 10 ນາທີຫຼັງຈາກການລົບກວນ.
ສະໜາມແມ່ເຫຼັກທີ່ໃຊ້ໃນການທົດລອງນີ້ໄດ້ຖືກຕັ້ງຄ່າໃນລັກສະນະທີ່ຄ້າຍຄືກັນກັບການສຶກສາການຖ່າຍພາບລັງສີເອັກສ໌ໃນຮ່າງກາຍ, ໂດຍມີແມ່ເຫຼັກດຽວກັນຖືກຍຶດໄວ້ເໜືອທໍ່ລົມຫາຍໃຈໂດຍໃຊ້ຄລິບກັ່ນ (ຮູບທີ 4). ປະລິມານ 50 μl (2 × 25 μl aliquots) ຂອງ LV-MP ໄດ້ຖືກສົ່ງເຂົ້າໄປໃນທໍ່ລົມຫາຍໃຈ (n = 3 ສັດ) ໂດຍໃຊ້ pipette ທີ່ມີປາຍເຈວຕາມທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນໜ້ານີ້. ກຸ່ມຄວບຄຸມ (n = 3 ສັດ) ໄດ້ຮັບ LV-MPs ດຽວກັນໂດຍບໍ່ຕ້ອງໃຊ້ແມ່ເຫຼັກ. ຫຼັງຈາກການສີດສຳເລັດແລ້ວ, cannula ຈະຖືກເອົາອອກຈາກທໍ່ ET ແລະສັດຈະຖືກ extubated. ແມ່ເຫຼັກຍັງຄົງຢູ່ບ່ອນນັ້ນເປັນເວລາ 10 ນາທີ, ຫຼັງຈາກນັ້ນມັນຖືກເອົາອອກ. ໜູໄດ້ຮັບຢາ meloxicam ໃນປະລິມານໃຕ້ຜິວໜັງ (1 ml/kg) (Ilium, ອົດສະຕຣາລີ) ຕາມດ້ວຍການປີ້ນກັບຂອງການໃຊ້ຢາສະລົບໂດຍການສັກ ip ຂອງ 1 mg/kg atipamazole hydrochloride (Antisedan, Zoetis, ອົດສະຕຣາລີ). ໜູໄດ້ຖືກຮັກສາຄວາມອົບອຸ່ນ ແລະ ຕິດຕາມຈົນກວ່າຈະຫາຍດີຈາກການໃຊ້ຢາສະລົບ.
ອຸປະກອນສົ່ງ LV-MP ໃນຕູ້ຄວາມປອດໄພທາງຊີວະພາບ. ສູນກາງ Luer ສີເທົາອ່ອນຂອງທໍ່ ET ສາມາດເຫັນໄດ້ຍື່ນອອກມາຈາກປາກ ແລະ ປາຍເຈວຂອງ pipette ທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບຖືກໃສ່ຜ່ານທໍ່ ET ໄປສູ່ຄວາມເລິກທີ່ຕ້ອງການເຂົ້າໄປໃນທໍ່ລົມ.
ໜຶ່ງອາທິດຫຼັງຈາກຂັ້ນຕອນການໃຫ້ຢາ LV-MP, ສັດໄດ້ຖືກຂ້າຕາຍຢ່າງໂຫດຮ້າຍໂດຍການສູດດົມ CO2 100% ແລະ ການສະແດງອອກຂອງ LacZ ໄດ້ຖືກປະເມີນໂດຍໃຊ້ການປິ່ນປົວດ້ວຍ X-gal ມາດຕະຖານຂອງພວກເຮົາ. ວົງແຫວນກະດູກອ່ອນສາມອັນທີ່ຫາງໄດ້ຖືກຖອດອອກເພື່ອຮັບປະກັນວ່າຄວາມເສຍຫາຍທາງກົນຈັກ ຫຼື ການຮັກສານ້ຳຈາກການວາງທໍ່ຫາຍໃຈບໍ່ໄດ້ລວມຢູ່ໃນການວິເຄາະ. ແຕ່ລະທໍ່ລົມຫາຍໃຈຖືກຕັດຕາມລວງຍາວເພື່ອສ້າງສອງເຄິ່ງສຳລັບການວິເຄາະ, ແລະ ພວກມັນໄດ້ຖືກຕິດຕັ້ງໃນຈານທີ່ມີຢາງຊິລິໂຄນ (Sylgard, Dow Inc) ໂດຍໃຊ້ເຂັມ Minutien (Fine Science Tools) ເພື່ອເບິ່ງເຫັນພື້ນຜິວຂອງ luminal. ການແຈກຢາຍ ແລະ ຮູບແບບຂອງຈຸລັງທີ່ຖືກປ່ຽນຮູບໄດ້ຖືກຢືນຢັນໂດຍການຖ່າຍຮູບທາງໜ້າໂດຍໃຊ້ກ້ອງຈຸລະທັດ Nikon (SMZ1500) ດ້ວຍກ້ອງຖ່າຍຮູບ DigiLite ແລະ ຊອບແວ TCapture (Tucsen Photonics, ຈີນ). ຮູບພາບໄດ້ຖືກເກັບກຳດ້ວຍການຂະຫຍາຍ 20x (ລວມທັງການຕັ້ງຄ່າສູງສຸດສຳລັບຄວາມກວ້າງເຕັມຂອງທໍ່ລົມຫາຍໃຈ), ໂດຍມີຄວາມຍາວທັງໝົດຂອງທໍ່ລົມຫາຍໃຈຖືກຖ່າຍພາບເທື່ອລະຂັ້ນຕອນ, ຮັບປະກັນການຊ້ອນກັນຢ່າງພຽງພໍລະຫວ່າງແຕ່ລະຮູບພາບເພື່ອໃຫ້ສາມາດ "ຕໍ່" ຮູບພາບໄດ້. ຮູບພາບຈາກແຕ່ລະ ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ທໍ່ລົມຫາຍໃຈໄດ້ຖືກປະກອບເຂົ້າກັນເປັນຮູບພາບປະສົມດຽວໂດຍໃຊ້ Image Composite Editor v2.0.3 (Microsoft Research) ໂດຍໃຊ້ອັລກໍຣິທຶມການເຄື່ອນໄຫວແບບຮາບພຽງ. ພື້ນທີ່ສະແດງອອກ LacZ ໃນຮູບພາບປະສົມຂອງທໍ່ລົມຫາຍໃຈຈາກສັດແຕ່ລະໂຕໄດ້ຖືກວັດແທກໂດຍໃຊ້ສະຄຣິບ MATLAB ອັດຕະໂນມັດ (R2020a, MathWorks) ຕາມທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ກ່ອນໜ້ານີ້, ໂດຍໃຊ້ການຕັ້ງຄ່າ 0.35 < Hue < 0.58, Saturation > 0.15, ແລະ Value < 0.7. ໂດຍການຕິດຕາມຮູບຮ່າງຂອງເນື້ອເຍື່ອ, ໜ້າກາກໄດ້ຖືກສ້າງຂຶ້ນດ້ວຍຕົນເອງໃນ GIMP v2.10.24 ສຳລັບແຕ່ລະຮູບພາບປະສົມເພື່ອລະບຸພື້ນທີ່ເນື້ອເຍື່ອ ແລະ ປ້ອງກັນການກວດພົບທີ່ບໍ່ຖືກຕ້ອງຈາກພາຍນອກເນື້ອເຍື່ອທໍ່ລົມຫາຍໃຈ. ພື້ນທີ່ທີ່ເປື້ອນຈາກຮູບພາບປະສົມທັງໝົດຈາກສັດແຕ່ລະໂຕໄດ້ຖືກລວມເຂົ້າກັນເພື່ອສ້າງພື້ນທີ່ທີ່ເປື້ອນທັງໝົດສຳລັບສັດນັ້ນ. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ພື້ນທີ່ທີ່ເປື້ອນໄດ້ຖືກແບ່ງອອກດ້ວຍພື້ນທີ່ໜ້າກາກທັງໝົດເພື່ອສ້າງພື້ນທີ່ປົກກະຕິ.
ແຕ່ລະທໍ່ລົມຫາຍໃຈຖືກຝັງຢູ່ໃນພາຣາຟິນ ແລະ ຕັດສ່ວນ 5 μm. ສ່ວນຕ່າງໆໄດ້ຖືກຍ້ອມສີດ້ວຍສີແດງໄວທີ່ເປັນກາງເປັນເວລາ 5 ນາທີ ແລະ ຮູບພາບໄດ້ຖືກຖ່າຍໂດຍໃຊ້ກ້ອງຈຸລະທັດ Nikon Eclipse E400, ກ້ອງຖ່າຍຮູບ DS-Fi3 ແລະ ຊອບແວຈັບພາບອົງປະກອບ NIS (ເວີຊັນ 5.20.00).
ການວິເຄາະທາງສະຖິຕິທັງໝົດໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນ GraphPad Prism v9 (GraphPad Software, Inc.). ຄວາມສຳຄັນທາງສະຖິຕິໄດ້ຖືກກຳນົດໄວ້ທີ່ p ≤ 0.05. ຄວາມເປັນປົກກະຕິໄດ້ຖືກຢືນຢັນໂດຍໃຊ້ການທົດສອບ Shapiro-Wilk, ແລະຄວາມແຕກຕ່າງໃນການຍ້ອມສີ LacZ ໄດ້ຖືກປະເມີນໂດຍໃຊ້ການທົດສອບ t-test ທີ່ບໍ່ໄດ້ຈັບຄູ່.
MP ຫົກອັນທີ່ໄດ້ອະທິບາຍໄວ້ໃນຕາຕະລາງທີ 1 ໄດ້ຖືກກວດສອບໂດຍໃຊ້ PCXI, ແລະ ການເບິ່ງເຫັນໄດ້ຖືກອະທິບາຍໄວ້ໃນຕາຕະລາງທີ 2. ສອງ polystyrene MPs (MP1 ແລະ MP2; 18 μm ແລະ 0.25 μm, ຕາມລຳດັບ) ບໍ່ສາມາດເບິ່ງເຫັນໄດ້ພາຍໃຕ້ PCXI, ແຕ່ຕົວຢ່າງທີ່ເຫຼືອສາມາດລະບຸໄດ້ (ຕົວຢ່າງແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 5). MP3 ແລະ MP4 (10-15% Fe3O4; 0.25 μm ແລະ 0.9 μm, ຕາມລຳດັບ) ສາມາດເບິ່ງເຫັນໄດ້ເລັກນ້ອຍ. ເຖິງແມ່ນວ່າຈະມີອະນຸພາກທີ່ນ້ອຍທີ່ສຸດທີ່ທົດສອບ, MP5 (98% Fe3O4; 0.25 μm) ແມ່ນເຫັນໄດ້ຊັດເຈນທີ່ສຸດ. ຜະລິດຕະພັນ CombiMag MP6 ຍາກທີ່ຈະສັງເກດເຫັນ. ໃນທຸກໆກໍລະນີ, ຄວາມສາມາດຂອງພວກເຮົາໃນການກວດຈັບ MP ໄດ້ຮັບການປັບປຸງຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໂດຍການແປແມ່ເຫຼັກໄປມາຂະໜານກັບ capillary. ເມື່ອແມ່ເຫຼັກເຄື່ອນຍ້າຍອອກຈາກ capillary, ອະນຸພາກໄດ້ຂະຫຍາຍອອກເປັນສາຍຍາວ, ແຕ່ເມື່ອແມ່ເຫຼັກໃກ້ຊິດຂຶ້ນ ແລະ ຄວາມແຮງຂອງສະໜາມແມ່ເຫຼັກເພີ່ມຂຶ້ນ, ສາຍອະນຸພາກຈະສັ້ນລົງເມື່ອອະນຸພາກເຄື່ອນຍ້າຍໄປສູ່ໜ້າດິນດ້ານເທິງຂອງ capillary (ເບິ່ງວິດີໂອເສີມ S1: MP4), ການເພີ່ມຄວາມໜາແໜ້ນຂອງອະນຸພາກຂອງໜ້າດິນ. ໃນທາງກັບກັນ, ເມື່ອແມ່ເຫຼັກຖືກຖອດອອກຈາກ capillary, ຄວາມແຮງຂອງສະໜາມຈະຫຼຸດລົງ ແລະ MPs ຈະຈັດລຽງຄືນໃໝ່ເປັນສາຍຍາວໆທີ່ຍືດອອກຈາກໜ້າດິນດ້ານເທິງຂອງ capillary (ເບິ່ງວິດີໂອເສີມ S2:MP4). ຫຼັງຈາກແມ່ເຫຼັກຢຸດການເຄື່ອນທີ່, ອະນຸພາກຍັງສືບຕໍ່ເຄື່ອນທີ່ເປັນເວລາສັ້ນໆຫຼັງຈາກຮອດຕຳແໜ່ງສົມດຸນ. ໃນຂະນະທີ່ MP ເຄື່ອນໄປຫາ ແລະ ອອກຈາກໜ້າດິນດ້ານເທິງຂອງ capillary, ອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກມັກຈະລາກເສດເຫຼືອຜ່ານນ້ຳ.
ການເບິ່ງເຫັນຂອງ MP ພາຍໃຕ້ PCXI ແຕກຕ່າງກັນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍລະຫວ່າງຕົວຢ່າງ.(ກ) MP3, (ຂ) MP4, (ຄ) MP5 ແລະ (ງ) MP6. ຮູບພາບທັງໝົດທີ່ສະແດງຢູ່ນີ້ແມ່ນຖ່າຍດ້ວຍແມ່ເຫຼັກທີ່ຕັ້ງຢູ່ປະມານ 10 ມມ ເໜືອເສັ້ນເລືອດຝອຍໂດຍກົງ. ວົງມົນໃຫຍ່ທີ່ເຫັນໄດ້ຊັດເຈນແມ່ນຟອງອາກາດທີ່ຕິດຢູ່ໃນເສັ້ນເລືອດຝອຍ, ສະແດງໃຫ້ເຫັນຢ່າງຊັດເຈນເຖິງລັກສະນະຂອງຂອບສີດຳ ແລະ ສີຂາວຂອງການຖ່າຍພາບຄວາມຄົມຊັດຂອງໄລຍະ. ກ່ອງສີແດງມີການຂະຫຍາຍທີ່ເພີ່ມຄວາມຄົມຊັດ. ໃຫ້ສັງເກດວ່າເສັ້ນຜ່າສູນກາງຂອງແຜນວາດແມ່ເຫຼັກໃນທຸກຮູບບໍ່ໄດ້ມີຂະໜາດ ແລະ ໃຫຍ່ກວ່າທີ່ສະແດງປະມານ 100 ເທົ່າ.
ເມື່ອແມ່ເຫຼັກຖືກແປໄປທາງຊ້າຍ ແລະ ຂວາຕາມດ້ານເທິງຂອງ capillary, ມຸມຂອງສາຍ MP ຈະປ່ຽນໄປເພື່ອໃຫ້ສອດຄ່ອງກັບແມ່ເຫຼັກ (ເບິ່ງຮູບທີ 6), ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງກຳນົດເສັ້ນສະໜາມແມ່ເຫຼັກ. ສຳລັບ MP3-5, ຫຼັງຈາກສາຍຮອດມຸມຂອບເຂດ, ອະນຸພາກຈະຖືກລາກໄປຕາມໜ້າຜິວດ້ານເທິງຂອງ capillary. ສິ່ງນີ້ມັກຈະເຮັດໃຫ້ MPs ຈັດກຸ່ມເປັນກຸ່ມໃຫຍ່ກວ່າໃກ້ກັບບ່ອນທີ່ສະໜາມແມ່ເຫຼັກແຮງທີ່ສຸດ (ເບິ່ງວິດີໂອເສີມ S3:MP5). ສິ່ງນີ້ຍັງເຫັນໄດ້ຊັດເຈນໂດຍສະເພາະເມື່ອຖ່າຍພາບໃກ້ກັບປາຍ capillary, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ MPs ລວມຕົວ ແລະ ເຂັ້ມຂຸ້ນຢູ່ທີ່ຈຸດຕິດຕໍ່ລະຫວ່າງນ້ຳ ແລະ ອາກາດ. ອະນຸພາກໃນ MP6, ເຊິ່ງຍາກທີ່ຈະແຍກແຍະໄດ້ຫຼາຍກວ່າ MP3-5, ບໍ່ໄດ້ຖືກລາກໃນຂະນະທີ່ແມ່ເຫຼັກເຄື່ອນທີ່ໄປຕາມ capillary, ແຕ່ສາຍ MP ໄດ້ແຍກຕົວອອກ, ເຮັດໃຫ້ອະນຸພາກຢູ່ໃນພາບ (ເບິ່ງວິດີໂອເສີມ S4:MP6). ໃນບາງກໍລະນີ, ເມື່ອສະໜາມແມ່ເຫຼັກທີ່ໃຊ້ຖືກຫຼຸດລົງໂດຍການຍ້າຍແມ່ເຫຼັກໄປໄກຈາກສະຖານທີ່ຖ່າຍພາບ, MPs ທີ່ເຫຼືອຈະຄ່ອຍໆລົງສູ່ໜ້າຜິວລຸ່ມຂອງທໍ່ໂດຍແຮງໂນ້ມຖ່ວງໃນຂະນະທີ່ຍັງຢູ່ໃນສາຍ (ເບິ່ງວິດີໂອເສີມ S5: MP3).
ມຸມຂອງສາຍ MP ຈະປ່ຽນແປງເມື່ອແມ່ເຫຼັກຖືກແປໄປທາງຂວາເທິງ capillary.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 ແລະ (d) MP6. ກ່ອງສີແດງປະກອບດ້ວຍການຂະຫຍາຍທີ່ເພີ່ມຄວາມຄົມຊັດ. ໃຫ້ສັງເກດວ່າວິດີໂອເສີມແມ່ນໃຫ້ຂໍ້ມູນຍ້ອນວ່າມັນເປີດເຜີຍໂຄງສ້າງອະນຸພາກທີ່ສຳຄັນ ແລະ ຂໍ້ມູນແບບເຄື່ອນໄຫວທີ່ບໍ່ສາມາດເບິ່ງເຫັນໄດ້ໃນຮູບພາບຄົງທີ່ເຫຼົ່ານີ້.
ການທົດສອບຂອງພວກເຮົາສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການເຄື່ອນຍ້າຍແມ່ເຫຼັກຊ້າໆໄປມາຕາມທໍ່ລົມຊ່ວຍໃຫ້ເຫັນພາບຂອງ MP ໃນສະພາບການຂອງການເຄື່ອນໄຫວທີ່ສັບສົນໃນຮ່າງກາຍ. ການທົດສອບໃນຮ່າງກາຍບໍ່ໄດ້ປະຕິບັດຍ້ອນວ່າລູກປັດໂພລີສະໄຕຣີນ (MP1 ແລະ MP2) ບໍ່ສາມາດເບິ່ງເຫັນໄດ້ໃນເສັ້ນເລືອດຝອຍ. ແຕ່ລະ MP ທີ່ເຫຼືອສີ່ອັນໄດ້ຖືກທົດສອບໃນຮ່າງກາຍດ້ວຍແກນຍາວຂອງແມ່ເຫຼັກທີ່ຕັ້ງຄ່າໄວ້ຂ້າງເທິງທໍ່ລົມໃນມຸມປະມານ 30° ກັບແນວຕັ້ງ (ເບິ່ງຮູບທີ 2b ແລະ 3a), ຍ້ອນວ່າສິ່ງນີ້ເຮັດໃຫ້ສາຍ MP ຍາວຂຶ້ນ ແລະ ມີປະສິດທິພາບຫຼາຍກວ່າການຕັ້ງຄ່າແມ່ເຫຼັກທີ່ຢຸດ. MP3, MP4 ແລະ MP6 ບໍ່ໄດ້ຖືກກວດພົບໃນທໍ່ລົມຂອງສັດທີ່ມີຊີວິດໃດໆ. ເມື່ອທາງເດີນຫາຍໃຈຂອງໜູຖືກຖ່າຍພາບຫຼັງຈາກສັດຖືກຂ້າຢ່າງມະນຸດ, ອະນຸພາກຍັງຄົງເບິ່ງບໍ່ເຫັນເຖິງແມ່ນວ່າຈະມີການເພີ່ມປະລິມານເພີ່ມເຕີມໂດຍໃຊ້ປັ໊ມສີດຢາ. MP5 ມີປະລິມານທາດເຫຼັກອອກໄຊສູງສຸດ ແລະ ເປັນອະນຸພາກດຽວທີ່ເບິ່ງເຫັນໄດ້, ແລະ ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອປະເມີນ ແລະ ກໍານົດລັກສະນະພຶດຕິກໍາໃນຮ່າງກາຍຂອງ MP.
ການວາງແມ່ເຫຼັກໄວ້ເທິງທໍ່ລົມໃນລະຫວ່າງການສົ່ງ MP ເຮັດໃຫ້ MPs ຫຼາຍອັນ, ແຕ່ບໍ່ແມ່ນທັງໝົດ, ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຢູ່ໃນມຸມມອງ. ອະນຸພາກທີ່ເຂົ້າໄປໃນທໍ່ລົມສາມາດສັງເກດເຫັນໄດ້ດີທີ່ສຸດໃນສັດທີ່ຖືກຂ້າໂດຍມະນຸດ. ຮູບທີ 7 ແລະວິດີໂອເສີມ S6: MP5 ສະແດງໃຫ້ເຫັນການຈັບແມ່ເຫຼັກຢ່າງໄວວາ ແລະ ການຈັດລຽງຂອງອະນຸພາກຢູ່ເທິງໜ້າດິນຂອງທໍ່ລົມທາງໜ້າ, ຊີ້ບອກວ່າ MPs ສາມາດຖືກນຳໄປສູ່ພາກພື້ນທີ່ຕ້ອງການຂອງທໍ່ລົມ. ເມື່ອຄົ້ນຫາທາງໄກກວ່າຕາມທໍ່ລົມຫຼັງຈາກການສົ່ງ MP, MPs ບາງອັນຖືກພົບເຫັນຢູ່ໃກ້ກັບ carina, ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າຄວາມເຂັ້ມຂອງສະໜາມແມ່ເຫຼັກບໍ່ພຽງພໍທີ່ຈະເກັບກຳ ແລະ ຮັກສາ MPs ທັງໝົດ, ຍ້ອນວ່າພວກມັນຖືກສົ່ງຜ່ານພາກພື້ນທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂອງສະໜາມແມ່ເຫຼັກສູງສຸດໃນລະຫວ່າງຂະບວນການຂອງນ້ຳ. ເຖິງຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ MP ຫຼັງຄອດແມ່ນສູງກວ່າອ້ອມຮອບພື້ນທີ່ທີ່ຖ່າຍພາບ, ຊີ້ບອກວ່າ MPs ຫຼາຍອັນຍັງຄົງຢູ່ໃນພາກພື້ນທາງເດີນຫາຍໃຈບ່ອນທີ່ຄວາມເຂັ້ມຂອງສະໜາມແມ່ເຫຼັກທີ່ໃຊ້ແມ່ນສູງສຸດ.
ຮູບພາບຈາກ (ກ) ກ່ອນ ແລະ (ຂ) ຫຼັງຈາກການສົ່ງ MP5 ເຂົ້າໄປໃນທໍ່ລົມຫາຍໃຈຂອງໜູທີ່ຖືກກຳຈັດໂດຍບໍ່ດົນມານີ້ ໂດຍມີແມ່ເຫຼັກຕັ້ງຢູ່ຂ້າງເທິງພື້ນທີ່ຖ່າຍພາບໂດຍກົງ. ພື້ນທີ່ຖ່າຍພາບຕັ້ງຢູ່ລະຫວ່າງວົງແຫວນກະດູກອ່ອນສອງອັນ. ກ່ອນການສົ່ງ MP, ມີນ້ຳຢູ່ໃນທາງເດີນຫາຍໃຈ. ກ່ອງສີແດງມີການຂະຫຍາຍທີ່ເພີ່ມຄວາມຄົມຊັດ. ຮູບພາບເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນມາຈາກວິດີໂອທີ່ສະແດງຢູ່ໃນວິດີໂອເສີມ S6:MP5.
ການແປພາສາແມ່ເຫຼັກຕາມທໍ່ລົມໃນຮ່າງກາຍເຮັດໃຫ້ລະບົບຕ່ອງໂສ້ MP ປ່ຽນມຸມພາຍໃນໜ້າຜິວທາງເດີນຫາຍໃຈໃນລັກສະນະທີ່ຄ້າຍຄືກັນກັບທີ່ເຫັນໃນເສັ້ນເລືອດຝອຍ (ເບິ່ງຮູບທີ 8 ແລະວິດີໂອເສີມ S7:MP5). ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ໃນການສຶກສາຂອງພວກເຮົາ, MPs ບໍ່ສາມາດຖືກລາກໄປຕາມໜ້າຜິວຂອງທາງເດີນຫາຍໃຈທີ່ມີຊີວິດໄດ້ຄືກັບທີ່ພວກມັນສາມາດເຮັດໄດ້ກັບເສັ້ນເລືອດຝອຍ. ໃນບາງກໍລະນີ, ລະບົບຕ່ອງໂສ້ MP ຈະຍາວຂຶ້ນເມື່ອແມ່ເຫຼັກເຄື່ອນທີ່ໄປທາງຊ້າຍ ແລະ ຂວາ. ສິ່ງທີ່ໜ້າສົນໃຈແມ່ນ, ພວກເຮົາຍັງພົບວ່າສາຍອະນຸພາກເບິ່ງຄືວ່າຈະປ່ຽນຄວາມເລິກຂອງຊັ້ນນ້ຳເທິງໜ້າຜິວເມື່ອແມ່ເຫຼັກຖືກເຄື່ອນທີ່ຕາມລວງຍາວຕາມທໍ່ລົມ, ແລະ ຂະຫຍາຍອອກເມື່ອແມ່ເຫຼັກຖືກເຄື່ອນທີ່ໂດຍກົງເທິງຫົວ ແລະ ສາຍອະນຸພາກຖືກໝຸນໄປຫາຕຳແໜ່ງຕັ້ງ (ເບິ່ງວິດີໂອເສີມ S7). : MP5 ເວລາ 0:09, ລຸ່ມຂວາ). ຮູບແບບລັກສະນະຂອງການເຄື່ອນໄຫວໄດ້ປ່ຽນແປງເມື່ອແມ່ເຫຼັກຖືກແປໄປທົ່ວດ້ານເທິງຂອງທໍ່ລົມຫາຍໃຈທາງຂ້າງ (ນັ້ນຄື, ໄປທາງຊ້າຍ ຫຼື ຂວາຂອງສັດ ແທນທີ່ຈະຕາມຄວາມຍາວຂອງທໍ່ລົມຫາຍໃຈ). ອະນຸພາກຍັງສາມາດເຫັນໄດ້ຢ່າງຊັດເຈນໃນຂະນະທີ່ພວກມັນເຄື່ອນຍ້າຍ, ແຕ່ເມື່ອແມ່ເຫຼັກຖືກຖອດອອກຈາກທໍ່ລົມຫາຍໃຈ, ປາຍຂອງສາຍອະນຸພາກກໍ່ສາມາດເຫັນໄດ້ (ເບິ່ງວິດີໂອເສີມ S8:MP5, ເລີ່ມຕົ້ນທີ່ 0:08). ນີ້ສອດຄ່ອງກັບພຶດຕິກຳ MP ທີ່ພວກເຮົາສັງເກດເຫັນພາຍໃຕ້ສະໜາມແມ່ເຫຼັກທີ່ໃຊ້ໃນຫຼອດແກ້ວ.
ຕົວຢ່າງຮູບພາບທີ່ສະແດງໃຫ້ເຫັນ MP5 ຢູ່ໃນທໍ່ລົມຫາຍໃຈຂອງໜູທີ່ໄດ້ຮັບຢາສະລົບທີ່ມີຊີວິດຢູ່.(ກ) ແມ່ເຫຼັກຖືກໃຊ້ເພື່ອຮັບຮູບພາບຂ້າງເທິງ ແລະ ທາງຊ້າຍຂອງທໍ່ລົມຫາຍໃຈ, ຈາກນັ້ນ (ຂ) ຫຼັງຈາກແມ່ເຫຼັກຖືກຍ້າຍໄປທາງຂວາ. ກ່ອງສີແດງມີການຂະຫຍາຍທີ່ເພີ່ມຄວາມຄົມຊັດ. ຮູບພາບເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນມາຈາກວິດີໂອທີ່ສະແດງຢູ່ໃນວິດີໂອເສີມ S7:MP5.
ເມື່ອສອງຂົ້ວຖືກຕັ້ງຄ່າໃນທິດທາງທິດເໜືອ-ໃຕ້ຢູ່ຂ້າງເທິງ ແລະ ຂ້າງລຸ່ມຂອງທໍ່ລົມ (ເຊັ່ນ: ການດຶງດູດ; ຮູບທີ 3b), ສາຍ MP ປະກົດຂຶ້ນຍາວກວ່າ ແລະ ຕັ້ງຢູ່ຝາຂ້າງຂອງທໍ່ລົມແທນທີ່ຈະຢູ່ໜ້າຜິວດ້ານຫຼັງຂອງທໍ່ລົມ (ເບິ່ງວິດີໂອເສີມ S9:MP5). ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງຂອງອະນຸພາກຢູ່ສະຖານທີ່ດຽວ (ເຊັ່ນ: ໜ້າຜິວດ້ານຫຼັງຂອງທໍ່ລົມ) ບໍ່ໄດ້ຖືກກວດພົບຫຼັງຈາກການສົ່ງນ້ຳເມື່ອໃຊ້ອຸປະກອນແມ່ເຫຼັກຄູ່, ເຊິ່ງມັກຈະເກີດຂຶ້ນເມື່ອໃຊ້ອຸປະກອນແມ່ເຫຼັກດຽວ. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ເມື່ອແມ່ເຫຼັກອັນໜຶ່ງຖືກຕັ້ງຄ່າໃຫ້ຕ້ານທານກັບຂົ້ວທີ່ປີ້ນກັບກັນ (ຮູບທີ 3c), ຈຳນວນອະນຸພາກທີ່ເບິ່ງເຫັນໄດ້ໃນມຸມມອງບໍ່ປາກົດວ່າເພີ່ມຂຶ້ນຫຼັງຈາກການສົ່ງ. ການຕັ້ງຄ່າຂອງການຕັ້ງຄ່າແມ່ເຫຼັກຄູ່ທັງສອງແມ່ນທ້າທາຍເນື່ອງຈາກຄວາມເຂັ້ມຂອງສະໜາມແມ່ເຫຼັກສູງທີ່ດຶງ ຫຼື ຍູ້ແມ່ເຫຼັກຕາມລຳດັບ. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ການຕັ້ງຄ່າໄດ້ຖືກປ່ຽນເປັນແມ່ເຫຼັກດຽວຂະໜານກັບທາງເດີນຫາຍໃຈ ແຕ່ຜ່ານທາງເດີນຫາຍໃຈທີ່ 90 ອົງສາ ເພື່ອໃຫ້ເສັ້ນສະໜາມຕັດຜ່ານຝາທໍ່ລົມໃນທິດທາງຕັ້ງສາກ (ຮູບທີ 3d), ທິດທາງທີ່ຖືກອອກແບບມາເພື່ອກຳນົດວ່າການລວມຕົວຂອງອະນຸພາກຢູ່ຝາຂ້າງສາມາດສັງເກດເຫັນໄດ້ຫຼືບໍ່. ເຖິງຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ໃນການຕັ້ງຄ່ານີ້, ບໍ່ມີການເຄື່ອນໄຫວທີ່ສາມາດລະບຸໄດ້ຂອງການສະສົມ MP ຫຼື ການເຄື່ອນໄຫວຂອງແມ່ເຫຼັກ. ອີງຕາມຜົນໄດ້ຮັບທັງໝົດເຫຼົ່ານີ້, ການຕັ້ງຄ່າການວາງທິດທາງ 30 ອົງສາແບບແມ່ເຫຼັກດຽວ (ຮູບທີ 3a) ໄດ້ຖືກເລືອກສຳລັບການສຶກສາຕົວນຳພັນທຸກຳໃນຮ່າງກາຍ.
ເມື່ອສັດຖືກຖ່າຍພາບຊ້ຳໆທັນທີຫຼັງຈາກການຂ້າຢ່າງມີມະນຸດສະທຳ, ການບໍ່ມີການເຄື່ອນໄຫວຂອງເນື້ອເຍື່ອທີ່ສັບສົນໝາຍຄວາມວ່າເສັ້ນອະນຸພາກທີ່ລະອຽດກວ່າ ແລະ ສັ້ນກວ່າສາມາດຮັບຮູ້ໄດ້ໃນພາກສະໜາມລະຫວ່າງກະດູກທີ່ຊັດເຈນ, "ສັ່ນ" ສອດຄ່ອງກັບການເຄື່ອນໄຫວຂອງແມ່ເຫຼັກ. ເຖິງຢ່າງໃດກໍ່ຕາມ, ຍັງບໍ່ສາມາດເຫັນການມີຢູ່ ແລະ ການເຄື່ອນໄຫວຂອງອະນຸພາກ MP6 ໄດ້ຢ່າງຊັດເຈນ.
ຄ່າ titer LV-LacZ ແມ່ນ 1.8 × 108 TU/ml, ແລະຫຼັງຈາກປະສົມກັບ CombiMag MP (MP6) ໃນອັດຕາສ່ວນ 1:1, ສັດໄດ້ຮັບຢາ tracheal dose 50 μl ຂອງຢາ LV vehicle 9 × 107 TU/ml (ເຊັ່ນ: 4.5 × 106 TU/rat). ໃນການສຶກສາເຫຼົ່ານີ້, ແທນທີ່ຈະແປແມ່ເຫຼັກໃນລະຫວ່າງການເກີດລູກ, ພວກເຮົາໄດ້ແກ້ໄຂແມ່ເຫຼັກໄວ້ໃນຕຳແໜ່ງດຽວເພື່ອກຳນົດວ່າການຖ່າຍທອດ LV (a) ສາມາດປັບປຸງໄດ້ເມື່ອທຽບກັບການສົ່ງເວັກເຕີໃນເວລາທີ່ບໍ່ມີສະໜາມແມ່ເຫຼັກ, ແລະ (b) ສາມາດສຸມໃສ່ໄດ້. ຈຸລັງທາງເດີນຫາຍໃຈຖືກຖ່າຍທອດໄປຫາພາກພື້ນເປົ້າໝາຍແມ່ເຫຼັກຂອງທາງເດີນຫາຍໃຈສ່ວນເທິງ.
ການມີແມ່ເຫຼັກ ແລະ ການໃຊ້ CombiMag ລວມກັບເວັກເຕີ LV ເບິ່ງຄືວ່າບໍ່ມີຜົນກະທົບທາງລົບຕໍ່ສຸຂະພາບສັດ, ເຊັ່ນດຽວກັບໂປໂຕຄອນການສົ່ງເວັກເຕີ LV ມາດຕະຖານຂອງພວກເຮົາ. ຮູບພາບດ້ານໜ້າຂອງພາກພື້ນທໍ່ລົມຫາຍໃຈທີ່ໄດ້ຮັບການລົບກວນທາງກົນຈັກ (ຮູບເສີມທີ 1) ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າມີລະດັບການສົ່ງສັນຍານທີ່ສູງຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນກຸ່ມສັດທີ່ໄດ້ຮັບການປິ່ນປົວດ້ວຍ LV-MP ເມື່ອມີແມ່ເຫຼັກ (ຮູບທີ 9a). ມີພຽງແຕ່ການຍ້ອມສີ LacZ ສີຟ້າຈຳນວນໜ້ອຍໜຶ່ງເທົ່ານັ້ນທີ່ມີຢູ່ໃນກຸ່ມຄວບຄຸມ (ຮູບທີ 9b). ການວັດແທກປະລິມານຂອງພື້ນທີ່ຍ້ອມສີ X-Gal ປົກກະຕິສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການບໍລິຫານ LV-MP ໃນເວລາທີ່ມີສະໜາມແມ່ເຫຼັກເຮັດໃຫ້ມີການປັບປຸງປະມານ 6 ເທົ່າ (ຮູບທີ 9c).
ຕົວຢ່າງຮູບພາບປະກອບທີ່ສະແດງໃຫ້ເຫັນການສົ່ງສັນຍານຂອງທໍ່ລົມໂດຍ LV-MP (ກ) ໃນເວລາທີ່ມີສະໜາມແມ່ເຫຼັກ ແລະ (ຂ) ໃນເວລາທີ່ບໍ່ມີແມ່ເຫຼັກ. (ຄ) ການປັບປຸງທີ່ສຳຄັນທາງສະຖິຕິໃນພື້ນທີ່ການສົ່ງສັນຍານ LacZ ທີ່ປົກກະຕິພາຍໃນທໍ່ລົມເມື່ອໃຊ້ແມ່ເຫຼັກ (*p = 0.029, t-test, n = 3 ຕໍ່ກຸ່ມ, ຄ່າສະເລ່ຍ ± SEM).
ພາກສ່ວນທີ່ມີຮອຍແດງໄວທີ່ເປັນກາງ (ຕົວຢ່າງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບເສີມທີ 2) ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຈຸລັງທີ່ມີຮອຍ LacZ ມີຢູ່ໃນຮູບແບບ ແລະ ສະຖານທີ່ທີ່ຄ້າຍຄືກັນຕາມທີ່ໄດ້ລາຍງານມາກ່ອນໜ້ານີ້.
ສິ່ງທ້າທາຍທີ່ສຳຄັນສຳລັບການປິ່ນປົວດ້ວຍພັນທຸກໍາທາງເດີນຫາຍໃຈຍັງຄົງເປັນການລະບຸສະຖານທີ່ທີ່ຖືກຕ້ອງຂອງອະນຸພາກພາຫະນະໄປສູ່ພາກພື້ນທີ່ສົນໃຈ ແລະ ການບັນລຸລະດັບສູງຂອງປະສິດທິພາບການສົ່ງສັນຍານໃນປອດທີ່ເຄື່ອນທີ່ໃນເວລາທີ່ມີກະແສລົມ ແລະ ການກຳຈັດນໍ້າເມືອກທີ່ມີການເຄື່ອນໄຫວ. ສຳລັບຜູ້ພາຫະນະ LV ທີ່ຖືກອອກແບບມາເພື່ອປິ່ນປົວພະຍາດທາງເດີນຫາຍໃຈ CF, ການເພີ່ມເວລາທີ່ຢູ່ອາໄສຂອງອະນຸພາກພາຫະນະພາຍໃນທາງເດີນຫາຍໃຈທີ່ນຳໄຟຟ້າໄດ້ເປັນເປົ້າໝາຍທີ່ຍາກທີ່ຈະເຂົ້າໃຈໄດ້. ດັ່ງທີ່ໄດ້ຊີ້ໃຫ້ເຫັນໂດຍ Castellani ແລະ ຄະນະ, ການນຳໃຊ້ສະໜາມແມ່ເຫຼັກເພື່ອປັບປຸງການສົ່ງສັນຍານມີຂໍ້ໄດ້ປຽບເມື່ອທຽບກັບວິທີການສົ່ງສັນຍານອື່ນໆເຊັ່ນ: ການໃຊ້ໄຟຟ້າ, ຍ້ອນວ່າມັນສາມາດລວມເອົາຄວາມງ່າຍດາຍ, ປະສິດທິພາບດ້ານຕົ້ນທຶນ, ການລະບຸສະຖານທີ່ສົ່ງສັນຍານ, ປະສິດທິພາບທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນ, ແລະ ເວລາຟັກຕົວທີ່ສັ້ນກວ່າ, ແລະ ອາດຈະມີປະລິມານພາຫະນະທີ່ນ້ອຍກວ່າ10. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ການວາງຕົວ ແລະ ພຶດຕິກຳຂອງອະນຸພາກແມ່ເຫຼັກໃນຮ່າງກາຍທາງເດີນຫາຍໃຈພາຍໃຕ້ອິດທິພົນຂອງແຮງແມ່ເຫຼັກພາຍນອກບໍ່ເຄີຍໄດ້ຖືກອະທິບາຍ, ແລະ ຕົວຈິງແລ້ວຍັງບໍ່ທັນໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງວິທີການນີ້ໃນຮ່າງກາຍເພື່ອເພີ່ມລະດັບການສະແດງອອກຂອງພັນທຸກໍາໃນທາງເດີນຫາຍໃຈທີ່ມີຊີວິດຄົບຖ້ວນ.
ການທົດລອງ PCXI ຊິນໂຄຣຕຣອນໃນຫຼອດທົດລອງຂອງພວກເຮົາສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າອະນຸພາກທັງໝົດທີ່ພວກເຮົາໄດ້ທົດສອບ, ຍົກເວັ້ນໂພລີສະໄຕຣີນ MP, ສາມາດເບິ່ງເຫັນໄດ້ໃນການຕັ້ງຄ່າການຖ່າຍພາບທີ່ພວກເຮົາໃຊ້. ໃນເວລາທີ່ມີສະໜາມແມ່ເຫຼັກ, MPs ປະກອບເປັນສາຍທີ່ມີຄວາມຍາວກ່ຽວຂ້ອງກັບປະເພດຂອງອະນຸພາກ ແລະ ຄວາມແຮງຂອງສະໜາມແມ່ເຫຼັກ (ເຊັ່ນ: ຄວາມໃກ້ຄຽງ ແລະ ການເຄື່ອນທີ່ຂອງແມ່ເຫຼັກ). ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 10, ສາຍທີ່ພວກເຮົາສັງເກດເຫັນແມ່ນຖືກສ້າງຂຶ້ນເນື່ອງຈາກອະນຸພາກແຕ່ລະອັນຖືກແມ່ເຫຼັກ ແລະ ກະຕຸ້ນສະໜາມແມ່ເຫຼັກທ້ອງຖິ່ນຂອງມັນເອງ. ສະໜາມແຍກຕ່າງຫາກເຫຼົ່ານີ້ເຮັດໃຫ້ອະນຸພາກທີ່ຄ້າຍຄືກັນອື່ນໆລວມຕົວ ແລະ ເຊື່ອມຕໍ່ກັນ, ດ້ວຍການເຄື່ອນທີ່ຄ້າຍຄືສາຍກຸ່ມເນື່ອງຈາກແຮງທ້ອງຖິ່ນຈາກແຮງດຶງດູດ ແລະ ແຮງຕ້ານທານທ້ອງຖິ່ນຂອງອະນຸພາກອື່ນໆ.
ແຜນວາດສະແດງໃຫ້ເຫັນ (a,b) ຂະບວນອະນຸພາກທີ່ສ້າງຂຶ້ນພາຍໃນຫຼອດເລືອດຝອຍທີ່ເຕັມໄປດ້ວຍນໍ້າ ແລະ (c,d) ຫຼອດລົມທີ່ເຕັມໄປດ້ວຍອາກາດ. ໃຫ້ສັງເກດວ່າຫຼອດເລືອດຝອຍ ແລະ ຫຼອດລົມບໍ່ໄດ້ຖືກແຕ້ມຕາມຂະໜາດ. ແຜງ (a) ຍັງປະກອບດ້ວຍຄຳອະທິບາຍຂອງ MP, ເຊິ່ງປະກອບດ້ວຍອະນຸພາກ Fe3O4 ທີ່ຈັດລຽງເປັນສາຍ.
ເມື່ອແມ່ເຫຼັກຖືກຍ້າຍໄປຂ້າງເທິງ capillary, ມຸມຂອງສາຍອະນຸພາກໄດ້ບັນລຸຂອບເຂດສຳຄັນສຳລັບ MP3-5 ທີ່ມີ Fe3O4, ຫຼັງຈາກນັ້ນສາຍອະນຸພາກບໍ່ໄດ້ຢູ່ໃນຕຳແໜ່ງເດີມອີກຕໍ່ໄປ, ແຕ່ໄດ້ເຄື່ອນຍ້າຍໄປຕາມໜ້າດິນໄປສູ່ຕຳແໜ່ງໃໝ່. ແມ່ເຫຼັກ. ຜົນກະທົບນີ້ອາດຈະເກີດຂຶ້ນຍ້ອນວ່າໜ້າດິນ capillary ຂອງແກ້ວລຽບພໍທີ່ຈະເຮັດໃຫ້ການເຄື່ອນໄຫວນີ້ເກີດຂຶ້ນ. ສິ່ງທີ່ໜ້າສົນໃຈ, MP6 (CombiMag) ບໍ່ໄດ້ປະພຶດແບບນີ້, ອາດຈະເປັນຍ້ອນວ່າອະນຸພາກມີຂະໜາດນ້ອຍກວ່າ, ມີການເຄືອບ ຫຼື ປະຈຸໄຟຟ້າພື້ນຜິວທີ່ແຕກຕ່າງກັນ, ຫຼື ນ້ຳຢາພາຫະນະທີ່ເປັນເຈົ້າຂອງມີຜົນກະທົບຕໍ່ຄວາມສາມາດໃນການເຄື່ອນຍ້າຍຂອງພວກມັນ. ຄວາມແຕກຕ່າງຂອງຮູບພາບຂອງອະນຸພາກ CombiMag ຍັງອ່ອນແອກວ່າ, ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່ານ້ຳ ແລະ ອະນຸພາກອາດຈະມີຄວາມໜາແໜ້ນຄ້າຍຄືກັນ ແລະ ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງບໍ່ສາມາດເຄື່ອນຍ້າຍເຂົ້າຫາກັນໄດ້ງ່າຍ. ອະນຸພາກຍັງສາມາດຕິດຢູ່ໄດ້ຖ້າແມ່ເຫຼັກເຄື່ອນທີ່ໄວເກີນໄປ, ຊີ້ບອກວ່າຄວາມແຮງຂອງສະໜາມແມ່ເຫຼັກບໍ່ສາມາດເອົາຊະນະແຮງສຽດທານລະຫວ່າງອະນຸພາກໃນນ້ຳໄດ້ສະເໝີໄປ, ຊີ້ບອກວ່າບາງທີມັນອາດຈະບໍ່ແປກໃຈທີ່ຄວາມແຮງຂອງສະໜາມແມ່ເຫຼັກ ແລະ ໄລຍະຫ່າງລະຫວ່າງແມ່ເຫຼັກ ແລະ ພື້ນທີ່ເປົ້າໝາຍມີຄວາມສຳຄັນຫຼາຍ. ເມື່ອພິຈາລະນາຮ່ວມກັນ, ຜົນໄດ້ຮັບເຫຼົ່ານີ້ຍັງຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າ, ໃນຂະນະທີ່ແມ່ເຫຼັກສາມາດຈັບ MPs ຫຼາຍອັນທີ່ໄຫຼຜ່ານພື້ນທີ່ເປົ້າໝາຍ, ມັນບໍ່น่าຈະເປັນໄປໄດ້ທີ່ແມ່ເຫຼັກສາມາດເພິ່ງພາໄດ້. ເພື່ອເຄື່ອນຍ້າຍອະນຸພາກ CombiMag ຕາມໜ້າຜິວຂອງທໍ່ລົມຫາຍໃຈ. ດັ່ງນັ້ນ, ພວກເຮົາສະຫຼຸບໄດ້ວ່າການສຶກສາ LV-MP ໃນຮ່າງກາຍຄວນໃຊ້ສະໜາມແມ່ເຫຼັກສະຖິດເພື່ອແນໃສ່ພາກພື້ນສະເພາະຂອງຕົ້ນໄມ້ທາງເດີນຫາຍໃຈ.
ເມື່ອອະນຸພາກຖືກສົ່ງໄປໃນຮ່າງກາຍ, ພວກມັນຍາກທີ່ຈະລະບຸໄດ້ໃນສະພາບການຂອງເນື້ອເຍື່ອຮ່າງກາຍທີ່ສັບສົນທີ່ເຄື່ອນຍ້າຍ, ແຕ່ຄວາມສາມາດໃນການກວດຫາພວກມັນໄດ້ຮັບການປັບປຸງໂດຍການແປແມ່ເຫຼັກຕາມແນວນອນຂ້າງເທິງທໍ່ລົມຫາຍໃຈເພື່ອ "ສັ່ນ" ສາຍ MP. ເຖິງແມ່ນວ່າການຖ່າຍພາບສົດເປັນໄປໄດ້, ແຕ່ມັນງ່າຍຕໍ່ການຮັບຮູ້ການເຄື່ອນໄຫວຂອງອະນຸພາກເມື່ອສັດຖືກຂ້າຢ່າງມະນຸດ. ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ MP ໂດຍທົ່ວໄປແມ່ນສູງທີ່ສຸດຢູ່ສະຖານທີ່ນີ້ເມື່ອແມ່ເຫຼັກຖືກຕັ້ງຢູ່ຂ້າງເທິງພື້ນທີ່ຖ່າຍພາບ, ເຖິງແມ່ນວ່າອະນຸພາກບາງຊະນິດມັກຈະພົບເຫັນຢູ່ຕາມທໍ່ລົມຫາຍໃຈ. ກົງກັນຂ້າມກັບການສຶກສາໃນຫຼອດທົດລອງ, ອະນຸພາກບໍ່ສາມາດຖືກລາກໄປຕາມທໍ່ລົມຫາຍໃຈໂດຍການແປແມ່ເຫຼັກ. ການຄົ້ນພົບນີ້ສອດຄ່ອງກັບວິທີທີ່ນໍ້າເມືອກທີ່ເຄືອບໜ້າດິນຂອງທໍ່ລົມຫາຍໃຈມັກຈະປະມວນຜົນອະນຸພາກທີ່ສູດດົມເຂົ້າໄປ, ກັກຂັງພວກມັນໄວ້ໃນນໍ້າເມືອກ ແລະ ຫຼັງຈາກນັ້ນຖືກກຳຈັດອອກໂດຍກົນໄກການກຳຈັດນໍ້າເມືອກ.
ພວກເຮົາໄດ້ສົມມຸດຕິຖານວ່າການໃຊ້ແມ່ເຫຼັກເພື່ອດຶງດູດທາງເທິງ ແລະ ທາງລຸ່ມຂອງທໍ່ລົມຫາຍໃຈ (ຮູບທີ 3b) ອາດຈະເຮັດໃຫ້ສະໜາມແມ່ເຫຼັກມີຄວາມເປັນເອກະພາບຫຼາຍຂຶ້ນ, ແທນທີ່ຈະເປັນສະໜາມແມ່ເຫຼັກທີ່ມີຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສູງໃນຈຸດໜຶ່ງ, ເຊິ່ງອາດຈະນຳໄປສູ່ການແຈກຢາຍຂອງອະນຸພາກທີ່ມີຄວາມເປັນເອກະພາບຫຼາຍຂຶ້ນ. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ການສຶກສາເບື້ອງຕົ້ນຂອງພວກເຮົາບໍ່ພົບຫຼັກຖານທີ່ຊັດເຈນເພື່ອສະໜັບສະໜູນສົມມຸດຕິຖານນີ້. ເຊັ່ນດຽວກັນ, ການຕັ້ງຄ່າແມ່ເຫຼັກຄູ່ເພື່ອຕ້ານທານ (ຮູບທີ 3c) ບໍ່ໄດ້ສົ່ງຜົນໃຫ້ການຕົກຕະກອນຂອງອະນຸພາກຫຼາຍຂຶ້ນໃນພື້ນທີ່ທີ່ຖ່າຍພາບ. ການຄົ້ນພົບສອງຢ່າງນີ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການຕັ້ງຄ່າແມ່ເຫຼັກຄູ່ບໍ່ໄດ້ປັບປຸງການຄວບຄຸມການເປົ້າໝາຍ MP ໃນທ້ອງຖິ່ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ, ແລະ ແຮງແມ່ເຫຼັກທີ່ແຮງຂຶ້ນແມ່ນຍາກທີ່ຈະຕັ້ງຄ່າ, ເຮັດໃຫ້ວິທີການນີ້ໃຊ້ບໍ່ໄດ້ຜົນ. ເຊັ່ນດຽວກັນ, ການຈັດທິດທາງແມ່ເຫຼັກທາງເທິງ ແລະ ຜ່ານທໍ່ລົມຫາຍໃຈ (ຮູບທີ 3d) ຍັງບໍ່ໄດ້ເພີ່ມຈຳນວນອະນຸພາກທີ່ເກັບໄວ້ໃນພື້ນທີ່ທີ່ຖ່າຍພາບ. ການຕັ້ງຄ່າທາງເລືອກເຫຼົ່ານີ້ບາງຢ່າງອາດຈະບໍ່ປະສົບຜົນສຳເລັດເພາະວ່າມັນເຮັດໃຫ້ຄວາມແຮງຂອງສະໜາມແມ່ເຫຼັກຕ່ຳລົງພາຍໃນພື້ນທີ່ທີ່ວາງພາບ. ດັ່ງນັ້ນ, ການຕັ້ງຄ່າແມ່ເຫຼັກມຸມ 30 ອົງສາດຽວ (ຮູບທີ 3a) ຖືກຖືວ່າເປັນວິທີທີ່ງ່າຍທີ່ສຸດ ແລະ ມີປະສິດທິພາບທີ່ສຸດສຳລັບການທົດສອບໃນຮ່າງກາຍ.
ການສຶກສາ LV-MP ໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າເມື່ອເວັກເຕີ LV ຖືກລວມເຂົ້າກັບ CombiMag ແລະ ສົ່ງຫຼັງຈາກການລົບກວນທາງກາຍະພາບໃນເວລາທີ່ມີສະໜາມແມ່ເຫຼັກ, ລະດັບການສົ່ງສັນຍານໄດ້ເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນທໍ່ລົມຫາຍໃຈເມື່ອທຽບກັບກຸ່ມຄວບຄຸມ. ອີງຕາມການສຶກສາການຖ່າຍພາບ synchrotron ແລະຜົນໄດ້ຮັບ LacZ, ສະໜາມແມ່ເຫຼັກສາມາດຮັກສາ LV ພາຍໃນທໍ່ລົມຫາຍໃຈ ແລະ ຫຼຸດຜ່ອນຈຳນວນອະນຸພາກເວັກເຕີທີ່ເຈາະເຂົ້າໄປໃນປອດໄດ້ທັນທີ. ການປັບປຸງການກຳນົດເປົ້າໝາຍດັ່ງກ່າວອາດຈະນຳໄປສູ່ປະສິດທິພາບທີ່ສູງຂຶ້ນໃນຂະນະທີ່ຫຼຸດຜ່ອນ titers ທີ່ສົ່ງ, ການສົ່ງສັນຍານນອກເປົ້າໝາຍ, ຜົນຂ້າງຄຽງຂອງການອັກເສບ ແລະ ພູມຕ້ານທານ, ແລະ ຄ່າໃຊ້ຈ່າຍໃນການນຳສົ່ງພັນທຸກຳ. ສິ່ງສຳຄັນ, ອີງຕາມຜູ້ຜະລິດ, CombiMag ສາມາດໃຊ້ຮ່ວມກັບວິທີການໂອນສັນຍານອື່ນໆ, ລວມທັງເວັກເຕີໄວຣັດອື່ນໆ (ເຊັ່ນ AAV) ແລະ ກົດນິວຄລີອິກ.