Nature.com သို့လာရောက်လည်ပတ်သည့်အတွက် ကျေးဇူးတင်ပါသည်။ သင်အသုံးပြုနေသောဘရောက်ဆာဗားရှင်းသည် CSS အတွက် အကန့်အသတ်ဖြင့် ပံ့ပိုးမှုရှိပါသည်။ အကောင်းဆုံးအတွေ့အကြုံအတွက်၊ အပ်ဒိတ်လုပ်ထားသောဘရောက်ဆာတစ်ခု (သို့မဟုတ် Internet Explorer တွင် လိုက်ဖက်ညီသောမုဒ်ကိုပိတ်ရန်) အကြံပြုပါသည်။ ထိုအချိန်တွင် ဆက်လက်ပံ့ပိုးကူညီမှုသေချာစေရန်၊ ပုံစံများနှင့် JavaScript မပါဘဲ ဆိုက်ကိုပြသပါမည်။
cystic fibrosis အဆုတ်ရောဂါကို ကုသရန်အတွက် gene vector များသည် conducting airways များကို ပစ်မှတ်ထားသင့်ပြီး peripheral lung transduction သည် ကုထုံးဆိုင်ရာ အကျိုးကျေးဇူးများကို မပေးဆောင်နိုင်သောကြောင့်ဖြစ်သည်။ Viral transduction efficiency သည် vector residence time နှင့် တိုက်ရိုက်သက်ဆိုင်ပါသည်။ သို့သော်လည်း၊ gene carriers ကဲ့သို့သော ပေးပို့အရည်များသည် လှုံ့ဆော်မှုပြုစဉ်အတွင်း alveoli အတွင်းသို့ သဘာဝအတိုင်း ပျံ့နှံ့သွားပြီး ကုထုံးတွင် အမှုန်အမွှားများကို ရှည်လျားစွာရှင်းလင်းစေပါသည်။ လေလမ်းကြောင်းအတွင်းရှိ gene carriers များ၏ နေထိုင်ချိန်သည် အရေးကြီးသော်လည်း အောင်မြင်ရန် ခက်ခဲပါသည်။ gene carrier-conjugated magnetic particles များသည် airways ၏ မျက်နှာပြင်ဆီသို့ ညွှန်ကြားနိုင်သော regional targeting ကို တိုးတက်စေနိုင်သည်။ in vivo visualization ၏ စိန်ခေါ်မှုများကြောင့်၊ ထိုကဲ့သို့သော သံလိုက်အမှုန်အမွှားများ၏ အပြုအမူသည် airway မျက်နှာပြင်ပေါ်ရှိ သံလိုက်အမှုန်အမွှားများကို အသုံးချနိုင်သော သံလိုက်စက်ကွင်းတစ်ခုရှိနေခြင်းအတွက် လေ့လာမှုတွင် နားလည်သဘောပေါက်ရန် ညံ့ဖျင်းပါသည်။ ထုံဆေးထိုးထားသော ကြွက်များ၏ လေပြွန်အတွင်း သံလိုက်အမှုန်များ ဆက်တိုက်ရွေ့လျားမှုကို vivo ရှိ လူတစ်ဦးချင်းစီနှင့် အစုလိုက် အမှုန်အမွှားများ၏ လှုပ်ရှားမှုပုံစံများကို ဆန်းစစ်ရန်။ ထို့နောက် ကျွန်ုပ်တို့သည် သံလိုက်စက်ကွင်းတစ်ခုထံတွင် lentiviral သံလိုက်အမှုန်များ ပေးပို့ခြင်းသည် သံလိုက်စက်ကွင်းအတွင်း transduction စွမ်းဆောင်ရည်ကို တိုးမြင့်စေသည်ဆိုသည်ကို ကျွန်ုပ်တို့လည်း အကဲဖြတ်ခဲ့ပါသည်။ သံလိုက်စက်ကွင်းအတွင်းရှိ ငုတ်လျှိုးနေသော ရွေ့လျားနေသော သံလိုက်စက်ကွင်းအတွင်းရှိ အမှုန်များကို ဗီရိုနှင့် vivo အတွင်းရှိ အမှုန်အမွှားများကို သံလိုက်ဖြင့် သက်ရှိလေလမ်းကြောင်းတစ်လျှောက် အလွယ်တကူ ဆွဲငင်လို့မရနိုင်သော်လည်း သယ်ယူပို့ဆောင်စဉ်တွင် သံလိုက်စက်ကွင်းအား အပြင်းထန်ဆုံးဖြစ်သော မြင်ကွင်းတွင် စုစည်းထားသည်။ အမှုန်အမွှားများကို သံလိုက်ဓာတ်နှင့် သံလိုက်စက်ကွင်းများကြားတွင် သံလိုက်အမှုန်အမွှားများ ပေးပို့သောအခါတွင် အသွင်ကူးပြောင်းမှုစွမ်းဆောင်ရည်ကိုလည်း ခြောက်ဆတိုးမြင့်လာသည်။ gene vector ပစ်မှတ်ကို မြှင့်တင်ရန်နှင့် vivo တွင် လေလမ်းကြောင်းလုပ်ဆောင်ရာတွင် transduction အဆင့်ကို တိုးမြှင့်ရန် အဖိုးတန်ချဉ်းကပ်မှုများ ဖြစ်နိုင်သည်။
Cystic fibrosis (CF) သည် CF transmembrane conductance regulator (CFTR) ဟုခေါ်သော မျိုးရိုးဗီဇတစ်ခုတွင် ကွဲလွဲမှုကြောင့် ဖြစ်ပေါ်လာခြင်းဖြစ်သည်။ CFTR ပရိုတင်းသည် ခန္ဓာကိုယ်အနှံ့ရှိ အရေပြားဆဲလ်များစွာတွင် ရှိနေသော အိုင်းယွန်းလမ်းကြောင်း၊ CF ရောဂါဖြစ်ပွားမှု၏ အဓိကနေရာတစ်ခုဖြစ်သည်။ CFTR ချို့ယွင်းချက်များသည် ပုံမှန်မဟုတ်သော ရေလမ်းကြောင်း၊ လေလမ်းကြောင်း၏ မျက်နှာပြင်ကို လျှော့ချပေးပြီး ရေဓာတ်ခန်းခြောက်စေသည် အလွှာ။၎င်းသည် လေလမ်းကြောင်းမှ ရှူသွင်းထားသော အမှုန်အမွှားများနှင့် ရောဂါပိုးမွှားများကို ရှင်းလင်းရန် mucociliary transport (MCT) စနစ်၏ စွမ်းရည်ကို ထိခိုက်စေပါသည်။ ကျွန်ုပ်တို့၏ ရည်မှန်းချက်မှာ CFTR ဗီဇ၏ မှန်ကန်သောမိတ္တူကို ပေးပို့ရန်အတွက် lentiviral (LV) ဗီဇကုထုံးကို တီထွင်ရန်နှင့် ASL၊ MCT နှင့် အဆုတ်ကျန်းမာရေးကို တိုးတက်ကောင်းမွန်လာစေရန်နှင့် အစွမ်းထက်နည်းပညာအသစ်များ ဆက်လက်တီထွင်နိုင်ရန် 1.
LV vectors များသည် CF airway gene ကုထုံးအတွက် ထိပ်တန်း ကိုယ်စားလှယ်လောင်းများထဲမှ တစ်ခုဖြစ်ပြီး အဓိကအားဖြင့် ၎င်းတို့သည် ကုထုံးဗီဇကို airway basal cells (airway stem cells) အတွင်းသို့ အပြီးအပိုင် ပေါင်းစပ်ထားနိုင်သောကြောင့် ဖြစ်သည်။၎င်းတို့သည် ပုံမှန်ရေဓါတ်နှင့် ချွဲရှင်းလင်းမှုကို ပြန်လည်ရရှိစေနိုင်သောကြောင့် လုပ်ဆောင်ချက်ရှိသော ဗီဇပြုပြင်ထားသော CF-ဆက်စပ်သော CF-ဆက်စပ်သော လေလမ်းကြောင်းဆိုင်ရာ မျက်နှာပြင်ဆဲလ်များကို ကွဲပြားသွားစေသောကြောင့် ၎င်းသည် အရေးကြီးပါသည်။ ဤသည်မှာ CF အဆုတ်ရောဂါ စတင်သည့်နေရာဖြစ်သောကြောင့် လေလမ်းကြောင်းအတွင်း ဘက်တီးရီးယားကို ပိုမိုနက်ရှိုင်းစွာ ပေးပို့ခြင်းသည် အဆုတ်ထဲသို့ alveolar transduction ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်သော်လည်း ၎င်းသည် CF တွင် ကုထုံးအတွက် အကျိုးကျေးဇူးမရှိပါ။ သို့ရာတွင်၊ မျိုးဗီဇသယ်ဆောင်သူများကဲ့သို့သော အရည်များသည် သဘာဝအတိုင်း လှုံ့ဆော်ခံရပြီး alveoli သို့ ရွေ့ပြောင်းပြီး 3,4 နှင့် တိုက်ရိုက်ဆက်စပ်သော ကုသမှုအမှုန်အမွှားများကို CTL သို့ လျင်မြန်စွာရှင်းလင်းပေးသည်။ ပုံမှန်ဒေသတွင်းလေ၀င်ပေါက်အပြင် ညှိနှိုင်းထားသော အမှုန်အမွှားများကို ဖမ်းယူခြင်းနှင့် MCT ဖြင့် အလွယ်တကူ လျှော့ချနိုင်သည့် ဆဲလ်လူလာစုပ်ယူမှုအား ပစ်မှတ်ဆဲလ်များဘေးတွင် တည်ရှိနေပါသည်။ CF အတွက်၊ လေလမ်းကြောင်းအတွင်း LV ၏နေထိုင်ချိန်ကို ရှည်ကြာနိုင်မှုသည် ဤဒေသတွင် ကူးပြောင်းမှုအဆင့်ကို မြင့်မားစွာရရှိရန် အရေးကြီးသော်လည်း ယခုအချိန်အထိ စိန်ခေါ်မှုများရှိနေသည်။
ဤအတားအဆီးကို ကျော်လွှားနိုင်ရန်၊ LV သံလိုက်အမှုန်များ (MPs) သည် ဖြည့်စွက်နည်းလမ်းနှစ်မျိုးဖြင့် ကူညီပေးနိုင်သည်ဟု ကျွန်ုပ်တို့အကြံပြုအပ်ပါသည်။ ပထမအချက်အနေဖြင့် ၎င်းတို့ကို ပစ်မှတ်ထားတိုးတက်စေရန်နှင့် မျိုးရိုးဗီဇသယ်ဆောင်သူအမှုန်များကို လိုချင်သောလေလမ်းကြောင်းဒေသတွင်နေထိုင်ရန် ကူညီပေးရန် ၎င်းတို့ကို သံလိုက်ဖြင့် လမ်းညွှန်နိုင်သည်၊ နှင့် ASL) ဆဲလ်အလွှာသို့ ရွှေ့ရန် 6.MPs များကို ပဋိပစ္စည်း၊ ဓာတုကုထုံးဆေးဝါးများ သို့မဟုတ် ဆဲလ်အမြှေးပါးများနှင့် ဆက်စပ်သော သို့မဟုတ် သက်ဆိုင်ရာဆဲလ်မျက်နှာပြင် receptors များနှင့် ချိတ်ဆက်ကာ အကျိတ်နေရာများတွင် စုပုံလာသောအခါတွင် ၎င်းတို့ကို ပစ်မှတ်ထားသော မူးယစ်ဆေးပို့ဆောင်မှုယာဉ်များအဖြစ် ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့်အသုံးပြုခဲ့သည်။ ကင်ဆာကုသခြင်းအတွက် သံလိုက်စက်ကွင်းများ 7. အခြား "အပူအအေးဓာတ်" နည်းစနစ်များသည် MP များကို တုန်ခါနေသော သံလိုက်စက်ကွင်းများနှင့် ထိတွေ့မိသောအခါ အပူပေးနိုင်ရန် ရည်ရွယ်ပြီး အကျိတ်ဆဲလ်များကို ဖျက်ဆီးပစ်ပါသည်။ သံလိုက်ဓာတ်ကူးပြောင်းခြင်း၏နိယာမကို DNA မှဆဲလ်များဆီသို့ ကူးပြောင်းခြင်းအား တိုးမြှင့်ရန်အတွက် သံလိုက်စက်ကွင်းကို အသုံးပြုပြီး DNA ၏ ဆဲလ်များဆီသို့ ကူးပြောင်းခြင်းကို အားကောင်းစေရန်အတွက် အသုံးပြုလေ့ရှိသည်မှာ vitro-viral နှင့် viral မဟုတ်သော ဆဲလ်အကွာအဝေးအတွက် ခက်ခဲသော ဗီဇကိုအသုံးပြု၍ vitro တွင် အသုံးများသည်။ လိုင်းများ။LV magnetotransfection ၏ထိရောက်မှုကိုတည်ဆောက်ထားပြီး၊ LV-MPs များကိုလူ့ bronchial epithelial cell line သို့ in vitro ပေးပို့ခြင်းဖြင့် static magnetic field တွင် transduction efficiency ကို LV vector တစ်ခုတည်းနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက 186-ဆ တိုးမြင့်လာပါသည်။LV-MP ကို ​​in vitro CF model တွင်အသုံးပြုထားပြီး၊ magnetic transfection 0-LVi ၏အဆ-LV ၏အဆပွားသောလေထုအတွင်း-LVquid အသွင်ကူးပြောင်းမှု 0 တိုးလာပါသည်။ CF sputum10.သို့သော်၊ vivo magnetotransfection ၏ကိုယ်တွင်းအင်္ဂါများတွင် အာရုံစိုက်မှုအနည်းငယ်သာရရှိခဲ့ပြီး တိရိစ္ဆာန်လေ့လာမှုအနည်းငယ်တွင်သာ အကဲဖြတ်ခဲ့ပြီး အထူးသဖြင့် အဆုတ် 16,17။ မည်သို့ပင်ဆိုစေကာမူ၊ CF အဆုတ်ကုထုံးတွင် သံလိုက်ဓာတ်လွှဲပြောင်းခြင်းအတွက် အခွင့်အလမ်းများမှာ ရှင်းပါသည်။ ထိရောက်သောသံလိုက်နာနိုအမှုန်အဆုတ်အဆုတ်ပေးပို့ခြင်းဆိုင်ရာ အထောက်အထားအထောက်အထားလေ့လာမှုသည် CF လူနာများတွင် လက်တွေ့ရလဒ်များ တိုးတက်ကောင်းမွန်လာစေရန် အနာဂတ် CFTR ရှူသွင်းခြင်းနည်းဗျူဟာများအတွက် လမ်းခင်းပေးလိမ့်မည်” 6။
အသုံးချသံလိုက်စက်ကွင်းတစ်ခုရှိနေသောလေလမ်းကြောင်းမျက်နှာပြင်ရှိသေးငယ်သောသံလိုက်အမှုန်အမွှားများ၏အပြုအမူသည်မြင်ယောင်ရန်နှင့်လေ့လာရန်ခက်ခဲသောကြောင့်နားလည်ရန်ခက်ခဲပါသည်။ အခြားလေ့လာမှုများတွင်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် မျက်နှာပြင်အတိမ်အနက်ကိုမပြန့်ပွားအောင်မြင်သာစေရန်နှင့် 190 ဓာတ်ငွေ့အတိမ်အနက်ကို တိုက်ရိုက်တိုင်းတာရန်အတွက် synchrotron-propagation-based phase-contrast X-ray imaging method (PB-PCXI) method ကိုတီထွင်ခဲ့သည်။ ရေဓာတ်ဖြည့်ပေးပြီး ကုသမှုထိရောက်မှု၏ အစောပိုင်းညွှန်ပြချက်အဖြစ် အသုံးပြုပါသည်။ ထို့အပြင် ကျွန်ုပ်တို့၏ MCT အကဲဖြတ်နည်းသည် PB-PCXI21 ကိုအသုံးပြု၍ မြင်နေရသည့်အတိုင်း MCT အမှတ်အသားများကို မြင်နိုင်သကဲ့သို့ အလူမီနာ သို့မဟုတ် မြင့်မားသောအလင်းပြန်ကိန်းမှန်ဖြင့်ဖွဲ့စည်းထားသော 10-35 µm အချင်းအမှုန်များကို အသုံးပြုပါသည်။
၎င်း၏မြင့်မားသော spatial နှင့် temporal resolution ကြောင့်၊ ကျွန်ုပ်တို့၏ PB-PCXI-based ASL နှင့် MCT ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုနည်းပညာများသည် vivo ရှိ တစ်ခုတည်းနှင့် အစုလိုက်အမှုန်အမွှားအပြုအမူများ၏ ဒိုင်နနမစ်နှင့် ပုံစံများကို စစ်ဆေးရန်အတွက် MP ဗီဇပေးပို့ခြင်းနည်းပညာများကို နားလည်ပြီး အကောင်းဆုံးဖြစ်အောင် လုပ်ဆောင်နိုင်စေရန် ကူညီပေးပါသည်။ ဤနေရာတွင် ကျွန်ုပ်တို့အသုံးပြုသောချဉ်းကပ်မှုသည် flux ၏ SPring-8 beamline 20 တွင် ဖော်ပြထားသော vector လှုပ်ရှားမှုကို အသုံးပြု၍ ကျွန်ုပ်တို့၏လေ့လာမှုများမှ ဆင်းသက်လာပါသည်။ ကျွန်ုပ်တို့၏ gene carrier dose တိရိစ္ဆာန်လေ့လာမှုများ 3,4 တွင်တွေ့ရှိရသော ကျွန်ုပ်တို့၏ပုံစံမဟုတ်သော မျိုးရိုးဗီဇဖော်ပြမှုပုံစံများကို ရှင်းပြရန် ကြွက်များ၏နှာခေါင်းနှင့် အဆုတ်လေလမ်းကြောင်းများသို့ ဆေးထိုးပေးပို့ခြင်း။
ဤလေ့လာမှု၏ ရည်ရွယ်ချက်မှာ ကြွက်များ၏ လေပြွန်အတွင်း MPs များ၏ vivo လှုပ်ရှားမှုများကို မြင်သာစေရန် synchrotron PB-PCXI ကို အသုံးပြုရန် ရည်ရွယ်ထားပါသည်။ အဆိုပါ PB-PCXI ပုံရိပ်ဖော်လေ့လာမှုများသည် MP များ၏ အကွာအဝေး၊ သံလိုက်စက်ကွင်းအား အားကောင်းမှုနှင့် တည်နေရာများကို စမ်းသပ်ရန်အတွက် MP ၏ ရွေ့လျားမှုအပေါ် အထောက်အကူဖြစ်စေရန် MP ၏ ရွေ့လျားမှုအပေါ် သက်ရောက်မှုကို သိရှိနိုင်စေရန် ရည်ရွယ်ထားသည်။ ဧရိယာ။ဤလေ့လာမှုများသည် အစစ်ခံပြီးနောက် လေပြွန်အတွင်း သိုလှောင်ထားသော အမှုန်အရေအတွက်ကို တိုးစေသည့် သံလိုက်ဖွဲ့စည်းမှုပုံစံများကို ခွဲခြားသတ်မှတ်နိုင်စေပါသည်။ ဒုတိယစီးရီးလေ့လာမှုများတွင်၊ MP ၏ ရလဒ်ဖြစ်နိုင်သည်ဟု ယူဆချက်အပေါ် အခြေခံ၍ လေလမ်းကြောင်း၏ LV-MPs များ၏ လေလမ်းကြောင်းဆီသို့ vivo ပေးပို့ခြင်း၏ ရလဒ်အဖြစ် ယူဆချက်အပေါ် အခြေခံ၍ ဤအကောင်းဆုံးပုံစံဖွဲ့စည်းမှုကို သရုပ်ပြရန် ကျွန်ုပ်တို့အား ရှာဖွေခဲ့သည်။ LV transduction စွမ်းဆောင်ရည်ကို မြှင့်တင်ပေးသည်။
တိရစ္ဆာန်လေ့လာမှုအားလုံးကို Adelaide (M-2019-060 နှင့် M-2020-022) နှင့် SPring-8 Synchrotron တိရစ္ဆာန်ကျင့်ဝတ်ကော်မတီတို့မှ အတည်ပြုထားသော ပရိုတိုကောများအတိုင်း လုပ်ဆောင်ခဲ့သည်။ စမ်းသပ်မှုများကို ARRIVE လမ်းညွှန်ချက်များအရ လုပ်ဆောင်ခဲ့သည်။
X-ray ပုံရိပ်အားလုံးကို ဂျပန်နိုင်ငံရှိ SPring-8 synchrotron တွင် BL20XU beamline တွင် ပြုလုပ်ခဲ့ပြီး၊ ယခင်ဖော်ပြထားသော 21,22 နှင့်ဆင်တူသော စနစ်ထည့်သွင်းမှုကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ အတိုချုပ်အားဖြင့်၊ စမ်းသပ်သေတ္တာကို synchrotron သိုလှောင်မှုကွင်းမှ 245 မီတာအကွာတွင် တည်ရှိသည်။ နမူနာမှ 0.6 maging အကွာအဝေးကို လေ့လာမှုများအတွက် အသုံးပြုပါသည်။ အဆင့်ဆန့်ကျင်ဘက်အကျိုးသက်ရောက်မှုများကို ထုတ်ပေးပါသည်။ 25 keV ၏ monochromatic အလင်းတန်းစွမ်းအင်ကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ ရုပ်ပုံများကို ကြည်လင်ပြတ်သားသော X-ray converter (SPring-8 BM3) ကို အသုံးပြု၍ sCMOS detector အဖြစ်တွဲဖက်ထားသည်။ အဆိုပါ converter သည် 10 µm အထူ Scintillator (Gd3O1CMOS directedGa3) ကို အသုံးပြု၍ X-rays များကို မြင်နိုင်သောအလင်းရောင်အဖြစ်သို့ ပြောင်းပေးပါသည်။ 10 အဏုစကုပ် ရည်ရွယ်ချက် (NA 0.3)။ sCMOS ထောက်လှမ်းကိရိယာသည် Orca-Flash4.0 (Hamamatsu Photonics၊ Japan) ခင်းကျင်းထားသော အရွယ်အစား 2048 × 2048 ပစ်ဇယ်နှင့် ခန့်မှန်းခြေ အကြမ်းအားဖြင့် ပစ်ဇယ်အရွယ်အစား 6.5 × 6.5 µm ဖြစ်သည်။ ဤတပ်ဆင်မှုသည် ထိရောက်သော မြင်ကွင်းတစ်ခု × 1 မီလီမီတာ နှင့် 1 µm ၏ ထိရောက်သော မြင်ကွင်းအိုင်ဆိုရိုပစ်ဇယ် အကွက်ကို ထုတ်ပေးပါသည်။ 1.1 မီလီမီတာ။အသက်ရှူခြင်းမှ ဖြစ်ပေါ်လာသော ရွေ့လျားမှုဆိုင်ရာ ပစ္စည်းများကို လျှော့ချနေစဉ် လေလမ်းကြောင်းအတွင်းနှင့် အပြင်ဘက် သံလိုက်အမှုန်များ၏ signal-to-noise အချိုးကို တိုးမြှင့်ရန် 100 ms ၏ အလင်းဝင်နှုန်းကို ရွေးချယ်ထားသည်။ vivo လေ့လာမှုများအတွက်၊ အလင်းဝင်ပေါက်များကြားရှိ ဓာတ်မှန်များကို ပိတ်ဆို့ခြင်းဖြင့် ဓာတ်ရောင်ခြည်ပမာဏကို ကန့်သတ်ရန် အမြန် X-ray ရှပ်တာတစ်ခုကို X-ray လမ်းကြောင်းတွင် ထားရှိထားပါသည်။
BL20XU ပုံရိပ်ဖော်ခန်းသည် Biosafety Level 2 အသိအမှတ်ပြုလက်မှတ်မဟုတ်သောကြောင့် SPring-8 PB-PCXI ပုံရိပ်ဖော်လေ့လာမှုများတွင် LV ဝန်ဆောင်မှုကို အသုံးမပြုခဲ့ပါ။ ယင်းအစား၊ အရွယ်အစား၊ ပစ္စည်းများ၊ သံပြင်းအားများနှင့် MP အတွင်းရှိ ဖန်သားပြင်အတွင်း ရွေ့လျားမှုနှင့် သံလိုက်စက်ကွင်းများကို နားလည်နိုင်စေရန်အတွက် အရွယ်အစားအမျိုးမျိုး၊ သတ္တုဓာတ်ပါဝင်မှုများနှင့် အသုံးချပရိုဂရမ်များကို မည်ကဲ့သို့ အကျိုးသက်ရောက်စေသည်—ထို့နောက် ဖန်သားပြင်အတွင်း သံလိုက်စက်ကွင်းများကို မည်ကဲ့သို့ အကျိုးသက်ရောက်စေသနည်း—ပထမဦးစွာ ဖန်သားပြင်၏ သံလိုက်စက်ကွင်းများကို နားလည်နိုင်စေရန်အတွက်၊ အသက်ရှင်သောလေလမ်းကြောင်း၌။ မျက်နှာပြင်ပေါ်တွင်.MPs များသည် 0.25 မှ 18 μm အရွယ်အစားရှိပြီး ပစ္စည်းအမျိုးမျိုးဖြင့် ပြုလုပ်ထားပါသည် (ဇယား 1 ကိုကြည့်ပါ)၊ သို့သော် MP အတွင်းရှိ သံလိုက်အမှုန်များ၏ အရွယ်အစားအပါအဝင် နမူနာတစ်ခုစီ၏ဖွဲ့စည်းပုံကို မသိရပါ။ ကျွန်ုပ်တို့၏ကျယ်ပြန့်သော MCT လေ့လာမှုများအပေါ် အခြေခံ၍ 19၊ 20၊ 21၊ 23၊ 24 သည် MP အတွင်းရှိ လေထုပမာဏကို သေးငယ်သည်ဟု မျှော်လင့်နိုင်သည် ဥပမာအားဖြင့် MP ရွေ့လျားမှုကို ပိုမိုကောင်းမွန်စွာမြင်နိုင်စေရန် တစ်ဆက်တည်းဘောင်များကို နုတ်ခြင်းဖြင့် မျက်နှာပြင်။ 0.25 μm အရွယ် MP တစ်ခုသည် ရုပ်ထွက်စက်၏ ကြည်လင်ပြတ်သားမှုထက် ပိုသေးငယ်သော်လည်း PB-PCXI သည် ၎င်းတို့၏ အသံအတိုးအကျယ် ဆန့်ကျင်ဘက်နှင့် ၎င်းတို့ကို စုဆောင်းပြီးနောက် စုဆောင်းထားသည့် မျက်နှာပြင်အရည်များ၏ ရွေ့လျားမှုကို သိရှိနိုင်မည်ဖြစ်သည်။
ဇယား 1 ရှိ MP တစ်ခုစီအတွက် နမူနာများကို 20 μl ဖန်သားမျှင်မျှင်များ (Drummond Microcaps, PA, USA) အတွင်း အချင်း 0.63 mm. Corpuscular particles များကို ရေတွင်ရနိုင်သော်လည်း CombiMag အမှုန်များကို ထုတ်လုပ်သူ၏ မူပိုင်အရည်များတွင် ရရှိနိုင်ပါသည်။ ပြွန်တစ်ခုစီတွင် တစ်ဝက်စီကို အရည် 1 μl (approximate) အပြည့်ထည့်ထားသည်။ ပုံ 1)။ဖန်သားမျှင်သွေးကြောများကို နမူနာအဆင့်တွင် အလျားလိုက်ချထားပြီး အရည်၏အနားများကို အသီးသီးနေရာချထားသည်။A 19 mm လုံးပတ် (28 mm) နီကယ်ခွံ ရှားပါးမြေကြီးနီဒီဒီယမ်သံဘိုရွန် (NdFeB) သံလိုက် (N35၊ cat. no. LM1652, Jaycaret of Electronic သံလိုက်တစ်ခု)။ Tesla သည် ပုံရိပ်ဖော်နေစဉ်အတွင်း ၎င်း၏တည်နေရာကိုအဝေးမှပြောင်းရန် သီးခြားဘာသာပြန်အဆင့်တစ်ခုဖြင့် တွဲထားသည်။ X-ray ပုံရိပ်ရယူမှုတွင် သံလိုက်သည် နမူနာအထက် 30 မီလီမီတာခန့်အကွာတွင် နေရာချထားသည့်အခါ စတင်ကာ ပုံများကို တစ်စက္ကန့်လျှင် 4 ဖရိမ်နှုန်းဖြင့် ရယူထားသည်။ ပုံရိပ်ဖော်နေစဉ်အတွင်း သံလိုက်အား ဖန်သားမျှင်ပိုက်ကို နီးကပ်စွာယူဆောင်လာပြီး (1 mm အကွာအဝေး၏ အစွမ်းသတ္တိကို ပြွန်အနေအထားအတိုင်း) ပြန်ဆိုပြီးနောက် အကွက်များ
နမူနာ xy ဘာသာပြန်အဆင့်ရှိ ဖန်သားမျှင်သွေးကြောများအတွင်း MP နမူနာများပါရှိသော ဖန်သားမျှင်ဓါတ်ပုံစနစ်ထည့်သွင်းခြင်း။ X-ray အလင်းတန်း၏လမ်းကြောင်းကို အနီရောင်မျဉ်းဖြင့် အမှတ်အသားပြုထားသည်။
MPs များ၏ in vitro မြင်နိုင်စွမ်းကို တည်ထောင်ပြီးသည်နှင့် ၎င်းတို့ထဲမှ အပိုင်းခွဲတစ်ခုကို တောရိုင်းအမျိုးစား အမျိုးသမီး albino Wistar ကြွက်များ (~12 ပတ်၊ ~200 ဂရမ်) ဖြင့် vivo တွင် စမ်းသပ်ခဲ့ပါသည်။ (Vetorphale®၊ Meiji Seika) ကြွက်များကို Pharma၊ Japan) ရောနှောပြီး ဝမ်းတွင်းသွင်းဆေးဖြင့် မေ့ဆေးပေးခဲ့သည်။ မေ့ဆေးပြီးနောက်၊ ၎င်းတို့သည် လေပြွန်တစ်ဝိုက်ရှိ အမွေးများကို ဖယ်ရှားကာ endotracheal tube (ET; 16 Ga iv cannula၊ Terumo Pine suction on စိတ်ကြိုက်ပြုလုပ်သော ပန်းကန်ပြားနှင့် Terumo BCT) စိတ်ကြိုက်ပြုလုပ်သော ပန်းကန်ပြားနှင့် Terumo BCT) ခန္ဓာကိုယ်အပူချိန်ထိန်းထားရန်အပူအိတ်တစ်ခုပါရှိသော 22 .ထို့နောက် ပုံ 2a တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း အစာအိမ်အလျားလိုက်ကို X-ray ပုံတွင်ပြထားသည့်အတိုင်း ပုံ 2a တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း နမူနာဘာသာပြန်သည့်ပုံးရှိ နမူနာဘာသာပြန်သည့်အဆင့်တွင် ဓါတ်ပုံသေတ္တာကို ထောင့်အနည်းငယ်ဖြင့် တွဲချိတ်ထားသည်။
(က) SPring-8 ပုံရိပ်ဖော်ဘောက်စ်ရှိ vivo ပုံရိပ်ဖော်ခြင်းစနစ်တွင်၊ X-ray အလင်းတန်း၏လမ်းကြောင်းကို အနီရောင်မျဉ်းဖြင့် အမှတ်အသားပြုထားသည်။(ခ၊ဂ) လေပြွန်ပေါ်ရှိ Magnet localization ကို ပုံသဏ္ဍာန်ဖြင့် တပ်ဆင်ထားသော IP ကင်မရာနှစ်လုံးကို အသုံးပြု၍ အဝေးမှ လုပ်ဆောင်ပါသည်။ စခရင်ရုပ်ပုံ၏ ဘယ်ဘက်ခြမ်းတွင်၊ ပေးပို့ခြင်းနေရာကို ET တွင် ကိုင်ဆောင်ထားသော ဝိုင်ယာကြိုးဝိုင်းကို tube အတွင်းမြင်နိုင်သည်၊
100 μl ဖန်ပြွန်ကို အသုံးပြု၍ အဝေးထိန်းဆေးထိုးပန့်စနစ် (UMP2၊ World Precision Instruments, Sarasota, FL) သည် PE10 tubing (OD 0.61 mm, ID 0.28 mm) ဖြင့် 30 Ga needle မှတဆင့် ပြွန်ကို အမှတ်အသားပြုပါ။ ထည့်သွင်းသည့်အခါ U trache အနေအထားမှန်ကြောင်း သေချာစေရန် ပြွန်ကိုမှတ်သားပါ။ micropump၊ ပြွန်၏အစွန်အဖျားကို MP နမူနာတွင် နှစ်မြှုပ်ထားစဉ် ဆေးထိုးပလပ်ကို ထုတ်ယူလိုက်ပါသည်။ ထို့နောက် တင်ဆောင်ထားသော ပေးပို့မှုပြွန်ကို endotracheal ပြွန်ထဲသို့ ထည့်သွင်းပြီး ထိပ်ဖျားကို ကျွန်ုပ်တို့ မျှော်လင့်ထားသည့် သံလိုက်စက်ကွင်း၏ အပြင်းထန်ဆုံးအပိုင်းအတွင်း ထည့်သွင်းထားသည်။ ရုပ်ပုံရယူမှုကို အပူချိန်၊ ကျွန်ုပ်တို့၏အသက်ရှူကိရိယာနှင့် ချိတ်ဆက်ထားသည့် အချိန်အချက်ပြကိရိယာအားလုံးကို အသုံးပြု၍ ထိန်းချုပ်ထားသည် (Ardu ရှပ်တာအဖွင့်/အပိတ်နှင့် ပုံရိပ်ရယူခြင်း) ကို Powerlab နှင့် LabChart (AD Instruments၊ Sydney၊ Australia) သုံးပြီး မှတ်တမ်းတင်ခဲ့သည် 22. အရံအတားကို လက်လှမ်းမမီသောအခါတွင် IP ကင်မရာနှစ်လုံး (Panasonic BB-SC382) သည် တစ်ခုနှင့်တစ်ခု ခန့်မှန်းခြေ 90° တွင် နေရာချထားပြီး Figg ၏ ဆက်စပ်မှုအတွင်း trachea ၏ အနေအထားကို စောင့်ကြည့်ရန် အသုံးပြုခဲ့သည်။ 2b၊c)) ရွေ့လျားမှုဆိုင်ရာ ပစ္စည်းများကို လျှော့ချရန်၊ အဆုံး-ဒီရေစီးဆင်းမှု ကုန်းပြင်မြင့်အတွင်း အသက်ရှုတိုင်း ရုပ်ပုံတစ်ပုံ ရရှိခဲ့သည်။
သံလိုက်တစ်ခုအား ပုံရိပ်ဖော်အိမ်အပြင်ဘက်တွင် အဝေးမှတည်ရှိနိုင်သည့် ဒုတိယအဆင့်တစ်ခုတွင် ချိတ်ထားသည်။ ထိုအထဲတွင် သံလိုက်အနေအထားများနှင့် ပုံစံအမျိုးမျိုးကို စမ်းသပ်ခဲ့သည်- လေပြွန်အထက် 30° ခန့်ထောင့်တွင် တပ်ဆင်ထားသည် (ပုံ 2a နှင့် 3a တွင်ပြထားသည့်ပုံစံများ)၊ တိရိစ္ဆာန်အထက် သံလိုက်တစ်ခုနှင့် အခြားတစ်ခုအား ဆွဲဆောင်ရန် အစွန်းအထင်းများ (ပုံ 3b ); တိရိစ္ဆာန်အထက် သံလိုက်တစ်ခုနှင့် အောက်တစ်ဖက်ကို တွန်းလှန်ရန် တိုင်များ (ပုံ 3c)၊ နှင့် အထက် သံလိုက်တစ်ခု နှင့် လေပြွန် နှင့် ထောင့်ဖြတ်ပိုင်း (ပုံ 3d)။ တိရိစ္ဆာန် နှင့် သံလိုက် ကို ပြင်ဆင်ပြီး သည်နှင့် စမ်းသပ်ရမည့် MP ကို ​​ဆေးထိုး ပန့် ထဲသို့ ထည့်ကာ 50 μl ပမာဏ ကို ပုံများ ရယူ စဉ် တွင် 4 μl/sec နှုန်း ဖြင့် ပေးပို့ ပါသည်။ ထို့နောက် သံလိုက် သည် ပုံများ ကို ဖြတ်၍ ရွေ့လျား ပြီး tracheaac တစ်လျှောက် နှင့် နောက်မှ လိုက်သွား ပါသည်။
vivo ပုံရိပ်ဖော်ခြင်းအတွက် သံလိုက်ဖွဲ့စည်းပုံ (က) ခန့်မှန်းခြေအားဖြင့် 30° ထောင့်ရှိ လေပြွန်အထက် သံလိုက်တစ်ခု၊ (ခ) ဆွဲဆောင်ရန် သတ်မှတ်ထားသော သံလိုက်နှစ်ခု၊ (ဂ) တွန်းလှန်ရန် သတ်မှတ်ထားသော သံလိုက်နှစ်ခု၊ (ဃ) လေပြွန်အတွင်းရှိ အထက်သံလိုက်တစ်ခုနှင့် ထောင့်မှန်ကျသည်။ လေ့လာသူသည် ပါးစပ်မှ အဆုတ်ဆီသို့ ငုံ့ကြည့်ကာ X-trachea ကိုဖြတ်၍ ဘယ်ဘက်ဘက်ခြမ်းကို ဖြတ်သွားသည် ။ ညာဘက်ခြမ်း။သံလိုက်အား လေပြွန်၏ အရှည်တစ်လျှောက် သို့မဟုတ် ဓာတ်မှန်ရောင်ခြည်၏ ဦးတည်ရာဘက်တွင် လေပြွန်အထက် ဘယ်ညာ ရွေ့လျားသည်။
အသက်ရှုခြင်းနှင့် နှလုံးလှုပ်ရှားမှုများ ရှုပ်ထွေးခြင်းမရှိဘဲ လေလမ်းကြောင်းအတွင်းရှိ အမှုန်အမွှားများ၏ မြင်နိုင်စွမ်းနှင့် အပြုအမူတို့ကို ဆုံးဖြတ်ရန် ကြိုးပမ်းခဲ့သည်။ ထို့ကြောင့် ပုံရိပ်ဖော်ကာလ၏ အဆုံးတွင် တိရစ္ဆာန်များသည် pentobarbital အလွန်အကျွံသောက်ခြင်းကြောင့် လူသားဆန်စွာ သတ်ဖြတ်ခြင်းခံခဲ့ရသည် (Somnopentil၊ Pitman-Moore၊ Washington Crossing၊ USA; ~ 65 mgome/kg တစ်ကြိမ် အသက်ရှုလမ်းကြောင်းပေါ်ရှိ တိရစ္ဆာန်များ)။ နှလုံးခုန်ရပ်သွားသည်၊ ပုံရိပ်ဖော်ခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်ကို ထပ်ခါတလဲလဲလုပ်ဆောင်ပြီး လေပြွန်မျက်နှာပြင်ပေါ်တွင် MP မတွေ့ပါက MP ၏နောက်ထပ်ဆေးကို ထပ်လောင်းထည့်ပါသည်။
ရရှိထားသောပုံများကို MATLAB (R2020a၊ The Mathworks) တွင် ရေးသားထားသော စိတ်ကြိုက် ဇာတ်ညွှန်းကို အသုံးပြု၍ ရရှိထားသော ပုံများကို (တစ်စက္ကန့်လျှင် ဖရိမ် 20၊ 15-25 × ပုံမှန်အမြန်နှုန်း) ကို ရုပ်ရှင်အဖြစ် စုစည်းထားသည်။
LV gene vector ပေးပို့ခြင်းဆိုင်ရာ လေ့လာမှုအားလုံးကို Adelaide တက္ကသိုလ်ရှိ Laboratory Animal Research Facility တွင် ပြုလုပ်ခဲ့ပြီး SPring-8 စမ်းသပ်မှု၏ ရလဒ်များကို အသုံးပြုရန်အတွက် သံလိုက်စက်ကွင်းအတွင်း LV-MP ပေးပို့ခြင်းအား vivo တွင် မျိုးဗီဇလွှဲပြောင်းမှုကို မြှင့်တင်ပေးနိုင်ခြင်း ရှိ၊ မရှိ အကဲဖြတ်ရန် ရည်ရွယ်၍ MP နှင့် သံလိုက်စက်ကွင်း၏ အကျိုးသက်ရောက်မှုများကို အကဲဖြတ်ရန်အတွက် တိရစ္ဆာန်အုပ်စုနှစ်စုကို ကုသခဲ့သည်- အခြားတစ်အုပ်စုနှင့် LV အုပ်စုအား ထိန်းညှိပေးထားကြောင်း၊ သံလိုက်မပါဘဲ LV-MP ။
LV gene vector များကို ယခင်က ဖော်ပြထားသော နည်းလမ်းများ 25, 26 ဖြင့် ထုတ်လုပ်ခဲ့သည်။ LacZ vector သည် constitutive MPSV promoter (LV-LacZ) မှ မောင်းနှင်သော နျူကလီးယား-ဒေသခံ beta-galactosidase ဗီဇကို ထုတ်ဖော်ပြသသည် TU/ml တွင် titer ကို တွက်ချက်ရန် အပြုသဘောဆောင်သောဆဲလ်များကို -80°C တွင် cryopreserved ထားပြီး၊ အသုံးမပြုမီ ရောမွှေကာ CombiMag နှင့် 1:1 အချိုးဖြင့် ရောစပ်ကာ ရေခဲပေါ်တွင် ပေါက်ဖွားပြီး အနည်းဆုံး မိနစ် 30 ကြိုတင်တွင် ဖုတ်ထားသည်။
ပုံမှန် Sprague Dawley ကြွက်များ (n = 3/group, ~2-3 ကို 0.4 mg/kg medetomidine (Domitor, Ilium, Australia) နှင့် 60 mg/kg ketamine (Ilium, Australia) လသားအရွယ်) ip) နှင့် ခွဲစိတ်မှုမဟုတ်သော canivalnulation ဖြင့် ဆေးထိုးရန် သေချာပါသည်။ tracheal airway တစ်ရှူးသည် LV ကူးပြောင်းခြင်းကို လက်ခံရရှိသည်၊ ၎င်းကို ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်ဖော်ပြထားသော စက်ပိုင်းဆိုင်ရာအနှောင့်အယှက်ပေးသည့်ပရိုတိုကောကို အသုံးပြု၍ ၎င်းကို လေပြွန်မျက်နှာပြင်ကို ဝိုင်ယာကြိုးတောင်းဖြင့် axially ပွတ်တိုက်ပေးသည် (N-Circle၊ Nitinol Tipless Stone Extractor NTSE-022115) -UDH၊ Cook Medical, USA) 30s Tracheal28 တွင် ဘေးကင်းလုံခြုံစွာ စီမံဆောင်ရွက်ခဲ့ပါသည်။ ကက်ဘိနက်နှောင့်ယှက်ပြီးနောက် 10 မိနစ်ခန့်။
ဤစမ်းသပ်မှုတွင် အသုံးပြုသည့် သံလိုက်စက်ကွင်းအား vivo X-ray ပုံရိပ်ဖော်လေ့လာမှုတွင် အလားတူပုံစံဖြင့် ပေါင်းခံ stent ကလစ်များ (ပုံ 4) ကိုအသုံးပြု၍ လေပြွန်အထက်တွင်ရှိသော သံလိုက်ဖြင့် ဖွဲ့စည်းထားပါသည်။ (ပုံ 4) LV-MP ၏ 50 μl ထုထည် (2 × 25 μl aliquots) ကို ယခင်က a ပိုက်ပါရှိသော တိရစ္ဆာန်များကဲ့သို့ gelette (n = 3) သုံးပြီး လေပြွန်ထဲသို့ ပို့ဆောင်ခဲ့သည် ဖော်ပြခဲ့သည်။ ထိန်းချုပ်မှုအုပ်စု (n = 3 တိရစ္ဆာန်) သည် သံလိုက်အသုံးမပြုဘဲ တူညီသော LV-MPs များကို လက်ခံရရှိခဲ့သည်။ ဆေးသွင်းပြီးနောက်၊ cannula ကို ET tube မှဖယ်ရှားပြီး တိရစ္ဆာန်ကို extubation လုပ်ပြီးဖြစ်သည်။ သံလိုက်သည် 10 မိနစ်ခန့်ကျန်ရှိနေပြီး ၎င်းကိုဖယ်ရှားမည်ဖြစ်သည်။ ကြွက်များသည် အရေပြားအောက်ဆေးပမာဏကို သြစတြေးလျနိုင်ငံမှ meloxicam (Iliversia/kg) ဖြင့် (1 ml/kg) ဖြင့် ပြီးနောက် ip ထိုးဆေး 1 mg/kg atipamazole hydrochloride (Antisedan၊ Zoetis၊ Australia)။ ကြွက်များကို မေ့ဆေးမှ ပြန်လည်ကောင်းမွန်လာသည်အထိ နွေးထွေးစွာ စောင့်ကြပ်ကြည့်ရှုခဲ့ပါသည်။
LV-MP ပေးပို့သည့် ကိရိယာသည် ဇီဝလုံခြုံရေးဆိုင်ရာ ဗီရိုအတွင်းမှ ဖြစ်သည်။ ET tube ၏ မီးခိုးရောင် Luer hub ကို ပါးစပ်မှ ပြူးထွက်နေသည်ကို မြင်တွေ့နိုင်ပြီး ပုံတွင်ပြထားသည့် ပိုက်အစွန်အဖျားကို ET tube မှတဆင့် အလိုရှိသော လေပြွန်ထဲသို့ ထည့်သွင်းပါသည်။
LV-MP ဆေးထိုးခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်ပြီးနောက် တစ်ပတ်အကြာတွင် တိရစ္ဆာန်များသည် 100% CO2 ရှူရှိုက်မိခြင်းဖြင့် လူသားဆန်စွာ သေဆုံးခဲ့ကြပြီး LacZ expression ကို ကျွန်ုပ်တို့၏ စံ X-gal ကုသမှုကို အသုံးပြု၍ အကဲဖြတ်ခဲ့သည်။ အဆိုပါ အရိုးရိုးအများစုကို ကွင်းသုံးခုကို ဖယ်ရှားခဲ့ပြီး endotracheal tube မှ အရည်များကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုတွင် မပါဝင်ကြောင်း သေချာစေရန်အတွက် ဖယ်ထုတ်လိုက်ပါသည်။ ဆီလီကွန်ရော်ဘာ (Sylgard၊ Dow Inc) ပါသည့် ပန်းကန်ထဲတွင် အလင်းဝင်နေသော မျက်နှာပြင်ကို မြင်သာစေရန် Minutien အပ် (Fine Science Tools) ကို အသုံးပြုထားသည်။ အသွင်ပြောင်းဆဲလ်များ၏ ပုံသဏ္ဍာန်နှင့် ပုံသဏ္ဍာန်ကို DigiLite ကင်မရာနှင့် TCapture ဆော့ဖ်ဝဲ (Tucquiring Photonicifications၊ China တွင် 2 ကြိမ်) အသုံးပြု၍ ရှေ့မျက်နှာစာဓာတ်ပုံဖြင့် အတည်ပြုခဲ့သည်။ trachea ၏ အကျယ်အဝန်း အပြည့်အတွက် အမြင့်ဆုံး ဆက်တင်)၊ trachea ၏ အရှည်တစ်ခုလုံးကို ပုံတစ်ပုံချင်းစီအလိုက် ပုံတစ်ပုံချင်းစီကြားတွင် အလုံအလောက် ထပ်နေစေရန် သေချာစေပါသည်။ ထို့နောက် trachea တစ်ခုစီမှ ပုံများကို Image Composite images Editor v2.0.3 (Microsoft Research) ၏ လှုပ်ရှားမှုဆိုင်ရာ အစီအစဥ်တစ်ခုစီတွင် ပေါင်းစပ်ထားသော ဧရိယာများကို အသုံးပြု၍ တစ်ခုတည်းသော ပေါင်းစပ်ရုပ်ပုံအဖြစ်သို့ စုစည်းထားပါသည်။ 0.35 < Hue < 0.58 ၊ Saturation > 0.15 နှင့် Value < 0.7. ယခင်ဖော်ပြခဲ့သည့်အတိုင်း အလိုအလျောက် MATLAB script (R2020a, MathWorks) ကို အသုံးပြု၍ တိရစ္ဆာန်တစ်ခုစီမှ လေပြွန်များကို တိုင်းတာသည် တစ်ရှူးဧရိယာကို ခွဲခြားသတ်မှတ်ရန်နှင့် tracheal တစ်ရှူးပြင်ပမှ မှားယွင်းသော ထောက်လှမ်းမှုများကို တားဆီးရန်အတွက် ရုပ်ပုံ။ တိရစ္ဆာန်တစ်ခုစီမှ ပေါင်းစပ်ရုပ်ပုံများအားလုံးမှ စွန်းထင်းသောနေရာများကို ထိုတိရစ္ဆာန်အတွက် စုစုပေါင်းစွန်းထင်းသောဧရိယာကို ထုတ်ပေးရန်အတွက် ပေါင်းစပ်ထားသည်။ ထို့နောက် စွန်းထင်းထားသောဧရိယာကို စုစုပေါင်းမျက်နှာဖုံးဧရိယာဖြင့် ပိုင်းခြားထားပါသည်။
လေပြွန်တစ်ခုစီကို paraffin တွင်ထည့်သွင်းထားပြီး 5 μm အပိုင်းများကို ဖြတ်တောက်ထားသည်။ အပိုင်းများကို 5 မိနစ်ကြာ ကြားနေအမြန်အနီရောင်ဖြင့် တန်ပြန်ထားပြီး ဓာတ်ပုံများကို Nikon Eclipse E400 အဏုစကုပ်၊ DS-Fi3 ကင်မရာနှင့် NIS ဒြပ်စင်ဖမ်းယူသည့်ဆော့ဖ်ဝဲ (ဗားရှင်း 5.20.00) ကို အသုံးပြု၍ ရရှိခဲ့သည်။
စာရင်းအင်းခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအားလုံးကို GraphPad Prism v9 (GraphPad Software, Inc.) တွင်ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ ကိန်းဂဏန်းအချက်အလတ်အရေးပါမှုကို p ≤ 0.05 တွင်သတ်မှတ်ထားသည်။ Shapiro-Wilk စမ်းသပ်မှုကိုအသုံးပြု၍ Normality ကိုစစ်ဆေးပြီး LacZ စွန်းထင်းခြင်းတွင် ကွဲပြားမှုများကို မတွဲမထားသော t-test ကိုအသုံးပြု၍ အကဲဖြတ်ခဲ့သည်။
ဇယား 1 တွင်ဖော်ပြထားသော MP ခြောက်ခုကို PCXI သုံးပြီး စစ်ဆေးခဲ့ပြီး မြင်နိုင်စွမ်းကို ဇယား 2 တွင်ဖော်ပြထားပါသည်။ polystyrene MP နှစ်ခု (MP1 နှင့် MP2; 18 μm နှင့် 0.25 μm အသီးသီး) ကို PCXI အောက်တွင် မမြင်နိုင်သော်လည်း ကျန်နမူနာများကို MP5 တွင် ခွဲခြားသတ်မှတ်နိုင်သည် (MP3 နှင့် ဥပမာများကို ပြထားသည်။ (10-15% Fe3O4; 0.25 μm နှင့် 0.9 μm အသီးသီး) ကို ဖျတ်လတ်စွာ မြင်နိုင်သည်။ စမ်းသပ်ထားသော အသေးငယ်ဆုံး အမှုန်အချို့ ပါဝင်သော်လည်း MP5 (98% Fe3O4; 0.25 μm) သည် အထင်ရှားဆုံးဖြစ်သည်။ CombiMag ထုတ်ကုန် MP6 ကို သိရှိနိုင်မှုအား မြှင့်တင်ရန် ခက်ခဲသည်။ သံလိုက်သည် သွေးကြောမျှင်များနှင့်အပြိုင် အပြန်ပြန်အလှန်လှန်၍ သံလိုက်များ သွေးကြောမျှင်များမှ ရွေ့သွားသောအခါ၊ အမှုန်များသည် ကြိုးရှည်ရှည်များဖြင့် တိုးလာသော်လည်း သံလိုက်များ နီးကပ်လာသည်နှင့်အမျှ သံလိုက်စက်ကွင်း အားကောင်းလာသောအခါ၊ အမှုန်များသည် သွေးကြောမျှင်၏ အပေါ်ယံမျက်နှာပြင်ဆီသို့ ရွေ့လျားလာသည်နှင့်အမျှ အမှုန်ကြိုးများသည် တိုသွားသည် (နောက်ဆက်တွဲ Video verse S1: MP4 ကို ကြည့်ပါ) သံလိုက်မျက်နှာပြင် တိုးလာသောအခါ၊ သွေးကြောမျှင်များမှ ဖယ်ရှားလိုက်သည်၊ ကွင်းဆင်းအားကောင်းလာပြီး MP များသည် သွေးကြောမျှင်၏ အပေါ်မျက်နှာပြင်မှ ရှည်လျားသော ကြိုးများအဖြစ် ပြန်လည်စီယူသည် (နောက်ဆက်တွဲ ဗီဒီယို S2:MP4 ကိုကြည့်ပါ)။ သံလိုက်သည် ရွေ့လျားမှုရပ်သွားပြီးနောက်၊ အမှုန်များသည် မျှခြေအနေအထားသို့ရောက်ရှိပြီးနောက် အချိန်တိုအတွင်း ဆက်လက်ရွေ့လျားသွားကြသည်။ MP သည် သံလိုက်အမှုန်အမွှားများဆီသို့ ရွေ့လျားလာသည်နှင့်အမျှ ပုံမှန်အားဖြင့် အမှုန်အမွှားများ၏ အပေါ်ဘက်မျက်နှာပြင်ကို ဆွဲယူလိုက်သည် အရည်။
PCXI အောက်ရှိ MP ၏မြင်နိုင်စွမ်းသည် နမူနာများကြားတွင် သိသိသာသာကွဲပြားပါသည်။(က) MP3၊ (b) MP4၊ (ဂ) MP5 နှင့် (d) MP6။ ဤတွင်ပြသထားသောပုံများအားလုံးသည် သွေးကြောမျှင်အထက် 10 မီလီမီတာခန့်ရှိသော သံလိုက်ဖြင့်ရိုက်ယူထားပါသည်။ ထင်ရှားသောကြီးမားသောစက်ဝိုင်းများသည် သွေးကြောမျှင်များအတွင်းပိတ်မိနေသောလေပူဖောင်းများဖြစ်ပြီး အနက်ရောင်နှင့်အဖြူရောင်အစွန်းများ ပေါင်းစပ်ပါဝင်သည့်အဆင့်ကို ရှင်းရှင်းလင်းလင်းပြသထားသည်။ ချဲ့ထွင်မှု။ ကိန်းဂဏာန်းအားလုံးရှိ သံလိုက်ပုံသဏ္ဍာန်၏ အချင်းများသည် အတိုင်းအတာမဟုတ်သည့်အပြင် ပြထားသည်ထက် အဆ 100 ခန့် ပိုကြီးသည်ကို သတိပြုပါ။
သံလိုက်ကို သွေးကြောမျှင်၏ထိပ်တစ်လျှောက် ဘယ်ညာဘာသာပြန်ထားသည်နှင့်အမျှ MP ကြိုး၏ထောင့်သည် သံလိုက်နှင့်လိုက်လျောညီထွေဖြစ်စေရန် ပြောင်းလဲသွားသည် (ပုံ 6 ကိုကြည့်ပါ) ထို့ကြောင့် သံလိုက်စက်ကွင်းလိုင်းများကိုဖော်ပြသည်။ MP3-5 အတွက်၊ ဘောင်ထောင့်တစ်ခုသို့ရောက်ပြီးနောက်၊ အမှုန်များကို သွေးကြောမျှင်မျက်နှာပြင်တစ်လျှောက် ဆွဲငင်သွားပါသည်။ ၎င်းသည် MPs အနီးကပ်ဆုံးအုပ်စုများဆီသို့ အပြင်းထန်ဆုံးဖြစ်စေသည် (သံလိုက်စက်ကွင်းများဆီသို့ မကြာခဏဆိုသလို) ဖြစ်ပေါ်စေသည် နောက်ဆက်တွဲ ဗီဒီယို S3:MP5)။ သွေးကြောမျှင်အဆုံးနှင့် နီးကပ်သော ပုံရိပ်ကို ထင်ရှားစေပြီး၊ MPs များသည် fluid-air interface တွင် စုစည်း၍ အာရုံစူးစိုက်နိုင်စေပါသည်။ MP3-5 ထက် ပိုင်းခြားရပိုခက်သော MP6 တွင် အမှုန်အမွှားများကို သံလိုက်သည် သွေးကြောမျှင်တစ်လျှောက် ရွေ့သွားသည့်အတွက် ဆွဲငင်မခံရဘဲ၊ MP strings များကို မြင်ကွင်းအတွင်း ကွဲထွက်သွားစေပါသည်။ S4:MP6)။အချို့ကိစ္စများတွင်၊ သံလိုက်အား ပုံရိပ်ဖော်သည့်နေရာမှ ကြီးမားသောအကွာအဝေးကိုရွှေ့ခြင်းဖြင့် သံလိုက်စက်ကွင်းကို လျှော့ချလိုက်သောအခါ ကျန်အမတ်များသည် ကြိုးတန်းတွင်ကျန်နေချိန်တွင် ပြွန်အောက်ခြေမျက်နှာပြင်သို့ ဖြည်းဖြည်းချင်းဆင်းသွားသည် (နောက်ဆက်တွဲဗီဒီယို S5: MP3 ကိုကြည့်ပါ)။
သွေးကြောမျှင်အထက်ဘက်ရှိ သံလိုက်အား MP3၊ (ခ) MP4၊ (ဂ) MP5 နှင့် (d) MP6။ အနီရောင်အကွက်တွင် ဆန့်ကျင်ဘက်ချဲ့ထွင်မှုအား မြှင့်တင်ပေးသည့် ဗီဒီယိုများပါရှိသည်။ နောက်ဆက်တွဲဗီဒီယိုများသည် အရေးကြီးသော အမှုန်အမွှားဖွဲ့စည်းပုံနှင့် တက်ကြွသောအချက်အလက်များကို ဤရုပ်ပုံများတွင် မြင်သာမြင်သာအောင်မပြနိုင်သောကြောင့် နောက်ဆက်တွဲဗီဒီယိုများသည် သတင်းအချက်အလတ်ဖြစ်ကြောင်း သတိပြုပါ။
ကျွန်ုပ်တို့၏စမ်းသပ်ချက်များအရ သံလိုက်အား လေပြွန်တစ်လျှောက် ဖြည်းညှင်းစွာရွေ့လျားခြင်းသည် vivo တွင်ရှုပ်ထွေးသောရွေ့လျားမှုအခြေအနေတွင် MP ၏အမြင်အာရုံကိုလွယ်ကူချောမွေ့စေကြောင်းပြသခဲ့သည်။ Vivo စမ်းသပ်ရာတွင် polystyrene beads (MP1 နှင့် MP2) ကို သွေးကြောမျှင်အတွင်းမမြင်နိုင်သောကြောင့် vivo တွင် မမြင်နိုင်ပါ။ ကျန် MP လေးခုအနက်တစ်ခုစီကို သံလိုက်၏အထက်ဝင်ရိုး 3 မှ trachea မှ vertical ရှည်သော၀င်ရိုးဖြင့် vivo တွင်စမ်းသပ်ထားသည်။ (ပုံ 2b နှင့် 3a ကိုကြည့်ပါ) ၎င်းသည် MP ကြိုးများကို ပိုရှည်စေသောကြောင့် သံလိုက်ဖွဲ့စည်းမှုအား ရပ်စဲထားသည်ထက် ပိုမိုထိရောက်ပါသည်။ MP3၊ MP4 နှင့် MP6 သည် မည်သည့်သက်ရှိတိရစ္ဆာန်များ၏လေပြွန်အတွင်းမှ မတွေ့ပါ။ တိရစ္ဆာန်များကို လူသားဆန်စွာသတ်ပြီးနောက် ကြွက်လေလမ်းကြောင်းများကို ပုံဖော်လိုက်သောအခါတွင်၊ အမှုန်များသည် 5MP ပမာဏကို ထပ်လောင်းထည့်ထားသည့်တိုင် သံဓာတ်ကို မမြင်နိုင်သောပမာဏအဖြစ် ဆက်လက်တည်ရှိနေပါသည်။ ၎င်းသည် တစ်ခုတည်းသော မြင်သာသော အမှုန်အမွှားဖြစ်သောကြောင့် MP ၏ vivo အပြုအမူကို အကဲဖြတ်ရန်နှင့် လက္ခဏာဆောင်ရန် အသုံးပြုခဲ့သည်။
MP ပေးပို့စဉ်အတွင်း သံလိုက်ကို လေပြွန်ပေါ်တွင် နေရာချခြင်းသည် မြင်ကွင်းနယ်ပယ်တွင် အများအပြား အာရုံစိုက်ခြင်းကို ဖြစ်ပေါ်စေသည်၊ သို့သော် အားလုံးမဟုတ်ပါ၊ အမတ်များသည် လေပြွန်အတွင်းသို့ ဝင်ရောက်လာသော အမှုန်အမွှားများကို လူသားဆန်စွာ ပူဇော်ထားသော တိရစ္ဆာန်များတွင် တွေ့ရှိနိုင်သည် ။ ပုံ 7 နှင့် နောက်ဆက်တွဲဗီဒီယို S6: MP5 သည် လျင်မြန်သော သံလိုက်ဓာတ်ဖမ်းယူမှုနှင့် MP5 ၏ ventral trachea ၏မျက်နှာပြင်ပေါ်ရှိ အမှုန်အမွှားများ၏ ညှိယူမှုကို လိုလားတောင့်တနိုင်သော trachea၊ trachea။ MP ပေးပို့ပြီးနောက် လေပြွန်တစ်လျှောက် အဝေးကိုရှာဖွေသည့်အခါ အချို့သောအမတ်များသည် carina နှင့် နီးကပ်လာသည်ကို တွေ့ရှိခဲ့ပြီး MPs အားလုံးကို စုဆောင်းထိန်းသိမ်းရန် သံလိုက်ဓာတ်အား မလုံလောက်ကြောင်း အကြံပြုကာ အရည်ဖြစ်စဉ်အတွင်း အများဆုံးသံလိုက်စက်ကွင်းအား ဧရိယာကိုဖြတ်၍ ပို့ဆောင်ပေးသောကြောင့် MPs များအားလုံးကို သံလိုက်စက်ကွင်းအား စုဆောင်းကာ ထိန်းသိမ်းနိုင်သည်ဟု အကြံပြုခဲ့သည်။ မည်သို့ပင်ဆိုစေကာမူ၊ မီးဖွားပြီးနောက် MP သည် လေထုဧရိယာတစ်ဝိုက်တွင် သံလိုက်ဓာတ်ပါဝင်မှုပိုမိုမြင့်မားကြောင်း အကြံပြုထားသည်။ အမြင့်ဆုံး။
(က) မတိုင်မီနှင့် (ခ) မှ MP5 ပေးပို့ပြီးနောက် ပုံရိပ်ဖော်ဧရိယာအထက်တွင် တိုက်ရိုက်နေရာယူထားသော သံလိုက်ဖြင့် မကြာသေးမီက အစားထိုးထားသော ကြွက်တစ်ကောင်၏ လေပြွန်ထဲသို့ MP5 ပေးပို့သည့်ပုံများ။ ပုံတွင်ဖော်ပြထားသောနေရာသည် အရိုးနုကွင်းနှစ်ခုကြားတွင်တည်ရှိသည်။ MP ပေးပို့ခြင်းမပြုမီ၊ လေလမ်းကြောင်းအတွင်း အရည်အချို့ရှိနေပါသည်။ အနီရောင်အကွက်တွင် ပုံတွင်ဖော်ပြထားသော ဆန့်ကျင်ဘက်-မြှင့်တင်ပေးသည့် MP6 ရုပ်ပုံများသည် ဗီဒီယိုတွင်ပါရှိသည်။
Vivo ရှိ လေပြွန်တစ်လျှောက် သံလိုက်ကို ဘာသာပြန်ခြင်းကြောင့် MP ကွင်းဆက်သည် သွေးကြောမျှင်များအတွင်းမြင်ရသည့် ပုံစံအတိုင်း အသက်ရှူလမ်းကြောင်းအတွင်းထောင့်ကို ပြောင်းလဲစေသည် (ပုံ 8 နှင့် နောက်ဆက်တွဲဗီဒီယို S7:MP5 ကိုကြည့်ပါ)။ သို့သော် ကျွန်ုပ်တို့၏လေ့လာမှုတွင် MP များကို သက်ရှိလေပြွန်၏မျက်နှာပြင်တစ်လျှောက် ဆွဲငင်မသွားနိုင်ဘဲ သွေးကြောမျှင်များနှင့် ညာဘက်သို့ ရွေ့နိုင်သည်။ အချို့ကိစ္စများတွင် ပိုရှည်သည်နှင့်အမျှ MP ကွင်းဆက်သည် ညာဘက်သို့ ရွေ့သွားမည်ဖြစ်သည်။ သံလိုက်အား လေပြွန်တစ်လျှောက် အလျားလိုက်ရွှေ့လိုက်သောအခါ အမှုန်ကြိုးသည် မျက်နှာပြင်အရည်လွှာ၏ အတိမ်အနက်ကို ပြောင်းလဲသွားပုံပေါ်ပြီး သံလိုက်အား အပေါ်မှ တိုက်ရိုက်ရွှေ့လိုက်သည့်အခါတွင် ကျယ်လာပြီး အမှုန်ကြိုးကို ဒေါင်လိုက်အနေအထားသို့ လှည့်လိုက်သောအခါတွင် ကျယ်လာသည် (နောက်ဆက်တွဲ ဗီဒီယို S7 ကိုကြည့်ပါ)။ : MP5 တွင် 0:09၊ ညာဘက်အောက်ခြေ)။သံလိုက်ကို လေပြွန်၏အပေါ်ဘက်တစ်ဖက်ခြမ်းတွင် ဘာသာပြန်လိုက်သောအခါ (ထိုအရာသည် အစာပြွန်၏အရှည်တစ်လျှောက်ထက် တိရစ္ဆာန်၏ဘယ်ဘက် သို့မဟုတ် ညာဘက်သို့) ရွေ့လျားသွားသည့်အတိုင်း ထင်ရှားစွာမြင်နေရဆဲဖြစ်သော်လည်း အမှုန်အမွှားများသည် လေပြွန်မှ သံလိုက်ကိုဖယ်လိုက်သောအခါတွင်၊ အမှုန်အမွှား 8 MP ကိုမြင်နိုင်သည် ( Video 5 ppary tips ) 0:08) မှစတင်၍)၎င်းသည် ဖန်သားမျှင်အတွင်းထည့်ထားသော သံလိုက်စက်ကွင်းအောက်တွင် ကျွန်ုပ်တို့တွေ့ရှိခဲ့သည့် MP အပြုအမူနှင့် ကိုက်ညီပါသည်။
မေ့ဆေးပေးထားသော ကြွက်၏ လေပြွန်အတွင်း MP5 ကို ပြသသည့် နမူနာပုံများ။(က) လေပြွန်အထက်နှင့် ဘယ်ဘက်တွင် ပုံများကို ရယူရန် သံလိုက်ကို အသုံးပြုပြီး၊ ထို့နောက် (ခ) သံလိုက်အား ညာဘက်သို့ ရွှေ့ပြီးနောက် အနီရောင်အကွက်တွင် ဆန့်ကျင်ဘက်ချဲ့ထွင်မှုကို မြှင့်တင်ပေးသည့် ပုံများပါရှိသည်။ ဤပုံများသည် နောက်ဆက်တွဲ ဗီဒီယို 55 တွင် ပြသထားသည့် ဗီဒီယိုမှဖြစ်သည်။
အစွန်းနှစ်ချောင်းကို လေပြွန်အထက်နှင့်တောင်အောက်ဘက်သို့ မြောက်-တောင်ဘက်သို့ ချိန်ညှိသတ်မှတ်သောအခါ (ဆိုလိုသည်မှာ ဆွဲဆောင်မှု; ပုံ 3b) တွင် MP chord များသည် ပိုမိုရှည်လျားလာပြီး dorsal tracheal မျက်နှာပြင်ပေါ်တွင်မဟုတ်ဘဲ လေပြွန်၏ဘေးနံရံတွင် တည်ရှိနေပါသည် (နောက်ဆက်တွဲဗီဒီယို S9:MP5 ကိုကြည့်ပါ) သို့သော်၊ မြင့်မားသောအမှုန်အမွှားများ၏ တည်နေရာသည် (အမှုန်အမွှားများမဟုတ်ပါ)၊ သံလိုက်နှစ်ခုပါသည့် စက်ကိုအသုံးပြုသည့်အခါ အရည်များပေးပို့ပြီးနောက် တွေ့ရှိနိုင်သည်၊ ၎င်းသည် သံလိုက်တစ်ခုတည်းကိရိယာကိုအသုံးပြုသည့်အခါတွင် ဖြစ်တတ်ပါသည်။ထို့နောက် သံလိုက်တစ်ခုသည် ဝင်ရိုးစွန်းများကိုပြောင်းပြန်လှန်ပစ်ရန် ပြင်ဆင်သတ်မှတ်လိုက်သောအခါ (ပုံ. 3c)၊ မြင်ကွင်းနယ်ပယ်တွင်မြင်ရသောအမှုန်အရေအတွက်များသည် ပေးပို့ပြီးနောက် တိုးလာပုံမပေါ်ပါ။ အဆိုပါ dual-magnet ဆွဲထုတ်ခြင်း သို့မဟုတ် သံလိုက်စက်ကွင်းနှစ်ခုစလုံး၏ ခိုင်မာမှုအား မြှင့်တင်ခြင်းမှာ သံလိုက်အကွက်နှစ်ခုလုံး၏ မြင့်မားသောဖွဲ့စည်းမှုကြောင့်ဖြစ်သည်။ သံလိုက်၊ အသီးသီး။ထို့နောက် စနစ်ထည့်သွင်းမှုကို လေလမ်းကြောင်းနှင့်အပြိုင် သံလိုက်တစ်ခုတည်းအဖြစ်သို့ ပြောင်းလဲခဲ့သော်လည်း 90 ဒီဂရီတွင် လေလမ်းကြောင်းကိုဖြတ်သန်းသွားသောကြောင့် ကွင်းပြင်လိုင်းများသည် tracheal wall ကို တစ်ဖက်တစ်လမ်းမှဖြတ်သွားခြင်းဖြစ်သည် (ပုံ 3d)၊ ဘေးဘက်နံရံရှိ အမှုန်အမွှားများစုပုံခြင်းကို သတိပြုနိုင်စေရန်အတွက် ဒီဇိုင်းထုတ်ထားသော လမ်းကြောင်းတစ်ခုဖြစ်သည်။သို့သော် MP ၏ magnet သည် ဤဖွဲ့စည်းမှုပုံစံတွင် ရွေ့လျားမှုမဟုတ်၊ လှုပ်ရှားမှု။ ဤရလဒ်များအားလုံးကို အခြေခံ၍ တစ်ခုတည်းသော သံလိုက်၊ 30 ဒီဂရီ တိမ်းညွှတ်မှုပုံစံ (ပုံ 3a) ကို vivo gene carrier လေ့လာမှုများတွင် ရွေးချယ်ခဲ့သည်။
တိရစ္ဆာန်ကို လူသားဆန်စွာ သတ်ဖြတ်ပြီးနောက် ချက်ချင်းဆိုသလို ထပ်ခါတလဲလဲ ပုံရိပ်ဖော်သောအခါ၊ သံလိုက်၏ ဘာသာပြန်ရွေ့လျားမှုနှင့်အညီ ပိုမိုသေးငယ်ပြီး ပိုတိုသော အမှုန်မျဉ်းများကို သံလိုက်၏ ဘာသာပြန်သည့် ရွေ့လျားမှုနှင့်အညီ “တုန်လှုပ်ချောက်ချား” နိုင်သည်ဟု ဆိုလိုသည်။ မည်သို့ပင်ဆိုစေကာမူ MP6 အမှုန်များ၏ တည်ရှိမှုနှင့် ရွေ့လျားမှုကို ရှင်းရှင်းလင်းလင်းမမြင်နိုင်ပါ။
LV-LacZ titer သည် 1.8 × 108 TU/ml ဖြစ်ပြီး၊ CombiMag MP (MP6) နှင့် 1:1 ရောစပ်ပြီးနောက်၊ တိရစ္ဆာန်များသည် 50 μl tracheal dose 9 × 107 TU/ml LV ယာဉ် (ဆိုလိုသည်မှာ 4.5 × 106 TU/rat) ကို ရရှိခဲ့သည်။ .ဤလေ့လာမှုများတွင် သံလိုက်စက်ကွင်းကို ဘာသာပြန်မည့်အစား LV transduction (a) ကို သံလိုက်စက်ကွင်းမရှိသည့်အခါ vector ပေးပို့ခြင်းနှင့် နှိုင်းယှဉ်၍ တိုးတက်ကောင်းမွန်နိုင်သည်ဆိုသည်ကို ဆုံးဖြတ်ရန် သံလိုက်အား တစ်နေရာတည်းတွင် ပြုပြင်ပြီး (ခ) အာရုံစူးစိုက်နိုင်သည် (ခ) လေလမ်းကြောင်းအပေါ်ပိုင်းရှိ သံလိုက်ပစ်မှတ်ဒေသများသို့ ကူးပြောင်းသွားပါသည်။
သံလိုက်များရှိနေခြင်းနှင့် LV vector များနှင့်ပေါင်းစပ်အသုံးပြုခြင်းသည် ကျွန်ုပ်တို့၏စံ LV vector ပေးပို့မှုပရိုတိုကောကဲ့သို့ပင် တိရစ္ဆာန်ကျန်းမာရေးအပေါ် ဆိုးရွားသောသက်ရောက်မှုများမပေါ်ပါ။ စက်ပိုင်းဆိုင်ရာအနှောင့်အယှက်ဖြစ်စေသော tracheal ဒေသ၏မျက်နှာစာပုံများ (နောက်ဆက်တွဲပုံ 1) သည် တိရစ္ဆာန်အုပ်စုတွင် သိသိသာသာကူးပြောင်းမှုအဆင့်ရှိကြောင်း ညွှန်ပြပါသည်။ O 9 (အသေးစား MP) သည် သံလိုက်ဓာတ်ရှိနေသောအခါတွင် LV-MP ရှိနေပါသည်။ အပြာရောင် LacZ စွန်းထင်းမှုပမာဏသည် ထိန်းချုပ်မှုအုပ်စု (ပုံ။ 9b) တွင် ရှိနေပါသည်။ ပုံမှန်ပြုလုပ်ထားသော X-Gal စွန်းထင်းသောနေရာများ၏ ပမာဏကို တိုင်းတာခြင်းသည် သံလိုက်စက်ကွင်းတစ်ခုရှိနေခြင်းတွင် LV-MP ၏ စီမံအုပ်ချုပ်မှုသည် ခန့်မှန်းခြေအားဖြင့် 6 ဆ တိုးတက်မှုကို ဖြစ်ပေါ်စေသည် (ပုံ။ 9c)။
သံလိုက်ဓာတ်မရှိခြင်းတွင် LV-MP (က) ဖြင့် tracheal transduction ကိုပြသသည့် နမူနာပုံများ။(ဂ) သံလိုက် (*p = 0.029၊ t-test၊ n = 3) သံလိုက်ကိုအသုံးပြုသောအခါ လေပြွန်အတွင်း ပုံမှန်ဖြစ်လာသော LacZ transduction area တွင် ကိန်းဂဏန်းအချက်အလက်များ သိသိသာသာတိုးတက်လာပါသည်။
ကြားနေမြန်သော အနီရောင်စွန်းထင်းသည့်အပိုင်းများ (ဥပမာ နောက်ဆက်တွဲပုံ။ 2 တွင် ပြထားသည်) ယခင်ဖော်ပြခဲ့သည့်အတိုင်း ပုံစံတူနှင့် တည်နေရာတွင် LacZ-စွန်းစွန်းဆဲလ်များကို ပြသထားသည်။
လေလမ်းကြောင်းဗီဇကုထုံးအတွက် အဓိကစိန်ခေါ်မှုမှာ စိတ်ဝင်စားသည့်ဒေသများသို့ သယ်ဆောင်သူအမှုန်အမွှားများကို တိကျသောနေရာချထားခြင်းနှင့် လေ၀င်လေထွက်နှင့် တက်ကြွသောချွဲများရှင်းလင်းခြင်းတို့ရှိနေချိန်တွင် အဆုတ်အတွင်း ရွေ့လျားနေသောအဆုတ်အတွင်း ကူးပြောင်းခြင်းထိရောက်မှုအဆင့်ကို ရရှိစေရန်ဖြစ်သည်။ CF လေလမ်းကြောင်းရောဂါကိုကုသရန် ဒီဇိုင်းထုတ်ထားသည့် LV သယ်ဆောင်သူများအတွက်၊ သယ်ဆောင်သူအမှုန်များ၏နေထိုင်ချိန်ကို တိုးမြင့်စေပါသည်။ အယ်လ်။၊ ကူးပြောင်းခြင်းအား ပိုမိုကောင်းမွန်စေရန် သံလိုက်စက်ကွင်းများအသုံးပြုခြင်းသည် electroporation ကဲ့သို့ ရိုးရှင်းခြင်း၊ ကုန်ကျစရိတ်သက်သာခြင်း၊ ပေးပို့မှုဒေသခံအဖြစ် ပြောင်းလဲခြင်း၊ ထိရောက်မှုတိုးမြင့်ခြင်းနှင့် ပေါက်ပွားချိန်တိုတိုနှင့် သေးငယ်သော သယ်ဆောင်ဆေးပမာဏ 10 ဖြစ်နိုင်ခြင်းတို့ကြောင့်၊ ၎င်းသည် ရိုးရှင်းမှု၊ ကုန်ကျစရိတ်သက်သာမှု၊ ပေးပို့မှုဒေသခံအဖြစ် ပေါင်းစပ်နိုင်သောကြောင့်၊ ထိရောက်မှုတိုးလာပြီး ပေါက်ပွားချိန်တိုတောင်းကာ သေးငယ်သော သယ်ဆောင်ဆေးပမာဏဖြစ်နိုင်သည်10။သို့သော်၊ vivo ၏ သံလိုက်ဓာတ်သည် လေလမ်းကြောင်းအတွင်း သံလိုက်အမှုန်အမွှားများ၏ လွှမ်းမိုးမှုအောက်တွင် ဘယ်သောအခါမှ မဖြစ်ခဲ့ပါ။ ဖော်ပြထားသည်မှာ၊ ဤနည်းလမ်း၏ဖြစ်နိုင်ချေကို လက်တွေ့ကျကျ အသက်ရှင်နေထိုင်နိုင်သောလေလမ်းကြောင်းရှိ မျိုးရိုးဗီဇဖော်ပြမှုအဆင့်ကို မြှင့်တင်ရန်အတွက် vivo တွင် လက်တွေ့သရုပ်ပြထားခြင်းမျိုးမရှိပါ။
ကျွန်ုပ်တို့အသုံးပြုထားသော ပုံရိပ်ဖော်စနစ်တွင် polystyrene MP မှလွဲ၍ ကျွန်ုပ်တို့စမ်းသပ်ထားသော အမှုန်များအားလုံးကို in vitro synchrotron PCXI စမ်းသပ်ချက်များက ပြသခဲ့သည်။ သံလိုက်စက်ကွင်းတစ်ခုစီတွင် MPs များသည် အမှုန်အမျိုးအစားနှင့် သံလိုက်စက်ကွင်း၏ အရှည်နှင့် ဆက်နွယ်နေသော ကြိုးများ (ဆိုလိုသည်မှာ သံလိုက်၏ အကွာအဝေးနှင့် ရွေ့လျားမှုကို ဆိုလိုပါသည်။) ပုံ ၁ တွင် ပြထားသည့်အတိုင်း အမှုန်တစ်ခုစီကို ပုံတွင်ပြထားသည်။ သံလိုက်ဖြင့်ပြုလုပ်ပြီး ၎င်း၏ကိုယ်ပိုင်သံလိုက်စက်ကွင်းကို လှုံ့ဆော်ပေးသည်။ ဤသီးခြားအကွက်များသည် အခြားအမှုန်အမွှားများကို စုစည်းကာ ချိတ်ဆက်ပေးကာ အခြားအမှုန်များ၏ ဒေသတွင်း ဆွဲဆောင်မှုနှင့် ရွံရှာဖွယ်ကောင်းသော တွန်းအားများကြောင့် အုပ်စုဖွဲ့ ကြိုးနှင့်တူသော လှုပ်ရှားမှုများ ဖြစ်စေသည်။
ဇယားကွက်ပြသခြင်း (a,b) အမှုန်အမွှားများကို အရည်ဖြည့်သွေးကြောမျှင်များနှင့် (c,d) လေပြွန်အတွင်းတွင် ထုတ်ပေးပါသည်။ သွေးကြောမျှင်များနှင့် လေပြွန်များကို စကေးအဖြစ်ဆွဲမထားပါ။ ကန့်ကွက် (a) တွင် Fe3O4 အမှုန်အမွှားများပါရှိသော MP ၏ ဖော်ပြချက်ပါရှိပါသည်။
သံလိုက်ကို သွေးကြောမျှင်အထက်သို့ ရွှေ့လိုက်သောအခါ၊ အမှုန်အမွှားကြိုး၏ထောင့်သည် Fe3O4 ပါဝင်သော MP3-5 အတွက် အရေးကြီးသောအဆင့်သို့ရောက်ရှိသွားသည်၊ ထို့နောက်တွင် အမှုန်ကြိုးသည် မူလအနေအထားတွင်မရှိတော့ဘဲ မျက်နှာပြင်တစ်လျှောက်ကို position.magnet အသစ်တစ်ခုသို့ ရွေ့သွားပါသည်။ဖန်သားမျှင်မျက်နှာပြင်သည် ဤရွေ့လျားမှုကိုခွင့်ပြုနိုင်လောက်အောင် ချောမွေ့နေသောကြောင့် ဤအကျိုးသက်ရောက်မှုဖြစ်ပေါ်လာနိုင်ဖွယ်ရှိပါသည်။ အမှုန်အမွှားများသည် သေးငယ်သောကြောင့်၊ အပေါ်ယံအလွှာများ သို့မဟုတ် မျက်နှာပြင်အား အမျိုးမျိုးရှိသောကြောင့် ဖြစ်နိုင်သည်၊ သို့မဟုတ် မူပိုင်ကယ်ရီယာအရည်သည် ၎င်းတို့၏ ရွေ့လျားနိုင်စွမ်းကို ထိခိုက်နိုင်သည်။ CombiMag အမှုန်များ၏ ရုပ်ပုံဆန့်ကျင်ဘက်မှာလည်း အားနည်းသည်၊ အရည်နှင့် အမှုန်များသည် ဆင်တူသောသိပ်သည်းဆရှိနိုင်သောကြောင့် တစ်ခုနှင့်တစ်ခုဆီသို့ လွယ်ကူစွာမရွေ့လျားနိုင်သောကြောင့် ဖြစ်နိုင်သည်။ ထိုအမှုန်များသည် သံလိုက်စက်ကွင်းတွင် အမြဲမြန်လွန်းပါက သံလိုက်စက်ကွင်းကို အမြဲမရွေ့လျားနိုင်ပါ။ အရည်အတွင်းရှိ အမှုန်များကြား ပွတ်တိုက်မှုအား သံလိုက်စက်ကွင်း ခွန်အားနှင့် သံလိုက်နှင့် ပစ်မှတ်ဧရိယာကြား အကွာအဝေးသည် အလွန်အရေးကြီးကြောင်း အကြံပြုပါသည်။ သံလိုက်များသည် ပစ်မှတ်ဧရိယာတစ်လျှောက် ဖြတ်သန်းစီးဆင်းနေသော MP အများအပြားကို သံလိုက်ဖြင့် ဖမ်းယူနိုင်သော်လည်း CombiMag အမှုန်များကို မျက်နှာပြင်တစ်လျှောက် သံလိုက်အား မှီခိုအားထားနိုင်မည်မဟုတ်ကြောင်း လေ့လာမှုများက အကြံပြုထားသည်။ တည်ငြိမ်သော သံလိုက်စက်ကွင်းများကို အသုံးပြု၍ လေလမ်းကြောင်းသစ်ပင်၏ သီးခြားဒေသများကို ပစ်မှတ်ထားရန်။
အမှုန်များကို ခန္ဓာကိုယ်အတွင်း ပို့ဆောင်သောအခါ၊ ရှုပ်ထွေးသော ခန္ဓာကိုယ်တစ်သျှူးများ ရွေ့လျားနေသော အခြေအနေတွင် ၎င်းတို့ကို ခွဲခြားရန် ခက်ခဲသော်လည်း ၎င်းတို့ကို လေပြွန်အထက် သံလိုက်အား MP strings များ "လှုပ်လှုပ်ရွရွ" အဖြစ်သို့ ဘာသာပြန်ခြင်းဖြင့် ၎င်းတို့ကို ထောက်လှမ်းနိုင်စွမ်း တိုးမြင့်လာခဲ့သည်။ MP strings ၏ အမြင့်ဆုံးနေရာကို လူသားဆန်စွာ သတ်လိုက်သောအခါတွင် ဤရွေ့လျားမှုကို ခွဲခြားသိမြင်ရန် ပိုမိုလွယ်ကူပါသည်။ အချို့သော အမှုန်အမွှားများကို လေပြွန်တစ်လျှောက်တွင် အများအားဖြင့် တွေ့ရှိနိုင်သော်လည်း ဗီတိုလေ့လာမှုများနှင့် ဆန့်ကျင်ဘက်အားဖြင့် သံလိုက်ကို ဘာသာပြန်ခြင်းဖြင့် လေပြွန်တစ်လျှောက် အမှုန်အမွှားများကို ဆွဲယူ၍မရပါ။ ဤတွေ့ရှိချက်သည် လေပြွန်မျက်နှာပြင်ကို ဖုံးအုပ်ထားသည့် ချွဲများကို ပုံမှန်အားဖြင့် ရှူသွင်းထားသည့် အမှုန်အမွှားများကို လုပ်ဆောင်ပေးကာ ချွဲများကို ပိတ်မိစေပြီး နောက်ပိုင်းတွင် ချွဲများကို ရှင်းလင်းစေပါသည်။
လေပြွန်အပေါ်နှင့်အောက် ဆွဲဆောင်ရန်အတွက် သံလိုက်များကိုအသုံးပြုခြင်းသည် တစ်ချိန်တည်းတွင် အလွန်စုစည်းနေသည့် သံလိုက်စက်ကွင်းထက် ပိုမိုတူညီသောသံလိုက်စက်ကွင်းကို ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်သည်ဟု ကျွန်ုပ်တို့ယူဆခဲ့ပြီး၊ အမှုန်များပိုမိုတူညီစွာပျံ့နှံ့မှုကိုဖြစ်ပေါ်စေနိုင်သည်ဟု ကျွန်ုပ်တို့ယူဆပါသည်။ သို့သော် ကျွန်ုပ်တို့၏ပဏာမလေ့လာမှုသည် ဤယူဆချက်အား ထောက်ခံရန် ပြတ်သားသောသက်သေအထောက်အထားမတွေ့ရှိရပါ။ထို့အတူ၊ ပေါင်းစပ်ဖွဲ့စည်းမှု 3Fi သည် သံလိုက်တစ်စုံမဟုတ်ပေ။ ပုံပြဧရိယာတွင် အမှုန်အမွှားများ ပိုမိုစုပုံလာပါသည်။ ဤတွေ့ရှိချက်နှစ်ခုသည် သံလိုက်နှစ်ခုတပ်ဆင်မှုသည် MP ပစ်မှတ်အား ဒေသတွင်းထိန်းချုပ်မှုကို သိသိသာသာမတိုးတက်စေကြောင်း သက်သေပြနေပြီး ရလဒ်အားကောင်းသောသံလိုက်စွမ်းအားများသည် ဖွဲ့စည်းသတ်မှတ်ရန်ခက်ခဲသောကြောင့် ဤချဉ်းကပ်နည်းသည် လက်တွေ့ကျမှုနည်းပါးသွားစေသည်။ အလားတူစွာ၊ အထက်ပါသံလိုက်ကို ဦးတည်ခြင်းနှင့် ဤလေပြွန်များ (ပုံ။ ပုံ 3d) ဧရိယာ၏ ထပ်ဆင့်အရေအတွက်မှာလည်း တိုးလာခြင်းမရှိပေ။ ထုတ်ယူသည့်ဧရိယာအတွင်း သံလိုက်စက်ကွင်းအား လျော့နည်းစေသောကြောင့် အခြားရွေးချယ်စရာဖွဲ့စည်းပုံများသည် မအောင်မြင်နိုင်ပေ။ ထို့ကြောင့်၊ 30 ဒီဂရီထောင့်ရှိ သံလိုက်ဖွဲ့စည်းမှုပုံစံ (ပုံ 3a) သည် vivo စမ်းသပ်မှုတွင် အလွယ်ကူဆုံးနှင့် အထိရောက်ဆုံးနည်းလမ်းဖြစ်သည်ဟု ယူဆပါသည်။
LV-MP လေ့လာမှုတွင် LV vector များကို CombiMag နှင့် ပေါင်းစပ်ပြီး သံလိုက်စက်ကွင်းအတွင်း ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာ အနှောင့်အယှက်များ ပေးပို့လာသောအခါ၊ ထိန်းချုပ်မှုများနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက လေပြွန်အတွင်း ကူးပြောင်းခြင်းအဆင့်သည် သိသိသာသာ တိုးလာကြောင်း ပြသခဲ့သည်။ synchrotron ပုံရိပ်လေ့လာမှုများနှင့် LacZ ရလဒ်များအပေါ် အခြေခံ၍ သံလိုက်စက်ကွင်းသည် LV ကို နက်ရှိုင်းသော vector အတွင်းသို့ ထိုးဖောက်ဝင်ရောက်ကာ trachea အတွင်းသို့ ချက်ခြင်း ထိန်းထားနိုင်ခဲ့ကြောင်း ထင်ရှားပါသည်။ အဆုတ်။ ယင်းသို့သော ပစ်မှတ်ထား တိုးတက်မှုများသည် မွေးဖွားပြီးသော titers၊ ပစ်မှတ်မဟုတ်သော ကူးပြောင်းမှု၊ ရောင်ရမ်းမှုနှင့် ကိုယ်ခံအားဆိုင်ရာ ဘေးထွက်ဆိုးကျိုးများနှင့် မျိုးဗီဇသယ်ဆောင်မှုကုန်ကျစရိတ်များကို လျှော့ချစဉ်တွင် ပိုမိုထိရောက်မှုကို ဖြစ်ပေါ်စေနိုင်သည်။ အရေးကြီးသည်မှာ ထုတ်လုပ်သူ၏အဆိုအရ CombiMag ကို အခြားသောဗိုင်းရပ်စ်ပိုးမွှားများ (ဥပမာ AAV ကဲ့သို့) နှင့် နျူကလိယအက်ဆစ်များအပါအဝင် အခြားဗီဇလွှဲပြောင်းမှုနည်းလမ်းများနှင့် တွဲဖက်အသုံးပြုနိုင်ပါသည်။