Nature.comን ስለጎበኙ እናመሰግናለን። የሚጠቀሙበት የአሳሽ ስሪት ለCSS የተወሰነ ድጋፍ አለው። ለተሻለ ተሞክሮ፣ የዘመነ አሳሽ እንዲጠቀሙ (ወይም በኢንተርኔት ኤክስፕሎረር ውስጥ የተኳሃኝነት ሁነታን እንዲያጠፉ) እንመክራለን። ይህ በእንዲህ እንዳለ፣ ቀጣይነት ያለው ድጋፍ ለማረጋገጥ፣ ጣቢያውን ያለ ቅጦች እና ጃቫስክሪፕት እናሳያለን።
የሳይስቲክ ፋይብሮሲስ የሳንባ በሽታን ለማከም የሚያገለግሉ የጂን ቬክተሮች የአየር መተላለፊያ መንገዶችን ኢላማ ማድረግ አለባቸው ምክንያቱም የዳርቻ የሳንባ ትራንስዱክሽን የሕክምና ጥቅም ስለማይሰጥ። የቫይረስ ትራንስዱክሽን ውጤታማነት በቀጥታ ከቬክተር የመኖሪያ ጊዜ ጋር የተያያዘ ነው። ሆኖም፣ እንደ ጂን ተሸካሚዎች ያሉ የማድረሻ ፈሳሾች በተነሳሽነት ወቅት ወደ አልቪዮሊ በተፈጥሮ ይሰራጫሉ፣ እና የማንኛውም አይነት የሕክምና ቅንጣቶች በ mucociliary ትራንስፖርት በፍጥነት ይጸዳሉ። በአየር መተላለፊያዎች ውስጥ የጂን ተሸካሚዎች የመኖሪያ ጊዜን ማራዘም አስፈላጊ ነው ነገር ግን ለማሳካት አስቸጋሪ ነው። ወደ አየር መተላለፊያዎች ወለል ሊመሩ የሚችሉ የጂን ተሸካሚ-የተጣመሩ መግነጢሳዊ ቅንጣቶች ክልላዊ ኢላማ ማድረግን ሊያሻሽል ይችላል። በ vivo ምስላዊነት ተግዳሮቶች ምክንያት፣ እንደዚህ ያሉ ትናንሽ መግነጢሳዊ ቅንጣቶች በአየር መተላለፊያው ወለል ላይ በተተገበረ መግነጢሳዊ መስክ ፊት ባህሪ በደንብ አልተረዳም። የዚህ ጥናት ዓላማ በ vivo ውስጥ የግለሰብ እና የጅምላ ቅንጣት ባህሪ ተለዋዋጭነት እና ቅጦችን ለመመርመር የሲንክሮትሮን ምስልን መጠቀም ነበር። ከዚያም በማግኔቲክ መስክ ፊት የሌኒቫይራል መግነጢሳዊ ቅንጣቶች አቅርቦት በአይጥ ትራኪያ ውስጥ የትራንስዱክሽን ቅልጥፍናን ይጨምራል ወይ የሚለውን ገምግመናል። Synchrotron የኤክስሬይ ኢሜጂንግ በብልቃጥ እና በቪቮ ውስጥ ባሉ የማይንቀሳቀሱ እና የሚንቀሳቀሱ መግነጢሳዊ መስኮች ውስጥ የመግነጢሳዊ ቅንጣቶችን ባህሪ ያሳያል። ቅንጣቶች በማግኔቶች አማካኝነት ሕያው በሆነው የመተንፈሻ ቱቦ ወለል ላይ በቀላሉ ሊጎተቱ አይችሉም፣ ነገር ግን በመጓጓዣ ጊዜ፣ ክምችቶቹ መግነጢሳዊ መስክ በጣም ጠንካራ በሆነበት የእይታ መስክ ውስጥ ይከማቻሉ። የሌኒቫይራል መግነጢሳዊ ቅንጣቶች መግነጢሳዊ መስክ ባለበት ጊዜ የመግነጢሳዊ መስክ ሲደርስ የመግነጢሳዊ መስክ ውጤታማነትም በስድስት እጥፍ ጨምሯል። እነዚህ ውጤቶች አንድ ላይ እንደሚያመለክቱት የሌኒቫይራል መግነጢሳዊ ቅንጣቶች እና መግነጢሳዊ መስኮች የጂን ቬክተር ኢላማን ለማሻሻል እና የመተንፈሻ ቱቦዎችን በቪቮ ውስጥ በማካሄድ የመግነጢሳዊ መስመር ደረጃዎችን ለመጨመር ጠቃሚ አቀራረቦች ሊሆኑ ይችላሉ።
ሲስቲክ ፋይብሮሲስ (CF) የሚከሰተው የCF ትራንስሜምብራን ኮንዳክሽን ተቆጣጣሪ (CFTR) በሚባል አንድ ጂን ውስጥ ባለው ልዩነት ምክንያት ነው። የCFTR ፕሮቲን በሰውነት ውስጥ በብዙ ኤፒተልየል ሴሎች ውስጥ የሚገኝ የአዮን ቻናል ሲሆን ይህም የCF pathogenesis ዋና ቦታ የሆነውን የአየር መተላለፊያ መንገዶችን ጨምሮ ነው። የCFTR ጉድለቶች ወደ ያልተለመደ የውሃ መጓጓዣ፣ የአየር መተላለፊያውን ወለል እርጥበት ማድረቅ እና የአየር መተላለፊያው ወለል ፈሳሽ (ASL) ንብርብር ጥልቀት መቀነስን ያስከትላሉ። ይህ ደግሞ የ mucociliary transportation (MCT) ስርዓት የተነፈሱ ቅንጣቶችን እና በሽታ አምጪ ተህዋሲያንን ከአየር መተላለፊያዎች የማጽዳት ችሎታን ይጎዳል። ግባችን የCFTR ጂንን ትክክለኛ ቅጂ ለማቅረብ እና ASL፣ MCT እና የሳንባ ጤናን ለማሻሻል እና እነዚህን መለኪያዎች በ vivo1 ውስጥ ለመለካት የሚችሉ አዳዲስ ቴክኖሎጂዎችን ማዳበርን ለመቀጠል የሌኒቫይራል (LV) ጂን ቴራፒ ማዘጋጀት ነው።
የLV ቬክተሮች ለሲኤፍ የአየር መተላለፊያ ጂን ሕክምና ግንባር ቀደም እጩዎች ናቸው፣ በዋናነት የሕክምና ጂንን ወደ አየር መተላለፊያ መሰረታዊ ሴሎች (የአየር መተላለፊያ ግንድ ሴሎች) በቋሚነት ማዋሃድ ስለሚችሉ። ይህ አስፈላጊ ነው ምክንያቱም ተግባራዊ ጂን-የተስተካከሉ CF-ተያያዥ የአየር መተላለፊያ ወለል ሴሎችን በመለየት መደበኛውን እርጥበት እና የንፍጥ ማጽዳትን መመለስ ስለሚችሉ፣ ይህም የዕድሜ ልክ ጥቅሞችን ያስገኛል። የLV ቬክተሮች በሚመራው የአየር መተላለፊያ መንገድ ላይ መመራት አለባቸው፣ ምክንያቱም የሲኤፍ የሳንባ በሽታ የሚጀምረው እዚህ ነው። የቬክተሩ ወደ ሳንባ ውስጥ በጥልቀት ማድረስ አልቪዮላር ትራንስዱክሽን ሊያስከትል ይችላል፣ ነገር ግን ይህ በሲኤፍ ውስጥ ምንም ዓይነት የሕክምና ጥቅም የለውም። ሆኖም፣ እንደ ጂን ተሸካሚዎች ያሉ ፈሳሾች ከተወለዱ በኋላ ከተነሳሱ በኋላ በተፈጥሯቸው ወደ አልቪዮሊ ይዛወራሉ3,4 እና የሕክምና ቅንጣቶች በMCT በፍጥነት ወደ አፍ ውስጥ ይጸዳሉ። የLV ትራንስዱክሽን ውጤታማነት ቬክተሩ ከዒላማ ሴሎች አጠገብ ሆኖ ሴሉላር እንዲወስድ ለማስቻል ከሚቆይበት ጊዜ ርዝመት ጋር በቀጥታ የተያያዘ ነው - "የመኖሪያ ጊዜ"5 - ይህም በተለመደው የክልል የአየር ፍሰት እንዲሁም በተቀናጀ የቅንጣት ሙከስ መያዝ እና MCT በቀላሉ ይቀንሳል። ለሲኤፍ፣ በአየር መተላለፊያው ውስጥ የLV የመኖሪያ ጊዜን የማራዘም ችሎታ በዚህ ክልል ውስጥ ከፍተኛ የትራንስዱክሽን ደረጃዎችን ለማሳካት አስፈላጊ ነው፣ ነገር ግን እስካሁን ድረስ ቆይቷል። ፈታኝ ነበር።
ይህንን እንቅፋት ለማሸነፍ፣ የLV መግነጢሳዊ ቅንጣቶች (MPs) በሁለት ተጓዳኝ መንገዶች ሊረዱ እንደሚችሉ እንጠቁማለን። በመጀመሪያ፣ ኢላማ ለማድረግ እና የጂን ተሸካሚ ቅንጣቶች በሚፈለገው የአየር መተላለፊያ ክልል ውስጥ እንዲኖሩ ለመርዳት በማግኔቲክ መንገድ ወደ አየር መተላለፊያው ወለል ሊመሩ ይችላሉ፤ እና ASL) ወደ ሴል ንብርብር 6 እንዲሸጋገሩ። MPs ከፀረ እንግዳ አካላት፣ ከኬሞቴራፒ መድኃኒቶች ወይም ከሴል ሽፋኖች ጋር የሚጣበቁ ወይም ከሚመለከታቸው የሴል ወለል ተቀባዮች ጋር የሚጣበቁ እና በስታቲክ ኤሌክትሪክ ፊት በቲሞር ቦታዎች ላይ የሚከማቹ እንደ ኢላማ የመድኃኒት አቅርቦት ተሽከርካሪዎች በስፋት ጥቅም ላይ ውለዋል። ለካንሰር ሕክምና የሚሆኑ መግነጢሳዊ መስኮች 7. ሌሎች “ሃይፐርተርማል” ቴክኒኮች የሚወዛወዙ መግነጢሳዊ መስኮች ሲጋለጡ MPsን ለማሞቅ ያለሙ ሲሆን በዚህም የቲሞር ሴሎችን ያጠፋሉ። መግነጢሳዊ መስክ ወደ ሴሎች ዝውውርን ለማሻሻል እንደ ትራንስፌክሽን ወኪል ሆኖ የሚያገለግልበት የማግኔቲክ ትራንስፌክሽን መርህ በተለምዶ በብልቃጥ ውስጥ ጥቅም ላይ የሚውለው ለመተላለፍ አስቸጋሪ ለሆኑ የሴል መስመሮች የተለያዩ ቫይራል ያልሆኑ እና ቫይራል ጂን ቬክተሮችን በመጠቀም ነው። የLV ማግኔቶትራንስፌክሽን ውጤታማነት የተረጋገጠው በብልቃጥ ውስጥ LV-MPዎችን ወደ ሰው ብሮንካይያል ኤፒተልየል ሴል መስመር በማድረስ ሲሆን፣ ከLV ቬክተር ብቻ ጋር ሲነጻጸር የትራንስዱክሽን ውጤታማነት በ186 እጥፍ ጨምሯል።LV-MP በብልቃጥ ውስጥ CF ሞዴል ላይም ተተግብሯል፣ መግነጢሳዊ ትራንስፌክሽን በአየር-ፈሳሽ በይነገጽ ባህሎች ውስጥ የLV ትራንስጀክሽን በCF አክታ ፊት በ20 እጥፍ ጨምሯል10። ሆኖም ግን፣ የአካል ክፍሎች በቪቮ ማግኔቶትራንስፌክሽን በአንጻራዊ ሁኔታ ሲታይ ብዙም ትኩረት አልተሰጠውም እና በጥቂት የእንስሳት ጥናቶች ብቻ ተገምግሟል11,12,13,14,15, በተለይም በሳንባዎች ውስጥ16,17. ያም ሆኖ፣ በሲኤፍ የሳንባ ህክምና ውስጥ የማግኔቲክ ትራንስፌክሽን እድሎች ግልጽ ናቸው። ታን እና ሌሎች (2020) “ውጤታማ የሆነ የማግኔቲክ ናኖፓርቲክል የሳንባ አቅርቦትን የሚያሳይ የፅንሰ-ሀሳብ ማረጋገጫ ጥናት በሲኤፍ ታካሚዎች ላይ ክሊኒካዊ ውጤቶችን ለማሻሻል የወደፊት የሲኤፍቲአር የመተንፈስ ስልቶች መንገድ ይጠርጋል”6።
በአየር መተላለፊያ ወለል ላይ የሚተገበሩ መግነጢሳዊ መስኮች ባሉበት ቦታ ላይ ትናንሽ መግነጢሳዊ ቅንጣቶች ባህሪ ለማየትና ለማጥናት አስቸጋሪ ስለሆነ ብዙም ግንዛቤ የለውም። በሌሎች ጥናቶች፣ የጋዝ ቦይ ወለል እርጥበትን በቀጥታ ለመለካት እና የሕክምና ውጤታማነትን እንደ መጀመሪያ አመላካች ሆኖ የሚያገለግል በASL ጥልቀት18 እና MCT ባህሪ19,20 ውስጥ ያሉ ጥቃቅን ውስጣዊ ለውጦችን ያለ ወራሪ እይታ እና ለመለካት የሚያስችል የሲንክሮትሮን-ፕሮፓጋዜሽን-ተኮር የደረጃ-ንፅፅር ኤክስሬይ ኢሜጂንግ (PB-PCXI) ዘዴ አዘጋጅተናል። በተጨማሪም፣ የMCT ግምገማ ዘዴያችን PB-PCXI21ን በመጠቀም የሚታዩ እንደ MCT ማርከሮች ከአሉሚና ወይም ከፍተኛ የማጣቀሻ መረጃ ጠቋሚ መስታወት የተውጣጡ ከ10-35 µm ዲያሜትር ያላቸው ቅንጣቶችን ይጠቀማል። ሁለቱም ቴክኒኮች MPን ጨምሮ የተለያዩ የቅንጣት ዓይነቶችን ለማየት ተስማሚ ናቸው።
ከፍተኛ የቦታ እና የጊዜ ጥራት ስላለው፣ የእኛ በPB-PCXI ላይ የተመሠረተ ASL እና MCT ትንተና ቴክኒኮች በቪቮ ውስጥ የአንድ እና የጅምላ ቅንጣት ባህሪ ተለዋዋጭነት እና ቅጦችን ለመመርመር በጣም ተስማሚ ናቸው፣ ይህም የMP ጂን አቅርቦት ቴክኒኮችን ለመረዳት እና ለማመቻቸት ይረዳናል። እዚህ የምንጠቀምበት አቀራረብ የ SPring-8 BL20B2 beamline ን በመጠቀም ካደረግናቸው ጥናቶች የተገኘ ሲሆን፣ በጂን ተሸካሚ መጠን የእንስሳት ጥናቶች 3,4 ውስጥ የሚታዩትን ወጥ ያልሆኑ የጂን አገላለጽ ቅጦችን ለማብራራት የሚረዳንን የሻም ቬክተር መጠን ወደ አይጦች የአፍንጫ እና የሳንባ አየር መንገዶች ከተላከ በኋላ የፈሳሽ እንቅስቃሴን በዓይነ ሕሊናችን ተመልክተናል።
የዚህ ጥናት ዓላማ በሕያዋን አይጦች የመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ የተከታታይ MPዎችን እንቅስቃሴ በሕያው አካል ውስጥ ለማየት የሲንክሮትሮን PB-PCXIን መጠቀም ነበር። እነዚህ የPB-PCXI ምስል ጥናቶች የተነደፉት የተለያዩ MPዎችን፣ የማግኔቲክ መስክ ጥንካሬዎችን እና ቦታዎችን በMP እንቅስቃሴ ላይ ያላቸውን ተጽእኖ ለመወሰን ነው። ከውጭ የሚተገበር መግነጢሳዊ መስክ የተላከው MP እንዲቆይ ወይም ወደ ኢላማው አካባቢ እንዲንቀሳቀስ እንደሚረዳ ገምተናል። እነዚህ ጥናቶች ከተቀመጡ በኋላ በትራኪያ ውስጥ የሚቆዩትን ቅንጣቶች ብዛት ከፍ የሚያደርጉ የማግኔት ውቅሮችን ለመለየት አስችለዋል። በሁለተኛው የጥናት ተከታታይ፣ በአየር መተላለፊያ መንገድ ላይ የLV-MPዎችን ማድረስ የተሻሻለ የLV ማስተላለፊያ ቅልጥፍናን ያስከትላል በሚል ግምት ላይ በመመስረት በቪቮ ወደ አይጥ አየር መንገድ የLV-MPዎችን ማስተላለፍ የሚያስከትለውን የትራንስዱክሽን ንድፍ ለማሳየት ይህንን ምርጥ ውቅር ለመጠቀም ሞክረናል።
ሁሉም የእንስሳት ጥናቶች የተከናወኑት በአዴላይድ ዩኒቨርሲቲ (M-2019-060 እና M-2020-022) እና በSPring-8 Synchrotron የእንስሳት ሥነ ምግባር ኮሚቴ በጸደቁ ፕሮቶኮሎች መሠረት ነው። ሙከራዎች የተከናወኑት በARRIVE መመሪያዎች መሠረት ነው።
ሁሉም የኤክስሬይ ምስል የተከናወነው በጃፓን በሚገኘው SPring-8 synchrotron በBL20XU beamline ላይ ሲሆን ቀደም ሲል ከተገለጸው ጋር ተመሳሳይ በሆነ ቅንብር በመጠቀም ነው። ባጭሩ የሙከራ ሳጥኑ ከ synchrotron ማከማቻ ቀለበት 245 ሜትር ርቀት ላይ ይገኛል። ለክፍል ምስል ጥናት ጥናቶች 0.6 ሜትር የናሙና-ወደ-መለየት ርቀት እና ለደረጃ ንፅፅር ተፅእኖዎችን ለመፍጠር 0.3 ሜትር ለኢንቪኦ ምስል ጥናቶች ጥቅም ላይ ይውላል። 25 keV የሆነ ሞኖክሮማቲክ ጨረር ኃይል ጥቅም ላይ ውሏል። ምስሎቹ የተነሱት ከ sCMOS ማወቂያ ጋር በተጣመረ ከፍተኛ ጥራት ባለው የኤክስሬይ መቀየሪያ (SPring-8 BM3) በመጠቀም ነው። መቀየሪያው 10 µm ውፍረት ያለው ስሲንቲሌተር (Gd3Al2Ga3O12) በመጠቀም ኤክስሬይ ወደ የሚታይ ብርሃን ይቀይረዋል፣ ከዚያም በ × 10 ማይክሮስኮፕ ዓላማ (NA 0.3) በመጠቀም ወደ sCMOS ዳሳሽ ይመራል። የsCMOS ማወቂያው Orca-Flash4.0 (Hamamatsu Photonics፣ ጃፓን) የድርድር መጠን ያለው ሲሆን የ... 2048 × 2048 ፒክስል እና 6.5 × 6.5 µm የሆነ ጥሬ የፒክሰል መጠን። ይህ ማዋቀር 0.51 µm የሆነ ውጤታማ የኢሶትሮፒክ ፒክስል መጠን እና በግምት 1.1 ሚሜ × 1.1 ሚሜ የእይታ መስክ ያስገኛል። የመተንፈሻ አካላትን እንቅስቃሴ ቅርሶች በመቀነስ በአየር መንገዱ ውስጥ እና ውጭ ያሉትን የማግኔቲክ ቅንጣቶች የምልክት-ወደ-ጫጫታ ጥምርታ ከፍ ለማድረግ 100 ms የመጋለጥ ርዝመት ተመርጧል። በቪቮ ጥናቶች ውስጥ፣ በኤክስሬይ መንገድ ላይ ፈጣን የኤክስሬይ መዝጊያ በመጋለጫዎች መካከል የኤክስሬይ ጨረርን በመዝጋት የጨረር መጠንን ለመገደብ ተተክሏል።
የBL20XU የምስል ክፍል የባዮሴፍቲ ደረጃ 2 የተረጋገጠ ስላልሆነ የLV ተሸካሚው በማንኛውም የSPring-8 PB-PCXI የምስል ጥናቶች ላይ ጥቅም ላይ አልዋለም። በምትኩ፣ መግነጢሳዊ መስኮች በመስታወት ካፒላሪዎች ውስጥ እና ከዚያም በህይወት ባሉ የአየር መተላለፊያዎች ውስጥ የMP እንቅስቃሴን እንዴት እንደሚነኩ ለመረዳት ከሁለት የንግድ አቅራቢዎች - የተለያዩ መጠኖችን፣ ቁሳቁሶችን፣ የብረት ክምችቶችን እና አፕሊኬሽኖችን የሚሸፍኑ - በሚገባ የተገለጹ MPዎችን መርጠናል። በላዩ ላይ። የMPዎች መጠን ከ0.25 እስከ 18 μm ሲሆን ከተለያዩ ቁሳቁሶች የተሠሩ ናቸው (ሠንጠረዥ 1ን ይመልከቱ)፣ ነገር ግን የእያንዳንዱ ናሙና ስብጥር፣ በMP ውስጥ ያሉትን መግነጢሳዊ ቅንጣቶች መጠን ጨምሮ፣ አይታወቅም። በሰፊው የMCT ጥናቶቻችን 19፣ 20፣ 21፣ 23፣ 24 ላይ በመመስረት፣ እስከ 5 μm የሚደርሱ ትናንሽ MPs በትራኪያ አየር መንገድ ወለል ላይ ሊታዩ እንደሚችሉ እንጠብቃለን፣ ለምሳሌ ተከታታይ ክፈፎችን በመቀነስ የMP እንቅስቃሴን የተሻሻለ ታይነት ለማየት። አንድ 0.25 μm መጠን ያለው MP ከምስል መሳሪያው ጥራት ያነሰ ነው፣ ነገር ግን PB-PCXI የድምፅ ንፅፅራቸውን እና ከተቀመጡ በኋላ የተቀመጡበትን የገጽታ ፈሳሽ እንቅስቃሴ እንደሚያውቅ ይጠበቃል።
በሠንጠረዥ 1 ውስጥ ለእያንዳንዱ MP ናሙናዎች የተዘጋጁት በ20 μl የመስታወት ካፒላሪዎች (ድራምመንድ ማይክሮካፕስ፣ ፒኤ፣ ዩኤስኤ) ሲሆን ውስጣዊ ዲያሜትር 0.63 ሚሜ ነው። ኮርፐስኩላር ቅንጣቶች በውሃ ውስጥ ይገኛሉ፣ የኮምቢማግ ቅንጣቶች ደግሞ በአምራቹ የግል ፈሳሽ ውስጥ ይገኛሉ። እያንዳንዱ ቱቦ በግማሽ በፈሳሽ (በግምት 11 μl) የተሞላ እና በናሙና መያዣው ላይ ይቀመጣል (ምስል 1 ይመልከቱ)። የመስታወት ካፒላሪዎች በቅደም ተከተል በምስል ሳጥኑ ውስጥ ባለው የናሙና ደረጃ ላይ በአግድም ተቀምጠዋል እና የፈሳሹን ጠርዞች አስቀምጠዋል። 19 ሚሜ ዲያሜትር (28 ሚሜ ርዝመት) የኒኬል ሼል ብርቅዬ ምድር ኒዮዲሚየም ብረት ቦሮን (NdFeB) ማግኔት (N35፣ የድመት ቁጥር LM1652፣ ጄይካር ኤሌክትሮኒክስ፣ አውስትራሊያ) ከ1.17 የተረፈ ማግኔቲዜሽን ጋር ቴስላ ከተለየ የትርጉም ደረጃ ጋር ተያይዟል በምስል ወቅት ቦታውን በርቀት ይለውጡ። የኤክስሬይ ምስል ማግኛ የሚጀምረው ማግኔቱ ከናሙናው በግምት 30 ሚሜ ሲቀመጥ እና ምስሎቹ በሰከንድ በ4 ክፈፎች ፍጥነት ሲገኙ ነው። በምስል ወቅት ማግኔቱ ወደ የመስታወት ካፒላሪ ቱቦ (ከ1 ሚሊ ሜትር ርቀት ላይ) እና ከዚያም የመስክ ጥንካሬ እና አቀማመጥ ተፅእኖዎችን ለመገምገም በቱቦው ላይ ተተርጉሟል።
በናሙና xy የትርጉም ደረጃ ላይ በመስታወት ካፒላሪዎች ውስጥ የMP ናሙናዎችን የያዘ በብልቃጥ ምስል ዝግጅት። የኤክስሬይ ጨረር መንገድ በቀይ የተቆራረጠ መስመር ምልክት ተደርጎበታል።
የፓርላማ አባላት በብልቃጥ ውስጥ ታይነት ከተረጋገጠ በኋላ፣ ከእነዚህ ውስጥ የተወሰኑት በዱር ዓይነት ሴት አልቢኖ ዊስታር አይጦች (~12 ሳምንታት ዕድሜ፣ ~200 ግ) ውስጥ በቪቮ ውስጥ ተፈትነዋል። 0.24 mg/kg ሜዴቶሚዲን (ዶሚቶር®፣ ዜኖአክ፣ ጃፓን)፣ 3.2 mg/kg ሚዳዞላም (ዶርሚኩም®፣ አስቴልላስ ፋርማ፣ ጃፓን) እና 4 mg/kg ቡቶርፋኖል (ቬቶርፋሌ®፣ ሜጂ ሴይካ) አይጦች በፔሪቶናል መርፌ በፋርማ ድብልቅ፣ ጃፓን) ሰመመን ተሰጥቷቸዋል። ከማደንዘዣ በኋላ፣ በትራኪያው ዙሪያ ያለውን ፀጉር በማስወገድ፣ የኢንዶትራቸል ቱቦ (ET፤ 16 Ga iv cannula፣ Terumo BCT) በማስገባት እና የሰውነት ሙቀት ለመጠበቅ የሙቀት ከረጢት ባለው ብጁ የምስል ሳህን ላይ በማገድ ለምስል ዝግጅት ተደርገዋል። ከዚያም የምስል ሰሌዳው እንደሚታየው በኤክስሬይ ምስሉ ውስጥ ያለውን ትራኪያ በአግድም ለማስተካከል በምስል ሳጥኑ ውስጥ ካለው የናሙና የትርጉም ደረጃ ጋር በትንሹ አንግል ላይ ተያይዟል። በስእል 2ሀ.
(ሀ) በSPring-8 የምስል ሳጥን ውስጥ የኢንቪቮ ኢሜጂንግ ማዋቀር፣ የኤክስሬይ ጨረር መንገድ በቀይ የተቆራረጠ መስመር ምልክት ተደርጎበታል።(ለ፣ሐ) በትራኪያው ላይ የማግኔት አካባቢያዊነት በሁለት ኦርቶጎን የተገጠሙ የአይፒ ካሜራዎችን በመጠቀም በርቀት ተከናውኗል። በማያ ገጹ ምስል ግራ በኩል፣ ጭንቅላቱን የያዘው የሽቦ ሉፕ እና በET ቱቦ ውስጥ የማድረሻ ካኑላ በቦታው ይታያል።
በ100 μl የመስታወት መርፌ በመጠቀም የርቀት መቆጣጠሪያ ያለው የሲሪንጅ ፓምፕ ሲስተም (UMP2፣ World Precision Instruments፣ Sarasota፣ FL) በ30 Ga መርፌ በኩል ከPE10 ቱቦ (OD 0.61 ሚሜ፣ ID 0.28 ሚሜ) ጋር ተገናኝቷል። የET ቱቦውን ሲያስገቡ ጫፉ በትራኪያው ውስጥ በትክክለኛው ቦታ ላይ መሆኑን ለማረጋገጥ ቱቦውን ምልክት ያድርጉበት። ማይክሮፓምፑን በመጠቀም የቱቦው ጫፍ በሚቀርበው የMP ናሙና ውስጥ ሲጠመቅ የሲሪንጅ ፕለገሩ ተወግዷል። ከዚያም የተጫነው የማድረሻ ቱቦ ወደ ኢንዶትራሼል ቱቦ ውስጥ ገብቷል፣ ጫፉም በሚጠበቀው የተተገበረው መግነጢሳዊ መስክ ጠንካራው ክፍል ውስጥ አስቀመጠ። የምስል ማግኛው ከአርዱዲኖ ጋር በተገናኘ የመተንፈሻ ማወቂያ በመጠቀም ቁጥጥር ይደረግበታል፣ እና ሁሉም ምልክቶች (ለምሳሌ የሙቀት መጠን፣ መተንፈስ፣ የመዝጊያ መክፈቻ/መዝጊያ እና የምስል ማግኛ) በፓወርላብ እና ላብቻርት (AD Instruments፣ ሲድኒ፣ አውስትራሊያ) በመጠቀም ተመዝግበዋል 22። ምስል ሲቀርጹ መያዣው በማይደረስበት ጊዜ ሁለት የአይፒ ካሜራዎች (ፓናሶኒክ BB-SC382) እርስ በእርስ በግምት 90° ርቀት ላይ ተቀምጠዋል። እና በምስል ወቅት ከትራኪያው ጋር በተያያዘ የማግኔት አቀማመጥን ለመከታተል ጥቅም ላይ ውለዋል (ምስል 2ለ፣ሐ)። የእንቅስቃሴ ቅርሶችን ለመቀነስ፣ በመጨረሻው የማዕበል ፍሰት ሜዳ ላይ በአንድ እስትንፋስ አንድ ምስል ተገኝቷል።
ማግኔት ከምስል ማስቀመጫው ውጭ በርቀት ሊገኝ ከሚችል ሁለተኛ ደረጃ ጋር ተያይዟል። የተለያዩ የማግኔት አቀማመጦች እና ውቅሮች ተፈትነዋል፣ ከእነዚህም ውስጥ፡- ከትራኪያው በላይ በግምት 30° አንግል ላይ ተጭነዋል (በስዕሎች 2a እና 3a ላይ የሚታዩት ውቅሮች)፤ አንድ ማግኔት ከእንስሳው በላይ እና ሌላኛው ከታች፣ ምሰሶዎቹ እንዲሳቡ ተዘጋጅተዋል (ምስል 3b)፤ አንድ ማግኔት ከእንስሳው በላይ እና ሌላኛው ከታች፣ ምሰሶዎቹ እንዲሸሹ ተዘጋጅተዋል (ምስል 3c)፤ እና አንድ ማግኔት ከላይ እና ከትራኪያው ጋር ቀጥ ያለ (ምስል 3d)። እንስሳው እና ማግኔቱ ከተዋቀሩ እና የሚፈተነው MP በመርፌ ፓምፕ ውስጥ ከተጫነ በኋላ፣ ምስሎችን ሲያገኙ በ4 μl/ሰከንድ ፍጥነት 50 μl መጠን ያቅርቡ። ከዚያም ማግኔቱ ምስሎችን ማግኘትን በመቀጠል በትራኪያው በኩል ወደ ኋላ እና ወደ ፊት ወይም ወደ ጎን ይንቀሳቀሳል።
ለኢንቪቮ ኢሜጂንግ የማግኔት ውቅር (ሀ) በግምት 30° አንግል ላይ ከትራኪያ በላይ ያለ አንድ ማግኔት፣ (ለ) ለመሳብ የተቀመጡ ሁለት ማግኔቶች፣ (ሐ) ለመሸሽ የተቀመጡ ሁለት ማግኔቶች፣ (መ) በላይ እና በትራኪያ ውስጥ ቀጥ ያለ አንድ ማግኔት። ታዛቢው ከአፍ ወደ ሳንባዎች በትራኪያ በኩል ወደ ታች ተመለከተ፣ እና የኤክስሬይ ጨረር በአይጡ ግራ በኩል አልፎ በቀኝ በኩል ወጣ። ማግኔቱ በአየር መንገዱ ርዝመት ወይም በኤክስሬይ ጨረር አቅጣጫ ከትራኪያው በላይ ወደ ግራ እና ቀኝ ይንቀሳቀሳል።
እንዲሁም ግራ የሚያጋባ የመተንፈስ እና የልብ እንቅስቃሴ በሌለበት የአየር መተላለፊያ ቱቦዎች ውስጥ ያሉትን ቅንጣቶች ታይነት እና ባህሪ ለማወቅ ሞክረናል። ስለዚህ፣ በምስል ዝግጅቱ መጨረሻ ላይ፣ እንስሳት በፔንቶባርቢታል ከመጠን በላይ በመጠጣት በሰው ልጅ ተገድለዋል (ሶምኖፔንቲል፣ ፒትማን-ሙር፣ ዋሽንግተን ክሮሲንግ፣ ዩኤስኤ፤ ~65 ሚ.ግ./ኪ.ግ. ip)። አንዳንድ እንስሳት በምስል ፕላትፎርሙ ላይ ቀርተዋል፣ እና መተንፈስ እና የልብ ምት ከቆመ በኋላ፣ የምስል ሂደቱ ተደግሟል፣ ምንም MP በአየር መተላለፊያ ወለል ላይ ካልታየ ተጨማሪ MP መጠን ተጨምሯል።
የተገኙት ምስሎች ጠፍጣፋ-ሜዳ እና ጨለማ-ሜዳ ተስተካክለው ከዚያም በMATLAB (R2020a፣ The Mathworks) በተጻፈ ብጁ ስክሪፕት በመጠቀም ወደ ፊልም (በሰከንድ 20 ክፈፎች፤ እንደ የመተንፈሻ ፍጥነት መጠን ከ15-25 × መደበኛ ፍጥነት) ተሰብስበዋል።
ሁሉም የLV ጂን ቬክተር አቅርቦት ጥናቶች የተካሄዱት በአዴላይድ ዩኒቨርሲቲ በሚገኘው የላቦራቶሪ እንስሳት ምርምር ተቋም ሲሆን የSPring-8 ሙከራ ውጤቶችን በመጠቀም በማግኔቲክ መስክ ፊት የLV-MP አቅርቦት በቪቮ ውስጥ የጂን ዝውውርን ሊያሻሽል ይችል እንደሆነ ለመገምገም ያለመ ነው። የMP እና የማግኔቲክ መስክ ውጤቶችን ለመገምገም ሁለት የእንስሳት ቡድኖች ታክመዋል፡ አንደኛው ቡድን ማግኔት የተቀመጠበት LV-MP ያለው የቁጥጥር ቡድን ተሰጥቶት ሌላኛው ቡድን ደግሞ ማግኔት የሌለው LV-MP ያለው የቁጥጥር ቡድን አግኝቷል።
የLV ጂን ቬክተሮች የተፈጠሩት ቀደም ሲል በተገለጹት ዘዴዎች 25፣ 26 ነው። የLacZ ቬክተር በ MPSV ፕሮሞተር (LV-LacZ) የሚመራውን በኑክሌር-አካባቢያዊ ቤታ-ጋላክቶሲዳሴ ጂንን ያሳያል፣ ይህም በሳንባ ቲሹ የፊት ክፍሎች እና በቲሹ ክፍሎች ውስጥ በሚታዩ በተለወጡ ሴሎች ውስጥ ሰማያዊ ምላሽ ምርት ያመነጫል። ቲትሬሽን በሴል ባህሎች ውስጥ የLacZ ፖዘቲቭ ሴሎችን ቁጥር በእጅ በመቁጠር በ TU/ml ውስጥ ያለውን ቲተር ለማስላት በሂሞሳይቶሜትር በመቁጠር ተከናውኗል። ተሸካሚዎች በ -80 °C ክሪዮፕሬዝድ ተደርገው ይቆያሉ፣ ከመጠቀምዎ በፊት ይቀልጣሉ፣ እና ከ CombiMag ጋር በ1፡1 ጥምርታ በመደባለቅ እና ከማድረስዎ በፊት ቢያንስ ለ30 ደቂቃዎች በበረዶ ላይ ይቆያሉ።
መደበኛ የስፕራግ ዳውሊ አይጦች (n = 3/ቡድን፣ ~2-3) በ0.4 ሚ.ግ/ኪ.ግ ሜዴቶሚዲን (ዶሚተር፣ ኢሊየም፣ አውስትራሊያ) እና 60 ሚ.ግ/ኪ.ግ ኬታሚን (ኢሊየም፣ አውስትራሊያ) ወር እድሜ ያለው) መርፌ እና ያለ ቀዶ ጥገና የአፍ ውስጥ ካኑሌሽን በ16 Ga iv ካኑላ ማደንዘዣ ተሰጥቷቸዋል። የመተንፈሻ ቱቦው ቲሹ LV ትራንስዳክሽን እንዲቀበል ለማረጋገጥ፣ ቀደም ሲል የተገለጸውን የሜካኒካል ዲስቱሬሽን ፕሮቶኮል በመጠቀም ተስተካክሏል፣ በዚህ ውስጥ የመተንፈሻ ቱቦው ወለል በሽቦ ቅርጫት (N-Circle፣ Nitinol Tipless Stone Extractor NTSE-022115) -UDH፣ Cook Medical፣ USA) 30 s28. ከዚያም የLV-MP የመተንፈሻ ቱቦ አስተዳደር ከተስተጓጎለ ከ10 ደቂቃዎች በኋላ በባዮሎጂካል ደህንነት ካቢኔ ውስጥ ተካሂዷል።
በዚህ ሙከራ ውስጥ ጥቅም ላይ የዋለው መግነጢሳዊ መስክ ከኢንቪቮ ኤክስ-ሬይ ኢሜጂንግ ጥናት ጋር በተመሳሳይ መልኩ ተዋቅሯል፣ ተመሳሳይ ማግኔቶች ከትራኪያው በላይ የዲስቲሌሽን ስቴንት ክሊፖችን በመጠቀም ተይዘዋል (ምስል 4)። ቀደም ሲል እንደተገለጸው የጄል ጫፍ የያዘ ፒፔት በመጠቀም 50 μl መጠን (2 × 25 μl aliquots) የLV-MP ወደ ትሬያ (n = 3 እንስሳት) ተላልፏል። የቁጥጥር ቡድን (n = 3 እንስሳት) ማግኔት ሳይጠቀሙ ተመሳሳይ LV-MPዎችን ተቀበሉ። ኢንፌክሽኑ ከተጠናቀቀ በኋላ ካኑላ ከET ቱቦው ይወገዳል እና እንስሳው ይወጣል። ማግኔቱ ለ10 ደቂቃዎች በቦታው ይቆያል፣ ከዚያም ይወገዳል። አይጦች ሜሎክሲካም (1 ሚሊ ሊትር/ኪ.ግ) (ኢሊየም፣ አውስትራሊያ) ከቆዳ በታች የሆነ መጠን ተቀብለዋል ከዚያም 1 mg/ኪ.ግ አቲፓማዞል ሃይድሮክሎራይድ (አንቲሴዳን፣ ዞኤቲስ፣ አውስትራሊያ) በአይፒ መርፌ ማደንዘዣውን ተመልሷል። አይጦች ከሰመመን ሙሉ በሙሉ እስኪድኑ ድረስ ሞቅ ብለው ይቆያሉ።
የኤልቪ-ኤምፒ የማድረሻ መሳሪያ በባዮሎጂካል ደህንነት ካቢኔ ውስጥ። የኤቲ ቱቦው ፈዛዛ ግራጫ ሉየር ማዕከል ከአፍ ሲወጣ ይታያል እና በስዕሉ ላይ የሚታየው የፒፔት ጄል ጫፍ በኤቲ ቱቦ በኩል ወደሚፈለገው ጥልቀት ወደ ትራይጃ ውስጥ ይገባል።
የLV-MP የመጠን ሂደት ከተደረገ ከአንድ ሳምንት በኋላ፣ እንስሳት በ100% የCO2 ትንፋሽ በሰው ልጅ ተገድለዋል፣ እና የLacZ አገላለጽ በመደበኛ የX-gal ህክምናችን ተገምግሟል። ከኢንዶትራቸል ቱቦ አቀማመጥ የሚመጣ ማንኛውም ሜካኒካዊ ጉዳት ወይም ፈሳሽ ማቆየት በትንታኔው ውስጥ እንዳይካተት ለማረጋገጥ ሦስቱ የ caudal በጣም cartilaginous ቀለበቶች ተወግደዋል። እያንዳንዱ ትራኪያ ለመተንተን ሁለት ግማሾችን ለመፍጠር በረጅም ርቀት ተቆርጦ ሲሊኮን ጎማ (Sylgard, Dow Inc) በያዘ ሳህን ውስጥ ተጭነዋል፣ እና የብርሃን ወለልን በዓይነ ሕሊናቸው ለማየት በMinutien መርፌ (Fine Science Tools) በመጠቀም ሲሊኮን ጎማ (Sylgard, Dow Inc) በተያዘ ሳህን ውስጥ ተጭነዋል። የተለወጡ ሴሎች ስርጭት እና ንድፍ በDigiLite ካሜራ እና TCapture ሶፍትዌር (Tucsen Photonics, China) በኒኮን ማይክሮስኮፕ (SMZ1500) በመጠቀም በፊት ለፊት ፎቶግራፍ ተረጋግጧል። ምስሎቹ የተገኙት በ20x ማጉላት (ለትራኪያ ሙሉ ስፋት ከፍተኛውን አቀማመጥ ጨምሮ) ሲሆን፣ የትራኪያው አጠቃላይ ርዝመት በደረጃ ተቀርጾ፣ ምስሉን "ስፌት" ለማድረግ በእያንዳንዱ ምስል መካከል በቂ መደራረብን ያረጋግጣል። ከእያንዳንዱ ትራኪያ የተገኙ ምስሎች ከዚያም የፕላነር እንቅስቃሴ ስልተ ቀመርን በመጠቀም የምስል ኮምፖዚት አርታኢ v2.0.3 (ማይክሮሶፍት ሪሰርች) በመጠቀም ወደ አንድ የተቀናጀ ምስል ተሰብስበዋል። ከእያንዳንዱ እንስሳ የሚመጡ የመተንፈሻ ቱቦዎች በተዋሃዱ ምስሎች ውስጥ የLacZ አገላለጽ ቦታዎች ቀደም ሲል እንደተገለፀው አውቶማቲክ በሆነ የMATLAB ስክሪፕት (R2020a፣ MathWorks) በመጠቀም 0.35 < Hue < 0.58፣ Saturation > 0.15፣ እና Value < 0.7 ቅንብሮችን በመጠቀም ተለክተዋል። የቲሹን ቅርጾች በመከታተል፣ የቲሹን ቦታ ለመለየት እና ከትራኪያ ቲሹ ውጭ ማንኛውንም የውሸት ግኝቶችን ለመከላከል ለእያንዳንዱ የተቀናጀ ምስል ጭምብል በGIMP v2.10.24 በእጅ ተፈጥሯል። ከእያንዳንዱ እንስሳ የተገኙ ሁሉም የተዋሃዱ ምስሎች የተበከሉት ቦታዎች ለዚያ እንስሳ አጠቃላይ የተበከለ ቦታ ለማመንጨት ተጠቃለዋል። ከዚያም የተበከለው ቦታ በአጠቃላይ የጭምብል ቦታ ተከፍሏል ይህም መደበኛውን ቦታ ለመፍጠር።
እያንዳንዱ የመተንፈሻ ቱቦ በፓራፊን ውስጥ ተካትቶ 5 μm ክፍሎች ተቆርጠዋል። ክፍሎቹ ለ5 ደቂቃ በገለልተኛ ፈጣን ቀይ ቀለም ተሸፍነው ምስሎቹ የተገኙት በኒኮን ኢክሊፕስ ኢ400 ማይክሮስኮፕ፣ በDS-Fi3 ካሜራ እና በNIS ኤለመንት ቀረጻ ሶፍትዌር (ስሪት 5.20.00) በመጠቀም ነው።
ሁሉም የስታቲስቲክስ ትንታኔዎች የተከናወኑት በ GraphPad Prism v9 (GraphPad Software, Inc.) ነው። የስታቲስቲክስ ጠቀሜታ በ p ≤ 0.05 ላይ ተቀምጧል። መደበኛነት የተረጋገጠው በሻፒሮ-ዊልክ ሙከራ ሲሆን በ LacZ ስቴይኒንግ ውስጥ ያሉ ልዩነቶች ያልተጣመረውን የቲ-ሙከራ ዘዴ በመጠቀም ተገምግመዋል።
በሰንጠረዥ 1 ላይ የተገለጹት ስድስት የፓርላማ አባላት PCXIን በመጠቀም ተመርምረዋል፣ እና ታይነቱ በሰንጠረዥ 2 ላይ ተገልጿል። ሁለት የፖሊስታይሪን MPs (MP1 እና MP2፤ 18 μm እና 0.25 μm በቅደም ተከተል) በPCXI ስር አይታዩም ነበር፣ ነገር ግን የተቀሩት ናሙናዎች ተለይተው ይታወቃሉ (ምሳሌዎች በምስል 5 ላይ ይታያሉ)። MP3 እና MP4 (10-15% Fe3O4፤ 0.25 μm እና 0.9 μm በቅደም ተከተል) በትንሹ ይታያሉ። ምንም እንኳን ከተሞከሩት ትናንሽ ቅንጣቶች ውስጥ አንዳንዶቹን ቢይዙም፣ MP5 (98% Fe3O4፤ 0.25 μm) በጣም ጎልቶ ይታያል። የኮምቢማግ ምርት MP6 ለመለየት አስቸጋሪ ነው። በሁሉም ሁኔታዎች፣ MPን የመለየት ችሎታችን ማግኔቱን ወደ ኋላ እና ወደ ፊት ከካፒላሪ ጋር በማነፃፀር በእጅጉ ተሻሽሏል። ማግኔቶቹ ከካፒላሪ ሲርቁ፣ ቅንጣቶቹ በረጅም ሕብረቁምፊዎች ተዘርግተዋል፣ ነገር ግን ማግኔቶቹ እየቀረቡ ሲሄዱ እና የመግነጢሳዊ መስክ ጥንካሬ ሲጨምር፣ ቅንጣቶቹ ወደ ካፒላሪ የላይኛው ገጽ ሲሸጋገሩ የቅንጣት ሕብረቁምፊዎች ያጥራሉ (ተጨማሪ ቪዲዮ S1ን ይመልከቱ፡ MP4)፣ የገጽታውን የቅንጣት ጥግግት ይጨምራል። በተቃራኒው፣ ማግኔቱ ከካፒላሪ ሲወገድ፣ የመስክ ጥንካሬው ይቀንሳል እና MPs ከካፒላሪ የላይኛው ገጽ የሚዘልቁ ረጅም ክሮች ውስጥ እንደገና ይደራጃሉ (ተጨማሪ ቪዲዮ S2:MP4ን ይመልከቱ)። ማግኔቱ መንቀሳቀስ ካቆመ በኋላ፣ ቅንጣቶቹ የእኩልነት ቦታ ላይ ከደረሱ በኋላ ለአጭር ጊዜ መንቀሳቀሳቸውን ይቀጥላሉ። MPው ወደ ካፒላሪ የላይኛው ገጽ ሲንቀሳቀስ እና ሲርቅ፣ መግነጢሳዊ ቅንጣቶች በተለምዶ ፍርስራሹን በፈሳሽ ውስጥ ይጎትታሉ።
በPCXI ስር የMP ታይነት በናሙናዎች መካከል በእጅጉ ይለያያል።(a) MP3፣ (ለ) MP4፣ (ሐ) MP5 እና (መ) MP6። እዚህ የሚታዩት ሁሉም ምስሎች የተነሱት በቀጥታ ከካፒላሪ በላይ በግምት 10 ሚሜ በሚገኝ ማግኔት ነው። የሚታዩት ትላልቅ ክበቦች በካፒላሪዎቹ ውስጥ የተዘጉ የአየር አረፋዎች ናቸው፣ ይህም የደረጃ ንፅፅር ምስል ጥቁር እና ነጭ ጠርዝ ባህሪያትን በግልጽ ያሳያል። ቀዩ ሳጥን የንፅፅር-ማጎልበቻ ማጉላትን ይዟል። በሁሉም ምስሎች ውስጥ ያሉት የማግኔት ንድፎች ዲያሜትሮች ለመጠን የማይመቹ እና ከታየው 100 እጥፍ የሚበልጡ መሆናቸውን ልብ ይበሉ።
ማግኔቱ በካፒላሪ አናት ላይ ወደ ግራ እና ቀኝ ሲተረጎም፣ የMP ሕብረቁምፊው አንግል ከማግኔቱ ጋር እንዲጣጣም ይለወጣል (ምስል 6 ይመልከቱ)፣ በዚህም የማግኔቲክ መስክ መስመሮችን ይገልፃል። ለMP3-5፣ ኮርዱ ወደ ወሰን አንግል ከደረሰ በኋላ፣ ቅንጣቶቹ በካፒላሪ የላይኛው ገጽ ላይ ይጎተታሉ። ይህ ብዙውን ጊዜ MPs መግነጢሳዊ መስክ ጠንካራ በሆነበት አቅራቢያ ወደ ትላልቅ ቡድኖች እንዲሰባሰቡ ያደርጋል (ተጨማሪ ቪዲዮ S3:MP5 ይመልከቱ)። ይህ በተለይ ከካፒላሪ ጫፍ አጠገብ ምስል ሲቀረጽ ይታያል፣ ይህም MPs በፈሳሽ-አየር በይነገጽ ላይ እንዲሰባሰቡ እና እንዲያተኩሩ ያደርጋል። ከMP3-5 ለመለየት አስቸጋሪ የሆኑት MP6 ውስጥ ያሉ ቅንጣቶች ማግኔቱ በካፒላሪ ላይ ሲንቀሳቀስ አልተጎተቱም፣ ነገር ግን የMP ሕብረቁምፊዎች ተለያይተው ቅንጣቶችን በእይታ መስክ ውስጥ ይተዋሉ (ተጨማሪ ቪዲዮ S4:MP6 ይመልከቱ)። በአንዳንድ ሁኔታዎች፣ የተተገበረው መግነጢሳዊ መስክ ማግኔቱን ከምስል ቦታው ትልቅ ርቀት በማንቀሳቀስ ሲቀንስ፣ ማንኛውም የቀሩ MPs በክሩ ውስጥ ሲቀሩ በስበት ኃይል ወደ ቱቦው የታችኛው ወለል ቀስ ብለው ይወርዳሉ (ተጨማሪ ቪዲዮ S5: MP3 ይመልከቱ)።
ማግኔቱ ከካፒላሪ በላይ ወደ ቀኝ ሲተረጎም የMP ሕብረቁምፊው አንግል ይለወጣል።(a) MP3፣ (b) MP4፣ (c) MP5 እና (d) MP6። ቀዩ ሳጥን የንፅፅር ማጉላትን ይዟል። ተጨማሪ ቪዲዮዎች በእነዚህ የማይንቀሳቀሱ ምስሎች ውስጥ ሊታዩ የማይችሉ አስፈላጊ የቅንጣት አወቃቀር እና ተለዋዋጭ መረጃዎችን ስለሚገልጹ መረጃ ሰጪ መሆናቸውን ልብ ይበሉ።
ሙከራዎቻችን እንደሚያሳዩት ማግኔቱን በትራኪያው በኩል ቀስ ብሎ ወደ ኋላና ወደ ፊት ማንቀሳቀስ ውስብስብ እንቅስቃሴን በቪቮ ውስጥ በማሳየት ረገድ የMPን እይታ ያመቻቻል። የፖሊስቲሪን ዶቃዎች (MP1 እና MP2) በካፒላሪ ውስጥ ስለማይታዩ የኢንቪቮ ሙከራ አልተከናወነም። የተቀሩት አራት MPዎች እያንዳንዳቸው ከትራኪያው በላይ ባለው ረጅም ዘንግ ከ30° ወደ ቋሚ አንግል (ምስል 2b እና 3a ይመልከቱ) በቪቮ ተፈትነዋል፣ ይህም ረዘም ያለ የMP ሰንሰለቶችን አስከትሏል እና ከማግኔት ውቅር ከተቋረጠው የበለጠ ውጤታማ ነበር። MP3፣ MP4 እና MP6 በማንኛውም ሕያው እንስሳት የመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ አልተገኙም። እንስሳቱ በሰብአዊነት ከተገደሉ በኋላ የአይጥ የአየር መተላለፊያዎች ምስል ሲታዩ፣ ተጨማሪ መጠን በሲሪንጅ ፓምፕ ሲጨመር እንኳን ቅንጣቶቹ የማይታዩ ሆነው ቆይተዋል። MP5 ከፍተኛውን የብረት ኦክሳይድ ይዘት ነበረው እና ብቸኛው የሚታይ ቅንጣት ነበር፣ ስለዚህም የMPን ውስጣዊ ባህሪ ለመገምገም እና ለመለየት ጥቅም ላይ ውሏል።
በኤምፒ መውለጃ ወቅት ማግኔቱን በትራኪያው ላይ ማስቀመጥ ብዙ የፓርላማ አባላትን (ፓርላማ አባላትን) በእይታ መስክ ላይ እንዲያተኩሩ አድርጓል፣ ነገር ግን ሁሉም አይደሉም። ወደ ትራኪያ የሚገቡ ቅንጣቶች በሰብአዊነት በተሰዉ እንስሳት ውስጥ በተሻለ ሁኔታ ይታያሉ። ምስል 7 እና ተጨማሪ ቪዲዮ S6፡ MP5 በአ ventral trachea ወለል ላይ ቅንጣቶችን በፍጥነት መግነጢሳዊ ቀረጻ እና አሰላለፍ ያሳያል፣ ይህም MPs ወደ ተፈላጊው የትራኪያ ክልሎች ሊመሩ እንደሚችሉ ያሳያል። MPs ከወለዱ በኋላ በትራኪያው በኩል የበለጠ ርቀት ሲፈልጉ፣ አንዳንድ MPs ከካሪናው አጠገብ ተገኝተዋል፣ ይህም የመግነጢሳዊ መስክ ጥንካሬ ሁሉንም MPs ለመሰብሰብ እና ለማቆየት በቂ እንዳልሆነ ይጠቁማል፣ ምክንያቱም በፈሳሽ ሂደት ወቅት ከፍተኛውን የማግኔቲክ መስክ ጥንካሬ ክልል ውስጥ ይደርሳሉ። ያም ሆኖ፣ ከወሊድ በኋላ የMP ክምችቶች በምስል በተሰራው አካባቢ ከፍ ያሉ ነበሩ፣ ይህም ብዙ MPs የተተገበረው መግነጢሳዊ መስክ ጥንካሬ ከፍተኛ በሆነበት የአየር መንገድ ክልሎች ውስጥ እንደቀሩ ይጠቁማል።
(ሀ) ከ (ሀ) በፊት እና (ለ) በቅርቡ ከሞተ አይጥ ወደ ትራስ ቱቦ ውስጥ ከገባ በኋላ ማግኔቱ በቀጥታ ከምስል ቦታው በላይ ተቀምጦ ነበር። የተቀረጸው ቦታ በሁለቱ የ cartilage ቀለበቶች መካከል ይገኛል። የ MP ከመውሰዱ በፊት በአየር መተላለፊያው ውስጥ የተወሰነ ፈሳሽ አለ። ቀዩ ሳጥን የንፅፅር ማጉላትን ይዟል። እነዚህ ምስሎች በተጨማሪ ቪዲዮ S6:MP5 ላይ ከሚታየው ቪዲዮ የተገኙ ናቸው።
ማግኔቱን በትራኪያ ኢን ቪቮ መተርጎም በአየር መተላለፊያው ወለል ውስጥ ያለውን አንግል በካፒላሪዎች ውስጥ ከሚታየው ጋር ተመሳሳይ በሆነ መንገድ እንዲቀይር አድርጓል (ምስል 8 እና ተጨማሪ ቪዲዮ S7:MP5 ይመልከቱ)። ሆኖም፣ በጥናታችን፣ MPs በካፒላሪዎች እንደቻሉት በሕያው የአየር መተላለፊያው ወለል ላይ ሊጎተቱ አልቻሉም። በአንዳንድ ሁኔታዎች፣ MP ሰንሰለቱ ማግኔቱ ወደ ግራ እና ቀኝ ሲንቀሳቀስ ረዘም ያለ ይሆናል። የሚገርመው፣ የ MP ሰንሰለቱ ማግኔቱ በትራኪያው በኩል በረጅም ርቀት ሲንቀሳቀስ የንጥረቱ ሕብረቁምፊ የገጽታ ፈሳሽ ንብርብር ጥልቀት እንደሚቀይር እና ማግኔቱ በቀጥታ ከላይ ሲንቀሳቀስ እና የንጥረቱ ሕብረቁምፊ ወደ ቋሚ ቦታ ሲዞር እንደሚሰፋ አግኝተናል (ተጨማሪ ቪዲዮ S7 ይመልከቱ)። : MP5 በ0:09፣ ከታች በስተቀኝ)። ማግኔቱ በትራኪያው አናት ላይ በጎን በኩል ሲተረጎም የእንቅስቃሴው ባህሪ ተለወጠ (ማለትም በትራኪያው ርዝመት ላይ ሳይሆን በእንስሳው ግራ ወይም ቀኝ)። ቅንጣቶቹ በሚንቀሳቀሱበት ጊዜ አሁንም በግልጽ ይታያሉ፣ ነገር ግን ማግኔቱ ከትራኪያው ሲወገድ፣ የቅንጣት ሕብረቁምፊዎች ጫፎች ይታያሉ (ተጨማሪ ቪዲዮ S8:MP5ን ይመልከቱ፣ ከ0:08 ጀምሮ)። ይህ በመስታወት ካፕላሪ ውስጥ በተተገበረ መግነጢሳዊ መስክ ስር ካየነው የMP ባህሪ ጋር የሚስማማ ነው።
በሕያው ማደንዘዣ በተሰራ አይጥ የመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ MP5 የሚያሳዩ የምሳሌ ምስሎች።(ሀ) ማግኔቱ ከትራኪያው በላይ እና በግራ በኩል ምስሎችን ለማግኘት ይጠቅማል፣ ከዚያም (ለ) ማግኔቱ ወደ ቀኝ ከተንቀሳቀሰ በኋላ። ቀዩ ሳጥን የንፅፅር ማጉላትን ይዟል። እነዚህ ምስሎች በተጨማሪ ቪዲዮ S7:MP5 ላይ ከሚታየው ቪዲዮ የተገኙ ናቸው።
ሁለቱ ምሰሶዎች ከትራኪያው በላይ እና በታች በሰሜን-ደቡብ አቅጣጫ ሲዋቀሩ (ማለትም መሳብ፤ ምስል 3ለ)፣ የMP ኮርዶች ረዘም ብለው ይታዩ እና በዶርሳል ትራኪያው ገጽ ላይ ሳይሆን በትራኪያው ጎን ግድግዳ ላይ ይገኛሉ (ተጨማሪ ቪዲዮ S9:MP5ን ይመልከቱ)። ሆኖም፣ ባለሁለት ማግኔት መሳሪያ ጥቅም ላይ ሲውል በአንድ ቦታ ላይ ከፍተኛ ቅንጣቶች (ማለትም የትራኪያው የኋላ ገጽ) ፈሳሽ ከደረሰ በኋላ አልተገኙም፣ ይህም ብዙውን ጊዜ አንድ-ማግኔት መሳሪያ ጥቅም ላይ ሲውል ይከሰታል። ከዚያም አንድ ማግኔት ምሰሶዎቹን እንዲገለበጥ ሲዋቀር (ምስል 3ሐ)፣ በእይታ መስክ ውስጥ የሚታዩት ቅንጣቶች ቁጥር ከተሰጠ በኋላ አልጨመረም። ማግኔቶቹን የሚጎትቱ ወይም የሚገፉ ከፍተኛ መግነጢሳዊ መስክ ጥንካሬዎች ስላሉት የሁለቱም ባለሁለት ማግኔት ውቅሮች ማዋቀር ፈታኝ ነው። ከዚያም ማግኔቶቹን የሚጎትቱ ወይም የሚገፉ ከፍተኛ መግነጢሳዊ መስክ ጥንካሬዎች ስላሉት ማዋቀር ከአየር መንገዱ ጋር ትይዩ ወደ አንድ ማግኔት ተቀይሯል ነገር ግን በ90 ዲግሪ በአየር መንገዱ በኩል ያልፋል ስለዚህ የመስክ መስመሮቹ የትራኪያውን ግድግዳ በተቃራኒ እንዲያልፉ ተደርጓል (ምስል 3መ)፣ በጎን ግድግዳ ላይ ያለው የንጥረ ነገር ክምችት ሊታይ ይችል እንደሆነ ለመወሰን የተነደፈ አቅጣጫ። ሆኖም ግን፣ በዚህ ውቅር ውስጥ፣ የMP ክምችት ወይም የማግኔት እንቅስቃሴ ሊታወቅ የሚችል እንቅስቃሴ አልነበረም። በእነዚህ ሁሉ ውጤቶች ላይ በመመስረት፣ ለኢንቪቮ የጂን ተሸካሚ ጥናቶች አንድ ነጠላ-ማግኔት፣ 30-ዲግሪ የአቅጣጫ ውቅር (ምስል 3a) ተመርጧል።
እንስሳው ሰብአዊ ግድያ ከተፈጸመ በኋላ ወዲያውኑ በተደጋጋሚ ምስል ሲቀርብለት፣ ግራ የሚያጋባ የቲሹ እንቅስቃሴ አለመኖር ማለት ግልጽ በሆነው በኢንተርኮንድራል መስክ ውስጥ ቀጭን እና አጭር የቅንጣት መስመሮችን መለየት ማለት ሲሆን ከማግኔቱ የትርጉም እንቅስቃሴ ጋር በሚስማማ መልኩ "የሚወዛወዝ" ነው። ያም ሆኖ፣ የMP6 ቅንጣቶች መኖር እና እንቅስቃሴ በግልጽ ማየት አይቻልም።
የLV-LacZ ቲተር 1.8 × 108 TU/ml ነበር፣ እና ከCombiMag MP (MP6) ጋር 1፡1 ከተቀላቀለ በኋላ እንስሳት 50 μl የትራሼል መጠን 9 × 107 TU/ml LV ተሽከርካሪ (ማለትም 4.5 × 106 TU/rat) ተቀበሉ። በእነዚህ ጥናቶች፣ በወሊድ ወቅት ማግኔቱን ከመተርጎም ይልቅ፣ ማግኔቱን በአንድ ቦታ አስተካክለናል፣ ይህም ማግኔቱን መግነጢሳዊ መስክ በሌለበት ጊዜ ከቬክተር አቅርቦት ጋር ሲነጻጸር ሊሻሻል ይችል እንደሆነ ለማወቅ (ሀ) ማግኔቲክ መስክ በሌለበት ሁኔታ ሊሻሻል ይችል እንደሆነ እና (ለ) ትኩረት ሊሰጣቸው የሚችሉ የአየር መተላለፊያ ሴሎች ወደ ላይኛው የመተንፈሻ ቱቦ መግነጢሳዊ ኢላማ ክልሎች ይተላለፋሉ።
የማግኔቶች መኖር እና ከLV ቬክተሮች ጋር የተጣመረው የኮምቢማግ አጠቃቀም በእንስሳት ጤና ላይ አሉታዊ ተጽዕኖ አላሳደረም ፣ ልክ እንደ መደበኛው የLV ቬክተር አቅርቦት ፕሮቶኮላችን። ለሜካኒካል መዛባት የተጋለጡ የትራኪል ክልል የፊት ምስሎች (ተጨማሪ ምስል 1) ማግኔቱ በሚኖርበት ጊዜ በLV-MP የታከሙ የእንስሳት ቡድን ውስጥ በከፍተኛ ሁኔታ ከፍ ያለ የትራንስዱክሽን ደረጃዎች እንደነበሩ ያመለክታሉ (ምስል 9a)። በቁጥጥር ቡድኑ ውስጥ አነስተኛ መጠን ያለው ሰማያዊ LacZ ቀለም ብቻ ነበር (ምስል 9ለ)። መደበኛ የሆኑ የX-Gal ቀለም ያላቸው አካባቢዎችን መለካት እንደሚያሳየው በመግነጢሳዊ መስክ ፊት የLV-MP አስተዳደር በግምት 6 እጥፍ መሻሻል እንዳስገኘ ያሳያል (ምስል 9c)።
የትራኪል ትራንስዳክሽንን በLV-MP (a) መግነጢሳዊ መስክ ባለበት እና (b) ማግኔት በሌለበት ጊዜ የሚያሳዩ የተዋሃዱ ምስሎች ምሳሌ። (c) ማግኔቱን ሲጠቀሙ በትራኪዩ ውስጥ በተለመደው የLacZ ትራንስዳክሽን አካባቢ በስታቲስቲክስ ደረጃ ጉልህ መሻሻል (*p = 0.029፣ t-test፣ n = 3 በቡድን፣ አማካይ ± SEM)።
ገለልተኛ ፈጣን ቀይ ቀለም ያላቸው ክፍሎች (በተጨማሪ ምስል 2 ላይ የሚታየው ምሳሌ) ቀደም ሲል እንደተዘገበው በተመሳሳይ ንድፍ እና ቦታ ላይ የLacZ ቀለም ያላቸው ሴሎችን አሳይቷል።
የአየር መተላለፊያ ጂን ሕክምና ቁልፍ ፈተና ተሸካሚ ቅንጣቶችን ወደ ተፈላጊ ክልሎች በትክክል መተርጎም እና በአየር ፍሰት እና በንቃት የንፍጥ ማጽዳት በሚኖርበት ጊዜ በሚንቀሳቀስ ሳንባ ውስጥ ከፍተኛ የትራንስዱክሽን ቅልጥፍናን ማሳካት ነው። የሲኤፍ የአየር መተላለፊያ በሽታን ለማከም ለተዘጋጁ የLV ተሸካሚዎች፣ በሚመሩ የመተንፈሻ ቱቦዎች ውስጥ ተሸካሚ ቅንጣቶች የመኖሪያ ጊዜን ማሳደግ እስካሁን ድረስ የማይታወቅ ግብ ነው። በካስቴላኒ እና ሌሎች እንደተጠቆመው፣ ትራንስዱክሽንን ለማሻሻል መግነጢሳዊ መስኮችን መጠቀም እንደ ኤሌክትሮፖሬሽን ካሉ ሌሎች የጂን አቅርቦት ዘዴዎች ጋር ሲነጻጸር ጥቅሞች አሉት፣ ምክንያቱም ቀላልነትን፣ ወጪ ቆጣቢነትን፣ የማድረስ አካባቢያዊነትን፣ የጨመረ ቅልጥፍናን እና አጭር የመታቀፊያ ጊዜዎችን እና ምናልባትም አነስተኛ መጠን ያለው ተሸካሚ መጠንን ሊያጣምር ይችላል። ሆኖም፣ በውጭ መግነጢሳዊ ኃይሎች ተጽዕኖ ስር በአየር መተላለፊያዎች ውስጥ የመግነጢሳዊ ቅንጣቶች ውስጣዊ ክምችት እና ባህሪ በፍፁም አልተገለጸም፣ የዚህ ዘዴ ተግባራዊነትም በህያው የመተንፈሻ ቱቦዎች ውስጥ የጂን አገላለጽ ደረጃዎችን ለማሻሻል በህያው አየር መንገዶች ውስጥ አልተረጋገጠም።
የእኛ የኢንቪትሮ ሲንክሮትሮን ፒሲኤክስአይ ሙከራዎች እንደሚያሳዩት ከፖሊስቲሪን ኤምፒ በስተቀር የሞከርናቸው ሁሉም ቅንጣቶች በተጠቀምንበት የምስል ማዋቀር ውስጥ ይታያሉ። በመግነጢሳዊ መስክ ፊት፣ MPዎች ርዝመታቸው ከቅንጣት አይነት እና ከማግኔት መስክ ጥንካሬ (ማለትም ከማግኔት ቅርበት እና እንቅስቃሴ) ጋር የተያያዙ ሕብረቁምፊዎችን ይፈጥራሉ። በስእል 10 እንደሚታየው፣ የምናያቸው ሕብረቁምፊዎች የሚፈጠሩት እያንዳንዱ ቅንጣት በማግኔት እና የራሱን የአካባቢ መግነጢሳዊ መስክ በማነሳሳት ነው። እነዚህ የተለያዩ መስኮች ሌሎች ተመሳሳይ ቅንጣቶች እንዲሰባሰቡ እና እንዲገናኙ ያደርጋሉ፣ ከሌሎች ቅንጣቶች የአካባቢ ማራኪ እና አስጸያፊ ኃይሎች የሚመጡ የአካባቢ ኃይሎች በመኖራቸው ምክንያት የቡድን ሕብረቁምፊ መሰል እንቅስቃሴዎች።
በፈሳሽ የተሞሉ ካፒላሪዎች እና (c,d) አየር የተሞላ ትራኪያ ውስጥ የሚፈጠሩትን የቅንጣት ባቡሮች የሚያሳይ ንድፍ (a, b) ያሳያል። ካፒላሪዎች እና ትራኪያ ወደ ሚዛን እንደማይሳቡ ልብ ይበሉ። ፓነሉ (a) በክር የተደረደሩ የFe3O4 ቅንጣቶችን የያዘውን የMP መግለጫም ይዟል።
ማግኔቱ ከካፒላሪ በላይ ሲንቀሳቀስ፣ የቅንጣት ሕብረቁምፊው አንግል Fe3O4 የያዘውን MP3-5 ወሳኝ ገደብ ላይ ደርሷል፣ ከዚያ በኋላ የቅንጣት ሕብረቁምፊው በመጀመሪያው ቦታ ላይ መቆየት አቁሞ፣ ነገር ግን በላዩ ላይ ወደ አዲስ ቦታ ተንቀሳቅሷል።magnet። ይህ ውጤት የመስተዋት ካፒላሪ ወለል ይህ እንቅስቃሴ እንዲከሰት የሚያስችል ለስላሳ ስለሆነ ሊከሰት ይችላል። የሚገርመው፣ MP6 (CombiMag) እንደዚህ አይነት ባህሪ አላሳየም፣ ምናልባትም ቅንጣቶቹ ትንሽ ስለነበሩ፣ የተለያዩ ሽፋኖች ወይም የወለል ክፍያዎች ስለነበሯቸው፣ ወይም የባለቤትነት ተሸካሚ ፈሳሽ የመንቀሳቀስ ችሎታቸውን ስለነካ። የኮምቢማግ ቅንጣቶች የምስል ንፅፅርም ደካማ ነው፣ ይህም ፈሳሹ እና ቅንጣቶቹ ተመሳሳይ እፍጋት ሊኖራቸው ስለሚችል በቀላሉ እርስ በእርስ ሊንቀሳቀሱ እንደማይችሉ ይጠቁማል። ማግኔቱ በጣም በፍጥነት ከተንቀሳቀሰ ቅንጣቶች ሊጣበቁ ይችላሉ፣ ይህም የማግኔቱ መስክ ጥንካሬ በፈሳሽ ውስጥ ባሉ ቅንጣቶች መካከል ያለውን ግጭት ሁልጊዜ ማሸነፍ እንደማይችል ያሳያል፣ ይህም ምናልባት የመግነጢሳዊ መስክ ጥንካሬ እና በማግኔቱ እና በዒላማው አካባቢ መካከል ያለው ርቀት አያስደንቅም ማለት ነው። በጣም አስፈላጊ ነው። እነዚህ ውጤቶች አንድ ላይ ሲወሰዱ፣ ማግኔቶች በዒላማው አካባቢ የሚፈሱ ብዙ MPዎችን ሊይዙ ቢችሉም፣ ማግኔቶች ሊታመኑባቸው እንደሚችሉ የማይመስል ነገር ነው። የኮምቢማግ ቅንጣቶችን በትራኪያው ወለል ላይ ለማንቀሳቀስ። ስለዚህ፣ በቪቮ ውስጥ ያሉ የLV-MP ጥናቶች የአየር መተላለፊያ ዛፉን የተወሰኑ አካባቢዎች በአካል ለማነጣጠር የማይንቀሳቀሱ መግነጢሳዊ መስኮችን መጠቀም አለባቸው ብለን ደምድመናል።
ቅንጣቶች በሰውነት ውስጥ ሲደርሱ፣ ውስብስብ በሆነ የሚንቀሳቀሱ የሰውነት ሕብረ ሕዋሳት አውድ ውስጥ ለመለየት አስቸጋሪ ናቸው፣ ነገር ግን የማግኔቱን ችሎታ ከትራኪያው በላይ ያለውን ማግኔት በአግድም ወደ MP ሕብረቁምፊዎች "እንዲወዛወዝ" በማድረግ ተሻሽሏል። ምንም እንኳን የቀጥታ ምስል ማድረግ ቢቻልም፣ እንስሳው በሰብአዊነት ከተገደለ በኋላ የቅንጣት እንቅስቃሴን መለየት ቀላል ነው። ማግኔቱ ከምስል ቦታው በላይ ሲቀመጥ የMP ክምችት በአጠቃላይ በዚህ ቦታ ከፍተኛ ነበር፣ ምንም እንኳን አንዳንድ ቅንጣቶች ብዙውን ጊዜ በትራኪያው አጠገብ ተጨማሪ ይገኙ ነበር። ከኢን ቪትሮ ጥናቶች በተቃራኒ፣ ቅንጣቶች ማግኔቱን በመተርጎም በትራኪያው ላይ መጎተት አይችሉም። ይህ ግኝት የትራኪያውን ወለል የሚሸፍነው ንፍጥ በተለምዶ የሚተነፍሱ ቅንጣቶችን እንዴት እንደሚያስኬድ፣ በንፍጥ ውስጥ እንደሚያጠምዳቸው እና ከዚያም በ mucociliary clearance ዘዴ እንዴት እንደሚጸዳ ጋር የሚስማማ ነው።
ማግኔቶችን ከትራኪያ በላይ እና በታች ለመሳብ መጠቀም (ምስል 3ለ) በአንድ ወቅት በከፍተኛ ሁኔታ የተከማቸ መግነጢሳዊ መስክ ሳይሆን የበለጠ ወጥ የሆነ መግነጢሳዊ መስክ ሊያስከትል እንደሚችል ገምተናል፣ ይህም ወደ ተመሳሳይ ቅንጣቶች ስርጭት ሊያመራ ይችላል። ሆኖም፣ የመጀመሪያ ጥናታችን ይህንን መላምት የሚደግፍ ግልጽ ማስረጃ አላገኘም። በተመሳሳይ፣ ጥንድ ማግኔቶችን ለማባረር ማዋቀር (ምስል 3ሐ) በምስል አካባቢው ላይ ተጨማሪ የቅንጣት ክምችት አላስከተለም። እነዚህ ሁለት ግኝቶች እንደሚያሳዩት ባለሁለት ማግኔት ማዋቀር የMP ኢላማን የአካባቢ ቁጥጥርን በእጅጉ አያሻሽልም፣ እና የተገኙት ጠንካራ መግነጢሳዊ ኃይሎች ለማዋቀር አስቸጋሪ ናቸው፣ ይህም ይህንን አቀራረብ ብዙም ተግባራዊ አያደርገውም። በተመሳሳይ፣ ከላይ ያለውን ማግኔት እና በትራኪያ በኩል ማነጣጠር (ምስል 3መ) በምስል አካባቢ ውስጥ የተያዙትን ቅንጣቶች ብዛት አላሳደገም። ከእነዚህ አማራጭ ውቅሮች ውስጥ አንዳንዶቹ በተቀማጭ ቦታ ውስጥ ዝቅተኛ መግነጢሳዊ መስክ ጥንካሬዎችን ስለሚያስከትሉ ስኬታማ ላይሆኑ ይችላሉ። ስለዚህ፣ ነጠላ የ30 ዲግሪ አንግል ማግኔት ውቅር (ምስል 3a) ለኢንቪኦ ሙከራ በጣም ቀላሉ እና በጣም ቀልጣፋ ዘዴ ተደርጎ ይወሰዳል።
የLV-MP ጥናት እንደሚያሳየው የLV ቬክተሮች ከኮምቢማግ ጋር ሲዋሃዱ እና መግነጢሳዊ መስክ ባለበት ጊዜ አካላዊ መዛባት ከተከሰተ በኋላ ሲደርሱ፣ በትራኪያ ውስጥ ያለው የትራንስክሽን መጠን ከቁጥጥር ጋር ሲነጻጸር በከፍተኛ ሁኔታ ጨምሯል። በሲንክሮትሮን የምስል ጥናቶች እና በላክዚ ውጤቶች ላይ በመመስረት፣ መግነጢሳዊ መስክ LV ን በትራኪያ ውስጥ ማቆየት እና ወዲያውኑ ወደ ሳንባ ውስጥ ዘልቀው የገቡትን የቬክተር ቅንጣቶች ብዛት መቀነስ ችሏል። እንደዚህ ያሉ ኢላማ ማድረጊያ ማሻሻያዎች የተላኩትን ቲተሮች፣ ከዒላማ ውጭ የሆነ ትራንስክሽን፣ እብጠት እና የበሽታ መከላከያ የጎንዮሽ ጉዳቶችን እና የጂን ተሸካሚ ወጪዎችን በመቀነስ ከፍተኛ ውጤታማነትን ሊያስከትሉ ይችላሉ። እንደ አምራቹ ገለጻ፣ CombiMag ከሌሎች የጂን ዝውውር ዘዴዎች ጋር በማጣመር ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል፣ ከሌሎች የቫይረስ ቬክተሮች (እንደ AAV) እና ኑክሊክ አሲዶች ጋር።