Nature.comን ስለጎበኙ እናመሰግናለን፡ እየተጠቀሙበት ያለው የአሳሽ ስሪት ለሲኤስኤስ የተገደበ ድጋፍ አለው። ለምርጥ ተሞክሮ የተሻሻለ አሳሽ (ወይም የተኳኋኝነት ሁነታን በInternet Explorer ውስጥ እንዲያጠፉት እንመክራለን) እስከዚያው ድረስ ቀጣይ ድጋፍን ለማረጋገጥ ጣቢያውን ያለ ቅጦች እና ጃቫስክሪፕት እናሳያለን።
ለሳይስቲክ ፋይብሮሲስ የሳንባ በሽታ ሕክምና የሚሰጡ የጂን ቬክተሮች የአየር መተላለፊያ መንገዶችን ማነጣጠር አለባቸው ምክንያቱም የሳንባዎች ሽግግር የሕክምና ጥቅም አይሰጥም. በመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ ያሉ የጂን ተሸካሚዎች አስፈላጊ ናቸው ነገር ግን ለመድረስ አስቸጋሪ ናቸው.የጂን ተሸካሚ-የተጣመሩ መግነጢሳዊ ቅንጣቶች ወደ አየር መንገዱ ወለል ላይ ሊመሩ የሚችሉ ክልላዊ ኢላማዎችን ሊያሻሽሉ ይችላሉ.በቪቮ ቪዥን እይታ ፈታኝ ሁኔታዎች ምክንያት, በተተገበረ ማግኔቲክ መስክ ውስጥ በአየር መንገዱ ላይ እንደነዚህ ያሉ ትናንሽ መግነጢሳዊ ቅንጣቶች በአየር መንገዱ ላይ ያለው ባህሪ በደንብ አልተረዳም. የጥናቱ ተከታታይ የምስል አጠቃቀም ዓላማ በ vivo ቪዥን ውስጥ የሚታየውን ምስል ለማቀናጀት ነበር. በ Vivo ውስጥ የግለሰብ እና የጅምላ ቅንጣት ባህሪን ተለዋዋጭነት እና ዘይቤን ለመመርመር በተዳከሙ አይጦች ቧንቧ ውስጥ ያሉ ማግኔቲክ ቅንጣቶች መግነጢሳዊ መስክ በሚኖርበት ጊዜ የሌንቲቫይራል መግነጢሳዊ ቅንጣቶች በአይጥ ትራክ ውስጥ የመቀየሪያ ቅልጥፍናን ያሳድጋሉ የሚለውን ገምግመናል። vivo.Particles በሕያው አየር መንገዱ ላይ በማግኔት በቀላሉ መጎተት አይቻልም ነገርግን በማጓጓዝ ጊዜ ክምችቶቹ የተከማቹት መግነጢሳዊ መስክ በጣም ጠንካራ በሆነበት የእይታ መስክ ላይ ነው። እና በአየር ውስጥ የአየር መተላለፊያ መንገዶችን በማካሄድ የመተላለፊያ ደረጃዎችን ይጨምሩ.
ሲስቲክ ፋይብሮሲስ (CF) የሚከሰተው CF ትራንስሜምብራን ኮንዳክሽን ተቆጣጣሪ (CFTR) ተብሎ በሚጠራው ነጠላ ዘረ-መል (ጅን) ልዩነት ነው.የ CFTR ፕሮቲን ion ቻናል ነው, ይህም የአየር መተላለፊያ መንገዶችን ጨምሮ በመላው የሰውነት ክፍሎች ውስጥ በሚገኙ ብዙ ኤፒተልየል ሴሎች ውስጥ ይገኛል, ይህም የአየር መተላለፊያ መንገዶችን ጨምሮ, የሲኤፍ በሽታ አምጪ ተህዋሲያን ዋነኛ ቦታ ነው. የ CFTR ጉድለቶች ወደ ያልተለመደ የውሃ ማጓጓዝ, የአየር መንገዱን ጥልቀት በመቀነስ, የአየር መንገዱን ጥልቀት ይቀንሳል. የ mucociliary ትራንስፖርት (MCT) ስርዓት ወደ ውስጥ የሚተነፍሱ ቅንጣቶችን እና በሽታ አምጪ ተህዋሲያንን ከመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ የማጽዳት ችሎታን ይጎዳል ግባችን የ CFTR ጂን ትክክለኛውን ቅጂ ለማድረስ እና የ ASL, MCT እና የሳንባ ጤናን ለማሻሻል እና እነዚህን መለኪያዎች በ vivo1 ውስጥ ለመለካት የሚያስችሉ አዳዲስ ቴክኖሎጂዎችን ለመቀጠል የሌንቲቫይራል (LV) ጂን ቴራፒን ማዘጋጀት ነው.
የኤል.ቪ ቬክተሮች ለሲኤፍ ኤርዌይ ጂን ሕክምና ግንባር ቀደም እጩዎች አንዱ ናቸው።በዋነኛነት የቲራፔቲካል ጂንን ወደ አየር መንገዱ መሰረታዊ ህዋሶች (የአየር መንገዱ ግንድ ሴሎች) በማዋሃድ ይህ አስፈላጊ ነው ምክንያቱም በጂን-የተስተካከለ CF-የተያያዘ የአየር መተላለፊያ ወለል ሴሎችን በመለየት መደበኛውን እርጥበት እና ንፋጭ ማፅዳትን ወደነበሩበት መመለስ ስለሚችሉ ይህ ከአየር መንገዱ ቀጥተኛ ህዋሳት ጋር የሚጋጭ ሲሆን ይህም ከአየር መንገዱ ጋር ቀጥተኛ ፋይዳ ይኖረዋል። የሲኤፍ ሳንባ በሽታ የሚጀምርበት ቦታ ነው። የቬክተር ወደ ሳንባ ውስጥ ጠለቅ ያለ ማድረስ የአልቮላር ሽግግርን ሊያስከትል ይችላል ነገር ግን ይህ በ CF ውስጥ ምንም ዓይነት የሕክምና ጥቅም የለውም.ነገር ግን እንደ ጂን ተሸካሚዎች ያሉ ፈሳሾች ከወለዱ በኋላ በተመስጦ ወደ አልቪዮሊ ይፈልሳሉ 3,4 እና የሕክምና ቅንጣቶች በፍጥነት ወደ የአፍ ውስጥ ምሰሶ ውስጥ በፍጥነት ይጸዳሉ. ሴሉላር መውሰድን ለመፍቀድ ቬክተር ከዒላማ ህዋሶች አጠገብ ይቆያል - "የመኖሪያ ጊዜ" 5 - በተለመደው የክልል የአየር ፍሰት በቀላሉ ይቀንሳል እንዲሁም የተቀናጀ ቅንጣት ንፋጭ ቀረጻ እና ኤም.ሲ.ኤፍ. ለ CF, በዚህ ክልል ውስጥ ከፍተኛ የትራንስፎርሜሽን ደረጃዎችን ለማምጣት በአየር መንገዱ ውስጥ የኤል.ቪ.
ይህንን መሰናክል ለማሸነፍ የኤልቪ መግነጢሳዊ ቅንጣቶች (MPs) በሁለት ተጓዳኝ መንገዶች ሊረዱ እንደሚችሉ እንጠቁማለን በመጀመሪያ ደረጃ ማነጣጠርን ለማሻሻል እና የጂን ተሸካሚ ቅንጣቶች በሚፈለገው የአየር ክልል ውስጥ እንዲኖሩ በማግኔት ወደ አየር መንገዱ ወለል ሊመሩ ይችላሉ; እና ASL) ወደ ሴል ሽፋን ለመሸጋገር 6.MPs ፀረ እንግዳ አካላትን፣ ኬሞቴራፒቲክ መድኃኒቶችን ወይም ሌሎች ትናንሽ ሞለኪውሎችን ከሴል ሽፋን ጋር በማያያዝ ወይም ከሚመለከታቸው የሕዋስ ወለል ተቀባይ ጋር በማገናኘት እና በማይንቀሳቀስ ኤሌክትሪክ ውስጥ በሚከማችበት ቦታ ላይ በሚከማቹበት ጊዜ የታለሙ የመድኃኒት ማመላለሻ ተሽከርካሪዎች በሰፊው ጥቅም ላይ ውለዋል። ለካንሰር ሕክምና መግነጢሳዊ መስኮች 7. ሌሎች “የሃይፐርተርማል” ቴክኒኮች ዓላማቸው MPs ለሚወዛወዙ መግነጢሳዊ መስኮች ሲጋለጡ ለማሞቅ ነው፣በዚህም የዕጢ ሴሎችን ያጠፋል። የኤል.ቪ ማግኔቶትራንስፌክሽን ተቋቁሟል ፣ የ LV-MPsን በብልቃጥ ወደ ሰው ብሮንካይያል ኤፒተልያል ሴል መስመር በቋሚ መግነጢሳዊ መስክ ፊት በማድረስ ፣ ከ LV ቬክተር ጋር ሲነፃፀር በ 186 እጥፍ የትራንስፎርሜሽን ውጤታማነት ይጨምራል ። የአክታ10.ነገር ግን የአካል ክፍሎችን በሰውነት ውስጥ ማግኔቶ ማስተላለፍ በአንፃራዊነት አነስተኛ ትኩረት ያገኘ ሲሆን በጥቂት የእንስሳት ጥናቶች 11,12,13,14,15, በተለይም በሳንባዎች 16,17. ቢሆንም, በሲኤፍ የሳንባ ህክምና ውስጥ የማግኔቲክ ሽግግር እድሎች ግልጽ ናቸው. ታን et al. የ pulmonary delivery ለወደፊት የ CFTR እስትንፋስ ስልቶች መንገድ ይከፍታል በ CF በሽተኞች ክሊኒካዊ ውጤቶችን ለማሻሻል"6.
በተተገበረው መግነጢሳዊ መስክ ላይ ትናንሽ መግነጢሳዊ ቅንጣቶች በአየር መንገዱ ወለል ላይ ያለው ባህሪ ለማየት እና ለማጥናት አስቸጋሪ ነው, ስለዚህም በደንብ ያልተረዳ ነው.በሌሎች ጥናቶች, synchrotron-propagation-based phase-ንፅፅር ኤክስ-ሬይ ኢሜጂንግ (PB-PCXI) ዘዴን በማያዳብር በምስል እና በመለካት በደቂቃ ውስጥ Vivo ለውጦች በ ACT ጥልቀት19 እና በጋዝ ጥልቀት19 ውስጥ መለካት እንችላለን። ለህክምና ውጤታማነት ቀደምት አመልካች ሆኖ ያገለግላል።በተጨማሪ የMCT ግምገማ ዘዴያችን ከ10-35 µm ዲያሜትር ቅንጣቶችን ከአሉሚና ወይም ከፍ ያለ የማጣቀሻ ኢንዴክስ መስታወት እንደ MCT ማርከሮች በመጠቀም PB-PCXI21 በመጠቀም ይጠቀማሉ።ሁለቱም ቴክኒኮች MPን ጨምሮ የተለያዩ አይነት ቅንጣቶችን ለማየት ተስማሚ ናቸው።
በከፍተኛ የቦታ እና ጊዜያዊ መፍታት ምክንያት የኛ PB-PCXI-based ASL እና MCT የትንታኔ ቴክኒኮች የነጠላ እና የጅምላ ቅንጣት ባህሪን ተለዋዋጭነት እና ቅጦችን በ Vivo ውስጥ ለመመርመር እና የ MP ጂን አቅርቦት ቴክኒኮችን ለመረዳት እና ለማመቻቸት ይረዱናል ። እዚህ የምንጠቀምበት አቀራረብ በ SPring-8 BL20B2 በመጠቀም ከጥናቶቻችን የተገኘ ነው ። በጂን ተሸካሚ መጠን የእንስሳት ጥናቶች 3፣4 ላይ የተስተዋሉ ወጥ ያልሆኑ የጂን አገላለጾቻችንን ለማብራራት የአፍንጫ እና የሳንባ አየር መንገዶች አይጦች።
የዚህ ጥናት ዓላማ ሲንክሮትሮን PB-PCXIን በመጠቀም ተከታታይ የፓርላማ አባላት በህያው አይጦች ቧንቧ ውስጥ የሚያደርጉትን እንቅስቃሴ በዓይነ ሕሊናዎ ለመመልከት ነበር።እነዚህ የPB-PCXI ኢሜጂንግ ጥናቶች የተለያዩ የፓርላማ አባላትን፣ መግነጢሳዊ መስክ ጥንካሬዎችን እና አካባቢዎችን ለመፈተሽ የተነደፉ ናቸው በኤምፒ እንቅስቃሴ ላይ ያላቸውን ተፅእኖ ለማወቅ። ኤምፒው መግነጢሳዊ አካባቢ እንዲቆይ ወይም እንዲንቀሳቀስ ያስችለዋል ብለን ገምተናል። ከተቀማጭ በኋላ በመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ የሚቆዩትን ብናኞች ቁጥር ከፍ የሚያደርጉ የማግኔት ውቅሮችን ለይተናል።በሁለተኛ ተከታታይ ጥናቶች፣ የኤል.ቪ-ኤምፒኤስን ወደ አይጥ አየር መንገድ በማቅረቡ ምክንያት የኤልቪ-ኤምፒኤስ አቅርቦት በአየር መንገዱ ላይ ማነጣጠር የተሻሻለ የኤል.ቪ.ኤ.ዲ.ኤስ.
ሁሉም የእንስሳት ጥናቶች የተካሄዱት በአድላይድ ዩኒቨርሲቲ (M-2019-060 እና M-2020-022) እና በ SPring-8 Synchrotron Animal Ethics ኮሚቴ በተፈቀደላቸው ፕሮቶኮሎች መሰረት ነው.በ ARRIVE መመሪያዎች መሰረት ሙከራዎች ተካሂደዋል.
ሁሉም የኤክስሬይ ምስል በ BL20XU beamline በጃፓን SPring-8 synchrotron ላይ ቀደም ሲል ከተገለፀው ጋር ተመሳሳይ የሆነ ማዋቀርን በመጠቀም ተከናውኗል።በአጭሩ የሙከራ ሳጥኑ ከ synchrotron ማከማቻ ቀለበት 245 ሜትር ርቀት ላይ ይገኛል።ከ 0.6 ሜትር ናሙና-ወደ-መመርመሪያ ርቀት 0.6 ሜትር ርቀት ለ ቅንጣት ኢሜጂንግ ጥናቶች እና 0. የ 25 keV ሞኖክሮማቲክ ጨረር ኃይል ጥቅም ላይ ውሏል። ምስሎች የተያዙት ከፍተኛ ጥራት ባለው የኤክስሬይ መለወጫ (SPring-8 BM3) ከ sCMOS መፈለጊያ ጋር ተዳምሮ ነው። ቀያሪው 10 µm ውፍረት ያለው scintillator (Gd3Al2Ga3O12) በመጠቀም ኤክስ-ሬይ ወደ የሚታይ ብርሃን ይለውጣል (Gd3Al2Ga3O12) እሱም ነገር ወደ ማይክሮስኮፕ (1CMOS0) 0.3)።የ sCMOS አነፍናፊ ኦርካ-ፍላሽ4.0 (ሃማማሱ ፎቶኒክስ፣ ጃፓን) የድርድር መጠን 2048 × 2048 ፒክስል እና ጥሬ የፒክሰል መጠን 6.5 × 6.5 µm። ይህ ማዋቀር ውጤታማ የሆነ የኢሶትሮፒክ ፒክሴል መጋለጥ 0.51 ሚሜ እና 1 × 1 የእይታ ርዝመት አለው። 100 ms ተመርጧል በመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ እና በውጭ ያሉ መግነጢሳዊ ቅንጣቶችን ሲግናል-ወደ-ጫጫታ ሬሾን ከፍ ለማድረግ እና በአተነፋፈስ ምክንያት የሚንቀሳቀሱ ቅርሶችን በመቀነስ።
የኤልቪ አገልግሎት አቅራቢው በማንኛውም የSPring-8 PB-PCXI ኢሜጂንግ ጥናቶች ውስጥ ጥቅም ላይ አልዋለም ምክንያቱም የBL20XU ኢሜጂንግ ክፍል ባዮሴፍቲ ደረጃ 2 የተረጋገጠ አይደለም ። ይልቁንስ ፣ ከተለያዩ የንግድ አቅራቢዎች ጥሩ ባህሪ ያላቸው የፓርላማ አባላትን መርጠናል - የተለያዩ መጠኖችን ፣ ቁሳቁሶችን ፣ የብረት ውህዶችን እና አፕሊኬሽኖችን በ capillas ውስጥ ፣ በመጀመሪያ በሜዳ ውስጥ እንዴት ማግኔቲክስ እና ማግኔቲክስ ላይ ተጽዕኖ ያሳድራል። የአየር መተላለፊያ መንገዶች. ላይ ላዩን.MPs መጠን ከ 0.25 እስከ 18 μm እና ከተለያዩ ቁሳቁሶች የተሠሩ ናቸው (ሰንጠረዥ 1 ይመልከቱ), ነገር ግን እያንዳንዱ ናሙና ስብጥር, በ MP ውስጥ ያለውን መግነጢሳዊ ቅንጣቶች መጠን ጨምሮ, የማይታወቅ ነው.በእኛ ሰፊ MCT ጥናቶች 19, 20, 21, 23, 24 ላይ በመመስረት, እኛ እንጠብቃለን MPs በአየር ላይ እንደ ትንሽ ሊታይ ይችላል 5. የ MP እንቅስቃሴን የተሻሻለ ታይነት ለማየት ተከታታይ ክፈፎችን በመቀነስ አንድ ባለ 0.25 μm MP ከምስል መሳሪያው ጥራት ያነሰ ነው፣ ነገር ግን PB-PCXI የድምጽ ንፅፅርን እና ከተቀማጭ በኋላ የሚቀመጡበትን የንጣፍ ፈሳሽ እንቅስቃሴን እንደሚያውቅ ይጠበቃል።
በሠንጠረዥ 1 ውስጥ ለእያንዳንዱ ኤምፒ ናሙናዎች በ 20 μl ብርጭቆ ካፕሊየኖች (Drummond Microcaps, PA, USA) ተዘጋጅተዋል ውስጣዊ ዲያሜትር 0.63 ሚሜ. የኮርፐስኩላር ቅንጣቶች በውሃ ውስጥ ይገኛሉ, CombiMag ቅንጣቶች ግን በአምራቹ የባለቤትነት ፈሳሽ ውስጥ ይገኛሉ.እያንዳንዱ ቱቦ በግማሽ ፈሳሽ (በግምት ናሙና) እና ስእል 11 ይመልከቱ). ካፊላሪዎች በምስል ሳጥኑ ውስጥ ባለው የናሙና መድረክ ላይ እንደቅደም ተከተላቸው እና የፈሳሹን ጠርዞች አስቀምጠዋል።19 ሚሜ ዲያሜትር (28 ሚሜ ርዝመት ያለው) የኒኬል ሼል ብርቅዬ ምድር ኒዮዲሚየም ብረት ቦሮን (NdFeB) ማግኔት (N35፣ ድመት ቁጥር LM1652፣ ጄይካር ኤሌክትሮኒክስ፣ አውስትራሊያ) ከቀሪው ማግኔሽን ጋር ተያይዟል። በምስል ጊዜ የኤክስሬይ ምስል ማግኘት የሚጀምረው ማግኔቱ በግምት 30 ሚሜ ያህል ከናሙናው በላይ ሲቀመጥ እና ምስሎች በሰከንድ 4 ክፈፎች ሲገዙ ነው። በምስል ሂደት ማግኔቱ ወደ መስታወት ካፒታል ቱቦ (1 ሚሜ ያህል ርቀት ላይ) እንዲጠጋ ተደርጓል እና ከዚያም የመስክ ጥንካሬን እና የቦታውን ተፅእኖ ለመገምገም በቧንቧው በኩል ተተርጉሟል።
በብልቃጥ ምስል ማዋቀር በናሙና xy የትርጉም ደረጃ ላይ የ MP ናሙናዎችን በመስታወት ካፒላሪዎች ውስጥ ይይዛል።
የፓርላማ አባላት በብልቃጥ ታይነት ከተመሠረተ የተወሰኑት በዱር-አይነት ሴት አልቢኖ ዊስታር አይጦች (~ 12 ሳምንታት ዕድሜ ያለው ~ 200 ግ) .0.24 mg/kg medetomidine (Domitor®, Zenoaq, Japan), 3.2 mg/kg midazolam (Dormicum®, Astelgol) እና Pp. (Vetorphale®, Meiji Seika) አይጦች በፋርማ ቅይጥ ሰመመን)፣ ጃፓን) intraperitoneal መርፌ። ማደንዘዣ ከተሰጠ በኋላ የመተንፈሻ ቱቦ አካባቢ ያለውን ፀጉር በማንሳት፣ endotracheal tubeን በማስገባት (ET; 16 Ga iv cannula፣ Terumo BCT) እና የሰውነት ሙቀትን በማስተካከል የሰውነት ሙቀትን በማስተካከል ለምስል ተዘጋጅተዋል። 22 .በምስል 2 ሀ ላይ እንደሚታየው የመተንፈሻ ቱቦውን በኤክስ ሬይ ምስል ላይ በአግድም ለማቀናጀት በትንሹ አንግል ላይ የኢሜጂንግ ጠፍጣፋው ከናሙና የትርጉም ደረጃ ጋር ተያይዟል።
(ሀ) በ SPring-8 ኢሜጂንግ ሳጥን ውስጥ በ Vivo imaging setup ውስጥ የኤክስሬይ ጨረሩ መንገድ በቀይ የተዘረጋ መስመር ምልክት ተደርጎበታል።
በርቀት የሚቆጣጠረው የሲሪንጅ ፓምፕ ሲስተም (UMP2, World Precision Instruments, Sarasota, FL) 100 μl ብርጭቆ መርፌን በመጠቀም ከ PE10 tubing (OD 0.61 mm, ID 0.28 mm) ጋር በ 30 Ga መርፌ በኩል ተገናኝቷል. ጫፉ ትክክለኛውን ቱቦ በሚያስገቡበት ጊዜ በማይክሮ ፑቱ ውስጥ በትክክል መኖሩን ለማረጋገጥ ቱቦውን ምልክት ያድርጉበት. የቱቦው ጫፍ በሚቀርበው የኤም.ፒ. ናሙና ውስጥ ሲጠመቅ መርፌው መውጣቱ ተወግዷል። የተጫነው የመላኪያ ቱቦ ወደ endotracheal ቱቦ ውስጥ ገብቷል፣ ጫፉን ከጠበቅነው መግነጢሳዊ መስክ በጣም ጠንካራ በሆነው ክፍል ውስጥ በማስቀመጥ። Powerlab and LabChart (AD Instruments, Sydney, Australia) 22. ኢሜጂንግ ማቀፊያው ተደራሽ በማይሆንበት ጊዜ፣ ሁለት የአይፒ ካሜራዎች (Panasonic BB-SC382) በ90° እርስ በርስ በግምት ተቀምጠዋል እና በምስል ወቅት የማግኔትን አቀማመጥ ከመተንፈሻ ቱቦ አንፃር ለመከታተል ጥቅም ላይ ውለው ነበር (ምስል 2 ለ፣ ሐ) ምስልን በሥነ-ጥበብ ጊዜ ለማሳነስ አንድ እንቅስቃሴን ለመቀነስ። አምባ.
አንድ ማግኔት ከሁለተኛ ደረጃ ጋር ተያይዟል ይህም ከኢሜጂንግ መኖሪያ ቤት ውጭ በሩቅ ሊቀመጥ ይችላል.የተለያዩ የማግኔት አቀማመጦች እና አወቃቀሮች ተፈትነዋል, ከእነዚህም መካከል: ከትራክቱ በላይ በግምት 30 ° በሆነ አንግል ላይ ተጭኗል (በምስል 2a እና 3a ላይ የሚታዩ ውቅሮች); አንድ ማግኔት ከእንስሳው በላይ እና ሌላው ከታች, ለመሳብ የተቀመጡ ምሰሶዎች (ምስል 3 ለ); አንድ ማግኔት ከእንስሳው በላይ እና ሌላው ከታች, ምሰሶቹ ለመቀልበስ የተቀመጡ ናቸው (ምስል 3 ሐ); እና አንድ ማግኔት ከላይ እና ከመተንፈሻ ቱቦ ጋር ቀጥ ያለ (ምስል 3d)። አንዴ እንስሳው እና ማግኔቱ ከተዋቀሩ እና የሚሞከረው MP ወደ መርፌው ፓምፕ ከተጫነ 50 μl መጠን በ 4 μl / ሰከንድ ምስሎችን ሲያገኙ ማግኔቱ ወደ ኋላ እና ወደ ፊት ይንቀሳቀሳል።
የማግኔት ውቅረት ለ vivo ኢሜጂንግ (ሀ) አንድ ማግኔት ከመተንፈሻ ቱቦ በላይ በግምት 30°፣ (ለ) ሁለት ማግኔቶች ለመሳብ ተቀምጠዋል፣ (ሐ) ሁለት ማግኔቶች ለመቀልበስ ተዘጋጅተዋል፣ (መ) አንድ ማግኔት ከላይ እና ቀጥ ብሎ በመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ። በመተንፈሻ ቱቦው ርዝመት ወይም በግራ እና በቀኝ ከመተንፈሻ ቱቦ በላይ ወደ ኤክስ ሬይ ጨረር አቅጣጫ ይንቀሳቀሳሉ.
በተጨማሪም ግራ የሚያጋባ አተነፋፈስ እና የልብ እንቅስቃሴ በማይኖርበት ጊዜ በአየር መንገዱ ውስጥ የሚገኙትን ቅንጣቶች ታይነት እና ባህሪ ለመወሰን ፈልገን ነበር.ስለዚህ በምስሉ ጊዜ ማብቂያ ላይ እንስሳት በፔንቶባርቢታል ከመጠን በላይ በመውሰድ በሰብአዊነት ተገድለዋል (ሶምኖፔንቲል, ፒትማን-ሙር, ዋሽንግተን መሻገሪያ, ዩኤስኤ; ~ 65 mg / kg ip , እና አንዳንድ እንስሳት መተንፈስ አቁመዋል. የምስል ሂደት ተደግሟል፣ ምንም MP በአየር መንገዱ ላይ የማይታይ ከሆነ ተጨማሪ የ MP መጠን በመጨመር።
የተገኙት ምስሎች በጠፍጣፋ ሜዳ እና በጨለማ ሜዳ ተስተካክለው ከዚያም በ MATLAB (R2020a, The Mathworks) የተጻፈ ብጁ ስክሪፕት በመጠቀም ወደ ፊልም (20 ክፈፎች በሰከንድ፣ 15-25 × መደበኛ ፍጥነት እንደ መተንፈሻ ፍጥነት) ተሰበሰቡ።
ሁሉም የኤልቪ ጂን ቬክተር መላኪያ ጥናቶች የተካሄዱት በአድላይድ ዩኒቨርሲቲ በሚገኘው የላብራቶሪ የእንስሳት ምርምር ተቋም ሲሆን የ SPring-8 ሙከራ ውጤትን ለመጠቀም በማግኔት መስክ ውስጥ የ LV-MP አቅርቦት በ vivo ውስጥ የጂን ዝውውርን ሊያሻሽል እንደሚችል ለመገምገም ነበር ። የኤምፒ እና ማግኔቲክ መስክን ተፅእኖ ለመገምገም ሁለት የእንስሳት ቡድኖች ታክመዋል-አንዱ ቡድን ከሌላው ቡድን ጋር LV-MP ተሰጥቷል ማግኔት ተቀምጧል።
የኤል.ቪ ጂን ቬክተሮች የተፈጠሩት ቀደም ሲል በተገለጹት ዘዴዎች ነው 25, 26 .LacZ ቬክተር የኒውክሌር-አከባቢ ቤታ-ጋላክቶሲዳሴን ጂን በ MPSV አራማጅ (LV-LacZ) የሚመራውን ጂን ይገልፃል, ይህም በተለወጡ ህዋሶች ውስጥ ሰማያዊ ምላሽ ያመነጫል, በሳንባ ቲሹ ፊት እና በቲሹ ክፍሎች ውስጥ በሚታየው የሳንባ ቲሹ ፊት እና የቲሹ ክፍሎች ውስጥ ይታያል. በ TU/ml ውስጥ ያለውን ደረጃ ለማስላት hemocytometer.ተጓጓዦች በ -80 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ይጠበቃሉ, ከመጠቀማቸው በፊት ይቀልጣሉ, እና ከ CombiMag ጋር በ 1: 1 ጥምርታ በመደባለቅ እና በበረዶ ላይ ቢያንስ ለ 30 ደቂቃዎች ከመውለዳቸው በፊት.
መደበኛ ስፕራግ ዳውሊ አይጦች (n = 3/ቡድን ፣ ~2-3) በ 0.4 mg/kg medetomidine (Domitor, Ilium, Australia) እና 60 mg/kg ketamine (Ilium, Australia) ወር እድሜ ያለው) ip) መርፌ እና ቀዶ ጥገና ካልተደረገ የአፍ16Gaiway አየር መውረጃ ቱቦን በተቀላቀለበት በማህፀን ውስጥ ማደንዘዣ ተደረገ። ቲሹ የኤልቪ ትራንስፎርሜሽን ይቀበላል፣ ቀደም ሲል የተገለጸውን የሜካኒካል መዛባት ፕሮቶኮላችንን በመጠቀም ተስተካክሏል፣ በዚህ ጊዜ የመተንፈሻ ቱቦው ወለል በሽቦ ቅርጫት (N-Circle, Nitinol Tipless Stone Extractor NTSE-022115) -UDH, Cook Medical, USA) 30 s28.Tracheal ደህንነት በ L ከደቂቃዎች በኋላ የባዮሎጂካል አስተዳደር ከተደረገ በኋላ በግምት 1 ደቂቃ ኤል. ግራ መጋባት.
በዚህ ሙከራ ውስጥ ጥቅም ላይ የዋለው መግነጢሳዊ መስክ በ Vivo X-ray imaging ጥናት ጋር ተመሳሳይ በሆነ መልኩ ተዋቅሯል, ተመሳሳይ ማግኔቶች ከመተንፈሻ ቱቦ በላይ የተያዙት የዲፕላስቲክ ስቴንት ክሊፖችን በመጠቀም (ስእል 4) 50 μl (2 × 25 μl aliquots) የ LV-MP ወደ ቧንቧው ውስጥ ገብቷል (n = 3 ቱ እንሰሳት) ከዚህ ቀደም የጂል ፓይፕ ቡድንን ተጠቅሟል። 3 እንስሳት) ማግኔት ሳይጠቀሙ ተመሳሳይ LV-MPs ወስደዋል ኢንፌክሽኑ ከተጠናቀቀ በኋላ ካንኑላ ከ ET ቱቦ ውስጥ ይወጣና እንስሳው ይወጣል.ማግኔቱ ለ 10 ደቂቃዎች ይቆያል, ከዚያም ይወገዳል.አይጦች ከቆዳ በታች የሆነ ሜሎክሲካም (1 ml / ኪ.ግ) (ኢሊየም, አውስትራሊያ) በዳግም አቲሲያይድ ኦቭ አቲፓምክፓዛዞል. (Antisedan, Zoetis, Australia)።አይጦች ከማደንዘዣ ሙሉ በሙሉ እስኪያገግሙ ድረስ እንዲሞቁ እና ክትትል ይደረግባቸዋል።
የኤልቪ-ኤምፒ ማቅረቢያ መሳሪያ በባዮሎጂካል ደህንነት ካቢኔ ውስጥ።የኢቲ ቲዩብ ፈዛዛ ግራጫ Luer hub ከአፍ ወጥቶ ይታያል እና በምስሉ ላይ የሚታየው የፔፕት ጄል ጫፍ በ ET ቱቦ ወደሚፈለገው ጥልቀት በመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ እንዲገባ ይደረጋል።
ከ LV-MP የዶዚንግ ሂደት ከአንድ ሳምንት በኋላ እንስሳት በሰብአዊነት በ 100% CO2 እስትንፋስ ተገድለዋል እና የ LacZ አገላለጽ የእኛን መደበኛ የ X-gal ህክምና በመጠቀም ይገመገማል.የሶስቱ ካውዳል አብዛኛዎቹ የ cartilaginous ቀለበቶች ተወግደዋል የኢንዶትራክሽናል ቱቦ አቀማመጥ ምንም አይነት የሜካኒካዊ ጉዳት ወይም ፈሳሽ ማቆየት በመተንተን ውስጥ አልተካተተም. የሲሊኮን ጎማ (ሲልጋርድ, ዶው ኢንክ) የ Minutien መርፌን (ደቃቅ የሳይንስ መሳሪያዎች) በመጠቀም የብርሃን ንጣፍን በዓይነ ሕሊናህ ለመመልከት.የተለወጡ ሴሎች ስርጭት እና ንድፍ በኒኮን ማይክሮስኮፕ (SMZ1500) በዲጂሊቲ ካሜራ እና TCapture ሶፍትዌር (Tucsen Photonics, China) ከፍተኛውን የምስል መጠን በማግኘቱ የተረጋገጠ ነው. ትራክ) በጠቅላላው የመተንፈሻ ቱቦ ርዝመት ደረጃ በደረጃ በመሳል በእያንዳንዱ ምስል መካከል በቂ መደራረብን በማረጋገጥ ምስልን "ለመገጣጠም" ያስችላል። ቀደም ሲል እንደተገለፀው MATLAB ስክሪፕት (R2020a, MathWorks) 0.35
እያንዳንዱ የመተንፈሻ ቱቦ በፓራፊን ውስጥ ተተክሏል እና 5 μm ክፍሎች ተቆርጠዋል.ክፍሎቹ በገለልተኛ ፈጣን ቀይ ቀለም ለ 5 ደቂቃዎች ተቆጥረዋል እና ምስሎች በኒኮን ግርዶሽ E400 ማይክሮስኮፕ, DS-Fi3 ካሜራ እና የ NIS ኤለመንቶች ቀረጻ ሶፍትዌር (ስሪት 5.20.00) በመጠቀም ተገኝተዋል.
ሁሉም የስታቲስቲክስ ትንታኔዎች በ GraphPad Prism v9 (GraphPad Software, Inc.) ውስጥ ተካሂደዋል. ስታቲስቲካዊ ጠቀሜታ በ p ≤ 0.05 ላይ ተቀምጧል.የ Shapiro-Wilk ፈተናን በመጠቀም መደበኛነት ተረጋግጧል, እና የ LacZ ማቅለሚያ ልዩነቶች ያልተጣመረ t-ፈተና በመጠቀም ይገመገማሉ.
በሰንጠረዥ 1 ላይ የተገለጹት ስድስት MPs PCXIን በመጠቀም የተመረመሩ ሲሆን ታይነቱ በሰንጠረዥ 2 ውስጥ ተገልጿል.ሁለት የ polystyrene MPs (MP1 እና MP2; 18 μm እና 0.25 μm, በቅደም ተከተል) በ PCXI ስር አይታዩም, ነገር ግን የተቀሩት ናሙናዎች ተለይተው የሚታወቁ ናቸው (ምሳሌዎች በስእል 45% 30-1 ይታያሉ). μm እና 0.9 μm እንደቅደም ተከተላቸው) በቀላሉ የሚታዩ ናቸው ምንም እንኳን ከተሞከሩት ጥቃቅን ቅንጣቶች ውስጥ የተወሰኑትን ቢይዙም MP5 (98% Fe3O4; 0.25 μm) በጣም ጎልቶ ይታያል። የኮምቢማግ ምርት MP6 ለመለየት አስቸጋሪ ነው። ካፊላሪ፣ ቅንጣቶቹ ረዣዥም ገመዶች ውስጥ ይራዘማሉ፣ ነገር ግን ማግኔቶቹ ሲቃረቡ እና የመግነጢሳዊ መስክ ጥንካሬ ሲጨምር፣ ቅንጣቶቹ ወደ ካፒላሪው የላይኛው ገጽ ሲሰደዱ ቅንጣቢው ሕብረቁምፊዎች አጠረ (ተጨማሪ ቪዲዮ S1፡ MP4 ይመልከቱ)፣ የገጽታ ቅንጣት ጥግግት ይጨምራል። የካፒታል የላይኛው ገጽ (ተጨማሪ ቪዲዮ S2: MP4 ይመልከቱ) ማግኔቱ መንቀሳቀሱን ካቆመ በኋላ, ቅንጣቶቹ ወደ ሚዛኑ ቦታ ከደረሱ በኋላ ለአጭር ጊዜ መንቀሳቀስ ይቀጥላሉ.ኤምፒ ወደ የላይኛው የላይኛው ክፍል ሲንቀሳቀስ እና ሲርቅ, መግነጢሳዊ ቅንጣቶች በተለምዶ ፍርስራሹን በፈሳሽ ውስጥ ይጎትቱታል.
በ PCXI ስር ያለው የኤምፒ ታይነት በናሙናዎች መካከል በእጅጉ ይለያያል።(ሀ) MP3፣ (ለ) MP4፣ (c) MP5 እና (d) MP6 እዚህ የሚታዩ ምስሎች በሙሉ የተወሰዱት ከካፒላሪው 10 ሚሜ ያህል ርቀት ላይ በሚገኝ ማግኔት ነው። የሚታዩት ትላልቅ ክበቦች በካፒላሪዎቹ ውስጥ የታሰሩ የአየር አረፋዎች ናቸው፣ ይህም ጥቁር እና ነጭ የጠርዝ ንፅፅርን በግልፅ አይያሳዩም። በሁሉም አኃዞች ውስጥ ያለው የማግኔት ሼማቲክስ ዲያሜትሮች መመዘን የለባቸውም እና ከሚታየው በግምት 100 እጥፍ ይበልጣል።
ማግኔቱ በካፒታል አናት ላይ ወደ ግራ እና ቀኝ ሲተረጎም የኤምፒ ሕብረቁምፊው አንግል ከማግኔት ጋር ይስተካከላል (ስእል 6 ይመልከቱ) በዚህ ምክንያት የመግነጢሳዊ መስክ መስመሮችን ይለያሉ ። ለ MP3-5 ፣ ኮርዱ ወደ ጣራው ጥግ ከደረሰ በኋላ ቅንጣቶች በካፒታል የላይኛው ገጽ ላይ ይጎተታሉ ። ይህ ብዙውን ጊዜ ወደ የ MPs ፕላስተሮች በጣም ቅርብ ወደሆነው የቪዲዬ ቡድን በጣም ቅርብ ነው ። S3: MP5) ይህ ደግሞ በተለይ ወደ ካፊላሪ መጨረሻ ሲቃረብ በግልጽ ይታያል፣ ይህም MPs እንዲዋሃዱ እና በፈሳሽ አየር በይነገጽ ላይ እንዲያተኩሩ ያደርጋል። ከMP3-5 የበለጠ ለመረዳት የሚያስቸግሩ በMP6 ውስጥ ያሉ ክፍሎች፣ ማግኔቱ ከካፒላሪው ጋር ሲንቀሳቀስ አልተጎተቱም፣ ነገር ግን የኤምፒ ገመዶች ተለያይተው የተወሰኑ የቪዲዮ እይታዎችን ይተዋል (በፊልም 6 ይመልከቱ)። የተተገበረው መግነጢሳዊ መስክ ማግኔቱን ከምስሉ ቦታው ብዙ ርቀት በማንቀሳቀስ ሲቀንስ፣ የቀሩት MPs በገመድ ውስጥ ሲቀሩ በስበት ኃይል ወደ ቱቦው የታችኛው ወለል ላይ ቀስ ብለው ይወርዳሉ (ተጨማሪ ቪዲዮ S5፡ MP3 ይመልከቱ)።
ማግኔቱ ከካፒታል በላይ ወደ ቀኝ ሲተረጎም የMP string አንግል ይቀየራል።(ሀ) MP3፣ (ለ) MP4፣ (c) MP5 እና (መ) MP6 ቀይ ሣጥን ንፅፅርን የሚያጎለብት ማጉላትን ይዟል።ተጨማሪ ቪዲዮዎቹ ጠቃሚ ቅንጣት አወቃቀሮችን እና ተለዋዋጭ መረጃዎችን በእነዚህ የማይንቀሳቀስ ምስሎች ውስጥ ሊታዩ የማይችሉትን መረጃ ሰጪ መሆናቸውን ልብ ይበሉ።
የእኛ ፈተናዎች ማግኔቱን ወደ ኋላና ወደ ፊት በመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ ማንቀሳቀስ የኤምፒን እይታ በቪቮ ውስጥ ውስብስብ እንቅስቃሴ ውስጥ እንዲታይ ያመቻቻል። 3 ሀ) ይህ ረዘም ያለ የኤምፒ ሰንሰለቶች ስላስከተለ እና የማግኔት ውቅር ከተቋረጠ የበለጠ ውጤታማ ነበር MP3 ፣ MP4 እና MP6 በማንኛውም የቀጥታ እንስሳት መተንፈሻ ቱቦ ውስጥ አልተገኙም ። የአይጥ አየር መንገዶች እንስሳቱ በሰብአዊነት ከተገደሉ በኋላ በምስል ሲታዩ ፣ ተጨማሪው መጠን በሲሪንጅ ተጠቅሞ ሲጨመር እንኳን ቅንጣቶቹ የማይታዩ ነበሩ ። MP5 ከፍተኛውን ክፍል እና ብረትን ለመገምገም ከፍተኛውን ብረት እና ኦክሳይድን ብቻ ነበር የሚታየው ። በ MP ባህሪ ውስጥ.
MP5 በሚሰጥበት ጊዜ ማግኔትን ከመተንፈሻ ቱቦው በላይ ማግኘቱ ብዙዎችን አስከትሏል ነገርግን ሁሉም አይደሉም። ወደ መተንፈሻ ቱቦ ውስጥ የሚገቡት ቅንጣቢዎች በተሻለ ሁኔታ በሰው ሰዉ በተሰዉ እንስሳት ላይ ይስተዋላሉ።ምስል 7 እና ተጨማሪ ቪዲዮ S6፡ MP5 በፍጥነት መግነጢሳዊ ቀረጻ እና ቅንጣቢዎችን ወደ ventral trachea ወለል ላይ ማስተካከልን ያሳያል። በፈሳሽ ሂደት ውስጥ ከፍተኛውን መግነጢሳዊ መስክ ጥንካሬ ክልል ውስጥ በመውሰዳቸው የማግኔቲክ መስክ ጥንካሬ ሁሉንም የፓርላማ አባላት ለመሰብሰብ እና ለማቆየት በቂ አለመሆኑን በመግለጽ አንዳንድ የፓርላማ አባላት ከመተንፈሻ ቱቦው አጠገብ ከኤም.ፒ. ከተሰጡ በኋላ ወደ ካሪና ቅርብ ሆነው ተገኝተዋል ። ቢሆንም ፣ የድህረ ወሊድ MP ስብስቦች በምስሉ በተቀረጸው ቦታ ዙሪያ ከፍተኛ ነበሩ ፣ ይህም ብዙ የፓርላማ አባላት ከፍተኛ መግነጢሳዊ ኃይል ባለበት የአየር መንገዱ ክልሎች ውስጥ እንደቆዩ ይጠቁማል ።
ምስሎች ከ (ሀ) በፊት እና (ለ) MP5 ወደ መተንፈሻ ቱቦ ውስጥ ካስገቡ በኋላ በቅርብ ጊዜ የተወገዘ አይጥ ማግኔት በቀጥታ ከምስል ቦታው በላይ ተቀምጧል። የምስሉ ቦታ የሚገኘው በሁለቱ የ cartilage ቀለበቶች መካከል ነው። ከኤምፒ ማድረስ በፊት በአየር መተላለፊያው ውስጥ የተወሰነ ፈሳሽ አለ።በቀይ ሳጥን ውስጥ የንፅፅር ማጉላትን ይይዛል።እነዚህ ምስሎች ከቪዲዮው የተወሰዱ ናቸው።
ማግኔትን በትራክ ውስጥ በቫይቮ መተርጎም የኤምፒ ሰንሰለቱ በመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ ካለው አንግል ጋር ተመሳሳይ በሆነ መልኩ በካፒላሪ ውስጥ ከሚታየው ጋር እንዲቀየር አድርጓል (ምስል 8 እና ተጨማሪ ቪዲዮ S7: MP5 ይመልከቱ) ነገር ግን በጥናታችን ውስጥ MPs በህያው የአየር መንገዱ ወለል ላይ መጎተት አይቻልም ። በአንዳንድ ሁኔታዎች የ MP ሰንሰለት በግራ በኩል ይረዝማል እናም ማግኔትን ወደ ቀኝ እንወስዳለን ። ማግኔቱ ከመተንፈሻ ቱቦው ጋር በረዥም ጊዜ ሲንቀሳቀስ እና ማግኔቱ በቀጥታ ወደላይ ሲንቀሳቀስ እና ቅንጣቢው ሕብረቁምፊ ወደ አቀባዊ አቀማመጥ ሲዞር የንጣፍ ፈሳሽ ንጣፍን ጥልቀት የሚቀይር ይመስላል (ተጨማሪ ቪዲዮ S7 ይመልከቱ)። : MP5 በ 0:09, ከታች በስተቀኝ) የእንቅስቃሴ ባህሪይ ንድፍ ተለውጧል ማግኔቱ በመተንፈሻ ቱቦው ላይ ወደ ጎን ለጎን ሲተረጎም (ይህም ከእንስሳት ወደ ግራ ወይም ቀኝ ከመተንፈሻ ቱቦው ርዝመት ይልቅ ወደ ግራ ወይም ቀኝ) . ቅንጣቶቹ አሁንም በሚንቀሳቀሱበት ጊዜ በግልጽ ይታዩ ነበር, ነገር ግን ማግኔቱ ከመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ ሲወጣ, የንጥሉ ጫፎች ጫፍ, ቪዲዮ 8 ኤምፒ ጅምር ላይ ይታያል. 0:08) ይህ በመስታወት ካፒታል ውስጥ በተተገበረ መግነጢሳዊ መስክ ስር ካየነው የ MP ባህሪ ጋር ይጣጣማል.
የቀጥታ ማደንዘዣ አይጥ መተንፈሻ ቱቦ ውስጥ MP5 የሚያሳይ ምሳሌ ምስሎች።
ሁለቱ ምሰሶዎች በሰሜን-ደቡብ አቅጣጫ ሲዋቀሩ ከመተንፈሻ ቱቦ በላይ እና በታች (ማለትም መሳብ ፣ ምስል 3 ለ) ፣ የኤምፒ ኮርዶች ረዘም ያለ ጊዜ ታየ እና ከጀርባው የመተንፈሻ ቱቦ ወለል ላይ ሳይሆን በመተንፈሻ ቱቦው የጎን ግድግዳ ላይ ተቀምጠዋል (ተጨማሪ ቪዲዮ S9: MP5ን ይመልከቱ) ። ሆኖም ፣ ከፍተኛ መጠን ያለው ቅንጣቶች በአንድ ቦታ ላይ ሲደርሱ ፈሳሽ አይታወቅም (ማለትም) ። ባለሁለት-ማግኔት መሳሪያ ጥቅም ላይ የዋለ ሲሆን ይህም በተለምዶ አንድ ማግኔት መሳሪያ ሲሰራ ይከሰታል።ከዛም አንድ ማግኔት ሲዋቀር ምሰሶቹን ለመቀልበስ ሲገለበጥ (ምስል 3c) በእይታ መስክ የሚታዩት ቅንጣቶች ቁጥር ከተረከቡ በኋላ የሚጨምር አይመስልም።የሁለቱም ባለሁለት-ማግኔት ውቅሮች ማግኔቱ ከፍ ባለ ወይም በአክብሮት ወደ ማግኔት ውቅሮች ማዋቀር ፈታኝ ነው። ከመተንፈሻ ቱቦ ጋር ትይዩ ነገር ግን በ 90 ዲግሪ የአየር መንገዱን በማለፍ የመስክ መስመሮቹ የትራክቱን ግድግዳ በኦርቶዶክስ በኩል እንዲያልፉ (ምስል 3 መ), በጎን ግድግዳ ላይ ያለውን ቅንጣት ማሰባሰብ መከበር ይቻል እንደሆነ ለመወሰን የተነደፈ አቅጣጫ .ነገር ግን በዚህ ውቅር ውስጥ የ MP ክምችት ወይም ማግኔት እንቅስቃሴ ተለይቶ የሚታወቅ እንቅስቃሴ የለም.በነጠላ ውቅር ላይ የተመሰረተ ነው. 3 ሀ) በ vivo ጂን ተሸካሚ ጥናቶች ተመርጧል።
እንስሳው ሰብዓዊ ግድያ ከተፈጸመ በኋላ በተደጋጋሚ በምስል ሲገለጽ፣ ግራ የሚያጋባ የቲሹ እንቅስቃሴ አለመኖሩ ማለት ጥቃቅን እና አጭር ቅንጣት መስመሮች ግልጽ በሆነው ኢንተርኮንድራል መስክ ላይ፣ ከማግኔት የትርጉም እንቅስቃሴ ጋር በሚጣጣም መልኩ “የሚናወጥ”። ቢሆንም፣ አሁንም የMP6 ቅንጣቶችን መኖር እና እንቅስቃሴ በግልፅ ማየት አልተቻለም።
የLV-LacZ ቲተር 1.8 × 108 TU/ml ነበር፣ እና ከ1፡1 ከCombiMag MP (MP6) ጋር ከተደባለቀ በኋላ እንስሳት የ 50 μl የመተንፈሻ መጠን 9 × 107 TU/ml LV ተሸከርካሪ (ማለትም 4.5 × 106 TU / ራት) አግኝተዋል። በእነዚህ ጥናቶች ውስጥ, በምጥ ጊዜ ማግኔትን ከመተርጎም ይልቅ, ማግኔትን በአንድ ቦታ ላይ አስተካክለነዋል, የኤል.ቪ ትራንስፎርሜሽን (ሀ) መግነጢሳዊ መስክ በሌለበት ጊዜ ከቬክተር አቅርቦት ጋር ሲነጻጸር ይሻሻላል, እና (ለ) ትኩረት ሊደረግ ይችላል የአየር መንገዱ ሴሎች ወደ ማግኔቲክ ዒላማ ክልሎች የላይኛው አየር መንገድ ይተላለፋሉ.
ማግኔቶችን መገኘት እና CombiMag ከ LV ቬክተሮች ጋር ተዳምሮ በእንስሳት ጤና ላይ አሉታዊ ተጽእኖ አላሳየም, የእኛ መደበኛ የ LV ቬክተር አቅርቦት ፕሮቶኮል. የ LacZ ማቅለሚያ በቁጥጥር ቡድን ውስጥ (ምስል 9 ለ) ውስጥ ተገኝቷል.የተለመዱት የኤክስ-ጋል ቀለም ያላቸው ቦታዎችን በመለካት የ LV-MP አስተዳደር መግነጢሳዊ መስክ በሚኖርበት ጊዜ በግምት 6 እጥፍ ማሻሻያ (ምስል 9 ሐ) አሳይቷል.
በ LV-MP (ሀ) መግነጢሳዊ መስክ ሲኖር እና (ለ) ማግኔት በሌለበት (ለ) መግነጢሳዊ መስክ በሚኖርበት ጊዜ የትራክሽን ሽግግርን የሚያሳዩ ምሳሌ የተቀናጁ ምስሎች።
ገለልተኛ ፈጣን ቀይ ቀለም ያላቸው ክፍሎች (ምሳሌ በተጨማሪ ምስል 2 ላይ የሚታየው) የLacZ ቀለም ያላቸው ሴሎች ቀደም ሲል እንደተዘገበው በተመሳሳይ ንድፍ እና ቦታ ላይ ይገኛሉ።
ለአየር መንገዱ የጂን ህክምና ቁልፍ ተግዳሮት ተሸካሚ ቅንጣቶችን ወደ ፍላጐት ክልሎች በትክክል መተረጎም እና በአየር ፍሰት እና ንቁ የሆነ የንፋጭ ማጽጃ በሚኖርበት ጊዜ በሚንቀሳቀስ ሳንባ ውስጥ ከፍተኛ የሆነ የመተላለፊያ ቅልጥፍናን ማሳካት ነው።የኤል.ቪ. ሽግግርን ለማሻሻል መግነጢሳዊ መስኮች እንደ ኤሌክትሮፖሬሽን ካሉ ሌሎች የጂን አቅርቦት ዘዴዎች ጋር ሲነፃፀሩ ጥቅማጥቅሞች አሉት ፣ ምክንያቱም ቀላልነትን ፣ ወጪ ቆጣቢነትን ፣ የአቅርቦት አከባቢን ፣ ውጤታማነትን ይጨምራል ፣ እና አጭር የመታቀፊያ ጊዜ እና ምናልባትም አነስተኛ ተሸካሚ dose10. ቢሆንም ፣ በ vivo ውስጥ የመግነጢሳዊ ቅንጣቶች አቀማመጥ እና ባህሪ በአየር መንገዱ ውስጥ በውጪ ያሉ መግነጢሳዊ ቅንጣቢዎች ባህሪ በጭራሽ አልተገለጸም ። ያልተነካ አየር መንገዶች ውስጥ የጂን አገላለጽ ደረጃዎችን ለማሳደግ Vivo ውስጥ አሳይቷል.
የኛ in vitro synchrotron PCXI ሙከራዎች እንዳሳዩት ከ polystyrene MP በስተቀር የሞከርናቸው ሁሉም ቅንጣቶች በተጠቀምንበት ምስል ዝግጅት ውስጥ ይታያሉ። መግነጢሳዊ መስክ በሚኖርበት ጊዜ MPs ርዝመታቸው ከቅንጣው አይነት እና ከማግኔቲክ መስክ ጥንካሬ (ማለትም የቅርበት እና የማግኔት እንቅስቃሴ) ጋር የተገናኘ ሕብረቁምፊ ይመሰርታሉ። local መግነጢሳዊ መስክ.እነዚህ የተለያዩ መስኮች ሌሎች ተመሳሳይ ቅንጣቶች እንዲዋሃዱ እና እንዲገናኙ ያደርጉታል, በቡድን ሕብረቁምፊ መሰል እንቅስቃሴዎች በአካባቢያዊ ኃይል ከአካባቢያዊ ማራኪ እና የሌሎች ቅንጣቶች አፀያፊ ኃይሎች.
የመርሃግብር ማሳያ (a,b) ቅንጣት ባቡሮች በፈሳሽ-የተሞሉ ካፊላሪዎች እና (c,d) አየር-የተሞላ የአየር ቧንቧ. ካፒላሪዎቹ እና የመተንፈሻ ቱቦው ወደ ሚዛን ያልተሳቡ መሆናቸውን ልብ ይበሉ. ፓነል (a) በተጨማሪም የ MP መግለጫ ይዟል, እሱም በገመድ ውስጥ የተደረደሩ የ Fe3O4 ቅንጣቶችን ይዟል.
ማግኔቱ ከካፒታል በላይ በተንቀሳቀሰበት ጊዜ የ ቅንጣቢው ሕብረቁምፊ አንግል Fe3O4 ን ለያዘው MP3-5 ወሳኝ ደረጃ ላይ ደርሷል፣ከዚያ በኋላ ቅንጣቢው ሕብረቁምፊው በመጀመሪያው ቦታ ላይ አልቆየም፣ነገር ግን በገጹ ላይ ወደ አዲስ ቦታ ተንቀሳቅሷል።ማግኔት ይህ ውጤት ሊከሰት ይችላል ምክንያቱም የመስታወት ካፊላሪ ወለል ለስላሳ ስለሆነ ይህ እንቅስቃሴ እንዲከሰት መፍቀድ አልቻለም። ቅንጦቶቹ ያነሱ ነበሩ፣ የተለያዩ ሽፋኖች ወይም የገጽታ ክፍያዎች ነበሯቸው ወይም የባለቤትነት ተሸካሚ ፈሳሽ የመንቀሳቀስ ችሎታቸውን ይነካል ። የ CombiMag ቅንጣቶች ምስል ንፅፅር እንዲሁ ደካማ ነው ፣ ይህም ፈሳሹ እና ቅንጣቶች ተመሳሳይ እፍጋቶች ሊኖራቸው ስለሚችል በቀላሉ እርስ በእርሳቸው መንቀሳቀስ አይችሉም። ማግኔቱ በጣም በፍጥነት የሚንቀሳቀስ ከሆነ ቅንጣቶች እንዲሁ ሊጣበቁ ይችላሉ ፣ ይህም የመግነጢሳዊው ጥንካሬ ሁል ጊዜ መግነጢሳዊ ጥንካሬን ማሸነፍ እንደማይችል ያሳያል ። የመግነጢሳዊ መስክ ጥንካሬ እና በማግኔት እና በዒላማው አካባቢ መካከል ያለው ርቀት በጣም አስፈላጊ መሆኑ አያስደንቅም ። እነዚህ ውጤቶች አንድ ላይ ሆነው ፣ ማግኔቶች በዒላማው አካባቢ የሚፈሱትን ብዙ የፓርላማ አባላትን መያዝ ቢችሉም ማግኔቶች የኮምቢማግ ቅንጣቶችን ከትራክቱ ወለል ጋር ለማንቀሳቀስ መታመን መቻላቸው የማይመስል ነገር ነው።
ቅንጣቶች በሰውነት ውስጥ በሚሰጡበት ጊዜ ውስብስብ በሚንቀሳቀስ የሰውነት ሕብረ ሕዋስ አውድ ውስጥ ለመለየት አስቸጋሪ ናቸው ነገር ግን ማግኔትን በአግድም ከትራክቱ በላይ በመተርጎም የMP ሕብረቁምፊዎችን "ማወዛወዝ" ማድረግ ይቻላል. ምንም እንኳን የቀጥታ ምስል ማሳየት ቢቻልም, እንስሳው በሰብአዊነት ከተገደሉ በኋላ የንዑሳን እንቅስቃሴን ለመለየት ቀላል ነው. የኤምፒ ትኩረቶች በአጠቃላይ በዚህ ቦታ ላይ ከፍተኛ መጠን ያለው ቦታ ላይ ቢገኙም, ምንም እንኳን የምስሉ መጠን ከፍ ያለ ቦታ ላይ ቢገኝም, ምንም እንኳን የምስሉ መጠን ከቦታው ከፍ ያለ ነበር. የትንፋሽ መተንፈሻ ቱቦ (in vitro) ጥናቶች በተቃራኒው ማግኔትን በመተርጎም ቅንጣቶችን ወደ ቧንቧው መጎተት አይችሉም። ይህ ግኝት የአየር ቧንቧው ላይ የሚሸፍነው ንፋጭ ቅንጣቶችን ወደ ውስጥ በሚተነፍሱበት ጊዜ እና በ mucociliary clearance ዘዴ እንዴት እንደሚያጸዳው ጋር የሚስማማ ነው።
መግነጢሳዊ መስክ ከመተንፈሻ ቱቦ በላይ እና በታች ለመሳብ ማግኔቶችን መጠቀም የበለጠ ወጥ የሆነ መግነጢሳዊ መስክ ሊፈጥር ይችላል ብለን ገምተናል። በአንድ ነጥብ ላይ በከፍተኛ ሁኔታ ከተከማቸ መግነጢሳዊ መስክ ይልቅ ወደ አንድ ወጥ የሆነ የንጥሎች ስርጭት ሊያመራ ይችላል።ነገር ግን የቅድሚያ ጥናታችን ይህንን መላምት የሚደግፍ ግልጽ ማስረጃ አላገኘም። በተቀረጸው ቦታ ላይ ቅንጣት ማከማቸት እነዚህ ሁለት ግኝቶች እንደሚያሳዩት ባለሁለት-ማግኔት ማቀናበሪያ የኤምፒ ኢላማ ቁጥጥርን በከፍተኛ ሁኔታ እንደማያሻሽል እና የሚመነጩት ጠንካራ መግነጢሳዊ ኃይሎች ለማዋቀር አስቸጋሪ ናቸው ፣ይህም አካሄድ ተግባራዊ እንዲሆን ያደርገዋል። በተቀማጭ አካባቢ ውስጥ የመግነጢሳዊ መስክ ጥንካሬዎች.ስለዚህ ነጠላ ባለ 30 ዲግሪ አንግል ማግኔት ውቅር (ስእል 3 ሀ) በ vivo ሙከራ ውስጥ በጣም ቀላሉ እና በጣም ቀልጣፋ ዘዴ ተደርጎ ይቆጠራል።
የ LV-MP ጥናት እንደሚያሳየው የኤል.ቪ.ቪ ቬክተሮች ከኮምቢማግ ጋር ሲጣመሩ እና ማግኔቲክ ፊልድ በሚኖርበት ጊዜ ከአካላዊ መዛባት በኋላ ሲሰጡ ከቁጥጥር ጋር ሲነፃፀር የትራንስፎርሜሽን ደረጃዎች በመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ በከፍተኛ ሁኔታ ይጨምራሉ። የተሰጡ ቲተሮችን፣ ከዒላማ ውጪ የሚደረግ ሽግግርን፣ እብጠትን እና የበሽታ መከላከል የጎንዮሽ ጉዳቶችን እና የጂን ተሸካሚ ወጪዎችን በመቀነስ ወደ ከፍተኛ ውጤታማነት ሊመራ ይችላል።በአስፈላጊነቱ፣ እንደ አምራቹ ገለጻ፣ CombiMag ከሌሎች የቫይረስ ቬክተሮች (እንደ AAV) እና ኑክሊክ አሲዶች ጋር ጨምሮ ከሌሎች የጂን ማስተላለፊያ ዘዴዎች ጋር አብሮ መጠቀም ይችላል።
የልጥፍ ሰዓት፡- ጁላይ 16-2022
