Nature.com saytına daxil olduğunuz üçün təşəkkür edirik. İstifadə etdiyiniz brauzer versiyasında CSS üçün məhdud dəstək var. Ən yaxşı təcrübə üçün sizə yenilənmiş brauzerdən istifadə etməyi (və ya Internet Explorer-də uyğunluq rejimini söndürməyi) tövsiyə edirik. Bu arada, davamlı dəstəyi təmin etmək üçün saytı üslub və JavaScript olmadan göstərəcəyik.
Kistik fibroz ağciyər xəstəliyinin müalicəsi üçün gen vektorları keçirici tənəffüs yollarını hədəf almalıdır, çünki periferik ağciyər ötürülməsi terapevtik fayda vermir. Viral ötürülmənin effektivliyi vektorun qalma müddəti ilə birbaşa bağlıdır. Bununla belə, gen daşıyıcıları kimi çatdırılma mayeləri təbii olaraq inspirasiya zamanı alveolalara diffuziya olunur və hər hansı bir selikli qişa ilə şəffaf formada olur. nəqliyyat.Gen daşıyıcılarının tənəffüs yollarında qalma müddətinin uzadılması vacibdir, lakin buna nail olmaq çətindir.Tənəffüs yollarının səthinə yönəldilə bilən gen daşıyıcısı ilə birləşmiş maqnit hissəcikləri regional hədəflənməni təkmilləşdirə bilər.İn vivo vizuallaşdırmanın çətinlikləri səbəbindən bu cür kiçik maqnit hissəciklərinin tənəffüs yollarının səthindəki davranışı bu maqnit sahəsinin mövcudluğunda zəif istifadə üçün tətbiq edilmişdir. anesteziya edilmiş siçovulların traxeyasında bir sıra maqnit hissəciklərinin in vivo hərəkətini vizuallaşdırmaq üçün sinxrotron görüntüləmə, fərdi və toplu hissəciklərin in vivo davranışının dinamikasını və nümunələrini araşdırmaq üçün. Bundan sonra biz həmçinin lentiviral maqnit hissəciklərinin maqnit sahəsinin mövcudluğunda çatdırılmasının transductionrayncherota rentgenoqramma effektivliyini artırıb-artırmayacağını qiymətləndirdik. stasionar və hərəkət edən maqnit sahələrində maqnit hissəciklərinin davranışını in vitro və in vivo aşkar edir. Hissəciklər canlı hava yolunun səthi boyunca maqnitlərlə asanlıqla sürüklənə bilməz, lakin daşınma zamanı çöküntülər maqnit sahəsinin ən güclü olduğu görmə sahəsində cəmləşir. Transduksiya səmərəliliyi də lentiviral hissəciklərin maqnit sahəsinin maqnit sahəsinə çatdırılması zamanı altı dəfə artdı. bu nəticələr lentiviral maqnit hissəciklərinin və maqnit sahələrinin gen vektorunun hədəflənməsini yaxşılaşdırmaq və in vivo hava yollarının aparılmasında transduksiya səviyyələrini artırmaq üçün dəyərli yanaşmalar ola biləcəyini göstərir.
Kistik fibroz (KF) CF transmembran keçiricilik tənzimləyicisi (CFTR) adlı tək genin dəyişməsindən qaynaqlanır. CFTR zülalı bədənin bir çox epitel hüceyrələrində, o cümlədən CF patogenezinin əsas yeri olan keçirici hava yollarında mövcud olan ion kanalıdır. (ASL) təbəqəsi. Bu, həmçinin mukosiliar nəqliyyat (MCT) sisteminin tənəffüs yollarından inhalyasiya olunmuş hissəcikləri və patogenləri təmizləmək qabiliyyətini zəiflədir. Məqsədimiz CFTR geninin düzgün nüsxəsini çatdırmaq və ASL, MCT və ağciyər sağlamlığını yaxşılaşdırmaq üçün lentiviral (LV) gen terapiyasını inkişaf etdirməkdir.
LV vektorları CF hava yolu gen terapiyası üçün aparıcı namizədlərdən biridir, çünki onlar terapevtik geni tənəffüs yolunun bazal hüceyrələrinə (tənəffüs yollarının kök hüceyrələri) daimi olaraq inteqrasiya edə bilirlər. Bu, vacibdir, çünki onlar funksional genlə korreksiya edilmiş CF ilə əlaqəli hüceyrələrə differensiallaşaraq normal nəmləndirməni və selik klirensini bərpa edə bilirlər və vektorun həyat boyu sürməsi ilə nəticələnir. Tənəffüs yolu, çünki CF ağciyər xəstəliyinin başladığı yerdir. Vektorun ağciyərə daha dərinə çatdırılması alveolyar transduksiya ilə nəticələnə bilər, lakin bunun CF-də heç bir terapevtik faydası yoxdur. Bununla belə, gen daşıyıcıları kimi mayelər doğuşdan sonra təbii olaraq alveollara miqrasiya edir3,4 və terapevtik hissəciklər MCT və ya MLLV-ə sürətlə ötürülür. səmərəlilik vektorun hüceyrənin udulmasına imkan vermək üçün hədəf hüceyrələrin yanında qalma müddəti ilə birbaşa bağlıdır – “yaşayış vaxtı”5 – bu, tipik regional hava axını, eləcə də koordinasiya edilmiş hissəciklərin selikli qişasının tutulması və MCT ilə asanlıqla azalır. CF üçün, LV-nin tənəffüs yolunda qalma müddətini uzatmaq qabiliyyəti bu bölgədə yüksək transduksiya səviyyəsinə nail olmaq üçün vacibdir, lakin indiyədək şall olmuşdur.
Bu maneəni aradan qaldırmaq üçün biz təklif edirik ki, LV maqnit hissəcikləri (MP) bir-birini tamamlayan iki şəkildə kömək edə bilər. Birincisi, hədəflənməni yaxşılaşdırmaq və gen daşıyıcı hissəciklərin arzu olunan tənəffüs yolu bölgəsində yerləşməsinə kömək etmək üçün onlar hava yolu səthinə maqnitlə istiqamətləndirilə bilər; və ASL) hüceyrə qatına keçmək üçün 6. MP-lər antikorlara, kimyaterapevtik dərmanlara və ya hüceyrə membranlarına bağlanan və ya müvafiq hüceyrə səthi reseptorlarına bağlanan və statik elektrikin mövcudluğu ilə şiş yerlərində yığılan digər kiçik molekullara bağlandıqda, məqsədyönlü dərman çatdırma vasitələri kimi geniş istifadə edilmişdir. Xərçəngin Müalicəsi üçün Maqnit Sahələri 7. Digər “hipertermal” üsullar MP-lərin salınan maqnit sahələrinə məruz qaldıqları zaman onları qızdırmaq və bununla da şiş hüceyrələrini məhv etmək məqsədi daşıyır. DNT-nin hüceyrələrə ötürülməsini gücləndirmək üçün transfeksiya agenti kimi maqnit sahəsinin istifadə edildiyi maqnit transfeksiya prinsipi, vitroviral və qeyri-vektorlar üçün geniş istifadə olunur. çətin ötürülən hüceyrə xətləri. LV maqnitotransfeksiyasının effektivliyi müəyyən edilmişdir, LV-MP-lərin statik maqnit sahəsinin mövcudluğunda insan bronxial epitelial hüceyrə xəttinə in vitro çatdırılması, tək LV vektoru ilə müqayisədə ötürülmə səmərəliliyini 186 dəfə artırır. CF bəlğəminin iştirakı ilə hava-maye interfeys mədəniyyətlərini 20 dəfə 10. Bununla belə, orqanların in vivo maqnitotransfeksiyasına nisbətən az diqqət yetirilmişdir və yalnız bir neçə heyvan tədqiqatında qiymətləndirilmişdir11,12,13,14,15, xüsusən də ağciyərlərdə16,17. Bununla belə, CF-də maqnit transfeksiya imkanları aydındır. al.(2020) bildirmişdir ki, “effektiv maqnit nanohissəciklərinin ağciyərlərə çatdırılmasının konseptual tədqiqatı CF xəstələrində klinik nəticələri yaxşılaşdırmaq üçün gələcək CFTR inhalyasiya strategiyalarına yol açacaqdır”6.
Tətbiq edilmiş bir maqnit sahəsinin mövcudluğunda tənəffüs yollarının səthlərində kiçik maqnit hissəciklərinin davranışını vizuallaşdırmaq və öyrənmək çətindir və buna görə də zəif başa düşülür. Digər tədqiqatlarda biz sinxrotron-yayılmaya əsaslanan faza-kontrast rentgen görüntüləmə (PB-PCXI) metodunu inkişaf etdirdik və ASL18-də dəqiqə ərzində davranış dəyişikliyini invaziv olmayan şəkildə vizuallaşdırmaq və ölçmək üçün bir üsul hazırladıq. qaz Kanalının səthinin nəmləndirilməsini ölçün və müalicənin effektivliyinin ilkin göstəricisi kimi istifadə edin. Bundan əlavə, bizim MCT qiymətləndirmə metodumuz PB-PCXI21 istifadə edərək görünən MCT markerləri kimi alüminium oksidindən və ya yüksək sındırma indeksli şüşədən ibarət 10-35 µm diametrli hissəciklərdən istifadə edir. Hər iki üsul bir sıra MP hissəciklərinin vizuallaşdırılması üçün uyğundur.
Yüksək məkan və zaman ayırdetmə qabiliyyətinə görə, bizim PB-PCXI əsaslı ASL və MCT analiz üsullarımız MP geninin çatdırılma üsullarını başa düşmək və optimallaşdırmaqda bizə kömək etmək üçün in vivo olaraq tək və toplu hissəciklərin davranışının dinamikasını və nümunələrini araşdırmaq üçün çox uyğundur. Burada tətbiq etdiyimiz yanaşma SPring-8 BL20B2-dən istifadə etməklə apardığımız tədqiqatlardan irəli gəlir. siçanların ağciyər tənəffüs yolları bizim gen daşıyıcı dozası heyvan tədqiqatlarımızda müşahidə edilən qeyri-vahid gen ifadə nümunələrini izah etməyə kömək etmək üçün 3,4.
Bu tədqiqatın məqsədi canlı siçovulların nəfəs borusunda bir sıra millət vəkillərinin in vivo hərəkətlərini vizuallaşdırmaq üçün PB-PCXI sinxrotronundan istifadə etmək idi. Bu PB-PCXI görüntüləmə tədqiqatları MP hərəkətinə təsirini müəyyən etmək üçün bir sıra MP-ləri, maqnit sahəsinin güclərini və yerlərini yoxlamaq üçün nəzərdə tutulmuşdur. Bu tədqiqatlar, həmçinin çökmədən sonra nəfəs borusunda saxlanılan hissəciklərin sayını maksimuma çatdıran maqnit konfiqurasiyalarını müəyyən etməyə imkan verdi. İkinci tədqiqatlar seriyasında biz LV-MP-nin siçovulların hava yoluna in vivo çatdırılması nəticəsində yaranan transduksiya modelini nümayiş etdirmək üçün bu optimal konfiqurasiyadan istifadə etməyə çalışdıq. transduksiya səmərəliliyi.
Heyvanlar üzərində bütün tədqiqatlar Adelaide Universiteti (M-2019-060 və M-2020-022) və SPring-8 Sinxrotron Heyvan Etika Komitəsi tərəfindən təsdiq edilmiş protokollara əsasən aparılıb. Təcrübələr ARRIVE təlimatlarına uyğun olaraq həyata keçirilib.
Bütün rentgen görüntüləmələri Yaponiyadakı SPring-8 sinxrotronunda BL20XU şüa xəttində, əvvəllər təsvir edilənə oxşar quraşdırmadan istifadə etməklə həyata keçirilmişdir21,22. Qısaca olaraq, eksperimental qutu sinxrotron saxlama halqasından 245 m məsafədə yerləşirdi. Nümunədən detektora 0,6 m məsafədə hissəciklərin təsviri tədqiqatları və vivom0 üçün istifadə olunur. faza kontrast effektləri yaratmaq üçün. 25 keV monoxromatik şüa enerjisindən istifadə edilmişdir. Şəkillər sCMOS detektoruna qoşulmuş yüksək rezolyusiyaya malik rentgen çeviricisi (SPring-8 BM3) istifadə edərək çəkilmişdir. Konvertor 10 µm qalınlığında sintilatordan (Gd3Al2G) istifadə edərək rentgen şüalarını görünən işığa çevirir. × 10 mikroskop obyektivi (NA 0.3). sCMOS detektoru 2048 × 2048 piksel massiv ölçüsü və 6.5 × 6.5 µm xam piksel ölçüsü ilə Orca-Flash4.0 (Hamamatsu Photonics, Yaponiya) idi. Bu quraşdırma effektiv piksel ölçüsü 5 µm tropik görüntü verir. Təxminən 1,1 mm × 1,1 mm. Tənəffüslə bağlı hərəkət artefaktlarını minimuma endirərkən tənəffüs yolunun daxilində və xaricində maqnit hissəciklərinin siqnal-küy nisbətini maksimuma çatdırmaq üçün 100 ms ekspozisiya uzunluğu seçilmişdir. İn vivo tədqiqatlar üçün rentgen şüaları arasında radiasiya təsirini məhdudlaşdırmaq üçün sürətli rentgen qapağı yerləşdirilmişdir.
LV daşıyıcısı heç bir SPring-8 PB-PCXI görüntüləmə tədqiqatlarında istifadə edilmədi, çünki BL20XU təsvir kamerası Biotəhlükəsizlik Səviyyəsi 2 sertifikatına malik deyil. Bunun əvəzinə biz iki kommersiya təchizatçısından bir sıra yaxşı səciyyələndirilmiş millət vəkillərini seçdik - bir sıra ölçüləri, materialları, dəmir konsentrasiyalarını və tətbiqləri əhatə edən - MP qapağının ilk maqnit sahəsinə və qapağına necə təsir etdiyini başa düşmək üçün. canlı tənəffüs yollarında. səthdə. MP-lərin ölçüləri 0,25 ilə 18 μm arasında dəyişir və müxtəlif materiallardan hazırlanır (Cədvəl 1-ə baxın), lakin MP daxilindəki maqnit hissəciklərinin ölçüsü də daxil olmaqla hər bir nümunənin tərkibi məlum deyil. Geniş MCT tədqiqatlarımıza əsasən 19, 20, 21, 23, 24, biz MP5-in havada kiçik görünə biləcəyini gözləyirik. səthi, məsələn, MP hərəkətinin daha yaxşı görünməsini görmək üçün ardıcıl çərçivələri çıxarmaqla. Tək bir 0,25 μm ölçülü MP görüntüləmə cihazının ayırdetmə qabiliyyətindən kiçikdir, lakin PB-PCXI-nin onların həcm kontrastını və çökdürüldükdən sonra çökdürüldükləri səth mayesinin hərəkətini aşkar etməsi gözlənilir.
Cədvəl 1-dəki hər MP üçün nümunələr daxili diametri 0,63 mm olan 20 μl şüşə kapilyarlarda (Drummond Microcaps, PA, ABŞ) hazırlanmışdır. Korpuskulyar hissəciklər suda, CombiMag hissəcikləri isə istehsalçının xüsusi mayesində mövcuddur. (Şəkil 1-ə baxın). Şüşə kapilyarlar müvafiq olaraq təsvir qutusunda nümunə səhnəsinə üfüqi şəkildə yerləşdirildi və mayenin kənarlarını yerləşdirdi. 19 mm diametrli (28 mm uzunluqda) nikel qabığı nadir torpaq neodimium dəmir bor (NdFeB) maqnit (N35, kat. №. LM1652, elektron maqnitləşdirmə ilə Avstraliya) 1.17 Tesla nail olmaq üçün ayrıca tərcümə mərhələsinə qoşulmuşdur. Görünüş zamanı öz mövqeyini uzaqdan dəyişdirin. X-ray təsvirinin alınması maqnit nümunədən təxminən 30 mm yuxarı yerləşdirildikdə başlayır və təsvirlər saniyədə 4 kadr sürətlə əldə edilir. Görüntüləmə zamanı maqnit şüşə kapilyar boruya yaxınlaşdırıldı və boru xətti boyunca təsirlərin gücünü təxminən 1 mm uzaqlaşdırdı.
Nümunənin xy tərcüməsi mərhələsində şüşə kapilyarlarda MP nümunələrindən ibarət in vitro görüntüləmə qurğusu. Rentgen şüasının yolu qırmızı kəsikli xətt ilə işarələnmişdir.
Millət vəkillərinin in vitro görünməsi müəyyən edildikdən sonra, onların bir hissəsi vəhşi tipli dişi albinos Wistar siçovullarında (~12 həftəlik, ~200 qr) in vivo sınaqdan keçirildi.0,24 mq/kq medetomidin (Domitor®, Zenoaq, Yaponiya), 3,2 mq/kq midazolam (Dormicum®, Pharmama®, Astellastorp/kg) və (Vetorphale®, Meiji Seika) Siçovullar qarın içi inyeksiya yolu ilə Pharma, Yaponiya qarışığı ilə anesteziya edilmişdir. Anesteziyadan sonra onlar traxeya ətrafındakı xəzləri çıxararaq, endotraxeal boru (ET; 16 Ga iv cannula) daxil etməklə görüntüləmə üçün hazırlanmışdırlar. bədən temperaturunu saxlamaq üçün termal çanta olan boşqab 22 .Daha sonra təsvir lövhəsi Şəkil 2a-da göstərildiyi kimi rentgen şəklində traxeyanı üfüqi şəkildə hizalamaq üçün görüntüləmə qutusunda nümunənin tərcüməsi mərhələsinə bir az bucaqla əlavə edildi.
(a) SPring-8 görüntüləmə qutusunda in vivo görüntüləmə quraşdırması, rentgen şüasının yolu qırmızı kəsikli xətt ilə qeyd olunur.(b,c) Traxeyada maqnit lokalizasiyası iki ortoqonal quraşdırılmış IP kameradan istifadə etməklə uzaqdan həyata keçirilib. Ekran görüntüsünün sol tərəfində başı tutan məftil halqası görünə bilər və çatdırılma borusunun içərisinə yerləşdirilə bilər.
100 μl şüşə şprisdən istifadə edən uzaqdan idarə olunan şpris nasos sistemi (UMP2, World Precision Instruments, Sarasota, FL) 30 Ga iynə vasitəsilə PE10 borusuna (OD 0,61 mm, ID 0,28 mm) qoşulmuşdur. Borunu mikrorampla, ETU-da yerləşdirərkən ucun düzgün mövqedə olduğundan əmin olmaq üçün borunu işarələyin. Borunun ucu çatdırılmaq üçün MP nümunəsinə batırılarkən şpris pistonu çıxarıldı. Yüklənmiş çatdırılma borusu daha sonra endotrakeal boruya daxil edildi və ucu gözlənilən tətbiq olunan maqnit sahəsinin ən güclü hissəsinə yerləşdirildi. Şəkil əldə edilməsi Arduino qutumuza qoşulmuş tənəffüs detektorundan istifadə etməklə idarə edildi (temperatur və bütün zamanlamalar açılış/bağlama və təsvirin əldə edilməsi) Powerlab və LabChart (AD Instruments, Sidney, Avstraliya) istifadə edərək qeydə alınmışdır 22. Şəkil çəkərkən Qoruma əlçatmaz olduqda, iki IP kamera (Panasonic BB-SC382) bir-birinə təxminən 90° yerləşdirilib və maqnitlənmə zamanı maqnitin vəziyyətini izləmək üçün istifadə edilib. hərəkət artefaktları, son gelgit axını platosu zamanı nəfəs başına bir görüntü əldə edildi.
Maqnit görüntüləmə korpusunun kənarından uzaqdan yerləşə bilən ikinci mərhələyə qoşulur. Müxtəlif maqnit mövqeləri və konfiqurasiyaları sınaqdan keçirilmişdir, o cümlədən: Traxeyanın üstündə təxminən 30° bucaq altında quraşdırılmışdır (konfiqurasiyalar Şəkil 2a və 3a-da göstərilmişdir); bir maqnit heyvanın üstündə, digəri aşağıda, dirəkləri cəlb etmək üçün təyin edilmiş (Şəkil 3b); bir maqnit heyvanın üstündə, digəri aşağıda, dirəkləri dəf etmək üçün təyin edilmiş (Şəkil 3c); və bir maqnit yuxarıda və traxeyaya perpendikulyardır (Şəkil 3d). Heyvan və maqnit konfiqurasiya edildikdən və sınaqdan keçiriləcək MP şpris pompasına yükləndikdən sonra, şəkilləri əldə edərkən 50 μl dozanı 4 μl/san sürətlə çatdırın. Daha sonra maqnit traxeyaya doğru və ya yan tərəfə doğru hərəkət edərkən traxeyaya doğru hərəkət edir.
İn vivo görüntüləmə üçün maqnit konfiqurasiyası (a) traxeyanın üstündə təxminən 30° bucaq altında olan tək maqnit, (b) cəlb etmək üçün təyin edilmiş iki maqnit, (c) dəf etmək üçün təyin edilmiş iki maqnit, (d) yuxarıda və nəfəs borusuna perpendikulyar olan tək bir maqnit. Müşahidəçi ağızdan aşağıya doğru ağciyərlərə baxdı, traxeyanın sol tərəfindən keçdi və sol tərəfdəki maqnitdən keçdi. sağ tərəfdən çıxdı. Maqnit ya hava yolunun uzunluğu boyunca, ya da rentgen şüası istiqamətində nəfəs borusu üzərində sola və sağa hərəkət edir.
Biz həmçinin tənəffüs yollarında zərrəciklərin görünmə qabiliyyətini və davranışını tənəffüs və ürək hərəkətinin qarışıqlığı olmadan müəyyən etməyə çalışdıq. Buna görə də, görüntüləmə dövrünün sonunda pentobarbitalın həddindən artıq dozası üçün heyvanlar insancasına öldürüldü (Somnopentil, Pitman-Moore, Washington Crossing, ABŞ; bir dəfə nəfəs alma platformasında ~ 65 mq/kq heyvan qaldı. ürək döyüntüsü dayandı, görüntüləmə prosesi təkrarlandı, tənəffüs yollarının səthində MP görünmədikdə əlavə MP dozası əlavə edildi.
Əldə edilmiş şəkillər düz sahə və qaranlıq sahə ilə düzəldildi və sonra MATLAB-da (R2020a, The Mathworks) yazılmış xüsusi skriptdən istifadə edərək filmə (saniyədə 20 kadr; tənəffüs sürətindən asılı olaraq 15-25 × normal sürət) yığıldı.
Bütün LV gen vektorunun çatdırılması tədqiqatları Adelaide Universitetinin Laboratoriya Heyvanları Tədqiqat Müəssisəsində aparıldı və maqnit sahəsinin mövcudluğunda LV-MP çatdırılmasının in vivo olaraq gen transferini artıra biləcəyini qiymətləndirmək üçün SPring-8 təcrübəsinin nəticələrindən istifadə etmək məqsədi daşıdı. MP və maqnit sahəsinin təsirlərini qiymətləndirmək üçün iki qrup heyvan müalicə edildi: bir qrupa LV- yerləşdirilmiş V qrupu ilə maqnit nəzarəti verildi, digərinə LV-MP qrupu verildi. maqnitsiz.
LV gen vektorları əvvəllər təsvir edilmiş üsullardan istifadə edilməklə yaradılmışdır 25, 26 . LacZ vektoru konstitusiya MPSV promotoru (LV-LacZ) tərəfindən idarə olunan nüvə lokallaşdırılmış beta-qalaktosidaza genini ifadə edir, transduksiya edilmiş hüceyrələrdə mavi reaksiya məhsulu istehsal edir, ağciyər toxumasının cəbhələrində görünən və hüceyrə mədəniyyətinin manuel hesablanması ilə toxuma bölmələrinin sayılması ilə həyata keçirilir. Titeri TU/ml ilə hesablamaq üçün hemositometri olan LacZ müsbət hüceyrələr.Daşıyıcılar -80 °C-də dondurulur, istifadədən əvvəl əridilir və 1:1 nisbətində qarışdırılaraq və çatdırılmadan əvvəl ən azı 30 dəqiqə buz üzərində inkubasiya edilərək CombiMag-a bağlanır.
Normal Sprague Dawley siçovulları (n = 3/qrup, ~2-3) 0,4 mq/kq medetomidin (Domitor, Ilium, Avstraliya) və 60 mq/kq ketamin (Ilium, Avstraliya) qarışığı ilə qarın içi anesteziyaya məruz qalmışdır) ip) inyeksiya və qeyri-cərrahi şifahi traxeya ilə təmin edə bilər. tənəffüs yolu toxuması LV transduksiyasını alır, o, əvvəllər təsvir edilmiş mexaniki pozğunluq protokolumuzdan istifadə etməklə şərtləndirilmişdir, burada traxeyanın səthi məftil səbəti ilə eksenel surətdə sürtülür (N-Circle, Nitinol Tipless Stone Extractor NTSE-022115) -UDH, Cook Medical, ABŞ) 30 s28-də LVT-nin təhlükəsizliyi təqribən həyata keçirilir. Narahatlıqdan 10 dəqiqə sonra.
Bu təcrübədə istifadə edilən maqnit sahəsi in vivo rentgen görüntüləmə tədqiqatına oxşar şəkildə konfiqurasiya edilmişdir, eyni maqnitlər distillə stent klipləri istifadə edərək nəfəs borusu üzərində saxlanılmışdır (Şəkil 4). LV-MP-nin 50 μl həcmi (2 × 25 μl alikot) nəfəs borusuna çatdırıldı (n = A nəzarəti üçün əvvəllər təsvir edilən bir boru ucu ilə3). qrup (n = 3 heyvan) maqnitdən istifadə etmədən eyni LV-MP-ləri qəbul etdi. İnfuziya tamamlandıqdan sonra kanül ET borusundan çıxarılır və heyvan ekstubasiya edilir. Maqnit 10 dəqiqə yerində qalır, sonra çıxarılır. Siçovullara dərialtı meloksikam dozası (1 ml/kq) qəbul edilir (Avstraliyada təkrar ipliksiya ilə) 1 mq/kq atipamazol hidroxlorid (Antisedan, Zoetis, Avstraliya). Siçovullar anesteziyadan tam sağalana qədər isti saxlanıldı və nəzarət edildi.
Bioloji təhlükəsizlik şkafında LV-MP çatdırma qurğusu. ET borusunun açıq boz Luer qovşağının ağızdan çıxdığını görmək olar və şəkildə göstərilən pipetin gel ucu ET borusu vasitəsilə nəfəs borusuna istənilən dərinliyə daxil edilir.
LV-MP dozaj prosedurundan bir həftə sonra heyvanlar 100% CO2 inhalyasiyası ilə insancasına öldürüldü və LacZ ifadəsi standart X-gal müalicəmizdən istifadə edilərək qiymətləndirildi. Endotraxeal boru yerləşdirməsindən yaranan hər hansı mexaniki zədənin və ya mayenin tutulmasının analizə daxil edilməməsini təmin etmək üçün üç kaudal ən qığırdaqlı halqa çıxarıldı. Hər nəfəs borusu iki uzunluqlu analiz yaratmaq üçün kəsildi və uzunluqda kəsildi, onlar uzunluqda kəsildilər luminal səthi vizuallaşdırmaq üçün Minutien iynəsi (İncə Elm Alətləri) istifadə edərək tərkibində silikon kauçuk (Sylgard, Dow Inc). Transdusiya edilmiş hüceyrələrin paylanması və nümunəsi DigiLite kamerası və TCapture proqramı (Tucsen Photonics, accluinding the China) ilə Nikon mikroskopundan (SMZ1500) istifadə edərək frontal fotoqrafiya ilə təsdiq edilmişdir. traxeyanın tam eni üçün ən yüksək parametr), traxeyanın bütün uzunluğu addım-addım təsvir olunmaqla, təsvirin “tikilməsinə” imkan vermək üçün hər bir təsvir arasında kifayət qədər üst-üstə düşməyi təmin edir. Daha sonra hər bir nəfəs borusundan olan şəkillər Şəkil Kompozisiya Redaktoru v2.0.3 (Microsoft Research) istifadə edərək, planlı şəkillərin kompozisiya sahələrinin ifadəsindən istifadə edərək vahid kompozit təsvirə yığıldı. hər bir heyvandan gələn nəfəs borusu əvvəlcədən təsvir olunduğu kimi avtomatlaşdırılmış MATLAB skripti (R2020a, MathWorks) istifadə edərək, 0,35 < Rəng < 0,58, Doyma > 0,15 və Dəyər < 0,7 parametrlərindən istifadə etməklə ölçüldü. Toxumanın konturlarını izləməklə, hər bir GIMP2-yə uyğun olaraq maska ​​əl ilə yaradıldı. toxuma sahəsini müəyyənləşdirin və traxeya toxumasının xaricində hər hansı saxta aşkarlamanın qarşısını alın. Hər bir heyvandan alınan bütün kompozit şəkillərdən ləkələnmiş sahələr həmin heyvan üçün ümumi ləkələnmiş sahəni yaratmaq üçün cəmləndi. Daha sonra normallaşdırılmış sahə yaratmaq üçün ləkələnmiş sahə ümumi maska ​​sahəsinə bölündü.
Hər bir nəfəs borusu parafinə gömülmüş və 5 μm-lik hissələr kəsilmişdir. Bölmələr 5 dəqiqə ərzində neytral sürətli qırmızı boya ilə əks olunmuş və şəkillər Nikon Eclipse E400 mikroskopu, DS-Fi3 kamerası və NIS elementlərinin çəkiliş proqramı (versiya 5.20.00) vasitəsilə əldə edilmişdir.
Bütün statistik təhlillər GraphPad Prism v9 (GraphPad Software, Inc.) proqramında yerinə yetirilib. Statistik əhəmiyyət p ≤ 0.05 səviyyəsində müəyyən edilib. Normallıq Şapiro-Wilk testindən istifadə edilərək təsdiq edilib və LacZ boyanmasında fərqlər qoşalaşmamış t-testindən istifadə etməklə qiymətləndirilib.
Cədvəl 1-də təsvir edilmiş altı MP PCXI istifadə edərək tədqiq edildi və görünmə qabiliyyəti Cədvəl 2-də təsvir edilmişdir. İki polistirol MP (MP1 və MP2; müvafiq olaraq 18 μm və 0.25 μm) PCXI altında görünmürdü, lakin qalan nümunələr müəyyən edilə bilərdi (nümunələr MP41-də göstərilmişdir). Fe3O4; müvafiq olaraq 0,25 μm və 0,9 μm) zəif görünür. Tərkibində sınaqdan keçirilmiş ən kiçik hissəciklərdən bəziləri olsa da, MP5 (98% Fe3O4; 0,25 μm) ən bariz idi. CombiMag məhsulu MP6-nı aşkar etmək çətindir. kapilyarla paralel. Maqnitlər kapilyardan uzaqlaşdıqda hissəciklər uzun tellərlə uzanırdı, lakin maqnitlər yaxınlaşdıqca və maqnit sahəsinin gücü artdıqca hissəciklər kapilyarın yuxarı səthinə doğru miqrasiya etdikcə hissəcik telləri qısalır (bax. Əlavə Video S1: MP4). kapilyar, sahənin gücü azalır və MP-lər kapilyarın yuxarı səthindən uzanan uzun tellərə yenidən düzülür (bax. Əlavə Video S2:MP4). Maqnit hərəkətini dayandırdıqdan sonra, tarazlıq vəziyyətinə çatdıqdan sonra hissəciklər qısa müddət ərzində hərəkət etməyə davam edir. MP hərəkət edərkən, mayenin yuxarı səthinə doğru və uzaqlaşdıqca kapilyar hissəciklər tipik olaraq maqnit parçacıqları əmələ gətirir.
PCXI altında MP-nin görünməsi nümunələr arasında əhəmiyyətli dərəcədə dəyişir.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 və (d) MP6. Burada göstərilən bütün şəkillər birbaşa kapilyardan təxminən 10 mm yuxarıda yerləşən maqnitlə çəkilib. Görünən böyük dairələr kapilyarlarda sıxışmış hava qabarcıqlarıdır və bu, fazanın ziddiyyətini göstərən ən qara və ağ kənar xüsusiyyətlərini açıq şəkildə göstərir. böyütmə.Qeyd edək ki, bütün rəqəmlərdəki maqnit sxemlərinin diametrləri miqyaslı deyil və göstəriləndən təxminən 100 dəfə böyükdür.
Maqnit kapilyarın yuxarı hissəsi boyunca sola və sağa çevrildikcə, MP siminin bucağı maqnitlə uyğunlaşmaq üçün dəyişir (Şəkil 6-a baxın), beləliklə, maqnit sahəsinin xətləri müəyyən edilir. MP3-5 üçün akkord eşik bucağına çatdıqdan sonra hissəciklər kapilyarın yuxarı səthi boyunca sürüklənir. ən güclüdür (Əlavə Video S3:MP5-ə baxın). Bu, kapilyar sonuna yaxın təsvirlər zamanı xüsusilə aydın görünür, bu da MP-lərin maye-hava interfeysində cəmləşməsinə və cəmləşməsinə səbəb olur. MP3-5-dən daha çətin ayırd etmək çətin olan MP6-dakı hissəciklər maqnit hərəkət etdiyi üçün sürüklənmirdi, lakin MP-nin kapilyar hissəsinin görünüş sahəsini tərk edərək parçalanır. (Əlavə Video S4: MP6-a baxın). Bəzi hallarda, maqnitin görüntüləmə yerindən böyük bir məsafədə hərəkət etdirilməsi ilə tətbiq olunan maqnit sahəsi azaldıqda, qalan hər hansı millət vəkili simdə qalaraq yavaş-yavaş cazibə qüvvəsi ilə borunun alt səthinə enirdi (bax. Əlavə Video S5: MP3).
Maqnit kapilyarın üstündə sağa çevrildikcə MP siminin bucağı dəyişir.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 və (d) MP6. Qırmızı qutuda kontrastı artıran böyütmə var. Qeyd edək ki, əlavə videolar informativdir, çünki onlar mühüm hissəcik strukturunu və bu statik şəkillərdə vizuallaşdırıla bilməyən dinamik məlumatları ortaya qoyur.
Testlərimiz göstərdi ki, maqnitin nəfəs borusu boyunca yavaş-yavaş irəli-geri hərəkət etdirilməsi MP-nin in vivo mürəkkəb hərəkət kontekstində vizuallaşdırılmasını asanlaşdırır. Polistirol muncuqları (MP1 və MP2) kapilyarda görünmədiyi üçün in vivo sınaq aparılmadı. Qalan dörd MP-nin hər biri traxeya 03°-dən yuxarı uzunluqlu maqnit konfiqurasiyası ilə in vivo sınaqdan keçirildi. şaquli (bax Şəkil 2b və 3a), çünki bu, daha uzun MP zəncirləri ilə nəticələndi və maqnit konfiqurasiyası dayandırıldığından daha təsirli idi. MP3, MP4 və MP6 heç bir canlı heyvanın nəfəs borusunda aşkar edilmədi. Heyvanlar insan tərəfindən öldürüldükdən sonra siçovulların tənəffüs yollarının təsviri aparıldıqda, hissəciklər görünməz olaraq qaldı, hətta əlavə həcmdə MP5 oksidi əlavə edildikdə də hissəciklər görünməz qaldı. yalnız görünən hissəcikdir və buna görə də MP-nin in vivo davranışını qiymətləndirmək və xarakterizə etmək üçün istifadə edilmişdir.
MP çatdırılması zamanı maqnitin traxeyanın üzərinə yerləşdirilməsi çoxlu sayda deputatın görmə sahəsində cəmləşməsi ilə nəticələndi, lakin hamısı deyil. Nəfəs borusuna daxil olan hissəciklər ən yaxşı insan tərəfindən qurban verilmiş heyvanlarda müşahidə olunur. Şəkil 7 və Əlavə Video S6: MP5 sürətli maqnit tutulması və hissəciklərin hizalanmasını göstərir, ventral traxeyanın səthində parçacıqların hizalanmasını göstərir. traxeya.MP çatdırıldıqdan sonra nəfəs borusu boyunca daha distal axtarış apararkən bəzi millət vəkilləri karinaya daha yaxın tapıldı və bu, maqnit sahəsinin gücünün bütün millət vəkillərini toplamaq və saxlamaq üçün kifayət etmədiyini irəli sürdü, çünki onlar maye prosesi zamanı maksimum maqnit sahəsinin gücü bölgəsindən ötürülürdülər. Buna baxmayaraq, doğuşdan sonrakı MP konsentrasiyaları təsvir edilən hava yolunun ətrafında tətbiq olunan maqnit sahəsinin çoxlu bölgələrində daha yüksək olduğunu göstərirdi. ən yüksək idi.
(a)-dan əvvəl və (b)-dən olan şəkillər, maqnit birbaşa görüntüləmə sahəsinin yuxarısında yerləşdirilmiş maqnitlə yaxınlarda evtanaziya edilmiş siçovulun nəfəs borusuna çatdırıldıqdan sonra. Təsvir edilən sahə iki qığırdaq halqasının arasında yerləşir. MP çatdırılmasından əvvəl hava yolunda bir qədər maye var. Qırmızı qutuda kontrastı artıran böyütmə var. Bu görüntülər S6MP-dən olan videoda göstərilir.
Maqnitin traxeyaya in vivo çevrilməsi MP zəncirinin kapilyarlarda göründüyü kimi tənəffüs yolu səthi daxilində bucağı dəyişməsinə səbəb oldu (Şəkil 8 və Əlavə Video S7:MP5-ə baxın). Bununla belə, bizim tədqiqatımızda millət vəkilləri canlı hava yolunun səthi boyunca kapilyarlarda olduğu kimi sürüklənə bilmədi. biz onu da tapdıq ki, maqnit traxeya boyunca uzununa hərəkət etdikdə hissəcik zəncirinin səthi maye təbəqəsinin dərinliyini dəyişdirir və maqnit birbaşa yuxarıya doğru hərəkət etdikdə və hissəcik simi şaquli mövqeyə çevrildikdə genişlənir (bax. Əlavə Video S7). : MP5 at 0:09, sağ alt). Maqnit traxeyanın yuxarı hissəsindən yan tərəfə (yəni nəfəs borusu boyunca deyil, heyvanın soluna və ya sağına) çevrildikdə xarakterik hərəkət nümunəsi dəyişdi. Hissəciklər hərəkət edərkən hələ də aydın görünürdü, lakin maqnit traxeyanın içindən çıxarıldıqda, hissəciklərin ucları görünürdü. S8:MP5, 0:08-dən başlayır). Bu, şüşə kapilyarda tətbiq olunan maqnit sahəsi altında müşahidə etdiyimiz MP davranışına uyğundur.
Canlı anesteziya edilmiş siçovulun nəfəs borusunda MP5-i göstərən nümunə şəkillər.(a) Maqnit traxeyanın yuxarısında və solunda, sonra (b) maqnit sağa köçürüldükdən sonra təsvirlər əldə etmək üçün istifadə olunur. Qırmızı qutuda kontrastı artıran böyütmə var. Bu görüntülər Əlavə Video S7:MP-də göstərilən videodandır.
İki qütb traxeyanın üstündə və altında şimal-cənub istiqamətində konfiqurasiya edildikdə (yəni cəlbedici; Şəkil 3b), MP akkordları daha uzun görünürdü və traxeyanın dorsal səthində deyil, nəfəs borunun yan divarında yerləşirdi (bax. Əlavə Video S9: MP5). Bununla belə, hissəciklərin yüksək konsentrasiyası (yəni, traxeyanın tək yerində aşkar edilməmişdir) iki maqnitli cihaz istifadə edildikdə mayenin çatdırılmasından sonra, bu adətən bir maqnitli cihaz istifadə edildikdə baş verir. Sonra bir maqnit qütbləri tərsinə dəf etmək üçün konfiqurasiya edildikdə (Şəkil 3c), çatdırıldıqdan sonra görünüş sahəsində görünən hissəciklərin sayı artmadı. quraşdırma daha sonra tənəffüs yoluna paralel, lakin 90 dərəcə tənəffüs yolundan keçən tək maqnitlə dəyişdirildi, beləliklə sahə xətləri traxeyanın divarını ortoqonal şəkildə keçdi (Şəkil 3d), oriyentasiya yan divarda hissəciklərin yığılmasının müşahidə oluna biləcəyini müəyyən etmək üçün nəzərdə tutulmuşdur .Lakin bu konfiqurasiyada, bu konfiqurasiyada heç bir maqnit hərəkəti yox idi. tək maqnitli, 30 dərəcə oriyentasiya konfiqurasiyası (Şəkil 3a) in vivo gen daşıyıcısı tədqiqatları üçün seçilmişdir.
Heyvan insan tərəfindən öldürüldükdən dərhal sonra dəfələrlə təsvir edildikdə, qarışıq toxuma hərəkətinin olmaması aydın interxondral sahədə daha incə və daha qısa hissəcik xətlərinin, maqnitin tərcümə hərəkətinə uyğun olaraq "yırğalandığını" müəyyən etmək demək idi. Buna baxmayaraq, hələ də MP6 hissəciklərinin varlığını və hərəkətini aydın görə bilmir.
LV-LacZ titri 1,8 × 108 TU/ml idi və CombiMag MP (MP6) ilə 1:1 nisbətində qarışdırıldıqdan sonra heyvanlar 9 × 107 TU/ml LV vasitəsinin (yəni 4,5 × 106 TU/siçovul) 50 μl trakeal dozasını aldılar. ).Bu tədqiqatlarda, əmək zamanı maqniti tərcümə etmək əvəzinə, LV transduksiyasının (a) maqnit sahəsinin olmadığı zaman vektor çatdırılması ilə müqayisədə təkmilləşdirilə biləcəyini və (b) fokuslana biləcəyini müəyyən etmək üçün maqniti bir vəziyyətdə sabitlədik.
Maqnitlərin mövcudluğu və LV vektorları ilə birlikdə CombiMag-ın istifadəsi, standart LV vektor çatdırılma protokolumuz kimi heyvan sağlamlığına mənfi təsir göstərməmişdir. Mexanik pozğunluğa məruz qalmış traxeya bölgəsinin ön şəkilləri (Əlavə Şəkil 1) göstərdi ki, heyvanlar qrupunda əhəmiyyətli dərəcədə yüksək transduksiya səviyyəsi var (LV-MP ilə müalicə edildikdə). nəzarət qrupunda az miqdarda mavi LacZ boyanması mövcud idi (Şəkil 9b). Normallaşdırılmış X-Gal ilə ləkələnmiş ərazilərin kəmiyyəti göstərdi ki, LV-MP-nin maqnit sahəsinin mövcudluğunda tətbiqi təxminən 6 dəfə yaxşılaşdı (Şəkil 9c).
LV-MP (a) maqnit sahəsinin mövcudluğunda və (b) maqnit olmadıqda traxeyanın ötürülməsini göstərən kompozit şəkillər nümunəsi. (c) Maqnitdən istifadə edərkən traxeya daxilində normallaşdırılmış LacZ transduksiya sahəsində statistik əhəmiyyətli yaxşılaşma (*p = 0,029, t-test, hər qrup üçün n = ± 3).
Neytral sürətli qırmızı ləkələnmiş hissələr (Əlavə Şəkil 2-də göstərilən nümunə) əvvəllər bildirildiyi kimi oxşar naxışda və yerdə mövcud olan LacZ ilə boyanmış hüceyrələri göstərdi.
Tənəffüs yolu gen terapiyası üçün əsas problem daşıyıcı hissəciklərin maraq bölgələrində dəqiq lokalizasiyası və hava axını və aktiv selik klirensi olduqda hərəkət edən ağciyərdə yüksək transduksiya effektivliyinə nail olmaqdır. CF hava yolu xəstəliyinin müalicəsi üçün nəzərdə tutulmuş LV daşıyıcıları üçün, keçirici tənəffüs yollarında daşıyıcı hissəciklərin qalma müddətini artırmaq Castella et al. Transduksiyanı yaxşılaşdırmaq üçün maqnit sahələrinin istifadəsi elektroporasiya kimi digər gen çatdırılma üsulları ilə müqayisədə üstünlüklərə malikdir, çünki o, sadəliyi, qənaətcilliyi, çatdırılma lokalizasiyasını, artan səmərəliliyi və daha qısa inkubasiya vaxtlarını və ehtimal ki, daha kiçik bir daşıyıcı dozanı birləşdirə bilər10. Bununla belə, in vivo çökmə və maqnit hissəciklərinin xarici təsiri altında davranışı heç vaxt təsvir edilməmişdir. nə də bütöv canlı hava yollarında gen ifadə səviyyələrini artırmaq üçün in vivo olaraq bu metodun mümkünlüyü nümayiş etdirilməmişdir.
Bizim in vitro sinxrotron PCXI təcrübələrimiz göstərdi ki, polistirol MP istisna olmaqla, sınaqdan keçirdiyimiz bütün hissəciklər istifadə etdiyimiz təsvir qurğusunda görünürdü. Maqnit sahəsinin mövcudluğunda, MP-lər uzunluqları hissəcik növü və maqnit sahəsinin gücü ilə (yəni maqnitin yaxınlığı və hərəkəti Şəkildə göstərildiyi kimi) bağlı olan sətirlər əmələ gətirir. hər bir fərdi hissəcik maqnitlənir və öz yerli maqnit sahəsini induksiya edir. Bu ayrı-ayrı sahələr digər hissəciklərin yerli cəlbedici və itələyici qüvvələrindən gələn yerli qüvvələr hesabına qrup simli hərəkətlərlə digər oxşar hissəciklərin birləşməsinə və birləşməsinə səbəb olur.
Sxematik (a,b) maye ilə dolu kapilyarların və (c,d) hava ilə dolu traxeyanın içərisində əmələ gələn hissəcik qatarlarını göstərir. Nəzərə alın ki, kapilyarlar və nəfəs borusu miqyasda çəkilmir. Panel (a) həmçinin sətirlərdə düzülmüş Fe3O4 hissəciklərini ehtiva edən MP-nin təsvirini ehtiva edir.
Maqnit kapilyardan yuxarı qaldırıldıqda, hissəcik siminin bucağı Fe3O4 ehtiva edən MP3-5 üçün kritik həddə çatdı, bundan sonra hissəcik simi artıq orijinal vəziyyətdə qalmayıb, səth boyunca yeni mövqeyə doğru hərəkət etdi. ola bilsin ki, hissəciklər daha kiçik, fərqli örtüklərə və ya səth yüklərinə malik olub və ya xüsusi daşıyıcı maye onların hərəkət qabiliyyətinə təsir göstərib. CombiMag hissəciklərinin təsvir kontrastı da zəifdir, bu, mayenin və hissəciklərin oxşar sıxlığa malik ola biləcəyini və buna görə də asanlıqla bir-birinə doğru hərəkət edə bilməyəcəyini göstərir. Mayedəki hissəciklər arasındakı sürtünmənin öhdəsindən gəlmək, bəlkə də təəccüblü deyil ki, maqnit sahəsinin gücü və maqnit ilə hədəf sahəsi arasındakı məsafə çox vacibdir. Birlikdə götürdükdə, bu nəticələr həmçinin göstərir ki, maqnitlər hədəf ərazidən axan bir çox millət vəkilini tuta bilsə də, çətin ki, maqnit hissəciklərin biz traktın səthi boyunca hərəkət etməsi üçün maqnitlərə etibar etmək mümkün deyil. in vivo LV-MP tədqiqatlarında tənəffüs yolu ağacının xüsusi bölgələrini fiziki olaraq hədəfləmək üçün statik maqnit sahələrindən istifadə etməli olduğu qənaətinə gəlin.
Zərrəciklər bədənə çatdırıldıqda, onları mürəkkəb hərəkət edən bədən toxuması kontekstində müəyyən etmək çətindir, lakin onları aşkar etmək qabiliyyəti maqnitin traxeyanın üstündəki üfüqi olaraq MP tellərini "hərəkətləndirmək" yolu ilə təkmilləşdirilmişdir. Canlı görüntüləmə mümkün olsa da, heyvan insan tərəfindən öldürüldükdən sonra hissəciklərin hərəkətini ayırd etmək daha asandır. sahə, baxmayaraq ki, bəzi hissəciklər adətən traxeya boyunca daha da tapılırdı. İn vitro tədqiqatlardan fərqli olaraq, hissəciklər maqnitin tərcüməsi ilə nəfəs borusu boyunca sürüklənə bilməz. Bu tapıntı nəfəs borusunun səthini örtən selikin adətən inhalyasiya olunmuş hissəcikləri emal etdiyi, onları selikdə tutması və sonradan selikli qişaların təmizlənməsi mexanizmi ilə uyğun gəlir.
Biz fərz etdik ki, traxeyanın yuxarısında və altında cazibə üçün maqnitlərdən istifadə (Şəkil 3b) bir nöqtədə yüksək cəmləşmiş, potensial olaraq hissəciklərin daha vahid paylanmasına gətirib çıxaran maqnit sahəsi ilə deyil, daha vahid maqnit sahəsi ilə nəticələnə bilər. Bununla belə, ilkin araşdırmamız bu fərziyyəni dəstəkləmək üçün aydın sübut tapmadı. 3c) təsvir edilən ərazidə daha çox hissəcik çökməsi ilə nəticələnmədi. Bu iki tapıntı göstərir ki, ikili maqnit qurğusu MP hədəflənməsinə yerli nəzarəti əhəmiyyətli dərəcədə təkmilləşdirmir və nəticədə yaranan güclü maqnit qüvvələrini konfiqurasiya etmək çətindir, bu da bu yanaşmanı daha az praktik edir. Bu alternativ konfiqurasiyalardan bəziləri çöküntü zonasında daha aşağı maqnit sahəsinin gücü ilə nəticələndiyi üçün uğurlu olmaya bilər. Buna görə də, tək 30 dərəcə bucaqlı maqnit konfiqurasiyası (Şəkil 3a) in vivo sınaq üçün ən asan və ən səmərəli üsul hesab olunur.
LV-MP tədqiqatı göstərdi ki, LV vektorları CombiMag ilə birləşdirildikdə və bir maqnit sahəsinin mövcudluğunda fiziki pozğunluqdan sonra çatdırıldıqda, traxeyada transduksiya səviyyələri nəzarətlə müqayisədə əhəmiyyətli dərəcədə artdı. Sinxrotron görüntüləmə tədqiqatları və LacZ nəticələrinə əsasən, maqnit sahəsi yəqin ki, LV vektorunun dərin hissəciklərinin sayını dərhal saxlaya bildi. ağciyər. Bu cür hədəfləmə təkmilləşdirmələri çatdırılan titrləri, hədəfdən kənar transduksiyanı, iltihablı və immun yan təsirləri və gen daşıyıcısı xərclərini azaltmaqla daha yüksək effektivliyə gətirib çıxara bilər. Vacibdir ki, istehsalçıya görə, CombiMag digər gen transferi üsulları ilə, o cümlədən digər viral AAV vektorları (nüvə turşuları və nükleik turşular) ilə birlikdə istifadə edilə bilər.