Daalụ maka ịga leta Nature.com. Ụdị ihe nchọgharị ị na-eji nwere nkwado dị nta maka CSS. Maka ahụmịhe kachasị mma, anyị na-akwado ka ị jiri ihe nchọgharị emelitere (ma ọ bụ gbanyụọ ọnọdụ ndakọrịta na Internet Explorer). Ka ọ dị ugbu a, iji hụ na nkwado na-aga n'ihu, anyị ga-egosi saịtị ahụ na-enweghị ụdị na JavaScript.
Ihe ndị na-egosi mkpụrụ ndụ ihe nketa maka ọgwụgwọ ọrịa akpa ume nke cystic fibrosis kwesịrị ilekwasị anya n'ikuku ndị na-eduzi ikuku n'ihi na nnyefe akpa ume anaghị enye uru ọgwụgwọ. Arụmọrụ nnyefe nje na-ejikọta kpọmkwem na oge obibi vector. Agbanyeghị, mmiri nnyefe dịka ndị na-ebu mkpụrụ ndụ ihe nketa na-agbasa n'ime alveoli n'oge mmụọ nsọ, a na-ewepụkwa mkpụrụ ndụ ọgwụgwọ nke ụdị ọ bụla ngwa ngwa site na mbugharị mucociliary. Ịgbatị oge obibi nke ndị na-ebu mkpụrụ ndụ ihe nketa n'ikuku dị mkpa mana ọ siri ike imezu. Mkpụrụ ndụ ihe nketa jikọtara nke nwere ike iduga n'elu ikuku nwere ike imeziwanye ebumnuche mpaghara. N'ihi ihe ịma aka nke vivo vivo visual visual, a ghọtaghị omume nke obere mkpụrụ ndụ ihe nketa dị otú ahụ n'elu ikuku n'ihu ubi magnet etinyere. Ebumnuche nke ọmụmụ ihe a bụ iji onyonyo synchrotron iji hụ mmegharị in vivo nke usoro mkpụrụ ndụ ihe nketa magnet na trachea nke oke anesthetized iji nyochaa ike na ụkpụrụ nke omume nke otu na nnukwu mkpụrụ ndụ ihe nketa na vivo. Anyị nyochakwara ma nnyefe nke mkpụrụ ndụ ihe nketa lentiviral n'ihu ubi magnet ga-eme ka arụmọrụ transduction dịkwuo elu na trachea oke. Synchrotron Ihe onyonyo X-ray na-egosi omume nke ihe ndọta magnetik na ubi ndọta na-agagharị na vitro na in vivo. Enweghị ike ịdọkpụrụ ihe ndị ahụ ngwa ngwa n'elu ikuku dị ndụ site na iji magnet, mana n'oge njem, a na-etinye ihe ndị ahụ n'ọhịa ebe ubi ndọta kacha sie ike. A mụbakwara arụmọrụ transduction okpukpu isii mgbe e nyere ihe ndọta lentiviral n'ihu ubi ndọta. N'ozuzu, nsonaazụ ndị a na-egosi na ihe ndọta lentiviral na ubi ndọta nwere ike ịbụ ụzọ bara uru iji melite ebumnuche vector gene ma bulie ọkwa transduction na iduzi ikuku n'ime vivo.
A na-akpata cystic fibrosis (CF) site na mgbanwe dị na otu mkpụrụ ndụ ihe nketa a na-akpọ CF transmembrane conductance regulator (CFTR). Protein CFTR bụ ọwa ion nke dị n'ọtụtụ mkpụrụ ndụ epithelial n'ahụ niile, gụnyere ikuku na-eduzi, ebe bụ isi nke pathogenesis CF. Nrụhie CFTR na-eduga na njem mmiri na-adịghị mma, na-eme ka mmiri ghara ịdị n'elu ikuku ma na-ebelata omimi nke oyi akwa mmiri n'elu ikuku (ASL). Nke a na-emebikwa ikike nke sistemụ mucociliary transport (MCT) iji kpochapụ ihe ndị na-akpata ọrịa na nje ndị na-efe efe site na ikuku. Ebumnuche anyị bụ ịmepụta ọgwụgwọ mkpụrụ ndụ ihe nketa lentiviral (LV) iji nye otu ziri ezi nke mkpụrụ ndụ ihe nketa CFTR ma melite ahụike ASL, MCT, na akpa ume, yana ịnọgide na-emepụta teknụzụ ọhụrụ nwere ike ịtụ paramita ndị a na vivo1.
Ndị na-ahụ maka LV bụ otu n'ime ndị na-eduga n'ọgwụgwọ mkpụrụ ndụ ihe nketa nke CF, ọkachasị n'ihi na ha nwere ike itinye mkpụrụ ndụ ihe nketa ọgwụgwọ na mkpụrụ ndụ ihe nketa basal nke ikuku (mkpụrụ ndụ ihe nketa ikuku). Nke a dị mkpa n'ihi na ha nwere ike iweghachi mmiri na mkpochapụ imi nkịtị site na iche iche ka ọ bụrụ mkpụrụ ndụ ihe nketa nke CF jikọtara na mkpụrụ ndụ ihe nketa na-arụ ọrụ, na-ebute uru ndụ niile. A ga-eduzi vektọ LV megide ikuku na-eduzi, ebe ọ bụ ebe ọrịa akpa ume CF na-amalite. Inyefe vektọ n'ime akpa ume miri emi nwere ike ibute transduction alveolar, mana nke a enweghị uru ọgwụgwọ na CF. Agbanyeghị, mmiri dị ka ndị na-ebu mkpụrụ ndụ ihe nketa na-akwaga na alveoli mgbe mmụọ nsọ gasịrị3,4 na a na-ewepụ mkpụrụ ndụ ihe nketa n'ime oghere ọnụ site na MCT. Arụmọrụ transduction LV metụtara kpọmkwem ogologo oge vektọ ahụ na-anọ n'akụkụ mkpụrụ ndụ ihe nketa iji kwe ka mkpụrụ ndụ nweta - "oge obibi"5 - nke a na-ebelata ngwa ngwa site na ikuku ikuku mpaghara yana njide mucous nke a haziri ahazi na MCT. Maka CF, ikike ịgbatị oge obibi nke LV n'ime ikuku dị mkpa iji nweta ọkwa dị elu nke transduction na mpaghara a, mana ruo ugbu a ọ dịla anya abụrụla ihe ịma aka.
Iji merie ihe mgbochi a, anyị na-atụ aro na mkpụrụ ndụ ihe nketa LV (MPs) nwere ike inye aka n'ụzọ abụọ na-emekọ ihe ọnụ. Nke mbụ, enwere ike iduzi ha site na magnetik gaa n'elu ikuku iji melite ebumnuche ma nyere mkpụrụ ndụ ihe nketa aka ibi na mpaghara ikuku achọrọ; na ASL) ịkwaga na oyi akwa sel 6. Ejirila MPs mee ihe nke ukwuu dị ka ụgbọ ala nnyefe ọgwụ ezubere iche mgbe ha na-ejikọ na ọgwụ mgbochi, ọgwụ kemoterapi, ma ọ bụ obere molekul ndị ọzọ na-ejikọ na akpụkpọ ahụ sel ma ọ bụ na-ejikọ na ndị na-anabata elu sel dị mkpa ma na-agbakọta na ebe etuto ahụ n'ihu ọkụ eletrik na-anaghị agbanwe agbanwe. Ubi Igwe Maka Ọgwụgwọ Ọrịa Kansa 7. Usoro "hyperthermal" ndị ọzọ na-achọ ime ka MP kpoo ọkụ mgbe ha na-ekpughere ubi magnet na-agagharị, si otú a na-ebibi mkpụrụ ndụ tumor. A na-ejikarị ụkpụrụ nke transfection magnet, nke a na-eji ubi magnet dị ka ihe na-eme ka nnyefe DNA dịkwuo mma na mkpụrụ ndụ, na vitro site na iji ọtụtụ vektọ mkpụrụ ndụ na-abụghị nje na nje maka ahịrị mkpụrụ ndụ siri ike ịgbanwe. A chọpụtala irè nke LV magnetotransfection, yana nnyefe in vitro nke LV-MPs na ahịrị mkpụrụ ndụ bronchial mmadụ n'ihu ubi magnet static, na-eme ka arụmọrụ transduction dịkwuo elu site na ugboro 186 ma e jiri ya tụnyere LV vector naanị. A tinyekwala LV-MP na ụdị in vitro CF, ebe transfection magnet mụbara transduction LV na omenala njikọ ikuku mmiri mmiri site na ugboro 20 na ọnụnọ nke CF sputum10. Agbanyeghị, in vivo magnetotransfection nke akụkụ ahụ enwetabeghị nlebara anya dị nta ma enyochala naanị na ọmụmụ anụmanụ ole na ole11,12,13,14,15, karịsịa n'ime akpa ume16,17. Agbanyeghị, ohere maka mgbanwe magnet na ọgwụgwọ akpa ume CF doro anya. Tan et al. (2020) kwuru na "ọmụmụ ihe akaebe nke echiche nke nnyefe akpa ume magnetik nanoparticle dị irè ga-emepe ụzọ maka atụmatụ iku ume CFTR n'ọdịnihu iji melite nsonaazụ ahụike na ndị ọrịa CF"6.
Ọ na-esiri ike ịhụ ma mụọ ihe gbasara obere ihe ndọta n'elu ikuku n'ihu ebe a na-etinye ihe ndọta, nke a na-aghọtaghị nke ọma. N'ọmụmụ ihe ndị ọzọ, anyị mepụtara usoro X-ray nke dabere na synchrotron-propagation-based phase-contrast X-ray imaging (PB-PCXI) iji hụ ma tụọ mgbanwe dị mkpirikpi na ndụ dị omimi ASL18 na omume MCT19,20 ozugbo iji tụọ mmiri gas n'elu ọwa mmiri ma jiri ya mee ihe dị ka ihe ngosi mbụ nke irè ọgwụgwọ. Na mgbakwunye, usoro nyocha MCT anyị na-eji ihe dị n'obosara 10-35 µm nke mejupụtara alumina ma ọ bụ iko ntụaka dị elu dị ka ihe nrịbama MCT a na-ahụ anya site na iji PB-PCXI21. Usoro abụọ a dabara adaba maka ịhụ ihe dị iche iche nke ụdị ihe ndọta, gụnyere MP.
N'ihi oke mkpebi ya dị elu na nke oge, usoro nyocha ASL na MCT nke dabeere na PB-PCXI anyị dabara nke ọma maka inyocha ike na ụkpụrụ nke omume otu na nnukwu ihe dị na vivo iji nyere anyị aka ịghọta ma melite usoro nnyefe mkpụrụ ndụ MP. Ụzọ anyị si eji ebe a sitere na ọmụmụ ihe anyị site na iji akara SPring-8 BL20B2, nke anyị ji anya nke uche hụ mmegharị mmiri mgbe nnyefe dose sham vector na-abanye n'ime ikuku imi na akpa ume nke òké iji nyere aka kọwaa ụkpụrụ ngosipụta mkpụrụ ndụ ihe nketa anyị na-abụghị otu nke a hụrụ na ọmụmụ anụmanụ dose gene anyị 3,4.
Ebumnuche nke ọmụmụ ihe a bụ iji synchrotron PB-PCXI iji hụ mmegharị in vivo nke usoro MPs na trachea nke oke dị ndụ. Emebere ọmụmụ ihe onyonyo PB-PCXI ndị a iji nwalee ọtụtụ MPs, ike magnetik, na ebe iji chọpụta mmetụta ha na mmegharị MP. Anyị chere na ubi magnetik etinyere n'èzí ga-enyere MP enyere aka ịnọ ma ọ bụ ịkwaga ebe ebumnuche. Ọmụmụ ihe ndị a nyekwara anyị ohere ịchọpụta nhazi magnet nke na-eme ka ọnụọgụgụ ihe ndị dị na trachea dịkwuo elu mgbe etinyechara ya. Na usoro ọmụmụ nke abụọ, anyị gbalịrị iji nhazi kachasị mma a gosipụta usoro transduction sitere na nnyefe in vivo nke LV-MPs na ikuku oke, dabere na echiche na nnyefe nke LV-MPs n'ihe gbasara ebumnuche ikuku ga-eme ka arụmọrụ transduction LV ka mma.
Emere ọmụmụ anụmanụ niile dịka usoro ndị Mahadum Adelaide kwadoro (M-2019-060 na M-2020-022) na Kọmitii Ụkpụrụ Omume Anụmanụ SPring-8 Synchrotron kwadoro si dị. Emere nnwale dịka ntuziaka ARRIVE si dị.
E mere onyonyo X-ray niile na akara ngosi BL20XU na SPring-8 synchrotron na Japan, site na iji ntọala yiri nke akọwara na mbụ21,22. N'ụzọ dị mkpirikpi, igbe nnwale ahụ dị mita 245 site na mgbanaka nchekwa synchrotron. A na-eji anya sample-to-detector nke 0.6 m maka ọmụmụ ihe onyonyo ihe na 0.3 m maka ọmụmụ ihe onyonyo in vivo iji mepụta mmetụta ọdịiche nke usoro. E jiri ike ọkụ monochromatic nke 25 keV. E ji ihe ntụgharị X-ray dị elu (SPring-8 BM3) jikọtara ya na ihe nchọpụta sCMOS. Ihe ntụgharị ahụ na-agbanwe radieshon X gaa na ìhè a na-ahụ anya site na iji scintillator dị 10 µm dị arọ (Gd3Al2Ga3O12), nke a na-eduga na ihe mmetụta sCMOS site na iji ihe mgbaru ọsọ microscope × 10 (NA 0.3). Ihe nchọpụta sCMOS bụ Orca-Flash4.0 (Hamamatsu Photonics, Japan) yana nha nhazi nke Pikselụ 2048 × 2048 na nha pikselụ raw nke 6.5 × 6.5 µm. Ntọala a na-enye nha pikselụ isotropic dị irè nke 0.51 µm na oghere anya nke ihe dị ka 1.1 mm × 1.1 mm. A họọrọ ogologo mkpughe nke 100 ms iji mee ka oke mgbaàmà-na-mkpọtụ nke ihe magnetik dị n'ime na n'èzí ikuku ma belata ihe ndị na-akpali mmegharị nke iku ume kpatara. Maka ọmụmụ ihe dị ndụ, e tinyere ihe mkpuchi X-ray ngwa ngwa n'ụzọ X-ray iji belata dose radieshon site na igbochi ụzarị X-ray n'etiti mkpughe.
Ejighị ihe mkpuchi LV mee ihe n'ọmụmụ ihe onyonyo SPring-8 PB-PCXI ọ bụla n'ihi na ụlọ ihe osise BL20XU abụghị nke a kwadoro na ọkwa Biosafety Level 2. Kama nke ahụ, anyị họpụtara ọtụtụ MP ndị a ma ama site na ndị na-ebubata ngwaahịa azụmahịa abụọ—nke gụnyere nha, ihe, njupụta ígwè, na ngwa—na mbụ iji ghọta otu ebe magnetik si emetụta mmegharị MP n'ime capillaries iko, wee banye n'ikuku dị ndụ. n'elu. MP dị n'ogo site na 0.25 ruo 18 μm ma e ji ọtụtụ ihe mee ha (lee Tebụl 1), mana ihe mejupụtara ihe nlele ọ bụla, gụnyere nha nke ihe ndọta dị n'ime MP, amaghị. Dabere na ọmụmụ MCT anyị sara mbara 19, 20, 21, 23, 24, anyị na-atụ anya na a ga-ahụ MP dị obere dị ka 5 μm n'elu tracheal airway, dịka ọmụmaatụ site na iwepụ etiti ndị na-esochi iji hụ mmụba nke mmegharị MP. Otu MP nke nha 0.25 μm pere mpe karịa mkpebi nke ngwaọrụ onyonyo, mana a na-atụ anya na PB-PCXI ga-achọpụta ọdịiche olu ha na mmegharị nke mmiri elu ebe a na-etinye ha na ya mgbe etinyechara ha.
E tinyere ihe nlele maka MP ọ bụla na Tebụl 1 na capillaries iko 20 μl (Drummond Microcaps, PA, USA) nke nwere dayameta dị n'ime 0.63 mm. Akụkụ akụkụ ahụ dị na mmiri, ebe akụkụ CombiMag dị na mmiri nke onye nrụpụta. A na-ejupụta tube ọ bụla ọkara mmiri mmiri (ihe dị ka 11 μl) ma tinye ya na ihe njide ihe nlele (lee Foto 1). E tinyere capillaries iko ahụ n'usoro n'elu ọkwa ihe nlele na igbe onyonyo, n'otu n'otu, ma tinye nsọtụ nke mmiri mmiri ahụ. Magnet nickel shell rare earth neodymium iron boron (NdFeB) nke dị 19 mm dayameta (28 mm ogologo) (N35, cat. no. LM1652, Jaycar Electronics, Australia) yana magnetization fọdụrụnụ nke 1.17 Tesla jikọtara ya na ọkwa ntụgharị dị iche iji nweta Gbanwee ọnọdụ ya n'ebe dị anya n'oge onyonyo. Nweta onyonyo X-ray na-amalite mgbe e tinyere magnet ihe dị ka 30 mm n'elu ihe nlele ahụ, a na-enwetakwa onyonyo na ọnụego nke okpokolo agba anọ kwa sekọnd. N'oge onyonyo, e wetara magnet ahụ nso tube iko capillary (ihe dị ka 1 mm n'ebe dị anya) wee tụgharịa ya n'akụkụ tube ahụ iji chọpụta mmetụta nke ike ubi na ọnọdụ ya.
Ntọala onyonyo In vitro nke nwere ihe nlele MP na capillaries iko na ọkwa ntụgharị xy. A na-eji ahịrị uhie akara akara ụzọ nke X-ray.
Ozugbo achọpụtara na a hụrụ ndị MP n'anya n'ime vitro, a nwalere otu n'ime ha n'ime oke ndị a na-akpọ albino Wistar nke ụdị anụ ọhịa (ihe dị ka izu iri na abụọ, ~200 g).0.24 mg/kg medetomidine (Domitor®, Zenoaq, Japan), 3.2 mg/kg midazolam (Dormicum®, Astellas Pharma, Japan) na 4 mg/kg butorphanol (Vetorphale®, Meiji Seika) A na-eji ọgwụ ogwu eme ka oke ndị a kụnwụọ site na iji ngwakọta Pharma), Japan. Mgbe a gwọchara ha, a kwadebere ha maka onyonyo site n'iwepụ ajị anụ gburugburu trachea, tinye tube endotracheal (ET; 16 Ga iv cannula, Terumo BCT) ma gbochie ha ịnọdụ ala n'elu efere onyonyo emere nke ọma nke nwere akpa okpomọkụ iji mee ka ahụ dị jụụ 22. E tinyere efere onyonyo ahụ na ọkwa ntụgharị ihe nlele n'ime igbe onyonyo n'akụkụ ntakịrị iji dozie trachea n'usoro na onyonyo X-ray, dịka egosiri. na Foto 2a.
(a) Ntọala onyonyo In vivo na igbe onyonyo SPring-8, a na-eji akara uhie akara akara ụzọ nke eriri X-ray. (b,c) E jiri kamera IP abụọ arụnyere n'akụkụ n'akụkụ n'ebe dị anya mee ebe magnet na trachea. N'akụkụ aka ekpe nke onyonyo ihuenyo ahụ, a pụrụ ịhụ eriri waya nke na-ejide isi ahụ, a na-ahụkwa cannula nnyefe n'ime tube ET.
E ji agịga iko 100 μl jikọọ sistemu mgbapụta sirinji nke a na-achịkwa n'ebe dịpụrụ adịpụ (UMP2, World Precision Instruments, Sarasota, FL) site na iji sirinji iko 100 μl na tubing PE10 (OD 0.61 mm, ID 0.28 mm) site na agịga 30 Ga. Kanye akara na tube ahụ iji hụ na isi ya dị n'ọnọdụ ziri ezi na trachea mgbe ị na-etinye tube ET. Site na iji micropump, a napụrụ plunger sirinji ahụ mgbe a na-emikpu isi tube ahụ n'ime ihe nlele MP a ga-ebuga. E tinyeziri tube nnyefe ebugoro n'ime tube endotracheal, na-etinye isi ya n'ime akụkụ kachasị ike nke ubi magnet anyị a tụrụ anya ya. E ji ihe nchọpụta iku ume jikọtara na igbe oge Arduino anyị chịkwaa nnweta onyonyo, a dekọkwara akara niile (dịka okpomọkụ, iku ume, imeghe/mmechi mkpuchi na nnweta onyonyo) site na iji Powerlab na LabChart (AD Instruments, Sydney, Australia) 22. Mgbe a na-ese foto Mgbe a naghị enweta ihe mkpuchi ahụ, e tinyere igwefoto IP abụọ (Panasonic BB-SC382) n'ihe dị ka 90° n'akụkụ ibe ha. e jikwa ha nyochaa ọnọdụ magnet ahụ ma e jiri ya tụnyere trachea n'oge onyonyo (Foto 2b,c). Iji belata ihe ndị na-emegharị ahụ, a na-enweta otu onyonyo kwa ume n'oge ala mmiri na-asọ asọ.
A na-ejikọ magnet na ọkwa nke abụọ nke enwere ike ịchọta ya n'ebe dị anya site na mpụga ebe a na-ese foto. A nwalere ọnọdụ magnet na nhazi dị iche iche, gụnyere: E tinyere ya n'akụkụ ihe dị ka 30° n'elu trachea (nhazi egosiri na Foto 2a na 3a); otu magnet n'elu anụmanụ ahụ na nke ọzọ n'okpuru, yana ogwe osisi ndị a haziri iji dọta (Foto 3b); otu magnet n'elu anụmanụ ahụ na nke ọzọ n'okpuru, yana ogwe osisi ndị a haziri iji chụpụ (Foto 3c); na otu magnet n'elu ma kwụ ọtọ na trachea (Foto 3d). Ozugbo e guzobere anụmanụ na magnet ahụ ma tinye MP a ga-anwale n'ime mgbapụta sirinji, nye dose 50 μl na ọnụego nke 4 μl/sekọnd ka ị na-enweta onyonyo. A na-ebugharị magnet ahụ azụ na azụ ma ọ bụ n'akụkụ n'ofe trachea ka ọ na-aga n'ihu na-enweta onyonyo.
Nhazi magnet maka onyonyo in vivo (a) otu magnet n'elu trachea n'akụkụ ihe dị ka 30°, (b) magnet abụọ e setịpụrụ ịdọta, (c) magnet abụọ e setịpụrụ ịdọta, (d) otu magnet n'elu na n'akụkụ trachea. Onye na-ekiri ihe na-eme ihe na-ele anya site n'ọnụ ruo n'akpa ume site na trachea, ogwe X-ray gafere n'akụkụ aka ekpe nke oke wee pụọ n'akụkụ aka nri. A na-ebugharị magnet ahụ n'ogologo ikuku ma ọ bụ aka ekpe na aka nri n'elu trachea n'akụkụ ogwe X-ray.
Anyị chọkwara ịchọpụta ihe ndị dị n'ikuku na-apụta ìhè na omume nke ihe ndị dị n'ikuku na-enweghị iku ume na mmegharị obi. Ya mere, na njedebe nke oge onyonyo ahụ, e gburu anụmanụ n'ụzọ dị mma maka oke ọgwụ pentobarbital (Somnopentil, Pitman-Moore, Washington Crossing, USA; ~65 mg/kg ip). A hapụrụ ụfọdụ anụmanụ n'elu ikpo okwu onyonyo ahụ, ozugbo iku ume na nkụchi obi kwụsịrị, a na-emegharị usoro onyonyo ahụ, na-agbakwunye dose MP ọzọ ma ọ bụrụ na ahụghị MP ahụ n'elu ikuku.
E doziri onyonyo ndị ahụ e nwetara n'ime ihe nkiri dị larịị ma dị ọchịchịrị, wee jikọta ha n'ime ihe nkiri (okpomọkụ 20 kwa sekọnd; 15-25 × ọsọ nkịtị dabere na ọnụego iku ume) site na iji edemede omenala e dere na MATLAB (R2020a, The Mathworks).
E mere ọmụmụ ihe niile gbasara nnyefe mkpụrụ ndụ ihe nketa LV na Ụlọ Ọrụ Nnyocha Anụmanụ nke Ụlọ Ọrụ Nyocha na Mahadum Adelaide ma jiri nsonaazụ nke nnwale SPring-8 chọpụta ma nnyefe LV-MP n'ihu ubi magnet nwere ike ime ka nnyefe mkpụrụ ndụ ihe nketa dịkwuo mma na vivo. Iji nyochaa mmetụta nke MP na ubi magnet, a gwọrọ otu anụmanụ abụọ: e nyere otu otu LV-MP na magnet etinyere, otu nke ọzọ natara otu njikwa nwere LV-MP na-enweghị magnet.
E ji ụzọ ndị a kọwara na mbụ mepụta vektọ mkpụrụ ndụ ihe nketa LV 25, 26. Vektọ LacZ na-egosipụta mkpụrụ ndụ ihe nketa beta-galactosidase nke mpaghara nuklia nke onye na-akwalite MPSV (LV-LacZ) na-akwalite, nke na-emepụta ngwaahịa mmeghachi omume acha anụnụ anụnụ na mkpụrụ ndụ ndị a gbanwere agbanwe, nke a na-ahụ anya na akụkụ anụ ahụ akpa ume na akụkụ anụ ahụ. Emere ntinye na omenala mkpụrụ ndụ site n'iji aka gụọ ọnụọgụ nke mkpụrụ ndụ LacZ dị mma na hemocytometer iji gbakọọ titer na TU/ml. A na-echekwa ihe ndị na-ebu ibu na -80 °C, gbazee tupu ejiri ya, ma jikọta ya na CombiMag site na ịgwakọta na oke 1:1 ma tinye ya na ice maka opekata mpe nkeji 30 tupu nnyefe.
E jiri ọgwụ mgbochi 0.4 mg/kg medetomidine (Domitor, Ilium, Australia) na ọgwụ mgbochi ketamine (Ilium, Australia) nke dị ọnwa 16) mee ka oke Sprague Dawley (n = 3/ìgwè, ~2-3) gwọọ ha n'ime afọ ime site na iji ọgwụ mgbochi 0.4 mg/kg medetomidine (Domitor, Ilium, Australia) na ọgwụ mgbochi 60 mg/kg ketamine (Ilium, Australia) nke dị ọnwa 16) na ọgwụ mgbochi ọnụ nke na-abụghị ịwa ahụ. Iji hụ na anụ ahụ na-ekesa tracheal na-enweta transduction LV, ejiri usoro mgbochi mekaniki anyị kọwara na mbụ mee ka ọ dị mma, nke e ji nkata waya tee elu tracheal axial (N-Circle, Nitinol Tipless Stone Extractor NTSE-022115) -UDH, Cook Medical, USA) 30 s28. E mechara jiri ọgwụ mgbochi LV-MP mee ihe n'ime kabinet nchekwa bayọlọji ihe dị ka nkeji iri mgbe nsogbu gasịrị.
E mepụtara ebe ndọta ejiri mee ihe na nnwale a n'ụzọ yiri nke ahụ na ọmụmụ ihe onyonyo X-ray in vivo, ya na otu magnet ndị ahụ ejiri n'elu trachea mee ihe site na iji ihe ndọta distillation (Foto nke 4). E tinyere olu 50 μl (2 × 25 μl aliquots) nke LV-MP n'ime trachea (n = anụmanụ 3) site na iji pipette nwere isi gel dịka akọwara na mbụ. Otu njikwa (n = anụmanụ 3) natara otu LV-MP ndị ahụ na-ejighị magnet. Mgbe emechachara ntinye ahụ, a na-ewepụ cannula ahụ na tube ET ma wepụ anụmanụ ahụ. Magnet ahụ na-anọ n'ọnọdụ ya ruo nkeji 10, wee wepụ ya. Oke nyere meloxicam (1 ml/kg) subcutaneous dose (Ilium, Australia) wee tụgharịa anesthesia site na ịgba ip nke 1 mg/kg atipamazole hydrochloride (Antisedan, Zoetis, Australia). E debere oke ọkụ ma nyochaa ya ruo mgbe ọ gbakechara kpamkpam site na anesthesia.
Ngwaọrụ nnyefe LV-MP dị n'ime kabọd nchekwa ihe ndị dị ndụ. A pụrụ ịhụ ebe Luer dị nro nke tube ET ka ọ na-apụta site n'ọnụ, a na-etinyekwa isi gel nke pipette egosiri na foto a site na tube ET ruo omimi achọrọ n'ime trachea.
Otu izu mgbe usoro LV-MP gasịrị, e gburu anụmanụ site na iku ume 100% CO2 ma jiri usoro X-gal anyị na-eme nyocha ngosipụta LacZ. E wepụrụ mgbaaka atọ nke caudal kachasị cartilaginous iji hụ na emebighị ihe ọ bụla ma ọ bụ njide mmiri sitere na ntinye tube endotracheal adịghị na nyocha ahụ. E bepụrụ trachea ọ bụla n'ogologo iji mepụta ọkara abụọ maka nyocha, e tinyekwara ha n'ime efere nwere roba silicone (Sylgard, Dow Inc) site na iji agịga Minutien (Fine Science Tools) iji hụ elu ọkụ ahụ. E gosipụtara nkesa na ụkpụrụ nke mkpụrụ ndụ ndị a gbanwere site na foto ihu site na iji ngwa nyocha Nikon (SMZ1500) na igwefoto DigiLite na ngwanrọ TCapture (Tucsen Photonics, China). E nwetara onyonyo na mmụba 20x (gụnyere ntọala kachasị elu maka obosara trachea zuru oke), yana onyonyo ogologo trachea dum site na nzọụkwụ, na-ahụ na e jikọtara ya nke ọma n'etiti onyonyo ọ bụla iji kwe ka onyonyo "kwaa akwa". Foto sitere na trachea ọ bụla E wee chịkọta ha n'otu onyonyo mejupụtara site na iji Image Composite Editor v2.0.3 (Microsoft Research) site na iji algọridim mmegharị planar. E jiri script MATLAB akpaka (R2020a, MathWorks) tụọ mpaghara ngosipụta LacZ na onyonyo mejupụtara trachea site na anụmanụ ọ bụla dịka akọwara na mbụ, site na iji ntọala nke 0.35 < Hue < 0.58, Saturation > 0.15, na Uru < 0.7. Site na ịchọpụta nhazi nke anụ ahụ, e ji aka mepụta ihe mkpuchi na GIMP v2.10.24 maka onyonyo mejupụtara ọ bụla iji chọpụta mpaghara anụ ahụ ma gbochie nchọpụta ụgha ọ bụla sitere na anụ ahụ tracheal. A chịkọtara ebe ntụpọ sitere na onyonyo mejupụtara niile sitere na anụmanụ ọ bụla iji mepụta mpaghara ntụpọ zuru oke maka anụmanụ ahụ. E kewara mpaghara ntụpọ ahụ site na mpaghara mkpuchi zuru oke iji mepụta mpaghara a na-emebu.
E tinyere trachea ọ bụla n'ime paraffin ma bepụ akụkụ 5 μm. E jiri uhie dị ọkụ nke na-anaghị agbanwe agbanwe mee ka akụkụ ndị ahụ dịgide ruo nkeji ise, e wee jiri igwe onyonyo Nikon Eclipse E400, igwefoto DS-Fi3 na ngwanrọ njide ihe NIS (ụdị 5.20.00) nweta onyonyo.
E mere nyocha ọnụọgụgụ niile na GraphPad Prism v9 (GraphPad Software, Inc.). E debere mkpa ọnụọgụgụ na p ≤ 0.05. E jiri ule Shapiro-Wilk kwado ihe nkịtị, e jirikwa ule t-test a na-ejikọghị ọnụ nyochaa ọdịiche dị na agba LacZ.
E jiri PCXI nyochaa MP isii ahụ a kọwara na Tebụl 1, a kọwakwara visibiliti na Tebụl 2. A hụghị MP polystyrene abụọ (MP1 na MP2; 18 μm na 0.25 μm, n'otu n'otu) n'okpuru PCXI, mana a na-amata ihe atụ ndị ọzọ (ihe atụ dị na Foto 5). MP3 na MP4 (10-15% Fe3O4; 0.25 μm na 0.9 μm, n'otu n'otu) a na-ahụ obere anya. Ọ bụ ezie na ha nwere ụfọdụ obere ihe ndị a nwalere, MP5 (98% Fe3O4; 0.25 μm) bụ nke kacha pụta ìhè. Ngwaahịa CombiMag MP6 siri ike ịhụ. N'ọnọdụ niile, ikike anyị ịchọpụta MP mụbara nke ukwuu site n'ịsụgharị magnet ahụ azụ na azụ na-aga n'ihu na capillary. Mgbe magnet ndị ahụ si na capillary pụọ, ihe ndị ahụ gbasaara na eriri ogologo, mana ka magnet ndị ahụ na-abịaru nso ma ike ubi magnet na-abawanye, eriri ihe ndị ahụ dị mkpụmkpụ ka ihe ndị ahụ na-aga n'elu elu nke capillary (lee Vidiyo Mgbakwunye S1: MP4), na-abawanye Njupụta nke ihe dị n'elu. N'aka nke ọzọ, mgbe ewepụrụ magnet ahụ na capillary, ike ubi ahụ na-ebelata ma MPs na-agbanwegharị gaa na eriri ogologo sitere na elu elu nke capillary (lee vidiyo mgbakwunye S2:MP4). Mgbe magnet ahụ kwụsịrị ịkwaga, ihe ndị ahụ na-aga n'ihu na-agagharị ruo obere oge mgbe ha rutere nguzozi. Ka MP na-aga n'ihu ma pụọ ​​​​n'elu elu nke capillary, ihe ndị ahụ na-adọkpụkarị ihe ndị ahụ site na mmiri mmiri.
Nhụpụta nke MP n'okpuru PCXI dị iche iche n'etiti ihe atụ.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 na (d) MP6. E sere foto niile egosiri ebe a na magnet dị ihe dị ka 10 mm kpọmkwem n'elu capillary. Gburugburu buru ibu ndị a na-ahụ anya bụ afụ ikuku nke a dọbara n'ime capillaries, na-egosi nke ọma atụmatụ akụkụ ojii na ọcha nke onyonyo ọdịiche nke usoro. Igbe uhie ahụ nwere mmụba na-eme ka ọdịiche dịkwuo mma. Rịba ama na dayameta nke eserese magnet na ọnụọgụgụ niile abụghị nha ma ha dị ihe dị ka okpukpu 100 karịa egosiri.
Ka a na-atụgharị magnet ahụ n'aka ekpe na aka nri n'elu capillary ahụ, akụkụ nke eriri MP na-agbanwe ka ọ dabara na magnet ahụ (lee eserese nke 6), si otú a na-akọwapụta ahịrị ubi magnet ahụ. Maka MP3-5, mgbe chord ahụ rutere n'akụkụ ọnụ ụzọ, a na-adọkpụ ihe ndị ahụ n'elu elu capillary ahụ. Nke a na-emekarị ka MPs na-agbakọta n'ime otu buru ibu nso ebe magnet ahụ siri ike (lee vidiyo mgbakwunye S3:MP5). Nke a na-apụtakwa ìhè karịsịa mgbe onyonyo dị nso na njedebe capillary ahụ, nke na-eme ka MPs chịkọta ma lekwasị anya na njikọ mmiri-ikuku. Adọkpụghị ihe ndị dị na MP6, nke siri ike ịchọpụta karịa MP3-5, ka magnet ahụ na-agagharị n'akụkụ capillary ahụ, mana eriri MP kewara, na-ahapụ ihe ndị ahụ n'ọhịa nke anya (lee vidiyo mgbakwunye S4:MP6). N'ọnọdụ ụfọdụ, mgbe e belatara ubi magnet ahụ etinyere site na ịkwaga magnet ahụ n'ebe dị anya site na ebe onyonyo ahụ, MP ọ bụla fọdụrụnụ na-agbada nwayọ nwayọ gaa n'elu ala nke tube ahụ site na ike ndọda mgbe ọ ka nọ na eriri ahụ (lee vidiyo mgbakwunye S5: MP3).
Akụkụ nke eriri MP na-agbanwe ka a na-atụgharị magnet ahụ n'aka nri n'elu capillary.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 na (d) MP6. Igbe uhie ahụ nwere mmụba na-eme ka ọdịiche dị. Rịba ama na vidiyo ndị ọzọ na-enye ihe ọmụma ebe ha na-ekpughe nhazi ihe dị mkpa na ozi na-agbanwe agbanwe nke a na-apụghị ịhụ anya na onyonyo ndị a na-anaghị ahụ anya.
Nnwale anyị gosiri na ibugharị magnet ahụ nwayọ nwayọ n'akụkụ trachea na-eme ka anya nke MP dị na mmegharị mgbagwoju anya na vivo. Emeghị nnwale In vivo ka a naghị ahụ polystyrene beads (MP1 na MP2) na capillary. A nwalere MP anọ ọ bụla fọdụrụ na vivo site na iji axis ogologo magnet nke edobere n'elu trachea n'akụkụ ihe dị ka 30° ruo na vetikal (lee Foto 2b na 3a), ebe nke a butere agbụ MP dị ogologo ma dị irè karịa nhazi magnet kwụsịrị. Achọpụtaghị MP3, MP4 na MP6 na trachea nke anụmanụ ọ bụla dị ndụ. Mgbe a na-ese onyinyo ụzọ ikuku oke mgbe e gbusịrị anụmanụ ahụ n'ụzọ mmadụ, ihe ndị ahụ ka na-adịghị ahụ anya ọbụlagodi mgbe etinyere olu ọzọ site na iji syringe pump. MP5 nwere ọdịnaya iron oxide kachasị elu ma bụrụ naanị ihe a na-ahụ anya, ya mere ejiri ya nyochaa ma kọwaa omume in vivo nke MP.
Itinye magnet n'elu trachea n'oge nnyefe MP mere ka ọtụtụ, mana ọ bụghị mmadụ niile, ndị omeiwu tinyekwuo uche n'ọhịa anya. A na-ahụkarị ihe ndị na-abanye na trachea n'ime anụmanụ e ji aka ha chụọ àjà. Foto nke 7 na Vidiyo Mgbakwunye S6: MP5 na-egosi njide magnet ngwa ngwa na nhazi nke ihe ndị dị n'elu trachea ventral, na-egosi na enwere ike iduga ndị omeiwu na mpaghara achọrọ nke trachea. Mgbe ha na-achọ ihe dị anya n'akụkụ trachea mgbe nnyefe MP gasịrị, a hụrụ ụfọdụ ndị omeiwu nso carina, na-egosi na ike magnet zuru oke iji chịkọta ma jigide ndị MP niile, ebe ọ bụ na a na-ebuga ha site na mpaghara ike magnet kachasị elu n'oge usoro mmiri mmiri. Agbanyeghị, mkpokọta MP mgbe a mụsịrị nwa dị elu gburugburu mpaghara onyonyo ahụ, na-egosi na ọtụtụ ndị omeiwu nọgidere na mpaghara ikuku ebe ike magnet etinyere dị elu.
Foto sitere na (a) tupu na (b) mgbe ebufere MP5 n'ime trachea nke oke e gburu n'oge na-adịbeghị anya yana magnet dị kpọmkwem n'elu ebe onyonyo ahụ. Ebe onyonyo ahụ dị n'etiti mgbaaka cartilage abụọ ahụ. Tupu ebufee MP, enwere mmiri mmiri n'ikuku ikuku. Igbe uhie ahụ nwere mmụba na-eme ka ọdịiche dị. Foto ndị a sitere na vidiyo egosiri na Vidiyo Mgbakwunye S6:MP5.
Ịsụgharị magnet n'akụkụ trachea in vivo mere ka agbụ MP gbanwee akụkụ dị n'ime elu ikuku n'ụzọ yiri nke a hụrụ na capillaries (lee Foto 8 na Vidiyo Mgbakwunye S7:MP5). Agbanyeghị, n'ọmụmụ ihe anyị, enweghị ike ịdọkpụrụ MP n'elu ikuku dị ndụ dịka ha nwere ike iji capillaries. N'ọnọdụ ụfọdụ, agbụ MP ga-adị ogologo ka magnet na-aga n'aka ekpe na aka nri. Ihe na-adọrọ mmasị bụ na anyị chọpụtakwara na eriri ahụ yiri ka ọ na-agbanwe omimi nke oyi akwa mmiri dị n'elu mgbe magnet na-agagharị n'ogologo n'akụkụ trachea, ma na-agbasa mgbe magnet na-agagharị kpọmkwem n'elu ma na-atụgharị eriri ahụ gaa n'ọnọdụ kwụ ọtọ (lee Vidiyo Mgbakwunye S7). : MP5 na 0:09, ala aka nri). Ụdị mmegharị ahụ gbanwere mgbe a tụgharịrị magnet ahụ n'elu trachea n'akụkụ (ya bụ, n'aka ekpe ma ọ bụ aka nri nke anụmanụ ahụ kama n'ogologo trachea). A ka na-ahụ ihe ndị ahụ nke ọma ka ha na-agagharị, mana mgbe ewepụrụ magnet ahụ na trachea, nsọtụ eriri ndị ahụ pụtara ìhè (lee vidiyo mgbakwunye S8:MP5, malite na 0:08). Nke a kwekọrọ na omume MP anyị hụrụ n'okpuru ebe magnet etinyere n'ime capillary iko.
Ihe atụ onyonyo na-egosi MP5 n'ime trachea nke oke a na-egbu egbu.(a) A na-eji magnet ahụ enweta onyonyo n'elu na n'aka ekpe nke trachea, wee (b) mgbe ebufere magnet ahụ gaa n'aka nri. Igbe uhie ahụ nwere mmụba na-eme ka ọdịiche dị. Foto ndị a sitere na vidiyo egosiri na vidiyo mgbakwunye S7:MP5.
Mgbe e guzobere ogidi abụọ ahụ n'akụkụ ugwu na ndịda n'elu na n'okpuru trachea (ya bụ, ịdọta; Fig. 3b), kọd MP ahụ pụtara ogologo oge ma dị n'akụkụ trachea kama n'elu trachea dorsal (lee Vidiyo Mgbakwunye S9: MP5). Agbanyeghị, achọpụtaghị oke mkpokọta nke ihe ndị dị n'otu ebe (ya bụ, elu azụ nke trachea) mgbe e nyefere mmiri mgbe ejiri ngwaọrụ magnet abụọ, nke na-emekarị mgbe ejiri ngwaọrụ magnet otu. Mgbe ahụ, mgbe e mere otu magnet ka ọ chụpụ ogidi ndị ahụ tụgharịrị (Fig. 3c), ọnụọgụgụ ihe ndị a na-ahụ anya n'ọhịa ahụ adịghị ka ọ na-amụba mgbe e nyefere ya. Nhazi nke nhazi magnet abụọ ahụ siri ike n'ihi ike dị elu nke magnet ma ọ bụ na-akwali magnet, n'otu n'otu. E mechara gbanwee ntọala ahụ ka ọ bụrụ otu magnet nke yiri ikuku mana ọ na-agafe na ikuku na ogo 90 ka ahịrị ubi ahụ wee gafee mgbidi trachea n'ụzọ kwụ ọtọ (Fig. 3d), nhazi e mere iji chọpụta ma enwere ike ịhụ mkpokọta ihe ndị dị na mgbidi dị n'akụkụ. Agbanyeghị, Na nhazi a, enweghị mmegharị a na-ahụta nke mkpokọta MP ma ọ bụ mmegharị magnet. Dabere na nsonaazụ ndị a niile, ahọpụtara nhazi nhazi otu-magnet, ogo 30 (Foto 3a) maka ọmụmụ ihe gbasara mkpụrụ ndụ ihe nketa in vivo.
Mgbe e sere anụmanụ ahụ ugboro ugboro ozugbo e gbusịrị ya n'ụzọ dị nro, enweghị mmegharị anụ ahụ na-agbagwoju anya pụtara na enwere ike ịhụ ahịrị obere na nke dị mkpụmkpụ n'ọhịa interchondral doro anya, "na-ama jijiji" dịka mmegharị ntụgharị nke magnet ahụ si dị. Agbanyeghị, a ka nwere ike ịhụ ọnụnọ na mmegharị nke mkpụrụ MP6 nke ọma.
Titer LV-LacZ bụ 1.8 × 108 TU/ml, mgbe agwakọtachara ya na CombiMag MP (MP6) 1:1, anụmanụ natara ọgwụ tracheal 50 μl nke 9 × 107 TU/ml LV (ya bụ, 4.5 × 106 TU/rat). N'ọmụmụ ihe ndị a, kama ịtụgharị magnet n'oge ịmụ nwa, anyị doziri magnet ahụ n'otu ọnọdụ iji chọpụta ma enwere ike imeziwanye transduction LV (a) ma e jiri ya tụnyere nnyefe vektọ na-enweghị ubi magnet, na (b) enwere ike itinye uche na mkpụrụ ndụ ikuku na-agafe na mpaghara ebe magnet nke elu ikuku.
Ọdịdị nke magnet na ojiji nke CombiMag jikọtara ya na vektọ LV adịghị ka ọ nwere mmetụta ọjọọ na ahụike anụmanụ, dịka usoro nnyefe vektọ LV anyị si dị. Foto ihu nke mpaghara tracheal nke nwere nsogbu igwe (Foto mgbakwunye 1) gosiri na enwere ọkwa transduction dị elu karịa na otu anụmanụ ejiri LV-MP gwọọ mgbe magnet dị (Foto 9a). Naanị obere ntụpọ LacZ na-acha anụnụ anụnụ dị na otu njikwa (Foto 9b). Ngụkọta nke ebe ntụpọ X-Gal a na-ahụkarị gosiri na nchịkwa nke LV-MP n'ihu ubi magnet mepụtara ihe dị ka okpukpu isii (Foto 9c).
Ihe atụ onyonyo ndị mejupụtara na-egosi mgbanwe tracheal site na LV-MP (a) n'ihu ebe magnet na (b) n'enweghị magnet. (c) Mmezi dị mkpa na mpaghara transduction LacZ a na-ahazi n'ime trachea mgbe ejiri magnet (*p = 0.029, t-test, n = 3 kwa otu, nkezi ± SEM).
Akụkụ ndị nwere agba uhie dị iche iche (ihe atụ egosiri na Foto Mgbakwunye nke 2) gosiri mkpụrụ ndụ ndị nwere agba LacZ dị n'otu ụdị na ebe dịka akọwara na mbụ.
Ihe ịma aka dị mkpa maka ọgwụgwọ mkpụrụ ndụ ihe nketa ikuku ka bụ ebe a na-ahụta ihe ndị na-ebu ibu n'akụkụ ndị dị mkpa ma na-enweta ọkwa dị elu nke arụmọrụ transduction n'ime akpa ume na-agagharị n'ihu ikuku na mwepụ nke mucous. Maka ndị na-ebu LV e mere iji gwọọ ọrịa ikuku CF, ịbawanye oge obibi nke ihe ndị na-ebu ibu n'ime ikuku na-eduzi abụrụla ihe mgbaru ọsọ a na-apụghị ịghọta aghọta. Dịka Castellani et al. si kwuo, iji ubi magnet iji melite transduction nwere uru ma e jiri ya tụnyere ụzọ nnyefe mkpụrụ ndụ ihe nketa ndị ọzọ dị ka electroporation, n'ihi na ọ nwere ike ijikọ mfe, ọnụ ahịa dị ọnụ ala, ebe nnyefe, mmụba arụmọrụ, na oge incubation dị mkpụmkpụ, yana ikekwe obere dose nke ihe na-ebu ibu. Agbanyeghị, a kọwabeghị itinye ihe na omume nke ihe ndị na-ebu ibu n'ime ikuku n'okpuru mmetụta nke ike magnet mpụga, egosighikwa ohere nke usoro a na vivo iji melite ọkwa ngosipụta mkpụrụ ndụ ihe nketa na ikuku ndụ dị ndụ.
Nnwale PCXI synchrotron anyị nke in vitro gosiri na ihe niile anyị nwalere, ewezuga polystyrene MP, pụtara ìhè na nhazi onyonyo anyị jiri. N'ihu ebe magnetik dị, ndị MP na-emepụta eriri ndị ogologo ha metụtara ụdị ihe na ike ebe magnetik (ya bụ, nso na mmegharị nke magnet). Dịka egosiri na Foto 10, eriri ndị anyị na-ahụ na-etolite n'ihi na a na-eme ka ihe ọ bụla dị na magnetik ma na-akpali ebe magnetik nke ya. Ubi ndị a dị iche iche na-eme ka ihe ndị ọzọ yiri ya chịkọta ma jikọọ, yana mmegharị yiri eriri otu n'ihi ike mpaghara sitere na ike mara mma na nke na-asọ oyi nke ihe ndị ọzọ.
Usoro ihe osise na-egosi (a,b) ụgbọ oloko ndị a na-emepụta n'ime capillaries jupụtara mmiri mmiri na (c,d) trachea jupụtara ikuku. Rịba ama na capillaries na trachea anaghị adọta nha. Panel (a) nwekwara nkọwa nke MP, nke nwere mkpụrụ ndụ Fe3O4 nke edobere n'ime eriri.
Mgbe e bufere magnet n'elu capillary ahụ, akụkụ nke eriri ihe ndị ahụ ruru oke dị mkpa maka MP3-5 nwere Fe3O4, mgbe nke ahụ gasịrị, eriri ihe ndị ahụ anaghịzi anọ n'ọnọdụ mbụ, kama ọ na-agagharị n'elu elu gaa n'ọnọdụ ọhụrụ.magnet. Mmetụta a nwere ike ime n'ihi na elu iko ahụ dị nro nke na-ekwe ka mmegharị a mee. Ihe na-adọrọ mmasị bụ na MP6 (CombiMag) emeghị omume a, ikekwe n'ihi na mkpụrụ ndị ahụ dị obere, nwere mkpuchi dị iche iche ma ọ bụ ụgwọ elu, ma ọ bụ mmiri ebu ihe nkeonwe metụtara ikike ha ịkwaga. Ihe dị iche na onyonyo nke mkpụrụ CombiMag dịkwa ike, na-egosi na mmiri na mkpụrụ ndị ahụ nwere ike inwe njupụta yiri nke ahụ ma ya mere ọ naghị agagharị ngwa ngwa n'ebe ibe ha nọ. Mkpụrụ ndị ahụ nwekwara ike ịrapara ma ọ bụrụ na magnet ahụ na-agagharị ngwa ngwa, na-egosi na ike ubi magnet ahụ enweghị ike imeri esemokwu dị n'etiti mkpụrụ ndị dị na mmiri ahụ mgbe niile, na-egosi na ikekwe ọ bụghị ihe ijuanya na ike ubi magnet na anya dị n'etiti magnet na mpaghara ebumnuche dị oke mkpa. N'ịchịkọta, nsonaazụ ndị a na-egosikwa na, ọ bụ ezie na magnet nwere ike ijide ọtụtụ MP ndị na-agafe na mpaghara ebumnuche, ọ gaghị ekwe omume na magnet nwere ike ịdabere na ya. iji bufee ihe ndị dị na CombiMag n'elu trachea. Ya mere, anyị kwubiri na n'ime ndụ, ọmụmụ ihe LV-MP kwesịrị iji oghere magnetik static lekwasị anya n'akụkụ ụfọdụ nke osisi ikuku.
Mgbe e tinyere ihe ndị dị n'ime ahụ, ọ na-esiri ike ịchọpụta ha n'ihe gbasara anụ ahụ dị mgbagwoju anya na-agagharị, mana ikike ịchọpụta ha ka mma site n'ịtụgharị magnet ahụ n'oghere n'elu trachea ka ọ "na-emegharị" eriri MP. Ọ bụ ezie na onyonyo dị ndụ ga-ekwe omume, ọ dị mfe ịchọpụta mmegharị ihe ndị dị n'ime ahụ ozugbo e gburu anụmanụ ahụ n'ụzọ mmadụ. Oke MP na-adịkarị elu n'ebe a mgbe e tinyere magnet n'elu ebe onyonyo ahụ, ọ bụ ezie na a na-ahụkarị ụfọdụ ihe ndị dị n'ime ya n'akụkụ trachea. N'adịghị ka ọmụmụ in vitro, enweghị ike ịdọkpụrụ ihe ndị dị n'ime trachea site n'ịsụgharị magnet ahụ. Nchọpụta a kwekọrọ n'otú ihe ndị dị n'ime trachea si emegharị ihe ndị e kuuru n'ime ahụ, na-ejide ha n'ime imi ahụ ma mechaa kpochapụ ha site na usoro mkpochapụ mucociliary.
Anyị chere na ojiji nke magnet maka ịdọta n'elu na n'okpuru trachea (Foto 3b) nwere ike ibute oghere magnetik yiri nke ahụ, kama oghere magnetik nke dị oke elu n'otu oge, nke nwere ike ibute nkesa nke obere ihe. Agbanyeghị, ọmụmụ ihe mbụ anyị ahụtaghị ihe akaebe doro anya iji kwado echiche a. N'otu aka ahụ, ịhazi ụzọ magnetik iji chụpụ (Foto 3c) emeghị ka ọtụtụ ihe ndị dị na mpaghara onyonyo ahụ pụta ìhè. Nchọpụta abụọ a na-egosi na ntọala magnetik abụọ anaghị eme ka njikwa mpaghara nke MP lekwasịrị anya ka mma nke ukwuu, nakwa na ike magnetik siri ike sitere na ya siri ike ịhazi, na-eme ka ụzọ a ghara ịba uru. N'otu aka ahụ, ịhazi magnet dị n'elu na site na trachea (Foto 3d) emeghịkwa ka ọnụọgụ nke ihe ndị dị na mpaghara onyonyo ahụ dịkwuo elu. Ụfọdụ n'ime nhazi ndị ọzọ a nwere ike ọ gaghị aga nke ọma n'ihi na ha na-ebute obere ike magnetik n'ime mpaghara nchekwa. Ya mere, a na-ewere nhazi magnetik otu ogo 30 (Foto 3a) dị ka ụzọ kachasị mfe na nke kachasị dị irè maka nnwale in vivo.
Ọmụmụ ihe LV-MP gosiri na mgbe ejikọtara vektọ LV na CombiMag ma nye ha mgbe nsogbu anụ ahụ gasịrị n'ihu ebe magnetik dị, ọkwa transduction mụbara nke ukwuu na trachea ma e jiri ya tụnyere ndị njikwa. Dabere na ọmụmụ ihe onyonyo synchrotron na nsonaazụ LacZ, o doro anya na ebe magnetik ahụ nwere ike ichekwa LV n'ime trachea ma belata ọnụọgụ nke ihe ndị dị na vektọ ndị banyere n'ime akpa ume ozugbo. Mmezi ebumnuche ndị dị otú ahụ nwere ike ibute arụmọrụ ka elu ebe ọ na-ebelata titers enyere, transduction na-apụ n'anya, mmetụta mkpali na ahụ ike, na ọnụ ahịa ndị na-ebu mkpụrụ ndụ ihe nketa. Dị mkpa, dịka onye nrụpụta si kwuo, enwere ike iji CombiMag na njikọ ya na ụzọ mbufe mkpụrụ ndụ ihe nketa ndị ọzọ, gụnyere vektọ nje ndị ọzọ (dịka AAV) na nucleic acids.