Asante kwa kutembelea Nature.com.Toleo la kivinjari unachotumia lina uwezo mdogo wa kutumia CSS.Kwa matumizi bora zaidi, tunapendekeza kwamba utumie kivinjari kilichosasishwa (au zima hali ya uoanifu katika Internet Explorer).Wakati huo huo, ili kuhakikisha usaidizi unaoendelea, tutaonyesha tovuti bila mitindo na JavaScript.
Vidudu vya jeni kwa ajili ya matibabu ya ugonjwa wa cystic fibrosis ya mapafu vinapaswa kulenga njia za hewa zinazoendesha kwa sababu upitishaji wa mapafu ya pembeni hautoi manufaa ya matibabu. Ufanisi wa upitishaji wa virusi unahusiana moja kwa moja na muda wa kuishi kwa vekta. Hata hivyo, vimiminika vya kujifungua kama vile vibeba jeni husambaa kwa kawaida kwenye tundu la mapafu wakati wa msukumo, na chembe za matibabu husafishwa kwa upesi kwa njia ya upitishaji wa njia yoyote ya urembo. wakati wa vibeba jeni kwenye njia za hewa ni muhimu lakini ni vigumu kufikiwa.Chembe za sumaku zilizounganishwa na mbeba jeni ambazo zinaweza kuelekezwa kwenye uso wa njia za hewa zinaweza kuboresha ulengaji wa kikanda.Kutokana na changamoto za taswira ya vivo, tabia ya chembe ndogo kama hizo za sumaku kwenye uso wa njia ya hewa mbele ya uwanja wa sumaku uliowekwa haieleweki vizuri.Lengo la utafiti huu lilikuwa kutumia taswira ya mfululizo wa vivo chembe kwenye trachea ya panya waliogandishwa ili kuchunguza mienendo na muundo wa tabia ya mtu binafsi na ya wingi wa chembe katika vivo. Kisha tukatathmini pia kama utoaji wa chembechembe za sumaku ya lentiviral mbele ya uwanja wa sumaku ungeongeza ufanisi wa upitishaji katika trachea ya panya. Upigaji picha wa X-ray wa Synchrotron unaonyesha tabia ya chembechembe za sumaku na chembechembe za sumaku zinazosonga kwenye sehemu ya chini. kuburutwa kwenye uso wa njia ya hewa hai na sumaku, lakini wakati wa usafiri, amana hujilimbikizia katika uwanja wa mtazamo ambapo uwanja wa sumaku ni wenye nguvu zaidi.Ufanisi wa upitishaji pia uliongezeka mara sita wakati chembechembe za sumaku za lentiviral zilipotolewa mbele ya uwanja wa sumaku.Pamoja, matokeo haya yanapendekeza kwamba chembe za sumaku za lentiviral na sehemu za sumaku zinaweza kuwa njia muhimu za kuboresha viwango vya kupitisha jeni katika kuongeza vekta ya hewa.
Cystic fibrosis (CF) husababishwa na kutofautiana kwa jeni moja inayoitwa CF transmembrane conductance regulator (CFTR).Protini ya CFTR ni chaneli ya ayoni ambayo iko katika seli nyingi za epithelial katika mwili wote, ikiwa ni pamoja na njia za hewa zinazopitisha hewa, tovuti kuu ya CF pathogenesis.Kasoro za CFTR husababisha kuharibika kwa uso wa maji, kupunguza kina cha uso wa maji, kupunguza uso wa maji wa njia ya hewa na kupunguza maji kwenye uso wa hewa wa ASL. tabaka.Hii pia inadhoofisha uwezo wa mfumo wa usafiri wa mucociliary (MCT) kuondoa chembe na vimelea vya magonjwa kutoka kwa njia ya hewa.Lengo letu ni kutengeneza tiba ya jeni ya lentiviral (LV) ili kutoa nakala sahihi ya jeni la CFTR na kuboresha ASL, MCT, na afya ya mapafu, na kuendelea kutengeneza teknolojia mpya zenye uwezo wa kupima parameta hizi.
Vekta za LV ni mojawapo ya wagombea wanaoongoza kwa tiba ya jeni ya njia ya hewa ya CF, hasa kwa sababu wanaweza kuunganisha kwa kudumu jeni ya matibabu kwenye seli za basal za njia ya hewa (seli za shina za njia ya hewa). Hii ni muhimu kwa sababu wanaweza kurejesha unyevu wa kawaida na kibali cha kamasi kwa kutofautisha katika kazi ya jeni iliyosahihishwa ya CF-inayohusishwa na njia ya hewa ya hewa, na kusababisha njia ya moja kwa moja ya seli za uso wa hewa, na kusababisha njia ya moja kwa moja ya seli za uso wa hewa, na kusababisha njia ya moja kwa moja ya vekta ya hewa. Ugonjwa wa mapafu ya CF huanza. Utoaji wa vekta ndani zaidi ya pafu unaweza kusababisha uhamishaji wa tundu la mapafu, lakini hii haina faida ya matibabu katika CF. Hata hivyo, viowevu kama vile vibeba jeni kwa kawaida huhamia kwenye alveoli baada ya msukumo baada ya kujifungua3,4 na chembe za matibabu husafishwa kwa haraka hadi kwenye cavity ya mdomo hadi kwa urefu unaofuata wa MCT unaohusiana moja kwa moja. ruhusu uchukuaji wa seli - "muda wa makazi"5 - ambayo hupunguzwa kwa urahisi na mtiririko wa hewa wa kawaida wa kikanda pamoja na uratibu wa kukamata kamasi ya chembe na MCT.Kwa CF, uwezo wa kuongeza muda wa kukaa kwa LV ndani ya njia ya hewa ni muhimu kufikia viwango vya juu vya uhamisho katika eneo hili, lakini hadi sasa imekuwa changamoto.
Ili kuondokana na kikwazo hiki, tunapendekeza kwamba chembe za sumaku za LV (Wabunge) zinaweza kusaidia kwa njia mbili za ziada.Kwanza, zinaweza kuongozwa kwa sumaku kwenye uso wa njia ya hewa ili kuboresha ulengaji na kusaidia chembe za kibeba jeni kukaa katika eneo la njia ya hewa inayotakiwa; na ASL) kuhamia safu ya seli 6.Mbunge zimetumiwa sana kama magari yanayolengwa ya kusambaza dawa wakati zinapofunga kingamwili, dawa za chemotherapeutic, au molekuli nyingine ndogo ambazo hushikamana na membrane za seli au kushikamana na vipokezi vya uso wa seli husika na kujilimbikiza kwenye tovuti za uvimbe kukiwa na umeme tuli. Sehemu za Sumaku kwa Matibabu ya Saratani 7. Mbinu zingine za "hyperthermal" zinalenga kuwapa Wabunge joto wanapokabiliwa na nyuga za sumaku zinazozunguka, na hivyo kuharibu seli za uvimbe. Kanuni ya uhamishaji sumaku, ambamo uga wa sumaku hutumika kama wakala wa uambukizaji ili kuboresha uhamishaji wa DNA hadi kwenye seli, hutumiwa kwa kawaida katika vitro kwa kutumia aina mbalimbali zisizo za virusi na virusi kwa ajili ya ugumu wa mistari ya seli ya LV. magnetotransfection imeanzishwa, pamoja na utoaji wa in vitro wa LV-MPs kwenye mstari wa seli ya kikoromeo ya epithelial mbele ya uwanja wa sumaku tuli, na kuongeza ufanisi wa upitishaji kwa mara 186 ikilinganishwa na vekta ya LV pekee. sputum10.Hata hivyo, katika vivo magnetotransfection ya viungo imepata uangalizi mdogo na imetathminiwa tu katika tafiti chache za wanyama11,12,13,14,15, hasa katika mapafu16,17.Hata hivyo, fursa za uhamishaji wa sumaku katika tiba ya mapafu ya CF ziko wazi.Tan et20 ushahidi wa ufanisi wa "20uthibitisho wa sumaku ulisema" utoaji wa mapafu wa nanoparticle utafungua njia kwa mikakati ya baadaye ya kuvuta pumzi ya CFTR ili kuboresha matokeo ya kimatibabu kwa wagonjwa wa CF”6.
Tabia ya chembechembe ndogo za sumaku kwenye nyuso za njia ya hewa mbele ya uga wa sumaku unaotumika ni vigumu kuibua na kujifunza, na hivyo kueleweka vibaya.Katika tafiti nyingine, tulitengeneza mbinu ya upigaji picha wa X-ray ya msingi wa synchrotron-uenezi-msingi wa awamu-tofauti ya X-ray (PB-PCXI) ili kuibua bila uvamizi na kukadiria mabadiliko ya dakika katika vivo katika tabia ya ASL hadi kina cha ASL192 ya uso wa ASL na kina cha M192 moja kwa moja. hutumika kama kiashirio cha mapema cha ufanisi wa matibabu. Aidha, mbinu yetu ya tathmini ya MCT hutumia chembechembe za kipenyo cha 10-35 µm zinazojumuisha alumina au kioo cha juu cha refractive kama alama za MCT zinazoonekana kwa kutumia PB-PCXI21. Mbinu zote mbili zinafaa kwa taswira ya aina mbalimbali za chembe, ikiwa ni pamoja na Mbunge.
Kwa sababu ya utatuzi wake wa juu wa anga na wa muda, mbinu zetu za uchambuzi wa ASL na MCT kulingana na PB-PCXI zinafaa vyema kwa kuchunguza mienendo na mifumo ya tabia ya chembe moja na nyingi katika vivo ili kutusaidia kuelewa na kuboresha mbinu za uwasilishaji wa jeni za Mbunge. Mbinu tunayotumia hapa inatokana na tafiti zetu kwa kutumia SPring-8 BL20B, harakati inayoonekana ya utoaji wa kipimo kinachoonekana. njia ya hewa ya pua na mapafu ya panya ili kusaidia kueleza mifumo yetu ya usemi wa jeni isiyo sare iliyozingatiwa katika masomo ya wanyama ya mbeba jeni 3,4 .
Madhumuni ya utafiti huu yalikuwa kutumia synchrotron PB-PCXI kuibua mienendo ya vivo ya mfululizo wa wabunge kwenye trachea ya panya wanaoishi. Tafiti hizi za picha za PB-PCXI ziliundwa ili kupima wabunge mbalimbali, nguvu za uga wa sumaku, na maeneo ili kubaini athari zao kwenye mwendo wa Mbunge. Tulikisia kuwa eneo linalolengwa la Mbunge lingeweza pia kuturuhusu kutumia eneo la sumaku ambalo lingeturuhusu kutumia eneo la sumaku. kutambua usanidi wa sumaku ambao huongeza idadi ya chembe zinazobaki kwenye trachea baada ya kuwekwa. Katika mfululizo wa pili wa tafiti, tulijaribu kutumia usanidi huu bora ili kuonyesha muundo wa upitishaji unaotokana na utoaji wa vivo wa LV-MPs kwenye njia ya hewa ya panya, kwa kuzingatia dhana kwamba uwasilishaji wa LV-MPs katika muktadha uliolengwa wa upitishaji hewa ungeboresha ufanisi wa njia ya hewa ya LV.
Masomo yote ya wanyama yalifanywa kulingana na itifaki zilizoidhinishwa na Chuo Kikuu cha Adelaide (M-2019-060 na M-2020-022) na Kamati ya Maadili ya Wanyama ya SPring-8 Synchrotron. Majaribio yalifanywa kulingana na miongozo ya WASILI.
Upigaji picha wote wa X-ray ulifanywa kwenye mstari wa boriti wa BL20XU kwenye synchrotron ya SPring-8 nchini Japani, kwa kutumia usanidi sawa na ule ulioelezwa hapo awali21,22.Kwa ufupi, kisanduku cha majaribio kilipatikana mita 245 kutoka kwa pete ya hifadhi ya synchrotron. Umbali wa sampuli hadi detector wa 0.6 m hutumika kwa tafiti za utofautishaji wa chembe za 0.3 mA kwa ajili ya tafiti za utofautishaji wa chembe za mA. nishati ya boriti ya monokromatiki ya keV 25 ilitumiwa. Picha zilinaswa kwa kutumia kigeuzi cha X-ray cha ubora wa juu (SPring-8 BM3) kilichounganishwa na kigunduzi cha sCMOS. Kigeuzi hicho hubadilisha miale ya X hadi mwanga unaoonekana kwa kutumia scintillator nene ya 10 µm (Gd3Al2Ga3C inayoelekezwa kwa MOS × lengo la MOS12), ambayo kisha ni MOS 12. (NA 0.3). Kitambuzi cha sCMOS kilikuwa Orca-Flash4.0 (Hamamatsu Photonics, Japani) chenye ukubwa wa safu ya pikseli 2048 × 2048 na saizi mbichi ya pikseli ya 6.5 × 6.5 µm. Mipangilio hii inatoa saizi bora ya isotropiki ya 0.51 × 1 mm ya taswira ya takriban 0.51 × 1. Urefu wa mfiduo wa mm 100 ulichaguliwa ili kuongeza uwiano wa ishara-kwa-kelele wa chembe za sumaku ndani na nje ya njia ya hewa huku ikipunguza mabaki ya mwendo unaosababishwa na kupumua. Kwa tafiti za vivo, shutter ya haraka ya X-ray iliwekwa kwenye njia ya X-ray ili kupunguza kipimo cha mionzi kwa kuzuia miale ya X-ray kati ya kuambukizwa.
Kitoa huduma cha LV hakikutumika katika tafiti zozote za upigaji picha za SPring-8 PB-PCXI kwa sababu chumba cha kupiga picha cha BL20XU hakijaidhinishwa na Kiwango cha 2 cha Usalama wa Uhai. Badala yake, tulichagua aina mbalimbali za Wabunge wenye sifa nzuri kutoka kwa wasambazaji wawili wa kibiashara—zinazoshughulikia ukubwa, nyenzo, viwango vya chuma, na matumizi ndani ya sehemu za sumaku za MP, kwanza ili kuelewa jinsi sehemu za sumaku za MP zinavyoishi. njia za hewa. juu ya uso. Wabunge hutofautiana kwa ukubwa kutoka 0.25 hadi 18 μm na hutengenezwa kwa nyenzo mbalimbali (tazama Jedwali 1), lakini muundo wa kila sampuli, ikiwa ni pamoja na ukubwa wa chembe za sumaku ndani ya Mbunge, haujulikani. Kulingana na tafiti zetu za kina za MCT 19, 20, 21, 23, 24, tunatarajia kwamba 5 μ juu ya njia ya hewa inaweza kuonekana kama uso mdogo wa trache. kutoa fremu zinazofuatana ili kuona mwonekano ulioimarishwa wa mwendo wa Mbunge. Mbunge mmoja wa ukubwa wa 0.25 μm ni mdogo kuliko azimio la kifaa cha kupiga picha, lakini PB-PCXI inatarajiwa kugundua utofautishaji wao wa sauti na mwendo wa umajimaji wa uso ambapo huwekwa baada ya kuwekwa.
Sampuli za kila Mbunge katika Jedwali 1 zilitayarishwa katika kapilari za glasi 20 μl (Drummond Microcaps, PA, USA) zenye kipenyo cha ndani cha 0.63 mm. Chembe za corpuscular zinapatikana katika maji, wakati chembe za CombiMag zinapatikana katika maji ya umiliki wa mtengenezaji. Kila tube imejaa nusu ya kishikilia kioevu (takriban 1 μ) 1).Kapilari za glasi ziliwekwa kwa mlalo kwenye hatua ya sampuli katika kisanduku cha kupiga picha, kwa mtiririko huo, na kuweka kingo za maji.Kipenyo cha mm 19 (urefu wa mm 28) ganda la nikeli adimu duniani neodymium chuma boroni (NdFeB) sumaku (N35, cat. no. LM1652, Australia1 Electronics sumaku) Teksi ya elektroniki ya Jaycar1 iliambatishwa kwa hatua tofauti ya kutafsiri ili kufikia Badilisha nafasi yake kwa mbali wakati wa kupiga picha.Upataji wa picha ya X-ray huanza wakati sumaku imewekwa takriban milimita 30 juu ya sampuli, na picha hupatikana kwa kasi ya fremu 4 kwa sekunde. Wakati wa kupiga picha, sumaku ililetwa karibu na bomba la kapilari la glasi (umbali wa takriban milimita 1) na kisha kutafsiriwa kando ya mrija hadi uimara wa shamba.
Uwekaji picha wa in vitro unaojumuisha sampuli za Mbunge katika kapilari za glasi kwenye sampuli ya hatua ya tafsiri ya xy. Njia ya boriti ya X-ray imewekwa alama ya mstari mwekundu uliokatika.
Mara tu mwonekano wa ndani wa Wabunge ulipoanzishwa, kikundi kidogo chao kilijaribiwa katika vivo katika panya wa kike albino Wistar (~umri wa wiki ~ 12, ~ 200 g).0.24 mg/kg medetomidine (Domitor®, Zenoaq, Japan), 3.2 mg/kg midazolam (Dormicum®, mg4/kg/Japani butorpha)s buti. (Vetorphale®, Meiji Seika) Panya walilazimishwa kwa mchanganyiko wa Pharma), Japani) kwa kudungwa ndani ya peritoneal. Baada ya ganzi, walitayarishwa kwa ajili ya kupiga picha kwa kuondoa manyoya karibu na mirija ya mirija, kwa kuingiza mrija wa endotracheal (ET; 16 Ga iv cannula, Terumo BCT) na kuwaweka kwenye picha ya sahani iliyo na halijoto maalum ili kudumisha halijoto ya mwili. 22 .Bamba la kupiga picha liliambatishwa kwa sampuli ya hatua ya kutafsiri katika kisanduku cha picha kwa pembe kidogo ili kupanga mirija ya mshipa mlalo katika picha ya X-ray, kama inavyoonyeshwa kwenye Mchoro 2a.
(a) Katika usanidi wa upigaji picha wa vivo katika kisanduku cha picha cha SPring-8, njia ya boriti ya X-ray ina alama ya mstari mwekundu uliokatika.(b,c) Ujanibishaji wa sumaku kwenye trachea ulifanyika kwa mbali kwa kutumia kamera mbili za IP zilizowekwa kwa njia ya orthogonally.Upande wa kushoto wa picha ya skrini, kitanzi cha waya kinachoshikilia kichwa kinaweza kuonekana, na mahali pa bomba la ET inaweza kuonekana.
Mfumo wa pampu ya sirinji inayodhibitiwa kwa mbali (UMP2, Vyombo vya Usahihi Duniani, Sarasota, FL) kwa kutumia sindano ya glasi 100 μl iliunganishwa kwenye neli ya PE10 (OD 0.61 mm, ID 0.28 mm) kupitia sindano ya Ga 30. Weka alama kwenye bomba ili kuhakikisha kuwa ncha iko katika nafasi sahihi. bomba la bomba la sindano lilitolewa huku ncha ya bomba ikitumbukizwa kwenye sampuli ya mbunge. Bomba la kuwasilisha lililopakiwa liliingizwa kwenye bomba la endotracheal, na kuweka ncha ndani ya sehemu yenye nguvu zaidi ya uga wetu wa sumaku uliotarajiwa. Upatikanaji wa picha ulidhibitiwa kwa kutumia kitambua upumuaji kilichounganishwa kwenye kisanduku chetu cha saa kinachotegemea Arduino, kisanduku cha kuweka saa, na kisanduku cha kuzima joto, na kisanduku cha kuzima joto, na ishara zote za rec. upatikanaji) zilirekodiwa kwa kutumia Powerlab na LabChart (Vyombo vya AD, Sydney, Australia) 22. Wakati wa kupiga picha Wakati enclosure haikuweza kufikiwa, kamera mbili za IP (Panasonic BB-SC382) ziliwekwa kwa takriban 90 ° kwa kila mmoja na zilitumiwa kufuatilia nafasi ya sumaku kuhusiana na trachea (Figmize). mabaki, picha moja ilipatikana kwa kila pumzi wakati wa uwanda wa mwisho wa mtiririko wa maji.
Sumaku imeunganishwa kwenye hatua ya pili ambayo inaweza kupatikana kwa mbali kutoka nje ya nyumba ya kupiga picha.Nafasi mbalimbali za sumaku na usanidi zilijaribiwa, ikiwa ni pamoja na: Kuwekwa kwa pembe ya takriban 30 ° juu ya trachea (mipangilio iliyoonyeshwa kwenye Mchoro 2a na 3a); sumaku moja juu ya mnyama na nyingine chini, na miti iliyowekwa ili kuvutia (Mchoro 3b); sumaku moja juu ya mnyama na nyingine chini, na nguzo zimewekwa ili kurudisha nyuma (Mchoro 3c); na sumaku moja juu na perpendicular kwa trachea (Kielelezo 3d).Pindi mnyama na sumaku zinaposanidiwa na Mbunge wa kujaribiwa kupakiwa kwenye pampu ya sindano, toa kipimo cha 50 μl kwa kasi ya 4 μl/sekunde huku ukipata picha. Sumaku husogezwa mbele na nyuma huku ikiendelea kupata picha kwenye trachea.
Usanidi wa sumaku kwa picha ya vivo (a) sumaku moja juu ya trachea kwa pembe ya takriban 30°, (b) sumaku mbili zilizowekwa ili kuvutia, (c) sumaku mbili zimewekwa ili kurudisha nyuma, (d) sumaku moja juu na ya pembeni kwenye trachea. Mtazamaji alitazama chini kutoka mdomoni hadi kwenye mapafu kupitia trachea na upande wa kushoto kupitia trachea ya kushoto na X-ray. upande.Sumaku huhamishwa kando ya urefu wa njia ya hewa au kushoto na kulia juu ya trachea katika mwelekeo wa boriti ya X-ray.
Pia tulitafuta kujua mwonekano na tabia ya chembe kwenye njia za hewa kwa kukosekana kwa kupumua kwa kutatanisha na mwendo wa moyo. Kwa hiyo, mwishoni mwa kipindi cha kupiga picha, wanyama waliuawa kibinadamu kwa overdose ya pentobarbital (Somnopentil, Pitman-Moore, Washington Crossing, USA; ~ 65 mg / kg, ip iliacha kwenye jukwaa na wanyama wa kupiga picha mara moja, wanyama walisimama kwenye jukwaa la kupumua). mchakato wa kupiga picha ulirudiwa, na kuongeza dozi ya ziada ya mbunge ikiwa hakuna mbunge anayeonekana kwenye uso wa njia ya hewa.
Picha zilizopatikana zilisahihishwa kwa uga-bapa na uga-usio na kuunganishwa kuwa filamu (fremu 20 kwa sekunde; 15-25 × kasi ya kawaida kulingana na kasi ya kupumua) kwa kutumia hati maalum iliyoandikwa katika MATLAB (R2020a, The Mathworks).
Masomo yote ya utoaji wa vekta ya jeni ya LV yalifanyika katika Kituo cha Utafiti wa Wanyama wa Maabara katika Chuo Kikuu cha Adelaide na yalilenga kutumia matokeo ya jaribio la SPring-8 kutathmini ikiwa utoaji wa LV-MP mbele ya uwanja wa sumaku unaweza kuimarisha uhamishaji wa jeni katika vivo. Ili kutathmini athari za Mbunge na uwanja wa sumaku, vikundi viwili vya wanyama vilitibiwa: kikundi kimoja kilipewa LV-MP na kikundi kingine cha udhibiti na MP. sumaku.
Vekta za jeni za LV zilitolewa kwa kutumia mbinu zilizoelezwa hapo awali 25, 26. Vekta ya LacZ inaeleza jeni ya beta-galactosidase ya nyuklia inayoendeshwa na kikuzaji cha MPSV (LV-LacZ), ambacho hutoa bidhaa ya mmenyuko wa bluu katika seli zilizobadilishwa, zinazoonekana katika pande za tishu za mapafu na sehemu za tishu. hemocytometer ili kukokotoa titer katika TU/ml. Vichukuzi huhifadhiwa kwenye -80 °C, huyeyushwa kabla ya matumizi, na kufungwa kwa CombiMag kwa kuchanganya kwa uwiano wa 1: 1 na kuangazia kwenye barafu kwa angalau dakika 30 kabla ya kujifungua.
Panya wa kawaida wa Sprague Dawley (n = 3/kikundi, ~2-3 walilazwa ganzi kwa njia ya utumbo kwa mchanganyiko wa 0.4 mg/kg medetomidine (Domitor, Ilium, Australia) na 60 mg/kg ketamine (Ilium, Australia) wenye umri wa mwezi mmoja) ip) sindano na njia isiyo ya upasuaji ya kuzuia hewa16 ili kuhakikisha upitishaji wa hewa ya mdomo kwa tishu. inapokea upitishaji wa LV, iliwekewa hali kwa kutumia itifaki yetu ya uharibifu wa mitambo iliyoelezwa hapo awali, ambapo sehemu ya njia ya hewa ya tracheal ilisuguliwa kwa mhimili na kikapu cha waya (N-Circle, Nitinol Tipless Stone Extractor NTSE-022115) -UDH, Cook Medical, USA) 30 s28.Tracheal tracheal administration baada ya takriban dakika ya LV-0MP ya tracheal kutekelezwa baada ya LV-Puration biological administration.
Sehemu ya sumaku iliyotumika katika jaribio hili ilisanidiwa kwa njia sawa na uchunguzi wa picha ya X-ray wa in vivo, na sumaku zile zile zilizoshikiliwa juu ya trachea kwa kutumia klipu za kunereka za kunereka (Mchoro 4). Kiasi cha 50 μl (2 × 25 μl aliquots) cha LV-MP kilitolewa kwenye trachea (n A = 3 ya kikundi cha kudhibiti) kilichoelezwa hapo awali kwa wanyama wa bomba la 3. = wanyama 3) walipokea wabunge wa LV sawa bila kutumia sumaku.Baada ya kuingizwa kukamilika, kanula huondolewa kwenye bomba la ET na mnyama hutolewa nje.Sumaku hubakia mahali hapo kwa dakika 10, kisha huondolewa.Panya walipokea kipimo cha chini cha ngozi cha meloxicam (1 ml/kg) (Ilium, Australia sindano ya atimaversle ya anesthesia ya 1) ikifuatiwa na rehema. hidrokloridi (Antisedan, Zoetis, Australia).Panya waliwekwa joto na kufuatiliwa hadi kupona kamili kutoka kwa anesthesia.
Kifaa cha utoaji wa LV-MP katika baraza la mawaziri la usalama wa kibiolojia.Kitovu cha rangi ya kijivu cha Luer cha tube ya ET kinaweza kuonekana kikitoka kinywa na ncha ya gel ya pipette iliyoonyeshwa kwenye picha inaingizwa kupitia bomba la ET hadi kina kinachohitajika kwenye trachea.
Wiki moja baada ya utaratibu wa kipimo cha LV-MP, wanyama waliuawa kwa kibinadamu kwa 100% ya kuvuta pumzi ya CO2 na kujieleza kwa LacZ kulipimwa kwa kutumia matibabu yetu ya kawaida ya X-gal. Pete tatu za caudal nyingi za cartilaginous ziliondolewa ili kuhakikisha kuwa uharibifu wowote wa mitambo au uhifadhi wa maji kutoka kwa uwekaji wa tube ya endotracheal haukujumuishwa katika uchambuzi. sahani iliyo na mpira wa silikoni (Sylgard, Dow Inc) kwa kutumia sindano ya Minutien (Zana za Sayansi Bora) ili kuibua uso wa mwanga. Usambazaji na muundo wa seli zilizobadilishwa zilithibitishwa na upigaji picha wa mbele kwa kutumia darubini ya Nikon (SMZ1500) yenye kamera ya DigiLite na programu ya TCapture (Tucsen Photonics, Uchina). upana wa trachea), yenye urefu mzima wa trachea iliyoonyeshwa hatua kwa hatua, ikihakikisha mwingiliano wa kutosha kati ya kila picha ili kuruhusu picha "kuunganishwa".Picha kutoka kwa kila trachea zilikusanywa katika picha moja ya mchanganyiko kwa kutumia Picha Composite Editor v2.0.3 (Microsoft Research) kwa kutumia algoriti ya mwendo iliyopangwa.LacZ kutoka kwa kila sehemu ya maelezo ya wanyama katika trachea iliunganishwa. hati ya otomatiki ya MATLAB (R2020a, MathWorks) kama ilivyoelezwa hapo awali, kwa kutumia mipangilio ya 0.35 < Hue < 0.58, Saturation > 0.15, na Thamani < 0.7. Kwa kufuatilia mikondo ya tishu, barakoa ilitolewa kwa mikono katika GIMP v2.10.24 ili kuzuia picha ya ugunduzi ya nje ya eneo kutoka kwa kila picha ya uwongo kutoka kwa kila picha ya nje kwa kila picha ya uwongo kwa kila picha ya nje. tishu za mirija.Sehemu zilizo na madoa kutoka kwa picha zote za mchanganyiko kutoka kwa kila mnyama zilijumlishwa ili kutoa jumla ya eneo lenye madoa kwa mnyama huyo.Eneo lenye madoa liligawanywa kwa jumla ya eneo la barakoa ili kutoa eneo lililosawazishwa.
Kila trachea ilipachikwa kwenye mafuta ya taa na sehemu za 5 μm zilikatwa. Sehemu zilizuiliwa kwa rangi nyekundu isiyo na upande kwa dakika 5 na picha zilipatikana kwa kutumia darubini ya Nikon Eclipse E400, kamera ya DS-Fi3 na programu ya kunasa kipengele cha NIS (toleo la 5.20.00).
Uchanganuzi wote wa takwimu ulifanyika katika GraphPad Prism v9 (Programu ya GraphPad, Inc.).Umuhimu wa takwimu umewekwa katika p ≤ 0.05.Ukawaida ulithibitishwa kwa kutumia jaribio la Shapiro-Wilk, na tofauti katika uwekaji rangi wa LacZ zilitathminiwa kwa kutumia jaribio la t ambalo halijaoanishwa.
Wabunge sita waliofafanuliwa katika Jedwali 1 walichunguzwa kwa kutumia PCXI, na mwonekano umefafanuliwa katika Jedwali 2. Wabunge wawili wa polystyrene (MP1 na MP2; 18 μm na 0.25 μm, mtawalia) hawakuonekana chini ya PCXI, lakini sampuli zilizosalia zilitambulika (mifano imeonyeshwa kwenye 5% (5) MP1 na MP2% 0.25 μm na 0.9 μm, mtawalia) zinaonekana hafifu. Ingawa ina baadhi ya chembe ndogo zaidi zilizojaribiwa, MP5 (98% Fe3O4; 0.25 μm) ndiyo iliyotamkwa zaidi. Bidhaa ya CombiMag MP6 ni vigumu kuiona. kapilari.Sumaku ziliposogea mbali na kapilari, chembe hizo zilipanuliwa kwa nyuzi ndefu, lakini sumaku zilipokaribia na nguvu ya shamba la sumaku kuongezeka, nyuzi za chembe zilifupishwa kadiri chembe zinavyohamia kwenye uso wa juu wa kapilari (tazama Video ya Nyongeza S1: MP4), ikiongeza msongamano wa chembe kwenye uso wa kapilari, wakati nguvu ya kapilari huondolewa kutoka kwa uso wa shamba. hupungua na Wabunge hujipanga upya katika nyuzi ndefu zinazotoka sehemu ya juu ya kapilari (tazama Video ya Nyongeza S2:MP4).Baada ya sumaku kuacha kusonga, chembechembe huendelea kusonga kwa muda mfupi baada ya kufikia nafasi ya msawazo.Mbunge anaposogea kuelekea na kuondoka kutoka sehemu ya juu ya kapilari, kwa kawaida chembe ya sumaku hupitia uchafu wa sumaku.
Mwonekano wa Mbunge chini ya PCXI hutofautiana kwa kiasi kikubwa kati ya sampuli.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 na (d) MP6.Picha zote zilizoonyeshwa hapa zilichukuliwa na sumaku iliyoko takriban milimita 10 juu ya kapilari.Miduara mikubwa inayoonekana ni viputo vya hewa vilivyonaswa kwenye kapilari, vinavyoonyesha kwa uwazi utofautishaji wa sehemu nyeusi na nyeupe sehemu ya utofautishaji wa kisanduku nyekundu. Ukuzaji.Kumbuka kwamba vipenyo vya michoro ya sumaku katika takwimu zote si vya kupima na ni takriban mara 100 zaidi ya inavyoonyeshwa.
Sumaku inapotafsiriwa kushoto na kulia pamoja na sehemu ya juu ya kapilari, pembe ya kamba ya Mbunge inabadilika ili kupatana na sumaku (ona Mchoro 6), hivyo kufafanua mistari ya shamba la sumaku.Kwa MP3-5, baada ya chord kufikia pembe ya kizingiti, chembe huvutwa pamoja na uso wa juu wa capillary. Video ya Nyongeza ya S3:MP5).Hii pia huonekana hasa wakati wa kupiga picha karibu na ncha ya kapilari, ambayo husababisha Wabunge kujumlisha na kuzingatia kiolesura cha hewa-kigiligili.Chembe katika MP6, ambazo zilikuwa ngumu zaidi kutambulika kuliko MP3-5, hazikuburutwa huku sumaku ikisogea kando ya kapilari, lakini MP , na kuacha sehemu ya mwonekano wa Video. S4:MP6).Katika baadhi ya matukio, uga wa sumaku uliowekwa ulipopunguzwa kwa kusogeza sumaku umbali mkubwa kutoka eneo la kupiga picha, Wabunge wowote waliosalia walishuka polepole hadi sehemu ya chini ya bomba kwa nguvu ya uvutano huku wakibaki kwenye uzi (angalia Video ya Nyongeza S5: MP3).
Pembe ya mfuatano wa Mbunge hubadilika sumaku inapotafsiriwa kwenda kulia juu ya kapilari.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 na (d) MP6. Kisanduku chekundu kina ukuzaji wa utofautishaji wa utofautishaji. Kumbuka kuwa video za ziada ni za kuarifu kwani zinafichua muundo wa chembe muhimu na maelezo yanayobadilika ambayo hayawezi kuonekana katika picha hizi tuli.
Majaribio yetu yalionyesha kuwa kusogeza sumaku polepole na kurudi kando ya trachea hurahisisha taswira ya Mbunge katika muktadha wa harakati tata katika vivo. Upimaji wa vivo haukufanywa kwa vile shanga za polystyrene (MP1 na MP2) hazikuonekana kwenye kapilari. Kielelezo 2b na 3a), kwa kuwa hii ilisababisha minyororo mirefu ya Mbunge na ilikuwa na ufanisi zaidi kuliko usanidi wa sumaku uliokatishwa.MP3, MP4 na MP6 hazikugunduliwa kwenye trachea ya wanyama wowote walio hai. Njia za hewa za panya zilipopigwa picha baada ya wanyama kuuawa kibinadamu, chembe hizo zilibaki zisizoonekana hata wakati sauti ya ziada iliongezwa kwa kutumia oksidi ya chuma na MP5 iliyoonekana tu. kwa hiyo ilitumika kutathmini na kubainisha tabia ya mbunge.
Kuweka sumaku juu ya trachea wakati wa utoaji wa Mbunge ilisababisha wengi, lakini si wote, Wabunge kujilimbikizia katika uwanja wa mtazamo.Chembe zinazoingia kwenye trachea zinazingatiwa vyema katika wanyama waliotolewa dhabihu ya kibinadamu.Mchoro wa 7 na Video ya Nyongeza S6: MP5 inaonyesha kukamata kwa kasi kwa sumaku na upatanishi wa chembe kwenye uso wa ventral inayoelekeza ambayo MP inaelekea kwenye eneo la trachea, wakati trachea inaweza kuelekezwa. wakitafuta kwa mbali zaidi kwenye trachea baada ya mbunge kujifungua, baadhi ya wabunge walipatikana karibu na carina, na kupendekeza kuwa nguvu ya uga wa sumaku haitoshi kukusanya na kuhifadhi wabunge wote, kwani walitolewa kupitia eneo la nguvu ya juu kabisa ya uwanja wa sumaku wakati wa mchakato wa maji.
Picha kutoka (a) kabla na (b) baada ya kuwasilisha MP5 kwenye trachea ya panya aliyeidhinishwa hivi majuzi na sumaku iliyowekwa moja kwa moja juu ya eneo la kupiga picha. Eneo la picha liko kati ya pete mbili za cartilage. Kabla ya Mbunge kutoa, kuna umajimaji katika njia ya hewa. Kisanduku chekundu kina ukuzaji wa utofautishaji. Picha hizi ni: kutoka kwa video ya nyongeza6 iliyoonyeshwa.
Kutafsiri sumaku kwenye trachea katika vivo kulisababisha mnyororo wa Mbunge kubadili angle ndani ya uso wa njia ya hewa kwa namna inayofanana na ile inayoonekana kwenye kapilari (ona Mchoro 8 na Video ya Nyongeza S7:MP5).Hata hivyo, katika utafiti wetu, Wabunge hawakuweza kuburutwa kwenye uso wa njia ya hewa iliyo hai kama walivyoweza kwa kapilari. Katika baadhi ya matukio husogea kwa muda mrefu kama sumaku ya kushoto na Mbunge. pia iligundua kuwa mfuatano wa chembe unaonekana kubadilisha kina cha safu ya maji ya uso wakati sumaku inaposogezwa kwa muda mrefu kando ya trachea, na hupanuka wakati sumaku inaposogezwa moja kwa moja juu na mfuatano wa chembe unazungushwa kwenye nafasi ya wima (angalia Video ya Nyongeza S7). : MP5 saa 0:09, chini kulia).Mchoro wa tabia ya mwendo ulibadilika sumaku ilipotafsiriwa sehemu ya juu ya trachea kwa upande (yaani, kushoto au kulia kwa mnyama badala ya urefu wa mirija).Bado chembe hizo zilionekana wazi zilipokuwa zikisogea, lakini sumaku ilipotolewa kutoka kwenye mirija ya hewa, ncha za sehemu ya juu ya mirija ya hewa (yaani, kushoto au kulia kwa mnyama badala ya urefu wa mirija).Bado chembe hizo zilionekana wazi zilipokuwa zikisogea, lakini sumaku ilipotolewa kwenye mirija ya hewa, ncha za sehemu ya juu ya mirija ya hewa zilionekana kwenye sehemu ya 8 ya Nyongeza ya MP. 0:08).Hii inalingana na tabia ya Mbunge tuliyoona chini ya uga wa sumaku uliowekwa kwenye kapilari ya glasi.
Mfano wa picha zinazoonyesha MP5 kwenye trachea ya panya hai aliyelala kwa ganzi. (a) Sumaku hutumika kupata picha juu na upande wa kushoto wa trachea, kisha (b) baada ya sumaku kusogezwa upande wa kulia. Sanduku jekundu lina ukuzaji wa kuboresha utofautishaji. Picha hizi ni kutoka kwa video iliyoonyeshwa kwenye Supplementary Video S7:MP5.
Wakati nguzo hizo mbili zilisanidiwa katika uelekeo wa kaskazini-kusini juu na chini ya trachea (yaani kuvutia; Mtini. 3b), mihimili ya Mbunge ilionekana kwa muda mrefu na iliwekwa kwenye ukuta wa mirija ya uti wa mgongo badala ya sehemu ya mirija ya uti wa mgongo (tazama Video ya Nyongeza S9:MP5).Hata hivyo, viwango vya juu vya chembechembe hazikuwa kwenye eneo moja la kiowevu (trachea) yaani, sehemu ya uso wa trachea iliyogunduliwa. uwasilishaji wakati kifaa cha sumaku-mbili kilipotumiwa, ambayo kwa kawaida hutokea wakati kifaa cha sumaku-moja kinapotumiwa.Kisha sumaku moja iliposanidiwa kurudisha nguzo kinyume (Mchoro 3c), idadi ya chembe zinazoonekana katika uga wa mwonekano hazikuonekana kuongezeka baada ya kujifungua.Usanidi wa usanidi wa sumaku-mbili ni changamoto kutokana na mvuto wa juu wa sumaku kubadilishwa kisha kubadilishwa kuwa sumaku ya juu ya kusukuma. sumaku moja sambamba na njia ya hewa lakini ikipitia njia ya hewa kwa nyuzi 90 ili mistari ya shamba ivuke ukuta wa mirija kwa njia ya orthogonal (Kielelezo 3d), mwelekeo ulioundwa ili kubaini ikiwa mkusanyiko wa chembe kwenye ukuta wa upande ungeweza kuzingatiwa. usanidi wa mwelekeo (Mchoro 3a) ulichaguliwa kwa ajili ya tafiti za vibeba jeni za vivo.
Mnyama alipopigwa picha mara kwa mara baada ya mauaji ya kibinadamu, kukosekana kwa mwendo wa tishu unaochanganyikiwa kulimaanisha kuwa mistari laini na mifupi ya chembe inaweza kutambulika katika uga wa kiingilio wazi, "kutetemeka" kulingana na mwendo wa kutafsiri wa sumaku. Walakini, bado haiwezi kuona wazi uwepo na mwendo wa chembe za MP6.
Titer ya LV-LacZ ilikuwa 1.8 × 108 TU / ml, na baada ya 1: 1 kuchanganya na CombiMag MP (MP6), wanyama walipokea dozi ya tracheal ya 50 μl ya 9 × 107 TU / ml LV gari (yaani 4.5 × 106 TU / panya). ).Katika tafiti hizi, badala ya kutafsiri sumaku wakati wa leba, tuliweka sumaku katika nafasi moja ili kubaini kama upitishaji wa LV (a) ungeweza kuboreshwa ikilinganishwa na utoaji wa vekta bila uga wa sumaku, na (b) inaweza kulenga seli za Airway hupitishwa kwenye maeneo yanayolengwa sumaku ya njia ya juu ya hewa.
Uwepo wa sumaku na utumiaji wa CombiMag pamoja na vekta za LV haukuonekana kuwa na athari mbaya kwa afya ya wanyama, kama vile itifaki yetu ya kawaida ya utoaji wa vekta ya LV. Picha za mbele za eneo la trachea zilizoathiriwa na uharibifu wa mitambo (Kielelezo cha 1 cha Nyongeza) zilionyesha kuwa kulikuwa na viwango vya juu zaidi vya uhamishaji katika kundi la wanyama wakati wa kutibiwa kwa magneta LV-9 ndogo (Ogly-MP). kiasi cha rangi ya bluu ya LacZ ilikuwepo katika kikundi cha udhibiti (Mchoro 9b) . Uhakikisho wa maeneo ya kawaida ya X-Gal yenye rangi ilionyesha kuwa utawala wa LV-MP mbele ya uwanja wa magnetic ulizalisha uboreshaji wa takriban mara 6 (Mchoro 9c).
Mfano wa picha za mchanganyiko zinazoonyesha upitishaji wa mirija kwa kutumia LV-MP (a) kukiwa na uga wa sumaku na (b) bila sumaku.(c) Uboreshaji wa kitakwimu katika eneo la kawaida la upitishaji la LacZ ndani ya mirija wakati wa kutumia sumaku (*p = 0.029, t-test, n = 3 kwa kila kikundi, maana ± SEM).
Sehemu zilizo na madoa mekundu ya haraka (mfano ulioonyeshwa kwenye Kielelezo cha 2 cha Nyongeza) zilionyesha visanduku vilivyo na LacZ vilivyo katika muundo na eneo sawa kama ilivyoripotiwa hapo awali.
Changamoto kuu kwa matibabu ya jeni ya njia ya hewa inasalia kuwa ujanibishaji sahihi wa chembe za mtoa huduma kwa maeneo yanayovutia na kufikia viwango vya juu vya ufanisi wa upitishaji katika pafu linalosonga kukiwa na mtiririko wa hewa na uondoaji wa kamasi amilifu. Kwa wabebaji wa LV ambao wameundwa kutibu ugonjwa wa njia ya hewa ya CF, kuongeza muda wa kuishi wa chembe za mtoa huduma ndani ya njia ya hewa inayoendesha imekuwa jambo lisiloweza kufikiwa hadi sasa. kuboresha uhamishaji kuna faida ikilinganishwa na mbinu zingine za uwasilishaji wa jeni kama vile upitishaji umeme, kwani inaweza kuchanganya unyenyekevu, ufanisi wa gharama, ujanibishaji wa utoaji, ongezeko la ufanisi, na muda mfupi wa incubation, na ikiwezekana kipimo kidogo cha mtoa huduma. viwango katika njia za hewa hai.
Majaribio yetu ya in vitro synchrotron PCXI yalionyesha kuwa chembechembe zote tulizojaribiwa, isipokuwa mbunge wa polystyrene, zilionekana kwenye usanidi wa picha tuliotumia. Mbele ya uga wa sumaku, wabunge huunda nyuzi ambazo urefu wake unahusiana na aina ya chembe na nguvu ya uga wa sumaku (yaani ukaribu na mwendo wa sumaku).Kama inavyoonyeshwa kwenye Mchoro wa 10 ambao kila chembe inaundwa, tunaona kila kamba ya sumaku inayoundwa. kushawishi uga wake wa ndani wa sumaku.Nyuga hizi tofauti husababisha chembe nyingine zinazofanana kujumlisha na kuunganishwa, kwa miondoko ya kamba-kama ya kikundi kutokana na nguvu za ndani kutoka kwa nguvu za ndani za kuvutia na za kuchukiza za chembe nyingine.
Inaonyesha kiratibu (a,b) treni za chembe zinazozalishwa ndani ya kapilari zilizojaa maji na (c,d) trachea iliyojaa hewa. Kumbuka kuwa kapilari na trachea hazijavutwa kwa mizani. Paneli (a) pia ina maelezo ya Mbunge, ambayo yana chembechembe za Fe3O4 zilizopangwa kwa mifuatano.
Wakati sumaku ilisogezwa juu ya kapilari, pembe ya kamba ya chembe ilifikia kizingiti muhimu kwa MP3-5 iliyo na Fe3O4, baada ya hapo kamba ya chembe haikukaa tena katika nafasi ya asili, lakini ilisogezwa kwenye uso hadi kwenye nafasi mpya.magnet.Athari hii inaweza kutokea kwa sababu uso wa kapilari ya kioo ni laini ya kutosha kuruhusu harakati hii kutokea.La kushangaza, chembe zilikuwa ndogo zaidi, zilikuwa na mipako tofauti au chaji za uso, au kiowevu cha mbebaji miliki kiliathiri uwezo wao wa kusonga. Tofauti ya picha ya chembe za CombiMag pia ni hafifu, na hivyo kupendekeza kwamba umajimaji na chembechembe zinaweza kuwa na msongamano sawa na kwa hivyo zisisogee kwa urahisi. Chembe zinaweza pia kukwama ikiwa sumaku itasonga haraka sana, ikionyesha kwamba chembe ya uga wa sumaku haiwezi kushinda kila wakati, ikionyesha kwamba sehemu ya sumaku haiwezi kushinda kila wakati. haishangazi kwamba nguvu ya uga wa sumaku na umbali kati ya sumaku na eneo lengwa ni muhimu sana. Kwa pamoja, matokeo haya pia yanapendekeza kwamba, ingawa sumaku zinaweza kukamata wabunge wengi ambao hupita kupitia eneo linalolengwa, hakuna uwezekano kwamba sumaku zinaweza kutegemewa kusongesha chembe za CombiMag kwenye uso wa trachea. mti.
Chembechembe zinapotolewa kwenye mwili, ni vigumu kuzitambua katika muktadha wa tishu changamano zinazosonga za mwili, lakini uwezo wa kuzigundua uliimarishwa kwa kutafsiri sumaku kwa mlalo juu ya trachea ili "kuzungusha" kamba za Mbunge. Ingawa upigaji picha wa moja kwa moja unawezekana, ni rahisi kutambua mwendo wa chembe mnyama akishauawa kwa njia ya kibinadamu. baadhi ya chembe kwa kawaida zilipatikana zaidi kando ya trachea.Kinyume na tafiti za in vitro, chembe haziwezi kuvutwa kando ya trachea kwa kutafsiri sumaku.Ugunduzi huu unalingana na jinsi kamasi inayofunika uso wa trachea kawaida husindika chembe za kuvuta pumzi, na kuziweka kwenye kamasi na hatimaye kusafishwa na utaratibu wa kibali cha mucociliary.
Tulidhani kwamba matumizi ya sumaku kwa ajili ya kuvutia juu na chini ya trachea (Kielelezo 3b) inaweza kusababisha uga wa sumaku sare zaidi, badala ya uga wa sumaku ambao umejilimbikizia sana wakati mmoja, ambao unaweza kusababisha usambazaji sare zaidi wa chembe.Hata hivyo, utafiti wetu wa awali haukupata ushahidi wazi wa kuunga mkono dhana hii. utuaji zaidi wa chembe katika eneo la picha. Matokeo haya mawili yanaonyesha kuwa usanidi wa sumaku-mbili hauboresha sana udhibiti wa ndani wa ulengaji wa Mbunge, na kwamba matokeo ya nguvu kali za sumaku ni vigumu kusanidi, na kufanya mbinu hii isifanye kazi. Vile vile, kuelekeza sumaku hapo juu na kupitia trachea (Mchoro 3d) pia haikuongeza idadi ya chembechembe zilizohifadhiwa kwa sababu zinaweza kubakizwa kwa picha mbadala katika eneo fulani. katika nguvu za chini za uga wa sumaku ndani ya eneo la utuaji. Kwa hiyo, usanidi wa sumaku wa pembe ya digrii 30 (Mchoro 3a) unachukuliwa kuwa njia rahisi na bora zaidi ya kupima katika vivo.
Utafiti wa LV-MP ulionyesha kuwa vekta za LV zilipounganishwa na CombiMag na kutolewa baada ya kusumbua kimwili mbele ya uwanja wa sumaku, viwango vya upitishaji viliongezeka kwa kiasi kikubwa katika trachea ikilinganishwa na vidhibiti.Kulingana na tafiti za picha za synchrotron na matokeo ya LacZ, uga wa sumaku uliweza kuhifadhi LV ndani ya trachea na kupunguza idadi ya chembe za uboreshaji wa vekta mara moja. inaweza kusababisha ufanisi wa juu wakati kupunguza titers iliyotolewa, uhamisho wa nje ya lengo, madhara ya uchochezi na kinga, na gharama za carrier wa jeni.Muhimu, kulingana na mtengenezaji, CombiMag inaweza kutumika kwa kushirikiana na njia nyingine za uhamisho wa jeni, ikiwa ni pamoja na vectors nyingine za virusi (kama vile AAV) na asidi nucleic.