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Gene vectors rau kev kho mob ntawm cystic fibrosis mob ntsws yuav tsum tsom rau txoj hauv kev ua pa vim hais tias peripheral ntsws transduction tsis muab cov txiaj ntsig kho mob.Viral transduction efficiency yog ncaj qha cuam tshuam rau vector chaw nyob lub sij hawm.Txawm li cas los xij, cov kua xa tawm xws li cov neeg nqa cov noob diffuse mus rau hauv lub alveoli thaum kev tshoov siab, thiab kev kho mob yog cov kab mob sib kis tau sai heev. Lub sijhawm nyob ntawm cov neeg nqa khoom hauv cov hlab ntsha yog qhov tseem ceeb tab sis nyuaj rau kev ua tiav.Gene carrier-conjugated magnetic particles uas tuaj yeem raug coj mus rau saum npoo ntawm cov hlab ntsha tuaj yeem txhim kho lub hom phiaj hauv cheeb tsam.Vim yog cov teeb meem ntawm vivo visualization, tus cwj pwm ntawm cov khoom me me ntawm cov hlau nplaum nyob rau hauv qhov chaw ntawm kev siv cov hlau nplaum siv rau qhov kev kawm tsis zoo. Nyob rau hauv vivo motion ntawm ib tug series ntawm magnetic particles nyob rau hauv lub trachea ntawm anesthetized nas mus soj ntsuam cov dynamics thiab cov qauv ntawm ib tug neeg thiab bulk particle cwj pwm nyob rau hauv vivo.Peb kuj soj ntsuam seb tus me nyuam ntawm lentiviral magnetic hais nyob rau hauv lub xub ntiag ntawm ib tug sib nqus teb yuav ua rau kom transduction efficiency nyob rau hauv lub Synchrray trachea tus cwj pwm. Particles nyob ruaj ruaj thiab txav magnetic teb nyob rau hauv vitro thiab vivo.Particles tsis tuaj yeem yooj yim dragged raws li saum npoo ntawm cov hlab cua nrog hlau nplaum, tab sis thaum lub sij hawm thauj, cov deposits yog concentrated nyob rau hauv lub teb ntawm saib qhov twg lub magnetic teb muaj zog tshaj.Transduction efficiency kuj tau nce rau 6 npaug thaum lentiviral magnetic particles raug xa nyob rau hauv lub xub ntiag ntawm ib tug magnetic teb cov ntsiab lus. Tej zaum yuav yog cov txheej txheem tseem ceeb los txhim kho cov hom phiaj gene vector thiab nce qib kev hloov pauv hauv kev ua pa hauv vivo.
Cystic fibrosis (CF) yog tshwm sim los ntawm kev hloov pauv hauv ib lub noob hu ua CF transmembrane conductance regulator (CFTR).Cov CFTR protein yog ib qho ion channel uas muaj nyob rau hauv ntau lub epithelial hlwb thoob plaws hauv lub cev, suav nrog cov ua pa, ib qhov chaw loj ntawm CF pathogenesis.CFTR tsis xws luag ua rau cov huab cua tsis xws luag, dehydrating lub dehydrating dej thiab dewatering. txheej.Qhov no tseem cuam tshuam lub peev xwm ntawm mucociliary thauj (MCT) system kom tshem tawm cov pa nqus pa thiab cov kab mob los ntawm cov pa.Our lub hom phiaj yog los tsim kho cov noob caj noob ces lentiviral (LV) kom xa cov ntawv luam ntawm cov noob CFTR kom raug thiab txhim kho ASL, MCT, thiab lub ntsws noj qab haus huv, thiab txuas ntxiv txhim kho cov cuab yeej tshiab ntawm kev ntsuas kev muaj peev xwm.
LV vectors yog ib qho ntawm cov neeg sib tw rau CF airway gene therapy, feem ntau vim tias lawv tuaj yeem sib xyaw cov tshuaj kho mob mus tas li rau hauv cov pa hauv nruab nrog cev (airway qia hlwb).Qhov no yog ib qho tseem ceeb vim tias lawv tuaj yeem rov ua kom cov dej ib txwm muaj thiab cov hnoos qeev tshem tawm los ntawm kev sib txawv rau hauv kev ua haujlwm gene-kho CF-txuas nrog cov kab mob hauv lub cev, ua rau muaj txiaj ntsig zoo rau V. Txoj kev ua pa, vim qhov no yog qhov chaw CF lub ntsws pib.Kev xa cov vector ntxaum mus rau hauv lub ntsws yuav ua rau alveolar transduction, tab sis qhov no tsis muaj txiaj ntsig kho hauv CF.Txawm li cas los xij, cov kua dej xws li cov neeg nqa cov noob tau tsiv mus rau alveoli raws li kev tshoov siab tom qab yug me nyuam 3,4 thiab kev kho cov kab mob hauv cov kab mob CT yog sai sai. Lub sijhawm ntev ntawm cov vector tseem nyob ib sab ntawm lub hom phiaj kom tso cai rau cov cellular uptake - "lub sijhawm nyob" 5 - uas tau yooj yim txo los ntawm cov huab cua hauv cheeb tsam nrog rau kev sib koom ua ke ntawm cov mucus capture thiab MCT.Rau CF, lub peev xwm los ncua lub sij hawm nyob ntawm LV nyob rau hauv txoj hlab cua yog ib qho tseem ceeb kom ua tiav qib siab ntawm kev hloov pauv hauv cheeb tsam no, tab sis tam sim no tau sib tw.
Txhawm rau kov yeej qhov teeb meem no, peb xav tias LV magnetic particles (MPs) tuaj yeem pab ua ob txoj hauv kev ntxiv. Ua ntej, lawv tuaj yeem ua cov hlau nplaum rau hauv cov hlab cua kom txhim kho lub hom phiaj thiab pab cov gene carrier particles nyob rau hauv thaj av xav tau; thiab ASL) kom txav mus rau cell txheej 6.MPs tau dav siv raws li lub hom phiaj kev xa khoom tsheb thaum lawv khi rau cov tshuaj tiv thaiv kab mob, tshuaj tua kab mob, lossis lwm cov khoom me me uas txuas rau cov cell membranes lossis khi rau cov cell nto receptors thiab sib sau ntawm cov qog nqaij hlav hauv qhov muaj hluav taws xob zoo li qub. Sib Nqus Fields rau Kev Kho Mob Cancer 7. Lwm yam "hyperthermal" cov tswv yim tsom kom sov MPs thaum lawv raug oscillating magnetic teb, yog li rhuav tshem cov qog hlwb.Lub hauv paus ntsiab lus ntawm magnetic transfection, nyob rau hauv uas ib tug hlau nplaum yog siv los ua ib tug transfection neeg sawv cev los txhim kho cov kev hloov ntawm DNA mus rau lub hlwb, feem ntau yog siv nyob rau hauv vitroviral siv ib tug ntau yam ntawm cov kab mob uas tsis yog-viral. Line.Qhov kev ua tau zoo ntawm LV magnetotransfection tau tsim, nrog rau hauv vitro xa ntawm LV-MPs mus rau tib neeg bronchial epithelial cell kab nyob rau hauv lub xub ntiag ntawm ib tug zoo li qub magnetic teb, nce transduction efficiency los ntawm 186-fold piv rau LV vector ib leeg.LV-MP kuj tau siv rau ib qho in vitro CF qauv, qhov chaw sib nqus transfection hauv huab cua-2 livquid interface nce. CF sputum10.Txawm li cas los xij, hauv vivo magnetotransfection ntawm lub cev tau txais kev saib xyuas me ntsis thiab tsuas yog raug soj ntsuam hauv qee qhov kev tshawb fawb tsiaj11,12,13,14,15, tshwj xeeb tshaj yog nyob rau hauv lub ntsws16,17.Txawm li cas los xij, lub sijhawm rau kev sib nqus sib nqus hauv CF lub ntsws kho yog qhov tseeb. Kev tshawb fawb pov thawj-ntawm-lub tswv yim ntawm kev ua tau zoo sib nqus nanoparticle pulmonary tus me nyuam yuav ua rau txoj hauv kev rau yav tom ntej CFTR cov tswv yim nqus pa los txhim kho cov txiaj ntsig ntawm cov neeg mob CF "6.
Tus cwj pwm ntawm cov khoom sib nqus me me ntawm cov pa hauv cov pa hauv qhov chaw uas siv cov hlau nplaum yog qhov nyuaj rau kev pom thiab kawm, thiab yog li tsis to taub. Hauv lwm cov kev tshawb fawb, peb tau tsim ib qho synchrotron-propagation-based phase-contrast X-ray imaging (PB-PCXI) method to noninvasively visualize and quantify minute in vivo change and MSL. hydration thiab siv raws li qhov taw qhia thaum ntxov ntawm kev kho mob zoo.Ntxiv rau, peb txoj kev ntsuam xyuas MCT siv 10–35 µm txoj kab uas hla uas muaj li ntawm alumina los yog siab refractive index iav raws li MCT cov cim pom siv PB-PCXI21.Ob hom kev kawm yog tsim rau kev pom ntawm ntau hom particle, suav nrog MP.
Vim nws qhov kev daws teeb meem siab thiab sab cev nqaij daim tawv, peb cov PB-PCXI-raws li ASL thiab MCT tsom xam cov tswv yim zoo haum rau kev tshuaj xyuas cov dynamics thiab cov qauv ntawm ib leeg thiab bulk particle tus cwj pwm hauv vivo los pab peb to taub thiab optimize MP noob xa cov tswv yim.Txoj kev uas peb ua hauj lwm ntawm no yog los ntawm peb cov kev tshawb fawb siv cov kab mob khaub thuas-8 peb BLized 2. koob tshuaj xa mus rau hauv lub qhov ntswg thiab pulmonary airways ntawm cov nas los pab piav qhia peb cov qauv uas tsis yog-uniform gene qhia tau pom nyob rau hauv peb cov gene carrier dose tsiaj kev tshawb fawb 3,4 .
Lub hom phiaj ntawm txoj kev tshawb no yog siv cov synchrotron PB-PCXI kom pom cov kev txav hauv vivo ntawm cov MPs nyob rau hauv lub trachea ntawm cov nas nyob.Cov kev tshawb fawb PB-PCXI no tau tsim los sim ntau yam ntawm MPs, magnetic fields, thiab cov chaw los txiav txim lawv cov txiaj ntsig ntawm MP kev txav mus los. area.Cov kev tshawb fawb no kuj tau tso cai rau peb txheeb xyuas cov kev teeb tsa hlau nplaum uas ua kom muaj pes tsawg tus ntawm cov khoom khaws cia hauv trachea tom qab tso tawm.Nyob rau hauv ob txoj kev tshawb fawb, peb tau nrhiav kev siv qhov zoo tshaj plaws configuration los ua kom pom cov qauv hloov pauv uas tshwm sim los ntawm vivo xa ntawm LV-MPs mus rau nas airway, raws li qhov kev xav ntawm LV-txoj kev xa khoom ntawm huab cua. txhim kho LV transduction efficiency.
Txhua qhov kev tshawb fawb tsiaj tau ua raws li cov txheej txheem pom zoo los ntawm University of Adelaide (M-2019-060 thiab M-2020-022) thiab SPring-8 Synchrotron Animal Ethics Committee.Cov kev sim tau ua raws li ARRIVE cov lus qhia.
Tag nrho cov duab xoo hluav taws xob tau ua tiav ntawm BL20XU beamline ntawm SPring-8 synchrotron hauv Nyij Pooj, siv kev teeb tsa zoo ib yam li tau piav qhia yav dhau los 21,22.Liab, lub thawv sim tau nyob ntawm 245 m los ntawm synchrotron cia nplhaib.A qauv-rau-tus ntsuas qhov deb ntawm 0.6 maging im 3 cov kev tshawb fawb p. Tsim kom muaj qhov sib txawv ntawm cov teebmeem.A monochromatic beam zog ntawm 25 keV tau siv.Cov duab tau ntes tau siv lub teeb pom kev zoo X-ray converter (SPring-8 BM3) txuas mus rau sCMOS detector.Lub converter hloov X-rays rau pom lub teeb uas siv 10 µm tuab scintillator (Gd3O1CMOS), uas yog siv lub sensor 10 µm × CMOS directedGa. 10 lub hom phiaj microscope (NA 0.3).Lub sCMOS ntes yog Orca-Flash4.0 (Hamamatsu Photonics, Nyiv) nrog qhov loj me ntawm 2048 × 2048 pixels thiab cov pixel loj ntawm 6.5 × 6.5 µm.Qhov kev teeb tsa no ua rau muaj txiaj ntsig zoo ntawm isotropic pixel ntawm 1 mm. 1.1 mm.Ib qhov ntev ntawm 100 ms raug xaiv los ua kom lub teeb liab-rau-lub suab sib piv ntawm cov khoom sib nqus sab hauv thiab sab nraud ntawm txoj hlab pa thaum txo qis ua pa-induced motion artifacts.Rau nyob rau hauv vivo kev tshawb fawb, X-ray shutter ceev tau muab tso rau hauv txoj kev X-ray kom txwv tsis pub siv hluav taws xob los ntawm kev thaiv cov khoom siv hluav taws xob.
Lub LV cab kuj tsis tau siv nyob rau hauv ib qho kev tshawb fawb SPring-8 PB-PCXI imaging chamber vim BL20XU imaging chamber tsis Biosafety Level 2 certified.Tshwj xeeb, peb xaiv ntau yam MPs zoo los ntawm ob tus neeg muag khoom lag luam - npog ntau qhov ntau thiab tsawg, cov ntaub ntawv, cov khoom siv hlau, thiab kev nkag siab txog li cas, thiab cov iav first nyob rau hauv cov pa cua. nyob rau saum npoo.MPs muaj qhov loj ntawm 0.25 mus rau 18 μm thiab yog tsim los ntawm ntau yam khoom siv (saib Table 1), tab sis qhov muaj pes tsawg leeg ntawm txhua tus qauv, nrog rau qhov loj ntawm cov hlau nplaum nyob hauv MP, tsis paub.Raws li peb cov kev tshawb fawb MCT uas nws kim heev 19, 20, 21, 23, 24μm, peb tuaj yeem pom me me raws li qhov xav tau ntawm MP. nto, piv txwv li los ntawm kev rho tawm cov thav duab sib law liag kom pom kev pom tau zoo ntawm MP tsab ntawv tsa suab.Ib qho 0.25 μm-qhov loj MP yog me dua qhov kev daws teeb meem ntawm cov duab, tab sis PB-PCXI yuav tsum kuaj xyuas lawv qhov sib txawv ntawm qhov sib txawv thiab cov lus tsa suab ntawm cov kua dej uas lawv tau tso tom qab tso tawm.
Cov qauv rau txhua tus MP hauv Table 1 tau npaj rau hauv 20 μl iav capillaries (Drummond Microcaps, PA, USA) nrog ib txoj kab uas hla ntawm 0.63 mm.Corpuscular particles muaj nyob rau hauv dej, thaum CombiMag hais muaj nyob rau hauv cov chaw tsim tshuaj paus cov khoom muaj kuab paug.Txhua lub raj yog ib nrab ntim cov kua (approximate μl) muab tso rau hauv cov qauv 1s (approximate) Daim duab 1).Cov iav capillaries tau muab tso rau kab rov tav ntawm cov qauv theem hauv lub thawv duab, raws li, thiab tso cov npoo ntawm cov kua dej.A 19 hli txoj kab uas hla (28 hli ntev) npib tsib xee plhaub tsis tshua muaj lub ntiaj teb neodymium hlau boron (NdFeB) hlau nplaum (N35, cat. no. LM1652, Jaycarization of Australia, Electronic magnet) Tesla tau txuas mus rau ib theem kev txhais lus cais kom ua tiav Hloov nws txoj hauj lwm nyob deb thaum lub sij hawm imaging.X-ray duab nrhiav tau pib thaum cov hlau nplaum nyob ze li ntawm 30 mm saum cov qauv, thiab cov duab tau txais ntawm tus nqi ntawm 4 thav duab ib ob.Lub sijhawm ua duab, cov hlau nplaum tau coj los ze rau lub iav capillary raj (kwv yees li 1 hli lub raj ntawm qhov cuam tshuam) thiab tom qab ntawd muab lub zog raws li txoj hauj lwm.
Nyob rau hauv vitro imaging teeb uas muaj MP cov qauv nyob rau hauv iav capillaries ntawm tus qauv xy txhais theem.
Thaum lub in vitro pom ntawm MPs tau tsim, ib pawg ntawm lawv tau sim hauv vivo hauv cov tsiaj qus albino Wistar nas (~12 lub lis piam, ~ 200 g). (Vetorphale®, Meiji Seika) Cov nas tsuag tau muab tshuaj loog nrog kev sib xyaw ntawm Pharma), Nyiv) los ntawm kev txhaj tshuaj intraperitoneal.Tom qab tshuaj loog, lawv tau npaj rau kev tshuaj xyuas los ntawm kev tshem tawm cov plaub nyob ib ncig ntawm lub trachea, ntxig rau lub raj endotracheal (ET; 16 Ga iv cannula, Terumo BCT) thiab kev cai rau lawv. Muaj lub hnab thermal los tswj lub cev kub 22. Qhov kev kuaj phaj txuas rau hauv lub cim kos duab nyob rau hauv lub trachea kab rov tav, raws li qhia hauv daim duab 2a.
(a) Nyob rau hauv vivo imaging setup nyob rau hauv lub SPring-8 imaging box, txoj kev ntawm lub X-ray beam yog cim nrog ib tug liab dashed kab.(b,c) Magnet localization ntawm lub trachea tau ua remotely siv ob orthogonally mounted IP koob yees duab.Ntawm sab laug ntawm lub screen duab, lub xaim voj uas tuav lub taub hau ntawm tus me nyuam tuaj yeem pom, thiab lub taub hau tuaj yeem pom.
Lub twj tso kua mis tswj chaw taws teeb (UMP2, Ntiaj Teb Precision Instruments, Sarasota, FL) siv 100 μl iav syringe tau txuas nrog PE10 tubing (OD 0.61 mm, ID 0.28 mm) ntawm 30 Ga koob.Mus lub raj kom paub meej tias lub taub hau yog nyob rau hauv txoj hauj lwm trache ET. micropump, lub syringe plunger raug rho tawm thaum lub taub hau ntawm lub raj yog immersed nyob rau hauv MP qauv yuav tsum tau xa.Lub loaded tube ces muab tso rau hauv lub endotracheal raj, muab lub taub hau nyob rau hauv lub zog tshaj qhov peb xav tau thov magnetic teb.Image acquisition yog tswj siv ib tug respiration detector, tag nrho cov sij hawm respiration box, respiration thiab respiration box. shutter qhib / kaw thiab cov duab tau txais) tau sau tseg siv Powerlab thiab LabChart (AD Instruments, Sydney, Australia) 22. Thaum thaij duab Thaum lub kaw lus tsis siv tau, ob lub koob yees duab IP (Panasonic BB-SC382) tau muab tso rau ntawm kwv yees li 90 ° rau ib leeg thiab tau siv los saib xyuas txoj haujlwm ntawm cov hlau nplaum thaum lub sij hawm trachea. 2b,c). Yuav kom txo qis cov khoom siv dag zog, ib daim duab tau txais ib qho pa thaum lub sijhawm kawg-tidal ntws toj siab.
Ib lub hlau nplaum txuas mus rau theem thib ob uas tuaj yeem nyob deb ntawm sab nraud ntawm cov duab vaj tsev.Ntau yam hlau nplaum txoj haujlwm thiab kev teeb tsa tau raug sim, suav nrog: Mounted ntawm lub kaum sab xis ntawm kwv yees li 30 ° saum lub trachea (cov duab qhia hauv daim duab 2a thiab 3a); ib lub hlau nplaum saum toj no tus tsiaj thiab lwm yam hauv qab no, nrog cov ncej teeb kom nyiam (Daim duab 3b ); ib lub hlau nplaum saum tus tsiaj thiab lwm yam hauv qab no, nrog rau cov ncej teeb tsa kom tawm tsam (Daim duab 3c); thiab ib lub hlau nplaum saum toj no thiab perpendicular mus rau trachea (Daim duab 3d).Thaum tus tsiaj thiab hlau nplaum raug teeb tsa thiab MP yuav tsum tau kuaj yog loaded rau hauv lub syringe twj tso kua mis, xa ib 50 μl koob tshuaj ntawm tus nqi ntawm 4 μl / sec thaum tau txais dluab.Cov hlau nplaum yog ces tsiv rov qab mus rau trachea los yog tom qab dluab.
Magnet configuration for in vivo imaging (a) ib leeg hlau nplaum saum lub trachea ntawm lub kaum sab xis ntawm kwv yees li 30 °, (b) ob lub hlau nplaum teem rau nyiam, (c) ob lub hlau nplaum teem rau repel, (d) ib qho hlau nplaum saum toj no thiab perpendicular nyob rau hauv lub trachea.Tus soj ntsuam saib ntawm lub qhov ncauj mus rau lub ntsws los ntawm lub trachea thiab sab laug, sab xis.Cov hlau nplaum yog txav raws qhov ntev ntawm txoj hlab pa los yog sab laug thiab sab xis saum lub trachea nyob rau hauv cov kev taw qhia ntawm lub X-ray beam.
Peb kuj tau nrhiav kev txiav txim siab txog kev pom thiab tus cwj pwm ntawm cov kab mob hauv cov hlab ntsws thaum tsis muaj qhov ua tsis taus pa thiab lub plawv dhia.Yog li ntawd, thaum kawg ntawm lub sijhawm thaij duab, cov tsiaj raug tua tib neeg rau pentobarbital overdose (Somnopentil, Pitman-Moore, Washington Hla, Tebchaws USA; ~ 65 mg/kg ib zaug ua pa thiab ip ). Lub plawv dhia nres, cov txheej txheem rov ua dua, ntxiv ib koob ntxiv ntawm MP yog tias tsis muaj MP pom nyob rau ntawm txoj hlab pa.
Cov duab uas tau txais tau yog tiaj tiaj thiab tsaus-tsav tau kho thiab tom qab ntawd sib sau ua yeeb yaj kiab (20 thav duab ib ob; 15-25 × ib txwm ceev nyob ntawm qhov ua pa) siv cov ntawv sau hauv MATLAB (R2020a, The Mathworks).
Tag nrho cov LV gene vector xa cov kev tshawb fawb tau ua nyob rau hauv Laboratory Animal Research Facility ntawm University of Adelaide thiab tsom siv cov txiaj ntsig ntawm SPring-8 kev sim los ntsuam xyuas seb LV-MP tus me nyuam nyob rau hauv lub xub ntiag ntawm cov hlau nplaum tuaj yeem txhim kho cov noob hloov hauv vivo.To soj ntsuam cov teebmeem ntawm MP thiab magnetic teb, ob pawg tsiaj raug kho: ib pab pawg tswj hwm tau txais LV pawg. LV-MP tsis muaj hlau nplaum.
LV gene vectors tau tsim los siv cov kev piav qhia yav dhau los 25, 26 .Lub LacZ vector qhia txog cov noob nuclei-localized beta-galactosidase uas tau tsav los ntawm tus tsim MPSV txhawb nqa (LV-LacZ), uas ua rau cov khoom siv xiav cov tshuaj tiv thaiv hauv cov hlwb hloov pauv, pom nyob rau hauv lub ntsws cov ntaub so ntswg fronts thiab phau ntawv cov ntaub so ntswg nyob rau hauv countcitration. Cov hlwb zoo nrog lub hemocytometer los xam cov titer hauv TU / ml.Cov neeg nqa khoom yog cryopreserved ntawm -80 ° C, thawed ua ntej siv, thiab khi rau CombiMag los ntawm kev sib tov ntawm 1: 1 piv thiab incubating rau dej khov rau yam tsawg 30 feeb ua ntej xa.
Ib txwm Sprague Dawley nas (n = 3 / pab pawg, ~ 2-3 tau tshuaj loog intraperitoneally nrog kev sib xyaw ntawm 0.4 mg / kg medetomidine (Domitor, Ilium, Australia) thiab 60 mg / kg ketamine (Ilium, Australia) lub hli-laus) ip) thiab tsis yog phais rau qhov kev txhaj tshuaj 6. tracheal airway cov ntaub so ntswg tau txais LV transduction, nws yog conditioned siv peb yav tas los piav mechanical perturbation raws tu qauv, nyob rau hauv uas lub tracheal airway nto yog rubbed axially nrog ib tug hlau pob tawb (N-Circle, Nitinol Tipless Stone Extractor NTSE-022115) -UDH, Cook Medical, USA) 30 Tracheal kev nyab xeeb kev ua hauj lwm nyob rau hauv lub US txee kwv yees li 10 feeb tom qab perturbation.
Cov hlau nplaum siv nyob rau hauv qhov kev sim no tau teeb tsa zoo ib yam li hauv vivo X-ray imaging txoj kev tshawb fawb, nrog tib cov hlau nplaum tuav saum lub trachea siv distillation stent clips (Daim duab 4).A 50 μl ntim (2 × 25 μl aliquots) ntawm LV-MP tau xa mus rau hauv cov trachea cov tsiaj nyeg (n = 3 lub taub hau) Cov pab pawg tswj hwm (n = 3 tsiaj) tau txais tib lub LV-MPs yam tsis tas siv cov hlau nplaum.Tom qab qhov kev txhaj tshuaj tiav lawm, cov cannula raug tshem tawm ntawm lub raj ET thiab cov tsiaj yog extubated. Cov hlau nplaum tseem nyob rau hauv qhov chaw rau 10 feeb, ces nws raug tshem tawm.Rats tau txais subcutaneous koob tshuaj meloxicam (1 ml / kg ntawm Australia) ua raws li los ntawm Australia. ip txhaj tshuaj ntawm 1 mg/kg atipamazole hydrochloride (Antisedan, Zoetis, Australia). Cov nas tsuag tau sov so thiab saib xyuas kom txog thaum rov zoo los ntawm kev siv tshuaj loog.
LV-MP cov khoom xa tuaj rau hauv lub txee rau kev nyab xeeb.Lub teeb grey Luer hub ntawm ET raj tuaj yeem pom tawm ntawm lub qhov ncauj thiab cov gel taub ntawm lub pipette uas pom hauv daim duab yog ntxig los ntawm ET raj mus rau qhov xav tau qhov tob rau hauv lub trachea.
Ib lub lis piam tom qab LV-MP dosing txheej txheem, tsiaj txhu raug tua tib neeg los ntawm 100% CO2 inhalation thiab LacZ qhia tau soj ntsuam siv peb tus qauv X-gal kev kho mob.Qhov peb caudal feem ntau cartilaginous rings raug tshem tawm kom ntseeg tau tias txhua yam kev puas tsuaj los yog cov kua dej tuav los ntawm endotracheal raj tso rau hauv qhov kev tshuaj ntsuam. mounted nyob rau hauv ib lub tais uas muaj silicone roj hmab (Sylgard, Dow Inc) siv ib rab koob Minutien (Cov Cuab Yeej Siv Zoo) kom pom cov luminal nto.Qhov kev faib tawm thiab cov qauv ntawm cov hlwb hloov tau raug lees paub los ntawm kev yees duab pem hauv ntej siv Nikon microscope (SMZ1500) nrog lub koob yees duab DigiLite thiab TCapture software (Tucquire magnification ntawm 2000) hauv Suav teb. qhov chaw siab tshaj plaws rau tag nrho qhov dav ntawm lub trachea), nrog rau tag nrho qhov ntev ntawm lub trachea imaged step-by-step, kom muaj kev sib tshooj txaus ntawm txhua daim duab kom tso cai rau cov duab "stitching".Images los ntawm txhua lub trachea tau sib sau ua ke rau hauv ib qho duab sib xyaw siv Image Composite Editor v2.0.3 (Microsoft Research) siv cov phiaj xwm kev sib txuas ntawm cov kev qhia. trachea los ntawm txhua tus tsiaj tau suav nrog siv MATLAB tsab ntawv automated (R2020a, MathWorks) raws li tau piav qhia yav dhau los, siv qhov chaw ntawm 0.35
Txhua lub trachea tau muab tso rau hauv paraffin thiab 5 μm ntu raug txiav.Cov ntu tau suav nrog nruab nrab nrawm nrawm rau 5 min thiab cov duab tau txais los ntawm Nikon Eclipse E400 microscope, DS-Fi3 lub koob yees duab thiab NIS lub caij ntes software (version 5.20.00).
Tag nrho cov kev txheeb xyuas txheeb cais tau ua tiav hauv GraphPad Prism v9 (GraphPad Software, Inc.) Qhov tseem ceeb ntawm Statistical tau teeb tsa ntawm p ≤ 0.05.Normality tau txheeb xyuas siv Shapiro-Wilk test, thiab qhov sib txawv ntawm LacZ staining tau soj ntsuam siv qhov tsis muaj kev sib tw t-test.
Lub rau MPs tau piav qhia hauv Table 1 tau tshuaj xyuas siv PCXI, thiab qhov pom tau tau piav qhia hauv Table 2.Ob lub polystyrene MPs (MP1 thiab MP2; 18 μm thiab 0.25 μm, feem) tsis pom nyob hauv PCXI, tab sis cov qauv seem tau txheeb xyuas tau 5 MP (piv txwv li, MP4 thiab piv txwv). (10-15% Fe3O4; 0.25 μm thiab 0.9 μm, ntsig txog) yog faintly pom.Txawm hais tias muaj qee qhov me me uas tau sim, MP5 (98% Fe3O4; 0.25 μm) yog cov lus tshaj tawm.Cov CombiMag cov khoom muaj peev xwm txhim kho MP6 tag nrho yog ib qho nyuaj rau peb cov ntaub ntawv. Thaum cov hlau nplaum txav deb ntawm lub capillary, cov khoom txuas mus rau hauv cov hlua ntev, tab sis raws li cov hlau nplaum tau los ze zog thiab cov hlau nplaum muaj zog ntxiv, cov hlua cov hlua luv luv vim cov khoom txav mus rau sab saum toj ntawm lub capillary (saib Ntxiv Video S1: MP4 deg ). tshem tawm ntawm lub capillary, lub zog teb txo qis thiab MPs rearrange rau hauv cov hlua ntev ntev los ntawm sab sauv ntawm lub capillary (saib Ntxiv Video S2: MP4). Tom qab cov hlau nplaum tsis txav, cov khoom txuas ntxiv mus rau ib lub sij hawm luv luv tom qab ncav cuag qhov sib npaug.Raws li MP txav mus rau thiab deb ntawm cov khoom seem ntawm lub capillary sab saum toj. kua dej.
Lub visibility ntawm MP nyob rau hauv PCXI sib txawv ntawm cov qauv.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 thiab (d) MP6.Tag nrho cov duab qhia ntawm no tau coj nrog ib tug hlau nplaum nyob kwv yees li 10 hli ncaj nraim saum lub capillary.Cov voj voog loj yog cov pa npuas nyob rau hauv lub capillaries, kom meej meej qhia cov xim dub thiab dawb ntug contracing cov theem ntawm contraindications. magnification.Nco ntsoov tias cov diameters ntawm cov hlau nplaum schematics nyob rau hauv tag nrho cov duab tsis yog scale thiab yog kwv yees li 100 npaug loj dua li qhia.
Raws li cov hlau nplaum tau txhais sab laug thiab sab xis nyob rau sab saum toj ntawm lub capillary, lub kaum sab xis ntawm MP txoj hlua hloov mus ua kom haum nrog cov hlau nplaum (saib daim duab 6), yog li delineating cov kab hlau nplaum sib nqus.Rau MP3-5, tom qab lub chord ncav cuag lub kaum ntse ntse, cov khoom raug rub los ntawm sab saum toj ntawm cov hlau nplaum. Supplementary Video S3:MP5).Qhov no kuj yog tshwj xeeb tshaj yog tshwm sim thaum imaging ze rau ntawm lub capillary kawg, uas ua rau MPs mus aggregate thiab mloog zoo ntawm cov kua-air interface.Particles nyob rau hauv MP6, uas yog nyuaj rau discern tshaj MP3-5, twb tsis dragged raws li cov hlau nplaum tsiv raws lub capillary, tab sis cov MP cov hlua ntawm cov particles tawm hauv cov yeeb yaj duab dissociated. S4:MP6).Rau qee qhov, thaum cov hlau nplaum siv tau raug txo los ntawm kev txav cov hlau nplaum kom deb ntawm qhov chaw pom, txhua tus MPs uas tseem tshuav maj mam nqis mus rau hauv qab ntawm lub raj los ntawm lub ntiajteb txawj nqus thaum nyob hauv txoj hlua (saib Ntxiv Video S5: MP3).
Lub kaum sab xis ntawm MP txoj hlua hloov pauv raws li cov hlau nplaum tau muab txhais rau sab xis saum lub capillary.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 thiab (d) MP6.Lub thawv liab muaj qhov sib piv-txhim kho qhov loj me.Nco ntsoov tias cov yeeb yaj kiab ntxiv yog cov ntaub ntawv vim lawv nthuav tawm cov qauv tseem ceeb thiab cov ntaub ntawv dynamic uas tsis tuaj yeem pom hauv cov duab zoo li no.
Peb cov kev ntsuam xyuas tau pom tias txav cov hlau nplaum maj mam rov qab mus rau hauv lub trachea ua kom pom kev pom ntawm MP nyob rau hauv cov ntsiab lus ntawm txoj kev txav hauv vivo.In vivo kev ntsuam xyuas tsis tau ua raws li cov hlaws polystyrene (MP1 thiab MP2) tsis pom nyob rau hauv capillary.Txhua ntawm plaub MPs ntxiv tau sim hauv vivo nrog cov hlau nplaum ntev ntawm lub kaum sab xis ntawm 0 ° rau kev teeb tsa ntawm lub kaum sab xis. (saib daim duab 2b thiab 3a), vim qhov no tau ua rau MP chains ntev dua thiab ua haujlwm zoo dua li cov hlau nplaum teeb tsa tau txiav tawm.MP3, MP4 thiab MP6 tsis pom nyob rau hauv cov hlab ntsha ntawm cov tsiaj muaj sia.Thaum nas cov kab mob tau pom tom qab cov tsiaj txhu raug tua tib neeg, cov khoom siv tseem tsis tau pom dua cov ntsiab lus MP3 ntxiv txawm tias muaj cov khoom siv hlau oxide ntxiv. thiab tsuas yog qhov pom pom, thiab yog li ntawd tau siv los ntsuas thiab ua tus cwj pwm hauv vivo tus cwj pwm ntawm MP.
Muab cov hlau nplaum hla lub trachea thaum MP xa ua rau muaj ntau, tab sis tsis yog tag nrho, MPs tau concentrated nyob rau hauv qhov chaw ntawm view.Particles nkag mus rau hauv lub trachea yog qhov zoo tshaj plaws pom nyob rau hauv humanely txi rau tsiaj.Daim duab 7 thiab ntxiv Video S6: MP5 qhia tau hais tias sai magnetic capture thiab alignment ntawm particles nyob rau saum npoo ntawm lub ventral trachea ntawm lub siab xav tau nyob rau hauv lub trachea cheeb tsam. trachea.Thaum tshawb nrhiav ntau dua nyob rau hauv lub trachea tom qab MP xa, qee cov MPs tau pom ze rau carina, qhia tias lub zog hlau nplaum tsis txaus los sau thiab khaws tag nrho MPs, raws li lawv tau xa los ntawm thaj tsam ntawm qhov siab tshaj plaws magnetic teb lub zog thaum lub sij hawm cov kua dej. Txawm li cas los xij, postpartum MP concentrations tau siab dua nyob ib ncig ntawm thaj tsam huab cua, uas tau hais tias muaj zog ntau dua nyob rau hauv cov cheeb tsam huab cua. siab tshaj.
Cov duab los ntawm (a) ua ntej thiab (b) tom qab xa MP5 mus rau hauv lub plab ntawm cov nas nyuam qhuav euthanized nrog cov hlau nplaum tso ncaj qha saum thaj chaw duab.Cov duab thaij duab yog nyob nruab nrab ntawm ob lub pob txha pob txha.Ua ntej MP xa, muaj qee cov kua dej hauv txoj hlab pa.Lub thawv liab muaj qhov sib piv-txhim kho MP5 cov duab hauv video.These dluab.
Txhais cov hlau nplaum raws li lub trachea hauv vivo ua rau MPs hloov lub kaum sab xis nyob rau hauv txoj hlab pa hauv qhov chaw zoo ib yam li pom hauv capillaries (saib daim duab 8 thiab Cov Video Ntxiv S7:MP5). Txawm li cas los xij, hauv peb txoj kev tshawb fawb, MPs tsis tuaj yeem rub tawm ntawm txoj hlab pa ntawm txoj hlab pa li lawv tuaj yeem nrog capillaries.Ib txhia ntev dua li cov hlau nplaum, peb yuav tau txais cov hlau nplaum sab laug. pom tias txoj hlua particle zoo nkaus li hloov qhov tob ntawm cov dej saum npoo txheej thaum cov hlau nplaum txav mus ntev raws lub trachea, thiab nthuav dav thaum cov hlau nplaum txav ncaj qha mus rau saum taub hau thiab cov hlua particle yog tig mus rau txoj hauj lwm ntsug (saib Ntxiv Video S7). : MP5 ntawm 0:09, hauv qab sab xis).Cov yam ntxwv ntawm cov lus tsa suab hloov pauv thaum cov hlau nplaum tau muab txhais los ntawm sab saum toj ntawm lub trachea tom qab (uas yog, rau sab laug lossis sab xis ntawm tus tsiaj es tsis yog raws li qhov ntev ntawm lub trachea).Cov khoom tseem pom meej thaum lawv txav mus, tab sis thaum cov hlau nplaum raug tshem tawm ntawm lub trachea, cov lus qhia ntawm ppary 8 yog pom. pib ntawm 0:08).Qhov no yog raws li MP tus cwj pwm peb tau pom nyob rau hauv ib daim ntawv thov magnetic teb nyob rau hauv lub iav capillary.
Piv txwv cov duab uas qhia MP5 nyob rau hauv lub trachea ntawm ib tug nyob anesthetized nas.(a) Cov hlau nplaum yog siv kom tau cov duab saum toj no thiab mus rau sab laug ntawm lub trachea, ces (b) tom qab cov hlau nplaum tsiv mus rau sab xis.Lub thawv liab muaj qhov sib piv-hloov magnification.Cov duab no yog los ntawm cov vis dis aus qhia hauv Ntxiv Video S7:MP
Thaum ob tug ncej tau teeb tsa nyob rau sab qaum teb-sab qab teb kev taw qhia saum toj no thiab hauv qab lub trachea (xws li kev nyiam; daim duab 3b), MP chords tshwm ntev dua thiab nyob rau ntawm phab ntsa ntawm lub trachea es tsis yog nyob rau ntawm lub dorsal tracheal nto (saib Ntxiv Video S9: MP5).Txawm li cas los xij, qhov siab ntawm qhov chaw ntawm qhov chaw tsis yog ib qho ntawm cov particles. kuaj pom tom qab cov dej xa tawm thaum siv cov khoom siv hlau nplaum dual, uas feem ntau tshwm sim thaum siv ib qho khoom siv hlau nplaum.Tom qab ntawd thaum ib lub hlau nplaum tau teeb tsa kom tshem tawm cov ncej thim rov qab (Daim duab 3c), tus naj npawb ntawm cov khoom pom hauv qhov kev pom tsis tshwm sim nce tom qab xa khoom.Qhov teeb tsa ntawm ob qho tib si dual-magnet configuration yog qhov siab tshaj qhov sib nqus ntawm qhov sib nqus los yog lub zog sib nqus sib nqus. Cov hlau nplaum, ntsig txog.Qhov kev teeb tsa tau hloov pauv mus rau ib qho hlau nplaum sib npaug mus rau txoj hlab pa tab sis dhau los ntawm txoj hlab pa ntawm 90 degrees kom cov kab teb hla lub tracheal phab ntsa orthogonally (Daim duab 3d), ib qho kev taw qhia tsim los txiav txim seb puas muaj qhov sib xyaw ua ke ntawm cov phab ntsa sab nrauv tuaj yeem pom .Txawm li cas los xij, hauv qhov kev teeb tsa no tsis muaj qhov sib txawv ntawm qhov sib txawv ntawm qhov sib txawv ntawm MP. txav.Raws li tag nrho cov txiaj ntsig no, ib qho hlau nplaum ib leeg, 30-degree orientation configuration (Daim duab 3a) raug xaiv rau hauv vivo gene carrier kev tshawb fawb.
Thaum tus tsiaj tau rov ua dua tam sim ntawd tom qab tib neeg tua, qhov tsis muaj qhov tsis txaus ntseeg ntawm cov ntaub so ntswg txhais tau hais tias cov kab me me thiab luv dua tuaj yeem pom hauv thaj chaw ntshiab interchondral, "wobbly" nyob rau hauv txoj kab nrog kev txhais lus ntawm cov hlau nplaum. Txawm li cas los xij, tseem tsis tuaj yeem pom meej pom muaj thiab cov lus tsa suab ntawm MP6 hais.
LV-LacZ titer yog 1.8 × 108 TU / ml, thiab tom qab 1: 1 sib xyaw nrog CombiMag MP (MP6), tsiaj tau txais 50 μl tracheal koob tshuaj 9 × 107 TU / ml LV tsheb (ie 4.5 × 106 TU / nas). ). Hauv cov kev tshawb fawb no, es tsis txhob txhais cov hlau nplaum thaum lub sij hawm ua hauj lwm, peb kho cov hlau nplaum nyob rau hauv ib txoj hauj lwm los txiav txim seb LV transduction (a) puas tuaj yeem txhim kho piv rau vector xa hauv qhov tsis muaj qhov sib nqus, thiab (b) tuaj yeem tsom Airway hlwb raug xa mus rau cov phiaj xwm sib nqus ntawm cov pa sab saud.
Lub xub ntiag ntawm cov hlau nplaum thiab kev siv CombiMag ua ke nrog LV vectors tsis tshwm sim muaj kev cuam tshuam rau tsiaj noj qab haus huv, raws li peb tus qauv LV vector xa raws cai.Frontal dluab ntawm cheeb tsam tracheal raug rau cov neeg kho tshuab perturbation (Ntxiv daim duab 1) qhia tias muaj kev hloov pauv ntau dua hauv pawg tsiaj uas tau kho nrog LV-MPa tam sim no). Tus nqi ntawm xiav LacZ staining yog tam sim no nyob rau hauv pawg tswj (Daim duab 9b).Quantification ntawm normalized X-Gal stained cheeb tsam pom tau hais tias kev tswj ntawm LV-MP nyob rau hauv lub xub ntiag ntawm ib tug sib nqus teb ua ib tug kwv yees li 6-fold kev txhim kho (Fig. 9c).
Piv txwv cov duab sib xyaw uas qhia txog kev hloov pauv ntawm cov hlab ntsha los ntawm LV-MP (a) nyob rau hauv lub xub ntiag ntawm lub magnetic teb thiab (b) nyob rau hauv tsis muaj ib tug hlau nplaum.(c) Statistically txhim kho nyob rau hauv normalized LacZ transduction cheeb tsam nyob rau hauv lub trachea thaum siv cov hlau nplaum (* p = 0.029, t-test, n = 3 ib pab pawg neeg), txhais tau tias ± SEM.
Qhov nruab nrab ceev liab-stained seem (piv txwv nyob rau hauv Ntxiv Fig. 2) pom LacZ-stained hlwb tam sim no nyob rau hauv ib tug zoo xws li cov qauv thiab qhov chaw raws li yav tas los qhia.
Ib qho kev sib tw tseem ceeb rau kev kho cov kab mob hauv txoj hlab ntsws tseem yog qhov tseeb hauv cheeb tsam ntawm cov khoom thauj mus rau thaj tsam ntawm kev txaus siab thiab ua tiav qib siab ntawm kev hloov pauv hauv lub ntsws nyob rau hauv lub xub ntiag ntawm airflow thiab active mucus clearance.Rau LV cov cab kuj tsim los kho CF cov kab mob hauv txoj hlab ntsws, nce lub sij hawm nyob ntawm cov khoom nqa khoom hauv cov kev ua pa tawm ntawm lub hom phiaj los ntawm Castella. al., kev siv cov khoom sib nqus los txhim kho kev hloov pauv muaj qhov zoo dua piv rau lwm cov noob xa khoom xws li electroporation, vim nws tuaj yeem ua ke yooj yim, siv tau zoo, kev xa khoom hauv cheeb tsam, nce efficiency, thiab luv luv incubation lub sij hawm, thiab tejzaum nws yog ib tug me me carrier dose10.Txawm li cas los xij, nyob rau hauv vivo deposition thiab tus cwj pwm ntawm cov hlau nplaum sab nraud tsis tau muaj zog nyob rau hauv lub magnetic teb. tau piav qhia, thiab tsis muaj qhov ua tau ntawm txoj kev no tau tshwm sim hauv vivo los txhim kho cov qib qhia cov noob hauv cov pa hauv cov pa.
Peb qhov kev sim hauv vitro synchrotron PCXI tau pom tias txhua qhov peb tau sim, tshwj tsis yog polystyrene MP, tau pom nyob rau hauv cov duab teeb tsa peb siv.Nyob rau hauv lub xub ntiag ntawm ib qho chaw sib nqus, MPs daim ntawv cov hlua uas nws ntev muaj feem xyuam rau hom particle thiab magnetic teb lub zog (xws li kev sib thooj thiab kev txav ntawm cov hlau nplaum). magnetized thiab inducing nws tus kheej hauv zos magnetic teb.Cov kev sib cais no ua rau lwm cov khoom zoo sib xws rau aggregate thiab txuas, nrog pab pawg neeg txoj hlua zoo li cov lus tsa suab vim yog lub zog hauv zos los ntawm lub zos txaus nyiam thiab repulsive rog ntawm lwm yam hais.
Schematic qhia (a,b) particle trains generated in fluid-filled capillaries and (c,d) air-filled trachea.Note that the capillaries and trachea are not drawn to scale.Panel (a) kuj muaj cov lus piav qhia ntawm MP, uas muaj Fe3O4 particles teem rau hauv cov hlua.
Thaum cov hlau nplaum tau txav mus rau saum lub capillary, lub kaum sab xis ntawm txoj hlua particle tau mus txog qhov tseem ceeb ntawm MP3-5 uas muaj Fe3O4, tom qab ntawd cov hlua particle tsis nyob hauv qhov qub, tab sis txav mus rau saum npoo mus rau qhov chaw tshiab.magnet.Cov nyhuv no yuav tshwm sim vim lub iav capillary nto yog du txaus kom tso cai rau qhov kev txav no tshwm sim.Interesting. Tej zaum vim hais tias cov khoom me me, muaj cov coatings sib txawv los yog cov nqi saum npoo, los yog cov khoom thauj khoom muaj peev xwm cuam tshuam rau lawv lub peev xwm txav.Cov duab sib piv ntawm CombiMag hais kuj tsis muaj zog, qhia tias cov kua thiab cov khoom yuav muaj qhov sib xws thiab yog li tsis yooj yim txav mus rau ib leeg.Particles kuj tuaj yeem tau daig yog tias cov hlau nplaum txav tsis tau ntau dhau. Kev sib txhuam ntawm cov khoom hauv cov kua dej, tawm tswv yim tias tej zaum nws tsis yog qhov xav tsis thoob tias qhov sib nqus lub zog thiab qhov kev ncua deb ntawm cov hlau nplaum thiab lub hom phiaj tseem ceeb heev.Koom ua ke, cov txiaj ntsig no kuj qhia tau tias, thaum cov hlau nplaum tuaj yeem ntes tau ntau MPs uas ntws los ntawm lub hom phiaj, nws tsis zoo li cov hlau nplaum tuaj yeem tso siab rau kev txav CombiMag particles raws li qhov kev tshawb fawb ntawm L.V. siv cov hlau nplaum zoo li qub rau lub cev lub cev tsom rau thaj chaw tshwj xeeb ntawm cov ntoo hauv cov hlab cua.
Thaum cov khoom xa tuaj rau hauv lub cev, lawv tsis yooj yim los txheeb xyuas cov ntsiab lus ntawm cov ntaub so ntswg ntawm lub cev, tab sis lub peev xwm los kuaj xyuas lawv tau txhim kho los ntawm kev txhais cov hlau nplaum kab rov tav saum lub trachea rau "wiggle" MP cov hlua.Txawm hais tias nyob imaging yog ua tau, nws yog yooj yim dua rau pom particle motion thaum tus tsiaj tau raug tua tib neeg txoj hauj lwm saum toj no MPet concentration. thaj chaw, txawm hais tias qee qhov feem ntau pom muaj nyob rau hauv trachea.Qhov sib piv rau cov kev tshawb fawb hauv vitro, cov khoom tsis tuaj yeem raug rub los ntawm txoj hlab pas los ntawm kev txhais cov hlau nplaum.Qhov kev tshawb pom no zoo ib yam li cov hnoos qeev uas coats saum npoo ntawm lub trachea feem ntau ua cov khoom nqus tau pa, ntxiab rau hauv cov hnoos qeev thiab tom qab tshem tawm cov muciliary.
Peb xav tias kev siv cov hlau nplaum rau kev nyiam nyob rau saum toj thiab hauv qab lub trachea (Daim duab 3b) yuav ua rau muaj qhov sib nqus sib nqus ntau dua, ntau dua li cov hlau nplaum sib nqus uas muaj zog heev ntawm ib qho, uas ua rau muaj kev faib tawm ntau dua ntawm cov particles.Txawm li cas los xij, peb qhov kev tshawb fawb ua ntej tsis pom cov pov thawj tseeb los txhawb qhov kev xav no. Zoo li ib khub ntawm cov hlau nplaum tsis sib xws. nyob rau hauv ntau particle deposition nyob rau hauv lub imaged cheeb tsam.Cov ob qhov kev tshawb pom no qhia tau hais tias lub dual-magnet teeb tsis ho txhim kho lub zos tswj ntawm MP lub hom phiaj, thiab cov resulting muaj zog sib nqus rog yog ib qho nyuaj rau configure, ua rau txoj kev no tsis tshua muaj tswv yim.Ib yam zoo li, orienting cov hlau nplaum saum toj no thiab los ntawm cov trachea (daim duab 3d. ntawm thaj tsam retained) kuj tseem tsis tau nce cov duab hauv cheeb tsam. Lwm qhov kev teeb tsa yuav tsis ua tiav vim tias lawv ua rau qis qis hauv qhov chaw sib nqus hauv cheeb tsam deposition.Yog li ntawd, ib qho 30-degree lub kaum sab xis hlau nplaum configuration (Daim duab 3a) yog suav tias yog txoj kev yooj yim tshaj plaws thiab muaj txiaj ntsig zoo tshaj plaws rau hauv vivo kuaj.
Txoj kev tshawb fawb LV-MP tau pom tias thaum LV vectors tau koom ua ke nrog CombiMag thiab xa tom qab lub cev muaj kev cuam tshuam nyob rau hauv lub xub ntiag ntawm magnetic teb, transduction theem tau nce siab nyob rau hauv lub trachea piv rau kev tswj.Raws li synchrotron imaging kev tshawb fawb thiab LacZ tau, lub magnetic teb tau pom meej muaj peev xwm khaws cia LV nyob rau hauv lub trachea cov lej tam sim ntawd thiab cov kab mob sib nqus. Lub ntsws.Qhov kev txhim kho lub hom phiaj no tuaj yeem ua rau muaj kev ua tau zoo dua thaum txo cov khoom xa tawm, kev hloov pauv ntawm lub hom phiaj, kev mob tshwm sim thiab kev tiv thaiv kab mob, thiab cov nqi nqa cov noob caj noob ces.Qhov tseem ceeb, raws li cov chaw tsim khoom, CombiMag tuaj yeem siv ua ke nrog lwm txoj hauv kev hloov cov noob, nrog rau lwm cov kab mob viral (xws li AAV) thiab nucleic acid.
Post lub sij hawm: Lub Xya hli ntuj-16-2022
