Nature.com saytiga tashrif buyurganingiz uchun tashakkur. Siz foydalanayotgan brauzer versiyasi CSS-ni cheklangan darajada qo‘llab-quvvatlaydi. Eng yaxshi tajriba uchun yangilangan brauzerdan foydalanishni tavsiya qilamiz (yoki Internet Explorer-da moslik rejimini o‘chirib qo‘ying). Ayni paytda qo‘llab-quvvatlashning davom etishini ta’minlash uchun biz saytni uslublar va JavaScript-larsiz ko‘rsatamiz.
Mukovistsidozni o'pka kasalligini davolash uchun gen vektorlari o'tkazuvchi havo yo'llariga qaratilgan bo'lishi kerak, chunki o'pkaning periferik transduktsiyasi terapevtik foyda keltirmaydi. Virusli transduksiya samaradorligi vektorning yashash vaqtiga bevosita bog'liq. Biroq, gen tashuvchisi kabi etkazib berish suyuqliklari nafas olish paytida alveolalarga tabiiy ravishda tarqaladi va har qanday zarrachalar zarrachalari bilan tiniq shaklda bo'ladi. Transport.Gen tashuvchilarning havo yoʻllarida boʻlish vaqtini uzaytirish muhim, ammo bunga erishish qiyin. Nafas yoʻllari yuzasiga yoʻnaltirilishi mumkin boʻlgan gen tashuvchisi bilan konjugatsiyalangan magnit zarralar mintaqaviy maqsadlilikni yaxshilashi mumkin. In vivo vizualizatsiyaning qiyinchiliklari tufayli bunday kichik magnit zarrachalarning havo yoʻllari yuzasidagi xatti-harakatlari magnit maydonining mavjudligida yomon tadqiq qilingan. In vivo jonli ravishda individual va ommaviy zarrachalar harakatining dinamikasi va naqshlarini o'rganish uchun anesteziya qilingan kalamushlarning traxeyasidagi bir qator magnit zarrachalarining in vivo harakatini vizualizatsiya qilish uchun sinxrotronli tasvirlash. Keyin biz magnit maydon mavjudligida lentiviral magnit zarrachalarni etkazib berish transductionrachray.-S traxeya rentgenogramma samaradorligini oshiradimi yoki yo'qligini ham baholadik. in vitro va in vivo sharoitda statsionar va harakatlanuvchi magnit maydonlarda magnit zarrachalarning harakatini ochib beradi. Zarrachalarni magnitlar yordamida tirik havo yoʻli yuzasi boʻylab osongina sudrab boʻlmaydi, lekin tashish paytida choʻkindilar magnit maydon eng kuchli boʻlgan koʻrish maydonida toʻplanadi. Oʻtkazuvchanlik samaradorligi, shuningdek, lentiviral zarrachalar magnit maydonida magnitlangan magnit maydonning borligi ham olti barobar oshdi. bu natijalar lentiviral magnit zarralari va magnit maydonlari gen vektorini nishonlashni yaxshilash va in vivo jonli ravishda havo yo'llarini o'tkazishda transduksiya darajasini oshirish uchun qimmatli yondashuvlar bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi.
Kistik fibroz (KF) CF transmembran o'tkazuvchanlik regulyatori (CFTR) deb ataladigan bitta genning o'zgarishi natijasida yuzaga keladi. CFTR oqsili ion kanali bo'lib, u butun tanadagi ko'plab epiteliya hujayralarida, shu jumladan o'tkazuvchi havo yo'llari, CF patogenezining asosiy joyidir. (ASL) qatlami. Bu, shuningdek, shilliq qavatli transport (MCT) tizimining nafas olish yo'llaridan nafas oladigan zarralar va patogenlarni tozalash qobiliyatini buzadi. Bizning maqsadimiz CFTR genining to'g'ri nusxasini etkazib berish va ASL, MCT va o'pka sog'lig'ini yaxshilash uchun lentiviral (LV) gen terapiyasini ishlab chiqish va bu yangi texnologiyalarni ishlab chiqishda davom etishdir.
LV vektorlari CF havo yo'li gen terapiyasi uchun etakchi nomzodlardan biri hisoblanadi, chunki ular terapevtik genni havo yo'llarining bazal hujayralariga (nafas yo'llarining ildiz hujayralari) doimiy ravishda integratsiyalashlari mumkin. Bu juda muhim, chunki ular funktsional gen bilan tuzatilgan CF bilan bog'liq bo'lgan nafas yo'llarining hujayralariga to'g'ridan-to'g'ri differensiallash orqali normal hidratsiya va shilliq klirensni tiklashi mumkin. havo yo'llari, chunki bu erda CF o'pka kasalligi boshlanadi. Vektorning o'pkaga chuqurroq kirib borishi alveolyar transduksiyaga olib kelishi mumkin, ammo bu CFda terapevtik foyda keltirmaydi. Biroq, gen tashuvchisi kabi suyuqliklar tug'ilgandan so'ng nafas olish paytida tabiiy ravishda alveolalarga ko'chiriladi3,4 va terapevtik zarrachalar MVLV ga tez o'tadi. samaradorlik vektorning hujayraning so'rilishini ta'minlash uchun maqsadli hujayralar yonida qoladigan vaqtga bevosita bog'liqdir - "yashash vaqti"5 - bu odatiy mintaqaviy havo oqimi, shuningdek muvofiqlashtirilgan zarracha shilliqqoni ushlash va MCT bilan osonlik bilan kamayadi. CF uchun, LV ning havo yo'li ichidagi yashash vaqtini uzaytirish qobiliyati bu mintaqada transduksiyaning yuqori darajasiga erishish uchun muhim, ammo hozirgacha challen.
Ushbu to'siqni bartaraf etish uchun biz LV magnit zarralari (MP) bir-birini to'ldiruvchi ikkita usulda yordam berishi mumkinligini taklif qilamiz.Birinchidan, ular nishonni yaxshilash va gen tashuvchisi zarrachalarining kerakli havo yo'li hududida yashashiga yordam berish uchun havo yo'li yuzasiga magnit yo'naltirilishi mumkin; va ASL) hujayra qatlamiga o'tish uchun 6.MP lar antikorlar, kimyoterapevtik preparatlar yoki hujayra membranalari bilan bog'langan yoki tegishli hujayra yuzasi retseptorlari bilan bog'langan va statik elektr borligida o'simta joylarida to'plangan boshqa kichik molekulalar bilan bog'langanda maqsadli dori vositalari sifatida keng qo'llanilgan. Saratonni davolash uchun magnit maydonlar 7. Boshqa "gipertermik" usullar MPlarni tebranuvchi magnit maydonlar ta'sirida qizdirishga va shu bilan o'simta hujayralarini yo'q qilishga qaratilgan. Magnit transfeksiya printsipi, bunda magnit maydon DNKning hujayralarga o'tkazilishini kuchaytirish uchun transfeksiya agenti sifatida ishlatiladi, odatda in vitroviral va vektor bo'lmagan genlar diapazonidan foydalaniladi. qiyin transduktsiyali hujayra liniyalari. LV magnitotransfektsiyasining samaradorligi aniqlandi, LV-MPlarni statik magnit maydon mavjudligida inson bronxial epitelial hujayra chizig'iga in vitro etkazib berish, transduktsiya samaradorligini faqat LV vektoriga nisbatan 186 marta oshirish. CF balg'ami ishtirokida havo-suyuqlik interfeysi madaniyatini 20 baravar oshiradi.10. Biroq, in vivo organlarning magnit o'tkazuvchanligiga nisbatan kam e'tibor berilgan va faqat bir nechta hayvonlar tadqiqotlarida baholangan11,12,13,14,15, ayniqsa o'pkada16,17. Shunga qaramay, CF va magnetik transfeksiya uchun aniq imkoniyatlar mavjud. al.(2020) ta'kidlaganidek, "samarali magnit nanopartikullarni o'pka orqali etkazib berish bo'yicha kontseptsiyani isbotlovchi tadqiqot CF bemorlarida klinik natijalarni yaxshilash uchun kelajakdagi CFTR inhalatsiya strategiyalariga yo'l ochadi"6.
Amaldagi magnit maydon mavjud bo'lganda havo yo'llari yuzasida kichik magnit zarralarning harakatini tasavvur qilish va o'rganish qiyin va shuning uchun kam tushuniladi. Boshqa tadqiqotlarda biz sinxrotron tarqalishiga asoslangan faza-kontrastli rentgen tasvirini (PB-PCXI) invaziv bo'lmagan holda vizualizatsiya qilish va ASL de 18 daqiqada o'zgarishlarni va miqdorini aniqlash uchun ishlab chiqdik. gaz kanali sirtining hidratsiyasini o'lchash va davolash samaradorligining dastlabki ko'rsatkichi sifatida ishlatiladi. Bundan tashqari, bizning MCT baholash usulimiz PB-PCXI21 yordamida ko'rinadigan MCT markerlari sifatida alumina oksidi yoki yuqori sinishi indeksli shishadan tashkil topgan 10-35 mikron diametrli zarrachalardan foydalanadi. Har ikki usul ham MP zarrachalari diapazonini ko'rish uchun mos keladi.
Yuqori fazoviy va vaqtinchalik ruxsati tufayli PB-PCXI-ga asoslangan ASL va MCT tahlil usullarimiz MP genini etkazib berish texnikasini tushunish va optimallashtirishga yordam berish uchun in vivo jonli ravishda bitta va ommaviy zarrachalar harakati dinamikasi va naqshlarini o'rganish uchun juda mos keladi. Biz bu erda qo'llagan yondashuv SPring-8 BL20B2 yordamida o'tkazgan tadqiqotlarimizdan kelib chiqadi. sichqonlarning o'pka havo yo'llari bizning gen tashuvchisi dozasi hayvonlarni o'rganishda kuzatilgan bir xil bo'lmagan gen ekspresyon naqshlarini tushuntirishga yordam beradi 3,4.
Ushbu tadqiqotning maqsadi PB-PCXI sinxrotronidan foydalanib, tirik kalamushlar traxeyasida bir qator MPlarning in vivo harakatlarini vizualizatsiya qilish edi. Ushbu PB-PCXI tasvirlash tadqiqotlari MP harakatiga ta'sirini aniqlash uchun bir qator MPlar, magnit maydon kuchlari va joylashuvini sinab ko'rish uchun mo'ljallangan. Ushbu tadqiqotlar, shuningdek, cho'kishdan keyin traxeyada saqlanib qolgan zarrachalar sonini maksimal darajada oshiradigan magnit konfiguratsiyalarini aniqlashga imkon berdi. Ikkinchi qator tadqiqotlarda biz LV-MP havo yo'liga LV-MP havo yo'lini havo yo'li orqali etkazib berish maqsadga muvofiq bo'ladi degan taxminga asoslanib, in vivo jonli ravishda LV-MP ning kalamush havo yo'liga yetkazilishi natijasida hosil bo'lgan transduksiya modelini ko'rsatish uchun foydalanishga harakat qildik. transduktsiya samaradorligi.
Hayvonlar bo‘yicha barcha tadqiqotlar Adelaida universiteti (M-2019-060 va M-2020-022) va SPring-8 Sinxrotron hayvonlar etikasi qo‘mitasi tomonidan tasdiqlangan protokollarga muvofiq amalga oshirildi. Tajribalar ARRIVE ko‘rsatmalariga muvofiq amalga oshirildi.
Barcha rentgen tasvirlari Yaponiyadagi SPring-8 sinxrotronida BL20XU nur chizig‘ida, avvalroq tasvirlanganga o‘xshash sozlash yordamida amalga oshirildi21,22.Qisqacha aytganda, eksperimental quti sinxrotron saqlash halqasidan 245 m masofada joylashgan. Namunadan detektorgacha bo‘lgan masofa 0,6 m masofada joylashgan. fazali kontrast effektlarini yaratish uchun. 25 keV monoxromatik nur energiyasidan foydalanilgan. Rasmlar sCMOS detektoriga ulangan yuqori aniqlikdagi rentgen konvertori (SPring-8 BM3) yordamida olingan. Konvertor 10 mkm qalinlikdagi sintilator (Gd3Al2G) yordamida rentgen nurlarini ko'rinadigan yorug'likka aylantiradi. × 10 mikroskop ob'ektivi (NA 0,3). sCMOS detektori massiv o'lchami 2048 × 2048 piksel va xom piksel o'lchami 6,5 × 6,5 mkm bo'lgan Orca-Flash4.0 (Hamamatsu Photonics, Yaponiya) edi. Taxminan 1,1 mm × 1,1 mm. Ekspozitsiya uzunligi 100 ms ga teng. Nafas olish natijasida paydo bo'ladigan harakat artefaktlarini minimallashtirish bilan birga havo yo'li ichidagi va tashqarisidagi magnit zarralarining signal-shovqin nisbatini maksimal darajada oshirish uchun tanlangan.
LV tashuvchisi hech qanday SPring-8 PB-PCXI tasvirlash tadqiqotlarida ishlatilmadi, chunki BL20XU tasvirlash kamerasi Bioxavfsizlik boʻyicha 2-darajali sertifikatga ega emas. Buning oʻrniga biz ikkita tijorat yetkazib beruvchidan bir qator yaxshi tavsiflangan deputatlarni tanladik – ular bir qator oʻlchamlarni, materiallarni, temir kontsentratsiyasini va qoʻllashni oʻz ichiga oladi – birinchi navbatda MP oynasidagi magnit maydonlar va shishaning harakatiga qanday taʼsir qilishini tushunish. tirik havo yo'llarida. yuzasida. MP larning o‘lchamlari 0,25 dan 18 mkm gacha bo‘lib, ular turli materiallardan tayyorlanadi (1-jadvalga qarang), lekin har bir namunaning tarkibi, jumladan, MP ichidagi magnit zarrachalarining o‘lchami noma’lum. MCT bo‘yicha keng ko‘lamli tadqiqotlarimiz asosida 19, 20, 21, 23, 24, biz MP5 havo yo‘lida kichik bo‘lishini kutishimiz mumkin. yuzasi, masalan, MP harakatining yaxshilangan koʻrinishini koʻrish uchun ketma-ket kadrlarni ayirish orqali. 0,25 mkm oʻlchamdagi bitta MP tasvirlash moslamasining ruxsatidan kichikroq, lekin PB-PCXI ularning hajm kontrastini va choʻktirilgandan soʻng yotqizilgan sirt suyuqligining harakatini aniqlashi kutilmoqda.
1-jadvaldagi har bir MP uchun namunalar ichki diametri 0,63 mm bo'lgan 20 mkl shisha kapillyarlarda (Drummond Microcaps, PA, AQSh) tayyorlangan. Korpuskulyar zarrachalar suvda, CombiMag zarrachalari esa ishlab chiqaruvchining maxsus suyuqligida mavjud. Har bir kolba suyuqlik bilan yarim to'ldirilgan va namunaning 1 mkl ustiga joylashtirilgan. (1-rasmga qarang). Shisha kapillyarlar navbati bilan tasvirlash qutisidagi namuna sahnasiga gorizontal ravishda joylashtirildi va suyuqlikning chetlarini joylashtirdi. 19 mm diametrli (28 mm uzunlikdagi) nikel qobig'i noyob tuproq neodimiy temir bor (NdFeB) magnit (N35, kat. № LM1652, elektron magnitlanish bilan Avstraliya) 1.17 Tesla erishish uchun alohida tarjima bosqichiga biriktirilgan edi. Rasmga tushirish vaqtida uning oʻrnini masofadan oʻzgartiring.Rentgen tasvirni olish magnit namunadan taxminan 30 mm balandlikda joylashganida boshlanadi va tasvirlar soniyasiga 4 kadr tezligida olinadi. Tasvirga olish vaqtida magnit shisha kapillyar trubkaga yaqinlashtirildi va soʻngra trubaning oʻtkazuvchanlik trubkasi boʻylab taʼsir kuchini baholang (taxminan 11 mm).
Namuna xy tarjima bosqichida shisha kapillyarlarda MP namunalarini o'z ichiga olgan in vitro tasvirni o'rnatish. Rentgen nurlarining yo'li qizil chiziq bilan belgilangan.
MPlarning in vitro ko'rinishi o'rnatilgandan so'ng, ularning bir qismi yovvoyi turdagi urg'ochi albinos Wistar kalamushlarida (~12 haftalik, ~200 g) in vivo sinovdan o'tkazildi. 0,24 mg/kg medetomidin (Domitor®, Zenoaq, Yaponiya), 3,2 mg/kg midazolam (Dormicum®, Astellastorp) va (Vetorphale®, Meiji Seika) Kalamushlar Pharma aralashmasi bilan, Yaponiya) qorin bo'shlig'iga in'ektsiya yo'li bilan behushlik qilindi. Anesteziyadan so'ng ular traxeya atrofidagi mo'ynani olib tashlash, endotraxeal trubkani (ET; 16 Ga ivmobilizatsiya qilish CT) va ularni supurish orqali tasvirlash uchun tayyorlangan. tana haroratini ushlab turish uchun termal sumkani o'z ichiga olgan plastinka 22 .So'ngra tasvirlash plitasi 2a-rasmda ko'rsatilganidek, rentgen tasvirida traxeyani gorizontal ravishda tekislash uchun tasvirlash qutisidagi namunani tarjima qilish bosqichiga engil burchak ostida biriktirilgan.
(a) SPring-8 tasvirlash qutisidagi in vivo tasvirni o'rnatish, rentgen nurlarining yo'li qizil chiziq bilan belgilangan. (b,c) Traxeyada magnitni lokalizatsiya qilish masofadan turib ikkita ortogonal o'rnatilgan IP kameralar yordamida amalga oshirildi. Ekran tasvirining chap tomonida boshni ushlab turgan sim halqa ko'rinib, ET trubkasi ichida joylashgan.
Masofadan boshqariladigan shprits nasos tizimi (UMP2, World Precision Instruments, Sarasota, FL) 100 mkl shisha shpritsdan foydalangan holda PE10 trubkasiga (OD 0,61 mm, ID 0,28 mm) 30 Ga igna orqali ulangan. Naychani mikroskopga kiritishda uchi to'g'ri holatda ekanligiga ishonch hosil qilish uchun trubkani belgilang. Naychaning uchi yetkazib beriladigan MP namunasiga botirilganda shprits pistoni tortib olindi. Yuklangan etkazib berish trubkasi so'ngra endotrakeal trubaga kiritilib, uchini biz kutayotgan qo'llaniladigan magnit maydonning eng kuchli qismiga joylashtirdi. Rasmni olish Arduino qutimizga ulangan nafas olish detektori yordamida boshqarildi, harorat va vaqtni o'lchashga asoslangan. ochish/yopish va tasvirni olish) Powerlab va LabChart (AD Instruments, Sidney, Avstraliya) yordamida yozib olingan 22. Tasvirga olishda Qo‘shimchaga kirish imkoni bo‘lmaganda, ikkita IP kamera (Panasonic BB-SC382) bir-biriga taxminan 90° burchak ostida joylashtirilgan va qarish paytida magnitning holatini kuzatish uchun ishlatilgan. harakat artefaktlari, so'nggi gelgit oqimi platosi davomida har bir nafas uchun bitta tasvir olindi.
Tasvirlash korpusining tashqarisidan masofadan turib joylashishi mumkin bo'lgan ikkinchi bosqichga magnit biriktirilgan.Magnitning turli pozitsiyalari va konfiguratsiyasi sinovdan o'tkazildi, jumladan: Traxeya ustidagi taxminan 30 ° burchak ostida o'rnatilgan (konfiguratsiyalar 2a va 3a-rasmlarda ko'rsatilgan); bir magnit hayvonning tepasida, ikkinchisi pastda, qutblarni jalb qilish uchun o'rnatilgan (3b-rasm); bitta magnit hayvonning tepasida, ikkinchisi pastda, qutblarni qaytarish uchun o'rnatilgan (3c-rasm); va bitta magnit yuqorida va traxeyaga perpendikulyar (3d-rasm). Hayvon va magnit sozlangandan so'ng va tekshiriladigan MP shprits pompasiga yuklangandan so'ng, tasvirlarni olish vaqtida 50 mkl dozani 4 mkl/sek tezlikda yuboring. So'ngra magnit traxeya bo'ylab harakatlanayotganda oldinga va orqaga suriladi.
In vivo tasvirlash uchun magnit konfiguratsiyasi (a) traxeya ustida taxminan 30° burchak ostida joylashgan bitta magnit, (b) tortish uchun o‘rnatilgan ikkita magnit, (c) qaytaruvchi ikkita magnit, (d) yuqorida va traxeyada perpendikulyar bo‘lgan bitta magnit. Kuzatuvchi og‘zidan pastga qarab o‘pkaga qaradi va traxeyaning chap tomoni orqali o‘tadi. o'ng tomondan chiqdi.Magnit nafas yo'lining uzunligi bo'ylab yoki rentgen nurlari yo'nalishi bo'yicha traxeyaning chap va o'ng tomonida harakatlanadi.
Shuningdek, biz nafas yo'llarida zarrachalarning ko'rinishi va xatti-harakatlarini chalkash nafas olish va yurak harakati bo'lmaganda aniqlashga harakat qildik.Shuning uchun tasvirlash davrining oxirida hayvonlar pentobarbitalning haddan tashqari dozasi uchun insoniy ravishda o'ldirilgan (Somnopentil, Pitman-Mur, Vashington Crossing, AQSh; va bir marta nafas olish platformasida ~ 65 mg/kg hayvonlar qoldi). yurak urishi to'xtadi, tasvirlash jarayoni takrorlandi, agar havo yo'llari yuzasida MP ko'rinmasa, qo'shimcha MP dozasini qo'shib qo'ydi.
Olingan tasvirlar tekis va qorong'i maydonda tuzatilgan va keyin MATLAB (R2020a, The Mathworks) da yozilgan maxsus skript yordamida kinoga yig'ilgan (sekundiga 20 kadr; nafas olish tezligiga qarab 15-25 × normal tezlik).
LV gen vektorini etkazib berish bo'yicha barcha tadqiqotlar Adelaida universitetidagi Laboratoriya hayvonlar tadqiqot markazida o'tkazildi va SPring-8 tajribasi natijalaridan LV-MPni magnit maydon mavjudligida in vivo jonli ravishda uzatishni kuchaytirishi mumkinligini baholashga qaratilgan. magnitsiz.
LV geni vektorlari ilgari tasvirlangan usullardan foydalangan holda yaratilgan 25, 26 .LacZ vektori konstitutsiyaviy MPSV promouteri (LV-LacZ) tomonidan boshqariladigan yadroviy lokalizatsiyalangan beta-galaktosidaza genini ifodalaydi, bu transduktsiyalangan hujayralarda ko'k reaktsiya mahsulotini ishlab chiqaradi, o'pka to'qimalarining old qismlarida ko'rinadi va hujayralar bo'limlarini qo'lda hisoblash orqali amalga oshiriladi. TU/ml da titrni hisoblash uchun gemositometrga ega LacZ musbat hujayralar. Tashuvchilar -80 °C da kriyokonservalanadi, ishlatishdan oldin eritiladi va 1:1 nisbatda aralashtirish va yetkazib berishdan oldin kamida 30 daqiqa muzda inkubatsiya qilish orqali CombiMag bilan bog'lanadi.
Oddiy Sprague Dawley kalamushlari (n = 3/guruh, ~2-3) 0,4 mg/kg medetomidin (Domitor, Ilium, Avstraliya) va 60 mg/kg ketamin (Ilium, Avstraliya) aralashmasi bilan qorin bo'shlig'iga behushlik qilingan) ip) in'ektsiya va jarrohliksiz og'iz bo'shlig'i tiqilishi bilan ta'minlanishi mumkin. Nafas yo'li to'qimalari LV transduktsiyasini oladi, u yuqorida tavsiflangan mexanik buzilish protokoli yordamida shartlangan, bunda traxeya havo yo'li yuzasi simli savat bilan eksenel ravishda ishqalangan (N-Circle, Nitinol uchsiz tosh ekstraktor NTSE-022115) -UDH, Cook Medical, AQSH) 30 s28 dan keyin LVT-ning xavfsizligini biologik usulda qo'llash amalga oshirildi. Bezovtalikdan 10 minut o'tgach.
Ushbu tajribada ishlatiladigan magnit maydon in vivo rentgen tasvirini o'rganishga o'xshash tarzda tuzilgan, xuddi shu magnitlar distillash stent kliplari yordamida traxeya ustida ushlab turilgan (4-rasm). 50 mkl hajmdagi LV-MP (2 × 25 mkl alikvotlar) traxeya ichiga yuborilgan (n = A 3 mkl. trubkasi) oldingi ta'riflangan trubkadan foydalangan holda. guruh (n = 3 hayvonlar) magnitdan foydalanmasdan bir xil LV-MPlarni oldi. Infuzion tugallangandan so'ng, kanül ET trubkasidan chiqariladi va hayvon ekstubatsiya qilinadi. Magnit 10 daqiqa davomida joyida qoladi, so'ngra u chiqariladi. Kalamushlar teri ostiga meloksikam dozasini (1 ml/kg) qabul qildilar. 1 mg/kg atipamazol gidroxloridi (Antisedan, Zoetis, Avstraliya). Kalamushlar behushlikdan to'liq tiklanishigacha iliq holda saqlangan va kuzatilgan.
Biologik xavfsizlik kabinetidagi LV-MP yetkazib berish moslamasi. ET trubasining och kulrang Luer uyasi og'izdan chiqib turganini ko'rish mumkin va rasmda ko'rsatilgan pipetkaning gel uchi ET trubkasi orqali traxeyaga kerakli chuqurlikka kiritiladi.
LV-MP dozalash protsedurasidan bir hafta o'tgach, hayvonlar 100% CO2 inhalatsiyasi orqali insoniy ravishda o'ldirilgan va LacZ ifodasi bizning standart X-gal davolashimiz yordamida baholangan. Endotraxeal naychani joylashtirishdan suyuqlikni ushlab turish yoki mexanik shikastlanishlar tahlilga kiritilmaganligiga ishonch hosil qilish uchun uchta kaudal eng xaftaga tushadigan halqalar olib tashlandi. tarkibida silikon kauchuk (Sylgard, Dow Inc) bo'lgan Minutien ignasi (Fine Science Tools) yordamida yorug'lik yuzasini ko'rish mumkin. Transduktsiya qilingan hujayralarning taqsimlanishi va naqshi DigiLite kamerasi va TCapture dasturi (Tucsen Photonics, accluinding) yordamida Nikon mikroskopi (SMZ1500) yordamida frontal suratga olish orqali tasdiqlangan. traxeyaning toʻliq kengligi uchun eng yuqori sozlama), traxeyaning butun uzunligi bosqichma-bosqich tasvirlanadi, bu tasvirni “tikish” uchun imkon berish uchun har bir tasvir oʻrtasida yetarlicha bir-biriga mos kelishini taʼminlaydi. Keyin har bir traxeyadan olingan tasvirlar Image Composite Editor v2.0.3 (Microsoft Research) yordamida tasvirlar aloxida harakatlanuvchi maydonlar ifodasi yordamida bitta kompozit tasvirga yigʻildi. Har bir hayvondan olingan traxeya miqdori yuqorida tavsiflanganidek avtomatlashtirilgan MATLAB skripti (R2020a, MathWorks) yordamida 0,35 < Hue < 0,58, Toʻyinganlik > 0.15 va Qiymat < 0.7 parametrlaridan foydalangan holda hisoblangan. Toʻqima konturini kuzatish orqali har bir GIMP2 komplektiga niqob qoʻlda yaratilgan. to‘qima maydonini aniqlang va traxeya to‘qimasidan tashqarida har qanday noto‘g‘ri aniqlashning oldini oling.Har bir hayvondan olingan barcha kompozit tasvirlardagi bo‘yalgan joylar o‘sha hayvon uchun umumiy bo‘yalgan maydon hosil qilish uchun jamlandi.So‘ngra normallashtirilgan maydon hosil qilish uchun bo‘yalgan maydon umumiy niqob maydoniga bo‘lingan.
Har bir traxeya kerosinga solingan va 5 mkm bo'laklar kesilgan. Bo'limlar 5 daqiqa davomida neytral tez qizil rangga qarama-qarshi bo'yalgan va tasvirlar Nikon Eclipse E400 mikroskopi, DS-Fi3 kamerasi va NIS elementini suratga olish dasturi (5.20.00 versiyasi) yordamida olingan.
Barcha statistik tahlillar GraphPad Prism v9 (GraphPad Software, Inc.) da amalga oshirildi. Statistik ahamiyat p ≤ 0.05 da oʻrnatildi. Oddiylik Shapiro-Wilk testi yordamida tekshirildi va LacZ binonidagi farqlar juftlashtirilmagan t-testi yordamida baholandi.
1-jadvalda tasvirlangan oltita MP PCXI yordamida tekshirildi va ko'rinish 2-jadvalda tasvirlangan. Ikki polistirol MP (MP1 va MP2; mos ravishda 18 mkm va 0,25 mkm) PCXI ostida ko'rinmas edi, ammo qolgan namunalarni aniqlash mumkin edi (misollar MP41 va MP41-rasmda ko'rsatilgan). Fe3O4; mos ravishda 0,25 mkm va 0,9 mkm) zaif ko'rinadi. Sinovdan o'tgan eng kichik zarrachalarni o'z ichiga olgan bo'lsa-da, MP5 (98% Fe3O4; 0,25 mkm) eng aniq bo'lgan. CombiMag mahsuloti MP6 ni aniqlab olish qiyin. kapillyarga parallel. Magnitlar kapillyardan uzoqlashganda, zarrachalar uzun iplar bo'lib cho'zilgan, lekin magnitlar yaqinlashib, magnit maydon kuchaygan sari, zarrachalar kapillyarning yuqori yuzasiga ko'chib o'tganda zarrachalar torlari qisqargan (Qo'shimcha video S1: MP4 ga qarang), zarrachalar o'rtasidan chiqib ketganda, magnitdan o'zgarganda, zarrachaning sirti ortib bormoqda. kapillyar, maydon kuchi kamayadi va MP lar kapillyarning yuqori yuzasidan cho'zilgan uzun iplarga qayta joylashadi (Qo'shimcha video S2: MP4 ga qarang).Magnit harakatni to'xtatgandan so'ng, zarrachalar muvozanat holatiga erishgandan so'ng, qisqa vaqt davomida harakat qilishda davom etadi. MP harakat qilganda va undan uzoqlashayotganda kapillyarning yuqori yuzasiga qarab, odatda magnit zarrachalar deb ataladi.
PCXI ostida MP ko'rinishi namunalar o'rtasida sezilarli darajada farq qiladi. (a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 va (d) MP6. Bu erda ko'rsatilgan barcha tasvirlar to'g'ridan-to'g'ri kapillyardan taxminan 10 mm yuqorida joylashgan magnit bilan olingan. Ko'rinib turgan katta doiralar kapillyarlarda tiqilib qolgan havo pufakchalari bo'lib, ularda eng qora va qizil rangli qutidagi kontrastlarning kontrast xususiyatlarini aniq ko'rsatib turibdi. Kattalashtirish. E'tibor bering, barcha raqamlardagi magnit sxemasining diametrlari masshtabga mos kelmaydi va ko'rsatilganidan taxminan 100 marta kattaroqdir.
Magnit kapillyarning yuqori qismi bo'ylab chapga va o'ngga aylantirilganda, MP satrining burchagi magnit bilan moslashish uchun o'zgaradi (6-rasmga qarang), shu bilan magnit maydon chiziqlari aniqlanadi. MP3-5 uchun akkord chegara burchakka erishgandan so'ng, zarralar kapillyarning yuqori yuzasi bo'ylab sudralib ketadi. eng kuchli (Qo'shimcha Video S3: MP5 ga qarang). Bu, ayniqsa, kapillyar uchiga yaqin tasvirlanganda yaqqol namoyon bo'ladi, bu esa deputatlarning suyuqlik-havo interfeysida to'planishiga va konsentratsiyasiga olib keladi. MP3-5 ga qaraganda farqlash qiyinroq bo'lgan MP6 zarralari magnitning harakatlanishi natijasida sudralib ketmadi, lekin ko'rinishdagi kapillyar qism bo'ylab MP bilan ajratilgan qismni tark etdi. (Qo'shimcha video S4: MP6 ga qarang). Ba'zi hollarda, magnitni tasvirlash joyidan katta masofaga siljitish orqali qo'llaniladigan magnit maydon kamaytirilganda, qolgan har qanday deputatlar ipda qolgan holda tortishish ta'sirida asta-sekin trubaning pastki yuzasiga tushdi (qarang. Qo'shimcha video S5: MP3).
Magnit kapillyar ustidagi o'ngga aylantirilganda MP simining burchagi o'zgaradi.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 va (d) MP6. Qizil quti kontrastni kuchaytiruvchi kattalashtirishni o'z ichiga oladi. E'tibor bering, qo'shimcha videolar informatsiondir, chunki ular muhim zarrachalar tuzilishini va bu statik tasvirlarda tasvirlab bo'lmaydigan dinamik ma'lumotlarni ochib beradi.
Bizning sinovlarimiz shuni ko'rsatdiki, magnitni traxeya bo'ylab asta-sekin oldinga va orqaga siljitish in vivo jonli murakkab harakat kontekstida MP ning vizualizatsiyasini osonlashtiradi. In vivo sinovlari polistirol boncuklar (MP1 va MP2) kapillyarda ko'rinmasligi sababli amalga oshirilmadi. Qolgan to'rtta MP ning har biri traxeya o'qidan 0° ga yaqin burchak ostida konfiguratsiya qilingan magnit bilan in vivo sinovdan o'tkazildi. vertikal (2b va 3a-rasmlarga qarang), chunki bu uzoqroq MP zanjirlariga olib keldi va magnit konfiguratsiyasi tugaganidan ko'ra samaraliroq bo'ldi. MP3, MP4 va MP6 hech qanday tirik hayvonlarning traxeyasida aniqlanmadi. Hayvonlar inson tomonidan o'ldirilgandan so'ng, kalamushlarning havo yo'llari tasvirlanganda, zarrachalar ko'rinmas bo'lib qoldi, hatto qo'shimcha hajmdagi temir oksidi qo'shilsa ham, MP5 tarkibidagi temirning yuqori miqdori qo'shilsa ham. faqat ko'rinadigan zarrachadir va shuning uchun MP ning in vivo harakatini baholash va tavsiflash uchun ishlatilgan.
MP yetkazib berish vaqtida magnitni traxeya ustiga qo‘yish natijasida ko‘pchilik deputatlar ko‘rish maydonida to‘planib qolgan, lekin hammasi emas. Traxeyaga kirgan zarralar eng yaxshi inson tomonidan qurbon qilingan hayvonlarda kuzatiladi. traxeya.MP tug'ilgandan keyin traxeya bo'ylab distalni qidirganda, ba'zi deputatlar karinaga yaqinroq topildi, bu esa barcha MPlarni yig'ish va ushlab turish uchun magnit maydon kuchining etarli emasligini ko'rsatdi, chunki ular suyuqlik jarayonida maksimal magnit maydon kuchiga ega bo'lgan hudud orqali etkazib berilgan. Shunga qaramay, tug'ruqdan keyingi MP konsentratsiyasi tasvirlangan havo yo'lining ko'p hududi atrofida qo'llaniladigan magnit maydon kuchining yuqori bo'lganligini ko'rsatdi. eng yuqori edi.
Yaqinda evtanizatsiya qilingan kalamushning traxeyasiga MP5 ni etkazib berishdan oldin va (b) dan olingan tasvirlar magniti tasvir maydonining tepasida joylashgan. Rasmga tushirilgan hudud ikkita xaftaga halqalari orasida joylashgan. MP yetkazib berishdan oldin havo yo'lida bir oz suyuqlik bor. Qizil quti kontrastni kuchaytiruvchi kattalashtirishni o'z ichiga oladi. Bu tasvirlar S6 MP videodan olingan.
Magnitni traxeya bo'ylab in vivo jonli ravishda o'tkazish MP zanjirining havo yo'llari yuzasi ichidagi burchagini kapillyarlarda ko'rinadigan tarzda o'zgartirishga olib keldi (8-rasm va qo'shimcha video S7: MP5 ga qarang). Biroq, bizning tadqiqotimizda deputatlarni tirik havo yo'li yuzasi bo'ylab kapillyarlar bilan bo'lgani kabi sudrab bo'lmaydi. biz shuningdek, magnit traxeya bo'ylab uzunlamasına harakatlantirilganda zarrachalar ipi sirt suyuqlik qatlamining chuqurligini o'zgartirganday ko'rinishini va magnitni to'g'ridan-to'g'ri tepada harakatlantirilganda va zarrachalar ipi vertikal holatga aylantirilganda kengayishini aniqladik (Qo'shimcha video S7 ga qarang). : MP5 da 0:09, pastki oʻng).Magnit traxeyaning yuqori qismidan lateral tomonga (yaʼni traxeyaning uzunligi boʻylab emas, balki hayvonning chap yoki oʻng tomoniga) oʻtkazilganda harakatning xarakterli shakli oʻzgardi. Zarrachalar harakatlanayotganda hamon yaqqol koʻrinib turardi, lekin magnit traxeyani olib tashlagach, zarrachaning uchlari (videokoʻrsatkichlari) iplari boʻlib qoldi. S8:MP5, 0:08 da boshlanadi). Bu shisha kapillyarda qo'llaniladigan magnit maydon ostida biz kuzatgan MP harakati bilan mos keladi.
Jonli behushlik qilingan kalamushning traxeyasida MP5 ni ko'rsatadigan misol tasvirlari. (a) Magnit traxeyaning yuqori va chap tomonidagi tasvirlarni olish uchun ishlatiladi, so'ngra (b) magnit o'ngga siljigandan so'ng. Qizil qutida kontrastni kuchaytiruvchi kattalashtirish mavjud. Bu tasvirlar Qo'shimcha Video S7:MPda ko'rsatilgan videodan olingan.
Ikki qutb traxeyaning tepasida va ostidan shimolga-janubga yo'naltirilganda (ya'ni, tortishish; 3b-rasm) MP akkordlari uzunroq paydo bo'lib, traxeyaning orqa yuzasida emas, balki traxeyaning yon devorida joylashgan edi (Qo'shimcha video S9: MP5 ga qarang). Biroq, zarrachalarning yuqori konsentratsiyasi (ya'ni, traxeya yuzasida bitta joylashuv aniqlanmagan). suyuqlik etkazib berilgandan so'ng, qo'sh magnitli qurilma ishlatilganda, bu odatda bitta magnitli qurilma ishlatilganda sodir bo'ladi. Keyin bitta magnit qutblarni teskari qaytarish uchun sozlanganda (3c-rasm), etkazib berishdan keyin ko'rish maydonida ko'rinadigan zarralar soni ko'paymagandek ko'rinadi. Ikkala magnitli konfiguratsiyani o'rnatish magnit maydonining yuqori tortishishi yoki magnit maydonining yuqori tortish kuchi tufayli qiyin. Keyin oʻrnatish havo yoʻliga parallel boʻlgan, biroq havo yoʻlidan 90 graduslik burchak ostida oʻtuvchi yagona magnitga oʻzgartirildi, shunda maydon chiziqlari traxeya devorini ortogonal tarzda kesib oʻtadi (3d-rasm), bu yoʻnalish yon devorda zarrachalar toʻplanishi kuzatilishi mumkinligini aniqlash uchun moʻljallangan. bitta magnitli, 30 graduslik orientatsiya konfiguratsiyasi (3a-rasm) in vivo gen tashuvchisi tadqiqotlari uchun tanlangan.
Hayvon insoniy o'ldirishdan so'ng darhol qayta-qayta suratga olinganda, chalkash to'qimalar harakatining yo'qligi aniq interxondral maydonda magnitning translatsiya harakati bilan "tebranuvchi" zarrachalarning ingichka va qisqaroq chiziqlarini aniqlash mumkinligini anglatadi. Shunga qaramay, hali ham MP6 zarralarining mavjudligi va harakatini aniq ko'ra olmaydi.
LV-LacZ titri 1,8 × 108 TU / ml edi va CombiMag MP (MP6) bilan 1: 1 aralashtirilgandan so'ng, hayvonlar 9 × 107 TU / ml LV transport vositasidan (ya'ni 4,5 × 106 TU / kalamush) 50 mkl trakeal dozani oldilar. ).Ushbu tadqiqotlarda, mehnat paytida magnitni tarjima qilish o'rniga, magnit maydon yo'qligida LV transduktsiyasi (a) vektor yetkazib berish bilan solishtirganda yaxshilanishi mumkinmi yoki yo'qligini aniqlash uchun magnitni bir holatda o'rnatdik va (b) yo'naltirilgan bo'lishi mumkinmi Havo yo'llari hujayralari yuqori nafas yo'llarining magnit maqsadli hududlariga o'tkaziladi.
Magnitlarning mavjudligi va LV vektorlari bilan birgalikda CombiMagdan foydalanish hayvonlarning sog'lig'iga salbiy ta'sir ko'rsatmadi, xuddi bizning standart LV vektorini etkazib berish protokolimiz kabi. Mexanik buzilishlarga duchor bo'lgan traxeya mintaqasining oldingi tasvirlari (qo'shimcha 1-rasm) hayvonlar guruhida transduktsiyaning sezilarli darajada yuqori bo'lganligini ko'rsatdi LV-MP bilan davolash qilinganida (LV-MP bilan davolashda). nazorat guruhida oz miqdorda ko'k LacZ bo'yalishi mavjud edi (9b-rasm).Normallashtirilgan X-Gal bo'yalgan hududlarning miqdorini aniqlash LV-MP ni magnit maydon mavjudligida qo'llash taxminan 6 barobar yaxshilanishini ko'rsatdi (9c-rasm).
LV-MP (a) magnit maydon mavjudligida va (b) magnit yo'qligida traxeyani o'tkazishni ko'rsatadigan kompozit tasvirlarga misol. (c) Magnitdan foydalanganda traxeya ichidagi normallashtirilgan LacZ transduktsiya maydonida statistik jihatdan sezilarli yaxshilanish (*p = 0,029, t-test, har bir guruh uchun o'rtacha ± 3).
Neytral tez qizil bo'yalgan qismlar (qo'shimcha 2-rasmda ko'rsatilgan misol) ilgari xabar qilinganidek, xuddi shunday naqsh va joylashuvda mavjud bo'lgan LacZ bilan bo'yalgan hujayralarni ko'rsatdi.
Havo yo'llari gen terapiyasi uchun asosiy muammo tashuvchi zarralarni qiziqtiradigan hududlarga aniq joylashtirish va havo oqimi va faol shilimshiq klirensi mavjud bo'lgan harakatlanuvchi o'pkada transduksiya samaradorligining yuqori darajasiga erishish bo'lib qolmoqda. CF havo yo'llari kasalliklarini davolash uchun mo'ljallangan LV tashuvchilar uchun, o'tkazuvchi havo yo'llari ichida tashuvchi zarrachalarning yashash vaqtini oshirish Castella va boshqalar. Transduksiyani yaxshilash uchun magnit maydonlardan foydalanish elektroporatsiya kabi genlarni etkazib berishning boshqa usullari bilan solishtirganda afzalliklarga ega, chunki u soddalik, iqtisodiy samaradorlik, etkazib berish lokalizatsiyasi, samaradorlikni oshirish va qisqaroq inkubatsiya vaqtlarini va, ehtimol, kichikroq tashuvchi dozani birlashtirishi mumkin10. Biroq, in vivo cho'kma va magnit havo yo'lidagi magnit zarrachalarining tashqi ta'siri ostidagi harakati hech qachon tasvirlanmagan. Bu usulning in vivo jonli havo yo'llarida genlarni ifodalash darajasini oshirish uchun haqiqatda ham ko'rsatilmagan.
In vitro sinxrotron PCXI tajribalarimiz shuni ko'rsatdiki, polistirol MP dan tashqari biz sinovdan o'tkazgan barcha zarrachalar biz ishlatgan tasvirlash moslamasida ko'rinib turardi. Magnit maydon mavjud bo'lganda, MPlar uzunligi zarracha turi va magnit maydon kuchiga bog'liq bo'lgan iplarni hosil qiladi (ya'ni, bizda ko'rsatilgan magnitning yaqinligi va harakati 10-rasmda ko'rsatilgan). har bir alohida zarracha magnitlanadi va o'zining mahalliy magnit maydonini induktsiya qiladi. Bu alohida maydonlar boshqa shunga o'xshash zarrachalarning to'planishiga va bog'lanishiga sabab bo'ladi, boshqa zarralarning mahalliy tortishish va itaruvchi kuchlaridan kelib chiqadigan mahalliy kuchlar tufayli guruhli ipga o'xshash harakatlar.
Suyuqlik bilan to'ldirilgan kapillyarlar va (c,d) havo bilan to'ldirilgan traxeya ichida hosil bo'lgan (a,b) zarracha poezdlarining sxematik ko'rinishi. Kapillyarlar va traxeya masshtabga tortilmaganiga e'tibor bering. (a) panelda shuningdek, iplar ichida joylashgan Fe3O4 zarralarini o'z ichiga olgan MP tavsifi mavjud.
Magnit kapillyardan yuqoriga ko'chirilganda, zarrachalar ipining burchagi Fe3O4 ni o'z ichiga olgan MP3-5 uchun kritik chegaraga yetdi, shundan so'ng zarrachalar ipi asl holatida qolmadi, balki sirt bo'ylab yangi holatga o'tdi.magnet.Bu effekt yuzaga kelishi mumkin, chunki shisha kapillyar yuzasi bu harakatni sodir bo'lishiga imkon beradigan darajada silliqdir. Ehtimol, zarrachalar kichikroq bo'lgani, turli qoplamali yoki sirt zaryadiga ega bo'lganligi yoki xususiy tashuvchi suyuqlik ularning harakat qilish qobiliyatiga ta'sir qilgani uchundir. CombiMag zarralarining tasvir kontrasti ham zaifroq, bu suyuqlik va zarrachalar bir-biriga o'xshash zichlikka ega bo'lishi mumkinligini ko'rsatadi va shuning uchun zarralar bir-biriga osonlikcha harakat qilmaydi. suyuqlikdagi zarrachalar orasidagi ishqalanishni engib o'tish, bu magnit maydon kuchi va magnit va maqsadli maydon orasidagi masofa juda muhim ekanligi ajablanarli emasligini ko'rsatadi. Birgalikda olingan bu natijalar shuni ko'rsatadiki, magnitlar maqsadli hududdan oqib o'tadigan ko'plab MPlarni ushlay olishi bilan birga, biz trassa yuzasi bo'ylab harakatlanishi uchun magnitlarga tayanib bo'lmaydi. in vivo LV-MP tadqiqotlari havo yo'llari daraxtining muayyan hududlarini jismoniy nishonga olish uchun statik magnit maydonlardan foydalanishi kerak degan xulosaga keling.
Zarrachalar tanaga yuborilganda, ularni murakkab harakatlanuvchi tana to'qimalari kontekstida aniqlash qiyin, ammo ularni aniqlash qobiliyati magnitni traxeya ustidagi gorizontal ravishda MP torlarini "qizg'itish" orqali kuchaytirildi. Jonli tasvirlash mumkin bo'lsa-da, hayvon inson tomonidan o'ldirilgandan keyin zarrachalar harakatini aniqlash osonroq bo'ladi. maydoni, garchi ba'zi zarralar odatda traxeya bo'ylab topilgan bo'lsa-da. In vitro tadqiqotlaridan farqli o'laroq, magnitni tarjima qilish orqali zarrachalarni traxeya bo'ylab sudrab bo'lmaydi. Bu topilma traxeya yuzasini qoplaydigan shilimshiq odatda nafas olayotgan zarrachalarni qanday qayta ishlagani, ularni shilimshiqda ushlab, keyinchalik shilliq qavatlar orqali tozalanishi bilan mos keladi.
Biz traxeya ustidagi va pastdagi tortishish uchun magnitlardan foydalanish (3b-rasm) bir nuqtada yuqori konsentratsiyali magnit maydon emas, balki bir xil magnit maydonga olib kelishi mumkin, deb taxmin qildik, bu potentsial ravishda zarrachalarning bir xil taqsimlanishiga olib keladi. Biroq, bizning dastlabki tadqiqotimiz bu farazni tasdiqlovchi aniq dalillarni topmadi. 3c) tasvirlangan maydonda zarrachalarning ko‘proq cho‘kishiga olib kelmadi. Bu ikki topilma shuni ko‘rsatadiki, qo‘sh magnitli o‘rnatish MP nishonining mahalliy nazoratini sezilarli darajada yaxshilamaydi va natijada paydo bo‘ladigan kuchli magnit kuchlarni sozlash qiyin, bu esa bu yondashuvni amaliy jihatdan kamroq qiladi. Xuddi shunday, magnitni yuqorida va traxeya orqali yo‘naltirish (3-rasmda tasvirlangan zarrachalar soni ham ko‘paymagan) maydon.Ushbu muqobil konfiguratsiyalarning ba'zilari muvaffaqiyatli bo'lmasligi mumkin, chunki ular cho'kma hududida magnit maydon kuchlarining pastligiga olib keladi.Shuning uchun 30 graduslik burchakli yagona magnit konfiguratsiyasi (3a-rasm) in vivo sinov uchun eng oson va eng samarali usul hisoblanadi.
LV-MP tadqiqoti shuni ko'rsatdiki, LV vektorlari CombiMag bilan birlashtirilganda va magnit maydon mavjud bo'lgan jismoniy buzilishdan so'ng yuborilganda, traxeyada transduksiya darajalari nazorat bilan solishtirganda sezilarli darajada oshgan. Sinxrotron ko'rish tadqiqotlari va LacZ natijalariga ko'ra, magnit maydon, aftidan, traxeya vektorlarining chuqur zarrachalari sonini saqlab qolishi mumkin edi. o'pka.Bunday maqsadli yaxshilanishlar etkazilgan titrlarni, maqsaddan tashqari transduktsiyani, yallig'lanish va immun nojo'ya ta'sirlarni va gen tashuvchisi xarajatlarini kamaytirish bilan yuqori samaradorlikka olib kelishi mumkin. Muhimi, ishlab chiqaruvchiga ko'ra, CombiMag boshqa genlarni uzatish usullari bilan, jumladan, boshqa virusli vektorlar (masalan, nukle AAV) bilan birgalikda ishlatilishi mumkin.