Hatur nuhun pikeun ngadatangan Nature.com.Vérsi browser anu anjeun anggo gaduh dukungan terbatas pikeun CSS. Kanggo pangalaman pangsaéna, kami nyarankeun yén anjeun nganggo browser anu diropéa (atanapi mareuman modeu kasaluyuan dina Internet Explorer).
Partikel silika porous anu disiapkeun ku metoda sol-gél kalawan sababaraha modifikasi pikeun meunangkeun macroporous particles.These partikel anu diturunkeun ku malik tambahan fragméntasi mindahkeun ranté (RAFT) polimérisasi kalawan N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) jeung styrene pikeun nyiapkeun N-phenylmaleimide fase stasioner stasioner baja N-phenylmaleimide (PMP. (100 × 1.8 mm id) anu dipak ku slurry packing.Evaluated PMP separation kolom tina campuran péptida diwangun ku lima péptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) kinerja albumin énzim leusin jeung chromatography. (HAS).Dina kaayaan élusi optimal, jumlah plat téoritis tina campuran péptida saluhur 280.000 pelat / m². Ngabandingkeun kinerja separation tina kolom dimekarkeun kalawan kolom komérsial Ascentis Express RP-Amide, ieu katalungtik yén kinerja separation tina kolom PMP éta punjul ti kolom komérsial dina watesan efisiensi separation sarta resolusi.
Dina taun-taun ayeuna, industri biopharmaceutical parantos janten pasar global anu ngembangna kalayan paningkatan anu ageung dina pangsa pasar. Kalayan kamekaran ngabeledug industri biofarmaseutikal1,2,3, analisa péptida sareng protéin diperyogikeun pisan. protéin dina cairan awak, jaringan jeung sél mangrupa tugas pisan nangtang alatan sajumlah badag spésiés berpotensi bisa didéteksi dina sampel tunggal. Sanajan spéktrometri massa mangrupa alat mujarab pikeun péptida jeung protéin sequencing, lamun sampel sapertos anu nyuntik kana spéktrométer massa dina hiji pass, separation moal idéal. Masalah ieu bisa mitigated ku ngalaksanakeun analisis jumlah MS (LC) nu. analit asup kana spéktrométer massa dina waktu nu tangtu 4,5,6. Sajaba ti éta, salila separation fase cair, analytes bisa museur di wewengkon sempit, kukituna concentrating analytes ieu sarta ngaronjatkeun sensitipitas deteksi MS. Kromatografi cair (LC) geus maju sacara signifikan leuwih dékade kaliwat tur geus jadi téhnik populér di proteomic 9,17.
Kromatografi cair fase tibalik (RP-LC) loba dipaké pikeun purifikasi sarta separation tina campuran péptida maké silika octadecyl-dirobah (ODS) salaku fase cicing11,12,13.Najan kitu, RP fase cicing teu nyadiakeun separation nyugemakeun tina péptida jeung protéin alatan struktur kompléx 14, philore15 husus maranéhanana, dirancang jeung 14, philore stasioner husus. fase anu diperlukeun pikeun nganalisis péptida jeung protéin jeung gugus polar jeung non-polar pikeun berinteraksi sareng jeung nahan analytes ieu16. Campuran-mode kromatografi, nu nyadiakeun interaksi multimodal, bisa jadi alternatif pikeun RP-LC pikeun separation péptida, protéin, jeung campuran kompléks séjénna. Sababaraha campuran-mode fase stasioner geus disiapkeun jeung fase stasioner protéin ieu geus disiapkeun jeung fase stasioner. separations17,18,19,20,21.Mixed-mode fase cicing (lilin / RPLC, HILIC / RPLC, polar intercalation / RPLC) cocog pikeun péptida jeung protéin separations alatan ayana duanana grup polar jeung non-polar22,23,24,25,26,27,28 stasioner intercalation sarua jeung stasioner polar. gugus polar kabeungkeut némbongkeun kakuatan separation alus sarta selectivity unik pikeun analits polar jeung non-polar, sakumaha separation gumantung kana interaksi antara analit jeung fase stasioner. Interaksi multimodal 29, 30, 31, 32. Nembe, Zhang et al. 30 nyiapkeun fase stasioner polyamine dodecyl-terminated tur suksés dipisahkeun hidrokarbon, antidepressants, flavonoid, nucleosides, estrogens, sarta sababaraha analytes séjén.The intercalator polar boga duanana gugus polar jeung non-polar, ku kituna bisa dipaké pikeun misahkeun péptida jeung protéin nu mibanda duanana hidrofobik jeung hidrofilik gugus C, 8-embedded C. kolom) sadia komersil dina ngaran dagang kolom Ascentis Express RP-Amide, tapi kolom ieu dipaké pikeun analisis amina 33 wungkul.
Dina ulikan ayeuna, hiji fase cicing polar-embedded (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) ieu disiapkeun jeung dievaluasi pikeun separation of péptida jeung trypsin digests of HSA.The fase cicing ieu disiapkeun ngagunakeun strategi handap.Partikel silika porous anu disiapkeun nurutkeun kana prosedur dibikeun dina publikasi urang saméméhna mibanda sababaraha modifikasi kana protokol préparasi, polycethylene aprotocol.PE, polycethylene, polycethylene a. asam disaluyukeun pikeun nyiapkeun partikel silika kalayan ukuran pori badag. Kadua, ligan anyar, phenylmaleimide-métil vinyl isocyanate, ieu disintésis sarta dipaké pikeun derivatize partikel silika pikeun nyiapkeun fase stasioner dipasang polar. Fase stasioner dihasilkeun ieu dipak kana kolom stainless steel (100 × 1.8 mm id packing nu maké skéma kolom dioptimalkeun) mastikeun ranjang homogen kabentuk dina column.Evaluate dipak separation kolom tina campuran péptida diwangun ku lima péptida; (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) jeung nyerna Trypsin of albumin sérum manusa (HAS). Kolom RP-Amide.Both péptida sareng protéin dititénan tiasa direngsekeun saé sareng éfisién dina kolom PMP, anu langkung éfisién tibatan kolom Ascentis Express RP-Amide.
PEG (Polyéthylene Glycol), Urea, Asam Asétat, Trimethoxy Orthosilicate (TMOS), Trimethyl Chlorosilane (TMCS), Trypsin, Human Serum Albumin (HSA), Amonium Chloride, Urea, Hexane Methyldisilazane (HMDS), Methacryloyl Chloride (MCTEMP, Benzol BP, MCTEMP), Benzol BP HPLC Kelas Acetonitrile (ACN), Métanol, 2-Propanol, sarta Acetone Dibeuli ti Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, AS).
Campuran uréa (8 g), poliétilén glikol (8 g), jeung 8 mL asam asétat 0,01 N diaduk salila 10 menit, terus 24 mL TMOS ditambahkeun kana eta dina kondisi és-tiis. Campuran réaksi ieu dipanaskeun dina 40 ° C salila 6 jam lajeng dina 120 ° C cai bahan nu dituang dina autoclave salila 8 jam. ieu garing dina 70 ° C pikeun jam 12. Massa lemes garing ieu taneuh lemes dina oven jeung calcined dina 550 ° C pikeun jam 12. Tilu bets anu disiapkeun jeung dicirikeun pikeun nalungtik reproducibility dina ukuran partikel, ukuran pori jeung aréa permukaan.
Ku modifikasi permukaan partikel silika jeung pre-sintésis ligan phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) dituturkeun ku polimérisasi radial kalawan styrene, sanyawa polar-ngandung grup ieu disiapkeun. Fase stasioner pikeun agrégat sareng ranté polystyrene.Prosés persiapan dijelaskeun di handap.
N-phenylmaleimide (200 mg) jeung métil vinyl isocyanate (100 mg) ieu leyur dina toluene garing, sarta 0,1 ml 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ditambahkeun kana flask réaksi pikeun nyiapkeun phenylmaleimide-métil vinyl isocyanate copolymer (PMC 0,6 jam) jeung campuran filter 6 ° C. garing dina oven dina 40 ° C salila 3 jam.
partikel silika garing (2 g) ieu dispersed dina toluene garing (100 ml), diaduk jeung sonicated dina 500 ml buleud handap flask pikeun 10 min.PMCP (10 mg) ieu leyur dina toluene jeung ditambahkeun dropwise kana flask réaksi ngaliwatan corong muterna. Campuran ieu refluxed di 100 ° C jeung saringan jeung dried jam dina 100 ° C jeung dried. 60 ° C salila 3 jam. Saterusna, PMCP-kabeungkeut silika partikel (100 g) ieu leyur dina toluene (200 ml) jeung 4-hidroksi-TEMPO (2 mL) ditambahkeun dina ayana 100 µL dibutyltin dilaurate salaku katalis. Campuran ieu diaduk dina 850 ° C saringan jeung ° C salila jam 50 ° C.
Styrene (1 mL), benzoyl péroxida BPO (0,5 mL), jeung partikel silika TEMPO-PMCP-napel (1,5 g) anu dispersed dina toluene jeung purged kalawan nitrogen. The polimérisasi styrene ieu dipigawé dina 100 ° C salila 12 jam. Produk anu dihasilkeun ieu dikumbah ku métanol jeung skéma sakabéhna garing dina Figure 60 ° C sapeuting.
Sampel anu degassed dina 393 K salila 1 jam pikeun ménta tekanan residual kirang ti 10-3 Torr.Jumlah N2 adsorbed dina tekanan relatif P / P0 = 0.99 ieu dipaké pikeun nangtukeun volume pori total.The morfologi bulistir jeung ligan-kabeungkeut silika partikel ieu nalungtik kalawan scanning éléktron micros, Japan Téhnologi éléktron. jeung ligan-kabeungkeut partikel silika) disimpen dina kolom aluminium maké tape karbon napel.Emas ieu plated dina sampel ngagunakeun Q150T sputter coater, sarta 5 nm Au lapisan ieu disimpen dina samples.This ngaronjatkeun efisiensi prosés maké tegangan low jeung nyadiakeun gandum rupa, sputtering tiis.A Thermo Éléktron (Waltham EA1.A1.Analisis éléktron dipaké) elemen Flash A1. Malvern (Worcestershire, Inggris) Mastersizer 2000 ukuran partikel analyzer ieu dipaké pikeun ménta distribusi ukuran partikel.Partikel silika taranjang jeung ligan-kabeungkeut partikel silika (5 mg unggal) anu dispersed dina 5 ml isopropanol, sonicated pikeun 10 mnt, vortexed pikeun 5 mnt, sarta disimpen dina bangku optik ti permogravizer 5 menit ieu dipigawé dina menit optik overThe permogravizer. rentang suhu 30 nepi ka 800 °C.
Kaca-dijejeran stainless steel kolom sempit-bore tina dimensi (100 × 1,8 mm id) ieu dipak ngagunakeun métode slurry packing, nerapkeun prosedur sarua dipaké dina Ref. 31.A kolom stainless steel (kaca-dijejeran, 100 × 1.8 mm id) kalawan outlet pas ngandung frit 1 µm ieu disambungkeun ka packer slurry (Alltech Deerfield, IL, AS). Nyiapkeun slurry fase cicing ku suspending 150 mg fase stasioner dina 1.2 mL eta dikirim ka méthanol tina méthanol jeung méthanol dipaké. slurry pangleyur ogé propelling solvent.Eusian kolom sequentially ku nerapkeun tekenan 100 MP pikeun 10 menit, 80 MP pikeun 15 menit, sarta 60 MP pikeun 30 minutes.During packing, Geter mékanis ieu dilarapkeun kalawan dua shakers kolom GC (Alltech, Deerfield, IL, IL, AS) pikeun mastikeun packing packing lalaunan. pikeun nyegah karuksakan dina kolom.Pegatkeun sambungan kolom ti Unit slurry packing tur sambungkeun pas sejen ka inlet jeung ka sistem LC mariksa kinerja na.
Pompa LC (10AD Shimadzu, Jepang), injector (Valco (USA) C14 W.05) kalayan loop suntik 50nL, degasser mémbran (Shimadzu DGU-14A), jandela kapilér UV-VIS diwangun. broadening.Saatos bungkusan, kapilér (50 μm id 365 sareng réduksi kapilér union (50 μm) dipasang dina outlet 1/16″ unit réduksi. Pengumpulan data sareng pamrosésan kromatografi dilakukeun nganggo parangkat lunak Multichro 2000. Pangimeutan dina 254 nm Analytes data dites pikeun analisa data chromatografik 254 nm. (Northampton, MA).
Albumin tina sérum manusa, bubuk lyophilized, ≥ 96% (éléktroforésis gél agarose) 3 mg dicampur tripsin (1,5 mg), 4,0 M uréa (1 ml), jeung 0,2 M amonium bikarbonat (1 ml). 0,1% TFA.Filter leyuran jeung nyimpen handap 4 °C.
Pemisahan campuran péptida sareng HSA trypsin digests dievaluasi sacara misah dina kolom PMP. Pariksa pamisahan campuran péptida sareng nyerna trypsin HSA ku kolom PMP sareng bandingkeun hasilna kana kolom Ascentis Express RP-Amide. Nomer plat téoritis diitung sapertos kieu:
Gambar SEM partikel silika bulistir jeung partikel silika kabeungkeut ligan ditémbongkeun dina Gbr. 2 .Gambar SEM partikel silika bulistir (A, B) némbongkeun yén, kontras jeung studi urang saméméhna, partikel ieu buleud nu partikel nu elongated atawa boga simetri henteu teratur. Beungeut partikel silika ligan-kabeungkeut (C, D) nyaeta smoother ti partikel silika bulistir, nu bisa jadi alatan palapis polystyrene permukaan partikel silika.
Nyeken gambar mikroskop éléktron partikel silika bulistir (A, B) jeung ligan-kabeungkeut partikel silika (C, D).
Sebaran ukuran partikel partikel silika bulistir jeung partikel silika ligan-kabeungkeut ditémbongkeun dina Gambar 3 (A). Kurva distribusi ukuran partikel dumasar-Volume némbongkeun yén ukuran partikel silika ngaronjat sanggeus modifikasi kimiawi (Gbr. 3A). Data distribusi ukuran partikel partikel silika ti ulikan ayeuna jeung ulikan saméméhna dibandingkeun dina Table 1 (A, P3. ukuran partikel), D3 (ukuran partikel P3). μm, dibandingkeun jeung ulikan saméméhna urang kalawan ad(0.5) nilai 3.05 μm (polystyrene-kabeungkeut silika partikel) 34. bets ieu miboga sebaran ukuran partikel narrower dibandingkeun ulikan saméméhna urang alatan babandingan varying PEG, uréa, TMOS, jeung asam asétat dina campuran réaksi. fungsionalisasi permukaan partikel silika kalawan stirena ngan disimpen lapisan polystyrene (0,97 µm) dina beungeut silika, sedengkeun dina fase PMP ketebalan lapisan 1,38 µm.
Distribusi ukuran partikel (A) jeung distribusi ukuran pori (B) partikel silika bulistir jeung partikel silika kabeungkeut ligan.
Ukuran pori, volume pori sarta aréa permukaan partikel silika ulikan ayeuna dirumuskeun dina Table 1 (B). The propil PSD partikel silika bulistir jeung ligan-kabeungkeut partikel silika ditémbongkeun dina Gambar 3 (B). Hasil anu comparable kana ulikan urang saméméhna.The ukuran pori tina bulistir jeung ligan-dibeungkeut silika jeung partikel masing-masing anu 2410, nu nunjukkeun ukuran po. ku 69 sanggeus modifikasi kimiawi, sakumaha ditémbongkeun dina Table 1(B), sarta parobahan kurva ditémbongkeun dina Gbr. 3 (B). Nya kitu, volume pori partikel silika turun tina 0,67 nepi ka 0,58 cm3 / g sanggeus modifikasi kimiawi. Wewengkon permukaan spésifik tina partikel silika m2 / 116 nu ditalungtik saméméhna nyaéta 116 m2. m2 / g) .Saperti ditémbongkeun dina Table 1 (B), aréa permukaan (m2 / g) partikel silika ogé turun tina 116 m2 / g ka 105 m2 / g sanggeus modifikasi kimiawi.
Hasil analisis unsur fase cicing ditémbongkeun dina Table 2. The loading karbon tina fase cicing ayeuna nyaeta 6,35%, nu leuwih handap tina loading karbon tina ulikan saméméhna urang (polystyrene kabeungkeut partikel silika, 7,93% 35 jeung 10,21%, masing-masing) 42. The loading karbon tina fase stasioner ayeuna aya dina préparasi postyrene low tina , Kusabab sababaraha fase stasioner SP nyaéta low. ligan kayaning phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) jeung 4-hydroxy-TEMPO dipaké. Persentase beurat nitrogén fase diam ayeuna nyaéta 2,21%, dibandingkeun jeung 0,1735 jeung 0,85% beurat nitrogén dina studi saméméhna, masing-masing. loadings produk (4) jeung (5) éta 2,7% jeung 2,9%, masing-masing, sedengkeun loading karbon tina produk ahir (6) éta 6,35%, ditémbongkeun saperti dina Table 2. The leungitna beurat dipariksa kalawan PMP fase diam, sarta kurva TGA ditémbongkeun dina Gambar 4. Kurva TGA nembongkeun leungitna beurat 8,6% jeung beban karbon 6,6%. ligan ngandung henteu ngan C tapi ogé N, O, sarta H.
Ligan phenylmaleimide-methylvinylisocyanate dipilih pikeun modifikasi permukaan partikel silika sabab mibanda grup phenylmaleimide polar jeung grup vinylisocyanate. Vinyl isocyanate grup salajengna bisa meta jeung styrene ku polimérisasi radikal hirup. Alesan kadua pikeun nyelapkeun grup nu boga interaksi sedeng jeung éléktrostatik jeung interaksi antara fase éléktrostatik jeung stasioner teu kuat. bagian phenylmaleimide teu boga muatan maya dina pH normal. Polaritasna fase diam bisa dikawasa ku jumlah optimal stirena jeung waktu réaksi polimérisasi radikal bébas. Léngkah panungtungan réaksi (polimérisasi radikal bébas) kritis tur bisa ngarobah polaritasna fase cicing. loading tina fase cicing jeung sabalikna.SPs disiapkeun kalawan konsentrasi béda tina styrene gaduh loadings karbon béda.Again, beban fase cicing ieu kana kolom stainless steel sarta pariksa kinerja kromatografi maranéhanana (selectivity, resolusi, nilai N, jsb) .Dumasar kana percobaan ieu, hiji rumusan dioptimalkeun dipilih pikeun nyiapkeun fase stasioner PMP jeung mastikeun retention kontrol alus.
Lima campuran péptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) ogé dievaluasi ngagunakeun kolom PMP ngagunakeun fase mobile; 60/40 (v/v) asetonitril/cai (0,1% TFA) dina laju aliran 80 μL/menit.Dina kaayaan élusi optimal, jumlah plat téoritis (N) per kolom (100 × 1,8 mm id) nyaéta 20.000 ± 100 (200.000 pelat N pikeun tilu kolom/m²). Sareng chriobal ​​anu ditingalikeun dina analisis Groad 5fast dina kolom PMP dina laju aliran anu luhur (700 μ sareng jam 50.8 × ex. kolom idéntik ukuranana (100 × 1.8 mm id) anu dipak kalawan tilu kavling béda tina PMP fase cicing pikeun mariksa reproducibility.The konsentrasi analyte pikeun tiap kolom dirékam ngagunakeun kaayaan élusi optimal sarta Jumlah pelat téoritis N sarta waktu ingetan pikeun misahkeun campuran test sarua dina unggal column.The data reproducibility pikeun kolom PMP reproducibility kacida alusna jeung kolom PMP4.The pisan well-ditingalikeun dina kolom PMP reproducibility. nilai %RSD handap, ditémbongkeun saperti dina Table 3.
Separation campuran péptida dina kolom PMP (B) jeung kolom Ascentis Express RP-Amide (A); fase mobile 60/40 ACN / H2O (TFA 0,1%), dimensi kolom PMP (100 × 1,8 mm id); analitik Urutan élusi sanyawa: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) jeung 5 (leucine) asam enkephalin)).
A kolom PMP (100 × 1.8 mm id) ieu dievaluasi pikeun separation of tryptic digests of sérum albumin manusa dina kinerja luhur kromatografi cair.The kromatogram dina Gambar 6 nunjukeun yen sampel dipisahkeun ogé jeung resolusina alus pisan.HSA digests dianalisis ngagunakeun laju aliran 100 µL/0.0% fase cetonitri cai jeung 100 µL/3 cai. TFA.Sakumaha ditémbongkeun dina kromatogram (Gambar 6), nyerna HSA geus dibeulah jadi 17 puncak pakait jeung 17 péptida.Efisiensi pamisahan unggal puncak dina nyerna HSA diitung sarta nilaina dirumuskeun dina Table 5.
A nyerna tryptic of HSA (100 × 1.8 mm id) ieu dipisahkeun dina kolom PMP; laju aliran (100 µL / mnt), fase mobile 60/40 asetonitril / cai kalawan 0,1% TFA.
dimana L nyaéta panjang kolom, η nyaéta viskositas fase gerak, ΔP nyaéta tekanan balik kolom, sarta u nyaéta laju linier fase mobile. Perméabilitas kolom PMP éta 2,5 × 10-14 m2, laju aliran éta 25 μL / mnt, sarta 60/40 v / v / v 1.0 perméabilitas AMP / cai 1. mm id) sarua jeung ulikan saméméhna urang Ref.34. Perméabilitas kolom anu dipak ku partikel porous superfisial nyaéta: 1,7 × 10-15 pikeun partikel 1,3 μm, 3,1 × 10-15 pikeun partikel 1,7 μm, 5,2 × 10-15 sareng 2,5 μm pikeun partikel 5,2 × 10-15 sareng 2,5 μm partikel μm 43. Ku kituna, perméabilitas fase PMP sarua jeung partikel cangkang inti 5 μm.
dimana Wx nyaéta beurat kolom anu dipak kalayan kloroform, Wy nyaéta beurat kolom anu dibungkus métanol, sareng ρ nyaéta dénsitas pelarut. Kapadetan métanol (ρ = 0,7866) sareng kloroform (ρ = 1,484). Kolom C18-Urea 31 anu kami pelajari sateuacana masing-masing 0,63 sareng 0,55. Ieu ngandung harti yén ayana ligan uréa ngirangan perméabilitas fase stasioner. Di sisi anu sanés, total porositas kolom PMP (100 × 1,8 mm id) nyaéta 0,60. Perméabilitas kolom C18 langkung handap tina kolom PMP-1. partikel silika sabab dina fase cicing tipe C18 ligan C18 napel kana partikel silika salaku ranté linier, sedengkeun dina fase stasioner tipe polystyrene, lapisan polimér A rélatif kandel kabentuk sabudeureun eta.Dina percobaan has, porositas kolom diitung salaku:
Gambar 7A,B nembongkeun kolom PMP (100 × 1,8 mm id) jeung kolom Ascentis Express RP-Amide (100 × 1,8 mm id) ngagunakeun kaayaan élusi sarua (ie, 60/40 ACN/H2O jeung 0,1% TFA). ) tina plot van Deemter. Campuran péptida anu dipilih (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) disiapkeun dina 20 µL/ Laju aliran minimum pikeun kadua kolom nyaéta 800 µL/min. kolom sareng kolom Ascentis Express RP-Amide masing-masing 2.6 µm sareng 3.9 µm. Nilai HETP nunjukkeun yén efisiensi pamisahan kolom PMP (100 × 1.8 mm id) langkung saé tibatan anu sayogi komersil Ascentis Express RP-Amide kolom (100 id × 1.8). panurunan dina nilai N kalayan ngaronjatna aliran teu signifikan dibandingkeun ulikan urang saméméhna.Efisiensi separation luhur kolom PMP (100 × 1,8 mm id) dibandingkeun kolom Ascentis Express RP-Amide dumasar kana perbaikan dina bentuk partikel, ukuran, sarta prosedur packing kolom kompléks dipaké dina work34 ayeuna.
(A) plot van Deemter (HETP versus laju linier fase mobile) diala ngagunakeun kolom PMP (100 × 1,8 mm id) dina 60/40 ACN / H2O kalawan 0,1% TFA. (B) plot van Deemter (HETP versus laju linier fase mobile) diala ngagunakeun hiji Ascentis Express RP-Amide / 06 kolom dina kolom RP-Amide 8 (10 mm × 1). ACN / H2O kalawan 0,1% TFA.
Fase stasioner polistirena anu dipasang ku polar disiapkeun sareng dievaluasi pikeun pamisahan campuran péptida sintétik sareng nyerna trypsin tina albumin sérum manusa (HAS) dina kromatografi cair kinerja tinggi. partikel, sintésis dikawasa fase cicing, sarta packing kolom kompléks.Salian efisiensi separation tinggi, tekanan deui kolom low dina laju aliran tinggi mangrupa kaunggulan sejen tina stasioner ieu fase.PMP kolom némbongkeun reproducibility alus tur bisa dipaké pikeun analisis campuran péptida jeung nyerna trypsin rupa proteins.We maksudna pikeun ngagunakeun kolom ieu pikeun separation sanyawa bioaktif tutuwuhan jeung produk alam medicinal fungi. kromatografi. Dina mangsa nu bakal datang, kolom PMP ogé bakal dievaluasi pikeun pamisahan protéin jeung antibodi monoklonal.
Widang, JK, Euerby, Bapak, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Panalungtikan on Péptida Separation Systems ku Fase Dibalikkeun Kromatografi Bagian I: Ngembangkeun hiji Kolom Characterization Protocol.J. Kromatografi.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Improved péptida aktip dirancang pikeun pengobatan kasakit tepa.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. péptida terapi sintétik: elmu jeung market.drug discovery.15 (1-2) kiwari, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Protéomic Liquid Chromatography.J. Kromatografi.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al.Advanced kromatografi-massa spéktrometri cair ngamungkinkeun incorporation of metabolomics sasaran sacara lega na proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89-97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Peran UHPLC dina ngembangkeun ubar.J. Séptémber Sci.30 (8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM aspék dasar tur praktis kromatografi cair tekanan ultrahigh pikeun separations gancang.J. Séptémber Sci.30 (8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Aplikasi kromatografi cair kinerja ultra-luhur dina development.J obat. Kromatografi.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al.Monolithic macroporous hydrogels disiapkeun tina minyak-di-cai emulsions fase internal tinggi pikeun purifikasi efisien enteroviruses.Chemical.Britain.J. 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Peran kromatografi cair dina proteomics.J. Kromatografi.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Tren munculna dina separations kromatografi cair fase tibalik tina péptida terapi jeung protéin: téori sarta aplikasi.J. Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Separation dua diménsi péptida ngagunakeun sistem RP-RP-HPLC ngagunakeun nilai pH béda dina dimensi separation kahiji jeung kadua.J. Séptémber Sci.28 (14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al.Karakteristik mindahkeun massa jeung kinerja kinétik kolom kromatografi-efisiensi tinggi dipak kalawan C18 sub-2 μm partikel pinuh sarta superficially porous ditalungtik.J. Séptémber Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al.Tren panganyarna na tantangan analitik dina isolasi, idéntifikasi jeung validasi tutuwuhan bioactive peptides.anus.biological anus.Chemical.410 (15), 3425-3444.https://doi.org/10.1007/s00216-0218-08-(20216-0218-08).
Mueller, JB et al.The bentang proteomic karajaan kahirupan.Alam 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al.Ngolah hilir péptida terapi ku kromatografi cair preparative.Molekul (Basel, Swiss) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Campuran-mode kromatografi jeung aplikasi na biopolymers.J. Kromatografi.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y. & Sun, Y. Ligands pikeun kromatografi protéin modeu campuran: prinsip, karakterisasi, jeung desain.J. Biotéhnologi.144(1), 3-11 (2009).