Gratias tibi ago quod Nature.com invisisti. Versio navigatri quam uteris limitatam sustentationem pro CSS habet. Pro optima experientia, commendamus ut navigatro renovato utaris (aut modum compatibilitatis in Internet Explorer deactivare). Interea, ut continua sustentatio praestetur, situm sine stylis et JavaScript demonstrabimus.
Particulae silicae porosae methodo sol-gel cum quibusdam modificationibus ad particulas macroporosas obtinendas praeparatae sunt. Hae particulae per polymerisationem additionis reversibilis fragmentationis catenae translationis (RAFT) cum N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanato (PMI) et styreno derivatae sunt ad intercalationem N-phenylmaleimidi phasis stationariae polystyreni (PMP) praeparandam. Columnae chalybis inoxidabilis angusto diametro (100 × 1.8 mm diametri) impletione in suspenso impletae sunt. Separationem columnae PMP mixturae peptidicae ex quinque peptidis (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucina enkephalina) constantem (perfunctionem chromatographicam) et digestionem trypsinae albuminis serici humani (HAS) aestimaverunt. Sub condicionibus elutionis optimis, numerus laminarum theoreticus mixturae peptidicae tam altus est quam 280,000 laminae/m². Comparando perfunctionem separationis columnae evolutae cum commerciali... In columna Ascentis Express RP-Amide, observatum est facultatem separationis columnae PMP superiorem esse columnae commerciali quoad efficientiam separationis et resolutionem.
Recentibus annis, industria biopharmaceutica mercatus globalis crescens facta est, cum incremento substantiali partis mercatus. Cum incremento explosivo industriae biopharmaceuticae1,2,3, analysis peptidorum et proteinorum valde desiderata est. Praeter peptidum destinatum, multae impuritates generantur durante synthesi peptidi, ita purificationem chromatographicam requirentes ut peptida puritatis desideratae obtineantur. Analysis et characterizatio proteinorum in humoribus corporis, textibus et cellulis negotium difficillimum est propter magnum numerum specierum potentialiter detectabilium in uno exemplo. Quamquam spectrometria massae instrumentum efficax est ad sequentiationem peptidorum et proteinorum, si talia exempla in spectrometrum massae uno transitu iniiciuntur, separatio non erit idealis. Hoc problema mitigari potest per implementationem separationum chromatographiae liquidae (LC) ante analysin MS, quae numerum analytorum in spectrometrum massae tempore dato ingredientium minuet4,5,6. Praeterea, durante separatione phasis liquidae, analyta in regiones angustas concentrari possunt, ita haec analyta concentrando et sensibilitatem detectionis MS emendando. Chromatographia liquida (LC) significanter progressa est per decennium proximum et facta est... ars popularis in analysi proteomica7,8,9,10.
Chromatographia liquida phasis inversae (RP-LC) late adhibetur ad purificationem et separationem mixturarum peptidarum, silica octadecyl-modificata (ODS) ut phase stationaria utens11,12,13. Attamen, phases stationariae RP separationem peptidorum et proteinorum satisfacientem non praebent propter structuram complexam et naturam amphiphilicam14,15. Ergo, phases stationariae specialiter designatae requiruntur ad peptida et proteina cum partibus polaribus et non polaribus analyzanda, ut cum his analytis interagant et retineant16. Chromatographia modi mixti, quae interactiones multimodales praebet, potest esse alternativa RP-LC ad separationem peptidorum, proteinorum, et aliarum mixturarum complexarum. Plures phases stationariae modi mixti praeparatae sunt, et columnae his phasibus impletae ad separationes peptidorum et proteinorum adhibitae sunt17,18,19,20,21. Phases stationariae modi mixti (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, intercalatio polaris/RPLC) aptae sunt ad separationes peptidorum et proteinorum propter praesentiam tam polarium quam non polarium... greges22,23,24,25,26,27,28. Similiter, phases stationariae intercalantes polares cum gregibus polaribus covalente iunctis bonam vim separationis et selectivitatem singularem pro analytis polaribus et non polaribus ostendunt, cum separatio ab interactione inter analytum et phasim stationariam pendeat. Interactiones multimodales 29, 30, 31, 32. Nuper, Zhang et al. 30 phasim stationariam polyaminae dodecyl-terminatam paraverunt et hydrocarbona, antidepressiva, flavonoida, nucleosida, oestrogena, et alia plura analyta feliciter separaverunt. Intercalator polaris et greges polares et non polares habet, ita adhiberi potest ad peptida et proteina separanda quae et partes hydrophobicas et hydrophilicas habent. Columnae polaribus inclusae (e.g., columnae C18 amidis inclusae) sub nomine commerciali Ascentis Express RP-Amide columnae commercialiter praesto sunt, sed hae columnae ad analysin aminae 33 tantum adhibentur.
In studio praesenti, phasis stationaria polari inclusa (polystyrenum N-phenylmaleimide inclusum) praeparata et aestimata est ad separationem peptidorum et digestorum trypsini HSA. Phasis stationaria hac ratione praeparata est. Particulae silicae porosae secundum rationem in publicatione nostra priori datam praeparatae sunt, quibusdam modificationibus protocolli praeparationis adhibitae. Ratio ureae, polyethyleni glycoli (PEG), TMOS, aquae, acidi acetici accommodata est ad particulas silicae magna pororum magnitudine praeparandas. Deinde, novum ligandum, phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanatum, synthesizatum est et adhibitum est ad particulas silicae derivandas ad phasis stationariam polari inclusam praeparandam. Phasis stationaria resultans in columnam chalybis inoxidabilis (100 × 1.8 mm diametri) schema sarcinationis optimizatum impleta est. Sarcina columnae vibratione mechanica adiuvatur ad stratum homogeneum intra columnam formandum. Separationem columnae compactae mixturarum peptidorum ex quinque peptidis constantium aestima; (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucinum Enkephalinum) et digestum trypsini albuminis serici humani (HAS). Mixtura peptidorum et digestum trypsini HSA cum bona resolutione et efficacia separari observatae sunt. Efficacia separationis columnae PMP cum ea columnae Ascentis Express RP-Amide comparata est. Et peptida et proteina bene resoluta et efficacia in columna PMP observata sunt, quae efficacior erat quam columna Ascentis Express RP-Amide.
PEG (Polyethylene Glycolum), Urea, Acidum Aceticum, Trimethoxy Orthosilicatum (TMOS), Trimethyl Chlorosilanum (TMCS), Trypsinum, Albuminum Seri Humani (HSA), Ammonium Chloridum, Urea, Hexanum Methyldisilazanum (HMDS), Methacryloyl Chloridum (MC), Styrenum, 4-Hydroxy-TEMPO, Benzoyl Peroxidum (BPO), HPLC Gradus Acetonitrilum (ACN), Methanolum, 2-Propanol, et Acetonum. Empta a Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).
Mixtura ureae (8 g), polyethylene glycolis (8 g), et 8 mL acidi acetici 0.01 N per 10 minuta agitata est, deinde 24 mL TMOS sub condicionibus glacialibus additi sunt. Mixtura reactionis ad 40°C per 6 horas calefacta est, deinde ad 120°C per 8 horas in autoclave chalybis inoxidabilis. Aqua effusa est et materia residua ad 70°C per 12 horas siccata est. Massa mollis sicca in furno leviter trita et ad 550°C per 12 horas calcinata est. Tres partes paratae et descriptae sunt ad reproducibilitatem in magnitudine particularum, magnitudine pororum et area superficiali examinandam.
Per modificationem superficialem particularum silicae cum ligando prae-synthetico phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) deinde per polymerisationem radialem cum styreno, compositum gregem polarem continens paratum est. Phasis stationaria pro aggregatis et catenis polystyreni. Processus praeparationis infra describitur.
N-phenylmaleimidum (200 mg) et methylvinylisocyanas (100 mg) in tolueno sicco dissoluta sunt, et 0.1 mL 2,2′-azoisobutyronitrili (AIBN) in ampullam reactionis additum est ad copolymerum phenylmaleimidi-methylvinylisocyanatis (PMCP) praeparandum. Mixtura ad 60°C per tres horas calefacta, filtrata et in furno ad 40°C per tres horas siccata est.
Particulae silicae siccatae (2 g) in tolueno sicco (100 mL) dispersae sunt, agitatae et in ampulla fundi rotundi 500 mL per 10 min sonicatae sunt. PMCP (10 mg) in tolueno dissolutum et guttatim in ampullam reactionis per infundibulum stillantem additum est. Mixtura ad 100°C per 8 horas refluxa, filtrata et acetono abluta, et ad 60°C per 3 horas siccata est. Deinde, particulae silicae PMCP-ligatae (100 g) in tolueno (200 ml) dissolutae sunt et 4-hydroxy-TEMPO (2 mL) in praesentia 100 µL dibutyltin dilaurati ut catalysatoris additum est. Mixtura ad 50°C per 8 horas agitata, filtrata et ad 50°C per 3 horas siccata est.
Styrenum (1 mL), benzoyli peroxidum BPO (0.5 mL), et particulae silicae TEMPO-PMCP-adnexae (1.5 g) in tolueno dispersae et nitrogenio purgatae sunt. Polymerizatio styreni ad 100°C per 12 horas peracta est. Productum inde ortum methanolo ablutum et ad 60°C per noctem siccatum est. Schema reactionis generale in Figura 1 monstratur.
Exempla ad 393 K per horam unam degasata sunt ut pressio residua minor quam 10⁻³ Torr obtineretur. Quantitas N₂ adsorpta ad pressionem relativam P/P₀ = 0.99 adhibita est ad volumen pororum totale determinandum. Morphologia particularum silicae nudarum et ligando iunctarum microscopio electronico scandenti (Hitachi High Technologies, Tokyo, Iaponia) examinata est. Exempla siccata (silica nuda et particulae silicae ligando iunctae) in columnam aluminii posita sunt utens taenia carbonis adhaesiva. Aurum in exemplaribus obductum est utens machina Q150T sputtering coater, et stratum Au 5 nm in exemplaribus depositum est. Hoc efficientiam processus utens tensionibus humilibus emendat et sputtering frigidum granorum tenuium praebet. Analysator elementalis Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112 ad analysin elementalem adhibitus est. Analysator magnitudinis particularum Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 ad distributionem magnitudinis particularum obtinendam adhibitus est. Particulae silicae nudae et... Particulae silicae ligando iunctae (singulae 5 mg) in 5 mL isopropanoli dispersae, per 10 min sonicatae, per 5 min vortex agitatae, et in mensa optica Mastersizer positae sunt. Analysis thermogravimetrica peracta est velocitate 5°C per minutum per intervallum temperaturae 30 ad 800°C.
Columnae ex chalybe inoxidabili vitreo obductae, angusto diametro, dimensiones (100 × 1.8 mm diametri), per methodum impletionis in suspenso (slurry) impletae sunt, eadem ratione adhibita quae in Ref. (Ref.) adhibita est. 31. Columna chalybis inoxidabilis (vitro obducta, 100 × 1.8 mm diametri) cum aptamento exitus fritam 1 µm continente, cum impletore mixturae (Alltech Deerfield, IL, USA) coniuncta est. Mixturam phasis stationariam praepara suspendendo 150 mg phasis stationariae in 1.2 mL methanoli et eam ad columnam repositionis mittendo. Methanolum ut solvens mixturae necnon solvens propellens adhibitum est. Columnam successive imple, pressiones 100 MP per 10 minuta, 80 MP per 15 minuta, et 60 MP per 30 minuta applicando. Dum impletur, vibratio mechanica duobus agitatoribus columnae GC (Alltech, Deerfield, IL, USA) applicata est ad impletionem uniformem columnae curandam. Impletorem mixturae claude et pressionem lente remitte ne quid detrimenti intra columnam fiat. Columnam ab unitate impletionis mixturae disiunge et aliam aptationem ad introitum et ad systema LC coniunge ad eius functionem inspiciendam.
Antlia LC (10AD Shimadzu, Iaponia), iniector (Valco (USA) C14 W.05) cum ansā injectionis 50nL, degasator membranae (Shimadzu DGU-14A), fenestra capillaris UV-VIS, detector instrumenti µLC specialis (UV-2075) et microcolumnae vitreae constructae sunt. Tubi connectivi angustissimi et brevissimi ad effectum dilatationis fasciae columnae extra minuendam adhibiti sunt. Post involucrum, capillaria (50 μm diametri intermedii 365°) et capillaria unionis reducentis (50 μm) ad exitum 1/16″ unionis reducentis installata sunt. Collectio datorum et processus chromatographicus per programmata Multichro 2000 facta sunt. Monitorizatio ad 254 nm. Analyta pro absorptione UV probata sunt. Data chromatographica per OriginPro8 (Northampton, MA) analysata sunt.
Albuminum ex sero humano, pulvis lyophilizatus, ≥ 96% (electrophoresis in gel agarose) 3 mg mixtum cum trypsino (1.5 mg), urea 4.0 M (1 mL), et ammonii bicarbonato 0.2 M (1 mL). Solutio per 10 minuta agitata est et in balneo aquae ad 37°C per 6 horas servata, deinde cum 1 mL 0.1% TFA extincta. Solutionem filtra et sub 4°C conserva.
Separatio mixturarum peptidicarum et digestorum trypsini HSA separatim in columnis PMP aestimata est. Separationem mixturae peptidicae et digestoris trypsini HSA per columnam PMP verifica et eventus cum columna Ascentis Express RP-Amide compara. Numerus laminae theoreticus sic computatur:
Imagines SEM particularum silicae nudarum et particularum silicae ligando iunctarum in Figura 2 monstrantur. Imagines SEM particularum silicae nudarum (A, B) ostendunt, contra studia nostra priora, has particulas sphaericas esse, in quibus elongatae sunt vel symmetriam irregularem habent. Superficies particularum silicae ligando iunctarum (C, D) levior est quam superficies particularum silicae nudarum, quod fortasse ob stratum catenarum polystyreni in superficie particularum silicae oritur.
Imagines microscopii electronici perlustrativi particularum silicae nudarum (A, B) et particularum silicae ligando iunctarum (C, D).
Distributiones magnitudinis particularum particularum silicae nudae et particularum silicae ligando iunctarum in Figura 3(A) monstrantur. Curvae distributionis magnitudinis particularum secundum volumen demonstraverunt magnitudinem particularum silicae post modificationem chemicam auctam esse (Fig. 3A). Data distributionis magnitudinis particularum particularum silicae ex studio praesenti et studio priori in Tabula 1(A) comparantur. Magnitudo particularum secundum volumen, d(0.5), PMP est 3.36 μm, comparata cum studio nostro priori cum valore ad(0.5) 3.05 μm (particulae silicae polystyreno iunctae)34. Haec cohors distributionem magnitudinis particularum angustiorem habuit comparata cum studio nostro priori propter rationes varias PEG, ureae, TMOS, et acidi acetici in mixtura reactionis. Magnitudo particularum phasis PMP paulo maior est quam phasis particularum silicae polystyreno iunctae quam antea studuimus. Hoc significat functionalizationem superficialem particularum silicae cum styreno tantum stratum polystyreni (0.97 µm) in superficie silicae deposuisse, dum in phasi PMP... Crassitudo strati erat 1.38 µm.
Distributio magnitudinis particularum (A) et distributio magnitudinis pororum (B) particularum silicae nudarum et particularum silicae ligando iunctarum.
Magnitudo pororum, volumen pororum, et area superficialis particularum silicae studii praesentis in Tabula 1(B) dantur. Formae PSD particularum silicae nudarum et particularum silicae ligando iunctarum in Figura 3(B) monstrantur. Resultata comparabilia sunt cum studio nostro priori. Magnitudines pororum particularum silicae nudarum et ligando iunctarum sunt 310 et 241 respective, quod indicat magnitudinem pororum 69 decrescere post modificationem chemicam, ut in Tabula 1(B) monstratur, et mutatio curvae in Figura 3(B) ostenditur. Similiter, volumen pororum particularum silicae a 0.67 ad 0.58 cm3/g post modificationem chemicam decrevit. Area superficialis specifica particularum silicae nunc investigatarum est 116 m2/g, quae comparabilis est cum studio nostro priori (124 m2/g). Ut in Tabula 1(B) monstratur, area superficialis (m2/g) particularum silicae etiam a 116 m2/g ad 105 m2/g post modificationem chemicam decrevit. modificatio.
Resultatus analysis elementalis phasis stationariae in Tabula 2 monstrantur. Onus carbonis phasis stationariae praesentis est 6.35%, quod minus est quam onus carbonis studii nostri prioris (particulae silicae polystyreno iunctae, 7.93%35 et 10.21%, respective)42. Onus carbonis phasis stationariae praesentis humile est, quia in praeparatione SP praesentis, praeter styrenum, nonnulla liganda polaria ut phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) et 4-hydroxy-TEMPO adhibita sunt. Percentatio ponderis nitrogenii phasis stationariae praesentis est 2.21%, comparata cum 0.1735 et 0.85% ponderis nitrogenii in studiis prioribus, respective. Hoc significat percentationem ponderis nitrogenii maiorem esse in phase stationaria praesenti propter phenylmaleimide. Similiter, onera carbonis productorum (4) et (5) erant 2.7% et 2.9%, respective, dum onus carbonis finalis... Productum (6) erat 6.35%, ut in Tabula 2 demonstratur. Ponderis iactura cum PMP phase stationaria probata est, et curva TGA in Figura 4 ostenditur. Curva TGA ponderis iacturam 8.6% ostendit, quae bene congruit cum onere carbonis (6.35%) quia liganda non solum C sed etiam N, O, et H continent.
Ligamentum phenylmaleimid-methylvinylisocyanatum ad modificationem superficiei particularum silicae electum est quia greges phenylmaleimid polares et greges vinylisocyanatum habet. Greges vinylisocyanatum ulterius cum styreno per polymerisationem radicalem vivam reagere possunt. Altera causa est inserere gregem qui interactionem moderatam cum analyto habet et nullam interactionem electrostaticam fortem inter analytum et phasim stationariam, cum pars phenylmaleimidi nullam caricam virtualem ad pH normalem habeat. Polaritas phasis stationariae per quantitatem optimam styreni et tempus reactionis polymerisationis radicalis liberi regi potest. Ultimus gradus reactionis (polymerizatio radicalis liberi) criticus est et polaritatem phasis stationariae mutare potest. Analysis elementalis peracta est ad onus carbonis harum phasium stationariarum inspiciendum. Observatum est auctum quantitatem styreni et tempus reactionis onus carbonis phasis stationariae augere et vice versa. SP cum diversis concentrationibus styreni praeparata diversa onera carbonis habent. Iterum, has phases stationarias in columnas chalybis inoxidabilis impone et earum chromatographicam inspice. effectus (selectivitatis, resolutionis, valor N, etc.). His experimentis innixa, formula optima selecta est ad phasim stationariam PMP praeparandam, ut polaritas moderata et bona retentio analyti curarentur.
Quinque mixturae peptidorum (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucinum enkephalinum) etiam per columnam PMP cum phase mobili aestimatae sunt; Acetonitrilum/aqua 60/40 (v/v) (0.1% TFA) cum fluxu 80 μL/min. Sub condicionibus elutionis optimalibus, numerus laminarum theoreticus (N) per columnam (100 × 1.8 mm diametri interioris) est 20 000 ± 100 (200 000 laminae/m²). Tabula 3 valores N pro tribus columnis PMP dat et chromatogrammata in Figura 5A monstrantur. Analysis celeris in columna PMP cum fluxu magno (700 μL/min), quinque peptida intra unum minutum eluta sunt, valores N optimi erant, 13 500 ± 330 per columnam (100 × 1.8 mm diametri interioris), quod 135 000 laminae/m² respondet (Figura 5B). Tres columnae eiusdem magnitudinis (100 × 1.8 mm diametri interioris) tribus diversis partibus phasis stationariae PMP impletae sunt ad reproducibilitatem inspiciendam. Concentratio analyti pro singulis columnis notata est adhibita condicionibus elutionis optimalibus et numero laminarum theoreticarum N necnon tempore retentionis ad eandem mixturam probationis in singulis columnis separandam. Data reproducibilitatis pro columnis PMP in Tabula 4 monstrantur. Reproducibilitas columnae PMP bene congruit cum valoribus %RSD infimis, ut in Tabula 3 demonstratur.
Separatio mixturae peptidicae in columna PMP (B) et columna Ascentis Express RP-Amide (A); phasis mobilis 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), dimensiones columnae PMP (100 × 1.8 mm diameter); ordo elutionis analyticus compositorum: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) et 5 (leucinum) (acidum enkephalinum).
Columna PMP (100 × 1.8 mm diametri) ad separationem digestorum trypticorum albuminis serici humani in chromatographia liquida altae efficaciae aestimata est. Chromatogramma in Figura 6 ostendit specimen bene separatum esse et resolutionem optimam esse. Digesta HSA analysata sunt utens fluxu 100 µL/min, phase mobili 70/30 acetonitrili/aquae et 0.1% TFA. Ut in chromatogrammate (Figura 6) demonstratur, digestio HSA divisa est in 17 cacumina, 17 peptidibus respondentia. Efficacia separationis cuiusque cacuminis in digestione HSA calculata est et valores in Tabula 5 dantur.
Digestum trypticum HSA (100 × 1.8 mm diametri) in columna PMP separatum est; celeritate fluxus (100 µL/min), phasis mobilis 60/40 acetonitrili/aqua cum 0.1% TFA.
ubi L est longitudo columnae, η est viscositas phasis mobilis, ΔP est pressio retrorsum columnae, et u est velocitas linearis phasis mobilis. Permeabilitas columnae PMP erat 2.5 × 10⁻¹⁴ m², fluxus erat 25 μL/min, et 60/40 v/v ACN/aqua adhibita est. Permeabilitas columnae PMP (100 × 1.8 mm diameter) similis erat ei studii nostri prioris Ref. 34. Permeabilitas columnae particulis superficialiter porosis plenae est: 1.7 × 10⁻¹⁵ pro particulis 1.3 μm, 3.1 × 10⁻¹⁵ pro particulis 1.7 μm, 5.2 × 10⁻¹⁵ et 2.5 × 10⁻¹⁴ m² pro particulis 2.6 μm Pro particulis 5 μm 43. Ergo, permeabilitas phasis PMP similis est ei particularum nucleo-corticali 5 μm.
Ubi Wx est pondus columnae chloroformio plenae, Wy est pondus columnae methanolo plenae, et ρ est densitas solventis. Densitates methanoli (ρ = 0.7866) et chloroformii (ρ = 1.484). Porositas totalis columnarum SILICA PARTICLES-C18 (100 × 1.8 mm diametri interioris) 34 et columnarum C18-Urea 31 quas antea studuimus erat 0.63 et 0.55 respective. Hoc significat praesentiam ligandorum ureae permeabilitatem phasis stationariae reducere. Ex altera parte, porositas totalis columnae PMP (100 × 1.8 mm diametri interioris) est 0.60. Permeabilitas columnarum PMP minor est quam columnarum particulis silicae C18-ligatis plenarum quia in phasibus stationariis C18-typi ligamina C18 particulis silicae ut catenae lineares adhaerent, dum in phasibus stationariis polystyreni-typi, stratum polymeri A relative crassum est... circa eam formata. In experimento typico, porositas columnae computatur ut:
Figura 7A et B columnam PMP (100 × 1.8 mm diametri) et columnam Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 mm diametri) iisdem condicionibus elutionis (i.e., 60/40 ACN/H₂O et 0.1% TFA) ex diagramma van Deemter ostendunt. Mixturae peptidorum selectae (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) in 20 µL paratae sunt. Minimum fluxus celeritatis pro ambabus columnis est 800 µL/min. Minimi valores HETP ad fluxum celeritatis optimam (80 µL/min) pro columna PMP et columna Ascentis Express RP-Amide erant 2.6 µm et 3.9 µm respective. Valores HETP indicant efficaciam separationis columnae PMP (100 × 1.8 mm id) multo meliorem esse quam columnae Ascentis Express RP-Amide commercialiter praesto (100 × 1.8 mm id). Diagramma van Deemter in Figura 7(A) ostendit decrementum valoris N cum fluxu crescente non esse significantem comparatum cum studio nostro priori. Efficacia separationis superior columnae PMP (100 × 1.8 mm id) comparata... Ad columnam Ascentis Express RP-Amide innititur emendationibus in forma particularum, magnitudine, et complexis rationibus impletionis columnarum, quae in opere praesenti adhibentur34.
(A) Diagramma van Deemter (HETP contra velocitatem linearem phasis mobilis) obtentum columna PMP (100 × 1.8 mm diametri) in 60/40 ACN/H2O cum 0.1% TFA utens. (B) Diagramma van Deemter (HETP contra velocitatem linearem phasis mobilis) obtentum columna Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 mm diametri) in 60/40 ACN/H2O cum 0.1% TFA utens.
Phase stationaria polystyreni polaris inclusa parata et aestimata est ad separationem mixturarum peptidorum syntheticorum et digestorum trypsini albuminis serici humani (HAS) in chromatographia liquida altae efficaciae. Efficacia chromatographica columnarum PMP pro mixturis peptidorum excellit in efficientia separationis et resolutione. Efficacia separationis emendata columnarum PMP debetur variis de causis, ut magnitudine particularum et magnitudine pororum particularum silicae, synthesis moderata phasis stationariae, et complexa compactione columnarum. Praeter efficientiam separationis altam, pressio retrorsum columnae humilis ad altas rates fluxus est aliud commodum huius phasis stationariae. Columnae PMP bonam reproducibilitatem exhibent et ad analysin mixturarum peptidorum et digestionem trypsini variarum proteinarum adhiberi possunt. Hanc columnam ad separationem productorum naturalium, compositorum bioactivorum ex plantis medicinalibus et extractorum fungorum in chromatographia liquida uti intendimus. In futuro, columnae PMP etiam ad separationem proteinorum et anticorporum monoclonalium aestimabuntur.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Investigatio Systematum Separationis Peptidorum per Chromatographiam Phaseis Inversae Pars I: Elaboratio Protocolli Characterizationis Columnae. J. Chromatography. 1603, 113–129. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al. Peptida activa emendata ad curationem morborum contagiosorum destinata. Biotechnologia Provecta. 36(2), 415-429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Peptida therapeutica synthetica: scientia et mercatus. *Drug Discovery*, 15 (1-2) hodie, 40-56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Xie, F., Smith, RD et Shen, Y. *Chromatographia Liquida Proteomica Provecta*. J. *Chromatographia*. A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Chromatographia liquida-spectrometria massae provecta incorporationem metabolomicae et proteomicae late directae permittit. anus. Chim. Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM et Salisbury, JJ. Munus UHPLC in evolutione medicamentorum. J. Sep. Sci. 30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. et Clausen, AM. Aspectus fundamentales et practici chromatographiae liquidae sub pressione altissima ad separationes rapidas. J. Sep. Sci. 30(8), 1167-1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA et Tchelitcheff, P. *Applicatio chromatographiae liquidae ultra-altissimae efficaciae in evolutione medicamentorum.* J. Chromatography. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Hydrogella macroporosa monolithica ex emulsionibus altae phasis internae oleo-in-aqua ad purificationem efficientem enterovirus praeparata. Chemical. Britain. J. 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, J.A. Munus chromatographiae liquidae in proteomica. J. Chromatography. A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. et Guillarme, D. *Emergentes inclinationes in separationibus chromatographiae liquidae phasis inversae peptidum et proteinorum therapeuticorum: theoria et applicationes.* J. Pharmacy. *Biomedical Science. anus. 69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC. Separatio bidimensionalis peptidorum utens systemate RP-RP-HPLC utens diversis valoribus pH in prima et secunda dimensione separationis. J. Sep. Sci. 28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al. Proprietates translationis massae et effectus cineticus columnarum chromatographicarum altae efficientiae, particulis C18 sub-2 μm plene et superficialiter porosis impletis, investigatae sunt. J. Sep. Sci. 43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al. *Recentes inclinationes et provocationes analyticae in isolatione, identificatione et validatione peptidum bioactivorum plantarum*. *Anus biologicus*. *Chemica*. 410(15), 3425–3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Mueller, JB et al. Prospectus proteomicus regni vitae. *Nature* 582(7813), 592-596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al. *De processu deorsum peptidorum therapeuticorum per chromatographiam liquidam praeparativam*. *Molecule* (Basel, Helvetia) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. et Geng, X. Chromatographia modi mixti et eius applicatio ad biopolymera. J. Chromatography. A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y. et Sun, Y. Liganda ad chromatographiam proteinicam modi mixti: principium, characterizatio, et consilium. J. Biotechnology. 144(1), 3-11 (2009).