Nature.com غا كىرگىنىڭىزگە رەھمەت. سىز ئىشلىتىۋاتقان تور كۆرگۈچ نۇسخىسىدا CSS نى قوللاش چەكلىك. ئەڭ ياخشى تەجرىبە ئۈچۈن، يېڭىلانغان تور كۆرگۈچ ئىشلىتىشىڭىزنى (ياكى Internet Explorer دا ماسلىشىشچانلىق ھالىتىنى ئېتىۋېتىشىڭىزنى) تەۋسىيە قىلىمىز. بۇ ئارىلىقتا، داۋاملىق قوللاشنى كاپالەتلەندۈرۈش ئۈچۈن، تور بېكەتنى ئۇسلۇب ۋە JavaScriptسىز كۆرسىتىمىز.
تۆشۈكلۈك كرېمنىي زەررىچىلىرى بىر قىسىم ئۆزگەرتىشلەر بىلەن سول-گېل ئۇسۇلى ئارقىلىق تەييارلىنىپ، ماكرو تۆشۈكلۈك زەررىچىلەرنى قولغا كەلتۈردى. بۇ زەررىچىلەر N-فېنىلمالېئىمىد-مېتىلۋىنىلىسوتسىئانات (PMI) ۋە ستىرول بىلەن قايتا قوشۇلۇش پارچىلىنىش زەنجىرى يۆتكەش (RAFT) پولىمېرلىشىش ئارقىلىق پولىسترېل (PMP) نىڭ N-فېنىلمالېئىمىد ئارىلاشمىسىنى تەييارلىدى. تار دىئامېتىرلىق داتلاشماس پولات تۈۋرۈكلەر (100 × 1.8 mm id) سۇيۇقلۇق قاچىلاش ئارقىلىق ئورالدى. بەش پېپتىد (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, لېيسىن ئېنكېفالىن) خروماتوگرافىيەلىك ئىقتىدارى) ۋە ئىنسان قان زەردابى ئالبۇمىن (HAS) نىڭ ترىپسىن ھەزىم قىلىنىشىدىن تەركىب تاپقان پېپتىد ئارىلاشمىسىنىڭ PMP تۈۋرۈك ئايرىلىشى باھالاندى. ئەڭ ياخشى ئېلىيۇتسىيە شارائىتىدا، پېپتىد ئارىلاشمىسىنىڭ نەزەرىيەۋى تەخسە سانى 280،000 تەخسە/كۋادراتقا يېتىدۇ. تەرەققىي قىلدۇرۇلغان ئايرىش ئىقتىدارىنى سېلىشتۇرۇش سودا خاراكتېرلىك Ascentis Express RP-Amide ئىستونىنى ئىشلەتكەندە، PMP ئىستونىنىڭ ئايرىش ئىقتىدارىنىڭ ئايرىش ئۈنۈمى ۋە ئېنىقلىق دەرىجىسى جەھەتتە سودا خاراكتېرلىك ئىستوندىن يۇقىرى ئىكەنلىكى كۆزىتىلدى.
يېقىنقى يىللاردىن بۇيان، بىئو دورىگەرلىك كەسپى بازار ئۈلۈشىنىڭ زور دەرىجىدە ئېشىشى بىلەن كېڭىيىۋاتقان دۇنيا بازىرىغا ئايلاندى. بىئو دورىگەرلىك كەسپىنىڭ پارتلاش خاراكتېرلىك ئېشىشىغا ئەگىشىپ، پېپتىد ۋە ئاقسىللارنى تەھلىل قىلىش ئىنتايىن زۆرۈر. نىشان پېپتىدتىن باشقا، پېپتىد بىرىكمىسى جەريانىدا بىر قانچە خىل ئارىلاشمىلار پەيدا بولىدۇ، شۇڭا خالىغان ساپلىقتىكى پېپتىدلارغا ئېرىشىش ئۈچۈن خروماتوگرافىيەلىك تازىلاش تەلەپ قىلىنىدۇ. بىر ئەۋرىشكىدە بايقىغىلى بولىدىغان تۈرلەرنىڭ سانى كۆپ بولغاچقا، بەدەن سۇيۇقلۇقى، توقۇلمىلىرى ۋە ھۈجەيرىلىرىدىكى ئاقسىللارنى تەھلىل قىلىش ۋە خاراكتېرلەشتۈرۈش ئىنتايىن قىيىن ۋەزىپە. ماسسا سپېكترومېتىرىيەسى پېپتىد ۋە ئاقسىل تەرتىپلەشنىڭ ئۈنۈملۈك قورالى بولسىمۇ، ئەگەر بۇنداق ئەۋرىشكىلەر ماسسا سپېكترومېتىرىغا بىرلا ۋاقىتتا كىرگۈزۈلسە، ئايرىش ئەڭ ياخشى بولمايدۇ. بۇ مەسىلىنى MS ئانالىزىدىن بۇرۇن سۇيۇق خروماتوگرافىيە (LC) ئايرىشنى يولغا قويۇش ئارقىلىق ھەل قىلغىلى بولىدۇ، بۇ بەلگىلىك ۋاقىتتا ماسسا سپېكترومېتىرىغا كىرىدىغان ئانالىز ماددىلىرىنىڭ سانىنى ئازايتىدۇ4،5،6. بۇنىڭدىن باشقا، سۇيۇق باسقۇچ ئايرىش جەريانىدا، ئانالىز ماددىلىرى تار رايونلارغا مەركەزلەشتۈرۈلۈپ، بۇ ئانالىز ماددىلىرىنى مەركەزلەشتۈرگىلى ۋە MS بايقاش سەزگۈرلۈكىنى ئۆستۈرگىلى بولىدۇ. سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيە (LC) ئۆتكەن ئون يىلدا زور دەرىجىدە تەرەققىي قىلدى ۋە پروتېئومىك ئانالىزدا ئالقىشقا ئېرىشكەن بىر تېخنىكا بولۇپ قالدى7،8،9،10.
تەتۈر باسقۇچلۇق سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسى (RP-LC) پېپتىد ئارىلاشمىلىرىنى تازىلاش ۋە ئايرىش ئۈچۈن كەڭ قوللىنىلىدۇ، بۇ ئۇسۇلدا ئوكتادېتسىل ئۆزگەرتىلگەن كرېمنىي (ODS) نى مۇقىم باسقۇچ قىلىپ ئىشلىتىلىدۇ11،12،13. قانداقلا بولمىسۇن، RP مۇقىم باسقۇچلىرى مۇرەككەپ قۇرۇلمىسى ۋە ئامفىفىل تەبىئىتى سەۋەبىدىن پېپتىدلار ۋە ئاقسىللارنى قانائەتلىنەرلىك ئايرىيالمايدۇ14،15. شۇڭلاشقا، بۇ ئانالىز قىلىنىدىغان ماددىلار بىلەن ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىش ۋە ئۇلارنى ساقلاپ قېلىش ئۈچۈن قۇتۇپلۇق ۋە قۇتۇپسىز بۆلەكلىرى بار پېپتىدلار ۋە ئاقسىللارنى تەھلىل قىلىش ئۈچۈن ئالاھىدە لايىھەلەنگەن مۇقىم باسقۇچلار تەلەپ قىلىنىدۇ16. كۆپ خىل ئۇسۇللۇق ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىدىغان ئارىلاشما ھالەتلىك خروماتوگرافىيە پېپتىدلار، ئاقسىللار ۋە باشقا مۇرەككەپ ئارىلاشمىلارنى ئايرىش ئۈچۈن RP-LC نىڭ ئورنىنى ئالالايدۇ. بىر قانچە ئارىلاشما ھالەتلىك مۇقىم باسقۇچلار تەييارلاندى، ھەمدە بۇ باسقۇچلار بىلەن تولدۇرۇلغان ئىستونلار پېپتىد ۋە ئاقسىل ئايرىش ئۈچۈن ئىشلىتىلدى17،18،19،20،21. ئارىلاشما ھالەتلىك مۇقىم باسقۇچلار (WAX/RPLC، HILIC/RPLC، قۇتۇپ ئارىلاشتۇرۇش/RPLC) پېپتىد ۋە ئاقسىلغا ماس كېلىدۇ. قۇتۇپ ۋە قۇتۇپسىز گۇرۇپپىلارنىڭ مەۋجۇتلۇقى سەۋەبىدىن ئايرىلىشلار22،23،24،25،26،27،28. شۇنىڭغا ئوخشاش، قۇتۇپلار ئۆزئارا تەسىر كۆرسىتىدىغان، كوۋالېنتلىق باغلىنىشلىق قۇتۇپ گۇرۇپپىلىرى بىلەن قۇتۇپلار ئارا ھەرىكەتلىنىدىغان مۇقىم باسقۇچلار قۇتۇپ ۋە قۇتۇپسىز ئانالىزاتلارغا نىسبەتەن ياخشى ئايرىلىش كۈچى ۋە ئۆزگىچە تاللاشچانلىقنى كۆرسىتىدۇ، چۈنكى ئايرىلىش ئانالىزات بىلەن مۇقىم باسقۇچ ئوتتۇرىسىدىكى ئۆز-ئارا تەسىرگە باغلىق. كۆپ خىل ئۇسۇلدىكى ئۆز-ئارا تەسىرلەر29، 30، 31، 32. يېقىندا، جاڭ قاتارلىقلار. 30 دودېتسىل بىلەن ئاخىرلاشقان پولىئامىن مۇقىم باسقۇچنى تەييارلىدى ۋە گىدروكاربون، ئانتىدېپرېسسىيە دورىلىرى، فلاۋونوئىدلار، نۇكلېئوزىدلار، ئېستروگېنلار ۋە باشقا بىر قانچە ئانالىز قىلىنىدىغان ماددىلارنى مۇۋەپپەقىيەتلىك ئايرىدى. قۇتۇپ ئارىلاشما ئۈسكۈنىسىنىڭ قۇتۇپ ۋە قۇتۇپسىز گۇرۇپپىلىرى بار، شۇڭا ئۇنى سۇغا چىداملىق ۋە سۇغا چىداملىق بۆلەكلەرگە ئىگە پېپتىدلار ۋە ئاقسىللارنى ئايرىشقا ئىشلىتىشكە بولىدۇ. قۇتۇپقا ئورۇنلاشتۇرۇلغان تۈۋرۈكلەر (مەسىلەن، ئامىدقا ئورۇنلاشتۇرۇلغان C18 تۈۋرۈكلىرى) Ascentis Express RP-Amide تۈۋرۈكلىرى سودا نامى ئاستىدا سېتىلىدۇ، ئەمما بۇ تۈۋرۈكلەر پەقەت ئامىن 33 نى تەھلىل قىلىش ئۈچۈن ئىشلىتىلىدۇ.
بۇ تەتقىقاتتا، قۇتۇپقا سىڭدۈرۈلگەن مۇقىم باسقۇچ (N-فېنىلمالېئىمىدقا سىڭدۈرۈلگەن پولىسترولېن) تەييارلىنىپ، HSA نىڭ پېپتىدلىرى ۋە تىرىپسىن پارچىلىرىنى ئايرىش ئۈچۈن باھالاندى. مۇقىم باسقۇچ تۆۋەندىكى ئۇسۇل ئارقىلىق تەييارلاندى. تۆشۈكلۈك كرېمنىي زەررىچىلىرى ئالدىنقى نەشرىمىزدە كۆرسىتىلگەن تەرتىپ بويىچە تەييارلاندى، تەييارلاش قائىدىسىگە بىر قىسىم ئۆزگەرتىشلەر كىرگۈزۈلدى. چوڭ تۆشۈكلۈك كرېمنىي زەررىچىلىرىنى تەييارلاش ئۈچۈن كاربامىد، پولىئېتىلېن گلىكول (PEG)، TMOS، سۇ ئاتسېتاتىك كىسلاتاسىنىڭ نىسبىتى تەڭشەلدى. ئىككىنچىدىن، يېڭى بىر لىگاند، فېنىلمالېئىمىد-مېتىل ۋىنىل ئىزوسىئانات بىرىكتۈرۈلۈپ، كرېمنىي زەررىچىلىرىنى ھاسىل قىلىش ئۈچۈن قۇتۇپقا سىڭدۈرۈلگەن مۇقىم باسقۇچ تەييارلاندى. نەتىجىدە ھاسىل بولغان مۇقىم باسقۇچ ئەلالاشتۇرۇلغان قاچىلاش لايىھىسى ئارقىلىق داتلاشماس پولات تۈۋرۈككە (100 × 1.8 mm id) ئورالدى. تۈۋرۈك قاچىلاش مېخانىكىلىق تىترەش ئارقىلىق تۈۋرۈك ئىچىدە بىردەك قەۋەت شەكىللىنىشىگە كاپالەتلىك قىلىنىدۇ. بەش پېپتىدتىن تەركىب تاپقان پېپتىد ئارىلاشمىلىرىنىڭ ئورالغان تۈۋرۈك ئايرىلىشىنى باھالاڭ. (Gly-Tyr، Gly-Leu-Tyr، Gly-Gly-Tyr-Arg، Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg، Leucine Enkephalin) ۋە ئىنسان قان زەردابى ئالبۇمىنىنىڭ (HAS) ترىپسىن ھەزىم قىلىنىشى. HSA نىڭ پېپتىد ئارىلاشمىسى ۋە ترىپسىن ھەزىم قىلىنىشىنىڭ ياخشى ئېنىقلىق ۋە ئۈنۈملۈك ئايرىلىشى كۆزىتىلدى. PMP ئىستونىنىڭ ئايرىش ئىقتىدارى Ascentis Express RP-Amide ئىستونىنىڭكى بىلەن سېلىشتۇرۇلدى. پېپتىدلار ۋە ئاقسىللارنىڭ PMP ئىستونىدا ياخشى ئېرىگەن ۋە ئۈنۈملۈك ئىكەنلىكى كۆزىتىلدى، بۇ Ascentis Express RP-Amide ئىستونىغا قارىغاندا تېخىمۇ ئۈنۈملۈك ئىدى.
PEG (پولىئېتىلېن گلىكول)، كاربامىد، ئاتسېتات كىسلاتاسى، ترىمېتوكسى ئورتوسىلىكات (TMOS)، ترىمېتىل خىلورسىلان (TMCS)، ترىپسىن، ئىنسان قان زەردابى ئالبۇمىنى (HSA)، ئاممونىي خىلورىد، كاربامىد، گېكسان مېتىلدىسىلازان (HMDS)، مېتاكرىلوئىل خىلورىد (MC)، ستىرول، 4-گىدروكسى-TEMPO، بېنزوئىل پېروكسىد (BPO)، HPLC دەرىجىلىك ئاتسېتونىترىل (ACN)، مېتانول، 2-پروپانول ۋە ئاتسېتون Sigma-Aldrich (سانت لۇئىس، MO، ئامېرىكا) دىن سېتىۋېلىندى.
كاربامىد (8 گرام)، پولىئېتىلېن گلىكول (8 گرام) ۋە 8 مىللىلىتىر 0.01 ناترونلۇق ئاتسېتاتىك كىسلاتا ئارىلاشمىسى 10 مىنۇت ئارىلاشتۇرۇلدى، ئاندىن مۇزدەك سوغۇق شارائىتتا 24 مىللىلىتىر TMOS قوشۇلدى. رېئاكسىيە ئارىلاشمىسى 40 سېلسىيە گرادۇستا 6 سائەت، ئاندىن 120 سېلسىيە گرادۇستا 8 سائەت داتلاشماس پولات ئاپتوماتىك ئوتوكلاۋدا قىزىتىلدى. سۇ قۇيۇلدى ۋە قالغان ماتېرىيال 70 سېلسىيە گرادۇستا 12 سائەت قۇرۇتۇلدى. قۇرۇتۇلغان يۇمشاق ماسسا ئوچاقتا سىلىق ئېزىلىپ، 550 سېلسىيە گرادۇستا 12 سائەت كۆيدۈرۈلدى. زەررىچە چوڭلۇقى، تۆشۈك چوڭلۇقى ۋە يۈزە كۆلىمىنىڭ قايتا ھاسىل بولۇشچانلىقىنى تەكشۈرۈش ئۈچۈن ئۈچ تۈركۈم تەييارلاندى ۋە خاراكتېرلەشتۈرۈلدى.
سىلىتسىي زەررىچىلىرىنى ئالدىن سىنتېزلانغان لىگاند فېنىلمالېئىمىد-مېتىلۋىنىلىسوتسىئانات (PCMP) بىلەن يۈزەكى ئۆزگەرتىش ۋە ئاندىن ستىرول بىلەن رادىئاتسىيەلىك پولىمېرلاشتۇرۇش ئارقىلىق، قۇتۇپ گۇرۇپپىسىنى ئۆز ئىچىگە ئالغان بىرىكمە تەييارلاندى. ئاگرېتلار ۋە پولىسترېل زەنجىرلىرى ئۈچۈن مۇقىم باسقۇچ. تەييارلاش جەريانى تۆۋەندە بايان قىلىنىدۇ.
N-فېنىلمالېئىمىد (200 مىللىگرام) ۋە مېتىل ۋىنىل ئىزوسىئانات (100 مىللىگرام) قۇرۇق تولۇئېندا ئېرىتىلدى، ھەمدە فېنىلمالېئىمىد-مېتىل ۋىنىل ئىزوسىئانات كوپولىمېرى (PMCP) تەييارلاش ئۈچۈن رېئاكسىيە بوتۇلكىسىغا 0.1 مىللىلىتىر 2،2′-ئازوئىزوبۇتىرونىترىل (AIBN) قوشۇلدى. ئارىلاشما 60 سېلسىيە گرادۇستا 3 سائەت قىزىتىلدى، سۈزۈلدى ۋە 40 سېلسىيە گرادۇستا 3 سائەت قۇرۇتۇلدى.
قۇرۇتۇلغان كرېمنىي زەررىچىلىرى (2 گرام) قۇرۇق تولۇئېنغا (100 مىللىلىتىر) ئېرىتىلىپ، ئارىلاشتۇرۇلۇپ، 500 مىللىلىتىرلىق يۇمىلاق ئاستى قەۋەتلىك بوتۇلكىدا 10 مىنۇت ئۇلترا ئاۋاز دولقۇنى بىلەن تەكشۈرۈلدى. PMCP (10 مىللىگرام) تولۇئېندا ئېرىتىلىپ، تامچىلىتىش قۇۋۇرى ئارقىلىق رېئاكسىيە بوتۇلكىسىغا تامچىلاپ قوشۇلدى. ئارىلاشما 100 سېلسىيە گرادۇستا 8 سائەت قايتا قاينىتىلىپ، سۈزۈلۈپ، ئاتسېتون بىلەن يۇيۇلۇپ، 60 سېلسىيە گرادۇستا 3 سائەت قۇرۇتۇلدى. ئاندىن، PMCP بىلەن باغلانغان كرېمنىي زەررىچىلىرى (100 گرام) تولۇئېندا (200 مىللىلىتىر) ئېرىتىلىپ، 100 µL دىبۇتىلتىن دىلاۋراتنىڭ كاتالىزاتور سۈپىتىدە قاتنىشىشى بىلەن 4-ھىدروكسى-TEMPO (2 مىللىلىتىر) قوشۇلدى. ئارىلاشما 50 سېلسىيە گرادۇستا 8 سائەت ئارىلاشتۇرۇلۇپ، سۈزۈلۈپ، 50 سېلسىيە گرادۇستا 3 سائەت قۇرۇتۇلدى.
ستىرول (1 مىللىلىتىر)، بېنزوئىل پېروكسىد BPO (0.5 مىللىلىتىر) ۋە TEMPO-PMCP قوشۇلغان كرېمنىي زەررىچىلىرى (1.5 گرام) تولۇئېنغا ئېرىتىلىپ، ئازوت بىلەن تازىلاندى. ستىرولنىڭ پولىمېرلىشىشى 100 سېلسىيە گرادۇستا 12 سائەت ئېلىپ بېرىلدى. نەتىجىدە ھاسىل بولغان مەھسۇلات مېتانول بىلەن يۇيۇلۇپ، 60 سېلسىيە گرادۇستا بىر كېچە قۇرۇتۇلدى. ئومۇمىي رېئاكسىيە لايىھەسى 1-رەسىمدە كۆرسىتىلدى.
ئەۋرىشكىلەر 393 K تېمپېراتۇرىدا 1 سائەت گازسىزلاندۇرۇلۇپ، 10-3 Torr دىن تۆۋەن قالدۇق بېسىمغا ئېرىشتى. ئومۇمىي تۆشۈك ھەجىمىنى بېكىتىش ئۈچۈن P/P0 = 0.99 نىسپىي بېسىمدا سۈمۈرۈلگەن N2 مىقدارى ئىشلىتىلدى. يالىڭاچ ۋە لىگاند بىلەن باغلانغان كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ مورفولوگىيەسى سىكانىرلاش ئېلېكترون مىكروسكوپى (Hitachi High Technologies, توكيو, ياپونىيە) ئارقىلىق تەكشۈرۈلدى. قۇرۇتۇلغان ئەۋرىشكىلەر (يالىڭاچ كرېمنىي ۋە لىگاند بىلەن باغلانغان كرېمنىي زەررىچىلىرى) يېلىملىق كاربون لېنتا ئىشلىتىپ ئاليۇمىن تۈۋرۈككە قويۇلدى. Q150T پۈركۈگۈچ قاپلاش ماشىنىسى ئارقىلىق ئەۋرىشكىلەرگە ئالتۇن يالىتىلدى، ئەۋرىشكىلەرگە 5 nm Au قەۋىتى قويۇلدى. بۇ تۆۋەن توك بېسىمى ئارقىلىق جەرياننىڭ ئۈنۈمىنى يۇقىرى كۆتۈرىدۇ ۋە ئىنچىكە دانچە، سوغۇق پۈركۈشنى تەمىنلەيدۇ. ئېلېمېنت ئانالىزى ئۈچۈن Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112 ئېلېمېنت ئانالىزاتورى ئىشلىتىلدى. زەررىچە چوڭلۇقىنى بېكىتىش ئۈچۈن Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 زەررىچە چوڭلۇقى ئانالىزاتورى ئىشلىتىلدى. تارقىلىشى. يالىڭاچ كرېمنىي زەررىچىلىرى ۋە بىرىكمە بىلەن باغلانغان كرېمنىي زەررىچىلىرى (ھەر بىرى 5 مىللىگرام) 5 مىللىلىتىر ئىزوپروپانولغا ئېرىتىلىپ، 10 مىنۇت ئۇلترا ئاۋاز دولقۇنى بىلەن تەمىنلىنىپ، 5 مىنۇت ئارىلاشتۇرۇلۇپ، ماستېرسىزېرنىڭ ئوپتىكىلىق ئۈستىلىگە قويۇلدى. تېرموگراۋىمېتىرلىق ئانالىز 30 دىن 800 سېلسىيە گرادۇسقىچە بولغان تېمپېراتۇرا دائىرىسىدە مىنۇتىغا 5 سېلسىيە گرادۇس سۈرئەت بىلەن ئېلىپ بېرىلدى.
ئۆلچىمى (100 × 1.8 مىللىمېتىر) بولغان ئەينەك بىلەن قاپلانغان داتلاشماس پولات تار تۈۋرۈكلەر 1-پايدىلىنىش نۇسخىسىدا ئىشلىتىلگەن ئۇسۇل بىلەن سۇلياۋ قاچىلاش ئۇسۇلى ئارقىلىق ئورالدى. 31. 1 µm فرىت بار چىقىش ئېغىزىغا ئۇلانغان داتلاشماس پولات تۈۋرۈك (ئەينەك بىلەن قاپلانغان، 100 × 1.8 mm id) سۇيۇقلۇق قاچىلاش ئۈسكۈنىسىگە (Alltech Deerfield, IL, USA) ئۇلاندى. 1.2 mL مېتانولغا 150 mg سۇيۇقلۇق قويۇپ، ساقلاش ئۈسكۈنىسىگە ئەۋەتىش ئارقىلىق سۇيۇقلۇق تەييارلاڭ. سۇيۇقلۇق ئېرىتكۈچى ۋە ئىتتىرىش ئېرىتكۈچى سۈپىتىدە مېتانول ئىشلىتىلدى. 10 مىنۇت 100 MP، 15 مىنۇت 80 MP ۋە 30 مىنۇت 60 MP بېسىم ئىشلىتىپ، تۈۋرۈكنى ئارقا-ئارقىدىن تولدۇرۇڭ. قاچىلاش جەريانىدا، تۈۋرۈكنىڭ بىردەك قاچىلاشىنى كاپالەتلەندۈرۈش ئۈچۈن ئىككى GC تۈۋرۈك سىلكىگۈچ (Alltech, Deerfield, IL, USA) بىلەن مېخانىكىلىق تەۋرىنىش قوللىنىلدى. سۇيۇقلۇق قاچىلاش ئۈسكۈنىسىنى تاقاپ، تۈۋرۈكنىڭ ئىچىدىكى ھەر قانداق بۇزۇلۇشنىڭ ئالدىنى ئېلىش ئۈچۈن بېسىمنى ئاستا-ئاستا قويۇپ بېرىڭ. تۈۋرۈكنى سۇيۇقلۇق قاچىلاش ئۈسكۈنىسىدىن ئايرىڭ ۋە يەنە بىر ئورنىتىش ئۈسكۈنىسىنى كىرىش ئېغىزى ۋە LC سىستېمىسىغا ئۇلاڭ. ئۇنىڭ ئىقتىدارىنى تەكشۈرۈش ئۈچۈن.
LC پومپىسى (10AD Shimadzu، ياپونىيە)، 50nL ئوكۇل قىلىش ھالقىسى بار ئوكۇل (Valco (ئامېرىكا) C14 W.05)، پەردە گاز چىقىرىش ئۈسكۈنىسى (Shimadzu DGU-14A)، UV-VIS كاپىللا دېرىزىسى ياسالغان. ئالاھىدە µLC ئۈسكۈنىسى دېتېكتورى (UV-2075) ۋە ئەينەك بىلەن قاپلانغان مىكرو تۈۋرۈكلەر ياسالغان. قوشۇمچە تۈۋرۈك لېنتىسىنىڭ كېڭىيىشىنىڭ تەسىرىنى ئەڭ تۆۋەن چەككە چۈشۈرۈش ئۈچۈن ئىنتايىن تار ۋە قىسقا تۇتاشتۇرۇش تۇرۇبىسى ئىشلىتىلگەن. ئوراپ قاچىلانغاندىن كېيىن، كاپىللالار (50 μm id 365 ۋە ئوكۇل قىلىش بىرىكمىسى كاپىللالىرى (50 μm) ئوكۇل قىلىش بىرىكمىسىنىڭ 1/16 دىيۇملۇق چىقىش ئېغىزىغا ئورنىتىلغان. سانلىق مەلۇمات توپلاش ۋە خروماتوگرافىيەلىك بىر تەرەپ قىلىش Multichro 2000 يۇمشاق دېتالى ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلغان. 254 nm ئانالىزاتتا كۆزىتىش UV سۈمۈرۈشچانلىقىنى تەكشۈرگەن. خروماتوگرافىيەلىك سانلىق مەلۇماتلار OriginPro8 (نورسامپتون، MA) تەرىپىدىن تەھلىل قىلىنغان.
ئىنسان قان زەردابىدىن ئېلىنغان ئالبۇمىن، لىئوفىللاشتۇرۇلغان پاراشوك، ≥ 96% (ئاگاروز گېلى ئېلېكتروفورېزى) 3 مىللىگرام ترىپسىن (1.5 مىللىگرام)، 4.0 M كاربامىد (1 مىللىلىتىر) ۋە 0.2 M ئاممونىي بىكاربونات (1 مىللىلىتىر) بىلەن ئارىلاشتۇرۇلىدۇ. ئېرىتمە 10 مىنۇت ئارىلاشتۇرۇلۇپ، 37 سېلسىيە گرادۇسلۇق سۇ مۇنچىسىدا 6 سائەت ساقلىنىدۇ، ئاندىن 1 مىللىلىتىر %0.1 TFA بىلەن سوۋۇتۇلىدۇ. ئېرىتمىنى سۈزۈپ، 4 سېلسىيە گرادۇستىن تۆۋەن تېمپېراتۇرىدا ساقلاڭ.
پېپتىد ئارىلاشمىسى ۋە HSA تىرىپسىن پارچىلىرىنىڭ ئايرىلىشى PMP ئىستونلىرىدا ئايرىم باھالاندى. PMP ئىستونىدىكى HSA نىڭ پېپتىد ئارىلاشمىسى ۋە تىرىپسىن پارچىلىرىنىڭ ئايرىلىشىنى تەكشۈرۈپ، نەتىجىلەرنى Ascentis Express RP-Amide ئىستونىدىكى نەتىجىلەر بىلەن سېلىشتۇرۇڭ. نەزەرىيەۋى تاختا نومۇرى تۆۋەندىكىدەك ھېسابلىنىدۇ:
يالىڭاچ كرېمنىي زەررىچىلىرى ۋە لىگاند بىلەن باغلانغان كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ SEM رەسىملىرى 2-رەسىمدە كۆرسىتىلدى. يالىڭاچ كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ SEM رەسىملىرى (A، B) ئىلگىرىكى تەتقىقاتلىرىمىزغا سېلىشتۇرغاندا، بۇ زەررىچىلەرنىڭ شار شەكىللىك بولۇپ، زەررىچىلەر سوزۇلغان ياكى نورمالسىز سىممېترىكلىققا ئىگە ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. لىگاند بىلەن باغلانغان كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ (C، D) يۈزى يالىڭاچ كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭكىدىن سىلىقراق، بۇ كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ يۈزىدە پولىسترېل زەنجىرىنىڭ قاپلىنىشى بىلەن مۇناسىۋەتلىك بولۇشى مۇمكىن.
يالىڭاچ كرېمنىي زەررىچىلىرى (A، B) ۋە بىرىكمە كرېمنىي زەررىچىلىرى (C، D) نىڭ ئېلېكترونلۇق مىكروسكوپ رەسىملىرىنى سىكانىرلاش.
يالىڭاچ كرېمنىي زەررىچىلىرى ۋە لىگاند بىلەن باغلىنىشلىق كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ زەررىچە چوڭلۇقىنىڭ تارقىلىشى 3(A)-رەسىمدە كۆرسىتىلدى. ھەجىمگە ئاساسەن زەررىچە چوڭلۇقىنىڭ تارقىلىش ئەگرى سىزىقلىرى خىمىيىلىك ئۆزگەرتىشتىن كېيىن كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ چوڭلۇقىنىڭ ئاشقانلىقىنى كۆرسەتتى (3A-رەسىم). نۆۋەتتىكى تەتقىقات ۋە ئالدىنقى تەتقىقاتتىكى كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ زەررىچە چوڭلۇقىنىڭ تارقىلىش سانلىق مەلۇماتلىرى 1(A)-جەدۋەلدە سېلىشتۇرۇلدى. PMP نىڭ ھەجىمگە ئاساسەن زەررىچە چوڭلۇقى، d(0.5)، ئىلگىرىكى تەتقىقاتىمىزغا سېلىشتۇرغاندا 3.36 μm بولۇپ، ad(0.5) قىممىتى 3.05 μm (پولىستىرول بىلەن باغلىنىشلىق كرېمنىي زەررىچىلىرى)34. بۇ تۈركۈم رېئاكسىيە ئارىلاشمىسىدىكى PEG، كاربامىد، TMOS ۋە ئاتسېتاتىك كىسلاتانىڭ نىسبىتىنىڭ ئوخشىماسلىقى سەۋەبىدىن، ئالدىنقى تەتقىقاتىمىزغا سېلىشتۇرغاندا زەررىچە چوڭلۇقىنىڭ تارقىلىشى تېخىمۇ تار بولدى. PMP باسقۇچىنىڭ زەررىچە چوڭلۇقى بىز ئىلگىرى تەتقىق قىلغان پولىستىرول بىلەن باغلىنىشلىق كرېمنىي زەررىچىسى باسقۇچىدىكىدىن سەل چوڭراق. بۇ دېگەنلىك، كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ ستىرول بىلەن يۈزەكى فۇنكسىيەلىشىشى كرېمنىي يۈزىگە پەقەت پولىستىرول قەۋىتى (0.97 µm) قوشقان، PMP باسقۇچىدا بولسا... قەۋەتنىڭ قېلىنلىقى 1.38 µm ئىدى.
يالىڭاچ كرېمنىي زەررىچىلىرى ۋە لىگاند بىلەن باغلانغان كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ زەررىچە چوڭلۇقىنىڭ تارقىلىشى (A) ۋە تۆشۈك چوڭلۇقىنىڭ تارقىلىشى (B).
نۆۋەتتىكى تەتقىقاتتىكى كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ تۆشۈك چوڭلۇقى، تۆشۈك ھەجىمى ۋە يۈز كۆلىمى 1(B) جەدۋەلدە كۆرسىتىلدى. يالىڭاچ كرېمنىي زەررىچىلىرى ۋە لىگاند بىلەن باغلانغان كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ PSD پروفىلى 3(B) رەسىمدە كۆرسىتىلدى. نەتىجىلەر ئىلگىرىكى تەتقىقاتىمىز بىلەن سېلىشتۇرغىلى بولىدۇ. يالىڭاچ ۋە لىگاند بىلەن باغلانغان كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ تۆشۈك چوڭلۇقى ئايرىم-ئايرىم ھالدا 310 ۋە 241 بولۇپ، بۇ خىمىيىلىك ئۆزگەرتىشتىن كېيىن تۆشۈك چوڭلۇقىنىڭ 69 گە ئازايغانلىقىنى كۆرسىتىدۇ، جەدۋەل 1(B) دە كۆرسىتىلگەندەك، ئەگرى سىزىقنىڭ ئۆزگىرىشى 3(B) رەسىمدە كۆرسىتىلدى. شۇنىڭغا ئوخشاش، خىمىيىلىك ئۆزگەرتىشتىن كېيىن كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ تۆشۈك ھەجىمى 0.67 دىن 0.58 cm3/g غىچە تۆۋەنلىگەن. ھازىر تەتقىق قىلىنىۋاتقان كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ سېلىشتۇرما يۈز كۆلىمى 116 m2/g بولۇپ، بۇ ئىلگىرىكى تەتقىقاتىمىز بىلەن سېلىشتۇرغىلى بولىدۇ (124 m2/g). جەدۋەل 1(B) دە كۆرسىتىلگەندەك، كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ يۈز كۆلىمى (m2/g) مۇ 116 m2/g دىن 105 گە تۆۋەنلىگەن. خىمىيىلىك ئۆزگەرتىشتىن كېيىنكى m2/g
تۇرغۇن باسقۇچنىڭ ئېلېمېنت ئانالىزىنىڭ نەتىجىسى 2-جەدۋەلدە كۆرسىتىلدى. توك تۇرغۇن باسقۇچنىڭ كاربون يۈكى %6.35 بولۇپ، بۇ ئالدىنقى تەتقىقاتىمىزدىكى كاربون يۈكىدىن تۆۋەن (پولىستىرول بىلەن باغلانغان كرېمنىي زەررىچىلىرى، ئايرىم-ئايرىم ھالدا %7.93335 ۋە %10.21) 42. توك تۇرغۇن باسقۇچنىڭ كاربون يۈكى تۆۋەن، چۈنكى توك SP نى تەييارلاشتا، ستىرولدىن باشقا، فېنىلمالېئىمىد-مېتىلۋىنىلىسوسيانات (PCMP) ۋە 4-گىدروكسى-TEMPO قاتارلىق بەزى قۇتۇپلۇق بىرىكمىلەر ئىشلىتىلگەن. توك تۇرغۇن باسقۇچنىڭ ئازوت ئېغىرلىقى نىسبىتى %2.21 بولۇپ، ئىلگىرىكى تەتقىقاتلاردىكى ئازوتنىڭ ئېغىرلىقى ئايرىم-ئايرىم ھالدا %0.1735 ۋە %0.85 ئىدى. بۇ دېگەنلىك، فېنىلمالېئىمىد سەۋەبىدىن، توك تۇرغۇن باسقۇچتا ئازوتنىڭ ئېغىرلىقى %10 يۇقىرى. شۇنىڭغا ئوخشاش، (4) ۋە (5) مەھسۇلاتلارنىڭ كاربون يۈكى ئايرىم-ئايرىم ھالدا %2.7 ۋە %2.9 بولغان، ئاخىرقى مەھسۇلاتنىڭ كاربون يۈكى بولسا (6) 2-جەدۋەلدە كۆرسىتىلگەندەك %6.35 بولدى. ئېغىرلىقنىڭ تۆۋەنلىشى PMP نىڭ مۇقىم باسقۇچى بىلەن تەكشۈرۈلدى، TGA ئەگرى سىزىقى 4-رەسىمدە كۆرسىتىلدى. TGA ئەگرى سىزىقى %8.6 ئېغىرلىقنىڭ تۆۋەنلىشىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ، بۇ كاربون يۈكى (%6.35) بىلەن ماس كېلىدۇ، چۈنكى بىرىكمىلەردە پەقەت Cلا ئەمەس، بەلكى N، O ۋە Hمۇ بار.
فېنىلمالېئىمىد-مېتىلۋىنىلۋىنىلىسوتسىئانات لىگاندى كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ يۈزەكى ئۆزگىرىشى ئۈچۈن تاللانغان، چۈنكى ئۇنىڭدا قۇتۇپلۇق فېنىلمالېئىمىد گۇرۇپپىسى ۋە ۋىنىلىسوتسىئانات گۇرۇپپىسى بار. ۋىنىل ئىزوسسىئانات گۇرۇپپىلىرى تىرىك رادىكال پولىمېرلىشىش ئارقىلىق ستىرول بىلەن تېخىمۇ رېئاكسىيە قىلالايدۇ. ئىككىنچى سەۋەب، ئانالىز قىلىنىدىغان ماددا بىلەن ئوتتۇراھال ئۆز-ئارا تەسىر كۆرسىتىدىغان ۋە ئانالىز قىلىنىدىغان ماددا بىلەن مۇقىم باسقۇچ ئوتتۇرىسىدا كۈچلۈك ئېلېكتروستاتىك ئۆز-ئارا تەسىر يوق بىر گۇرۇپپىنى قوشۇش، چۈنكى فېنىلمالېئىمىد بۆلىكى نورمال pH قىممىتىدە ھېچقانداق مەۋھۇم زەرەتكە ئىگە ئەمەس. مۇقىم باسقۇچنىڭ قۇتۇپلۇقىنى ئەڭ ياخشى مىقداردىكى ستىرول ۋە ئەركىن رادىكال پولىمېرلىشىشنىڭ رېئاكسىيە ۋاقتى ئارقىلىق كونترول قىلغىلى بولىدۇ. رېئاكسىيەنىڭ ئەڭ ئاخىرقى باسقۇچى (ئەركىن رادىكال پولىمېرلىشىش) ئىنتايىن مۇھىم بولۇپ، مۇقىم باسقۇچنىڭ قۇتۇپلۇقىنى ئۆزگەرتەلەيدۇ. بۇ مۇقىم باسقۇچلارنىڭ كاربون يۈكىنى تەكشۈرۈش ئۈچۈن ئېلېمېنت ئانالىزى ئېلىپ بېرىلدى. ستىرول مىقدارى ۋە رېئاكسىيە ۋاقتىنى ئاشۇرۇش مۇقىم باسقۇچنىڭ كاربون يۈكىنى ئاشۇرىدىغانلىقى ۋە ئەكسىچە ئىكەنلىكى كۆزىتىلدى. ئوخشىمىغان قويۇقلۇقتىكى ستىرول بىلەن تەييارلانغان SP لارنىڭ كاربون يۈكى ئوخشىمايدۇ. يەنە بىر قېتىم، بۇ مۇقىم باسقۇچلارنى داتلاشماس پولات تۈۋرۈكلەرگە قاچىلاپ، ئۇلارنىڭ خروماتوگرافىيە ئىقتىدارى (تاللاشچانلىقى، ئېنىقلىق دەرىجىسى، N قىممىتى قاتارلىقلار). بۇ تەجرىبىلەرگە ئاساسەن، كونترول قىلىنىدىغان قۇتۇپلۇق ۋە ياخشى ئانالىز قىلىنىدىغان ماددىلارنىڭ ساقلىنىشىنى كاپالەتلەندۈرۈش ئۈچۈن PMP نىڭ تۇراقلىق باسقۇچىنى تەييارلاش ئۈچۈن ئەلالاشتۇرۇلغان فورمۇلا تاللاندى.
بەش خىل پېپتىد ئارىلاشمىسى (Gly-Tyr، Gly-Leu-Tyr، Gly-Gly-Tyr-Arg، Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg، لېيسىن ئېنكېفالىن) يەنە كۆچمە باسقۇچ ئىشلىتىلگەن PMP ئىستون ئارقىلىق باھالاندى؛ 60/40 (v/v) ئاتسېتونىترىل/سۇ (0.1% TFA) 80 μL/min ئېقىم سۈرئىتىدە. ئەڭ ياخشى ئېلىيۇتسىيە شارائىتىدا، ھەر بىر ئىستون (100 × 1.8 mm id) نىڭ نەزەرىيەۋى تاختا سانى (N) 20,000 ± 100 (200,000 تاختا/m²). 3-جەدۋەلدە ئۈچ PMP ئىستونىنىڭ N قىممىتى بېرىلگەن، خروماتوگراممىلار 5A-رەسىمدە كۆرسىتىلگەن. يۇقىرى ئېقىم سۈرئىتى (700 μL/min) دىكى PMP ئىستونىدا تېز ئانالىز قىلىنغان، بىر مىنۇت ئىچىدە بەش پېپتىد ئېلىيۇتسىيە قىلىنغان، N قىممىتى ناھايىتى ياخشى بولغان، ھەر بىر ئىستون (100 × 1.8 mm id) 13,500 ± 330 بولغان، 135,000 تاختا/m غا ماس كېلىدۇ (5B-رەسىم). ئۈچ ئوخشاش چوڭلۇقتىكى ئىستون (100 × 1.8 mm id) تەكشۈرۈش ئۈچۈن ئۈچ خىل PMP مۇقىم باسقۇچ بىلەن ئورالغان. قايتا ئىشلەپچىقىرىش ئىقتىدارى. ھەر بىر ئىستوننىڭ ئانالىز قىلىنىدىغان ماددىلارنىڭ قويۇقلۇقى ئەڭ ياخشى ئېلىيۇتسىيە شارائىتى ۋە نەزەرىيەۋى تاختىلارنىڭ سانى N ۋە ساقلاش ۋاقتى ئارقىلىق خاتىرىلەنگەن بولۇپ، ھەر بىر ئىستوندا ئوخشاش سىناق ئارىلاشمىسىنى ئايرىش ئۈچۈن ئىشلىتىلگەن. PMP ئىستونلىرىنىڭ قايتا ئىشلەپچىقىرىش ئىقتىدارى سانلىق مەلۇماتلىرى 4-جەدۋەلدە كۆرسىتىلدى. 3-جەدۋەلدە كۆرسىتىلگەندەك، PMP ئىستونىنىڭ قايتا ئىشلەپچىقىرىش ئىقتىدارى ئىنتايىن تۆۋەن %RSD قىممىتى بىلەن ياخشى مۇناسىۋەتلىك.
پېپتىد ئارىلاشمىسىنى PMP تۈۋرۈكى (B) ۋە Ascentis Express RP-Amide تۈۋرۈكى (A) دا ئايرىش؛ ھەرىكەتچان باسقۇچ 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%)، PMP تۈۋرۈكىنىڭ ئۆلچىمى (100 × 1.8 mm id); ئانالىز قىلىش. بىرىكمىلەرنىڭ ئېلۇتسىيە تەرتىپى: 1 (Gly-Tyr)، 2 (Gly-Leu-Tyr)، 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg)، 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) ۋە 5 (لېيسىن) كىسلاتا ئېنكېفالىن)).
يۇقىرى ئۈنۈملۈك سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسىدە ئىنسان قان زەردابى ئالبۇمىننىڭ ترىپتىك پارچىلىرىنى ئايرىش ئۈچۈن PMP ئىستون (100 × 1.8 mm id) باھالاندى. 6-رەسىمدىكى خروماتوگراممىدىن كۆرۈۋېلىشقا بولىدۇكى، ئەۋرىشكە ياخشى ئايرىلغان ۋە ئېنىقلىق دەرىجىسى ناھايىتى ياخشى. HSA پارچىلىرى 100 µL/min ئېقىم سۈرئىتى، ھەرىكەتچان باسقۇچ 70/30 ئاتسېتونىترىل/سۇ ۋە %0.1 TFA ئارقىلىق تەھلىل قىلىندى. خروماتوگراممىدا كۆرسىتىلگەندەك (6-رەسىم)، HSA پارچىلىنىشى 17 پېپتىدقا ماس كېلىدىغان 17 چوققىغا بۆلۈنگەن. HSA پارچىلىنىشىدىكى ھەر بىر چوققىنىڭ ئايرىش ئۈنۈمى ھېسابلىنىپ، قىممەتلەر 5-جەدۋەلدە كۆرسىتىلدى.
HSA نىڭ ترىپتىك پارچىسى (100 × 1.8 mm id) PMP ئىستونىدا ئايرىلدى؛ ئېقىم سۈرئىتى (100 µL/min)، ھەرىكەتچان باسقۇچ 60/40 ئاتسېتونىترىل/سۇ، %0.1 TFA قوشۇلغان.
بۇ يەردە L تۈۋرۈك ئۇزۇنلۇقى، η ھەرىكەتچان باسقۇچنىڭ يېپىشقاقلىقى، ΔP تۈۋرۈكنىڭ قايتىش بېسىمى، u بولسا ھەرىكەتچان باسقۇچنىڭ سىزىقلىق سۈرئىتى. PMP تۈۋرۈكىنىڭ ئۆتكۈزۈشچانلىقى 2.5 × 10-14 m2، ئېقىم سۈرئىتى 25 μL/min، ۋە 60/40 v/v ACN/سۇ ئىشلىتىلگەن. PMP تۈۋرۈكىنىڭ ئۆتكۈزۈشچانلىقى (100 × 1.8 mm id) ئالدىنقى تەتقىقاتىمىزنىڭ 34-نومۇرلۇق پايدىلىنىش ماتېرىيالىغا ئوخشايدۇ. يۈزەكى تۆشۈكلۈك زەررىچىلەر بىلەن تولدۇرۇلغان تۈۋرۈكنىڭ ئۆتكۈزۈشچانلىقى: 1.3 μm زەررىچىلەر ئۈچۈن 1.7 × 10-15، 1.7 μm زەررىچىلەر ئۈچۈن 3.1 × 10-15، 2.6 μm زەررىچىلەر ئۈچۈن 5.2 × 10-15 ۋە 2.5 × 10-14 m2. 5 μm زەررىچىلەر ئۈچۈن 43. شۇڭا، PMP باسقۇچىنىڭ ئۆتكۈزۈشچانلىقى 5 μm يادرولۇق قېپىنىڭ ئۆتكۈزۈشچانلىقىغا ئوخشايدۇ. زەررىچىلەر.
بۇ يەردە Wx خلوروفورم بىلەن ئورالغان تۈۋرۈكنىڭ ئېغىرلىقى، Wy مېتانول بىلەن ئورالغان تۈۋرۈكنىڭ ئېغىرلىقى، ρ ئېرىتكۈچىنىڭ زىچلىقى. مېتانول (ρ = 0.7866) ۋە خلوروفورم (ρ = 1.484) نىڭ زىچلىقى. بىز ئىلگىرى تەتقىق قىلغان سىلىتسىي زەررىچىلىرى-C18 تۈۋرۈكى (100 × 1.8 mm id) 34 ۋە C18-كاربامىد تۈۋرۈكى 31 نىڭ ئومۇمىي تۆشۈكلۈكى ئايرىم-ئايرىم ھالدا 0.63 ۋە 0.55 بولدى. بۇ دېگەنلىك، كاربامىد بىرىكمىلىرىنىڭ بولۇشى مۇقىم باسقۇچنىڭ ئۆتكۈزۈشچانلىقىنى تۆۋەنلىتىدۇ. يەنە بىر تەرەپتىن، PMP تۈۋرۈكىنىڭ ئومۇمىي تۆشۈكلۈكى (100 × 1.8 mm id) 0.60. PMP تۈۋرۈكلىرىنىڭ ئۆتكۈزۈشچانلىقى C18 بىلەن باغلانغان كرېمنىي زەررىچىلىرى بىلەن ئورالغان تۈۋرۈكلەرگە قارىغاندا تۆۋەن، چۈنكى C18 تىپلىق مۇقىم باسقۇچلاردا C18 بىرىكمىلىرى كرېمنىي زەررىچىلىرىگە سىزىقلىق زەنجىر شەكلىدە باغلىنىدۇ، پولىسترېل تىپلىق مۇقىم باسقۇچلاردا بولسا، A نىسبەتەن قېلىن. ئۇنىڭ ئەتراپىدا پولىمېر قەۋىتى شەكىللىنىدۇ. ئادەتتىكى تەجرىبىدە، تۈۋرۈكنىڭ تۆشۈكلۈك دەرىجىسى تۆۋەندىكىدەك ھېسابلىنىدۇ:
7A ۋە B رەسىملىرىدە van Deemter رەسىمىنىڭ ئوخشاش ئېلىيۇتسىيە شارائىتى (يەنى 60/40 ACN/H2O ۋە 0.1% TFA) ئىشلىتىلگەن PMP ئىستون (100 × 1.8 mm id) ۋە Ascentis Express RP-Amide ئىستون (100 × 1.8 mm id) كۆرسىتىلگەن. تاللانغان پېپتىد ئارىلاشمىلىرى (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) 20 µL/ دا تەييارلاندى. ئىككى ئىستوننىڭ ئەڭ تۆۋەن ئېقىم سۈرئىتى 800 µL/مىنۇت. PMP ئىستون ۋە Ascentis Express RP-Amide ئىستونىنىڭ ئەڭ ياخشى ئېقىم سۈرئىتى (80 µL/مىنۇت) دىكى ئەڭ تۆۋەن HETP قىممىتى ئايرىم-ئايرىم ھالدا 2.6 µm ۋە 3.9 µm بولدى. HETP قىممىتى PMP ئىستونىنىڭ ئايرىش ئۈنۈمىنىڭ (100 × 1.8 mm id) بازاردا سېتىلىۋاتقان Ascentis Express RP-Amide ئىستونىدىن (100 × 1.8 mm id) كۆپ ياخشى ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. 7-رەسىمدىكى (A) ۋان دېمتېر گىرافىكى ئېقىمنىڭ ئېشىشى بىلەن N قىممىتىنىڭ تۆۋەنلىشىنىڭ ئالدىنقى تەتقىقاتىمىزغا سېلىشتۇرغاندا مۇھىم ئەمەسلىكىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. PMP ئىستونىنىڭ يۇقىرى ئايرىش ئۈنۈمى (100 × Ascentis Express RP-Amide تۈۋرۈكى بىلەن سېلىشتۇرغاندا 1.8 mm id) نىڭ ئىشلىتىلىشى، ھازىرقى خىزمەتتە ئىشلىتىلگەن زەررىچە شەكلى، چوڭلۇقى ۋە مۇرەككەپ تۈۋرۈك ئوراش تەرتىپلىرىنىڭ ياخشىلىنىشىغا ئاساسلانغان34.
(A) %0.1 TFA بىلەن 60/40 ACN/H2O دىكى PMP ئىستون (100 × 1.8 mm id) ئارقىلىق قولغا كەلتۈرۈلگەن van Deemter گىرافىكى (HETP بىلەن كۆچمە باسقۇچ سىزىقلىق سۈرئەت).(B) %0.1 TFA بىلەن 60/40 ACN/H2O دىكى Ascentis Express RP-Amide ئىستون (100 × 1.8 mm id) ئارقىلىق قولغا كەلتۈرۈلگەن van Deemter گىرافىكى (HETP بىلەن كۆچمە باسقۇچ سىزىقلىق سۈرئەت).
يۇقىرى ئۈنۈملۈك سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسىدە سۈنئىي پېپتىد ئارىلاشمىسى ۋە ئىنسان قان زەردابى ئالبۇمىنىنىڭ (HAS) تىرىپسىن پارچىلىرىنى ئايرىش ئۈچۈن قۇتۇپقا سىڭدۈرۈلگەن پولىسترېل تۇراقلىق باسقۇچ تەييارلاندى ۋە باھالاندى. پېپتىد ئارىلاشمىسى ئۈچۈن PMP ئىستونلىرىنىڭ خروماتوگرافىيە ئىقتىدارى ئايرىش ئۈنۈمى ۋە ئېنىقلىقى جەھەتتە ئىنتايىن ياخشى. PMP ئىستونلىرىنىڭ ئايرىش ئىقتىدارىنىڭ ياخشىلىنىشى كۆپ خىل سەۋەبلەر تۈپەيلىدىن، مەسىلەن كرېمنىي زەررىچىلىرىنىڭ زەررىچە چوڭلۇقى ۋە تۆشۈك چوڭلۇقى، تۇراقلىق باسقۇچنىڭ كونترول قىلىنىدىغان سىنتېزى ۋە مۇرەككەپ ئىستون ئورالمىسى. يۇقىرى ئايرىش ئۈنۈمىدىن باشقا، يۇقىرى ئېقىم سۈرئىتىدە تۆۋەن ئىستون ئارقا بېسىمى بۇ تۇراقلىق باسقۇچنىڭ يەنە بىر ئەۋزەللىكى. PMP ئىستونلىرى ياخشى قايتا ئىشلەپچىقىرىش ئىقتىدارىنى نامايان قىلىدۇ ۋە ھەر خىل ئاقسىللارنىڭ پېپتىد ئارىلاشمىسى ۋە تىرىپسىن پارچىلىرىنى تەھلىل قىلىشتا ئىشلىتىشكە بولىدۇ. بىز بۇ ئىستوننى سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسىدە تەبىئىي مەھسۇلاتلار، دورىلىق ئۆسۈملۈكلەردىن ئېلىنغان بىئو ئاكتىپ بىرىكمىلەر ۋە زەمبۇرۇغ ئېكىستراكتلىرىنى ئايرىش ئۈچۈن ئىشلىتىشنى پىلانلىدۇق. كەلگۈسىدە، PMP ئىستونلىرى ئاقسىللارنى ئايرىش ۋە مونوكلونال ئانتىتېلا ئۈچۈنمۇ باھالىنىدۇ.
فىلىد، JK، ئېۋېربى، MR، لاۋ، J.، تخېگېرسېن، H. ۋە پېتېرسسون، P. تەتۈر باسقۇچلۇق خروماتوگرافىيە ئارقىلىق پېپتىد ئايرىش سىستېمىسى تەتقىقاتى I-قىسىم: ئىستون خاراكتېرىنى بېكىتىش كېلىشىمىنى تۈزۈش. J. خروماتوگرافىيە. 1603، 113–129. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
گومېز، ب. قاتارلىقلار. يۇقۇملۇق كېسەللىكلەرنى داۋالاش ئۈچۈن لايىھەلەنگەن ياخشىلانغان ئاكتىپ پېپتىدلار. بىئوتېخنىكا. ئىلغار. 36(2)، 415-429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. سۈنئىي داۋالاش پېپتىدلىرى: ئىلىم-پەن ۋە بازار. دورا بايقاش. 15 (1-2) بۈگۈن، 40-56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. ئىلغار پروتېئومىك سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسى. J. خروماتوگرافىيەسى. A 1261, 78–90 (2012).
لىيۇ، ۋ. قاتارلىقلار. ئىلغار سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسى-ماسسا سپېكترومېتىرىيەسى كەڭ دائىرىلىك نىشانلىق مېتابولومىك ۋە پروتېئومىكىنى بىرلەشتۈرۈشكە شارائىت ھازىرلايدۇ. anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ UHPLC نىڭ دورا تەرەققىياتىدىكى رولى. J. Sep. Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM تېز ئايرىش ئۈچۈن ئۇلترا يۇقىرى بېسىملىق سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسىنىڭ ئاساسىي ۋە ئەمەلىي جەھەتلىرى. J. Sep. Sci.30(8), 1167-1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. دورا تەرەققىياتىدا ئىنتايىن يۇقىرى ئۈنۈملۈك سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسىنىڭ قوللىنىلىشى. J. Cromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
گۇ، خ. قاتارلىقلار. ئېنتېروۋىرۇسنى ئۈنۈملۈك تازىلاش ئۈچۈن سۇدىكى ماي تەركىبى يۇقىرى ئىچكى باسقۇچلۇق ئېمۇلسىيەدىن تەييارلانغان مونولىت ماكرو تۆشۈكلۈك گىدروگېللار. خىمىيىلىك. ئەنگىلىيە. ژۇرنىلى 401، 126051 (2020).
شى، ي.، شياڭ، ر.، خورۋات، س. ۋە ۋىلكىنس، ج.ا. سۇيۇق خروماتوگرافىيەنىڭ پروتېئومىكادىكى رولى. ج. خروماتوگرافىيە. A 1053(1-2)، 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. داۋالاش پېپتىدلىرى ۋە ئاقسىللارنى تەتۈر باسقۇچلۇق سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسى بىلەن ئايرىشتىكى يېڭىدىن پەيدا بولغان يۈزلىنىشلەر: نەزەرىيە ۋە قوللىنىشچانلىقى. J. Pharmacy. Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC بىرىنچى ۋە ئىككىنچى ئايرىش ئۆلچىمىدىكى ئوخشىمايدىغان pH قىممىتىنى ئىشلىتىپ RP-RP-HPLC سىستېمىسى ئارقىلىق پېپتىدلارنى ئىككى ئۆلچەملىك ئايرىش. J. Sep. Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti، S. قاتارلىقلار. تولۇق ۋە يۈزەكى تۆشۈكلۈك C18 sub-2 μm زەررىچىلىرى بىلەن ئورالغان يۇقىرى ئۈنۈملۈك خروماتوگرافىيەلىك تۈۋرۈكلەرنىڭ ماسسا يۆتكىلىش خۇسۇسىيىتى ۋە كىنېتىكىلىق ئىقتىدارى تەكشۈرۈلدى. J. Sep. Sci.43 (9-10)، 1737-1745 (2020).
پىئوۋېسانا، س. قاتارلىقلار. ئۆسۈملۈك بىئوئاكتىپ پېپتىدلىرىنى ئايرىش، ئېنىقلاش ۋە جەزملەشتۈرۈشتىكى يېقىنقى يۈزلىنىشلەر ۋە ئانالىز جەھەتتىكى قىيىنچىلىقلار. anus.biological anus.Chemical.410(15)، 3425–3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Mueller، JB قاتارلىقلار. ھاياتلىق پادىشاھلىقىنىڭ پروتېئومىك مەنزىرىسى. تەبىئەت 582(7813)، 592-596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. قاتارلىقلار. تەييارلاش سۇيۇقلۇق خروماتوگرافىيەسى ئارقىلىق داۋالاش پېپتىدلىرىنى تۆۋەنگە قاراپ بىر تەرەپ قىلىش. Molecule (Basel, Switzerland) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. ئارىلاشما ھالەتتىكى خروماتوگرافىيە ۋە ئۇنىڭ بىئوپولىمېرلارغا قوللىنىلىشى. J. Cromatography. A 1218(49), 8813–8825 (2011).
جاۋ، گ.، دوڭ، خ.-ي. ۋە سۇن، ي. ئارىلاشما ھالەتتىكى ئاقسىل خروماتوگرافىيەسى ئۈچۈن بىرىكتۈرگۈچلەر: پىرىنسىپ، خاراكتېر ۋە لايىھە. J. Biotechnology.144(1)، 3-11 (2009).