Nature.com-এ আসার জন্য আপনাকে ধন্যবাদ। আপনি যে ব্রাউজার সংস্করণটি ব্যবহার করছেন তাতে CSS-এর সীমিত সমর্থন রয়েছে। সর্বোত্তম অভিজ্ঞতার জন্য, আমরা আপনাকে একটি হালনাগাদ ব্রাউজার ব্যবহার করার (অথবা ইন্টারনেট এক্সপ্লোরারে কম্প্যাটিবিলিটি মোড বন্ধ করার) পরামর্শ দিচ্ছি। আপাতত, নিরবচ্ছিন্ন সমর্থন নিশ্চিত করার জন্য, আমরা স্টাইল এবং জাভাস্ক্রিপ্ট ছাড়াই সাইটটি প্রদর্শন করব।
ম্যাক্রোপোরাস কণা পাওয়ার জন্য সল-জেল পদ্ধতিতে কিছু পরিবর্তন এনে ছিদ্রযুক্ত সিলিকা কণা প্রস্তুত করা হয়েছিল। এই কণাগুলোকে রিভার্সিবল অ্যাডিশন ফ্র্যাগমেন্টেশন চেইন ট্রান্সফার (RAFT) পলিমারাইজেশনের মাধ্যমে এন-ফিনাইলম্যালিইমাইড-মিথাইলভিনাইলআইসোসায়ানেট (PMI) এবং স্টাইরিনের সাথে ডেরিভেটাইজ করে পলিস্টাইরিনের এন-ফিনাইলম্যালিইমাইড ইন্টারক্যালেশন (PMP) স্থির দশা প্রস্তুত করা হয়েছিল। সরু-ছিদ্রযুক্ত স্টেইনলেস স্টিলের কলাম (১০০ × ১.৮ মিমি অভ্যন্তরীণ ব্যাস) স্লারি প্যাকিং দ্বারা প্যাক করা হয়েছিল। পাঁচটি পেপটাইড (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, লিউসিন এনকেফ্যালিন) সমন্বিত একটি পেপটাইড মিশ্রণের PMP কলাম পৃথকীকরণ এবং মানব সিরাম অ্যালবুমিনের (HAS) ট্রিপসিন হজম মূল্যায়ন করা হয়েছিল। সর্বোত্তম এলুশন পরিস্থিতিতে, পেপটাইড মিশ্রণের তাত্ত্বিক প্লেট সংখ্যা প্রতি বর্গমিটারে ২৮০,০০০ প্লেট পর্যন্ত হয়। বাণিজ্যিক Ascentis Express RP-Amide কলামের সাথে উন্নত কলামটির পৃথকীকরণ কর্মক্ষমতা তুলনা করে দেখা গেছে যে, পৃথকীকরণ দক্ষতা এবং রেজোলিউশনের দিক থেকে PMP কলামটির কর্মক্ষমতা বাণিজ্যিক কলামটির চেয়ে উন্নত ছিল।
সাম্প্রতিক বছরগুলিতে, বায়োফার্মাসিউটিক্যাল শিল্প একটি সম্প্রসারণশীল বৈশ্বিক বাজারে পরিণত হয়েছে এবং এর বাজার অংশীদারিত্ব উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে। বায়োফার্মাসিউটিক্যাল শিল্পের এই বিস্ফোরক বৃদ্ধির সাথে সাথে¹,²,³, পেপটাইড এবং প্রোটিনের বিশ্লেষণ অত্যন্ত কাঙ্ক্ষিত হয়ে উঠেছে। লক্ষ্য পেপটাইড ছাড়াও, পেপটাইড সংশ্লেষণের সময় বিভিন্ন অপদ্রব্য তৈরি হয়, ফলে কাঙ্ক্ষিত বিশুদ্ধতার পেপটাইড পাওয়ার জন্য ক্রোমাটোগ্রাফিক পরিশোধন প্রয়োজন হয়। শরীরের তরল পদার্থ, কলা এবং কোষের প্রোটিনের বিশ্লেষণ ও বৈশিষ্ট্য নির্ধারণ একটি অত্যন্ত কঠিন কাজ, কারণ একটিমাত্র নমুনায় বিপুল সংখ্যক সম্ভাব্য সনাক্তযোগ্য প্রজাতি থাকতে পারে। যদিও পেপটাইড এবং প্রোটিনের ক্রম নির্ধারণের জন্য ভর বর্ণালিবীক্ষণ (mass spectrometry) একটি কার্যকর সরঞ্জাম, কিন্তু যদি এই ধরনের নমুনা একবারে ভর বর্ণালিবীক্ষণ যন্ত্রে প্রবেশ করানো হয়, তবে পৃথকীকরণ আদর্শ হবে না। ভর বর্ণালিবীক্ষণ (MS) বিশ্লেষণের আগে তরল ক্রোমাটোগ্রাফি (LC) পৃথকীকরণ প্রয়োগ করে এই সমস্যাটি প্রশমিত করা যেতে পারে, যা একটি নির্দিষ্ট সময়ে ভর বর্ণালিবীক্ষণ যন্ত্রে প্রবেশকারী বিশ্লেষ্য পদার্থের সংখ্যা হ্রাস করবে⁴,⁵,⁶। এছাড়াও, তরল দশার পৃথকীকরণের সময়, বিশ্লেষ্য পদার্থগুলিকে সংকীর্ণ অঞ্চলে কেন্দ্রীভূত করা যায়, যার ফলে এই বিশ্লেষ্য পদার্থগুলি ঘনীভূত হয় এবং ভর বর্ণালিবীক্ষণ সনাক্তকরণের সংবেদনশীলতা উন্নত হয়। গত দশকে ক্রোমাটোগ্রাফি (LC) উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত হয়েছে এবং প্রোটিওমিক বিশ্লেষণে একটি জনপ্রিয় কৌশল হয়ে উঠেছে7,8,9,10।
অক্টাডেসিল-মডিফায়েড সিলিকা (ODS)-কে স্থির দশা (stationary phase) হিসেবে ব্যবহার করে পেপটাইড মিশ্রণের বিশুদ্ধকরণ এবং পৃথকীকরণের জন্য রিভার্সড-ফেজ লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি (RP-LC) ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়¹¹,¹²,¹³। তবে, RP স্থির দশাগুলো পেপটাইড এবং প্রোটিনের জটিল গঠন এবং উভমুখী (amphiphilic) প্রকৃতির কারণে তাদের সন্তোষজনক পৃথকীকরণ প্রদান করে না¹⁴,¹⁵। তাই, পেপটাইড এবং প্রোটিন বিশ্লেষণের জন্য পোলার এবং নন-পোলার অংশযুক্ত বিশেষভাবে ডিজাইন করা স্থির দশার প্রয়োজন হয়, যা এই অ্যানালাইটগুলোর সাথে মিথস্ক্রিয়া করে এবং সেগুলোকে ধরে রাখে¹⁶। মিক্সড-মোড ক্রোমাটোগ্রাফি, যা মাল্টিমোডাল মিথস্ক্রিয়া প্রদান করে, পেপটাইড, প্রোটিন এবং অন্যান্য জটিল মিশ্রণ পৃথকীকরণের জন্য RP-LC-এর একটি বিকল্প হতে পারে। বেশ কয়েকটি মিক্সড-মোড স্থির দশা প্রস্তুত করা হয়েছে, এবং এই দশাগুলো দিয়ে প্যাক করা কলামগুলো পেপটাইড এবং প্রোটিন পৃথকীকরণের জন্য ব্যবহৃত হয়েছে¹⁷,¹⁸,¹⁹,²⁰,²¹। মিক্সড-মোড স্থির দশা (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, পোলার) পোলার এবং নন-পোলার উভয় গ্রুপের উপস্থিতির কারণে ইন্টারক্যালেশন/আরপিএলসি) পেপটাইড এবং প্রোটিন পৃথকীকরণের জন্য উপযুক্ত²²,²³,²⁴,²⁵,²⁶,²⁷,²⁸। একইভাবে, সমযোজী বন্ধনে আবদ্ধ পোলার গ্রুপযুক্ত পোলার ইন্টারক্যালেটিং স্থির দশাগুলো পোলার এবং নন-পোলার অ্যানালাইটের জন্য ভালো পৃথকীকরণ ক্ষমতা এবং অনন্য নির্বাচনশীলতা দেখায়, কারণ পৃথকীকরণ অ্যানালাইট এবং স্থির দশার মধ্যেকার মিথস্ক্রিয়ার উপর নির্ভর করে। বহুবিধ মিথস্ক্রিয়া²⁹,³⁰,³¹,³²। সম্প্রতি, ঝাং প্রমুখ। ৩০ একটি ডোডেসিল-টার্মিনেটেড পলিঅ্যামাইন স্থির দশা প্রস্তুত করে সফলভাবে হাইড্রোকার্বন, অ্যান্টিডিপ্রেসেন্ট, ফ্ল্যাভোনয়েড, নিউক্লিওসাইড, ইস্ট্রোজেন এবং আরও বেশ কয়েকটি অ্যানালাইট পৃথক করা হয়েছিল। পোলার ইন্টারক্যালেটরে পোলার এবং নন-পোলার উভয় গ্রুপই থাকে, তাই এটি পেপটাইড এবং প্রোটিন পৃথক করতে ব্যবহার করা যেতে পারে, যেগুলোর হাইড্রোফোবিক এবং হাইড্রোফিলিক উভয় অংশই রয়েছে। পোলার-এমবেডেড কলাম (যেমন, অ্যামাইড-এমবেডেড C18 কলাম) বাণিজ্যিকভাবে Ascentis Express RP-Amide কলাম নামে পাওয়া যায়, কিন্তু এই কলামগুলো শুধুমাত্র অ্যামাইন ৩৩ বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহৃত হয়।
বর্তমান গবেষণায়, পেপটাইড এবং HSA-এর ট্রিপসিন ডাইজেস্ট পৃথকীকরণের জন্য একটি পোলার-এমবেডেড স্টেশনারি ফেজ (N-ফেনিলম্যালিইমাইড-এমবেডেড পলিস্টাইরিন) প্রস্তুত ও মূল্যায়ন করা হয়েছে। স্টেশনারি ফেজটি নিম্নলিখিত কৌশল ব্যবহার করে প্রস্তুত করা হয়েছিল। আমাদের পূর্ববর্তী প্রকাশনায় প্রদত্ত পদ্ধতি অনুসারে, প্রস্তুতি প্রোটোকলে কিছু পরিবর্তন সহ, ছিদ্রযুক্ত সিলিকা কণা প্রস্তুত করা হয়েছিল। বড় ছিদ্রযুক্ত সিলিকা কণা প্রস্তুত করার জন্য ইউরিয়া, পলিইথিলিন গ্লাইকোল (PEG), TMOS, জল এবং অ্যাসিটিক অ্যাসিডের অনুপাত সামঞ্জস্য করা হয়েছিল। দ্বিতীয়ত, একটি নতুন লিগ্যান্ড, ফেনাইলম্যালিইমাইড-মিথাইল ভিনাইল আইসোসায়ানেট, সংশ্লেষণ করা হয়েছিল এবং একটি পোলার এমবেডেড স্টেশনারি ফেজ প্রস্তুত করার জন্য সিলিকা কণাগুলোকে ডেরিভেটাইজ করতে এটি ব্যবহার করা হয়েছিল। ফলস্বরূপ স্টেশনারি ফেজটি অপ্টিমাইজড প্যাকিং স্কিম ব্যবহার করে একটি স্টেইনলেস স্টিল কলামে (100 × 1.8 মিমি আইডি) প্যাক করা হয়েছিল। কলামের মধ্যে একটি সমজাতীয় বেড তৈরি নিশ্চিত করার জন্য যান্ত্রিক কম্পনের মাধ্যমে কলাম প্যাকিংয়ে সহায়তা করা হয়। পাঁচটি পেপটাইড সমন্বিত পেপটাইড মিশ্রণের প্যাকড কলাম পৃথকীকরণ মূল্যায়ন করুন; (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) এবং মানব সিরাম অ্যালবুমিনের (HAS) ট্রিপসিন ডাইজেস্ট। পেপটাইড মিশ্রণ এবং HSA-এর ট্রিপসিন ডাইজেস্ট ভালো রেজোলিউশন এবং দক্ষতার সাথে পৃথক হতে দেখা গেছে। PMP কলামের পৃথকীকরণ কর্মক্ষমতা Ascentis Express RP-Amide কলামের সাথে তুলনা করা হয়েছিল। PMP কলামে পেপটাইড এবং প্রোটিন উভয়ই ভালোভাবে পৃথকীকৃত এবং কার্যকর হতে দেখা গেছে, যা Ascentis Express RP-Amide কলামের চেয়ে বেশি কার্যকর ছিল।
পিইজি (পলিইথিলিন গ্লাইকোল), ইউরিয়া, অ্যাসিটিক অ্যাসিড, ট্রাইমিথক্সি অর্থোসিলিকেট (টিএমওএস), ট্রাইমিথাইল ক্লোরোসিলেন (টিএমসিএস), ট্রিপসিন, হিউম্যান সিরাম অ্যালবুমিন (এইচএসএ), অ্যামোনিয়াম ক্লোরাইড, ইউরিয়া, হেক্সেন, মিথাইলডিসিলাজেন (এইচএমডিএস), মেথাক্রিলয়ল ক্লোরাইড (এমসি), স্টাইরিন, ৪-হাইড্রক্সি-টেম্পো, বেনজয়ল পারক্সাইড (বিপিও), এইচপিএলসি গ্রেড অ্যাসিটোনাইট্রাইল (এসিএন), মিথানল, ২-প্রোপানল এবং অ্যাসিটোন সিগমা-অলড্রিচ (সেন্ট লুইস, এমও, ইউএসএ) থেকে ক্রয়কৃত।
ইউরিয়া (৮ গ্রাম), পলিইথিলিন গ্লাইকোল (৮ গ্রাম) এবং ৮ মিলি ০.০১ N অ্যাসিটিক অ্যাসিডের একটি মিশ্রণ ১০ মিনিট ধরে নাড়ানো হয়, এবং তারপর বরফ-ঠান্ডা অবস্থায় এর সাথে ২৪ মিলি TMOS যোগ করা হয়। বিক্রিয়া মিশ্রণটিকে একটি স্টেইনলেস স্টিল অটোক্লেভে প্রথমে ৪০°C তাপমাত্রায় ৬ ঘন্টা এবং তারপর ১২০°C তাপমাত্রায় ৮ ঘন্টা ধরে উত্তপ্ত করা হয়। জল ঢেলে ফেলে দেওয়া হয় এবং অবশিষ্ট পদার্থটিকে ৭০°C তাপমাত্রায় ১২ ঘন্টা ধরে শুকানো হয়। শুকনো নরম পিণ্ডটিকে একটি ওভেনে মসৃণভাবে গুঁড়ো করা হয় এবং ৫৫০°C তাপমাত্রায় ১২ ঘন্টা ধরে ক্যালসিন করা হয়। কণার আকার, ছিদ্রের আকার এবং পৃষ্ঠতলের ক্ষেত্রফলের পুনরুৎপাদনযোগ্যতা পরীক্ষা করার জন্য তিনটি ব্যাচ প্রস্তুত ও বৈশিষ্ট্যযুক্ত করা হয়েছিল।
পূর্ব-সংশ্লেষিত লিগ্যান্ড ফিনাইলম্যালিইমাইড-মিথাইলভিনাইলআইসোসায়ানেট (PCMP) দ্বারা সিলিকা কণার পৃষ্ঠতল পরিবর্তন এবং পরবর্তীতে স্টাইরিনের সাথে রেডিয়াল পলিমারাইজেশনের মাধ্যমে একটি পোলার গ্রুপ-যুক্ত যৌগ প্রস্তুত করা হয়েছিল। এটি অ্যাগ্রিগেট এবং পলিস্টাইরিন চেইনের জন্য স্থির দশা হিসেবে কাজ করে। প্রস্তুতি প্রক্রিয়াটি নিচে বর্ণনা করা হলো।
ফেনাইলম্যালিইমাইড-মিথাইল ভিনাইল আইসোসায়ানেট কোপলিমার (PMCP) প্রস্তুত করার জন্য, ২০০ মিলিগ্রাম এন-ফেনাইলম্যালিইমাইড এবং ১০০ মিলিগ্রাম মিথাইল ভিনাইল আইসোসায়ানেট শুষ্ক টলুইনে দ্রবীভূত করা হয় এবং বিক্রিয়া ফ্লাস্কে ০.১ মিলি ২,২′-অ্যাজোআইসোবিউটিরোনাইট্রাইল (AIBN) যোগ করা হয়। মিশ্রণটিকে ৬০°C তাপমাত্রায় ৩ ঘন্টা ধরে উত্তপ্ত করা হয়, এরপর ছেঁকে নিয়ে ৪০°C তাপমাত্রায় একটি ওভেনে ৩ ঘন্টা ধরে শুকানো হয়।
একটি ৫০০ মিলি গোলতল ফ্লাস্কে ২ গ্রাম শুকনো সিলিকা কণা ১০০ মিলি শুকনো টলুইনে ছড়িয়ে দিয়ে ১০ মিনিট ধরে নাড়ানো ও সনিকেশন করা হয়েছিল। পিএমসিপি (১০ মিলিগ্রাম) টলুইনে দ্রবীভূত করে একটি ড্রপিং ফানেলের মাধ্যমে ফোঁটা ফোঁটা করে বিক্রিয়া ফ্লাস্কে যোগ করা হয়েছিল। মিশ্রণটিকে ১০০° সেলসিয়াসে ৮ ঘন্টা ধরে রিফ্লাক্স করা হয়েছিল, তারপর ছেঁকে অ্যাসিটোন দিয়ে ধুয়ে ৬০° সেলসিয়াসে ৩ ঘন্টা ধরে শুকানো হয়েছিল। এরপর, পিএমসিপি-সংযুক্ত সিলিকা কণা (১০০ গ্রাম) ২০০ মিলি টলুইনে দ্রবীভূত করা হয়েছিল এবং অনুঘটক হিসেবে ১০০ মাইক্রোলিটার ডাইবিউটিলটিন ডাইলোরেটের উপস্থিতিতে ২ মিলি ৪-হাইড্রক্সি-টেম্পো যোগ করা হয়েছিল। মিশ্রণটিকে ৫০° সেলসিয়াসে ৮ ঘন্টা ধরে নাড়ানো হয়েছিল, তারপর ছেঁকে ৫০° সেলসিয়াসে ৩ ঘন্টা ধরে শুকানো হয়েছিল।
স্টাইরিন (১ মিলি), বেনজয়েল পারক্সাইড বিপিও (০.৫ মিলি), এবং টেম্পো-পিএমসিপি-সংযুক্ত সিলিকা কণা (১.৫ গ্রাম) টলুইনে দ্রবীভূত করে নাইট্রোজেন দ্বারা পার্জ করা হয়েছিল। স্টাইরিনের পলিমারাইজেশন ১০০°C তাপমাত্রায় ১২ ঘন্টা ধরে সম্পন্ন করা হয়েছিল। প্রাপ্ত উৎপাদটিকে মিথানল দিয়ে ধুয়ে ৬০°C তাপমাত্রায় সারারাত ধরে শুকানো হয়েছিল। সামগ্রিক বিক্রিয়া পরিকল্পনা চিত্র ১-এ দেখানো হয়েছে।
নমুনাগুলোকে ৩৯৩ কেলভিন তাপমাত্রায় ১ ঘণ্টা ধরে ডিগ্যাস করা হয়েছিল, যাতে অবশিষ্ট চাপ ১০⁻³ টরের কম হয়। P/P₀ = ০.৯৯ আপেক্ষিক চাপে শোষিত নাইট্রোজেনের পরিমাণ মোট ছিদ্রের আয়তন নির্ধারণ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। খালি এবং লিগ্যান্ড-সংযুক্ত সিলিকা কণার গঠন স্ক্যানিং ইলেকট্রন মাইক্রোস্কোপি (হিটাচি হাই টেকনোলজিস, টোকিও, জাপান) দিয়ে পরীক্ষা করা হয়েছিল। শুকনো নমুনা (খালি সিলিকা এবং লিগ্যান্ড-সংযুক্ত সিলিকা কণা) আঠালো কার্বন টেপ ব্যবহার করে একটি অ্যালুমিনিয়াম কলামে স্থাপন করা হয়েছিল। একটি Q150T স্পাটার কোটার ব্যবহার করে নমুনাগুলোর উপর সোনার প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল এবং নমুনাগুলোর উপর একটি ৫ ন্যানোমিটার Au স্তর জমা করা হয়েছিল। এটি কম ভোল্টেজ ব্যবহার করে প্রক্রিয়ার দক্ষতা উন্নত করে এবং সূক্ষ্ম দানাযুক্ত কোল্ড স্পাটারিং প্রদান করে। মৌলীয় বিশ্লেষণের জন্য একটি থার্মো ইলেকট্রন (ওয়ালথাম, এমএ, ইউএসএ) ফ্ল্যাশ EA1112 এলিমেন্টাল অ্যানালাইজার ব্যবহার করা হয়েছিল। কণার আকার বন্টন পাওয়ার জন্য একটি মালভার্ন (ওরচেস্টারশায়ার, ইউকে) মাস্টারসাইজার ২০০০ পার্টিকল সাইজ অ্যানালাইজার ব্যবহার করা হয়েছিল। খালি সিলিকা কণা এবং লিগ্যান্ড-সংযুক্ত সিলিকা কণা (প্রতিটি ৫ মিলিগ্রাম) ৫ মিলি আইসোপ্রোপানলে ছড়িয়ে দেওয়া হয়, ১০ মিনিট ধরে সনিকেশন ও ৫ মিনিট ধরে ভরটেক্সিং করা হয় এবং মাস্টারসাইজারের অপটিক্যাল বেঞ্চে রাখা হয়। ৩০ থেকে ৮০০ ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রার পরিসরে প্রতি মিনিটে ৫ ডিগ্রি সেলসিয়াস হারে থার্মোগ্র্যাভিমেট্রিক বিশ্লেষণ করা হয়।
রেফারেন্সে ব্যবহৃত একই কার্যপ্রণালী প্রয়োগ করে স্লারি প্যাকিং পদ্ধতিতে (১০০ × ১.৮ মিমি অভ্যন্তরীণ ব্যাস) গ্লাস-লাইন্ড স্টেইনলেস স্টিলের সরু-ছিদ্রযুক্ত কলামগুলি প্যাক করা হয়েছিল। ৩১. একটি ১ µm ফ্রিটযুক্ত আউটলেট ফিটিং সহ একটি স্টেইনলেস স্টিল কলাম (গ্লাস-লাইন্ড, ১০০ × ১.৮ মিমি আইডি) একটি স্লারি প্যাকারের (অলটেক ডিয়ারফিল্ড, আইএল, ইউএসএ) সাথে সংযুক্ত করা হয়েছিল। ১৫০ মিলিগ্রাম স্টেশনারি ফেজকে ১.২ মিলি মিথানলে সাসপেন্ড করে একটি স্টেশনারি ফেজ স্লারি প্রস্তুত করুন এবং এটিকে স্টোরেজ কলামে পাঠান। মিথানল স্লারি সলভেন্ট এবং প্রপেলিং সলভেন্ট উভয় হিসাবেই ব্যবহৃত হয়েছিল। ১০ মিনিটের জন্য ১০০ এমপি, ১৫ মিনিটের জন্য ৮০ এমপি এবং ৩০ মিনিটের জন্য ৬০ এমপি চাপ প্রয়োগ করে পর্যায়ক্রমে কলামটি পূরণ করুন। প্যাকিংয়ের সময়, কলামের ইউনিফর্ম প্যাকিং নিশ্চিত করার জন্য দুটি জিসি কলাম শেকার (অলটেক, ডিয়ারফিল্ড, আইএল, ইউএসএ) দিয়ে যান্ত্রিক কম্পন প্রয়োগ করা হয়েছিল। স্লারি প্যাকারটি বন্ধ করুন এবং কলামের ভিতরে কোনও ক্ষতি রোধ করতে ধীরে ধীরে চাপ ছেড়ে দিন। স্লারি প্যাকিং ইউনিট থেকে কলামটি সংযোগ বিচ্ছিন্ন করুন এবং ইনলেট ও ​​এলসি সিস্টেমে অন্য একটি ফিটিং সংযুক্ত করুন। এর কর্মক্ষমতা যাচাই করুন।
একটি এলসি পাম্প (10AD শিমাজু, জাপান), ৫০ ন্যানোলিটার ইনজেকশন লুপসহ ইনজেক্টর (ভ্যালকো (ইউএসএ) C14 W.05), মেমব্রেন ডিগ্যাসার (শিমাজু DGU-14A), ইউভি-ভিআইএস ক্যাপিলারি উইন্ডো, বিশেষ মাইক্রোএলসি ডিভাইস ডিটেক্টর (UV-2075) এবং গ্লাস-লাইন্ড মাইক্রোকলাম দিয়ে এটি তৈরি করা হয়েছিল। অতিরিক্ত কলাম ব্যান্ড ব্রডনিং-এর প্রভাব কমানোর জন্য খুব সরু এবং ছোট সংযোগকারী টিউবিং ব্যবহার করা হয়েছিল। প্যাকেজিং-এর পরে, ক্যাপিলারি (৫০ মাইক্রোমিটার আইডি ৩৬৫) এবং রিডিউসিং ইউনিয়ন ক্যাপিলারি (৫০ মাইক্রোমিটার) রিডিউসিং ইউনিয়নের ১/১৬″ আউটলেটে স্থাপন করা হয়েছিল। মাল্টিক্রো ২০০০ সফটওয়্যার ব্যবহার করে ডেটা সংগ্রহ এবং ক্রোমাটোগ্রাফিক প্রক্রিয়াকরণ করা হয়েছিল। ২৫৪ ন্যানোমিটারে পর্যবেক্ষণ করে অ্যানালাইটগুলোর ইউভি অ্যাবজর্বেন্স পরীক্ষা করা হয়েছিল। ক্রোমাটোগ্রাফিক ডেটা অরিজিনপ্রো৮ (নর্থহ্যাম্পটন, এমএ) দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।
মানব সিরাম থেকে প্রাপ্ত অ্যালবুমিন, লাইওফিলাইজড পাউডার, ≥ ৯৬% (অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস) ৩ মিলিগ্রাম, ট্রিপসিন (১.৫ মিলিগ্রাম), ৪.০ মোলার ইউরিয়া (১ মিলি) এবং ০.২ মোলার অ্যামোনিয়াম বাইকার্বোনেট (১ মিলি)-এর সাথে মেশানো হলো। দ্রবণটি ১০ মিনিট ধরে নাড়ানো হলো এবং ৩৭° সেলসিয়াস তাপমাত্রার ওয়াটার বাথে ৬ ঘন্টা রাখা হলো, তারপর ১ মিলি ০.১% টিএফএ দিয়ে প্রশমিত করা হলো। দ্রবণটি ছেঁকে নিন এবং ৪° সেলসিয়াসের নিচে সংরক্ষণ করুন।
PMP কলামে পেপটাইড মিশ্রণ এবং HSA ট্রিপসিন ডাইজেস্টের পৃথকীকরণ আলাদাভাবে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। PMP কলাম দ্বারা পেপটাইড মিশ্রণ এবং HSA-এর ট্রিপসিন ডাইজেস্টের পৃথকীকরণ পরীক্ষা করুন এবং ফলাফলগুলি Ascentis Express RP-Amide কলামের সাথে তুলনা করুন। তাত্ত্বিক প্লেট সংখ্যা নিম্নরূপ গণনা করা হয়:
চিত্র ২-এ খালি সিলিকা কণা এবং লিগ্যান্ড-সংযুক্ত সিলিকা কণার SEM চিত্র দেখানো হয়েছে। খালি সিলিকা কণার (A, B) SEM চিত্র থেকে দেখা যায় যে, আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার বিপরীতে, এই কণাগুলো গোলাকার এবং এদের প্রতিসাম্য দীর্ঘায়িত বা অনিয়মিত। লিগ্যান্ড-সংযুক্ত সিলিকা কণার (C, D) পৃষ্ঠতল খালি সিলিকা কণার চেয়ে মসৃণ, যা সিলিকা কণার পৃষ্ঠে পলিস্টাইরিন শৃঙ্খলের আবরণের কারণে হতে পারে।
লিগ্যান্ডবিহীন সিলিকা কণা (A, B) এবং লিগ্যান্ড-সংযুক্ত সিলিকা কণার (C, D) স্ক্যানিং ইলেকট্রন মাইক্রোস্কোপ চিত্র।
খালি সিলিকা কণা এবং লিগ্যান্ড-আবদ্ধ সিলিকা কণার কণার আকার বন্টন চিত্র 3(A)-তে দেখানো হয়েছে। আয়তন-ভিত্তিক কণার আকার বন্টন রেখাচিত্রগুলি দেখিয়েছে যে রাসায়নিক পরিবর্তনের পরে সিলিকা কণার আকার বৃদ্ধি পেয়েছে (চিত্র 3A)। বর্তমান গবেষণা এবং পূর্ববর্তী গবেষণা থেকে প্রাপ্ত সিলিকা কণার কণার আকার বন্টনের তথ্য সারণি 1(A)-তে তুলনা করা হয়েছে। PMP-এর আয়তন-ভিত্তিক কণার আকার, d(0.5), হল 3.36 μm, যা আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার ad(0.5) মান 3.05 μm (পলিস্টাইরিন-আবদ্ধ সিলিকা কণা)34-এর তুলনায় কম। বিক্রিয়া মিশ্রণে PEG, ইউরিয়া, TMOS, এবং অ্যাসিটিক অ্যাসিডের বিভিন্ন অনুপাতের কারণে এই ব্যাচের কণার আকার বন্টন আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার তুলনায় সংকীর্ণ ছিল। PMP পর্যায়ের কণার আকার আমাদের পূর্বে অধ্যয়ন করা পলিস্টাইরিন-আবদ্ধ সিলিকা কণা পর্যায়ের চেয়ে সামান্য বড়। এর মানে হল যে স্টাইরিন দিয়ে সিলিকা কণার পৃষ্ঠতল কার্যকরীকরণ কেবল সিলিকার উপর একটি পলিস্টাইরিন স্তর (0.97 µm) জমা করেছে। পৃষ্ঠতল, যেখানে PMP পর্যায়ে স্তরটির পুরুত্ব ছিল ১.৩৮ µm।
অ-লিগ্যান্ড সিলিকা কণা এবং লিগ্যান্ড-আবদ্ধ সিলিকা কণার কণার আকার বন্টন (A) এবং ছিদ্রের আকার বন্টন (B)।
বর্তমান গবেষণার সিলিকা কণাগুলির ছিদ্রের আকার, ছিদ্রের আয়তন এবং পৃষ্ঠতলের ক্ষেত্রফল সারণি 1(B)-তে দেওয়া হয়েছে। লিগ্যান্ড-যুক্ত সিলিকা কণা এবং লিগ্যান্ড-যুক্ত সিলিকা কণাগুলির PSD প্রোফাইল চিত্র 3(B)-তে দেখানো হয়েছে। ফলাফলগুলি আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার সাথে তুলনীয়। লিগ্যান্ড-যুক্ত সিলিকা কণাগুলির ছিদ্রের আকার যথাক্রমে 310 এবং 241, যা নির্দেশ করে যে রাসায়নিক পরিবর্তনের পরে ছিদ্রের আকার 69 কমে যায়, যেমনটি সারণি 1(B)-তে দেখানো হয়েছে, এবং বক্ররেখার পরিবর্তন চিত্র 3(B)-তে দেখানো হয়েছে। একইভাবে, রাসায়নিক পরিবর্তনের পরে সিলিকা কণাগুলির ছিদ্রের আয়তন 0.67 থেকে 0.58 cm³/g-তে কমে গেছে। বর্তমানে অধ্যয়ন করা সিলিকা কণাগুলির নির্দিষ্ট পৃষ্ঠতলের ক্ষেত্রফল 116 m²/g, যা আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার (124 m²/g) সাথে তুলনীয়। সারণি 1(B)-তে যেমন দেখানো হয়েছে, সিলিকা কণাগুলির পৃষ্ঠতলের ক্ষেত্রফল (m²/g) 116 থেকে কমে গেছে। রাসায়নিক পরিবর্তনের পর m²/g থেকে 105 m²/g।
স্থির দশার মৌলিক বিশ্লেষণের ফলাফল সারণী 2-এ দেখানো হয়েছে। বর্তমান স্থির দশার কার্বন লোডিং হল 6.35%, যা আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার (পলিস্টাইরিন সংযুক্ত সিলিকা কণা, যথাক্রমে 7.93%35 এবং 10.21%) 42 কার্বন লোডিং এর চেয়ে কম। বর্তমান স্থির দশার কার্বন লোডিং কম, কারণ বর্তমান এসপি (SP) প্রস্তুতিতে, স্টাইরিন ছাড়াও, কিছু পোলার লিগ্যান্ড যেমন ফিনাইলম্যালিইমাইড-মিথাইলভিনাইলআইসোসায়ানেট (PCMP) এবং 4-হাইড্রোক্সি-টেম্পো (4-hydroxy-TEMPO) ব্যবহার করা হয়েছিল। বর্তমান স্থির দশার নাইট্রোজেনের ওজন শতাংশ হল 2.21%, যেখানে পূর্ববর্তী গবেষণায় নাইট্রোজেনের ওজন শতাংশ ছিল যথাক্রমে 0.1735 এবং 0.85%। এর মানে হল যে ফিনাইলম্যালিইমাইডের কারণে বর্তমান স্থির দশায় নাইট্রোজেনের ওজন শতাংশ বেশি। একইভাবে, পণ্য (4) এবং (5) এর কার্বন লোডিং ছিল যথাক্রমে 2.7% এবং 2.9%, যেখানে চূড়ান্ত উৎপাদ (6)-এর কার্বন লোডিং ছিল 6.35%, যা সারণি 2-তে দেখানো হয়েছে। PMP স্থির দশার সাহায্যে ওজন হ্রাস পরীক্ষা করা হয়েছিল, এবং TGA বক্ররেখাটি চিত্র 4-এ দেখানো হয়েছে। TGA বক্ররেখাটি 8.6% ওজন হ্রাস দেখায়, যা কার্বন লোডিং (6.35%)-এর সাথে ভালভাবে সামঞ্জস্যপূর্ণ কারণ লিগ্যান্ডগুলিতে কেবল C নয়, N, O, এবং H-ও রয়েছে।
সিলিকা কণার পৃষ্ঠতল পরিবর্তনের জন্য ফিনাইলম্যালিইমাইড-মিথাইলভিনাইলআইসোসায়ানেট লিগ্যান্ডটি বেছে নেওয়া হয়েছিল কারণ এতে পোলার ফিনাইলম্যালিইমাইড গ্রুপ এবং ভিনাইলআইসোসায়ানেট গ্রুপ রয়েছে। ভিনাইল আইসোসায়ানেট গ্রুপগুলি লিভিং র‍্যাডিক্যাল পলিমারাইজেশনের মাধ্যমে স্টাইরিনের সাথে আরও বিক্রিয়া করতে পারে। দ্বিতীয় কারণটি হলো এমন একটি গ্রুপ যুক্ত করা যার অ্যানালাইটের সাথে মাঝারি মিথস্ক্রিয়া রয়েছে এবং অ্যানালাইট ও স্থির দশার মধ্যে কোনো শক্তিশালী স্থিরবৈদ্যুতিক মিথস্ক্রিয়া নেই, যেহেতু স্বাভাবিক pH-এ ফিনাইলম্যালিইমাইড অংশে কোনো ভার্চুয়াল চার্জ থাকে না। স্থির দশার পোলারিটি স্টাইরিনের সর্বোত্তম পরিমাণ এবং ফ্রি র‍্যাডিক্যাল পলিমারাইজেশনের বিক্রিয়ার সময় দ্বারা নিয়ন্ত্রণ করা যেতে পারে। বিক্রিয়ার শেষ ধাপ (ফ্রি-র‍্যাডিক্যাল পলিমারাইজেশন) অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ এবং এটি স্থির দশার পোলারিটি পরিবর্তন করতে পারে। এই স্থির দশাগুলির কার্বন লোডিং পরীক্ষা করার জন্য মৌলীয় বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। দেখা গেছে যে স্টাইরিনের পরিমাণ এবং বিক্রিয়ার সময় বাড়ালে স্থির দশার কার্বন লোডিং বৃদ্ধি পায় এবং এর বিপরীতটিও ঘটে। স্টাইরিনের বিভিন্ন ঘনত্ব দিয়ে প্রস্তুত স্থির দশাগুলির কার্বন লোডিং ভিন্ন ভিন্ন হয়। আবার, এই স্থির দশাগুলিকে স্টেইনলেস স্টিলে লোড করুন। স্টিল কলাম ব্যবহার করে তাদের ক্রোমাটোগ্রাফিক কার্যকারিতা (নির্বাচনশীলতা, রেজোলিউশন, N মান, ইত্যাদি) পরীক্ষা করা হয়। এই পরীক্ষাগুলোর উপর ভিত্তি করে, নিয়ন্ত্রিত পোলারিটি এবং ভালো অ্যানালাইট রিটেনশন নিশ্চিত করার জন্য PMP স্টেশনারি ফেজ প্রস্তুত করতে একটি অপ্টিমাইজড ফর্মুলেশন নির্বাচন করা হয়েছিল।
একটি মোবাইল ফেজ ব্যবহার করে PMP কলামের মাধ্যমে পাঁচটি পেপটাইড মিশ্রণ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, লিউসিন এনকেফ্যালিন) মূল্যায়ন করা হয়েছিল; ৬০/৪০ (v/v) অ্যাসিটোনাইট্রাইল/পানি (০.১% TFA) ৮০ μL/min প্রবাহ হারে। সর্বোত্তম এলুশন পরিস্থিতিতে, প্রতি কলামে (১০০ × ১.৮ মিমি আইডি) তাত্ত্বিক প্লেট সংখ্যা (N) হলো ২০,০০০ ± ১০০ (২০০,০০০ প্লেট/মি²)। সারণি ৩-এ তিনটি PMP কলামের জন্য N-এর মান দেওয়া হয়েছে এবং ক্রোমাটোগ্রামগুলো চিত্র ৫A-তে দেখানো হয়েছে। একটি PMP কলামে উচ্চ প্রবাহ হারে (৭০০ μL/min) দ্রুত বিশ্লেষণে, এক মিনিটের মধ্যে পাঁচটি পেপটাইড এলুটেড হয়েছিল, N-এর মান খুব ভালো ছিল, প্রতি কলামে (১০০ × ১.৮ মিমি আইডি) ১৩,৫০০ ± ৩৩০, যা ১৩৫,০০০ প্লেট/মি²-এর সমতুল্য (চিত্র ৫B)। তিনটি একই আকারের কলাম। পুনরুৎপাদনযোগ্যতা যাচাই করার জন্য তিনটি ভিন্ন লটের PMP স্থির দশা দিয়ে ১০০ × ১.৮ মিমি অভ্যন্তরীণ ব্যাসের কলামগুলো প্যাক করা হয়েছিল। প্রতিটি কলামে একই পরীক্ষামূলক মিশ্রণকে পৃথক করার জন্য সর্বোত্তম এলুশন শর্ত, তাত্ত্বিক প্লেটের সংখ্যা N এবং রিটেনশন টাইম ব্যবহার করে প্রতিটি কলামের জন্য অ্যানালাইটের ঘনত্ব রেকর্ড করা হয়েছিল। PMP কলামগুলোর পুনরুৎপাদনযোগ্যতার ডেটা সারণি ৪-এ দেখানো হয়েছে। সারণি ৩-এ যেমন দেখানো হয়েছে, PMP কলামের পুনরুৎপাদনযোগ্যতা অত্যন্ত কম %RSD মানের সাথে ভালোভাবে সামঞ্জস্যপূর্ণ।
PMP কলাম (B) এবং Ascentis Express RP-Amide কলাম (A)-এ পেপটাইড মিশ্রণের পৃথকীকরণ; মোবাইল ফেজ ৬০/৪০ ACN/H2O (TFA ০.১%), PMP কলামের মাপ (১০০ × ১.৮ মিমি আইডি); যৌগগুলির বিশ্লেষণাত্মক এলুশনের ক্রম: ১ (Gly-Tyr), ২ (Gly-Leu-Tyr), ৩ (Gly-Gly-Tyr-Arg), ৪ (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) এবং ৫ (লিউসিন অ্যাসিড এনকেফ্যালিন)।
হাই পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফিতে হিউম্যান সিরাম অ্যালবুমিনের ট্রিপটিক ডাইজেস্ট পৃথকীকরণের জন্য একটি পিএমপি কলাম (১০০ × ১.৮ মিমি আইডি) মূল্যায়ন করা হয়েছিল। চিত্র ৬-এর ক্রোমাটোগ্রামটি দেখায় যে নমুনাটি ভালোভাবে পৃথক হয়েছে এবং রেজোলিউশন খুব ভালো। ১০০ µL/মিনিট প্রবাহ হার, ৭০/৩০ অ্যাসিটোনাইট্রাইল/জল মোবাইল ফেজ এবং ০.১% টিএফএ ব্যবহার করে এইচএসএ ডাইজেস্ট বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। ক্রোমাটোগ্রামে (চিত্র ৬) যেমন দেখানো হয়েছে, এইচএসএ ডাইজেশনটি ১৭টি পেপটাইডের সাথে সঙ্গতিপূর্ণ ১৭টি পিকে বিভক্ত হয়েছে। এইচএসএ ডাইজেস্টের প্রতিটি পিকের পৃথকীকরণ দক্ষতা গণনা করা হয়েছিল এবং মানগুলি সারণি ৫-এ দেওয়া হয়েছে।
একটি PMP কলামে HSA-এর (100 × 1.8 মিমি আইডি) ট্রিপটিক ডাইজেস্ট পৃথক করা হয়েছিল; প্রবাহের হার (100 µL/মিনিট), সচল দশা ছিল 60/40 অ্যাসিটোনাইট্রাইল/পানি যাতে 0.1% TFA মেশানো ছিল।
যেখানে L হলো কলামের দৈর্ঘ্য, η হলো সচল দশার সান্দ্রতা, ΔP হলো কলামের পশ্চাৎচাপ, এবং u হলো সচল দশার রৈখিক বেগ। PMP কলামের ভেদ্যতা ছিল 2.5 × 10⁻¹⁴ m², প্রবাহের হার ছিল 25 μL/min, এবং 60/40 v/v ACN/পানি ব্যবহার করা হয়েছিল। PMP কলামের (100 × 1.8 mm id) ভেদ্যতা আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণা (রেফারেন্স 34)-এর অনুরূপ ছিল। উপরিভাগে ছিদ্রযুক্ত কণা দ্বারা প্যাক করা কলামের ভেদ্যতা হলো: 1.3 μm কণার জন্য 1.7 × 10⁻¹⁵, 1.7 μm কণার জন্য 3.1 × 10⁻¹⁵, 2.6 μm কণার জন্য 5.2 × 10⁻¹⁵ এবং 2.5 × 10⁻¹⁴ m²। 5 μm কণার জন্য। ৪৩. অতএব, পিএমপি দশার ভেদ্যতা ৫ মাইক্রোমিটার কোর-শেল কণার ভেদ্যতার অনুরূপ।
যেখানে Wx হলো ক্লোরোফর্ম দিয়ে প্যাক করা কলামের ওজন, Wy হলো মিথানল দিয়ে প্যাক করা কলামের ওজন, এবং ρ হলো দ্রাবকের ঘনত্ব। মিথানল (ρ = ০.৭৮৬৬) এবং ক্লোরোফর্মের (ρ = ১.৪৮৪) ঘনত্ব। আমরা পূর্বে যে সিলিকা পার্টিকেলস-C18 কলাম (১০০ × ১.৮ মিমি আইডি)³⁴ এবং C18-ইউরিয়া কলাম³¹ নিয়ে গবেষণা করেছি, সেগুলোর মোট পোরোসিটি ছিল যথাক্রমে ০.৬৩ এবং ০.৫৫। এর অর্থ হলো, ইউরিয়া লিগ্যান্ডের উপস্থিতি স্থির দশার ভেদ্যতা হ্রাস করে। অন্যদিকে, PMP কলামের (১০০ × ১.৮ মিমি আইডি) মোট পোরোসিটি হলো ০.৬০। PMP কলামের ভেদ্যতা C18-বন্ডেড সিলিকা পার্টিকেল দিয়ে প্যাক করা কলামের চেয়ে কম, কারণ C18-ধরণের স্থির দশায় C18 লিগ্যান্ডগুলো সিলিকা কণার সাথে সংযুক্ত থাকে। রৈখিক শৃঙ্খলের ক্ষেত্রে, পলিস্টাইরিন-জাতীয় স্থির দশায় এর চারপাশে একটি অপেক্ষাকৃত পুরু পলিমার স্তর গঠিত হয়। একটি সাধারণ পরীক্ষায়, কলামের ছিদ্রতা নিম্নরূপে গণনা করা হয়:
চিত্র ৭এ,বি-তে একই এলুশন শর্ত (অর্থাৎ, ৬০/৪০ এসিএন/এইচ২ও এবং ০.১% টিএফএ) ব্যবহার করে পিএমপি কলাম (১০০ × ১.৮ মিমি আইডি) এবং অ্যাসেন্টিস এক্সপ্রেস আরপি-অ্যামাইড কলাম (১০০ × ১.৮ মিমি আইডি) দেখানো হয়েছে। নির্বাচিত পেপটাইড মিশ্রণ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) ২০ µL/মিনিটে প্রস্তুত করা হয়েছিল। উভয় কলামের জন্য সর্বনিম্ন প্রবাহ হার হল ৮০০ µL/মিনিট। PMP কলাম এবং Ascentis Express RP-Amide কলামের জন্য সর্বোত্তম প্রবাহ হারে (৮০ µL/মিনিট) সর্বনিম্ন HETP মান ছিল যথাক্রমে ২.৬ µm এবং ৩.৯ µm। HETP মানগুলি নির্দেশ করে যে PMP কলামের (১০০ × ১.৮ মিমি id) পৃথকীকরণ দক্ষতা বাণিজ্যিকভাবে উপলব্ধ Ascentis Express RP-Amide কলামের (১০০ × ১.৮ মিমি id) চেয়ে অনেক ভালো। চিত্র ৭(A)-তে ভ্যান ডিমটার প্লট দেখায় যে প্রবাহ বৃদ্ধির সাথে N মানের হ্রাস ঘটে। আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার তুলনায় উল্লেখযোগ্য নয়। Ascentis Express RP-Amide কলামের তুলনায় PMP কলামের (100 × 1.8 মিমি id) উচ্চতর পৃথকীকরণ দক্ষতা বর্তমান গবেষণায় ব্যবহৃত কণার আকৃতি, আকার এবং জটিল কলাম প্যাকিং পদ্ধতির উন্নতির উপর ভিত্তি করে তৈরি হয়েছে।
(A) 0.1% TFA সহ 60/40 ACN/H2O দ্রবণে একটি PMP কলাম (100 × 1.8 মিমি id) ব্যবহার করে প্রাপ্ত ভ্যান ডিমটার প্লট (HETP বনাম মোবাইল ফেজের রৈখিক বেগ)। (B) 0.1% TFA সহ 60/40 ACN/H2O দ্রবণে একটি Ascentis Express RP-Amide কলাম (100 × 1.8 মিমি id) ব্যবহার করে প্রাপ্ত ভ্যান ডিমটার প্লট (HETP বনাম মোবাইল ফেজের রৈখিক বেগ)।
হাই পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফিতে সিন্থেটিক পেপটাইড মিশ্রণ এবং হিউম্যান সিরাম অ্যালবুমিন (HAS)-এর ট্রিপসিন ডাইজেস্ট পৃথকীকরণের জন্য একটি পোলার-এমবেডেড পলিস্টাইরিন স্টেশনারি ফেজ প্রস্তুত ও মূল্যায়ন করা হয়েছিল। পেপটাইড মিশ্রণের জন্য PMP কলামের ক্রোমাটোগ্রাফিক পারফরম্যান্স পৃথকীকরণ দক্ষতা এবং রেজোলিউশনের দিক থেকে চমৎকার। PMP কলামের এই উন্নত পৃথকীকরণ পারফরম্যান্সের বিভিন্ন কারণ রয়েছে, যেমন সিলিকা কণার কণার আকার ও ছিদ্রের আকার, স্টেশনারি ফেজের নিয়ন্ত্রিত সংশ্লেষণ এবং জটিল কলাম প্যাকিং। উচ্চ পৃথকীকরণ দক্ষতার পাশাপাশি, উচ্চ প্রবাহ হারে কলামের কম ব্যাক প্রেশার এই স্টেশনারি ফেজের আরেকটি সুবিধা। PMP কলামগুলো ভালো পুনরুৎপাদনযোগ্যতা প্রদর্শন করে এবং পেপটাইড মিশ্রণ ও বিভিন্ন প্রোটিনের ট্রিপসিন ডাইজেশন বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে। আমরা লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফিতে প্রাকৃতিক পণ্য, ঔষধি উদ্ভিদ থেকে প্রাপ্ত বায়োঅ্যাক্টিভ যৌগ এবং ছত্রাকের নির্যাস পৃথকীকরণের জন্য এই কলামটি ব্যবহার করতে চাই। ভবিষ্যতে, প্রোটিন এবং মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি পৃথকীকরণের জন্যও PMP কলাম মূল্যায়ন করা হবে।
ফিল্ড, জে.কে., ইউয়ারবি, এম.আর., লাউ, জে., থোর্গারসেন, এইচ. ও পিটারসন, পি.। রিভার্সড ফেজ ক্রোমাটোগ্রাফি দ্বারা পেপটাইড পৃথকীকরণ সিস্টেমের উপর গবেষণা পর্ব ১: একটি কলাম বৈশিষ্ট্যকরণ প্রোটোকলের উন্নয়ন। জে. ক্রোমাটোগ্রাফি। ১৬০৩, ১১৩–১২৯। https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (২০১৯)।
গোমেজ, বি. এট আল. সংক্রামক রোগের চিকিৎসার জন্য ডিজাইন করা উন্নত সক্রিয় পেপটাইড। বায়োটেকনোলজি.অ্যাডভান্সড.36(2), 415-429। https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018)।
ভ্লিঘে, পি., লিসোস্কি, ভি., মার্টিনেজ, জে. এবং ক্রেস্টচ্যাটিস্কি, এম.। সিন্থেটিক থেরাপিউটিক পেপটাইড: বিজ্ঞান এবং বাজার। ড্রাগ ডিসকভারি। 15 (1-2) টুডে, 40-56। https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010)।
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. অ্যাডভান্সড প্রোটিওমিক লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি। J. Chromatography.A 1261, 78–90 (2012)।
লিউ, ডব্লিউ. এট আল. উন্নত লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি-মাস স্পেকট্রোমেট্রি ব্যাপকভাবে লক্ষ্যযুক্ত মেটাবোলোমিক্স এবং প্রোটিওমিক্সের অন্তর্ভুক্তি সক্ষম করে। অ্যানাস.চিম.অ্যাক্টা ১০৬৯, ৮৯–৯৭ (২০১৯)।
চেসনাট, এসএম এবং স্যালিসবারি, জেজে ঔষধ উন্নয়নে UHPLC-এর ভূমিকা। জে. সেপ. সাই. 30(8), 1183-1190 (2007)।
উ, এন. এবং ক্লাউসেন, এএম. দ্রুত পৃথকীকরণের জন্য অতি উচ্চ চাপ তরল ক্রোমাটোগ্রাফির মৌলিক এবং ব্যবহারিক দিক। জে. সেপ. সাই. 30(8), 1167-1182। https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007)।
রেন, এসএ এবং চেলিচেফ, পি। ঔষধ উন্নয়নে আল্ট্রা-হাই পারফরম্যান্স লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফির প্রয়োগ। জে. ক্রোমাটোগ্রাফি। 1119 (1-2), 140-146। https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006)।
গু, এইচ. প্রমুখ। এন্টারোভাইরাসের কার্যকর বিশুদ্ধকরণের জন্য তেল-জলে উচ্চ অভ্যন্তরীণ দশা ইমালশন থেকে প্রস্তুত মনোলিথিক ম্যাক্রোপোরাস হাইড্রোজেল। কেমিক্যাল ব্রিটেন জার্নাল ৪০১, ১২৬০৫১ (২০২০)।
শি, ওয়াই., জিয়াং, আর., হোরভাথ, সি. এবং উইলকিন্স, জে.এ. প্রোটিওমিক্সে লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফির ভূমিকা। জে. ক্রোমাটোগ্রাফি.এ 1053(1-2), 27-36 (2004)।
ফেকাতে, এস., ভিউথে, জে.-এল. এবং গিলার্ম, ডি.। চিকিৎসাগত পেপটাইড এবং প্রোটিনের রিভার্সড-ফেজ লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি পৃথকীকরণে উদীয়মান প্রবণতা: তত্ত্ব এবং প্রয়োগ। জে. ফার্মেসি.বায়োমেডিকেল সায়েন্স.অ্যানাস.৬৯, ৯-২৭ (২০১২)।
গিলার, এম., অলিভোভা, পি., ডেলি, এ.ই. এবং গেবলার, জে.সি. প্রথম এবং দ্বিতীয় পৃথকীকরণ মাত্রায় বিভিন্ন pH মান ব্যবহার করে একটি RP-RP-HPLC সিস্টেমের মাধ্যমে পেপটাইডের দ্বি-মাত্রিক পৃথকীকরণ। জে. সেপ. সাই. 28(14), 1694-1703 (2005)।
ফেলেটি, এস. এট আল। C18 সাব-২ μm সম্পূর্ণ এবং উপরিভাগে ছিদ্রযুক্ত কণা দ্বারা প্যাক করা উচ্চ-দক্ষতা সম্পন্ন ক্রোমাটোগ্রাফিক কলামের ভর স্থানান্তর বৈশিষ্ট্য এবং গতিগত কার্যকারিতা তদন্ত করা হয়েছিল। জে. সেপ. সাই. 43 (9-10), 1737-1745 (2020)।
পিওভেসানা, এস. এট আল. উদ্ভিদের জৈব সক্রিয় পেপটাইডের বিচ্ছিন্নকরণ, সনাক্তকরণ এবং বৈধকরণের সাম্প্রতিক প্রবণতা এবং বিশ্লেষণাত্মক চ্যালেঞ্জ। কেমিক্যাল। 410(15), 3425–3444। https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018)।
মুলার, জেবি এট আল। জীবন রাজ্যের প্রোটিওমিক ল্যান্ডস্কেপ। নেচার 582(7813), 592-596। https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020)।
ডেলুকা, সি. এট আল. প্রস্তুতিমূলক তরল ক্রোমাটোগ্রাফি দ্বারা থেরাপিউটিক পেপটাইডের ডাউনস্ট্রিম প্রক্রিয়াকরণ। মলিকিউল (বাসেল, সুইজারল্যান্ড) 26(15), 4688(2021)।
ইয়াং, ওয়াই. এবং গেং, এক্স. মিশ্র-মোড ক্রোমাটোগ্রাফি এবং জৈব পলিমারে এর প্রয়োগ। জে. ক্রোমাটোগ্রাফি.এ 1218(49), 8813–8825 (2011)।
ঝাও, জি., ডং, এক্স.-ওয়াই. এবং সান, ওয়াই. মিশ্র-মোড প্রোটিন ক্রোমাটোগ্রাফির জন্য লিগ্যান্ড: নীতি, বৈশিষ্ট্য এবং নকশা। জে. বায়োটেকনোলজি। 144 (1), 3-11 (2009)।