Nature.com পরিদর্শন করার জন্য আপনাকে ধন্যবাদ। আপনি যে ব্রাউজার সংস্করণটি ব্যবহার করছেন তাতে CSS-এর জন্য সীমিত সমর্থন রয়েছে। সেরা অভিজ্ঞতার জন্য, আমরা আপনাকে একটি আপডেট করা ব্রাউজার ব্যবহার করার পরামর্শ দিচ্ছি (অথবা ইন্টারনেট এক্সপ্লোরারে সামঞ্জস্যতা মোড বন্ধ করুন)। ইতিমধ্যে, অব্যাহত সমর্থন নিশ্চিত করার জন্য, আমরা স্টাইল এবং জাভাস্ক্রিপ্ট ছাড়াই সাইটটি প্রদর্শন করব।
ছিদ্রযুক্ত সিলিকা কণাগুলি ম্যাক্রোপোরাস কণাগুলি পেতে কিছু পরিবর্তন সহ একটি সল-জেল পদ্ধতি দ্বারা প্রস্তুত করা হয়েছিল। এই কণাগুলিকে N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) এবং styrene দিয়ে বিপরীতমুখী সংযোজন ফ্র্যাগমেন্টেশন চেইন ট্রান্সফার (RAFT) পলিমারাইজেশন দ্বারা ডেরিভেটিজ করা হয়েছিল যাতে পলিস্টাইরিন (PMP) স্থির পর্যায়ের N-phenylmaleimide ইন্টারক্যালেশন প্রস্তুত করা যায়। ন্যারো-বোর স্টেইনলেস স্টিলের কলাম (100 × 1.8 মিমি আইডি) স্লারি প্যাকিং দ্বারা প্যাক করা হয়েছিল। পাঁচটি পেপটাইড (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) ক্রোমাটোগ্রাফিক কর্মক্ষমতা) এবং মানব সিরাম অ্যালবুমিন (HAS) এর ট্রিপসিন হজম সমন্বিত একটি পেপটাইড মিশ্রণের PMP কলাম বিচ্ছেদ মূল্যায়ন করা হয়েছে। সর্বোত্তম নির্গমন অবস্থার অধীনে, পেপটাইড মিশ্রণের তাত্ত্বিক প্লেট গণনা 280,000 প্লেট/m² পর্যন্ত বেশি। বাণিজ্যিকের সাথে উন্নত কলামের বিচ্ছেদ কর্মক্ষমতা তুলনা করা হচ্ছে অ্যাসেনটিস এক্সপ্রেস আরপি-অ্যামাইড কলামে, দেখা গেছে যে পিএমপি কলামের বিচ্ছেদ কর্মক্ষমতা বিচ্ছেদ দক্ষতা এবং রেজোলিউশনের দিক থেকে বাণিজ্যিক কলামের চেয়ে উন্নত ছিল।
সাম্প্রতিক বছরগুলিতে, জৈব-ঔষধ শিল্প একটি ক্রমবর্ধমান বৈশ্বিক বাজারে পরিণত হয়েছে যার বাজার অংশীদারিত্ব উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে। জৈব-ঔষধ শিল্পের বিস্ফোরক বৃদ্ধির সাথে সাথে 1,2,3, পেপটাইড এবং প্রোটিন বিশ্লেষণ অত্যন্ত কাঙ্ক্ষিত। লক্ষ্য পেপটাইড ছাড়াও, পেপটাইড সংশ্লেষণের সময় বেশ কয়েকটি অমেধ্য তৈরি হয়, যার ফলে কাঙ্ক্ষিত বিশুদ্ধতার পেপটাইড পেতে ক্রোমাটোগ্রাফিক পরিশোধন প্রয়োজন। একটি নমুনায় সম্ভাব্য সনাক্তযোগ্য প্রজাতির সংখ্যা বিপুল সংখ্যক থাকার কারণে শরীরের তরল, টিস্যু এবং কোষে প্রোটিন বিশ্লেষণ এবং বৈশিষ্ট্য নির্ধারণ একটি অত্যন্ত চ্যালেঞ্জিং কাজ। যদিও ভর স্পেকট্রোমেট্রি পেপটাইড এবং প্রোটিন সিকোয়েন্সিংয়ের জন্য একটি কার্যকর হাতিয়ার, যদি এই জাতীয় নমুনাগুলি এক পাসে ভর স্পেকট্রোমিটারে ইনজেক্ট করা হয়, তবে পৃথকীকরণ আদর্শ হবে না। MS বিশ্লেষণের আগে তরল ক্রোমাটোগ্রাফি (LC) পৃথকীকরণ বাস্তবায়ন করে এই সমস্যাটি হ্রাস করা যেতে পারে, যা একটি নির্দিষ্ট সময়ে ভর স্পেকট্রোমিটারে প্রবেশকারী বিশ্লেষণকারীদের সংখ্যা হ্রাস করবে 4,5,6। এছাড়াও, তরল পর্যায়ে পৃথকীকরণের সময়, বিশ্লেষণগুলিকে সংকীর্ণ অঞ্চলে কেন্দ্রীভূত করা যেতে পারে, যার ফলে এই বিশ্লেষণগুলিকে কেন্দ্রীভূত করা যায় এবং MS সনাক্তকরণ সংবেদনশীলতা উন্নত হয়। তরল ক্রোমাটোগ্রাফি (LC) গত দশকে উল্লেখযোগ্যভাবে এগিয়েছে এবং প্রোটিয়ামিক বিশ্লেষণে একটি জনপ্রিয় কৌশল হয়ে উঠেছে7,8,9,10।
অক্টাডেসিল-মডিফাইড সিলিকা (ODS) কে স্থির পর্যায় হিসেবে ব্যবহার করে পেপটাইড মিশ্রণের পরিশোধন এবং পৃথকীকরণের জন্য বিপরীত-পর্যায়ের তরল ক্রোমাটোগ্রাফি (RP-LC) ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়11,12,13। যাইহোক, RP স্থির পর্যায়গুলি তাদের জটিল গঠন এবং অ্যাম্ফিফিলিক প্রকৃতির কারণে পেপটাইড এবং প্রোটিনের সন্তোষজনক পৃথকীকরণ প্রদান করে না 14,15। অতএব, এই বিশ্লেষণগুলির সাথে মিথস্ক্রিয়া এবং ধরে রাখার জন্য মেরু এবং অ-মেরু অংশ সহ পেপটাইড এবং প্রোটিন বিশ্লেষণ করার জন্য বিশেষভাবে ডিজাইন করা স্থির পর্যায়গুলির প্রয়োজন হয়16। মিশ্র-মোড ক্রোমাটোগ্রাফি, যা মাল্টিমোডাল মিথস্ক্রিয়া প্রদান করে, পেপটাইড, প্রোটিন এবং অন্যান্য জটিল মিশ্রণের পৃথকীকরণের জন্য RP-LC এর বিকল্প হতে পারে। বেশ কয়েকটি মিশ্র-মোড স্থির পর্যায় প্রস্তুত করা হয়েছে, এবং এই পর্যায়গুলি দিয়ে প্যাক করা কলামগুলি পেপটাইড এবং প্রোটিন পৃথকীকরণের জন্য ব্যবহার করা হয়েছে17,18,19,20,21। মিশ্র-মোড স্থির পর্যায়গুলি (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, পোলার ইন্টারক্যালেশন/RPLC) পেপটাইড এবং প্রোটিনের জন্য উপযুক্ত। মেরু এবং অ-মেরু উভয় গোষ্ঠীর উপস্থিতির কারণে পৃথকীকরণ 22,23,24,25,26,27,28। একইভাবে, সমযোজীভাবে বন্ধনযুক্ত মেরু গোষ্ঠীর সাথে মেরু আন্তঃক্যালেটিং স্থির পর্যায়গুলি মেরু এবং অ-মেরু বিশ্লেষকদের জন্য ভাল পৃথকীকরণ ক্ষমতা এবং অনন্য নির্বাচনীতা দেখায়, কারণ বিচ্ছেদ বিশ্লেষক এবং স্থির পর্যায়ের মধ্যে মিথস্ক্রিয়ার উপর নির্ভর করে। বহুমুখী মিথস্ক্রিয়া 29, 30, 31, 32। সম্প্রতি, ঝাং এবং অন্যান্যরা। 30 একটি ডোডিসিল-টার্মিনেটেড পলিঅ্যামাইন স্টেশনারি ফেজ তৈরি করেছে এবং হাইড্রোকার্বন, অ্যান্টিডিপ্রেসেন্টস, ফ্ল্যাভোনয়েড, নিউক্লিওসাইড, ইস্ট্রোজেন এবং অন্যান্য বেশ কয়েকটি বিশ্লেষককে সফলভাবে পৃথক করেছে। পোলার ইন্টারক্যালেটরে পোলার এবং নন-পোলার উভয় গ্রুপ রয়েছে, তাই এটি পেপটাইড এবং প্রোটিনগুলিকে পৃথক করতে ব্যবহার করা যেতে পারে যার হাইড্রোফোবিক এবং হাইড্রোফিলিক উভয় অংশ রয়েছে। পোলার-এম্বেডেড কলাম (যেমন, অ্যামাইড-এম্বেডেড C18 কলাম) বাণিজ্যিকভাবে অ্যাসেনটিস এক্সপ্রেস RP-অ্যামাইড কলাম নামে পাওয়া যায়, তবে এই কলামগুলি শুধুমাত্র অ্যামাইন 33 বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহৃত হয়।
বর্তমান গবেষণায়, HSA-এর পেপটাইড এবং ট্রিপসিন ডাইজেস্ট পৃথকীকরণের জন্য একটি পোলার-এমবেডেড স্টেশনারি ফেজ (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) প্রস্তুত এবং মূল্যায়ন করা হয়েছিল। নিম্নলিখিত কৌশল ব্যবহার করে স্টেশনারি ফেজটি প্রস্তুত করা হয়েছিল। প্রস্তুতি প্রোটোকলের কিছু পরিবর্তন সহ আমাদের পূর্ববর্তী প্রকাশনায় প্রদত্ত পদ্ধতি অনুসারে ছিদ্রযুক্ত সিলিকা কণা প্রস্তুত করা হয়েছিল। বৃহৎ ছিদ্র আকারের সিলিকা কণা প্রস্তুত করার জন্য ইউরিয়া, পলিথিলিন গ্লাইকল (PEG), TMOS, জল অ্যাসিটিক অ্যাসিডের অনুপাত সামঞ্জস্য করা হয়েছিল। দ্বিতীয়ত, একটি নতুন লিগ্যান্ড, ফিনাইলমেলেইমাইড-মিথাইল ভিনাইল আইসোসায়ানেট, সংশ্লেষিত করা হয়েছিল এবং একটি পোলার এমবেডেড স্টেশনারি ফেজ প্রস্তুত করার জন্য সিলিকা কণাগুলিকে ডেরিভেটিজ করতে ব্যবহার করা হয়েছিল। ফলস্বরূপ স্টেশনারি ফেজটি অপ্টিমাইজড প্যাকিং স্কিম ব্যবহার করে একটি স্টেইনলেস স্টিলের কলামে (100 × 1.8 মিমি আইডি) প্যাক করা হয়েছিল। কলামের মধ্যে একটি সমজাতীয় স্তর তৈরি হয়েছে তা নিশ্চিত করার জন্য কলামের প্যাকিংটি যান্ত্রিক কম্পনের সাহায্যে সহায়তা করা হয়। পাঁচটি পেপটাইড সমন্বিত পেপটাইড মিশ্রণের প্যাক করা কলাম পৃথকীকরণ মূল্যায়ন করুন; (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) এবং মানব সিরাম অ্যালবুমিন (HAS) এর ট্রিপসিন ডাইজেস্ট। HSA এর পেপটাইড মিশ্রণ এবং ট্রিপসিন ডাইজেস্ট ভাল রেজোলিউশন এবং দক্ষতার সাথে পৃথক হতে দেখা গেছে। PMP কলামের পৃথকীকরণ কর্মক্ষমতা অ্যাসেনটিস এক্সপ্রেস RP-Amide কলামের সাথে তুলনা করা হয়েছে। PMP কলামে পেপটাইড এবং প্রোটিন উভয়ই ভালভাবে দ্রবীভূত এবং দক্ষ বলে দেখা গেছে, যা অ্যাসেনটিস এক্সপ্রেস RP-Amide কলামের চেয়ে বেশি দক্ষ ছিল।
PEG (পলিথিলিন গ্লাইকল), ইউরিয়া, অ্যাসিটিক অ্যাসিড, ট্রাইমেথক্সি অর্থোসিলিকেট (TMOS), ট্রাইমিথাইল ক্লোরোসিলেন (TMCS), ট্রিপসিন, হিউম্যান সিরাম অ্যালবুমিন (HSA), অ্যামোনিয়াম ক্লোরাইড, ইউরিয়া, হেক্সেন মিথাইলডিসিলাজেন (HMDS), মেথাক্রিলয়ল ক্লোরাইড (MC), স্টাইরিন, 4-হাইড্রোক্সি-টেম্পো, বেনজয়াইল পারক্সাইড (BPO), HPLC গ্রেড অ্যাসিটোনাইট্রাইল (ACN), মিথানল, 2-প্রোপানল এবং অ্যাসিটোন সিগমা-অ্যালড্রিচ (সেন্ট লুইস, MO, USA) থেকে কেনা।
ইউরিয়া (৮ গ্রাম), পলিথিলিন গ্লাইকল (৮ গ্রাম) এবং ৮ মিলি ০.০১ এন অ্যাসিটিক অ্যাসিডের মিশ্রণ ১০ মিনিটের জন্য নাড়াচাড়া করা হয়েছিল, এবং তারপর বরফ-ঠান্ডা অবস্থায় ২৪ মিলি টিএমওএস যোগ করা হয়েছিল। বিক্রিয়ার মিশ্রণটি ৪০° সেলসিয়াসে ৬ ঘন্টা এবং তারপর ১২০° সেলসিয়াসে ৮ ঘন্টা স্টেইনলেস স্টিলের অটোক্লেভে উত্তপ্ত করা হয়েছিল। জল ঢেলে দেওয়া হয়েছিল এবং অবশিষ্ট উপাদানটি ৭০° সেলসিয়াসে ১২ ঘন্টা শুকানো হয়েছিল। শুকনো নরম ভরটি একটি চুলায় মসৃণভাবে পিষে ৫৫০° সেলসিয়াসে ১২ ঘন্টা ধরে ক্যালসাইন করা হয়েছিল। কণার আকার, ছিদ্রের আকার এবং পৃষ্ঠের ক্ষেত্রফলের পুনরুৎপাদনযোগ্যতা পরীক্ষা করার জন্য তিনটি ব্যাচ প্রস্তুত এবং বৈশিষ্ট্যযুক্ত করা হয়েছিল।
প্রাক-সংশ্লেষিত লিগ্যান্ড ফিনাইলম্যালেইমাইড-মিথাইলভিনাইলিসোসায়ানেট (PCMP) দিয়ে সিলিকা কণার পৃষ্ঠ পরিবর্তনের মাধ্যমে এবং তারপরে স্টাইরিনের সাথে রেডিয়াল পলিমারাইজেশনের মাধ্যমে, একটি মেরু গ্রুপ-ধারণকারী যৌগ প্রস্তুত করা হয়েছিল। সমষ্টি এবং পলিস্টাইরিন শৃঙ্খলের জন্য স্থির পর্যায়। প্রস্তুতি প্রক্রিয়াটি নীচে বর্ণনা করা হয়েছে।
N-phenylmaleimide (200 mg) এবং মিথাইল ভিনাইল আইসোসায়ানেট (100 mg) শুষ্ক টলুইনে দ্রবীভূত করা হয়েছিল, এবং 0.1 mL 2,2′-অ্যাজোইসোবিউটিরোনাইট্রাইল (AIBN) বিক্রিয়া ফ্লাস্কে যোগ করা হয়েছিল যাতে ফিনাইলমেলইমাইড-মিথাইল ভিনাইল আইসোসায়ানেট কোপলিমার (PMPC) প্রস্তুত করা হয়। মিশ্রণটি 60°C তাপমাত্রায় 3 ঘন্টার জন্য উত্তপ্ত করা হয়েছিল, ফিল্টার করা হয়েছিল এবং 40°C তাপমাত্রায় 3 ঘন্টার জন্য একটি চুলায় শুকানো হয়েছিল।
শুকনো সিলিকা কণা (২ গ্রাম) শুষ্ক টলুইন (১০০ মিলি) তে ছড়িয়ে দেওয়া হয়েছিল, ৫০০ মিলি গোলাকার নীচের ফ্লাস্কে ১০ মিনিটের জন্য নাড়াচাড়া করা হয়েছিল এবং সোনিকেটেড করা হয়েছিল। পিএমসিপি (১০ মিলিগ্রাম) টলুইন তে দ্রবীভূত করা হয়েছিল এবং একটি ড্রপিং ফানেলের মাধ্যমে বিক্রিয়া ফ্লাস্কে ড্রপওয়াইজ যোগ করা হয়েছিল। মিশ্রণটি ১০০°C তাপমাত্রায় ৮ ঘন্টার জন্য রিফ্লাক্স করা হয়েছিল, অ্যাসিটোন দিয়ে ফিল্টার করা হয়েছিল এবং ধুয়ে ৬০°C তাপমাত্রায় ৩ ঘন্টার জন্য শুকানো হয়েছিল। তারপর, পিএমসিপি-বন্ডেড সিলিকা কণা (১০০ গ্রাম) টলুইন (২০০ মিলি) তে দ্রবীভূত করা হয়েছিল এবং অনুঘটক হিসাবে ১০০ µL ডিবিউটাইলটিন ডাইলোরেটের উপস্থিতিতে ৪-হাইড্রোক্সি-টেম্পো (২ মিলি) যোগ করা হয়েছিল। মিশ্রণটি ৫০°C তাপমাত্রায় ৮ ঘন্টার জন্য নাড়াচাড়া করা হয়েছিল, ফিল্টার করা হয়েছিল এবং ৫০°C তাপমাত্রায় ৩ ঘন্টার জন্য শুকানো হয়েছিল।
স্টাইরিন (১ মিলি), বেনজয়াইল পারক্সাইড BPO (০.৫ মিলি), এবং টেম্পো-পিএমসিপি-সংযুক্ত সিলিকা কণা (১.৫ গ্রাম) টলুইনে ছড়িয়ে দেওয়া হয়েছিল এবং নাইট্রোজেন দিয়ে পরিষ্কার করা হয়েছিল। স্টাইরিনের পলিমারাইজেশন ১০০ ডিগ্রি সেলসিয়াসে ১২ ঘন্টা ধরে করা হয়েছিল। ফলস্বরূপ পণ্যটি মিথানল দিয়ে ধুয়ে ৬০ ডিগ্রি সেলসিয়াসে রাতারাতি শুকানো হয়েছিল। সামগ্রিক প্রতিক্রিয়া পরিকল্পনা চিত্র ১ এ দেখানো হয়েছে।
১০-৩ টরের কম চাপ পেতে নমুনাগুলিকে ১ ঘন্টার জন্য ৩৯৩ K তাপমাত্রায় গ্যাসমুক্ত করা হয়েছিল। মোট ছিদ্রের আয়তন নির্ধারণের জন্য P/P0 = 0.99 আপেক্ষিক চাপে শোষিত N2 এর পরিমাণ ব্যবহার করা হয়েছিল। স্ক্যানিং ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি দিয়ে খালি এবং লিগ্যান্ড-বন্ডেড সিলিকা কণার আকারবিদ্যা পরীক্ষা করা হয়েছিল (হিটাচি হাই টেকনোলজিস, টোকিও, জাপান)। শুকনো নমুনা (খালি সিলিকা এবং লিগ্যান্ড-বন্ডেড সিলিকা কণা) আঠালো কার্বন টেপ ব্যবহার করে একটি অ্যালুমিনিয়াম কলামে স্থাপন করা হয়েছিল। Q150T স্পুটার কোটার ব্যবহার করে নমুনাগুলিতে সোনার প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল এবং নমুনাগুলিতে একটি 5 nm Au স্তর জমা করা হয়েছিল। এটি কম ভোল্টেজ ব্যবহার করে প্রক্রিয়া দক্ষতা উন্নত করে এবং সূক্ষ্ম শস্য, ঠান্ডা স্পুটারিং প্রদান করে। মৌলিক বিশ্লেষণের জন্য একটি থার্মো ইলেকট্রন (ওয়ালথাম, এমএ, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) ফ্ল্যাশ EA1112 মৌলিক বিশ্লেষক ব্যবহার করা হয়েছিল। কণার আকার বিতরণ পেতে একটি মালভার্ন (ওরচেস্টারশায়ার, যুক্তরাজ্য) মাস্টারসাইজার 2000 কণা আকার বিশ্লেষক ব্যবহার করা হয়েছিল। নগ্ন সিলিকা কণা এবং লিগ্যান্ড-বন্ডেড সিলিকা কণা (প্রতিটি ৫ মিলিগ্রাম) ৫ মিলি আইসোপ্রোপানলে ছড়িয়ে দেওয়া হয়েছিল, ১০ মিনিটের জন্য সোনিকেটেড করা হয়েছিল, ৫ মিনিটের জন্য ঘূর্ণি করা হয়েছিল এবং মাস্টারসাইজারের অপটিক্যাল বেঞ্চে স্থাপন করা হয়েছিল। ৩০ থেকে ৮০০ ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রার পরিসরে প্রতি মিনিটে ৫ ডিগ্রি সেলসিয়াস হারে থার্মোগ্রাভিমেট্রিক বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।
কাচ-রেখাযুক্ত স্টেইনলেস স্টিলের সংকীর্ণ-বোর আকারের কলামগুলি (১০০ × ১.৮ মিমি আইডি) স্লারি প্যাকিং পদ্ধতি ব্যবহার করে প্যাক করা হয়েছিল, রেফারেন্সে ব্যবহৃত একই পদ্ধতি প্রয়োগ করে। ৩১. একটি স্টেইনলেস স্টিলের কলাম (কাচের রেখাযুক্ত, ১০০ × ১.৮ মিমি আইডি) যার আউটলেট ফিটিং ১ µm ফ্রিট ধারণ করে একটি স্লারি প্যাকারের সাথে সংযুক্ত করা হয়েছিল (অলটেক ডিয়ারফিল্ড, আইএল, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র)। ১.২ মিলি মিথানলে ১৫০ মিলিগ্রাম স্থির ফেজ সাসপেন্ড করে একটি স্থির ফেজ স্লারি প্রস্তুত করুন এবং স্টোরেজ কলামে পাঠান। স্লারি দ্রাবক এবং প্রোপেলিং দ্রাবক হিসেবে মিথানল ব্যবহার করা হয়েছিল। ১০ মিনিটের জন্য ১০০ এমপি, ১৫ মিনিটের জন্য ৮০ এমপি এবং ৩০ মিনিটের জন্য ৬০ এমপি চাপ প্রয়োগ করে কলামটি ক্রমানুসারে পূরণ করুন। প্যাকিংয়ের সময়, কলামের অভিন্ন প্যাকিং নিশ্চিত করার জন্য দুটি জিসি কলাম শেকার (অলটেক, ডিয়ারফিল্ড, আইএল, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) দিয়ে যান্ত্রিক কম্পন প্রয়োগ করা হয়েছিল। কলামের মধ্যে কোনও ক্ষতি রোধ করতে স্লারি প্যাকারটি বন্ধ করুন এবং ধীরে ধীরে চাপ ছেড়ে দিন। স্লারি প্যাকিং ইউনিট থেকে কলামটি সংযোগ বিচ্ছিন্ন করুন এবং এর কার্যকারিতা পরীক্ষা করার জন্য ইনলেট এবং এলসি সিস্টেমের সাথে আরেকটি ফিটিং সংযুক্ত করুন।
একটি LC পাম্প (10AD Shimadzu, জাপান), 50nL ইনজেকশন লুপ সহ ইনজেক্টর (Valco (USA) C14 W.05), মেমব্রেন ডিগ্যাসার (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS ক্যাপিলারি উইন্ডো তৈরি করা হয়েছিল বিশেষ µLC ডিভাইস ডিটেক্টর (UV-2075) এবং কাচ-রেখাযুক্ত মাইক্রোকলাম। অতিরিক্ত কলাম ব্যান্ড প্রশস্তকরণের প্রভাব কমাতে খুব সরু এবং ছোট সংযোগকারী টিউবিং ব্যবহার করুন। প্যাকেজিংয়ের পরে, রিডিউসিং ইউনিয়নের 1/16″ আউটলেটে ক্যাপিলারি (50 μm id 365 এবং রিডিউসিং ইউনিয়ন ক্যাপিলারি (50 μm) ইনস্টল করা হয়েছিল। মাল্টিক্রো 2000 সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে ডেটা সংগ্রহ এবং ক্রোমাটোগ্রাফিক প্রক্রিয়াকরণ করা হয়েছিল। 254 nm অ্যানালাইটে পর্যবেক্ষণ UV শোষণের জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল। ক্রোমাটোগ্রাফিক ডেটা OriginPro8 (Northampton, MA) দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।
মানুষের সিরাম থেকে অ্যালবুমিন, লাইওফিলাইজড পাউডার, ≥ ৯৬% (অ্যাগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস) ৩ মিলিগ্রাম ট্রিপসিন (১.৫ মিলিগ্রাম), ৪.০ মিলি ইউরিয়া (১ মিলি), এবং ০.২ মিলি অ্যামোনিয়াম বাইকার্বোনেট (১ মিলি) এর সাথে মিশ্রিত। দ্রবণটি ১০ মিনিটের জন্য নাড়াচাড়া করা হয়েছিল এবং ৩৭°C তাপমাত্রায় ৬ ঘন্টার জন্য জল স্নানে রাখা হয়েছিল, তারপর ১ মিলি ০.১% TFA দিয়ে নিভিয়ে ফেলা হয়েছিল। দ্রবণটি ফিল্টার করুন এবং ৪°C এর নিচে সংরক্ষণ করুন।
পেপটাইড মিশ্রণ এবং HSA ট্রিপসিন ডাইজেস্টের পৃথকীকরণ PMP কলামে আলাদাভাবে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। PMP কলামের মাধ্যমে পেপটাইড মিশ্রণ এবং HSA এর ট্রিপসিন ডাইজেস্টের পৃথকীকরণ পরীক্ষা করুন এবং ফলাফলগুলি Ascentis Express RP-Amide কলামের সাথে তুলনা করুন। তাত্ত্বিক প্লেট নম্বরটি নিম্নরূপ গণনা করা হয়:
খালি সিলিকা কণা এবং লিগ্যান্ড-বন্ডেড সিলিকা কণার SEM চিত্র চিত্র 2-এ দেখানো হয়েছে। খালি সিলিকা কণার (A, B) SEM চিত্রগুলি দেখায় যে, আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার বিপরীতে, এই কণাগুলি গোলাকার যেখানে কণাগুলি দীর্ঘায়িত বা অনিয়মিত প্রতিসাম্য রয়েছে। লিগ্যান্ড-বন্ডেড সিলিকা কণার (C, D) পৃষ্ঠটি খালি সিলিকা কণার তুলনায় মসৃণ, যা সিলিকা কণার পৃষ্ঠে পলিস্টাইরিন চেইনের আবরণের কারণে হতে পারে।
খালি সিলিকা কণা (A, B) এবং লিগ্যান্ড-বন্ডেড সিলিকা কণা (C, D) এর ইলেকট্রন মাইক্রোস্কোপের ছবি স্ক্যান করা হচ্ছে।
খালি সিলিকা কণা এবং লিগ্যান্ড-বন্ডেড সিলিকা কণার কণা আকার বন্টন চিত্র 3(A) তে দেখানো হয়েছে। আয়তন-ভিত্তিক কণা আকার বন্টন বক্ররেখা দেখায় যে রাসায়নিক পরিবর্তনের পরে সিলিকা কণার আকার বৃদ্ধি পেয়েছে (চিত্র 3A)। বর্তমান গবেষণা এবং পূর্ববর্তী গবেষণা থেকে সিলিকা কণার কণা আকার বন্টনের তথ্য সারণি 1(A) তে তুলনা করা হয়েছে। PMP এর আয়তন-ভিত্তিক কণা আকার, d(0.5), আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার তুলনায় 3.36 μm, ad(0.5) মান 3.05 μm (পলিস্টাইরিন-বাউন্ড সিলিকা কণা)34। বিক্রিয়া মিশ্রণে PEG, ইউরিয়া, TMOS এবং অ্যাসিটিক অ্যাসিডের বিভিন্ন অনুপাতের কারণে আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার তুলনায় এই ব্যাচের কণা আকার বন্টন সংকীর্ণ ছিল। PMP পর্যায়ের কণার আকার আমরা পূর্বে অধ্যয়ন করা পলিস্টাইরিন-বাউন্ড সিলিকা কণা পর্যায়ের তুলনায় সামান্য বড়। এর অর্থ হল স্টাইরিন দিয়ে সিলিকা কণার পৃষ্ঠ কার্যকরীকরণ সিলিকা পৃষ্ঠে শুধুমাত্র একটি পলিস্টাইরিন স্তর (0.97 μm) জমা করে, যেখানে PMP তে পর্যায়ে স্তরের পুরুত্ব ছিল 1.38 µm।
খালি সিলিকা কণা এবং লিগ্যান্ড-আবদ্ধ সিলিকা কণার কণা আকার বন্টন (A) এবং ছিদ্র আকার বন্টন (B)।
বর্তমান গবেষণার সিলিকা কণার ছিদ্রের আকার, ছিদ্রের আয়তন এবং পৃষ্ঠের ক্ষেত্রফল সারণি 1(B) এ দেওয়া হল। খালি সিলিকা কণা এবং লিগ্যান্ড-বন্ডেড সিলিকা কণার PSD প্রোফাইল চিত্র 3(B) এ দেওয়া হল। ফলাফলগুলি আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার সাথে তুলনীয়। খালি এবং লিগ্যান্ড-বাউন্ড সিলিকা কণার ছিদ্রের আকার যথাক্রমে 310 এবং 241, যা নির্দেশ করে যে রাসায়নিক পরিবর্তনের পরে ছিদ্রের আকার 69 হ্রাস পায়, যেমনটি সারণি 1(B) এ দেখানো হয়েছে, এবং বক্ররেখার পরিবর্তন চিত্র 3(B) এ দেখানো হয়েছে। একইভাবে, রাসায়নিক পরিবর্তনের পরে সিলিকা কণার ছিদ্রের আয়তন 0.67 থেকে 0.58 cm3/g এ কমেছে। বর্তমানে অধ্যয়ন করা সিলিকা কণার নির্দিষ্ট পৃষ্ঠের ক্ষেত্রফল 116 m2/g, যা আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার (124 m2/g) সাথে তুলনীয়। সারণি 1(B) এ দেওয়া হল, সিলিকা কণার পৃষ্ঠের ক্ষেত্রফল (m2/g)ও 116 m2/g থেকে কমেছে রাসায়নিক পরিবর্তনের পর ১০৫ মি২/গ্রাম।
স্থির পর্যায়ের মৌলিক বিশ্লেষণের ফলাফল সারণি ২-এ দেখানো হয়েছে। বর্তমান স্থির পর্যায়ের কার্বন লোডিং ৬.৩৫%, যা আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার কার্বন লোডিং (পলিস্টাইরিন বন্ডেড সিলিকা কণা, যথাক্রমে ৭.৯৩%৩৫ এবং ১০.২১%) থেকে কম। ৪২. বর্তমান স্থির পর্যায়ের কার্বন লোডিং কম, কারণ বর্তমান SP তৈরিতে, স্টাইরিন ছাড়াও, কিছু পোলার লিগ্যান্ড যেমন ফিনাইলম্যালাইমাইড-মিথাইলভিনাইলিসোসায়ানেট (PCMP) এবং ৪-হাইড্রোক্সি-টেম্পো ব্যবহার করা হয়েছিল। বর্তমান স্থির পর্যায়ের নাইট্রোজেন ওজন শতাংশ ২.২১%, পূর্ববর্তী গবেষণায় নাইট্রোজেনের ওজন অনুসারে যথাক্রমে ০.১৭৩৫ এবং ০.৮৫% ছিল। এর অর্থ হল ফিনাইলম্যালাইমাইডের কারণে বর্তমান স্থির পর্যায়ে নাইট্রোজেনের wt % বেশি। একইভাবে, (৪) এবং (৫) পণ্যের কার্বন লোডিং যথাক্রমে ২.৭% এবং ২.৯% ছিল, যখন চূড়ান্ত পণ্যের কার্বন লোডিং (6) ছিল 6.35%, যেমনটি সারণি 2-এ দেখানো হয়েছে। ওজন হ্রাস PMP স্টেশনারি ফেজ দিয়ে পরীক্ষা করা হয়েছিল, এবং TGA বক্ররেখা চিত্র 4-এ দেখানো হয়েছে। TGA বক্ররেখা 8.6% ওজন হ্রাস দেখায়, যা কার্বন লোডিং (6.35%) এর সাথে ভালভাবে সামঞ্জস্যপূর্ণ কারণ লিগ্যান্ডগুলিতে কেবল C নয়, N, O এবং Hও থাকে।
সিলিকা কণার পৃষ্ঠ পরিবর্তনের জন্য ফিনাইলম্যালাইমাইড-মিথাইলভিনাইলিসোসায়ানেট লিগ্যান্ড বেছে নেওয়া হয়েছিল কারণ এতে পোলার ফিনাইলম্যালাইমাইড গ্রুপ এবং ভিনাইলিসোসায়ানেট গ্রুপ রয়েছে। ভিনাইল আইসোসায়ানেট গ্রুপগুলি জীবন্ত র‍্যাডিকাল পলিমারাইজেশনের মাধ্যমে স্টাইরিনের সাথে আরও বিক্রিয়া করতে পারে। দ্বিতীয় কারণ হল এমন একটি গ্রুপ সন্নিবেশ করা যার বিশ্লেষকের সাথে একটি মাঝারি মিথস্ক্রিয়া থাকে এবং বিশ্লেষক এবং স্থির পর্যায়ের মধ্যে কোনও শক্তিশালী ইলেক্ট্রোস্ট্যাটিক মিথস্ক্রিয়া থাকে না, কারণ ফিনাইলম্যালাইমাইড অংশের স্বাভাবিক pH-তে কোনও ভার্চুয়াল চার্জ থাকে না। স্থির পর্যায়ের পোলারিটি স্টাইরিনের সর্বোত্তম পরিমাণ এবং ফ্রি র‍্যাডিকাল পলিমারাইজেশনের প্রতিক্রিয়া সময় দ্বারা নিয়ন্ত্রণ করা যেতে পারে। বিক্রিয়ার শেষ ধাপ (ফ্রি-র‍্যাডিকাল পলিমারাইজেশন) অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ এবং স্থির পর্যায়ের পোলারিটি পরিবর্তন করতে পারে। এই স্থির পর্যায়ের কার্বন লোডিং পরীক্ষা করার জন্য মৌলিক বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। দেখা গেছে যে স্টাইরিনের পরিমাণ এবং প্রতিক্রিয়া সময় বৃদ্ধির ফলে স্থির পর্যায়ের কার্বন লোডিং বৃদ্ধি পায় এবং বিপরীতভাবে। স্টাইরিনের বিভিন্ন ঘনত্বের সাথে প্রস্তুত SP-গুলিতে বিভিন্ন কার্বন লোডিং থাকে। আবার, এই স্থির পর্যায়েরগুলিকে স্টেইনলেস স্টিলের কলামে লোড করুন এবং তাদের পরীক্ষা করুন ক্রোমাটোগ্রাফিক কর্মক্ষমতা (নির্বাচনীতা, রেজোলিউশন, N মান, ইত্যাদি)। এই পরীক্ষাগুলির উপর ভিত্তি করে, নিয়ন্ত্রিত পোলারিটি এবং ভাল বিশ্লেষণ ধারণ নিশ্চিত করার জন্য PMP স্টেশনারি ফেজ প্রস্তুত করার জন্য একটি অপ্টিমাইজড ফর্মুলেশন নির্বাচন করা হয়েছিল।
পাঁচটি পেপটাইড মিশ্রণ (গ্লাই-টাইর, গ্লাই-লিউ-টাইর, গ্লাই-গ্লাই-টাইর-আর্গ, টাইর-ইলে-গ্লাই-সার-আর্গ, লিউসিন এনকেফালিন) একটি মোবাইল ফেজ ব্যবহার করে একটি পিএমপি কলাম ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল; ৮০ μL/মিনিট প্রবাহ হারে ৬০/৪০ (v/v) অ্যাসিটোনিট্রাইল/জল (০.১% TFA)। সর্বোত্তম নির্গমন অবস্থার অধীনে, প্রতি কলামে (১০০ × ১.৮ মিমি আইডি) তাত্ত্বিক প্লেট নম্বর (N) হল ২০,০০০ ± ১০০ (২০০,০০০ প্লেট/মি²)। সারণী ৩ তিনটি PMP কলামের জন্য N মান দেয় এবং ক্রোমাটোগ্রাম চিত্র ৫এ-তে দেখানো হয়েছে। উচ্চ প্রবাহ হারে (৭০০ μL/মিনিট) একটি PMP কলামের দ্রুত বিশ্লেষণে, এক মিনিটের মধ্যে পাঁচটি পেপটাইড নির্গমন করা হয়েছিল, N মান খুব ভালো ছিল, প্রতি কলামে ১৩,৫০০ ± ৩৩০ (১০০ × ১.৮ মিমি আইডি), ১৩৫,০০০ প্লেট/মি (চিত্র ৫বি) এর সাথে মিলে যায়। তিনটি অভিন্ন আকারের কলাম (১০০ × ১.৮ মিমি আইডি) পরীক্ষা করার জন্য তিনটি ভিন্ন লট PMP স্থির ফেজ দিয়ে প্যাক করা হয়েছিল। পুনরুৎপাদনযোগ্যতা। প্রতিটি কলামের জন্য বিশ্লেষণাত্মক ঘনত্ব সর্বোত্তম নির্গমন অবস্থা এবং তাত্ত্বিক প্লেটের সংখ্যা N এবং ধারণ সময় ব্যবহার করে রেকর্ড করা হয়েছিল যাতে প্রতিটি কলামে একই পরীক্ষার মিশ্রণ পৃথক করা যায়। PMP কলামের পুনরুৎপাদনযোগ্যতা তথ্য সারণি 4 এ দেখানো হয়েছে। PMP কলামের পুনরুৎপাদনযোগ্যতা খুব কম %RSD মানের সাথে ভালভাবে সম্পর্কযুক্ত, যেমনটি সারণি 3 এ দেখানো হয়েছে।
PMP কলাম (B) এবং Ascentis Express RP-Amide কলাম (A) -এ পেপটাইড মিশ্রণের বিচ্ছেদ; মোবাইল ফেজ 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP কলাম মাত্রা (100 × 1.8 মিমি id); বিশ্লেষণাত্মক যৌগগুলির নির্গমন ক্রম: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) এবং 5 (leucine) অ্যাসিড এনকেফালিন))।
উচ্চ কার্যকারিতা সম্পন্ন তরল ক্রোমাটোগ্রাফিতে মানব সিরাম অ্যালবুমিনের ট্রিপটিক ডাইজেস্ট পৃথকীকরণের জন্য একটি PMP কলাম (100 × 1.8 মিমি আইডি) মূল্যায়ন করা হয়েছিল। চিত্র 6-এর ক্রোমাটোগ্রাম দেখায় যে নমুনাটি ভালভাবে পৃথক করা হয়েছে এবং রেজোলিউশন খুব ভাল। HSA ডাইজেস্টগুলি 100 µL/মিনিট প্রবাহ হার, মোবাইল ফেজ 70/30 অ্যাসিটোনিট্রাইল/জল এবং 0.1% TFA ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। ক্রোমাটোগ্রামে (চিত্র 6) দেখানো হয়েছে, HSA ডাইজেস্টকে 17টি পেপটাইডের সাথে সম্পর্কিত 17টি পিকে বিভক্ত করা হয়েছে। HSA ডাইজেস্টে প্রতিটি পিকের বিচ্ছেদ দক্ষতা গণনা করা হয়েছিল এবং মানগুলি সারণি 5-এ দেওয়া হয়েছে।
HSA (100 × 1.8 মিমি আইডি) এর একটি ট্রিপটিক ডাইজেস্ট একটি PMP কলামে আলাদা করা হয়েছিল; প্রবাহ হার (100 µL/মিনিট), ভ্রাম্যমাণ ফেজ 60/40 অ্যাসিটোনাইট্রাইল/জল 0.1% TFA সহ।
যেখানে L হল কলামের দৈর্ঘ্য, η হল মোবাইল ফেজের সান্দ্রতা, ΔP হল কলামের পিছনের চাপ, এবং u হল মোবাইল ফেজের রৈখিক বেগ। PMP কলামের ব্যাপ্তিযোগ্যতা ছিল 2.5 × 10-14 m2, প্রবাহ হার ছিল 25 μL/মিনিট, এবং 60/40 v/v ACN/জল ব্যবহার করা হয়েছিল। PMP কলামের ব্যাপ্তিযোগ্যতা (100 × 1.8 মিমি id) আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার অনুরূপ ছিল রেফ। 34. উপরিভাগের ছিদ্রযুক্ত কণা দিয়ে ভরা কলামের ব্যাপ্তিযোগ্যতা হল: 1.3 μm কণার জন্য 1.7 × 10-15, 1.7 μm কণার জন্য 3.1 × 10-15, 5.2 × 10-15 এবং 2.6 μm কণার জন্য 2.5 × 10-14 m2 5 μm কণার জন্য 43. অতএব, PMP ফেজের ব্যাপ্তিযোগ্যতা 5 μm এর অনুরূপ। কোর-শেল কণা।
যেখানে Wx হল ক্লোরোফর্ম দিয়ে ভরা কলামের ওজন, Wy হল মিথানল দিয়ে ভরা কলামের ওজন, এবং ρ হল দ্রাবকের ঘনত্ব। মিথানলের ঘনত্ব (ρ = 0.7866) এবং ক্লোরোফর্ম (ρ = 1.484)। SILICA PARICLES-C18 কলাম (100 × 1.8 mm id) 34 এবং C18-ইউরিয়া কলাম 31 যা আমরা পূর্বে অধ্যয়ন করেছি তার মোট ছিদ্রতা যথাক্রমে 0.63 এবং 0.55 ছিল। এর অর্থ হল ইউরিয়া লিগ্যান্ডের উপস্থিতি স্থির পর্যায়ের ব্যাপ্তিযোগ্যতা হ্রাস করে। অন্যদিকে, PMP কলামের (100 × 1.8 mm id) মোট ছিদ্রতা 0.60। PMP কলামের ব্যাপ্তিযোগ্যতা C18-বন্ডেড সিলিকা কণা দিয়ে ভরা কলামের তুলনায় কম কারণ C18-ধরণের স্থির পর্যায়ে C18 লিগ্যান্ডগুলি সিলিকা কণার সাথে রৈখিক শৃঙ্খল হিসাবে সংযুক্ত থাকে, যখন পলিস্টাইরিন-ধরণের স্থির পর্যায়ক্রমে, এর চারপাশে একটি অপেক্ষাকৃত পুরু পলিমার স্তর তৈরি হয়। একটি সাধারণ পরীক্ষায়, কলামের ছিদ্রতা গণনা করা হয়:
চিত্র 7A,B ভ্যান ডিমটার প্লটের একই নির্গমন শর্ত (অর্থাৎ, 60/40 ACN/H2O এবং 0.1% TFA) ব্যবহার করে PMP কলাম (100 × 1.8 মিমি আইডি) এবং অ্যাসেনটিস এক্সপ্রেস RP-অ্যামাইড কলাম (100 × 1.8 মিমি আইডি) দেখায়। নির্বাচিত পেপটাইড মিশ্রণ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) 20 µL/ এ প্রস্তুত করা হয়েছিল। উভয় কলামের জন্য সর্বনিম্ন প্রবাহ হার 800 µL/মিনিট। PMP কলামের জন্য সর্বোত্তম প্রবাহ হারে (80 µL/মিনিট) সর্বনিম্ন HETP মান এবং Ascentis Express RP-Amide কলামের জন্য যথাক্রমে 2.6 µm এবং 3.9 µm ছিল। HETP মানগুলি নির্দেশ করে যে PMP কলামের বিচ্ছেদ দক্ষতা (100 × 1.8 mm id) বাণিজ্যিকভাবে উপলব্ধ Ascentis Express RP-Amide কলামের (100 × 1.8 mm id) তুলনায় অনেক ভালো। চিত্র 7(A) এর ভ্যান ডিমটার প্লট দেখায় যে ক্রমবর্ধমান প্রবাহের সাথে N মানের হ্রাস আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণার তুলনায় উল্লেখযোগ্য নয়। PMP কলামের উচ্চতর বিচ্ছেদ দক্ষতা (১০০ × ১.৮ মিমি আইডি) অ্যাসেনটিস এক্সপ্রেস আরপি-অ্যামাইড কলামের তুলনায় বর্তমান কাজে ব্যবহৃত কণার আকৃতি, আকার এবং জটিল কলাম প্যাকিং পদ্ধতির উন্নতির উপর ভিত্তি করে তৈরি করা হয়েছে।
(A) 0.1% TFA সহ 60/40 ACN/H2O তে PMP কলাম (100 × 1.8 মিমি আইডি) ব্যবহার করে ভ্যান ডিমটার প্লট (HETP বনাম মোবাইল ফেজ লিনিয়ার বেগ) প্রাপ্ত। (B) 0.1% TFA সহ 60/40 ACN/H2O তে Ascentis Express RP-Amide কলাম (100 × 1.8 মিমি আইডি) ব্যবহার করে ভ্যান ডিমটার প্লট (HETP বনাম মোবাইল ফেজ লিনিয়ার বেগ) প্রাপ্ত।
উচ্চ কার্যকারিতা সম্পন্ন তরল ক্রোমাটোগ্রাফিতে সিন্থেটিক পেপটাইড মিশ্রণ এবং মানব সিরাম অ্যালবুমিন (HAS) এর ট্রিপসিন ডাইজেস্ট পৃথকীকরণের জন্য একটি পোলার-এমবেডেড পলিস্টাইরিন স্টেশনারি ফেজ প্রস্তুত এবং মূল্যায়ন করা হয়েছিল। পেপটাইড মিশ্রণের জন্য PMP কলামের ক্রোমাটোগ্রাফিক কর্মক্ষমতা পৃথকীকরণ দক্ষতা এবং রেজোলিউশনে চমৎকার। PMP কলামের উন্নত পৃথকীকরণ কর্মক্ষমতা বিভিন্ন কারণে, যেমন সিলিকা কণার কণার আকার এবং ছিদ্র আকার, স্থির পর্যায়ের নিয়ন্ত্রিত সংশ্লেষণ এবং জটিল কলাম প্যাকিং। উচ্চ পৃথকীকরণ দক্ষতা ছাড়াও, উচ্চ প্রবাহ হারে কম কলামের পিছনে চাপ এই স্থির পর্যায়ের আরেকটি সুবিধা। PMP কলামগুলি ভাল প্রজননযোগ্যতা প্রদর্শন করে এবং পেপটাইড মিশ্রণ বিশ্লেষণ এবং বিভিন্ন প্রোটিনের ট্রিপসিন হজমের জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে। আমরা তরল ক্রোমাটোগ্রাফিতে প্রাকৃতিক পণ্য, ঔষধি উদ্ভিদ থেকে জৈব সক্রিয় যৌগ এবং ছত্রাকের নির্যাস পৃথকীকরণের জন্য এই কলামটি ব্যবহার করার ইচ্ছা পোষণ করি। ভবিষ্যতে, প্রোটিন এবং মনোক্লোনাল অ্যান্টিবডি পৃথকীকরণের জন্য PMP কলামের মূল্যায়নও করা হবে।
ফিল্ড, জে কে, ইউয়ারবি, এমআর, লাউ, জে., থোগারসেন, এইচ. এবং পিটারসন, পি. রিভার্সড ফেজ ক্রোমাটোগ্রাফি পার্ট I দ্বারা পেপটাইড সেপারেশন সিস্টেমের উপর গবেষণা: একটি কলাম ক্যারেক্টারাইজেশন প্রোটোকলের উন্নয়ন। জে. ক্রোমাটোগ্রাফি.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019)।
গোমেজ, বি. এট আল। সংক্রামক রোগের চিকিৎসার জন্য উন্নত সক্রিয় পেপটাইড। জৈব প্রযুক্তি। উন্নত। 36(2), 415-429। https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018)।
ভ্লিগে, পি., লিসোস্কি, ভি., মার্টিনেজ, জে. এবং খ্রেস্টচাটিস্কি, এম. সিন্থেটিক থেরাপিউটিক পেপটাইডস: বিজ্ঞান এবং বাজার। ড্রাগ আবিষ্কার। 15 (1-2) আজ, 40-56। https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010)।
জি, এফ., স্মিথ, আরডি এবং শেন, ওয়াই. অ্যাডভান্সড প্রোটিওমিক লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি.জে. ক্রোমাটোগ্রাফি.এ ১২৬১, ৭৮–৯০ (২০১২)।
লিউ, ডব্লিউ. এট আল। অ্যাডভান্সড লিকুইড ক্রোমাটোগ্রাফি-ভর স্পেকট্রোমেট্রি বিস্তৃতভাবে লক্ষ্যবস্তুযুক্ত বিপাক এবং প্রোটিওমিক্স অন্তর্ভুক্ত করতে সক্ষম করে। অ্যানুস। চিম। অ্যাক্টা 1069, 89–97 (2019)।
চেসনট, এসএম এবং স্যালিসবারি, জেজে ওষুধ উন্নয়নে ইউএইচপিএলসির ভূমিকা। জে. সেপ্টেম্বর. বিজ্ঞান. 30(8), 1183-1190 (2007)।
উ, এন. এবং ক্লাউসেন, এএম দ্রুত বিচ্ছেদের জন্য অতি উচ্চ চাপের তরল ক্রোমাটোগ্রাফির মৌলিক এবং ব্যবহারিক দিক। জে. সেপ্টেম্বর. বিজ্ঞান. 30(8), 1167-1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007)।
রেন, এসএ এবং চেলিচেফ, পি। ওষুধ বিকাশে অতি-উচ্চ কর্মক্ষমতাসম্পন্ন তরল ক্রোমাটোগ্রাফির প্রয়োগ। জে। ক্রোমাটোগ্রাফি.১১৯(১-২), ১৪০-১৪৬। https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (২০০৬)।
গু, এইচ. এট আল। এন্টারোভাইরাসগুলির দক্ষ পরিশোধনের জন্য তেল-ইন-ওয়াটার হাই ইন্টারনাল ফেজ ইমালসন থেকে প্রস্তুত মনোলিথিক ম্যাক্রোপোরাস হাইড্রোজেল। কেমিক্যাল.ব্রিটেন.জে. 401, 126051 (2020)।
শি, ওয়াই., জিয়াং, আর., হরভাথ, সি. এবং উইলকিন্স, জেএ প্রোটিওমিক্সে তরল ক্রোমাটোগ্রাফির ভূমিকা। জে. ক্রোমাটোগ্রাফি.এ 1053(1-2), 27-36 (2004)।
ফেকেট, এস., ভেউথে, জে.-এল. এবং গিলারমে, ডি. থেরাপিউটিক পেপটাইড এবং প্রোটিনের বিপরীত-পর্যায়ের তরল ক্রোমাটোগ্রাফি পৃথকীকরণের উদীয়মান প্রবণতা: তত্ত্ব এবং প্রয়োগ। জে. ফার্মেসি.বায়োমেডিক্যাল সায়েন্স.অনুস.৬৯, ৯-২৭ (২০১২)।
গিলার, এম., অলিভোভা, পি., ডালি, এই এবং জেবলার, জেসি প্রথম এবং দ্বিতীয় পৃথকীকরণ মাত্রায় বিভিন্ন pH মান ব্যবহার করে একটি RP-RP-HPLC সিস্টেম ব্যবহার করে পেপটাইডের দ্বি-মাত্রিক পৃথকীকরণ। জে. সেপ্টেম্বর. Sci.28(14), 1694-1703 (2005)।
Feletti, S. et al. C18 সাব-2 μm সম্পূর্ণ এবং অতি-ছিদ্রযুক্ত কণা দিয়ে ভরা উচ্চ-দক্ষ ক্রোমাটোগ্রাফিক কলামের ভর স্থানান্তর বৈশিষ্ট্য এবং গতিগত কর্মক্ষমতা তদন্ত করা হয়েছিল। J. সেপ্টেম্বর Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020)।
পিওভেসানা, এস. এট আল। উদ্ভিদ জৈব সক্রিয় পেপটাইডের বিচ্ছিন্নতা, সনাক্তকরণ এবং বৈধকরণের সাম্প্রতিক প্রবণতা এবং বিশ্লেষণাত্মক চ্যালেঞ্জ। anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018)।
মুলার, জেবি প্রমুখ। জীবনের রাজ্যের প্রোটমিক ল্যান্ডস্কেপ। প্রকৃতি 582(7813), 592-596। https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020)।
ডেলুকা, সি. এট আল। প্রস্তুতিমূলক তরল ক্রোমাটোগ্রাফি দ্বারা থেরাপিউটিক পেপটাইডের ডাউনস্ট্রিম প্রক্রিয়াকরণ। অণু (বাসেল, সুইজারল্যান্ড) 26(15), 4688(2021)।
ইয়াং, ওয়াই. এবং গেং, এক্স. মিশ্র-মোড ক্রোমাটোগ্রাফি এবং বায়োপলিমারে এর প্রয়োগ। জে. ক্রোমাটোগ্রাফি.এ 1218(49), 8813–8825 (2011)।
ঝাও, জি., ডং, এক্স.-ওয়াই. এবং সান, ওয়াই. মিশ্র-মোড প্রোটিন ক্রোমাটোগ্রাফির জন্য লিগ্যান্ডস: নীতি, চরিত্রায়ন এবং নকশা। জে. বায়োটেকনোলজি.১৪৪(১), ৩-১১ (২০০৯)।