Nature.comን ስለጎበኙ እናመሰግናለን፡ እየተጠቀሙበት ያለው የአሳሽ ስሪት ለሲኤስኤስ የተገደበ ድጋፍ አለው። ለምርጥ ተሞክሮ የተሻሻለ አሳሽ (ወይም የተኳኋኝነት ሁነታን በInternet Explorer ውስጥ እንዲያጠፉት እንመክራለን) እስከዚያው ድረስ ቀጣይ ድጋፍን ለማረጋገጥ ጣቢያውን ያለ ቅጦች እና ጃቫስክሪፕት እናሳያለን።
የተቦረቦረ የሲሊካ ቅንጣቶች በሶል-ጄል ዘዴ ተዘጋጅተዋል አንዳንድ ማሻሻያዎች የማክሮፖረስ ቅንጣቶችን ለማግኘት.እነዚህ ቅንጣቶች በተገላቢጦሽ የመደመር መቆራረጥ ሰንሰለት ማስተላለፊያ (RAFT) ፖሊመሬዜሽን ከ N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) እና styrene of N-phenylmaleimstyrerrow polyreror ኢንተርኔሬሽን (N-phenylmaleimiderror) የጽህፈት መሳሪያ (PMI) እና styrene ለማዘጋጀት. ከማይዝግ ብረት የተሰሩ ዓምዶች (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) በቆሻሻ ማሸጊያዎች ተጭነዋል።የተገመገመ የፒኤምፒ አምድ መለያየት የፔፕታይድ ድብልቅ አምስት peptides (ግሊ-ታይር ፣ ግላይ-ሉ-ታይር ፣ ግላይ-ግላይ-ታይር-አርግ ፣ ታይር-ኢሌ-ጊሊ-ሰር-አርክፋግራፊክ ኢንችሮግራፊክ ፣ አፈፃፀም) ዳይሬክሽን ኦቭ ሂውማንድ ትሪፕሲን ሴረም አልቡሚን (HAS)።በተሻለ elution ሁኔታዎች የፔፕታይድ ድብልቅ ቲዎሬቲካል ጠፍጣፋ ቆጠራ እስከ 280,000 ፕሌትስ/ሜ.ሜ ይደርሳል።የዳበረውን አምድ የመለየት አፈጻጸም ከንግድ አሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ ጋር በማነፃፀር የPMP አምድ መለያየት አፈጻጸም ከንግድ መፍታት አቅም አንፃር የላቀ እንደነበር ተስተውሏል።
ከቅርብ ዓመታት ወዲህ የባዮፋርማሱቲካል ኢንዱስትሪ በገቢያ ድርሻ ላይ በከፍተኛ ደረጃ እየጨመረ በመምጣቱ ዓለም አቀፍ ገበያ እየሆነ መጥቷል ። በባዮፋርማሱቲካል ኢንደስትሪው ፈንጂ እድገት 1 ፣2 ፣3 ፣ የፔፕታይድ እና ፕሮቲኖች ትንተና በጣም ተፈላጊ ነው ። ከተገመተው peptide በተጨማሪ ፣ የተፈለገውን የፔፕታይድ ውህደት በሚሰራበት ጊዜ ብዙ ቆሻሻዎች የሚፈልጓቸውን የፔፕታይድ ውህዶችን ለማግኘት እና የፔፕታይድ ንፅህናን ለማግኘት የፔፕታይድ ትንተናን ይፈልጋል በሰውነት ፈሳሾች፣ ቲሹዎች እና ሴሎች ውስጥ ያሉ ፕሮቲኖች በአንድ ናሙና ውስጥ ሊገኙ የሚችሉ በርካታ ዝርያዎች በመኖራቸው እጅግ በጣም ፈታኝ ተግባር ነው ምንም እንኳን የጅምላ ስፔክትሮሜትሪ ለፔፕታይድ እና ፕሮቲን ቅደም ተከተል ውጤታማ መሳሪያ ቢሆንም ፣ እንደዚህ ያሉ ናሙናዎች በአንድ ማለፊያ ውስጥ በጅምላ ስፔክትሮሜትር ውስጥ ከተከተቡ መለያየቱ ተስማሚ አይሆንም።ይህ ችግር ክሮሞግራፊን በመተግበር ክሮሞግራፊን በመተግበር ኤም.ኤስ. በተወሰነ ጊዜ ውስጥ ወደ ጅምላ ስፔክትሮሜትር የሚገቡ ተንታኞች 4,5,6. በተጨማሪም, በፈሳሽ ደረጃ መለያየት ወቅት, ትንታኔዎች በጠባብ ክልሎች ውስጥ ሊተኩሩ ይችላሉ, በዚህም እነዚህን ትንታኔዎች በማተኮር እና MS የማወቅ ችሎታን ያሻሽላል.
የተገለበጠ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (RP-LC) የፔፕታይድ ድብልቆችን ለማጣራት እና ለመለየት በሰፊው ጥቅም ላይ ይውላል octadecyl-modified silica (ODS) እንደ ቋሚ ደረጃ11,12,13.ነገር ግን, RP የማይንቀሳቀስ ደረጃዎች peptides እና ፕሮቲኖች ውስብስብ በሆነው አወቃቀራቸው,1 amphire 5 መዋቅር ምክንያት አጥጋቢ መለያየትን አያቀርቡም. የተነደፉ የማይንቀሳቀስ ደረጃዎች peptides እና ፕሮቲኖችን ከዋልታ እና ከዋልታ ካልሆኑ አካላት ጋር ለመተንተን እና ከእነዚህ ትንታኔዎች ጋር እንዲቆዩ ያስፈልጋል16. ቅልቅል ሁነታ chromatography, መልቲ ሞዳል መስተጋብር ያቀርባል, peptides, ፕሮቲኖች, እና ሌሎች ውስብስብ ድብልቆች መካከል መለያየት RP-LC አንድ አማራጭ ሊሆን ይችላል በርካታ አምዶች-ሁነታ ተዘጋጅቷል, እና ደረጃዎች ጽህፈት ቤት ጋር ብዙ ድብልቅ-ሁነታ ተዘጋጅቷል. peptide እና ፕሮቲን መለያየት17,18,19,20,21.ድብልቅ-ሁነታ ቋሚ ደረጃዎች (WAX / RPLC, HILIC / RPLC, የዋልታ intercalation / RPLC) peptide እና ፕሮቲን መለያየት ምክንያት ሁለቱም የዋልታ እና ያልሆኑ የዋልታ ቡድኖች22,23,24,25,28,2826,22,23,24,25,2826,726. በጋር የተገናኙ የዋልታ ቡድኖች ጥሩ የመለያያ ሃይል እና ልዩ የሆነ የዋልታ እና የዋልታ ያልሆኑ ተንታኞችን ያሳያሉ። የመልቲሞዳል ግንኙነቶች 29, 30, 31, 32. በቅርብ ጊዜ, Zhang et al. 30 dodecyl-terminated polyamine stationary phase አዘጋጅቶ በተሳካ ሁኔታ ሃይድሮካርቦኖችን፣ ፀረ-ጭንቀቶችን፣ ፍሌቮኖይድን፣ ኑክሊዮሲዶችን፣ ኢስትሮጅንን እና ሌሎች በርካታ ትንታኔዎችን ለየ።የዋልታ ኢንተርካሌተር ሁለቱም የዋልታ እና የዋልታ ያልሆኑ ቡድኖች ስላሉት በሃይድሮፎቢክ እና በሃይድሮፊሊክ-የተቀቡ አሚሜዲድ 8 ሞገድ ያላቸው peptides እና ፕሮቲኖች ለመለየት ይጠቅማል። አምዶች) በንግድ ስም Ascentis Express RP-Amide columns ስር ይገኛሉ፣ነገር ግን እነዚህ አምዶች ለአሚን 33 ትንታኔ ብቻ ያገለግላሉ።
አሁን ባለው ጥናት ውስጥ የፖላ-ኢምበድድ የማይንቀሳቀስ ደረጃ (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) ተዘጋጅቶ የተገመገመ የ peptides እና trypsin digestive HSA መለያየት ነው።የቋሚ ደረጃው የተዘጋጀው በሚከተለው ስልት ነው።በቀድሞው ህትመታችን በተገለጸው አሰራር መሰረት የፖስት ሲሊካ ቅንጣቶች ተዘጋጅተው በፖሊቶቶኮል ሬሾ ፖሊቲኮል ሬሾን አንዳንድ ማሻሻያዎችን በማድረግ። (PEG), TMOS, የውሃ አሴቲክ አሲድ ትልቅ pore መጠን ጋር ሲሊካ ቅንጣቶች ለማዘጋጀት ተስተካክሏል ሁለተኛ, አዲስ ligand, phenylmaleimide-ሜቲኤል vinyl isocyanate, የተቀናጀ እና ሲሊካ ቅንጣቶች ለማራገፍ ጥቅም ላይ ዋልታ የተከተተ የማይንቀሳቀስ phase. በውጤቱም የማይንቀሳቀስ id0 ብረት ወደ አይዝጌ 1 በመጠቀም ×. የማሸግ ዘዴ.የዓምዱ ማሸጊያው በሜካኒካዊ ንዝረት በመታገዝ በአምዱ ውስጥ አንድ አይነት አልጋ መፈጠሩን ያረጋግጣል.የታሸገውን አምድ የፔፕታይድ ድብልቆችን አምስት peptides ያቀፈ መለያየትን ይገምግሙ; (ግሊ-ታይር፣ ግሊ-ሊው-ታይር፣ ግሊ-ግሊ-ታይር-አርግ፣ ታይር-ኢሌ-ግሊ-ሰር-አርግ፣ ሉሲን ኢንኬፋሊን) እና ትራይፕሲን መፈጨት የሰው ሴረም አልቡሚን (HAS)። የ HSA peptide ቅልቅል እና ትራይፕሲን መፈጨት ከፒኤፒኤስ አፈጻጸም ጋር ሲነፃፀሩ በጥሩ ጥራት እና ቅልጥፍና ሲለዩ ተስተውለዋል። የ RP-Amide አምድ.ሁለቱም peptides እና ፕሮቲኖች በ PMP አምድ ላይ በደንብ መፍትሄ እና ውጤታማ ሆነው ተስተውለዋል, ይህም ከ Ascentis Express RP-Amide አምድ የበለጠ ውጤታማ ነበር.
ፒኢጂ (ፖሊኢትይሊን ግላይኮል)፣ ዩሪያ፣ አሴቲክ አሲድ፣ ትሪሜቶክሲ ኦርቶሲሊኬት (TMOS)፣ ትራይሜቲል ክሎሮሲላን (TMCS)፣ ትራይፕሲን፣ የሰው ሴረም አልቡሚን (HSA)፣ አሚዮኒየም ክሎራይድ፣ ዩሪያ፣ ሄክሳኔ ሜቲልዲሲላዛኔ (ኤችኤምዲኤስ)፣ ሜታክሪሎይል ክሎራይድ (ኤም.ሲ.ሲ) ፐርኦክሳይድ (BPO)፣ የ HPLC ደረጃ አሴቶኒትሪል (ኤሲኤን)፣ ሜታኖል፣ 2-ፕሮፓኖል፣ እና አሴቶን ከሲግማ-አልድሪች (ሴንት ሉዊስ፣ MO፣ ዩኤስኤ) የተገዛ።
የዩሪያ (8 ግ) ፣ ፖሊ polyethylene glycol (8 ግ) እና 8 ሚሊ 0.01 ኤን አሴቲክ አሲድ ድብልቅ ለ 10 ደቂቃዎች ተወስዷል ፣ ከዚያም 24 ሚሊ TM ኤምኦኤስ በበረዶ-ቀዝቃዛ ሁኔታዎች ውስጥ ተጨምሯል ። የምላሽ ድብልቅው በ 40 ° ሴ ለ 6 ሰአታት ይሞቃል እና ከዚያም በ 120 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ከማይዝግ ብረት ውስጥ ለ 8 ሰአታት ያፈሱ። በ 70 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ለ 12 ሰአታት ደርቋል. የደረቀው ለስላሳ ክብደት በምድጃ ውስጥ ለስላሳ መሬት እና በ 550 ° ሴ ለ 12 ሰአታት በ 550 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ተጨምሯል. ሶስት ስብስቦች ተዘጋጅተው በንጥል መጠን, በቀዳዳ መጠን እና በንጣፍ ስፋት ላይ እንደገና መራባትን ይመረምራሉ.
የሲሊካ ቅንጣቶችን በቅድመ-የተሰራ ሊጋንድ phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (ፒሲኤምፒ) በማሻሻል ራዲያል ፖሊሜራይዜሽን ከስታይሪን ጋር በመሆን የዋልታ ቡድን የያዘ ውህድ ተዘጋጅቷል። ለድምር እና ፖሊቲሪሬን ሰንሰለቶች የማይንቀሳቀስ ደረጃ.የዝግጅቱ ሂደት ከዚህ በታች ተብራርቷል.
N-phenylmaleimide (200 mg) እና methyl vinyl isocyanate (100 mg) በደረቅ ቶሉኢን ውስጥ ይሟሟቸዋል፣ እና 0.1 ሚሊ 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate copolymer (የፒኤምሲሲፒ ፎረይሜር) ፎረሜር 0.1 ml 2.2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ወደ ምላሽ ፍላሽ ተጨምሯል። በ 40 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ውስጥ ለ 3 ሰዓታት በምድጃ ውስጥ ተጣርቶ ይደርቃል.
የደረቁ የሲሊካ ቅንጣቶች (2 ግ) በደረቅ ቶሉኢን (100 ሚሊ ሊት) ውስጥ ተበታትነው በ 500 ሚሊ ሊትር ክብ የታችኛው ጠርሙስ ውስጥ ለ 10 ደቂቃዎች ተጨምረዋል ። ፒኤምሲፒ (10 mg) በቶሉይን ውስጥ ተፈትቷል እና በተቀማጭ ፈንገስ ውስጥ ጠብታ አቅጣጫ ተጨምሯል ። ድብልቅው በ 180 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ተጣርቶ በ 100 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ተጣብቋል ። 60 ° ሴ ለ 3 ሰአታት.ከዚያም ከPMCP ጋር የተጣበቁ የሲሊካ ቅንጣቶች (100 ግራም) በቶሉይን (200 ሚሊ ሊትር) እና 4-hydroxy-TEMPO (2 mL) በ 100 µL ዲቢቲልቲን ዲላራሬት ውስጥ እንደ ማነቃቂያ እና በ 80 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ውስጥ ተጣርቶ በ 80 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ውስጥ ተጣብቋል.
ስታይሬን (1 ሚሊ ሊትር), ቤንዞይል ፐሮክሳይድ BPO (0.5 ml), እና TEMPO-PMCP-የተያያዙ የሲሊካ ቅንጣቶች (1.5 ግራም) በቶሉሊን ውስጥ ተበታትነው በናይትሮጅን ተጠርገዋል.
ናሙናዎቹ ከ 10-3 ቶር ያነሰ የቀረውን ግፊት ለማግኘት በ 393 ኪ ለ 1 ሰአት በጋዝ ተወስደዋል.የ N2 መጠን በ P / P0 = 0.99 በተመጣጣኝ ግፊት ላይ የተጣበቀውን የጠቅላላ ቀዳዳ መጠን ለመወሰን ጥቅም ላይ ይውላል ባዶ እና ligand-bonded silica particles ሞርፎሎጂ (ሂሳብ) በኤሌክትሮን, የጃፓን ቶኪዮ ማይክሮስኮፒ ቴክኖልጂዎች ቅኝት ታይቷል. (ባዶ ሲሊካ እና ligand-የተሳሰረ የሲሊካ ቅንጣቶች) ተለጣፊ የካርቦን ቴፕ በመጠቀም በአሉሚኒየም አምድ ላይ ተቀምጠዋል።ወርቅ በናሙናዎቹ ላይ Q150T sputter coater በመጠቀም ተለጥፏል እና የ 5 nm Au ንብርብር በናሙናዎቹ ላይ ተቀምጧል።ይህ ዝቅተኛ ቮልቴጅን በመጠቀም የሂደቱን ውጤታማነት ያሻሽላል እና ጥሩ እህል ፣ ቀዝቀዝ ያለ ፍላሽ ዩኤስኤ ኤሌትሪክ ይሰጣል። EA1112 elemental analyzer ለኤሌሜንታል ትንተና ጥቅም ላይ ውሏል.A Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 particle size analyzer particle size distributed ን ለማግኘት ጥቅም ላይ ይውላል እርቃናቸውን የሲሊካ ቅንጣቶች እና ligand-የተሳሰረ ሲሊካ ቅንጣቶች (5 mg እያንዳንዱ) በ 5 mL isopropanol ላይ ተበታትነው ነበር, minvorted ለ ኦፕቲካል መጠን, minvorted ለ 5 mL ውስጥ ተበተኑ ነበር isopropanol, minvorted ለ. የ Mastersizer ቤንች.ቴርሞግራቪሜትሪክ ትንተና በደቂቃ በ 5 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ከ 30 እስከ 800 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ባለው የሙቀት መጠን ተካሂዷል.
በመስታወት የተደረደሩ አይዝጌ ብረት ጠባብ-ቦርሳ አምዶች የመጠን (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) የዝቃጭ ማሸጊያ ዘዴን በመጠቀም የታሸጉ ናቸው፣ ይህም በማጣቀሻ ውስጥ ጥቅም ላይ የዋለውን ተመሳሳይ አሰራር በመተግበር ነው። 31.የማይዝግ ብረት አምድ (በመስታወት የተሸፈነ፣ 100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) 1 µm ፍርግር የያዘ መውጫ ፊቲንግ ከስሉሪ ፓከር (Alltech Deerfield, IL, USA) ጋር ተገናኝቷል። 150 ሚሊ ግራም የጽህፈት መሳሪያ በማገድ ወደ ሚቴታን 2 mL ማከማቻ በማቆም የቋሚ ደረጃ ፍሳሾችን ያዘጋጁ። እንደ ስሉሪ ሟሟ እንዲሁም እንደ ፕሮፔሊንግ መሟሟት ጥቅም ላይ ውሏል። 100 MP ለ 10 ደቂቃዎች፣ 80 MP ለ 15 ደቂቃዎች እና 60 MP ለ 30 ደቂቃዎች ግፊት በማድረግ ዓምዱን በቅደም ተከተል ይሙሉ። ግፊቱ ቀስ በቀስ በአምዱ ውስጥ ምንም አይነት ጉዳት እንዳይደርስ ለመከላከል ዓምዱን ከቅዝቃዛ ማሸጊያው ክፍል ያላቅቁት እና አፈፃፀሙን ለመፈተሽ ሌላ ተስማሚ ከመግቢያው እና ከ LC ስርዓት ጋር ያገናኙ።
የኤልሲ ፓምፕ (10AD ሺማድዙ፣ ጃፓን)፣ ኢንጀክተር (ቫልኮ (አሜሪካ) C14 W.05) ከ50nL መርፌ ሉፕ ጋር፣ membrane ደጋሰር (ሺማድዙ DGU-14A)፣ UV-VIS capillary መስኮት ተሰርቷል ልዩ µLC መሣሪያ መፈለጊያ (UV-2075) እና በመስታወት የተደረደሩ አጭር ጠባብ ቱቦዎች እና በጣም ጠባብ ቱቦዎች። አምድ ባንድ ማስፋፋት ከማሸጊያው በኋላ ካፒላሪዎች (50 μm id 365 እና የዩኒየን ካፒላሪዎችን በመቀነስ (50 μm) በ1/16 ኢንች መውጫው ላይ ተጭነዋል።መረጃ አሰባሰብ እና ክሮማቶግራፊ ሂደት በ Multichro 2000 ሶፍትዌር ተከናውኗል። በ 254 nm ክትትል የሚደረግበት ትንተና በ UVgint ተፈትኗል። (ኖርታምፕተን፣ ኤም.ኤ)
አልቡሚን ከሰው ሴረም, ሊዮፊላይዝድ ዱቄት, ≥ 96% (አጋሮዝ ጄል ኤሌክትሮፊክስ) 3 ሚ.ግ ከትራይፕሲን (1.5 ሚ.ግ.), 4.0 M ዩሪያ (1 ሚሊ ሊትር) እና 0.2 ሜ አሚዮኒየም ባይካርቦኔት (1 ሚሊ ሊትር) ጋር ተቀላቅሏል. መፍትሄው ለ 10 ደቂቃዎች ተወስዶ በ 67 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ውስጥ በውሃ መታጠቢያ ውስጥ እና በ 37 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ውስጥ በውሃ መታጠቢያ ውስጥ ይቀመጣል. 0.1% TFA. መፍትሄውን ያጣሩ እና ከ 4 ° ሴ በታች ያከማቹ.
የፔፕታይድ ድብልቆችን እና የ HSA ትራይፕሲን መፈጨትን መለየት በ PMP አምዶች ላይ በተናጠል ተገምግመዋል።
የ SEM ምስሎች ባዶ የሲሊካ ቅንጣቶች እና በ ligand-የተገናኙ የሲሊካ ቅንጣቶች በ FIG ውስጥ ይታያሉ. 2 .ሴም ባዶ የሲሊካ ቅንጣቶች (A, B) ምስሎች እንደሚያሳዩት, ከቀደምት ጥናቶቻችን በተለየ, እነዚህ ቅንጣቶች ክብ ቅርጽ ያላቸው ሲሆን ይህም ቅንጣቶች ይረዝማሉ ወይም መደበኛ ያልሆነ ሲምሜትሪ አላቸው. የሲሊካ ቅንጣቶች.
በባዶ የሲሊካ ቅንጣቶች (A፣ B) እና ligand-የተሳሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች (ሲ፣ ዲ) የኤሌክትሮን ማይክሮስኮፕ ምስሎችን በመቃኘት ላይ።
ባዶ ሲሊካ ቅንጣቶች እና ligand-የተሳሰረ ሲሊካ ቅንጣቶች ቅንጣት መጠን ማከፋፈያዎች ምስል 3 (A) ውስጥ ይታያሉ.ድምጽ ላይ የተመሠረተ ቅንጣት መጠን ስርጭት ኩርባዎች የሲሊካ ቅንጣቶች መጠን ጨምሯል ኬሚካል ማሻሻያ በኋላ (የበለስ. 3A). የ PMP 3.36 μm ነው፣ ከቀደምት ጥናታችን ጋር ሲነጻጸር ማስታወቂያ (0.5) ዋጋ 3.05 μm (የ polystyrene-bound silica particles) ቀደም ብለን ያጠናነው ከፖሊstyrene ጋር የተያያዘ የሲሊካ ቅንጣቢ ክፍል ነው። ይህ ማለት የሲሊካ ቅንጣቶችን ከስታይሪን ጋር መተግበር በሲሊካ ወለል ላይ የ polystyrene ንብርብር (0.97 µm) ብቻ ተቀምጧል፣ በPMP ደረጃ የንብርብሩ ውፍረት 1.38 µm ነበር።
የተራቆቱ የሲሊካ ቅንጣቶች እና በሊንጋድ የታሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች ቅንጣቢ መጠን ስርጭት (A) እና ቀዳዳ መጠን ስርጭት (B)።
የአሁኑ ጥናት የሲሊካ ቅንጣቶች ስፋት ፣ ቀዳዳ መጠን እና የገጽታ ስፋት በሰንጠረዥ 1 (ለ) ውስጥ ተሰጥቷል ። የ PSD መገለጫዎች ባዶ የሲሊካ ቅንጣቶች እና ligand-የተገናኙ ሲሊካ ቅንጣቶች በስእል 3 (B) ውስጥ ይታያሉ። ውጤቶቹ ከቀደምት ጥናታችን ጋር ይነፃፀራሉ። በሰንጠረዥ 1(ለ) ላይ እንደሚታየው የጉድጓድ መጠኑ በ69 እንደሚቀንስ ያሳያል። ቀደም ሲል ጥናታችን (124 ሜ 2 / ሰ) በሰንጠረዥ 1 (ለ) ላይ እንደሚታየው የሲሊካ ቅንጣቶች የላይኛው ክፍል (m2 / g) እንዲሁም ከኬሚካል ማስተካከያ በኋላ ከ 116 m2 / g ወደ 105 m2 / g ቀንሷል.
የቋሚ ደረጃ ኤለሜንታል ትንተና ውጤቶች በሰንጠረዥ 2. የካርቦን ጭነት የአሁኑ የማይንቀሳቀስ ደረጃ 6.35% ነው, ይህም ካለፈው ጥናት የካርቦን ጭነት ያነሰ ነው (polystyrene bonded silica ቅንጣቶች, 7.93% 35 እና 10.21%, በቅደም ተከተል) 42. የካርቦን ጭነት የወቅቱ ዝቅተኛ ነው, ምክንያቱም የወቅቱ የጽህፈት መሳሪያ ዝቅተኛ ነው, ምክንያቱም SP. ስታይሬን ፣ አንዳንድ የዋልታ ሊንዶች እንደ phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) እና 4-hydroxy-TEMPO ጥቅም ላይ ውለዋል ። የናይትሮጅን ክብደት መቶኛ የአሁኑ የማይንቀሳቀስ ደረጃ 2.21% ነው ፣ ከ 0.1735 እና 0.85% ናይትሮጅን በክብደት ከ 0.1735 እና 0.85% ጋር ሲነፃፀር ፣ አሁን ያለው የናይትሮጂን ደረጃ በ wt ከፍ ያለ ነው ማለት ነው ። phenylmaleimide.በተመሳሳይ, ምርቶች የካርቦን ጭነቶች (4) እና (5) 2.7% እና 2.9%, በቅደም, የመጨረሻው ምርት (6) ያለውን የካርቦን ጭነት 6.35% ነበር ሳለ, ሠንጠረዥ 2. የክብደት መቀነስ PMP የማይንቀሳቀስ ደረጃ ጋር ታይቷል, እና TGA ጥምዝ በስእል 8 ውስጥ ጥሩ ኪሳራ ያሳያል, TGA ጥምዝ በስእል 8. የካርቦን ጭነት (6.35%) ምክንያቱም ማያያዣዎች C ብቻ ሳይሆን N, O እና H ጭምር ይይዛሉ.
የ phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ligand የሲሊካ ቅንጣቶች ላይ ላዩን ማሻሻያ ተመርጧል ምክንያቱም የዋልታ phenylmaleimide ቡድኖች እና vinylisocyanate ቡድኖች አሉት.Vinyl isocyanate ቡድኖች ሕያው አክራሪ polymerization በማድረግ styrene ጋር ተጨማሪ ምላሽ ይችላሉ.ሁለተኛው ምክንያት አንድ ቡድን ማስገባት ነው እና Analyt ያለውን ጣቢያ መካከል መካከለኛ መስተጋብር እና ምንም ጠንካራ ግንኙነት ያለው ጣቢያ. ደረጃ ፣ የ phenylmaleimide moiety በመደበኛ ፒኤች ላይ ምንም ምናባዊ ክፍያ ስለሌለው የቋሚ ደረጃው polarity በጥሩ የ styrene መጠን እና የነፃ ራዲካል ፖሊሜራይዜሽን ምላሽ ጊዜ ቁጥጥር ሊደረግበት ይችላል። የምላሹ የመጨረሻ ደረጃ (ነፃ ራዲካል ፖሊሜራይዜሽን) ወሳኝ እና የቋሚውን ፖላሪቲ መለወጥ ይችላል። እና ምላሽ ጊዜ የቋሚ ደረጃ ያለውን የካርቦን ጭነት ጨምሯል እና በግልባጩ.SPs የተለያዩ ውህዶች ጋር የተዘጋጀ ስታይሪን የተለያዩ የካርቦን ጭነት አላቸው.እንደገና እነዚህን ቋሚ ደረጃዎች ወደ አይዝጌ ብረት አምዶች መጫን እና ያላቸውን chromatographic አፈጻጸም ያረጋግጡ (ምርጫ, ጥራት, N ዋጋ, ወዘተ..) በእነዚህ ሙከራዎች ላይ በመመስረት, አንድ የተመቻቸ አጻጻፍ ተመርጧል PMP ቁጥጥር ያለው ጥራት ያለው የጽህፈት መሳሪያ እና የፒኤምፒ የጽህፈት ቤት ቆይታን ለማዘጋጀት ተመርጧል.
አምስት የፔፕታይድ ድብልቆች (ጊሊ-ታይር, ግሊ-ሊ-ታይር, ግሊ-ግሊ-ታይር-አርግ, ቲር-ኢሌ-ግሊ-ሰር-አርግ, ሉሲን ኢንኬፋሊን) እንዲሁም የሞባይል ደረጃን በመጠቀም የ PMP አምድ በመጠቀም ይገመገማሉ; 60/40 (v/v) acetonitrile/ውሃ (0.1% TFA) በ 80 μL/ደቂቃ ፍሰት ፍጥነት።በጥሩ ኢሌሽን ሁኔታዎች፣ የቲዎሬቲካል ፕሌትስ ቁጥር (N) በአንድ አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) 20,000 ± 100 (200,000 ፕሌትስ/ኤም ፒ 3) ዋጋ ይሰጣል። አምዶች እና ክሮማቶግራሞች በስእል 5A ላይ ይታያሉ ፈጣን ትንታኔ በ PMP አምድ ላይ በከፍተኛ ፍጥነት (700 μL / ደቂቃ), አምስት peptides በአንድ ደቂቃ ውስጥ ተፈትቷል, N እሴቶች በጣም ጥሩ ነበሩ, 13,500 ± 330 በአንድ አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ), 135,00 ፕሌትስ ጋር ይዛመዳል. አምዶች (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) በሦስት የተለያዩ የፒኤምፒ ቋሚ ደረጃዎች ተሞልተው እንደገና መራባትን ለመፈተሽ በእያንዳንዱ አምድ ላይ ያለው የትንታኔ ትኩረት እጅግ በጣም ጥሩውን የብርሃን ሁኔታዎችን እና የቲዎሬቲካል ሳህኖችን ቁጥር በመጠቀም እና የማቆያ ጊዜን በመጠቀም በእያንዳንዱ አምድ ላይ አንድ አይነት የሙከራ ድብልቅን ይለያሉ ። ለ PMP አምዶች የመራቢያ መረጃ ከፒኤምፒ አምዶች በጥሩ ሁኔታ በሠንጠረዥ 4 ውስጥ ይታያል ። በሰንጠረዥ 3 ላይ እንደሚታየው % RSD እሴቶች።
በ PMP አምድ (B) እና Ascentis Express RP-Amide አምድ (A) ላይ የ peptide ድብልቅን መለየት; የሞባይል ደረጃ 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP አምድ ልኬቶች (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ); የትንታኔው የውህዶች ቅደም ተከተል-1 (ግሊ-ታይር) ፣ 2 (ግሊ-ሉ-ታይር) ፣ 3 (ግሊ-ግሊ-ታይር-አርግ) ፣ 4 (ታይር-ኢሌ-ግላይ-ሰር-አርግ) እና 5 (ሌይሲን) አሲድ ኢንኬፋሊን))።
የፒኤምፒ አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) ከፍተኛ አፈፃፀም ባለው የሂውማን ሴረም አልበሚን ትራይፕቲክ ዳይጄስትስ በከፍተኛ አፈፃፀም ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ለመለየት ተገምግሟል።በስእል 6 ላይ ያለው ክሮማቶግራም ናሙናው በደንብ እንደተለየ እና ጥራቱ በጣም ጥሩ እንደሆነ ያሳያል።HSA መፍጨት በ 100 µL/ደቂቃ ፣ ሞባይል ውሀ እና 30% አሴቶኒ። TFA.በ chromatogram (ስእል 6) ላይ እንደሚታየው የ HSA መፍጨት ከ 17 peptides ጋር በሚዛመዱ 17 ጫፎች ተከፍሏል. በ HSA መፍጨት ውስጥ ያለው የእያንዳንዱ ጫፍ የመለየት ውጤታማነት ይሰላል እና እሴቶቹ በሰንጠረዥ 5 ውስጥ ተሰጥተዋል.
የ HSA (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) tryptic diest በ PMP አምድ ላይ ተለያይቷል; የፍሰት መጠን (100 µL/ደቂቃ)፣ የሞባይል ደረጃ 60/40 አሴቶኒትሪል/ውሃ ከ0.1% TFA ጋር።
ኤል የአምዱ ርዝመት ነው ፣ η የሞባይል ደረጃ viscosity ነው ፣ ΔP የአምድ የኋላ ግፊት ነው ፣ እና u የተንቀሳቃሽ ስልክ መስመር ቀጥተኛ ፍጥነት ነው። መታወቂያ) ከቀደምት ጥናታችን ጋር ተመሳሳይ ነበር Ref.34. በአዕማድ ላይ ከመጠን በላይ ባለ ቀዳዳ ቅንጣቶች የተሞላው የመተላለፊያ ይዘት: 1.7 × 10-15 ለ 1.3 μm ቅንጣቶች, 3.1 × 10-15 ለ 1.7 μm ቅንጣቶች, 5.2 × 10-15 እና 2.2 × 1.2 ሚሜ; ቅንጣቶች ለ 5 μm ቅንጣቶች 43.ስለዚህ, የፒኤምፒ ደረጃ መተላለፍ ከ 5 μm ኮር-ሼል ቅንጣቶች ጋር ተመሳሳይ ነው.
Wx በክሎሮፎርም የታሸገው የዓምድ ክብደት፣ Wy በሜታኖል የተሞላው የዓምድ ክብደት፣ እና ρ የሟሟ መጠን ነው። ቀደም ሲል ያጠናቸው C18-Urea አምዶች 31 በቅደም ተከተል 0.63 እና 0.55 ናቸው.ይህ ማለት የዩሪያ ማያያዣዎች መኖራቸው የቋሚውን ደረጃ መተላለፍን ይቀንሳል ማለት ነው. የሲሊካ ቅንጣቶች በ C18-አይነት ቋሚ ደረጃዎች ውስጥ የ C18 ligands ከሲሊካ ቅንጣቶች ጋር እንደ መስመራዊ ሰንሰለቶች ተያይዘዋል ፣ በ polystyrene-አይነት ቋሚ ደረጃዎች ውስጥ ፣ A በአንጻራዊነት ወፍራም ፖሊመር ንብርብር በዙሪያው ይመሰረታል ። በተለመደው ሙከራ ፣ የአምዱ porosity እንደሚከተለው ይሰላል ።
ምስል 7A, B የ PMP አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) እና Ascentis Express RP-Amide አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) ተመሳሳይ የብርሃን ሁኔታዎችን (ማለትም 60/40 ACN/H2O እና 0.1% TFA) ያሳያል። ) የቫን ዲምተር ሴራ. የተመረጡት የፔፕታይድ ድብልቆች (ጊሊ-ታይር፣ ግላይ-ሌው-ታይር፣ ግሊ-ግሊ-ታይር-አርግ፣ ታይር-ኢሌ-ግሊ-ሰር-አርግ፣ ሉሲን ኢንኬፋሊን) በ20 µL ውስጥ ተዘጋጅተዋል/ የሁለቱም አምዶች ዝቅተኛው የፍሰት መጠን 800 µL/ደቂቃ ነው። ዝቅተኛው የHETPm መጠን 800 µL/ደቂቃ ነው። አምድ እና የአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ 2.6 µm እና 3.9 µm እንደቅደም ተከተላቸው።የHETP እሴቶች እንደሚያመለክቱት የፒኤምፒ አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) የመለየት ቅልጥፍና በንግድ ከሚገኘው Ascentis Express RP-Amide አምድ (100 × 1) ዲ አምድ (100 × 1) ዲ ምስል ያሳያል። እየጨመረ ከሚሄደው ፍሰት ጋር የ N ዋጋ መቀነስ ካለፈው ጥናታችን ጋር ሲነጻጸር ከፍተኛ አይደለም የ PMP አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) ከአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ ጋር ሲነፃፀር ከፍተኛ የመለየት ውጤታማነት በአሁኑ ሥራ34 ውስጥ ጥቅም ላይ በሚውለው የንጥል ቅርጽ, መጠን እና ውስብስብ የአምድ ማሸግ ሂደቶች ላይ የተመሰረተ ነው.
(A) ቫን ዴምተር ሴራ (HETP ከሞባይል ደረጃ መስመራዊ ፍጥነት) በፒኤምፒ አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) በ60/40 ACN/H2O ከ 0.1% TFA ጋር።(B) van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity) Ascentis Express RP-Amide/0 × 1000 አምድ በመጠቀም የተገኘ። ACN/H2O ከ0.1% TFA ጋር።
ከፍተኛ አፈፃፀም ባለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ውስጥ ሰው ሰራሽ የፔፕታይድ ድብልቆችን እና ትራይፕሲን መፈጨትን ለመለየት የሚያስችል የዋልታ-የተከተተ የ polystyrene የጽህፈት መሳሪያ ተዘጋጅቶ ተገምግሟል። የሲሊካ ቅንጣቶች መጠን ፣ የቋሚ ደረጃ ቁጥጥር ውህደት እና ውስብስብ አምድ ማሸግ ከከፍተኛ መለያየት ቅልጥፍና በተጨማሪ ዝቅተኛ የአምድ የኋላ ግፊት በከፍተኛ ፍሰት መጠን የዚህ የማይንቀሳቀስ ደረጃ ሌላው ጥቅም ነው።የፒኤምፒ አምዶች ጥሩ የመራባት ችሎታን ያሳያሉ እና ለ peptide ድብልቅ እና ትራይፕሲን መፈጨት ለመተንተን ሊያገለግሉ ይችላሉ የተለያዩ ፕሮቲኖች። በፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ውስጥ የመድኃኒት ተክሎች እና የፈንገስ ውጤቶች ለወደፊቱ የፒኤምፒ አምዶች ፕሮቲኖችን እና ሞኖክሎናል ፀረ እንግዳ አካላትን ለመለየት ይገመገማሉ።
ፊልድ፣ JK፣ Euerby፣ MR፣ Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ስለ Peptide መለያየት ሲስተምስ በተገለበጠ ደረጃ ክሮማቶግራፊ ላይ የተደረገ ጥናት ክፍል አንድ፡ የአምድ ባህሪ ፕሮቶኮል ልማት.J. Chromatography.1603፣ 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019)።
ጎሜዝ, ቢ እና ሌሎች የተሻሻለ ንቁ peptides ተላላፊ በሽታዎችን ለማከም የተነደፈ.ባዮቴክኖሎጂ.Advanced.36 (2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. ሠራሽ ቴራፒዩቲክ peptides: ሳይንስ እና ገበያ. የመድሃኒት ግኝት.15 (1-2) ዛሬ, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.12.109.
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. የላቀ ፕሮቲዮሚክ ፈሳሽ Chromatography.J. Chromatography.A 1261, 78-90 (2012).
ሊዩ፣ ደብሊው እና ሌሎች የላቀ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ-ማስ ስፔክትሮሜትሪ በስፋት የታለሙ ሜታቦሎሚክስ እና ፕሮቲሞሚክስን ማካተት ያስችላል።አኑስ.ቺም.አክታ 1069፣ 89-97 (2019)።
Chesnut, SM & Salisbury, JJ UHPLC በመድኃኒት ልማት ውስጥ ያለው ሚና.J. ሴፕቴምበር Sci.30 (8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM ለፈጣን መለያየት የ ultrahigh pressure ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ መሰረታዊ እና ተግባራዊ ገጽታዎች.J. ሴፕቴምበር Sci.30 (8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. እጅግ በጣም ከፍተኛ አፈፃፀም ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ በመድሃኒት ልማት ውስጥ ማመልከቻ. Chromatography.1119(1-2)፣ 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006)።
ጉ, ኤች እና ሌሎች ሞኖሊቲክ ማክሮፖረስ ሃይድሮጅልስ ከዘይት-ውሃ ውስጥ ከፍተኛ የውስጥ ክፍል emulsion ለ enteroviruses ቅልጥፍና ለማጣራት.Chemical.Britain.J. 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ሚና በፕሮቲዮቲክስ.ጄ. Chromatography.A 1053 (1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L.& Guillarme, D. በተገላቢጦሽ ደረጃ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ የቲራፔቲክ peptides እና ፕሮቲኖች መለያየት ላይ ብቅ ያሉ አዝማሚያዎች፡ ቲዎሪ እና አፕሊኬሽኖች። ፋርማሲ.ባዮሜዲካል ሳይንስ.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC RP-RP-HPLC ስርዓትን በመጠቀም የተለያዩ የፒኤች እሴቶችን በመጠቀም የ peptides ሁለት-ልኬት መለያየት የመጀመሪያ እና ሁለተኛ መለያየት። ሴፕቴምበር 28 (14), 1694-1703 (2005).
ፌሌቲ፣ ኤስ እና ሌሎች በC18 ንኡስ-2 μm ሙሉ እና ላዩን ባለ ቀዳዳ ቅንጣቶች የታሸጉ ከፍተኛ ቅልጥፍና ያላቸው ክሮማቶግራፊያዊ አምዶች የጅምላ ማስተላለፊያ ባህሪያት እና የእንቅስቃሴ አፈጻጸም ተመርምሯል። ሴፕቴምበር Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al.የቅርብ ጊዜ አዝማሚያዎች እና የትንታኔ ፈተናዎች የዕፅዋት ባዮአክቲቭ peptides.anus.biological anus.Chemical.410(15)፣ 3425–3444
ሙለር፣ ጄቢ እና ሌሎች የሕይወት መንግሥት ፕሮቲዮሚክ መልክአ ምድር ተፈጥሮ 582(7813)፣ 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020)።
DeLuca, C. et al. ቴራፒዩቲካል peptides በዝግጅት ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ወደ ታች ማቀነባበር. ሞለኪውል (ባሴል, ስዊዘርላንድ) 26 (15), 4688 (2021).
ያንግ፣ Y. & Geng፣ X. የተቀላቀለ ሁነታ ክሮማቶግራፊ እና ለባዮፖሊመሮች አተገባበር። Chromatography.A 1218(49), 8813-8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Ligands ለድብልቅ ሁነታ ፕሮቲን ክሮማቶግራፊ፡ መርህ፣ ባህሪ እና ዲዛይን። ባዮቴክኖሎጂ.144 (1), 3-11 (2009).