Nature.comን ስለጎበኙ እናመሰግናለን። የሚጠቀሙበት የአሳሽ ስሪት ለCSS የተወሰነ ድጋፍ አለው። ለተሻለ ተሞክሮ፣ የዘመነ አሳሽ እንዲጠቀሙ (ወይም በኢንተርኔት ኤክስፕሎረር ውስጥ የተኳሃኝነት ሁነታን እንዲያጠፉ) እንመክራለን። ይህ በእንዲህ እንዳለ፣ ቀጣይነት ያለው ድጋፍ ለማረጋገጥ፣ ጣቢያውን ያለ ቅጦች እና ጃቫስክሪፕት እናሳያለን።
ቀዳዳ ያላቸው የሲሊካ ቅንጣቶች በሶል-ጄል ዘዴ ተዘጋጅተው ማክሮፖረስ ቅንጣቶችን ለማግኘት አንዳንድ ማሻሻያዎችን አድርገዋል። እነዚህ ቅንጣቶች በተገላቢጦሽ የመጨመሪያ ሰንሰለት ዝውውር (RAFT) ፖሊመሪዜሽን ከN-phenylmaleemide-methylvinylisocyanate (PMI) እና ስታይሪን በመጠቀም የ polystyrene (PMP) የማይንቀሳቀስ ደረጃን ለማዘጋጀት N-phenylmaleemide intercalation ለማዘጋጀት ተወስደዋል። ጠባብ-ቦረቦረ አይዝጌ ብረት አምዶች (100 × 1.8 ሚሜ አይዲ) በ slurry ማሸጊያ ታሽገዋል። አምስት ፔፕታይዶችን (Gly-Tyr፣ Gly-Leu-Tyr፣ Gly-Gly-Tyr-Arg፣ Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg፣ Leucine Enkephalin) ክሮማቶግራፊክ አፈጻጸም) እና የሰው ሴረም አልቡሚን (HAS) ትራይፕሲን መፈጨትን ያካተተ የፔፕታይድ ድብልቅ የPMP አምድ መለያየት ተገምግሟል። በተመቻቸ የማምለጫ ሁኔታዎች ውስጥ፣ የፔፕታይድ ድብልቅ የቲዎሬቲካል ሳህን ብዛት እስከ 280,000 ሳህኖች/ሜ² ድረስ ከፍ ያለ ነው። የተሻሻለውን አምድ የመለያየት አፈጻጸም በማነፃፀር በንግድ አሴንቲስ ኤክስፕረስ አርፒ-አሚድ አምድ፣ የPMP አምድ የመለያየት አፈጻጸም በመለያየት ቅልጥፍና እና ጥራት ረገድ ከንግድ አምድ የላቀ መሆኑን ተስተውሏል።
በቅርብ ዓመታት ውስጥ፣ የባዮፋርማሱቲካል ኢንዱስትሪ የገበያ ድርሻ በከፍተኛ ሁኔታ እየጨመረ በመምጣቱ እየጨመረ የመጣ ዓለም አቀፍ ገበያ ሆኗል። የባዮፋርማሱቲካል ኢንዱስትሪ 1,2,3 ፈንጂ እድገትን ተከትሎ፣ የፔፕታይዶች እና ፕሮቲኖች ትንተና በጣም ተፈላጊ ነው። ከዒላማው ፔፕታይድ በተጨማሪ፣ በፔፕታይድ ውህደት ወቅት በርካታ ቆሻሻዎች ይፈጠራሉ፣ በዚህም ምክንያት የተፈለገውን ንፅህና ለማግኘት የክሮማቶግራፊ ንፅህናን ይጠይቃል። በሰውነት ፈሳሾች፣ ሕብረ ሕዋሳት እና ሴሎች ውስጥ ያሉ ፕሮቲኖችን መተንተን እና መለየት በአንድ ናሙና ውስጥ ሊገኙ የሚችሉ በርካታ ዝርያዎች በመኖራቸው እጅግ ፈታኝ ተግባር ነው። የጅምላ ስፔክትሮሜትሪ ለፔፕታይድ እና ለፕሮቲን ቅደም ተከተል ውጤታማ መሳሪያ ቢሆንም፣ እንደዚህ ያሉ ናሙናዎች በአንድ ማለፊያ ወደ ጅምላ ስፔክትሮሜትር ከተወጉ፣ መለያየት ተስማሚ አይሆንም። ይህ ችግር ከኤምኤስ ትንተና በፊት ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (LC) መለያየትን በመተግበር ሊቀንስ ይችላል፣ ይህም በተወሰነ ጊዜ ወደ ጅምላ ስፔክትሮሜትር የሚገቡትን አናሊቶች ቁጥር ይቀንሳል4,5,6። በተጨማሪም፣ በፈሳሽ ደረጃ መለያየት ወቅት አናሊቶች በጠባብ ክልሎች ውስጥ ሊያተኩሩ ይችላሉ፣ በዚህም እነዚህን አናሊቶች በማተኮር እና የኤምኤስ ምርመራን ያሻሽላሉ። ስሜታዊነት። ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (LC) ባለፉት አስርት ዓመታት ውስጥ በከፍተኛ ሁኔታ እድገት አሳይቷል እና በፕሮቲዮሚክ ትንተና ውስጥ ተወዳጅ ዘዴ ሆኗል7,8,9,10.
የተገላቢጦሽ-ደረጃ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ (RP-LC) እንደ ቋሚ ደረጃ ኦክታዴሲል-የተሻሻለ ሲሊካ (ODS) በመጠቀም የፔፕታይድ ድብልቆችን ለማጥራት እና ለመለየት በስፋት ጥቅም ላይ ይውላል11,12,13። ሆኖም፣ የRP ቋሚ ደረጃዎች ውስብስብ አወቃቀራቸው እና አምፊፊሊክ ባህሪያቸው ምክንያት የፔፕታይዶችን እና ፕሮቲኖችን አጥጋቢ መለያየት አያቀርቡም 14,15። ስለዚህ፣ ከፖላር እና ከፖላር ያልሆኑ ክፍሎች ጋር ፔፕታይዶችን እና ፕሮቲኖችን ለመተንተን ልዩ የተነደፉ ቋሚ ደረጃዎች ያስፈልጋሉ ከእነዚህ ተንታኞች ጋር ለመገናኘት እና ለማቆየት16. ባለብዙ ሞዳል መስተጋብሮችን የሚያቀርበው የተቀላቀለ-ሁነታ ክሮማቶግራፊ፣ የፔፕታይዶችን፣ ፕሮቲኖችን እና ሌሎች ውስብስብ ድብልቆችን ለመለየት ከRP-LC አማራጭ ሊሆን ይችላል። በርካታ የተደባለቀ-ሁነታ ቋሚ ደረጃዎች ተዘጋጅተዋል፣ እና በእነዚህ ደረጃዎች የታሸጉ አምዶች ለፔፕታይድ እና ፕሮቲን መለያየት ጥቅም ላይ ውለዋል።17,18,19,20,21. የተቀላቀለ-ሁነታ ቋሚ ደረጃዎች (WAX/RPLC፣ HILIC/RPLC፣ የፖላር ኢንተርካሌሽን/RPLC) ለፔፕታይድ እና ፕሮቲን ተስማሚ ናቸው። የዋልታ እና የዋልታ ያልሆኑ ቡድኖች በመኖራቸው ምክንያት የሚፈጠሩ መለያየት22,23,24,25,26,27,28። በተመሳሳይ፣ የዋልታ እርስ በርስ የሚገናኙ የማይንቀሳቀሱ ደረጃዎች ከኮቫለንት ጋር የተያያዙ የዋልታ ቡድኖች ጋር ጥሩ የመለያየት ኃይል እና ለዋልታ እና ላልሆኑ አናሌቶች ልዩ ምርጫ ያሳያሉ፣ ምክንያቱም መለያየት በአናሌት እና በቋሚ ደረጃ መካከል ባለው መስተጋብር ላይ የተመሰረተ ነው። ባለብዙ ሞዳል መስተጋብሮች 29፣ 30፣ 31፣ 32። በቅርብ ጊዜ፣ ዣንግ እና ሌሎችም። 30 ዶዴሲል-የተጠናቀቀ ፖሊአሚን የማይንቀሳቀስ ደረጃ አዘጋጅቶ በተሳካ ሁኔታ ሃይድሮካርቦኖችን፣ ፀረ-ጭንቀት መድሃኒቶችን፣ ፍሌቮኖይድስን፣ ኑክሊዮሳይዶችን፣ ኢስትሮጅኖችን እና ሌሎች በርካታ አናላይቶችን ለየ። የፖላር ኢንተርካሌተር የፖላር እና የፖላር ያልሆኑ ቡድኖች አሉት፣ ስለዚህ ሃይድሮፎቢክ እና ሃይድሮፊሊክ ሞይቲስ ያላቸውን ፔፕታይዶችን እና ፕሮቲኖችን ለመለየት ሊያገለግል ይችላል። የፖላር-ኢምቤድ አምዶች (ለምሳሌ፣ አሚድ-ኢምቤድ C18 አምዶች) በንግድ ስም Ascentis Express RP-Amide አምዶች ስር ለንግድ ይገኛሉ፣ ነገር ግን እነዚህ አምዶች ለአሚን 33 ትንተና ብቻ ያገለግላሉ።
በአሁኑ ጥናት፣ የፔፕታይዶችን እና የHSA ትራይፕሲን ውህዶችን ለመለየት የፖላር-ኢምቤድ የማይንቀሳቀስ ምዕራፍ (N-phenylmaleemide-embedded polystyrene) ተዘጋጅቶ ተገምግሟል። የማይንቀሳቀስ ምዕራፍ የተዘጋጀው በሚከተለው ስትራቴጂ ነው። ባለ ቀዳዳ ሲሊካ ቅንጣቶች በቀድሞው ህትመታችን በተሰጠው አሰራር መሰረት ተዘጋጅተው በዝግጅት ፕሮቶኮል ላይ አንዳንድ ማሻሻያዎችን በማድረግ ተዘጋጅተዋል። የዩሪያ፣ የፖሊኢታይሊን ግላይኮል (PEG)፣ TMOS እና የውሃ አሴቲክ አሲድ ጥምርታ ትልቅ የቀዳዳ መጠን ያላቸውን የሲሊካ ቅንጣቶች ለማዘጋጀት ተስተካክሏል። ሁለተኛ፣ አዲስ ሊጋንድ፣ ፌኒልማሌሚድ-ሜቲል ቪኒል ኢሶሲያኔት፣ ተቀላቅሎ የሲሊካ ቅንጣቶችን ለማውጣት በፖላር የተከተተ የማይንቀሳቀስ ምዕራፍ ለማዘጋጀት ጥቅም ላይ ውሏል። የተገኘው የማይንቀሳቀስ ምዕራፍ በተመቻቸ የማሸጊያ ዘዴ በመጠቀም በማይዝግ ብረት አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) ውስጥ ታሽጓል። የአምድ ማሸጊያው በአምዱ ውስጥ ተመሳሳይነት ያለው አልጋ መፈጠሩን ለማረጋገጥ በሜካኒካል ንዝረት ይረዳል። አምስት ፔፕታይዶችን ያካተተ የፔፕታይድ ድብልቆች የታሸጉ የአምድ መለያየትን ይገምግሙ፤ (Gly-Tyr፣ Gly-Leu-Tyr፣ Gly-Gly-Tyr-Arg፣ Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg፣ Leucine Enkephalin) እና የሰው ሴረም አልቡሚን (HAS) የትራይፕሲን ዳይጀስት። የ HSA የፔፕታይድ ድብልቅ እና የትራይፕሲን ዳይጀስት በጥሩ ጥራት እና ቅልጥፍና ተለይተው ታይተዋል። የ PMP አምድ የመለየት አፈጻጸም ከአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ ጋር ተነጻጽሯል። ሁለቱም ፔፕታይዶች እና ፕሮቲኖች በPMP አምድ ላይ በደንብ የተፈቱ እና ቀልጣፋ ሆነው ተስተውለዋል፣ ይህም ከአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ የበለጠ ቀልጣፋ ነበር።
PEG (ፖሊኢቲሊን ግላይኮል)፣ ዩሪያ፣ አሲቲክ አሲድ፣ ትሪሜቶክሲ ኦርቶሲሊኬት (TMOS)፣ ትሪሜቲል ክሎሮሲላን (TMCS)፣ ትራይፕሲን፣ የሰው ሴረም አልቡሚን (HSA)፣ አሞኒየም ክሎራይድ፣ ዩሪያ፣ ሄክሳን ሜቲልዲስላዛኔ (ኤችኤምዲኤስ)፣ ሜታክሪሎይል ክሎራይድ (ኤምሲ)፣ ስታይሪን፣ 4-ሃይድሮክሲ-ቴምፖ፣ ቤንዞይል ፐርኦክሳይድ (ቢፒኦ)፣ HPLC ግሬድ አሲቶኒትሪል (ኤሲኤን)፣ ሜታኖል፣ 2-ፕሮፓኖል እና አሲቶን የተገዛው ከሲግማ-አልድሪች (ሴንት ሉዊስ፣ ሚዙሪ፣ ዩኤስኤ) ነው።
የዩሪያ (8 ግራም)፣ የፖሊኢታይሊን ግላይኮል (8 ግራም) እና 8 ሚሊ ሊትር 0.01 ናሲቲክ አሲድ ድብልቅ ለ10 ደቂቃዎች ተቀላቅሎ ከዚያም 24 ሚሊ ሊትር TMOS በበረዶ ቀዝቃዛ ሁኔታዎች ውስጥ ተጨምሮበታል። የምላሽ ድብልቁ በ40°ሴ ለ6 ሰዓታት ከዚያም በ120°ሴ ለ8 ሰዓታት በማይዝግ ብረት አውቶክላቭ ውስጥ እንዲሞቅ ተደርጓል። ውሃው ፈሰሰ እና የቀረው ቁሳቁስ በ70°ሴ ለ12 ሰዓታት እንዲደርቅ ተደርጓል። የደረቀው ለስላሳ ክብደት በምድጃ ውስጥ ለስላሳ በሆነ ሁኔታ ተፈጭቶ ለ12 ሰዓታት በ550°ሴ እንዲቆይ ተደርጓል። በቅንጣት መጠን፣ በቀዳዳ መጠን እና በገጽታ ስፋት ውስጥ የመራባት ችሎታን ለመመርመር ሶስት ክፍሎች ተዘጋጅተው ተለይተው ተለይተዋል።
ቅድመ-የተዋሃዱ ሊጋንድ ፌኒልማሌሚድ-ሜቲልቪኒሊሶሲያኔት (PCMP) ያላቸው የሲሊካ ቅንጣቶችን የገጽታ ለውጥ በማድረግ እና ከስታይሪን ጋር ራዲያል ፖሊሜራይዜሽን ተከትሎ፣ የፖላር ቡድን የያዘ ውህድ ተዘጋጅቷል። ለስብስብ እና ለፖሊስቲሪን ሰንሰለቶች የጽህፈት ደረጃ። የዝግጅት ሂደቱ ከዚህ በታች ተብራርቷል።
ኤን-ፌኒልማሊሚድ (200 ሚ.ግ) እና ሜቲል ቪኒል ኢሶሲያኔት (100 ሚ.ግ) በደረቅ ቶሉይን ውስጥ ተሟጠዋል፣ እና ፌኒልማሊሚድ-ሜቲል ቪኒል ኢሶሲያኔት ኮፖሊመር (PMCP) ለማዘጋጀት 0.1 ሚሊ ሊትር 2,2′-አዞይሶቡቲሮኒትሪል (AIBN) ወደ ምላሽ ሰጪው ብልቃጥ ተጨምሯል። ድብልቁ በ60°ሴ ለ3 ሰዓታት ሞቆ፣ ተጣርቶ ለ3 ሰዓታት በ40°ሴ ምድጃ ውስጥ ደርቋል።
የደረቁ የሲሊካ ቅንጣቶች (2 ግራም) በደረቅ ቶሉኒን (100 ሚሊ ሊትር) ውስጥ ተበታትነው ለ10 ደቂቃ በ500 ሚሊ ሊትር ክብ የታችኛው ጠርሙስ ውስጥ ተቀላቅለው ተቀላቅለዋል። PMCP (10 ሚ.ግ) በቶሉኒን ውስጥ ተሟጦ በሚወርድ ፈንገስ በኩል ወደ ምላሽ ብልቃጡ ተጨምሯል። ድብልቁ በ100°ሴ ለ8 ሰዓታት ተመልሷል፣ ተጣርቶ በአሴቶን ታጥቦ ለ3 ሰዓታት በ60°ሴ ደርቋል። ከዚያም፣ PMCP-የተጣመሩ የሲሊካ ቅንጣቶች (100 ግራም) በቶሉኒን (200 ሚሊ ሊትር) ውስጥ ተሟጠዋል እና 4-ሃይድሮክሲ-TEMPO (2 ሚሊ ሊትር) እንደ ማነቃቂያ ተጨምሯል። ድብልቁ በ50°ሴ ለ8 ሰዓታት ተቀላቅሏል፣ በ50°ሴ ለ3 ሰዓታት ተጣርቶ ደርቋል።
ስታይሪን (1 ሚሊ ሊትር)፣ ቤንዞይል ፐርኦክሳይድ BPO (0.5 ሚሊ ሊትር) እና TEMPO-PMCP የተያያዙ የሲሊካ ቅንጣቶች (1.5 ግራም) በቶሉኒን ውስጥ ተበታትነው በናይትሮጅን ተጠርገዋል። የስታይሪን ፖሊሜራይዜሽን በ100°ሴ ለ12 ሰዓታት ተካሂዷል። የተገኘው ምርት በሜታኖል ታጥቦ በአንድ ሌሊት በ60°ሴ ደርቋል። አጠቃላይ የምላሽ መርሃ ግብሩ በስእል 1 ላይ ይታያል።
ናሙናዎቹ ከ10-3 ቶር ያነሰ የተረፈ ግፊት ለማግኘት በ393 K ለ1 ሰዓት ተወግደዋል። የጠቅላላውን የቀዳዳ መጠን ለመወሰን በP/P0 = 0.99 አንጻራዊ ግፊት የተዋሃደው የN2 መጠን ጥቅም ላይ ውሏል። የባዶ እና የሊጋንድ ትስስር ያላቸው የሲሊካ ቅንጣቶች ሞርፎሎጂ በስካኒንግ ኤሌክትሮን ማይክሮስኮፒ (ሂታቺ ሃይ ቴክኖሎጂስ፣ ቶኪዮ፣ ጃፓን) ተመርምሯል። የደረቁ ናሙናዎች (ባዶ ሲሊካ እና የሊጋንድ ትስስር ያላቸው የሲሊካ ቅንጣቶች) በአሉሚኒየም አምድ ላይ በማጣበቂያ የካርቦን ቴፕ ተለጥፈዋል። ወርቅ በናሙናዎቹ ላይ በQ150T ስፓተር ሽፋን ተጠቅሞ ተለጠፈ፣ እና 5 nm Au ንብርብር በናሙናዎቹ ላይ ተከማችቷል። ይህ ዝቅተኛ ቮልቴጅ በመጠቀም የሂደቱን ቅልጥፍና ያሻሽላል እና ጥሩ እህል፣ ቀዝቃዛ ስፓተር ይሰጣል። የቴርሞ ኤሌክትሮን (ዋልትሃም፣ ኤምኤ፣ ዩኤስኤ) ፍላሽ EA1112 ኤለመንታል ተንታኝ ለኤለመንታል ትንተና ጥቅም ላይ ውሏል። የንጥረ ነገር መጠን ስርጭትን ለማግኘት ማልቨርን (ዎርሴስተርሻየር፣ ዩኬ) ማስተርስዘር 2000 የንጥረ ነገር መጠን ተንታኝ ጥቅም ላይ ውሏል። ቅንጣቶችና በሊጋንድ የተሳሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች (እያንዳንዳቸው 5 ሚ.ግ.) በ5 ሚሊ ሊትር አይሶፕሮፓኖል ውስጥ ተበትነው ለ10 ደቂቃ በሶኒክስ ተጨምረው ለ5 ደቂቃ በድምፅ ተቀላቅለው በማስተርዘር ኦፕቲካል ቤንች ላይ ተቀምጠዋል። የቴርሞግራቪሜትሪክ ትንተና በደቂቃ 5 °ሴ በ30 እስከ 800 °ሴ ባለው የሙቀት ክልል ውስጥ ተካሂዷል።
በመስታወት የተሸፈኑ አይዝጌ ብረት ጠባብ-ቦረቦሩ አምዶች (100 × 1.8 ሚሜ አይዲ) በማጣቀሻው ውስጥ ጥቅም ላይ የዋለውን ተመሳሳይ አሰራር ተግባራዊ በማድረግ የተዝረከረከ ማሸጊያ ዘዴን በመጠቀም ታሽገዋል። 31. 1 µm ፍሪት የያዘ የውጪ መግጠሚያ ያለው አይዝጌ ብረት አምድ (በመስታወት የተሸፈነ፣ 100 × 1.8 ሚሜ መለያ) ከስሉሪ ማሸጊያ (Alltech Deerfield, IL, USA) ጋር ተገናኝቷል። 150 ሚ.ግ የማይንቀሳቀስ ደረጃ በ1.2 ሚሊ ሊትር ሜታኖል ውስጥ በማንጠልጠል የማይንቀሳቀስ ደረጃ ስሉሪ ያዘጋጁ እና ወደ ማከማቻ አምድ ይላኩት። ሜታኖል እንደ ስሉሪ ሶሊቬት እንዲሁም እንደ ፕሮፔሊንግ ሶሊቬት ጥቅም ላይ ውሏል። 100 MP ለ10 ደቂቃዎች፣ 80 MP ለ15 ደቂቃዎች እና 60 MP ለ30 ደቂቃዎች ግፊት በማድረግ አምዱን በቅደም ተከተል ይሙሉት። በማሸጊያው ወቅት፣ የአምዱን ወጥ የሆነ ማሸጊያ ለማረጋገጥ በሁለት የGC አምድ ሻከር (Alltech, Deerfield, IL, USA) ሜካኒካል ንዝረት ተተግብሯል። የስሉሪ ማሸጊያውን ይዝጉ እና በአምዱ ውስጥ ምንም አይነት ጉዳት እንዳይደርስ ግፊቱን ቀስ ብለው ይልቀቁ። አምዱን ከስሉሪ ማሸጊያ አሃድ ያላቅቁ እና አፈፃፀሙን ለመፈተሽ ሌላ ተስማሚ ወደ መግቢያው እና ወደ LC ስርዓት ያገናኙ።
የኤልሲ ፓምፕ (10AD Shimadzu፣ ጃፓን)፣ መርፌ (Valco (USA) C14 W.05) ከ50nL መርፌ ዑደት፣ የሜምብሬን ዲጋሰር (Shimadzu DGU-14A)፣ የUV-VIS ካፊላሪ መስኮት ተገንብቷል። ልዩ µLC መሳሪያ ማወቂያ (UV-2075) እና በመስታወት የተሸፈኑ ማይክሮኮምዶች። ተጨማሪ የአምድ ባንድ መስፋፋትን ውጤት ለመቀነስ በጣም ጠባብ እና አጭር የመገናኛ ቱቦ ይጠቀሙ። ከማሸጊያው በኋላ፣ ካፒላሪዎች (50 μm id 365 እና የሚቀንሱ የዩኒየን ካፊላሪዎች (50 μm) በተቀነሰው ዩኒየን 1/16″ መውጫ ላይ ተጭነዋል። የመረጃ አሰባሰብ እና የክሮማቶግራፊክ ሂደት የተከናወነው ባለብዙ ክሮሞቶግራፊ ሶፍትዌርን በመጠቀም ነው። በ254 nm አናሊቶች ላይ ክትትል ለUV መምጠጥ ተፈትኗል። የክሮማቶግራፊክ መረጃዎች በOriginPro8 (Northampton, MA) ተተነተኑ።
ከሰው ሴረም የተወሰደ አልቡሚን፣ ሊዮፊላይዝድ ዱቄት፣ ≥ 96% (አጋሮዝ ጄል ኤሌክትሮፎሬሲስ) 3 ሚ.ግ ከትራይፕሲን (1.5 ሚ.ግ)፣ 4.0 ሚ.ግ ዩሪያ (1 ሚሊ ሊትር) እና 0.2 ሚ.ግ አሞኒየም ባይካርቦኔት (1 ሚሊ ሊትር) ጋር ተቀላቅሏል። መፍትሄው ለ10 ደቂቃዎች ተቀላቅሎ በ37°ሴ ውስጥ ለ6 ሰዓታት በውሃ መታጠቢያ ውስጥ ተይዟል፣ ከዚያም በ1 ሚሊ ሊትር 0.1% TFA ይጠፋል። መፍትሄውን ያጣሩ እና ከ4°ሴ በታች ባለው የሙቀት መጠን ያስቀምጡ።
የፔፕታይድ ድብልቆችን እና የኤችኤስኤ ትራይፕሲን ዲጀክቶችን መለየት በፒኤምፒ አምዶች ላይ ለየብቻ ተገምግሟል። የኤችኤስኤ የፔፕታይድ ድብልቅ እና የኤችኤስኤ ትራይፕሲን ዲጀክሽን በፒኤምፒ አምድ መለየትን ያረጋግጡ እና ውጤቶቹን ከአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-አሚድ አምድ ጋር ያወዳድሩ። የቲዎሬቲካል ሳህኑ ቁጥር እንደሚከተለው ይሰላል፡
የባዶ ሲሊካ ቅንጣቶች እና በሊጋንድ የተያያዙ የሲሊካ ቅንጣቶች የSEM ምስሎች በምስል 2 ላይ ይታያሉ። የባዶ ሲሊካ ቅንጣቶች (A፣ B) የSEM ምስሎች ከቀደሙት ጥናቶቻችን በተቃራኒ እነዚህ ቅንጣቶች ክብ ቅርጽ ያላቸው ሲሆኑ ቅንጣቶቹ የተራዘሙ ወይም መደበኛ ያልሆነ ሲሜትሪ አላቸው። የሊጋንድ የተያያዙ የሲሊካ ቅንጣቶች (C፣ D) ገጽ ከባዶ ሲሊካ ቅንጣቶች ይልቅ ለስላሳ ነው፣ ይህም በሲሊካ ቅንጣቶች ወለል ላይ ባለው የፖሊስቲሪን ሰንሰለቶች ሽፋን ምክንያት ሊሆን ይችላል።
የባዶ ሲሊካ ቅንጣቶች (A፣ B) እና በሊጋንድ የተሳሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች (C፣ D) የኤሌክትሮን ማይክሮስኮፕ ምስሎችን መቃኘት።
የባዶ ሲሊካ ቅንጣቶች እና በሊጋንድ የታሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች የቅንጣት መጠን ስርጭቶች በምስል 3(A) ውስጥ ይታያሉ። በድምጽ ላይ የተመሰረቱ የቅንጣት መጠን ስርጭት ኩርባዎች የሲሊካ ቅንጣቶች መጠን ከኬሚካል ማሻሻያ በኋላ እንደጨመረ አሳይተዋል (ምስል 3A)። ከአሁኑ ጥናት እና ከቀደመው ጥናት የተገኙት የሲሊካ ቅንጣቶች የቅንጣት መጠን ስርጭት መረጃ በሰንጠረዥ 1(A) ውስጥ ተነጻጽሯል። የPMP መጠን ላይ የተመሰረተ የቅንጣት መጠን፣ d(0.5)፣ ከቀዳሚው ጥናት ጋር ሲነጻጸር 3.36 μm ነው፣ ከ3.05 μm (ፖሊስቲሪን የታሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች) ጋር ሲነጻጸር 3.36 μm። ይህ ባች በምላሽ ድብልቅ ውስጥ ባለው የPEG፣ የዩሪያ፣ TMOS እና የአሴቲክ አሲድ የተለያዩ ሬሾዎች ምክንያት ከቀዳሚው ጥናት ጋር ሲነጻጸር ጠባብ የቅንጣት መጠን ስርጭት ነበረው። የPMP ደረጃ ቅንጣት መጠን ቀደም ሲል ካጠናነው የፖሊስቲሪን የታሰሩ የሲሊካ ቅንጣት ምዕራፍ ትንሽ ከፍ ያለ ነው። ይህ ማለት ስታይሪን ያላቸው የሲሊካ ቅንጣቶች የወለል ተግባራዊነት የፖሊስቲሪን ንብርብር (0.97 µm) በሲሊካ ወለል ላይ ብቻ ያስቀምጣል፣ በ የPMP ደረጃ የንብርብሩ ውፍረት 1.38 µm ነበር።
የባዶ ሲሊካ ቅንጣቶች እና በሊጋንድ የታሰሩ የሲሊካ ቅንጣቶች የቅንጣት መጠን ስርጭት (A) እና የቀዳዳ መጠን ስርጭት (B)።
የአሁኑ ጥናት የሲሊካ ቅንጣቶች የቀዳዳ መጠን፣ የቀዳዳ መጠን እና የወለል ስፋት በሰንጠረዥ 1(ለ) ውስጥ ተሰጥቷል። የባዶ ሲሊካ ቅንጣቶች እና የሊጋንድ-የተያያዙ የሲሊካ ቅንጣቶች የPSD መገለጫዎች በምስል 3(ለ) ውስጥ ይታያሉ። ውጤቶቹ ከቀደመው ጥናታችን ጋር ተመሳሳይ ናቸው። የባዶ እና የሊጋንድ-የተያያዙ የሲሊካ ቅንጣቶች የቀዳዳ መጠኖች በቅደም ተከተል 310 እና 241 ናቸው፣ ይህም በሰንጠረዥ 1(ለ) ላይ እንደሚታየው የቀዳዳው መጠን በኬሚካል ማሻሻያ ከተደረገ በኋላ በ69 እንደሚቀንስ እና የመጠምዘዣው ለውጥ በምስል 3(ለ) ላይ ይታያል። በተመሳሳይ፣ የሲሊካ ቅንጣቶች የቀዳዳ መጠን ከኬሚካል ማሻሻያ በኋላ ከ0.67 ወደ 0.58 ሴ.ሜ3/ግ ቀንሷል። በአሁኑ ጊዜ የተጠኑት የሲሊካ ቅንጣቶች የገጽታ ስፋት 116 ሜ2/ግ ሲሆን ይህም ከቀደመው ጥናታችን (124 ሜ2/ግ) ጋር ተመሳሳይ ነው። በሰንጠረዥ 1(ለ) ላይ እንደሚታየው የሲሊካ ቅንጣቶች የገጽታ ስፋት (ሜ2/ግ) ከ116 ሜ2/ግ ወደ 105 ቀንሷል። ከኬሚካል ማሻሻያ በኋላ m2/g።
የቋሚ ደረጃው የኤለመንታል ትንተና ውጤቶች በሰንጠረዥ 2 ውስጥ ይታያሉ። የአሁኑ የቋሚ ደረጃ የካርቦን ጭነት 6.35% ሲሆን ይህም ከቀደመው ጥናታችን (ፖሊስቲሪን የተጣመሩ የሲሊካ ቅንጣቶች፣ በቅደም ተከተል 7.93%35 እና 10.21%) ከካርቦን ጭነት ያነሰ ነው 42. የአሁኑ የቋሚ ደረጃ የካርቦን ጭነት ዝቅተኛ ነው። ምክንያቱም የአሁኑን SP በማዘጋጀት ሂደት፣ ከስታይሪን በተጨማሪ፣ እንደ ፌኒልማሊሚድ-ሜቲልቪኒሊሶሲያኔት (PCMP) እና 4-ሃይድሮክሲ-TEMPO ያሉ አንዳንድ የፖላር ሊጋንድ ጥቅም ላይ ውለዋል። የአሁኑ የቋሚ ደረጃ የናይትሮጅን ክብደት መቶኛ በቀደሙት ጥናቶች በቅደም ተከተል ከ0.1735 እና 0.85% የናይትሮጅን ክብደት ጋር ሲነጻጸር 2.21% ነው። ይህ ማለት በአሁኑ የቋሚ ደረጃ ውስጥ የናይትሮጅን መጠን በፌኒልማሊሚድ ምክንያት ከፍ ያለ ነው ማለት ነው። በተመሳሳይ፣ የምርቶች (4) እና (5) የካርቦን ጭነት በቅደም ተከተል 2.7% እና 2.9% ሲሆን የካርቦን ጭነት ደግሞ በቅደም ተከተል 2.7% እና 2.9% ነበር። የመጨረሻው ምርት (6) 6.35% ነበር፣ በሰንጠረዥ 2 ላይ እንደሚታየው። የክብደት መቀነሱ በPMP የማይንቀሳቀስ ደረጃ ተረጋግጧል፣ እና የTGA ኩርባ በስእል 4 ላይ ይታያል። የTGA ኩርባ 8.6% የክብደት መቀነስ ያሳያል፣ ይህም ከካርቦን ጭነት (6.35%) ጋር በጥሩ ሁኔታ የሚስማማ ነው ምክንያቱም ሊጋንዶቹ C ብቻ ሳይሆን N፣ O እና Hንም ይይዛሉ።
የፊኒልማሌሚድ-ሜቲልቪኒሊሶሲያኔት ሊጋንድ የተመረጠው የሲሊካ ቅንጣቶችን የወለል ማሻሻያ ለማድረግ ነው ምክንያቱም የፖላር ፌኒልማሌሚድ ቡድኖች እና የቪኒሊሶሲያኔት ቡድኖች ስላሉት። የቪኒል ኢሶሲያኔት ቡድኖች በህያው ራዲካል ፖሊመሪዜሽን ከስታይሪን ጋር የበለጠ ምላሽ መስጠት ይችላሉ። ሁለተኛው ምክንያት ከ አናላይት ጋር መካከለኛ መስተጋብር ያለው እና በአናላይት እና በቋሚ ደረጃ መካከል ጠንካራ ኤሌክትሮስታቲክ መስተጋብር የሌለው ቡድን ማስገባት ነው፣ ምክንያቱም የፊኒልማሌሚድ ክፍል በመደበኛ ፒኤች ምንም ምናባዊ ክፍያ የለውም። የቋሚ ደረጃው ፖላሪቲ በተመቻቸ የስታይሪን መጠን እና በነጻ ራዲካል ፖሊመሪዜሽን የምላሽ ጊዜ ሊቆጣጠር ይችላል። የምላሹ የመጨረሻ ደረጃ (ፍሪ-ራዲካል ፖሊመሪዜሽን) ወሳኝ እና የቋሚ ደረጃውን ፖላሪቲ ሊለውጥ ይችላል። የእነዚህን የማይንቀሳቀሱ ደረጃዎች የካርቦን ጭነት ለመፈተሽ የኤለመንታል ትንተና ተካሂዷል። የስታይሪን መጠን እና የምላሽ ጊዜ መጨመር የማይንቀሳቀሱበትን ደረጃ የካርቦን ጭነት እና በተቃራኒው እንደሚጨምር ታይቷል። በተለያዩ የስታይሪን ክምችት የተዘጋጁ SPዎች የተለያዩ የካርቦን ጭነቶች አሏቸው። እንደገና፣ እነዚህን የማይንቀሳቀሱ ደረጃዎች ወደ አይዝጌ ብረት አምዶች ይጫኑ እና የእነሱን ያረጋግጡ። የክሮማቶግራፊክ አፈጻጸም (ምርጫ፣ ጥራት፣ የN እሴት፣ ወዘተ)። በእነዚህ ሙከራዎች ላይ በመመስረት፣ ቁጥጥር የሚደረግበት ፖላሪቲ እና ጥሩ የትንታኔ ማቆየትን ለማረጋገጥ የPMP ቋሚ ደረጃን ለማዘጋጀት የተመቻቸ ቀመር ተመርጧል።
አምስት የፔፕታይድ ድብልቆች (Gly-Tyr፣ Gly-Leu-Tyr፣ Gly-Gly-Tyr-Arg፣ Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg፣ Leucine enkephalin) በሞባይል ደረጃ በመጠቀም በPMP አምድ ተገምግመዋል፤ 60/40 (v/v) አሴቶኒትሪል/ውሃ (0.1% TFA) በ80 μL/ደቂቃ የፍሰት ፍጥነት። በተመቻቸ የፍሰት ሁኔታዎች ውስጥ፣ በአንድ አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መለያ) የቲዎሬቲካል ሳህን ቁጥር (N) 20,000 ± 100 (200,000 ሳህኖች/m²) ነው። ሠንጠረዥ 3 ለሶስቱ PMP አምዶች የN እሴቶችን ይሰጣል እና ክሮማቶግራሞቹ በምስል 5A ውስጥ ይታያሉ። በከፍተኛ የፍሰት ፍጥነት (700 μL/ደቂቃ) በPMP አምድ ላይ ፈጣን ትንተና፣ አምስት ፔፕታይዶች በአንድ ደቂቃ ውስጥ ተገልጸዋል፣ የN እሴቶች በጣም ጥሩ ነበሩ፣ በአንድ አምድ 13,500 ± 330 (100 × 1.8 ሚሜ መለያ)፣ ከ135,000 ሳህኖች/ሜ ጋር ይዛመዳል (ምስል 5ለ)። ሶስት ተመሳሳይ መጠን ያላቸው አምዶች (100 × 1.8 ሚሜ መለያ) ለማረጋገጥ በሦስት የተለያዩ የPMP ቋሚ ደረጃ ተሞልተዋል። የድጋሚ ምርት አቅም። የእያንዳንዱ አምድ የትንታኔ ክምችት የተመደበው በእያንዳንዱ አምድ ላይ ተመሳሳይ የሙከራ ድብልቅን ለመለየት በተመቻቸ የማውጣት ሁኔታዎች እና በቲዎሬቲካል ሳህኖች ብዛት N እና የማቆያ ጊዜን በመጠቀም ነው። የPMP አምዶች የድጋሚ ምርት መረጃ በሰንጠረዥ 4 ውስጥ ይታያል። የPMP አምድ የድጋሚ ምርት አቅም በሰንጠረዥ 3 ላይ እንደሚታየው በጣም ዝቅተኛ ከሆኑ %RSD እሴቶች ጋር በጥሩ ሁኔታ ይዛመዳል።
የፔፕታይድ ድብልቅ በPMP አምድ (B) እና በአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ (A) ላይ መለየት፤ የሞባይል ደረጃ 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%)፣ የPMP አምድ ልኬቶች (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ)፤ ትንታኔ የውህዶቹ የማውጣት ቅደም ተከተል፡ 1 (Gly-Tyr)፣ 2 (Gly-Leu-Tyr)፣ 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg)፣ 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) እና 5 (leucine) አሲድ ኤንኬፋሊን))።
ከፍተኛ አፈጻጸም ባለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ውስጥ የሰው ሴረም አልቡሚን ትራይፕቲክ ዳይጀስቶችን ለመለየት የPMP አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መለያ) ተገምግሟል። በምስል 6 ላይ ያለው ክሮማቶግራም ናሙናው በደንብ የተነጠለ እና ጥራቱ በጣም ጥሩ መሆኑን ያሳያል። የHSA ዳይጀስቶች የተተነተኑት 100 µL/ደቂቃ፣ የሞባይል ደረጃ 70/30 አሴቶኒትሪል/ውሃ እና 0.1% TFA በመጠቀም ነው። በክሮማቶግራም (ምስል 6) ላይ እንደሚታየው፣ የHSA ዳይጀስሽን ከ17 ፔፕታይዶች ጋር በሚዛመዱ 17 ጫፎች ተከፍሏል። በHSA ዳይጀስ ውስጥ የእያንዳንዱ ጫፍ የመለያየት ውጤታማነት ተሰልቶ እሴቶቹ በሠንጠረዥ 5 ውስጥ ተሰጥተዋል።
የኤችኤስኤ (100 × 1.8 ሚሜ አይዲ) ትራይፕቲክ ዲጂት በፒኤምፒ አምድ ላይ ተለያይቷል፤ የፍሰት መጠን (100 µL/ደቂቃ)፣ የሞባይል ደረጃ 60/40 አሴቶኒትሪል/ውሃ ከ0.1% TFA ጋር።
L የአምዱ ርዝመት ሲሆን፣ η የሞባይል ደረጃ viscosity ሲሆን፣ ΔP የአምዱ የኋላ ግፊት ሲሆን፣ u ደግሞ የሞባይል ደረጃ መስመራዊ ፍጥነት ነው። የPMP አምድ መተላለፊያ 2.5 × 10-14 m2 ነበር፣ የፍሰት መጠኑ 25 μL/ደቂቃ ነበር፣ እና 60/40 v/v ACN/ውሃ ጥቅም ላይ ውሏል። የPMP አምድ መተላለፊያ (100 × 1.8 ሚሜ አይዲ) ከቀዳሚው ጥናታችን ጋር ተመሳሳይ ነበር። ማጣቀሻ 34. በላዩ ላይ ቀዳዳ ባላቸው ቅንጣቶች የተሞላው የአምዱ መተላለፊያ እንደሚከተለው ነው፡ ለ1.3 μm ቅንጣቶች 1.7 × 10-15፣ ለ1.7 μm ቅንጣቶች 3.1 × 10-15፣ ለ2.6 μm ቅንጣቶች 5.2 × 10-15 እና ለ2.6 μm ቅንጣቶች 2.5 × 10-14 m2 ለ5 μm ቅንጣቶች 43. ስለዚህ፣ የPMP ደረጃ መተላለፊያ ከ5 μm ኮር-ሼል ቅንጣቶች ጋር ተመሳሳይ ነው።
Wx በክሎሮፎርም የተሞላው የአምድ ክብደት ሲሆን Wy በሜታኖል የተሞላው የአምድ ክብደት ሲሆን ρ ደግሞ የመሟሟቱ ጥግግት ነው። የሜታኖል (ρ = 0.7866) እና የክሎሮፎርም (ρ = 1.484) ጥግግቶች። ቀደም ብለን ያጠናናቸው የሲሊካ ቅንጣቶች-C18 አምዶች (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) 34 እና C18-ዩሪያ አምዶች 31 አጠቃላይ ቀዳዳ በቅደም ተከተል 0.63 እና 0.55 ነበሩ። ይህ ማለት የዩሪያ ሊጋንድ መኖር የቋሚ ደረጃውን መተላለፊያ ይቀንሳል ማለት ነው። በሌላ በኩል የPMP አምድ አጠቃላይ ቀዳዳ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) 0.60 ነው። የPMP አምዶች መተላለፊያ በC18-የተያያዙ የሲሊካ ቅንጣቶች ከተሞሉ አምዶች ያነሰ ነው ምክንያቱም በC18 አይነት ቋሚ ደረጃዎች C18 ሊጋንድ ከሲሊካ ቅንጣቶች ጋር እንደ መስመራዊ ሰንሰለቶች ተያይዘዋል፣ በፖሊስቲሪን አይነት ቋሚ ውስጥ ደግሞ ደረጃዎች፣ የ A በአንጻራዊነት ወፍራም የፖሊመር ንብርብር በዙሪያው ይፈጠራል። በተለመደው ሙከራ፣ የአምድ ቀዳዳ እንደሚከተለው ይሰላል፡
ምስል 7A,B የቫን ዴምተር ሴራ ተመሳሳይ የማስወገጃ ሁኔታዎችን (ማለትም 60/40 ACN/H2O እና 0.1% TFA) በመጠቀም የPMP አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መለያ) እና የአስሴንቲስ ኤክስፕረስ አርፒ-አሚድ አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መለያ) ያሳያል። የተመረጡ የፔፕታይድ ድብልቆች (Gly-Tyr፣ Gly-Leu-Tyr፣ Gly-Gly-Tyr-Arg፣ Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg፣ Leucine Enkephalin) በ20 µL ተዘጋጅተዋል። ለሁለቱም አምዶች ዝቅተኛው የፍሰት መጠን 800 µL/ደቂቃ ነው። ለPMP አምድ እና ለአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ በተመቻቸ የፍሰት መጠን (80 µL/ደቂቃ) ዝቅተኛው የHETP እሴቶች በቅደም ተከተል 2.6 µm እና 3.9 µm ነበሩ። የHETP እሴቶች የPMP አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) የመለያየት ውጤታማነት ከገበያ ከሚገኘው የአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መታወቂያ) በጣም የተሻለ መሆኑን ያመለክታሉ። በምስል 7(A) ውስጥ ያለው የቫን ዴምተር ሴራ የሚያሳየው ፍሰት እየጨመረ ሲሄድ የN እሴት መቀነስ ከቀዳሚው ጥናታችን ጋር ሲነጻጸር ጉልህ አይደለም። የPMP አምድ ከፍተኛ የመለያየት ውጤታማነት (100 × 1.8 ሚሜ መለያ) ከአስሴንቲስ ኤክስፕረስ RP-Amide አምድ ጋር ሲነጻጸር በአሁኑ ስራ34 ውስጥ ጥቅም ላይ በሚውሉት የቅንጣት ቅርፅ፣ መጠን እና ውስብስብ የአምድ ማሸጊያ ሂደቶች ላይ በተደረጉ ማሻሻያዎች ላይ የተመሠረተ ነው።
(ሀ) የቫን ዴምተር ሴራ (HETP ከሞባይል ፌዝ መስመራዊ ፍጥነት ጋር ሲነጻጸር) በ60/40 ACN/H2O ውስጥ በ0.1% TFA.(B) በ60/40 ACN/H2O ውስጥ በ0.1% TFA ውስጥ በ60/40 ACN/H2O ውስጥ በ0.1% TFA ውስጥ በPMP አምድ (100 × 1.8 ሚሜ መለያ) በመጠቀም የተገኘ የቫን ዴምተር ሴራ (HETP ከሞባይል ፌዝ መስመራዊ ፍጥነት ጋር ሲነጻጸር)።
ከፍተኛ አፈጻጸም ባለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ውስጥ ሰው ሰራሽ የፔፕታይድ ድብልቆችን እና የሰው ሴረም አልቡሚን (HAS) የትራይፕሲን ውህዶችን ለመለየት የፖላር-ኢምቤድድ ፖሊስቲሪን የማይንቀሳቀስ ምዕራፍ ተዘጋጅቶ ተገምግሟል። ለፔፕታይድ ድብልቆች የPMP አምዶች ክሮማቶግራፊ አፈፃፀም በመለያየት ቅልጥፍና እና ጥራት በጣም ጥሩ ነው። የPMP አምዶች የተሻሻለው የመለያየት አፈፃፀም በተለያዩ ምክንያቶች ምክንያት ነው፣ ለምሳሌ የሲሊካ ቅንጣቶች የቅንጣት መጠን እና የቀዳዳ መጠን፣ የቋሚ ደረጃ ቁጥጥር የሚደረግበት ውህደት እና ውስብስብ የአምድ ማሸጊያ። ከከፍተኛ የመለያየት ቅልጥፍና በተጨማሪ፣ በከፍተኛ ፍሰት ፍጥነት ዝቅተኛ የአምድ የኋላ ግፊት የዚህ የማይንቀሳቀስ ምዕራፍ ሌላ ጥቅም ነው። የPMP አምዶች ጥሩ የመራባት ችሎታ ያሳያሉ እና የፔፕታይድ ድብልቆችን ለመተንተን እና የተለያዩ ፕሮቲኖችን የትራይፕሲን መፈጨትን ለመተንተን ሊያገለግሉ ይችላሉ። ይህንን አምድ የተፈጥሮ ምርቶችን፣ ከመድኃኒት ተክሎች ባዮአክቲቭ ውህዶችን እና በፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ውስጥ የፈንገስ ተዋጽኦዎችን ለመለየት ለመጠቀም እንፈልጋለን። ወደፊት፣ የPMP አምዶች ለፕሮቲኖች እና ለሞኖክሎናል ፀረ እንግዳ አካላት መለያየትም ይገመገማሉ።
ፊልድ፣ ጄኬ፣ ዩርቢ፣ ኤምአር፣ ላው፣ ጄ.፣ ቶገርሰን፣ ኤች. እና ፒተርሰን፣ ፒ. በተገላቢጦሽ የደረጃ ክሮማቶግራፊ የፔፕታይድ መለያየት ስርዓቶች ላይ የተደረገ ጥናት ክፍል 1፡ የአምድ ባህሪ ፕሮቶኮል ልማት። ጄ. ክሮማቶግራፊ.1603፣ 113–129።https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019)።
ጎሜዝ፣ ቢ. እና ሌሎችም። ለተላላፊ በሽታዎች ሕክምና የተነደፉ የተሻሻሉ አክቲቭ ፔፕታይዶች። ባዮቴክኖሎጂ.Advanced.36(2)፣ 415-429።https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018)።
ቪሊጌ፣ ፒ.፣ ሊሶቭስኪ፣ ቪ.፣ ማርቲኔዝ፣ ጄ. እና ክሬስትቻቲስኪ፣ ኤም. ሲንተቲክ ቴራፒዩቲክ ፔፕታይዶች፡ ሳይንስ እና ገበያ። የመድኃኒት ግኝት።15 (1-2) ዛሬ፣ 40-56።https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010)።
ዢ፣ ኤፍ.፣ ስሚዝ፣ አርዲ እና ሼን፣ ዋይ። የላቀ ፕሮቲዮሚክ ሊኩዊድ ክሮማቶግራፊ።ጄ. ክሮማቶግራፊ.ኤ 1261፣ 78–90 (2012)።
ሊዩ፣ ደብሊው. እና ሌሎችም። የላቀ የሊኩድ ክሮማቶግራፊ-ጅምላ ስፔክትሮሜትሪ በስፋት የታለሙ ሜታቦሎሚክስ እና ፕሮቲኦሚክስ.አነስ.ቺም.አክታ 1069፣ 89–97 (2019) እንዲካተቱ ያስችላል።
Chesnut, SM & Salisbury, JJ የUHPLC በመድኃኒት ልማት ውስጥ ያለው ሚና። J. ሴፕቴምበር. Sci.30(8)፣ 1183-1190 (2007)።
Wu, N. & Clausen, AM ለፈጣን መለያየት እጅግ በጣም ከፍተኛ ግፊት ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ መሰረታዊ እና ተግባራዊ ገጽታዎች። J. Sep. Sci.30(8)፣ 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007)።
ሬን፣ ኤስኤ እና ቼሊቼፍ፣ ፒ. እጅግ በጣም ከፍተኛ አፈፃፀም ያለው ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ በመድኃኒት ልማት ውስጥ አተገባበር። ጄ. ክሮማቶግራፊ.1119(1-2)፣ 140-146።https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006)።
ጉ፣ ኤች. እና ሌሎችም። ኢንቴሮቫይረሶችን ውጤታማ በሆነ መንገድ ለማጽዳት ከዘይት-ውስጥ-ውስጥ ከፍተኛ የውስጥ ደረጃ ኢሙሊሽን የተዘጋጁ ሞኖሊቲክ ማክሮፖረስ ሃይድሮጄሎች።Chemical.Britain.J. 401, 126051 (2020).
ሺ፣ ዋይ.፣ ዢያንግ፣ አር.፣ ሆርቫዝ፣ ሲ. እና ዊልኪንስ፣ ጄኤ በፕሮቲዮሚክስ ውስጥ የፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ሚና። ጄ. ክሮማቶግራፊ.ኤ 1053(1-2)፣ 27-36 (2004)።
ፌኬቴ፣ ኤስ.፣ ቬውቴይ፣ ጄ.-ኤል. እና ጊላርሜ፣ ዲ. የሕክምና ፔፕታይዶችን እና ፕሮቲኖችን በተገላቢጦሽ ደረጃ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ መለየት ላይ ብቅ ያሉ አዝማሚያዎች፡ ቲዎሪ እና አፕሊኬሽኖች። ጄ. ፋርማሲ። ባዮሜዲካል ሳይንስ.አነስ.69፣ 9-27 (2012)።
ጂላር፣ ኤም.፣ ኦሊቮቫ፣ ፒ.፣ ዳሊ፣ ኤኢ እና ጌብለር፣ ጄሲ በአንደኛው እና በሁለተኛው የመለያየት ልኬቶች ውስጥ የተለያዩ የፒኤች እሴቶችን በመጠቀም የ RP-RP-HPLC ስርዓትን በመጠቀም የፔፕታይዶች ባለ ሁለት ገጽታ መለያየት። ጄ. ሴፕቴምበር. ሳይ.28(14)፣ 1694-1703 (2005)።
ፌሌቲ፣ ኤስ. እና ሌሎችም። ሙሉ በሙሉ እና በላዩ ላይ ቀዳዳ ባላቸው ቅንጣቶች የተሞሉ የC18 ንዑስ-2 μm የተሞሉ ከፍተኛ ብቃት ያላቸው ክሮማቶግራፊክ አምዶች የጅምላ ዝውውር ባህሪያት እና የኪነቲክ አፈጻጸም ተመርምረዋል። ​​ጄ. ሴፕ. ሳይ.43 (9-10)፣ 1737-1745 (2020)።
ፒዮቬሳና፣ ኤስ. እና ሌሎችም። የእፅዋት ባዮአክቲቭ ፔፕታይዶችን ለይቶ ማውጣት፣ መለየት እና ማረጋገጥ ላይ የቅርብ ጊዜ አዝማሚያዎች እና የትንታኔ ተግዳሮቶች።anus.biological anus.Chemical.410(15)፣ 3425–3444።https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018)።
ሙለር፣ ጄቢ እና ሌሎችም። የሕይወት መንግሥት ፕሮቲዮሚክ ገጽታ። ተፈጥሮ 582(7813)፣ 592-596።https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020)።
ዴሉካ፣ ሲ. እና ሌሎችም። በዝግጅት ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ የሕክምና ፔፕታይዶችን የታችኛው ሂደት። ሞለኪውል (ባሴል፣ ስዊዘርላንድ) 26(15)፣ 4688(2021)።
ያንግ፣ ዋይ. እና ጌንግ፣ ኤክስ. የተቀላቀለ-ሁነታ ክሮማቶግራፊ እና ለባዮፖሊመሮች ያለው አተገባበር። ጄ. ክሮማቶግራፊ.ኤ 1218(49)፣ 8813–8825 (2011)።
ዣኦ፣ ጂ.፣ ዶንግ፣ X.-Y.& Sun, Y. ለተደባለቀ-ሁነታ ፕሮቲን ክሮማቶግራፊ ሊጋንዶች፡ መርህ፣ ባህሪ እና ዲዛይን። J. ባዮቴክኖሎጂ.144(1)፣ 3-11 (2009)።