Salamat sa pagbisita sa Nature.com.Ang bersyon sa browser nga imong gigamit adunay limitado nga suporta alang sa CSS.Alang sa labing kaayo nga kasinatian, among girekomenda nga mogamit ka usa ka updated nga browser (o i-off ang compatibility mode sa Internet Explorer).Sa kasamtangan, aron masiguro ang padayon nga suporta, among ipakita ang site nga walay mga estilo ug JavaScript.
Ang mga porous nga silica nga mga partikulo giandam pinaagi sa usa ka pamaagi sa sol-gel nga adunay pipila nga mga pagbag-o aron makuha ang mga macroporous nga mga partikulo.Kini nga mga partikulo nakuha pinaagi sa reversible nga pagdugang nga fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization nga adunay N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) ug styrene aron maandam ang N-phenylmaleimide nga hugna sa stainless steel intercalation sa polystyrene (PMP) (100 × 1.8 mm id) giputos sa slurry packing.Gi-evaluate ang PMP column separation sa usa ka peptide mixture nga naglangkob sa lima ka peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) (HAS).Ubos sa kamalaumon nga mga kondisyon sa elution, ang theoretical plate count sa peptide mixture kay ingon ka taas sa 280,000 plates/m².Pagtandi sa separation performance sa naugmad nga column sa commercial Ascentis Express RP-Amide column, naobserbahan nga ang separation performance sa PMP column mas labaw sa commercial column sa termino sa separation efficiency ug resolution.
Sa bag-ohay nga mga tuig, ang biopharmaceutical nga industriya nahimong usa ka pagpalapad sa tibuok kalibutan nga merkado uban sa usa ka igo nga pagtaas sa bahin sa merkado. Uban sa eksplosibo nga pagtubo sa biopharmaceutical industriya1,2,3, ang pag-analisa sa peptides ug mga protina mao ang kaayo gitinguha. Dugang pa sa target peptide, ubay-ubay nga mga hugaw ang namugna sa panahon sa peptide synthesis, sa ingon nanginahanglan sa pagdalisay sa chromatographic nga kinaiya ug pag-analisa sa peptide. sa mga protina sa mga pluwido sa lawas, mga tisyu ug mga selula usa ka hilabihan ka mahagiton nga buluhaton tungod sa dako nga gidaghanon sa posibleng makit-an nga mga espisye sa usa ka sample.Bisan tuod ang mass spectrometry usa ka epektibo nga himan alang sa peptide ug protein sequencing, kon ang maong mga sample i-inject sa mass spectrometer sa usa ka pass, ang panagbulag dili maayo. analytes nga mosulod sa mass spectrometer sa usa ka gihatag nga panahon4,5,6.Dugang pa, sa panahon sa liquid phase separation, analytes mahimong naka-focus sa pig-ot nga mga rehiyon, sa ingon concentrating niini nga mga analytes ug pagpalambo sa MS detection sensitivity.Liquid chromatography (LC) abante kamahinungdanon sa milabay nga dekada ug nahimong usa ka popular nga teknik sa proteomic ,9,17,10.
Ang reversed-phase liquid chromatography (RP-LC) kaylap nga gigamit alang sa pagputli ug pagbulag sa mga peptide mixtures gamit ang octadecyl-modified silica (ODS) isip stationary phase11,12,13.Apan, ang RP stationary phases wala maghatag og makatagbaw nga separation sa peptides ug proteins tungod sa ilang komplikadong gambalay nga 14,philore15, philore peptide ug mga protina tungod sa ilang komplikado nga istruktura nga 14, philore15 ug amphiore. ang mga hugna gikinahanglan sa pag-analisar sa mga peptide ug mga protina nga adunay polar ug non-polar moieties aron makig-uban ug magpabilin niini nga mga analytes16.Mixed-mode chromatography, nga naghatag ug multimodal interactions, mahimong alternatibo sa RP-LC alang sa pagbulag sa peptides, proteins, ug uban pang komplikadong mga sagol. separations17,18,19,20,21.Mixed-mode stationary phases (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC) mao ang angay alang sa peptide ug protina separasyon tungod sa presensya sa mga polar ug non-polar nga mga grupo22,23,24,25,26,27,28 intercalatory nga estasyon sa polar. Ang mga gigapos nga polar nga mga grupo nagpakita sa maayo nga gahum sa pagbulag ug talagsaon nga pagpili alang sa polar ug non-polar analytes, tungod kay ang pagbulag nagdepende sa interaksyon tali sa analyte ug stationary nga hugna. Multimodal nga mga interaksyon 29, 30, 31, 32. Bag-ohay lang, Zhang et al. 30 nag-andam ug dodecyl-terminated polyamine stationary phase ug malampusong nagbulag sa hydrocarbon, antidepressants, flavonoids, nucleosides, estrogens, ug uban pang mga analytes. kolum) anaa sa komersiyo ubos sa ngalan sa pamatigayon nga Acentis Express RP-Amide nga mga kolum, apan kini nga mga kolum gigamit alang sa pagtuki sa amine 33 lamang.
Sa kasamtangan nga pagtuon, ang usa ka polar-embedded stationary phase (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) giandam ug gi-evaluate alang sa separation sa peptides ug trypsin digests sa HSA.The stationary phase giandam gamit ang mosunod nga estratehiya.Ang mga porous nga silica nga mga partikulo giandam sumala sa pamaagi nga gihatag sa among miaging publikasyon nga adunay pipila ka mga pagbag-o sa protocol sa pag-andam, ang polycethyleneure nga protocol.PE. acid gi-adjust aron sa pag-andam sa silica particles nga adunay dako nga pore size.Ikaduha, usa ka bag-ong ligand, phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate, gi-synthesize ug gigamit sa pag-derivatize sa mga particle sa silica aron sa pag-andam sa polar embedded stationary phase. pagsiguro nga ang usa ka homogenous nga higdaanan maporma sulod sa kolum.Pagtimbang-timbang sa packed column separation sa peptide mixtures nga naglangkob sa lima ka peptides; (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) ug Trypsin digest sa human serum albumin (HAS) . Ang kolum sa RP-Amide.Ang mga peptide ug mga protina naobserbahan nga maayo nga nasulbad ug episyente sa kolum sa PMP, nga mas episyente kaysa sa kolum sa Ascentis Express RP-Amide.
PEG (Polyethylene Glycol), Urea, Acetic Acid, Trimethoxy Orthosilicate (TMOS), Trimethyl Chlorosilane (TMCS), Trypsin, Human Serum Albumin (HSA), Ammonium Chloride, Urea, Hexane Methyldisilazane (HMDS), Methacryloyl Chloride (MC-OTEMP), Styrene, 4 HPLC Grade Acetonitrile (ACN), Methanol, 2-Propanol, ug Acetone Gipalit gikan sa Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).
Ang usa ka sinagol nga urea (8 g), polyethylene glycol (8 g), ug 8 mL sa 0.01 N acetic acid gikutaw sulod sa 10 minutos, ug dayon 24 mL sa TMOS ang gidugang niini ubos sa ice-cold nga mga kondisyon. gipauga sa 70 ° C sulod sa 12 ka oras. Ang uga nga humok nga masa mao ang hamis nga yuta sa usa ka hurnohan ug gi-calcined sa 550 ° C sulod sa 12 ka oras. Tulo ka batch ang giandam ug gihulagway aron masusi ang reproducibility sa gidak-on sa partikulo, gidak-on sa pore ug lugar sa nawong.
Pinaagi sa pagbag-o sa nawong sa mga partikulo sa silica nga adunay pre-synthesized ligand phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) nga gisundan sa radial polymerization nga adunay styrene, giandam ang usa ka polar group-containing compound. Stationary phase para sa mga aggregates ug polystyrene chains.Ang proseso sa pagpangandam gihulagway sa ubos.
Ang N-phenylmaleimide (200 mg) ug methyl vinyl isocyanate (100 mg) natunaw sa uga nga toluene, ug ang 0.1 mL nga 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) gidugang sa reaction flask aron maandam ang phenylmaleimide-methyl isocyanate copolymer (PMC00) nga mga oras sa 3. gipauga sa oven sa 40°C sulod sa 3 ka oras.
Ang uga nga mga partikulo sa silica (2 g) gisabwag sa uga nga toluene (100 mL), gipalihok ug gi-sonicated sa usa ka 500 mL round bottom flask alang sa 10 min.PMCP (10 mg) natunaw sa toluene ug gidugang dropwise ngadto sa reaction flask pinaagi sa dropping funnel. 60 ° C sulod sa 3 ka oras. Unya, ang PMCP-bonded silica particles (100 g) natunaw sa toluene (200 ml) ug 4-hydroxy-TEMPO (2 mL) gidugang sa presensya sa 100 µL sa dibutyltin dilaurate isip catalyst. Ang sagol gikutaw sa 850 ° C ug 0 ° C nga mga oras nga gikutaw sa 850 ° C ug 0.
Ang Styrene (1 mL), benzoyl peroxide BPO (0.5 mL), ug TEMPO-PMCP-attached silica particles (1.5 g) gisabwag sa toluene ug gipurga sa nitrogen. Ang polymerization sa styrene gihimo sa 100 ° C sulod sa 12 ka oras. Ang resulta nga produkto gihugasan sa methanol ug gipauga sa tibuok gabii sa Figure nga pamaagi sa 60 ° C.
Ang mga sample gi-degassed sa 393 K sulod sa 1 ka oras aron makuha ang nahabilin nga presyur nga ubos pa sa 10-3 Torr.Ang kantidad sa N2 adsorbed sa usa ka relatibong presyur sa P / P0 = 0.99 gigamit aron mahibal-an ang kinatibuk-ang pore volume.Ang morphology sa hubo ug ligand-bonded silica nga mga partikulo gisusi sa pag-scan sa mga electron micros, Japan nga sample sa Japan. ug ligand-bonded silica particles) gibutang sa aluminum column gamit ang adhesive carbon tape.Gold ang plated sa samples gamit ang Q150T sputter coater, ug usa ka 5 nm Au layer ang gideposito sa samples.This improves process efficiency using low voltages and provide fine grain, cold sputtering.A Thermo Electron (Waltham EA1 . Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 nga gidak-on sa partikulo analisador gigamit sa pagkuha sa tipik gidak-on distribution.Hubo silica particles ug ligand-bonded silica particles (5 mg matag usa) ang nagkatibulaag sa 5 mL sa isopropanol, sonicated alang sa 10 min, vortexed alang sa 5 min, ug gibutang sa ibabaw sa optical bench sa usa ka °C nga sukod sa usa ka Masters rate sa usa ka pagtuki sa Masters. range sa temperatura nga 30 hangtod 800 °C.
Ang glass-lined stainless steel narrow-bore columns sa mga dimensyon (100 × 1.8 mm id) giputos gamit ang slurry packing method, nga nag-apply sa samang pamaagi nga gigamit sa Ref. 31.Usa ka stainless steel column (glass-lined, 100 × 1.8 mm id) nga adunay outlet fitting nga adunay sulod nga 1 µm frit ang konektado sa slurry packer (Alltech Deerfield, IL, USA). slurry solvent ingon man ang propelling solvent. Pun-a ang column nga sunud-sunod pinaagi sa pagbutang ug pressure sa 100 MP sulod sa 10 minutos, 80 MP sulod sa 15 minutos, ug 60 MP sulod sa 30 minutos. Atol sa pagpamutos, ang mekanikal nga vibration gipadapat sa duha ka GC column shakers (Alltech, Deerfield, IL, USA) aron maseguro nga hinayhinay nga buhian ang packing sa kolum. aron malikayan ang bisan unsang kadaot sulod sa column.Idiskonekta ang column gikan sa slurry packing unit ug isumpay ang laing haom sa inlet ug sa LC system aron masusi ang performance niini.
Usa ka LC pump (10AD Shimadzu, Japan), injector (Valco (USA) C14 W.05) nga adunay 50nL injection loop, membrane degasser (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS capillary window ang gitukod Espesyal nga µLC device detector (UV-2075) ug glass-lined nga mga microcolumns nga mugbo ug gamay kaayo nga epekto sa pagkonektar sa mga kolum. pagpalapad.Pagkahuman sa pagputos, ang mga capillaries (50 μm id 365 ug ang pagkunhod sa mga capillaries sa unyon (50 μm) gi-install sa 1/16 ″ outlet sa reducing union. Ang pagkolekta sa datos ug pagproseso sa chromatographic gihimo gamit ang Multichro 2000 software. Ang pag-monitor sa 254 nm Analytes gisulayan sa pag-analisa sa Chromatographic sa 254 nm. (Northampton, MA).
Albumin gikan sa human serum, lyophilized powder, ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 mg nga sinaktan sa trypsin (1.5 mg), 4.0 M urea (1 mL), ug 0.2 M ammonium bicarbonate (1 mL). 0.1% TFA. Isala ang solusyon ug tipigi ubos sa 4 °C.
Pagbulag sa peptide mixtures ug HSA trypsin digests gibana-bana nga gilain sa PMP columns.Check the separation of peptide mixture and trypsin digest of HSA by the PMP column and compare the results to the Ascentis Express RP-Amide column.The theoretical plate number is calculated as follows:
Ang mga imahe sa SEM sa mga hubad nga mga partikulo sa silica ug mga partikulo sa silica nga gigapos sa ligand gipakita sa FIG. Ang 2 .SEM nga mga hulagway sa hubo nga silica nga mga partikulo (A, B) nagpakita nga, sukwahi sa atong nangaging mga pagtuon, kini nga mga partikulo mga lingin diin ang mga partikulo elongated o adunay dili regular nga simetriya.Ang nawong sa ligand-bonded silica nga mga partikulo (C, D) mas hamis kay sa hubo nga silica nga mga partikulo, nga mahimong tungod sa kadena sa polystyrene sa ibabaw nga mga partikulo sa silica.
Pag-scan sa mga hulagway sa mikroskopyo sa elektron sa hubo nga mga partikulo sa silica (A, B) ug mga partikulo sa silica nga gigapos sa ligand (C, D).
Ang gidak-on sa partikulo nga mga apod-apod sa hubo nga silica nga mga partikulo ug ligand-bonded silica nga mga partikulo gipakita sa Figure 3(A). Ang gidaghanon nga gibase sa gidak-on sa partikulo sa pag-apod-apod nagpakita nga ang gidak-on sa mga partikulo sa silica misaka human sa kemikal nga pagbag-o (Fig. 3A). μm, kon itandi sa among miaging pagtuon nga adunay ad(0.5) nga kantidad nga 3.05 μm (polystyrene-bound silica particles)34.Kini nga batch adunay mas pig-ot nga partikulo nga pag-apod-apod kon itandi sa among miaging pagtuon tungod sa lain-laing ratios sa PEG, urea, TMOS, ug acetic acid sa reaction mixture. surface functionalization sa silica particles nga adunay styrene nagdeposito lang ug polystyrene layer (0.97 µm) sa silica surface, samtang sa PMP phase ang layer gibag-on 1.38 µm.
Pag-apod-apod sa gidak-on sa partikulo (A) ug pag-apod-apod sa gidak-on sa lungag (B) sa mga partikulo sa silica nga hubo ug mga partikulo sa silica nga gigapos sa ligand.
Ang pore size, pore volume ug surface area sa silica particles sa kasamtangang pagtuon gihatag sa Table 1(B). pinaagi sa 69 human sa kemikal nga pagbag-o, sama sa gipakita sa Table 1(B), ug ang kausaban sa kurba gipakita sa Fig. 3(B) .Sama, ang pore volume sa silica particles mikunhod gikan sa 0.67 ngadto sa 0.58 cm3/g human sa kemikal nga pagbag-o. m2/g) .Sama sa gipakita sa Table 1(B), ang surface area (m2/g) sa silica particles usab mikunhod gikan sa 116 m2/g ngadto sa 105 m2/g human sa kemikal nga kausaban.
Ang mga resulta sa elemental analysis sa stationary phase gipakita sa Table 2. Ang carbon loading sa kasamtangan nga stationary phase mao ang 6.35%, nga mas ubos kay sa carbon loading sa atong miaging pagtuon (polystyrene bonded silica particles, 7.93%35 ug 10.21%, sa tinagsa) 42. Ang carbon loading sa kasamtangan nga stationary phase, ang pag-andam sa pipila ka ubos sa , Ang mga ligid sama sa phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) ug 4-hydroxy-TEMPO gigamit. Ang porsyento nga gibug-aton sa nitroheno sa kasamtangan nga yugto sa paghunong mao ang 2.21%, kung itandi sa 0.1735 ug 0.85% nga gibug-aton sa nitroheno sa miaging mga pagtuon, matag usa. Kini nagpasabut nga ang gibug-aton nga porsyento sa carbonnyimilar nga bahin mas taas sa karon nga estasyon sa carbonnyimilar. loadings sa mga produkto (4) ug (5) mao ang 2.7% ug 2.9%, sa tinagsa, samtang ang carbon loading sa katapusan nga produkto (6) mao ang 6.35%, sama sa gipakita sa Table 2. Ang gibug-aton sa pagkawala gisusi sa PMP stationary phase, ug ang TGA curve gipakita sa Figure 4. Ang TGA curve nagpakita sa usa ka gibug-aton sa pagkawala sa 8.6% nga kasabotan sa 5.6% sa loading. Ang mga ligand adunay dili lamang C kondili usab N, O, ug H.
Ang phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ligand gipili alang sa pagbag-o sa nawong sa mga partikulo sa silica tungod kay kini adunay polar nga phenylmaleimide nga mga grupo ug vinylisocyanate nga mga grupo. Ang Vinyl isocyanate nga mga grupo mahimo pa nga mo-react sa styrene pinaagi sa buhi nga radical polymerization. Ang ikaduha nga rason mao ang pagsal-ot sa usa ka grupo nga adunay kasarangang interaksyon sa analyte ug ang analyte nga interaksyon tali sa analyte ug walay lig-on nga bahin Ang phenylmaleimide moiety walay virtual charge sa normal nga pH. Ang polarity sa stationary phase mahimong kontrolahon sa kamalaumon nga gidaghanon sa styrene ug ang reaction time sa free radical polymerization. loading sa stationary phase ug vice versa.SPs giandam uban sa lain-laing mga konsentrasyon sa styrene adunay lain-laing mga carbon loadings.Pag-usab, load niini nga mga stasionary phase ngadto sa stainless steel mga kolum ug check sa ilang chromatographic performance (selectivity, resolution, N bili, ug uban pa).Base niini nga mga eksperimento, usa ka optimized pormulasyon ang gipili aron sa pag-andam sa PMP stationary nga hugna aron masiguro ang maayo nga kontrolado nga politelarity nga hugna aron masiguro ang maayo nga kontrolado nga politelarity.
Lima ka peptide mixtures (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) gi-evaluate usab gamit ang PMP column gamit ang mobile phase; 60/40 (v/v) acetonitrile/tubig (0.1% TFA) sa flow rate nga 80 μL/min. Ubos sa kamalaumon nga mga kondisyon sa elution, ang theoretical plate number (N) kada column (100 × 1.8 mm id) kay 20,000 ± 100 (200,000 ka TMP nga kolum/m²) ug ang mga chromatograms gipakita sa Figure 5A. Paspas nga pag-analisa sa usa ka kolum sa PMP sa taas nga rate sa pag-agos (700 μL / min), lima ka peptides ang na-eluted sulod sa usa ka minuto, ang N values ​​​​maayo kaayo, 13,500 ± 330 kada kolum (100 × 1.8 mm id), Katugbang sa 135, 000,000,000,000,000,000,000,000,000,000. Ang managsama nga gidak-on nga mga kolum (100 × 1.8 mm id) giputos sa tulo ka lain-laing mga lote sa PMP stationary phase aron masusi ang reproducibility.Ang analyte nga konsentrasyon alang sa matag column girekord gamit ang kamalaumon nga kondisyon sa elution ug ang gidaghanon sa theoretical plates N ug retention time aron sa pagbulag sa samang test mixture sa matag column. ubos nga %RSD values, sama sa gipakita sa Table 3.
Pagbulag sa peptide mixture sa PMP column (B) ug Ascentis Express RP-Amide column (A); mobile phase 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP column dimensyon (100 × 1.8 mm id); analytical Ang han-ay sa elution sa mga compound: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) ug 5 (leucine) acid enkephalin)).
Ang usa ka kolum sa PMP (100 × 1.8 mm id) gi-evaluate alang sa pagbulag sa tryptic digests sa human serum albumin sa high performance liquid chromatography. Ang chromatogram sa Figure 6 nagpakita nga ang sample maayo nga gibulag ug ang resolusyon maayo kaayo. Ang HSA digests gi-analisar gamit ang flow rate nga 100 µL/30% nga acetonitrile ug tubig nga 100 µL/30. TFA.Sama sa gipakita sa chromatogram (Figure 6), ang HSA digestion nabahin ngadto sa 17 peak katumbas sa 17 peptides.
Usa ka tryptic digest sa HSA (100 × 1.8 mm id) gibulag sa usa ka kolum sa PMP; flow rate (100 µL/min), mobile phase 60/40 acetonitrile/tubig nga adunay 0.1% TFA.
diin L mao ang gitas-on sa kolum, η mao ang viscosity sa mobile phase, ΔP mao ang column back pressure, ug u ang linear velocity sa mobile phase.Ang permeability sa PMP column mao ang 2.5 × 10-14 m2, ang flow rate mao ang 25 μL/min, ug 60/40 v/v . mm id) susama nianang sa among miaging pagtuon Ref.34.Ang permeability sa kolum nga giputos sa mga taphaw nga porous nga mga partikulo mao ang: 1.7 × 10-15 alang sa 1.3 μm nga mga partikulo, 3.1 × 10-15 alang sa 1.7 μm nga mga partikulo, 5.2 × 10-15 ug 2.5 μm alang sa 2.5 μm. μm nga mga partikulo 43. Busa, ang pagkamatuhup sa PMP nga hugna susama sa 5 μm nga core-shell nga mga partikulo.
diin ang Wx mao ang gibug-aton sa kolum nga giputos sa chloroform, ang Wy mao ang gibug-aton sa kolum nga giputos sa methanol, ug ang ρ mao ang densidad sa solvent. Densidad sa methanol (ρ = 0.7866) ug chloroform (ρ = 1.484).Ang kinatibuk-ang porosity sa SILICA PARTIKLES-C18 × 18. Ang C18-Urea nga mga kolum 31 nga among gitun-an kaniadto mao ang 0.63 ug 0.55, matag usa. Kini nagpasabot nga ang presensya sa urea ligand makapamenos sa permeability sa stationary phase. Sa laing bahin, ang total porosity sa PMP column (100 × 1.8 mm id) kay 0.60. silica particles tungod kay sa C18-type stationary phases ang C18 ligands gilakip sa silica particles isip linear chains, samtang sa polystyrene-type stationary phases, ang medyo baga nga polymer layer naporma sa palibot niini.
Ang Figure 7A,B nagpakita sa PMP column (100 × 1.8 mm id) ug Ascentis Express RP-Amide column (100 × 1.8 mm id) gamit ang parehas nga elution nga kondisyon (ie, 60/40 ACN/H2O ug 0.1% TFA). ) sa laraw sa van Deemter. Pinili nga peptide mixtures (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) giandam sa 20 µL/ Ang minimum flow rate sa duha ka column mao ang 800 µL/min. kolum ug ang kolum sa Ascentis Express RP-Amide mao ang 2.6 µm ug 3.9 µm, matag usa. Ang HETP values ​​​​nagpakita nga ang separation efficiency sa PMP column (100 × 1.8 mm id) mas maayo kay sa komersiyal nga available nga Ascentis Express RP-Amide column (100 id 1.8). ang pagkunhod sa N nga bili uban sa pagdugang sa dagan dili mahinungdanon kon itandi sa atong miaging pagtuon.Ang mas taas nga pagbulag efficiency sa PMP kolum (100 × 1.8 mm id) kon itandi sa Ascentis Express RP-Amide kolum gibase sa mga kalamboan sa partikulo porma, gidak-on, ug komplikado kolum packing pamaagi nga gigamit sa kasamtangan nga trabaho34.
(A) van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity) nakuha gamit ang PMP column (100 × 1.8 mm id) sa 60/40 ACN/H2O nga adunay 0.1% TFA.(B) van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity) nga nakuha gamit ang Ascentis Express RP-Amide 1.0 × 4 column (10 mm Amide 1.8 mm) ACN/H2O nga adunay 0.1% TFA.
Ang usa ka polar-embedded polystyrene stationary phase giandam ug gisusi alang sa pagbulag sa sintetikong peptide mixtures ug trypsin digests sa human serum albumin (HAS) sa high performance liquid chromatography. mga partikulo, kontrolado nga synthesis sa estasyon nga bahin, ug komplikado nga kolum packing.Dugang pa sa taas nga pagbulag efficiency, ubos nga kolum likod pressure sa hatag-as nga dagan rates mao ang lain nga bentaha sa niini nga stationary phase.PMP kolum nagpakita sa maayo nga reproducibility ug mahimong gamiton alang sa pagtuki sa peptide mixtures ug trypsin paghilis sa nagkalain-laing mga protina.We nagtinguha sa paggamit niini nga kolum alang sa panagbulag sa mga bioinal aktibo nga mga tanom nga likido gikan sa mga natural nga mga produkto. chromatography.Sa umaabot, ang mga kolum sa PMP susihon usab alang sa pagbulag sa mga protina ug monoclonal antibodies.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Pagpanukiduki sa Peptide Separation Systems pinaagi sa Reversed Phase Chromatography Part I: Development of a Column Characterization Protocol.J. Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez.
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides: science and the market.drug discovery.15 (1-2) karon, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J. Chromatography.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al.Advanced liquid chromatography-mass spectrometry makahimo sa paglakip sa halapad nga target metabolomics ug proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89-97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Ang papel sa UHPLC sa pagpalambo sa droga.J. Septiyembre Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Fundamental ug praktikal nga mga aspeto sa ultrahigh pressure liquid chromatography alang sa paspas nga pagbulag.J. Sep. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Paggamit sa ultra-high performance liquid chromatography sa drug development.J. Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al.Monolithic macroporous hydrogels giandam gikan sa lana-sa-tubig taas nga internal nga bahin emulsions alang sa episyente nga pagputli sa enteroviruses.Chemical.Britain.J. 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Ang papel sa liquid chromatography sa proteomics.J. Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Nag-uswag nga uso sa reversed-phase liquid chromatography separations sa therapeutic peptides ug proteins: theory and applications.J. Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Two-dimensional separation of peptides gamit ang RP-RP-HPLC system gamit ang lain-laing pH values ​​sa una ug ikaduhang separation dimensions.J. Septiyembre Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al.Ang mass transfer nga mga kinaiya ug kinetic performance sa high-efficiency chromatographic columns nga puno sa C18 sub-2 μm nga bug-os ug taphaw nga porous nga mga partikulo gisusi.J. Septiyembre Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Bag-o nga mga uso ug analytical nga mga hagit sa pag-inusara, pag-ila ug pag-validate sa tanum nga bioactive peptides.anus.biological anus.Chemical.410 (15), 3425-3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-08-(20216-018-08).
Mueller, JB et al.Ang proteomic nga talan-awon sa gingharian sa kinabuhi.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al.Pagproseso sa downstream sa therapeutic peptides pinaagi sa preparative liquid chromatography.Molecule (Basel, Switzerland) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Mixed-mode chromatography ug ang paggamit niini sa biopolymers.J. Chromatography.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Ligands para sa mixed-mode protein chromatography: prinsipyo, karakterisasyon, ug disenyo.J. Biotechnology.144(1), 3-11 (2009).