Nature.com भ्रमण गर्नुभएकोमा धन्यवाद।तपाईंले प्रयोग गरिरहनुभएको ब्राउजर संस्करणमा CSS को लागि सीमित समर्थन छ।उत्तम अनुभवको लागि, हामी तपाईंलाई अद्यावधिक गरिएको ब्राउजर प्रयोग गर्न सिफारिस गर्छौं (वा इन्टरनेट एक्सप्लोररमा अनुकूलता मोड बन्द गर्नुहोस्)।यस बीचमा, निरन्तर समर्थन सुनिश्चित गर्न, हामी शैली र जाभास्क्रिप्ट बिना साइट प्रदर्शन गर्नेछौं।
पोरस सिलिका कणहरू सोल-जेल विधिद्वारा केही परिमार्जनहरू सहित म्याक्रोपोरस कणहरू प्राप्त गर्न तयार पारिएका थिए। यी कणहरूलाई पोलिस्टीरिन (PMP) स्थिर चरणको N-फेनिलमेलिमाइड इन्टरकलेसन तयार गर्न N-फेनिलमेलिमाइड-मिथाइलभिनिलिसोसाइनेट (PMI) र स्टाइरिनको साथ उल्टाउन सकिने थप फ्र्याग्मेन्टेसन चेन ट्रान्सफर (RAFT) पोलिमराइजेसनद्वारा व्युत्पन्न गरिएको थियो। साँघुरो-बोर स्टेनलेस स्टील स्तम्भहरू (१०० × १.८ मिमी आईडी) स्लरी प्याकिङद्वारा प्याक गरिएको थियो। पाँच पेप्टाइडहरू (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) क्रोमेटोग्राफिक प्रदर्शन) र मानव सीरम एल्बुमिन (HAS) को ट्रिप्सिन पाचन मिलेर बनेको पेप्टाइड मिश्रणको PMP स्तम्भ विभाजनको मूल्याङ्कन गरिएको। इष्टतम उत्सर्जन अवस्थाहरूमा, पेप्टाइड मिश्रणको सैद्धान्तिक प्लेट गणना २८०,००० प्लेटहरू/m² जति उच्च छ। व्यावसायिकसँग विकसित स्तम्भको पृथकीकरण प्रदर्शनको तुलना गर्दै एसेन्टिस एक्सप्रेस आरपी-एमाइड स्तम्भमा, यो अवलोकन गरियो कि पीएमपी स्तम्भको पृथकीकरण कार्यसम्पादन पृथकीकरण दक्षता र रिजोल्युसनको सन्दर्भमा व्यावसायिक स्तम्भ भन्दा उच्च थियो।
हालैका वर्षहरूमा, बायोफार्मास्युटिकल उद्योग बजार हिस्सामा उल्लेखनीय वृद्धिको साथ विस्तार भइरहेको विश्वव्यापी बजार बनेको छ। बायोफार्मास्युटिकल उद्योग १,२,३ को विस्फोटक वृद्धिसँगै, पेप्टाइड्स र प्रोटिनहरूको विश्लेषण अत्यधिक वांछनीय छ। लक्षित पेप्टाइडको अतिरिक्त, पेप्टाइड संश्लेषणको क्रममा धेरै अशुद्धताहरू उत्पन्न हुन्छन्, यसरी इच्छित शुद्धताको पेप्टाइडहरू प्राप्त गर्न क्रोमेटोग्राफिक शुद्धीकरण आवश्यक पर्दछ। एउटै नमूनामा सम्भावित रूपमा पत्ता लगाउन सकिने प्रजातिहरूको ठूलो संख्याको कारणले गर्दा शरीरको तरल पदार्थ, तन्तु र कोशिकाहरूमा प्रोटिनहरूको विश्लेषण र विशेषताकरण अत्यन्तै चुनौतीपूर्ण कार्य हो।यद्यपि मास स्पेक्ट्रोमेट्री पेप्टाइड र प्रोटिन अनुक्रमणको लागि प्रभावकारी उपकरण हो, यदि त्यस्ता नमूनाहरूलाई एकै पासमा मास स्पेक्ट्रोमिटरमा इन्जेक्ट गरिन्छ भने, पृथकीकरण आदर्श हुनेछैन।एमएस विश्लेषण अघि तरल क्रोमेटोग्राफी (LC) पृथकीकरण लागू गरेर यो समस्यालाई कम गर्न सकिन्छ, जसले दिइएको समयमा मास स्पेक्ट्रोमिटरमा प्रवेश गर्ने विश्लेषकहरूको संख्या घटाउनेछ ४,५,६। थप रूपमा, तरल चरण पृथकीकरणको समयमा, विश्लेषकहरूलाई साँघुरो क्षेत्रहरूमा केन्द्रित गर्न सकिन्छ, जसले गर्दा यी विश्लेषकहरूलाई केन्द्रित गर्न र एमएस पत्ता लगाउने संवेदनशीलता सुधार गर्न सकिन्छ।तरल क्रोमेटोग्राफी (LC) ले विगत एक दशकमा उल्लेखनीय रूपमा प्रगति गरेको छ र प्रोटोमिक विश्लेषणमा एक लोकप्रिय प्रविधि बनेको छ7,8,9,10।
अक्टाडेसिल-परिमार्जित सिलिका (ODS) लाई स्थिर चरणको रूपमा प्रयोग गरेर पेप्टाइड मिश्रणहरूको शुद्धीकरण र पृथकीकरणको लागि उल्टो-चरण तरल क्रोमेटोग्राफी (RP-LC) व्यापक रूपमा प्रयोग गरिन्छ। यद्यपि, RP स्थिर चरणहरूले तिनीहरूको जटिल संरचना र एम्फिफिलिक प्रकृति 14,15 को कारणले पेप्टाइडहरू र प्रोटीनहरूको सन्तोषजनक पृथकीकरण प्रदान गर्दैनन्। त्यसकारण, यी विश्लेषकहरूसँग अन्तर्क्रिया गर्न र कायम राख्न ध्रुवीय र गैर-ध्रुवीय भागहरू भएका पेप्टाइडहरू र प्रोटीनहरूको विश्लेषण गर्न विशेष रूपमा डिजाइन गरिएको स्थिर चरणहरू आवश्यक पर्दछ। बहु-मोडल अन्तर्क्रियाहरू प्रदान गर्ने मिश्रित-मोड क्रोमेटोग्राफी, पेप्टाइडहरू, प्रोटीनहरू, र अन्य जटिल मिश्रणहरूको पृथकीकरणको लागि RP-LC को विकल्प हुन सक्छ। धेरै मिश्रित-मोड स्थिर चरणहरू तयार पारिएका छन्, र यी चरणहरूले भरिएका स्तम्भहरू पेप्टाइड र प्रोटीन पृथकीकरणको लागि प्रयोग गरिएका छन्17,18,19,20,21। मिश्रित-मोड स्थिर चरणहरू (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, ध्रुवीय इन्टरकेलेसन/RPLC) पेप्टाइड र प्रोटीनको लागि उपयुक्त छन्। ध्रुवीय र गैर-ध्रुवीय समूहहरू 22,23,24,25,26,27,28 दुवैको उपस्थितिको कारणले हुने पृथकीकरण। त्यस्तै गरी, सहसंयोजक रूपमा बाँधिएका ध्रुवीय समूहहरूसँग ध्रुवीय अन्तर्क्रियात्मक स्थिर चरणहरूले ध्रुवीय र गैर-ध्रुवीय विश्लेषकहरूको लागि राम्रो पृथकीकरण शक्ति र अद्वितीय चयनशीलता देखाउँछन्, किनकि पृथकीकरण विश्लेषक र स्थिर चरण बीचको अन्तरक्रियामा निर्भर गर्दछ। बहुविध अन्तरक्रियाहरू 29, 30, 31, 32। हालसालै, झाङ एट अल। ३० ले डोडेसिल-टर्मिनेटेड पोलिमाइन स्थिर चरण तयार गर्‍यो र हाइड्रोकार्बन, एन्टीडिप्रेसेन्ट्स, फ्लेभोनोइड्स, न्यूक्लियोसाइड्स, एस्ट्रोजेन र धेरै अन्य विश्लेषकहरूलाई सफलतापूर्वक अलग गर्‍यो। ध्रुवीय इन्टरक्यालेटरमा ध्रुवीय र गैर-ध्रुवीय दुवै समूहहरू हुन्छन्, त्यसैले यसलाई हाइड्रोफोबिक र हाइड्रोफिलिक दुवै भाग भएका पेप्टाइड्स र प्रोटीनहरू अलग गर्न प्रयोग गर्न सकिन्छ। ध्रुवीय-इम्बेडेड स्तम्भहरू (जस्तै, एमाइड-इम्बेडेड C18 स्तम्भहरू) एसेन्टिस एक्सप्रेस RP-एमाइड स्तम्भहरू नामक व्यापारिक नाम अन्तर्गत व्यावसायिक रूपमा उपलब्ध छन्, तर यी स्तम्भहरू एमाइन ३३ को विश्लेषणको लागि मात्र प्रयोग गरिन्छ।
हालको अध्ययनमा, HSA को पेप्टाइड्स र ट्रिप्सिन डाइजेस्टहरूको पृथकीकरणको लागि ध्रुवीय-एम्बेडेड स्थिर चरण (N-फेनाइलमालेइमाइड-एम्बेडेड पोलिस्टाइरिन) तयार पारिएको थियो र मूल्याङ्कन गरिएको थियो। स्थिर चरण निम्न रणनीति प्रयोग गरेर तयार गरिएको थियो। तयारी प्रोटोकलमा केही परिमार्जनहरू सहित हाम्रो अघिल्लो प्रकाशनमा दिइएको प्रक्रिया अनुसार छिद्रयुक्त सिलिका कणहरू तयार पारिएको थियो। ठूलो छिद्र आकारको सिलिका कणहरू तयार गर्न युरिया, पोलिथिलीन ग्लाइकोल (PEG), TMOS, पानी एसिटिक एसिडको अनुपात समायोजन गरिएको थियो। दोस्रो, नयाँ लिगान्ड, फेनाइलमालेइमाइड-मिथाइल भिनाइल आइसोसाइनेट, संश्लेषित गरिएको थियो र ध्रुवीय एम्बेडेड स्थिर चरण तयार गर्न सिलिका कणहरू व्युत्पन्न गर्न प्रयोग गरिएको थियो। परिणामस्वरूप स्थिर चरणलाई अनुकूलित प्याकिङ योजना प्रयोग गरेर स्टेनलेस स्टील स्तम्भ (१०० × १.८ मिमी आईडी) मा प्याक गरिएको थियो। स्तम्भ भित्र एकसमान ओछ्यान बनेको सुनिश्चित गर्न स्तम्भ प्याकिङलाई मेकानिकल कम्पनले सहयोग गरिन्छ। पाँच पेप्टाइडहरू मिलेर बनेको पेप्टाइड मिश्रणहरूको प्याक गरिएको स्तम्भ विभाजनको मूल्याङ्कन गर्नुहोस्; (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) र मानव सीरम एल्बुमिन (HAS) को ट्रिप्सिन डाइजेस्ट। HSA को पेप्टाइड मिश्रण र ट्रिप्सिन डाइजेस्ट राम्रो रिजोल्युसन र दक्षताका साथ अलग भएको अवलोकन गरिएको थियो। PMP स्तम्भको पृथकीकरण प्रदर्शनलाई एसेन्टिस एक्सप्रेस RP-Amide स्तम्भसँग तुलना गरिएको थियो। PMP स्तम्भमा पेप्टाइड र प्रोटीन दुवै राम्रोसँग समाधान भएको र कुशल भएको अवलोकन गरिएको थियो, जुन एसेन्टिस एक्सप्रेस RP-Amide स्तम्भ भन्दा बढी कुशल थियो।
PEG (पोलिइथिलिन ग्लाइकोल), युरिया, एसिटिक एसिड, ट्राइमेथोक्सी अर्थोसिलिकेट (TMOS), ट्राइमिथाइल क्लोरोसिलेन (TMCS), ट्रिप्सिन, ह्युमन सीरम एल्बुमिन (HSA), अमोनियम क्लोराइड, युरिया, हेक्सेन मिथाइलडिसिलाजेन (HMDS), मेथाक्रिलोयल क्लोराइड (MC), स्टाइरीन, ४-हाइड्रोक्सी-टेम्पो, बेन्जोयल पेरोक्साइड (BPO), HPLC ग्रेड एसिटोनाइट्राइल (ACN), मेथानोल, २-प्रोपानोल, र एसिटोन सिग्मा-एल्ड्रिच (सेन्ट लुइस, MO, संयुक्त राज्य अमेरिका) बाट खरिद गरिएको।
युरिया (८ ग्राम), पोलिथिलीन ग्लाइकोल (८ ग्राम), र ८ एमएल ०.०१ एन एसिटिक एसिडको मिश्रण १० मिनेटको लागि चलाइयो, र त्यसपछि २४ एमएल TMOS बरफ-चिसो अवस्थामा थपियो। प्रतिक्रिया मिश्रणलाई ४० डिग्री सेल्सियसमा ६ घण्टाको लागि र त्यसपछि १२० डिग्री सेल्सियसमा ८ घण्टाको लागि स्टेनलेस स्टील अटोक्लेभमा तताइएको थियो। पानी खन्याइएको थियो र अवशिष्ट सामग्रीलाई ७० डिग्री सेल्सियसमा १२ घण्टाको लागि सुकाइएको थियो। सुकेको नरम पिण्डलाई ओभनमा चिल्लो पिसेर १२ घण्टाको लागि ५५० डिग्री सेल्सियसमा क्याल्साइन गरिएको थियो। कण आकार, छिद्र आकार र सतह क्षेत्रमा पुनरुत्पादन क्षमता जाँच गर्न तीनवटा ब्याचहरू तयार पारिएका थिए र विशेषताहरू बनाइएका थिए।
पूर्व-संश्लेषित लिगान्ड फेनाइलमेलिमाइड-मिथाइलभिनिलिसोसाइनेट (PCMP) को साथ सिलिका कणहरूको सतह परिमार्जन गरेर र त्यसपछि स्टाइरिनको साथ रेडियल पोलिमराइजेशन गरेर, ध्रुवीय समूह-युक्त यौगिक तयार पारियो। समुच्चय र पोलिस्टीरिन चेनहरूको लागि स्थिर चरण। तयारी प्रक्रिया तल वर्णन गरिएको छ।
N-phenylmaleimide (२०० मिलीग्राम) र मिथाइल भिनाइल आइसोसाइनेट (१०० मिलीग्राम) लाई सुख्खा टोल्युइनमा घोलियो, र फिनाइलमालेइमाइड-मिथाइल भिनाइल आइसोसाइनेट कोपोलिमर (PMPC) तयार गर्न प्रतिक्रिया फ्लास्कमा ०.१ मिलीलीटर २,२′-एजोइसोब्युटाइरोनिट्राइल (AIBN) थपियो। मिश्रणलाई ६० डिग्री सेल्सियसमा ३ घण्टाको लागि तताइएको थियो, फिल्टर गरिएको थियो र ४० डिग्री सेल्सियसमा ३ घण्टाको लागि ओभनमा सुकाइएको थियो।
सुकेका सिलिका कणहरू (२ ग्राम) लाई सुख्खा टोल्युइन (१०० एमएल) मा छरिएका थिए, ५०० एमएल गोलो तल्लो फ्लास्कमा १० मिनेटको लागि हलचल र सोनिकेट गरिएको थियो। पीएमसीपी (१० मिलीग्राम) टोल्युइनमा घुलाइएको थियो र ड्रपिङ फनेल मार्फत प्रतिक्रिया फ्लास्कमा ड्रपवाइज थपिएको थियो। मिश्रणलाई १०० डिग्री सेल्सियसमा ८ घण्टाको लागि रिफ्लक्स गरिएको थियो, एसीटोनले फिल्टर गरिएको र धोइएको थियो र ६० डिग्री सेल्सियसमा ३ घण्टाको लागि सुकाइएको थियो। त्यसपछि, पीएमसीपी-बन्धित सिलिका कणहरू (१०० ग्राम) टोल्युइन (२०० एमएल) मा घुलाइएको थियो र उत्प्रेरकको रूपमा १०० µL डिब्युटिलटिन डाइलरेटको उपस्थितिमा ४-हाइड्रोक्सी-टेम्पो (२ एमएल) थपिएको थियो। मिश्रणलाई ५० डिग्री सेल्सियसमा ८ घण्टाको लागि हलचल गरिएको थियो, फिल्टर गरिएको र ५० डिग्री सेल्सियसमा ३ घण्टाको लागि सुकाइएको थियो।
स्टाइरीन (१ एमएल), बेन्जोयल पेरोक्साइड बीपीओ (०.५ एमएल), र टेम्पो-पीएमसीपी-संलग्न सिलिका कणहरू (१.५ ग्राम) टोलुइनमा छरिएका थिए र नाइट्रोजनले शुद्ध पारिएका थिए। स्टाइरीनको पोलिमराइजेशन १०० डिग्री सेल्सियसमा १२ घण्टाको लागि गरिएको थियो। परिणामस्वरूप उत्पादनलाई मेथानोलले धोइयो र रातभरि ६० डिग्री सेल्सियसमा सुकाइयो। समग्र प्रतिक्रिया योजना चित्र १ मा देखाइएको छ।
१०-३ टोर भन्दा कमको अवशिष्ट दबाब प्राप्त गर्न नमूनाहरूलाई १ घण्टाको लागि ३९३ K मा डिग्यास गरिएको थियो। कुल छिद्रको मात्रा निर्धारण गर्न P/P0 = ०.९९ को सापेक्षिक दबाबमा सोसिएको N2 को मात्रा प्रयोग गरिएको थियो। स्क्यानिङ इलेक्ट्रोन माइक्रोस्कोपी (हिताची हाई टेक्नोलोजीज, टोकियो, जापान) मार्फत नाङ्गो र लिगान्ड-बन्डेड सिलिका कणहरूको आकारविज्ञानको जाँच गरिएको थियो। सुकेका नमूनाहरू (नाङ्गो सिलिका र लिगान्ड-बन्डेड सिलिका कणहरू) टाँसिने कार्बन टेप प्रयोग गरेर एल्युमिनियम स्तम्भमा राखिएको थियो। Q150T स्पटर कोटर प्रयोग गरेर नमूनाहरूमा सुनको प्लेट गरिएको थियो, र नमूनाहरूमा ५ nm Au तह जम्मा गरिएको थियो। यसले कम भोल्टेज प्रयोग गरेर प्रक्रिया दक्षता सुधार गर्दछ र राम्रो अन्न, चिसो स्पटरिंग प्रदान गर्दछ। तत्व विश्लेषणको लागि थर्मो इलेक्ट्रोन (वाल्थम, एमए, संयुक्त राज्य अमेरिका) फ्ल्यास EA1112 तत्व विश्लेषक प्रयोग गरिएको थियो। कण आकार वितरण प्राप्त गर्न माल्भर्न (वोर्सेस्टरशायर, युके) मास्टरसाइजर २००० कण आकार विश्लेषक प्रयोग गरिएको थियो। नाङ्गो सिलिका कणहरू र लिगान्ड-बन्धित सिलिका कणहरू (प्रत्येक ५ मिलीग्राम) ५ एमएल आइसोप्रोपानोलमा छरिएका थिए, १० मिनेटको लागि सोनिकेटेड थिए, ५ मिनेटको लागि भोर्टेक्स गरिएको थियो, र मास्टरसाइजरको अप्टिकल बेन्चमा राखिएको थियो। थर्मोग्राभिमेट्रिक विश्लेषण ३० देखि ८०० डिग्री सेल्सियसको तापक्रम दायरामा प्रति मिनेट ५ डिग्री सेल्सियसको दरमा गरिएको थियो।
ग्लास-लाइन गरिएको स्टेनलेस स्टीलको साँघुरो-बोर आयामका स्तम्भहरू (१०० × १.८ मिमी आईडी) स्लरी प्याकिङ विधि प्रयोग गरेर प्याक गरिएको थियो, सन्दर्भमा प्रयोग गरिएको उही प्रक्रिया लागू गर्दै। ३१. १ µm फ्रिट भएको आउटलेट फिटिङ भएको स्टेनलेस स्टीलको स्तम्भ (ग्लास-लाइन गरिएको, १०० × १.८ मिमी आईडी) स्लरी प्याकर (अलटेक डियरफिल्ड, IL, USA) मा जडान गरिएको थियो। १.२ एमएल मिथेनोलमा १५० मिलीग्राम स्थिर चरण निलम्बन गरेर स्थिर चरण स्लरी तयार गर्नुहोस् र भण्डारण स्तम्भमा पठाउनुहोस्। मिथेनोललाई स्लरी विलायकको साथै प्रोपेलिंग विलायकको रूपमा प्रयोग गरिएको थियो। १० मिनेटको लागि १०० MP, १५ मिनेटको लागि ८० MP, र ३० मिनेटको लागि ६० MP को दबाब लागू गरेर स्तम्भलाई क्रमिक रूपमा भर्नुहोस्। प्याकिङको क्रममा, स्तम्भको एकरूप प्याकिङ सुनिश्चित गर्न दुई GC स्तम्भ शेकरहरू (अलटेक, डियरफिल्ड, IL, USA) सँग मेकानिकल कम्पन लागू गरिएको थियो। स्लरी प्याकर बन्द गर्नुहोस् र स्तम्भ भित्र कुनै पनि क्षति हुनबाट रोक्नको लागि बिस्तारै दबाब छोड्नुहोस्। स्लरी प्याकिङ एकाइबाट स्तम्भलाई विच्छेद गर्नुहोस् र यसको कार्यसम्पादन जाँच गर्न इनलेट र LC प्रणालीमा अर्को फिटिंग जडान गर्नुहोस्।
एउटा LC पम्प (१०AD Shimadzu, जापान), ५०nL इन्जेक्सन लूप भएको इन्जेक्टर (Valco (USA) C14 W.05), झिल्ली डिगासर (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS केशिका विन्डो निर्माण गरिएको थियो। विशेष µLC उपकरण डिटेक्टर (UV-2075) र गिलास-लाइन गरिएको माइक्रोस्तम्भहरू। अतिरिक्त स्तम्भ ब्यान्ड विस्तारको प्रभावलाई कम गर्न धेरै साँघुरो र छोटो जडान गर्ने ट्युबिङ प्रयोग गर्नुहोस्। प्याकेजिङ पछि, रिड्युसिङ युनियनको १/१६″ आउटलेटमा केशिकाहरू (५० μm id ३६५ र रिड्युसिङ युनियन केशिकाहरू (५० μm) स्थापना गरिएको थियो। Multichro २००० सफ्टवेयर प्रयोग गरेर डेटा सङ्कलन र क्रोमेटोग्राफिक प्रशोधन गरिएको थियो। UV अवशोषणको लागि २५४ nm विश्लेषणहरूमा निगरानी परीक्षण गरिएको थियो। क्रोमेटोग्राफिक डेटा OriginPro8 (Northampton, MA) द्वारा विश्लेषण गरिएको थियो।
मानव सीरमबाट एल्बुमिन, लियोफिलाइज्ड पाउडर, ≥ ९६% (एगारोज जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस) ३ मिलीग्राम ट्रिप्सिन (१.५ मिलीग्राम), ४.० मिलीग्राम युरिया (१ मिलीग्राम), र ०.२ मिलीग्राम अमोनियम बाइकार्बोनेट (१ मिलीग्राम) सँग मिसाइएको। घोललाई १० मिनेटको लागि चलाइएको थियो र ३७ डिग्री सेल्सियसमा ६ घण्टाको लागि पानीको नुहाउने ठाउँमा राखिएको थियो, त्यसपछि १ मिलीग्राम ०.१% TFA ले शान्त पारिएको थियो। घोललाई फिल्टर गर्नुहोस् र ४ डिग्री सेल्सियसभन्दा कम तापक्रममा भण्डार गर्नुहोस्।
पेप्टाइड मिश्रण र HSA ट्रिप्सिन डाइजेस्टको पृथक्करण PMP स्तम्भहरूमा छुट्टाछुट्टै मूल्याङ्कन गरिएको थियो। PMP स्तम्भद्वारा HSA को पेप्टाइड मिश्रण र ट्रिप्सिन डाइजेस्टको पृथक्करण जाँच गर्नुहोस् र परिणामहरूलाई एसेन्टिस एक्सप्रेस RP-Amide स्तम्भसँग तुलना गर्नुहोस्। सैद्धान्तिक प्लेट नम्बर निम्नानुसार गणना गरिएको छ:
नाङ्गो सिलिका कणहरू र लिगान्ड-बन्धित सिलिका कणहरूको SEM छविहरू चित्र २ मा देखाइएका छन्। नाङ्गो सिलिका कणहरू (A, B) को SEM छविहरूले देखाउँछन् कि, हाम्रा अघिल्ला अध्ययनहरूको विपरीत, यी कणहरू गोलाकार छन् जसमा कणहरू लामो छन् वा अनियमित सममिति छन्। लिगान्ड-बन्धित सिलिका कणहरू (C, D) को सतह नाङ्गो सिलिका कणहरूको भन्दा चिल्लो छ, जुन सिलिका कणहरूको सतहमा पोलिस्टीरिन चेनको कोटिंगको कारणले हुन सक्छ।
खाली सिलिका कणहरू (A, B) र लिगान्ड-बन्धित सिलिका कणहरू (C, D) को इलेक्ट्रोन माइक्रोस्कोप छविहरू स्क्यान गर्दै।
नाङ्गो सिलिका कणहरू र लिगान्ड-बन्धित सिलिका कणहरूको कण आकार वितरण चित्र ३(A) मा देखाइएको छ। भोल्युम-आधारित कण आकार वितरण वक्रहरूले रासायनिक परिमार्जन पछि सिलिका कणहरूको आकार बढेको देखाएको छ (चित्र ३A)। हालको अध्ययन र अघिल्लो अध्ययनबाट सिलिका कणहरूको कण आकार वितरण डेटा तालिका १(A) मा तुलना गरिएको छ। PMP को भोल्युम-आधारित कण आकार, d(0.5), हाम्रो अघिल्लो अध्ययनको तुलनामा ३.३६ μm छ, जुन हाम्रो अघिल्लो अध्ययनको ad(0.5) मान ३.०५ μm (पोलिस्टीरिन-बन्धित सिलिका कणहरू)३४ सँग तुलना गरिएको छ। प्रतिक्रिया मिश्रणमा PEG, युरिया, TMOS, र एसिटिक एसिडको फरक अनुपातको कारणले गर्दा यो ब्याचमा हाम्रो अघिल्लो अध्ययनको तुलनामा कण आकार वितरण साँघुरो थियो। PMP चरणको कण आकार हामीले पहिले अध्ययन गरेको पोलिस्टीरिन-बन्धित सिलिका कण चरणको भन्दा अलि ठूलो छ। यसको मतलब स्टाइरिनको साथ सिलिका कणहरूको सतह कार्यात्मककरणले सिलिका सतहमा पोलिस्टीरिन तह (०.९७ μm) मात्र जम्मा गर्‍यो, जबकि PMP चरणमा तहको मोटाई १.३८ µm थियो।
नाङ्गो सिलिका कणहरू र लिगान्ड-बाउन्ड सिलिका कणहरूको कण आकार वितरण (A) र छिद्र आकार वितरण (B)।
हालको अध्ययनको सिलिका कणहरूको छिद्र आकार, छिद्रको मात्रा र सतह क्षेत्र तालिका १(B) मा दिइएको छ। बेयर सिलिका कणहरू र लिगान्ड-बन्डेड सिलिका कणहरूको PSD प्रोफाइलहरू चित्र ३(B) मा देखाइएको छ। नतिजाहरू हाम्रो अघिल्लो अध्ययनसँग तुलना गर्न सकिन्छ। बेयर र लिगान्ड-बाउन्ड सिलिका कणहरूको छिद्र आकार क्रमशः ३१० र २४१ छन्, जसले तालिका १(B) मा देखाइए अनुसार रासायनिक परिमार्जन पछि छिद्र आकार ६९ ले घट्छ भन्ने संकेत गर्दछ, र वक्रको परिवर्तन चित्र ३(B) मा देखाइएको छ। त्यस्तै गरी, रासायनिक परिमार्जन पछि सिलिका कणहरूको छिद्र मात्रा ०.६७ बाट ०.५८ सेमी३/g मा घट्यो। हाल अध्ययन गरिएको सिलिका कणहरूको विशिष्ट सतह क्षेत्र ११६ m२/g छ, जुन हाम्रो अघिल्लो अध्ययन (१२४ m२/g) सँग तुलना गर्न सकिन्छ। तालिका १(B) मा देखाइए अनुसार, सिलिका कणहरूको सतह क्षेत्र (m२/g) पनि ११६ m२/g बाट घट्यो। रासायनिक परिमार्जन पछि १०५ वर्ग मीटर/ग्राम।
स्थिर चरणको मौलिक विश्लेषणको नतिजा तालिका २ मा देखाइएको छ। हालको स्थिर चरणको कार्बन लोडिङ ६.३५% छ, जुन हाम्रो अघिल्लो अध्ययनको कार्बन लोडिङ भन्दा कम छ (पोलिस्टाइरीन बन्डेड सिलिका कणहरू, क्रमशः ७.९३%३५ र १०.२१%) ४२। हालको स्थिर चरणको कार्बन लोडिङ कम छ, किनभने हालको SP को तयारीमा, स्टाइरीनको अतिरिक्त, फिनाइलमालेइमाइड-मिथाइलभिनिलिसोसाइनेट (PCMP) र ४-हाइड्रोक्सी-टेम्पो जस्ता केही ध्रुवीय लिगान्डहरू प्रयोग गरिएको थियो। हालको स्थिर चरणको नाइट्रोजन तौल प्रतिशत २.२१% छ, जुन अघिल्लो अध्ययनहरूमा नाइट्रोजनको तौलले क्रमशः ०.१७३५ र ०.८५% थियो। यसको मतलब फिनाइलमालेइमाइडको कारणले गर्दा हालको स्थिर चरणमा नाइट्रोजनको wt % बढी छ। त्यसैगरी, उत्पादनहरू (४) र (५) को कार्बन लोडिङ क्रमशः २.७% र २.९% थियो, जबकि अन्तिम उत्पादन (6) को कार्बन लोडिङ तालिका २ मा देखाइए अनुसार ६.३५% थियो। तौल घटाउने कार्य PMP स्थिर चरणसँग जाँच गरिएको थियो, र TGA वक्र चित्र ४ मा देखाइएको छ। TGA वक्रले ८.६% को तौल घटाउने देखाउँछ, जुन कार्बन लोडिङ (६.३५%) सँग राम्रो सहमतिमा छ किनभने लिगान्डहरूमा C मात्र नभई N, O, र H पनि हुन्छन्।
सिलिका कणहरूको सतह परिमार्जनको लागि फिनाइलमलेइमाइड-मिथाइलभिनिलिसोसाइनेट लिगान्ड छनोट गरिएको थियो किनभने यसमा ध्रुवीय फिनाइलमलेइमाइड समूहहरू र भिनिलिसोसाइनेट समूहहरू छन्। भिनाइल आइसोसाइनेट समूहहरूले जीवित रेडिकल पोलिमराइजेसनद्वारा स्टाइरिनको साथ थप प्रतिक्रिया दिन सक्छन्। दोस्रो कारण भनेको विश्लेषकसँग मध्यम अन्तरक्रिया भएको र विश्लेषक र स्थिर चरण बीच कुनै बलियो इलेक्ट्रोस्टेटिक अन्तरक्रिया नभएको समूह घुसाउनु हो, किनकि फिनाइलमलेइमाइड मोइटीमा सामान्य pH मा कुनै भर्चुअल चार्ज हुँदैन। स्थिर चरणको ध्रुवतालाई स्टाइरिनको इष्टतम मात्रा र फ्री रेडिकल पोलिमराइजेसनको प्रतिक्रिया समयद्वारा नियन्त्रण गर्न सकिन्छ। प्रतिक्रियाको अन्तिम चरण (फ्री-रेडिकल पोलिमराइजेसन) महत्वपूर्ण छ र स्थिर चरणको ध्रुवता परिवर्तन गर्न सक्छ। यी स्थिर चरणहरूको कार्बन लोडिङ जाँच गर्न मौलिक विश्लेषण गरिएको थियो। यो अवलोकन गरियो कि स्टाइरिनको मात्रा र प्रतिक्रिया समय बढाउँदा स्थिर चरणको कार्बन लोडिङ बढ्यो र यसको विपरीत। स्टाइरिनको विभिन्न सांद्रताका साथ तयार पारिएका SP हरूमा फरक कार्बन लोडिङ हुन्छ। फेरि, यी स्थिर चरणहरूलाई स्टेनलेस स्टील स्तम्भहरूमा लोड गर्नुहोस् र तिनीहरूको जाँच गर्नुहोस्। क्रोमेटोग्राफिक कार्यसम्पादन (चयनात्मकता, रिजोल्युसन, N मान, आदि)। यी प्रयोगहरूको आधारमा, नियन्त्रित ध्रुवता र राम्रो विश्लेषणात्मक अवधारण सुनिश्चित गर्न PMP स्थिर चरण तयार गर्न एक अनुकूलित सूत्रीकरण चयन गरिएको थियो।
पाँच पेप्टाइड मिश्रणहरू (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) लाई पनि मोबाइल चरण प्रयोग गरेर PMP स्तम्भ प्रयोग गरेर मूल्याङ्कन गरिएको थियो; ८० μL/मिनेटको प्रवाह दरमा ६०/४० (v/v) एसिटोनिट्राइल/पानी (०.१% TFA)। इष्टतम उत्सर्जन अवस्थाहरूमा, प्रति स्तम्भ (१०० × १.८ मिमी आइडी) सैद्धान्तिक प्लेट नम्बर (N) २०,००० ± १०० (२००,००० प्लेट/m²) हुन्छ। तालिका ३ ले तीन PMP स्तम्भहरूको लागि N मानहरू दिन्छ र क्रोमेटोग्रामहरू चित्र ५A मा देखाइएका छन्। उच्च प्रवाह दर (७०० μL/मिनेट) मा PMP स्तम्भमा द्रुत विश्लेषण, एक मिनेट भित्र पाँच पेप्टाइडहरू उत्सर्जित गरियो, N मानहरू धेरै राम्रो थिए, प्रति स्तम्भ १३,५०० ± ३३० (१०० × १.८ मिमी आइडी), १३५,००० प्लेट/मिटर (चित्र ५B) सँग मेल खान्छ। तीन समान आकारका स्तम्भहरू (१०० × १.८ मिमी आइडी) जाँच गर्न PMP स्थिर चरणको तीन फरक लटहरूले प्याक गरिएको थियो। पुनरुत्पादन क्षमता। प्रत्येक स्तम्भको लागि विश्लेषणात्मक सांद्रता इष्टतम उत्सर्जन अवस्थाहरू र सैद्धान्तिक प्लेटहरूको संख्या N र अवधारण समय प्रयोग गरेर प्रत्येक स्तम्भमा समान परीक्षण मिश्रण अलग गर्न रेकर्ड गरिएको थियो। PMP स्तम्भहरूको लागि पुनरुत्पादन क्षमता डेटा तालिका ४ मा देखाइएको छ। तालिका ३ मा देखाइए अनुसार PMP स्तम्भको पुनरुत्पादन क्षमता धेरै कम %RSD मानहरूसँग राम्रोसँग सम्बन्धित छ।
PMP स्तम्भ (B) र Ascentis Express RP-Amide स्तम्भ (A) मा पेप्टाइड मिश्रणको पृथकीकरण; मोबाइल चरण 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP स्तम्भ आयाम (100 × 1.8 मिमी id); विश्लेषणात्मक यौगिकहरूको उत्सर्जन क्रम: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) र 5 (leucine) एसिड enkephalin))।
उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमेटोग्राफीमा मानव सीरम एल्बुमिनको ट्रिप्टिक डाइजेस्टहरू अलग गर्नको लागि PMP स्तम्भ (१०० × १.८ मिमी आईडी) मूल्याङ्कन गरिएको थियो। चित्र ६ मा रहेको क्रोमेटोग्रामले नमूना राम्रोसँग छुट्याइएको र रिजोल्युसन धेरै राम्रो भएको देखाउँछ। HSA डाइजेस्टहरू १०० µL/मिनेटको प्रवाह दर, मोबाइल चरण ७०/३० एसिटोनिट्राइल/पानी र ०.१% TFA प्रयोग गरेर विश्लेषण गरिएको थियो। क्रोमेटोग्राम (चित्र ६) मा देखाइए अनुसार, HSA पाचनलाई १७ पेप्टाइडहरूसँग मिल्दोजुल्दो १७ शिखरहरूमा विभाजन गरिएको छ। HSA डाइजेस्टमा प्रत्येक शिखरको पृथकीकरण दक्षता गणना गरिएको थियो र मानहरू तालिका ५ मा दिइएको छ।
HSA (१०० × १.८ मिमी id) को ट्रिप्टिक डाइजेस्ट PMP स्तम्भमा छुट्याइएको थियो; प्रवाह दर (१०० µL/मिनेट), मोबाइल चरण ६०/४० एसिटोनिट्राइल/पानी ०.१% TFA सहित।
जहाँ L स्तम्भको लम्बाइ हो, η मोबाइल चरणको चिपचिपापन हो, ΔP स्तम्भ पछाडिको चाप हो, र u मोबाइल चरणको रेखीय वेग हो। PMP स्तम्भको पारगम्यता २.५ × १०-१४ m२ थियो, प्रवाह दर २५ μL/मिनेट थियो, र ६०/४० v/v ACN/पानी प्रयोग गरिएको थियो। PMP स्तम्भको पारगम्यता (१०० × १.८ मिमी id) हाम्रो अघिल्लो अध्ययनको जस्तै थियो। Ref.३४. सतही रूपमा छिद्रपूर्ण कणहरूले भरिएको स्तम्भको पारगम्यता हो: १.३ μm कणहरूको लागि १.७ × १०-१५, १.७ μm कणहरूको लागि ३.१ × १०-१५, ५.२ × १०-१५ र २.६ μm कणहरूको लागि २.५ × १०-१४ m२ ५ μm कणहरूको लागि ४३. त्यसैले, PMP चरणको पारगम्यता ५ μm जस्तै छ। कोर-शेल कणहरू।
जहाँ Wx क्लोरोफर्मले भरिएको स्तम्भको तौल हो, Wy मिथेनोलले भरिएको स्तम्भको तौल हो, र ρ विलायकको घनत्व हो। मिथेनोलको घनत्व (ρ = 0.7866) र क्लोरोफर्म (ρ = 1.484)। हामीले पहिले अध्ययन गरेका SILICA PARICLES-C18 स्तम्भहरू (100 × 1.8 mm id) 34 र C18-Urea स्तम्भहरू 31 को कुल porosity क्रमशः 0.63 र 0.55 थियो। यसको मतलब युरिया लिगान्डहरूको उपस्थितिले स्थिर चरणको पारगम्यता कम गर्छ। अर्कोतर्फ, PMP स्तम्भ (100 × 1.8 mm id) को कुल porosity 0.60 छ। PMP स्तम्भहरूको पारगम्यता C18-बन्डेड सिलिका कणहरूले भरिएका स्तम्भहरूको भन्दा कम छ किनभने C18-प्रकारको स्थिर चरणहरूमा C18 लिगान्डहरू सिलिका कणहरूसँग रेखीय चेनको रूपमा जोडिएका हुन्छन्, जबकि पोलिस्टीरिन-प्रकारमा स्थिर चरणहरूमा, यसको वरिपरि अपेक्षाकृत बाक्लो बहुलक तह बनाइन्छ। एक सामान्य प्रयोगमा, स्तम्भको छिद्रता यसरी गणना गरिन्छ:
चित्र ७A,B ले भ्यान डिमिटर प्लटको समान उत्सर्जन अवस्थाहरू (अर्थात्, ६०/४० ACN/H2O र ०.१% TFA) प्रयोग गरेर PMP स्तम्भ (१०० × १.८ मिमी id) र एसेन्टिस एक्सप्रेस RP-एमाइड स्तम्भ (१०० × १.८ मिमी id) देखाउँछ। चयन गरिएका पेप्टाइड मिश्रणहरू (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) २० µL/ मा तयार पारिएका थिए। दुवै स्तम्भहरूको लागि न्यूनतम प्रवाह दर ८०० µL/मिनेट हो। PMP स्तम्भ र Ascentis Express RP-Amide स्तम्भको लागि इष्टतम प्रवाह दर (८० µL/मिनेट) मा न्यूनतम HETP मानहरू क्रमशः २.६ µm र ३.९ µm थिए। HETP मानहरूले संकेत गर्दछ कि PMP स्तम्भ (१०० × १.८ मिमी id) को पृथकीकरण दक्षता व्यावसायिक रूपमा उपलब्ध Ascentis Express RP-Amide स्तम्भ (१०० × १.८ मिमी id) भन्दा धेरै राम्रो छ। चित्र ७(A) मा रहेको भ्यान डिएम्टर प्लटले देखाउँछ कि बढ्दो प्रवाहको साथ N मानमा कमी हाम्रो अघिल्लो अध्ययनको तुलनामा महत्त्वपूर्ण छैन। PMP स्तम्भको उच्च पृथकीकरण दक्षता (१०० × १.८ मिमी आईडी) एसेन्टिस एक्सप्रेस आरपी-एमाइड स्तम्भको तुलनामा हालको कार्य ३४ मा प्रयोग गरिएका कण आकार, आकार र जटिल स्तम्भ प्याकिङ प्रक्रियाहरूमा सुधारमा आधारित छ।
(A) ०.१% TFA भएको ६०/४० ACN/H2O मा PMP स्तम्भ (१०० × १.८ मिमी id) प्रयोग गरेर प्राप्त गरिएको भ्यान डिमिटर प्लट (HETP बनाम मोबाइल फेज रेखीय वेग)। (B) ०.१% TFA भएको ६०/४० ACN/H2O मा एसेन्टिस एक्सप्रेस RP-एमाइड स्तम्भ (१०० × १.८ मिमी id) प्रयोग गरेर प्राप्त गरिएको भ्यान डिमिटर प्लट (HETP बनाम मोबाइल फेज रेखीय वेग)।
उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमेटोग्राफीमा मानव सीरम एल्बुमिन (HAS) को सिंथेटिक पेप्टाइड मिश्रण र ट्रिप्सिन डाइजेस्टहरू अलग गर्नको लागि ध्रुवीय-एम्बेडेड पोलिस्टाइरिन स्थिर चरण तयार पारिएको थियो र मूल्याङ्कन गरिएको थियो। पेप्टाइड मिश्रणहरूको लागि PMP स्तम्भहरूको क्रोमेटोग्राफिक प्रदर्शन पृथकीकरण दक्षता र रिजोल्युसनमा उत्कृष्ट छ। PMP स्तम्भहरूको सुधारिएको पृथकीकरण प्रदर्शन विभिन्न कारणहरूले गर्दा हो, जस्तै सिलिका कणहरूको कण आकार र छिद्र आकार, स्थिर चरणको नियन्त्रित संश्लेषण, र जटिल स्तम्भ प्याकिङ। उच्च पृथकीकरण दक्षताको अतिरिक्त, उच्च प्रवाह दरहरूमा कम स्तम्भ ब्याक प्रेसर यस स्थिर चरणको अर्को फाइदा हो। PMP स्तम्भहरूले राम्रो प्रजनन क्षमता प्रदर्शन गर्छन् र पेप्टाइड मिश्रणहरूको विश्लेषण र विभिन्न प्रोटीनहरूको ट्रिप्सिन पाचनको लागि प्रयोग गर्न सकिन्छ। हामी यो स्तम्भलाई प्राकृतिक उत्पादनहरू, औषधीय बिरुवाहरूबाट जैविक सक्रिय यौगिकहरू र तरल क्रोमेटोग्राफीमा फंगल अर्कहरूको अलग गर्न प्रयोग गर्ने इरादा राख्छौं। भविष्यमा, प्रोटीन र मोनोक्लोनल एन्टिबडीहरूको अलग गर्नको लागि PMP स्तम्भहरूको पनि मूल्याङ्कन गरिनेछ।
फिल्ड, जेके, युर्बी, एमआर, लाउ, जे., थोगरसन, एच. र पिटरसन, पी. रिभर्स्ड फेज क्रोमेटोग्राफी भाग १ द्वारा पेप्टाइड पृथकीकरण प्रणालीहरूमा अनुसन्धान: स्तम्भ क्यारेक्टराइजेशन प्रोटोकलको विकास। जे. क्रोमेटोग्राफी.१६०३, ११३–१२९.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (२०१९)।
गोमेज, बी. एट अल। संक्रामक रोगहरूको उपचारको लागि डिजाइन गरिएको सुधारिएको सक्रिय पेप्टाइडहरू। जैविक प्रविधि। उन्नत। ३६(२), ४१५-४२९। https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (२०१८)।
भ्लिघे, पी., लिसोव्स्की, भी., मार्टिनेज, जे. र ख्रेस्टचाटिस्की, एम. सिंथेटिक थेराप्युटिक पेप्टाइड्स: विज्ञान र बजार। औषधि खोज। १५ (१-२) आज, ४०-५६। https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (२०१०)।
झी, एफ., स्मिथ, आरडी र शेन, वाई. एडभान्स्ड प्रोटियोमिक लिक्विड क्रोमेटोग्राफी.जे. क्रोमेटोग्राफी.ए १२६१, ७८–९० (२०१२)।
लिउ, डब्ल्यू. एट अल। उन्नत तरल क्रोमेटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्रीले व्यापक रूपमा लक्षित मेटाबोलोमिक्स र प्रोटियोमिक्सलाई समावेश गर्न सक्षम बनाउँछ।anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019)।
चेसनट, एसएम र सालिसबरी, जेजे औषधि विकासमा UHPLC को भूमिका। जे. सेप्टेम्बर. विज्ञान.३०(८), ११८३-११९० (२००७)।
वू, एन. र क्लाउसेन, एएम द्रुत विभाजनको लागि अति उच्च दबाव तरल क्रोमेटोग्राफीको आधारभूत र व्यावहारिक पक्षहरू। जे. सेप्टेम्बर. विज्ञान.३०(८), ११६७-११८२.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (२००७)।
रेन, एसए र चेलिचेफ, पी. औषधि विकासमा अल्ट्रा-उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमेटोग्राफीको प्रयोग। जे. क्रोमेटोग्राफी.११९(१-२), १४०-१४६.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (२००६)।
गु, एच. एट अल। इन्टेरोभाइरसको कुशल शुद्धीकरणको लागि तेल-इन-पानी उच्च आन्तरिक चरण इमल्सनबाट तयार पारिएका मोनोलिथिक म्याक्रोपोरस हाइड्रोजेलहरू। केमिकल।ब्रिटेन।जे. ४०१, १२६०५१ (२०२०)।
शि, वाई., सियाङ, आर., होर्भाथ, सी. र विल्किन्स, जेए प्रोटियोमिक्समा तरल क्रोमेटोग्राफीको भूमिका। जे. क्रोमेटोग्राफी.ए १०५३(१-२), २७-३६ (२००४)।
फेकेटे, एस., भेउथे, जे.-एल. र गुइलार्मे, डी. चिकित्सीय पेप्टाइड्स र प्रोटीनहरूको उल्टो-चरण तरल क्रोमेटोग्राफी विभाजनमा उदीयमान प्रवृत्तिहरू: सिद्धान्त र अनुप्रयोगहरू। जे. फार्मेसी.बायोमेडिकल साइन्स.एनस.६९, ९-२७ (२०१२)।
गिलार, एम., ओलिभोभा, पी., डेली, एई र गेबलर, जेसी पहिलो र दोस्रो पृथकीकरण आयामहरूमा फरक pH मानहरू प्रयोग गरेर RP-RP-HPLC प्रणाली प्रयोग गरेर पेप्टाइडहरूको दुई-आयामी पृथकीकरण। जे. सेप्टेम्बर. Sci.28(14), 1694-1703 (2005)।
फेलेट्टी, एस. एट अल। C18 उप-2 μm पूर्ण र सतही रूपमा छिद्रपूर्ण कणहरूले भरिएका उच्च-दक्षता क्रोमेटोग्राफिक स्तम्भहरूको मास ट्रान्सफर विशेषताहरू र गतिज प्रदर्शनको अनुसन्धान गरियो। जे. सेप्टेम्बर. विज्ञान.४३ (९-१०), १७३७-१७४५ (२०२०)।
पिओवेसाना, एस. एट अल। बिरुवाको जैविक सक्रिय पेप्टाइड्सको अलगाव, पहिचान र प्रमाणीकरणमा हालसालैका प्रवृत्तिहरू र विश्लेषणात्मक चुनौतीहरू।anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018)।
मुलर, जेबी एट अल। जीवनको राज्यको प्रोटोमिक परिदृश्य। प्रकृति ५८२(७८१३), ५९२-५९६। https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (२०२०)।
डेलुका, सी. एट अल। तयारी तरल क्रोमेटोग्राफी द्वारा चिकित्सीय पेप्टाइड्सको डाउनस्ट्रीम प्रशोधन। अणु (बासेल, स्विट्जरल्याण्ड) 26(15), 4688(2021)।
याङ, वाई. र गेङ, एक्स. मिश्रित-मोड क्रोमेटोग्राफी र बायोपोलिमरहरूमा यसको प्रयोग। जे. क्रोमेटोग्राफी.ए १२१८(४९), ८८१३–८८२५ (२०११)।
झाओ, जी., डोङ, एक्स.-वाई. र सन, वाई. मिश्रित-मोड प्रोटीन क्रोमेटोग्राफीको लागि लिगान्डहरू: सिद्धान्त, विशेषताकरण, र डिजाइन। जे. बायोटेक्नोलजी.१४४(१), ३-११ (२००९)।