សូមអរគុណសម្រាប់ការចូលមើលគេហទំព័រ Nature.com។ កំណែកម្មវិធីរុករកដែលអ្នកកំពុងប្រើមានការគាំទ្រ CSS មានកំណត់។ ដើម្បីទទួលបានបទពិសោធន៍ល្អបំផុត យើងសូមណែនាំឱ្យអ្នកប្រើកម្មវិធីរុករកដែលបានធ្វើបច្ចុប្បន្នភាព (ឬបិទរបៀបឆបគ្នានៅក្នុង Internet Explorer)។ ទន្ទឹមនឹងនេះ ដើម្បីធានាបាននូវការគាំទ្រជាបន្តបន្ទាប់ យើងនឹងបង្ហាញគេហទំព័រដោយគ្មានរចនាប័ទ្ម និង JavaScript។
ភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលមានរន្ធញើសត្រូវបានរៀបចំដោយវិធីសាស្ត្រសូល-ជែលជាមួយនឹងការកែប្រែមួយចំនួនដើម្បីទទួលបានភាគល្អិតម៉ាក្រូប៉ូរ៉ូស។ ភាគល្អិតទាំងនេះត្រូវបានដេរីវេដោយប៉ូលីមែររីសាស្យុងខ្សែសង្វាក់បំបែកបន្ថែមបញ្ច្រាស (RAFT) ជាមួយ N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) និង styrene ដើម្បីរៀបចំការបញ្ចូល N-phenylmaleimide នៃដំណាក់កាលស្ថានី polystyrene (PMP)។ ជួរឈរដែកអ៊ីណុកដែលមានរន្ធតូចចង្អៀត (100 × 1.8 mm id) ត្រូវបានវេចខ្ចប់ដោយការវេចខ្ចប់ slurry។ ការបំបែកជួរឈរ PMP ដែលបានវាយតម្លៃនៃល្បាយ peptide ដែលមាន peptide ចំនួនប្រាំ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) និងការរំលាយ trypsin នៃអាល់ប៊ុយមីនសេរ៉ូមរបស់មនុស្ស (HAS)។ ក្រោមលក្ខខណ្ឌ elution ល្អបំផុត ចំនួនបន្ទះទ្រឹស្តីនៃល្បាយ peptide គឺខ្ពស់ដល់ 280,000 បន្ទះ/ម៉ែត្រការ៉េ។ ការប្រៀបធៀបដំណើរការបំបែកនៃជួរឈរដែលបានអភិវឌ្ឍជាមួយ នៅក្នុងជួរឈរពាណិជ្ជកម្ម Ascentis Express RP-Amide គេសង្កេតឃើញថា ប្រសិទ្ធភាពនៃការបំបែកនៃជួរឈរ PMP គឺល្អជាងជួរឈរពាណិជ្ជកម្មទាក់ទងនឹងប្រសិទ្ធភាព និងការដោះស្រាយ។
ក្នុងប៉ុន្មានឆ្នាំថ្មីៗនេះ ឧស្សាហកម្មជីវឱសថបានក្លាយជាទីផ្សារសកលដែលកំពុងពង្រីកខ្លួន ជាមួយនឹងការកើនឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃចំណែកទីផ្សារ។ ជាមួយនឹងការរីកចម្រើនយ៉ាងឆាប់រហ័សនៃឧស្សាហកម្មជីវឱសថ1,2,3 ការវិភាគនៃ peptides និងប្រូតេអ៊ីនគឺជាការចង់បានយ៉ាងខ្លាំង។ បន្ថែមពីលើ peptide គោលដៅ ភាពមិនបរិសុទ្ធជាច្រើនត្រូវបានបង្កើតឡើងក្នុងអំឡុងពេលសំយោគ peptide ដូច្នេះតម្រូវឱ្យមានការបន្សុទ្ធ chromatographic ដើម្បីទទួលបាន peptides នៃភាពបរិសុទ្ធដែលចង់បាន។ ការវិភាគ និងការកំណត់លក្ខណៈនៃប្រូតេអ៊ីននៅក្នុងសារធាតុរាវរាងកាយ ជាលិកា និងកោសិកាគឺជាកិច្ចការដ៏លំបាកមួយ ដោយសារតែចំនួនដ៏ច្រើននៃប្រភេទសត្វដែលអាចរកឃើញនៅក្នុងគំរូតែមួយ។ ទោះបីជា mass spectrometry គឺជាឧបករណ៍ដ៏មានប្រសិទ្ធភាពសម្រាប់ការធ្វើលំដាប់ peptide និងប្រូតេអ៊ីនក៏ដោយ ប្រសិនបើគំរូបែបនេះត្រូវបានចាក់ចូលទៅក្នុង mass spectrometer ក្នុងមួយជំហាន ការបំបែកនឹងមិនល្អទេ។ បញ្ហានេះអាចត្រូវបានកាត់បន្ថយដោយការអនុវត្តការបំបែក chromatography រាវ (LC) មុនពេលការវិភាគ MS ដែលនឹងកាត់បន្ថយចំនួននៃ analytes ដែលចូលទៅក្នុង mass spectrometer នៅពេលជាក់លាក់មួយ4,5,6។ លើសពីនេះ ក្នុងអំឡុងពេលបំបែកដំណាក់កាលរាវ analytes អាចត្រូវបានផ្តោតនៅក្នុងតំបន់តូចចង្អៀត ដោយហេតុនេះប្រមូលផ្តុំ analytes ទាំងនេះ និងធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវការរកឃើញ MS។ ភាពរសើប។ ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវ (LC) បានរីកចម្រើនគួរឱ្យកត់សម្គាល់ក្នុងរយៈពេលមួយទសវត្សរ៍កន្លងមកនេះ ហើយបានក្លាយជាបច្ចេកទេសដ៏ពេញនិយមមួយក្នុងការវិភាគប្រូតេអូមិច7,8,9,10។
ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវដំណាក់កាលបញ្ច្រាស (RP-LC) ត្រូវបានគេប្រើប្រាស់យ៉ាងទូលំទូលាយសម្រាប់ការបន្សុទ្ធ និងការបំបែកល្បាយប៉ិបទីតដោយប្រើស៊ីលីកាកែប្រែ octadecyl (ODS) ជាដំណាក់កាលស្ថានី11,12,13។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ដំណាក់កាលស្ថានី RP មិនផ្តល់នូវការបំបែកប៉ិបទីត និងប្រូតេអ៊ីនដែលពេញចិត្តនោះទេ ដោយសារតែរចនាសម្ព័ន្ធស្មុគស្មាញ និងលក្ខណៈ amphiphilic របស់វា14,15។ ដូច្នេះ ដំណាក់កាលស្ថានីដែលត្រូវបានរចនាឡើងជាពិសេស គឺត្រូវបានទាមទារដើម្បីវិភាគប៉ិបទីត និងប្រូតេអ៊ីនជាមួយនឹងសមាសធាតុប៉ូល និងមិនមែនប៉ូល ដើម្បីធ្វើអន្តរកម្មជាមួយ និងរក្សាសារធាតុវិភាគទាំងនេះ16។ ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរបៀបចម្រុះ ដែលផ្តល់នូវអន្តរកម្មពហុម៉ូឌុល អាចជាជម្រើសមួយជំនួស RP-LC សម្រាប់ការបំបែកប៉ិបទីត ប្រូតេអ៊ីន និងល្បាយស្មុគស្មាញផ្សេងទៀត។ ដំណាក់កាលស្ថានីរបៀបចម្រុះជាច្រើនត្រូវបានរៀបចំ ហើយជួរឈរដែលពោរពេញទៅដោយដំណាក់កាលទាំងនេះត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការបំបែកប៉ិបទីត និងប្រូតេអ៊ីន17,18,19,20,21។ ដំណាក់កាលស្ថានីរបៀបចម្រុះ (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC) គឺសមរម្យសម្រាប់ការបំបែកប៉ិបទីត និងប្រូតេអ៊ីនដោយសារតែ វត្តមាននៃក្រុមប៉ូល និងមិនមែនប៉ូលទាំង២២,២៣,២៤,២៥,២៦,២៧,២៨។ ស្រដៀងគ្នានេះដែរ ដំណាក់កាលស្ថានីដែលមានអន្តរកម្មប៉ូលជាមួយក្រុមប៉ូលភ្ជាប់ជាមួយកូវ៉ាឡង់បង្ហាញពីថាមពលបំបែកល្អ និងការជ្រើសរើសពិសេសសម្រាប់សារធាតុវិភាគប៉ូល និងមិនមែនប៉ូល ដោយសារការបំបែកអាស្រ័យលើអន្តរកម្មរវាងសារធាតុវិភាគ និងដំណាក់កាលស្ថានី។ អន្តរកម្មពហុម៉ូឌុល ២៩, ៣០, ៣១, ៣២។ ថ្មីៗនេះ Zhang et al. ៣០ បានរៀបចំដំណាក់កាលស្ថានីប៉ូលីអាមីនដែលបញ្ចប់ដោយដូដេស៊ីល និងបានបំបែកអ៊ីដ្រូកាបូន ថ្នាំប្រឆាំងនឹងជំងឺធ្លាក់ទឹកចិត្ត សារធាតុ flavonoids សារធាតុ nucleosides អេស្ត្រូសែន និងសារធាតុវិភាគជាច្រើនទៀតដោយជោគជ័យ។ អន្តរកម្មប៉ូលមានទាំងក្រុមប៉ូល និងមិនមែនប៉ូល ដូច្នេះវាអាចត្រូវបានប្រើដើម្បីបំបែក peptides និងប្រូតេអ៊ីនដែលមានទាំងសារធាតុ hydrophobic និង hydrophilic។ ជួរឈរដែលបង្កប់ដោយប៉ូល (ឧទាហរណ៍ ជួរឈរ C18 ដែលបង្កប់ដោយអាមីដ) មានលក់ក្រោមឈ្មោះពាណិជ្ជកម្មថា ជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide ប៉ុន្តែជួរឈរទាំងនេះត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការវិភាគអាមីន ៣៣ តែប៉ុណ្ណោះ។
នៅក្នុងការសិក្សាបច្ចុប្បន្ននេះ ដំណាក់កាលស្ថានីដែលបង្កប់ដោយប៉ូល (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) ត្រូវបានរៀបចំ និងវាយតម្លៃសម្រាប់ការបំបែក peptides និង trypsin digests នៃ HSA។ ដំណាក់កាលស្ថានីត្រូវបានរៀបចំដោយប្រើយុទ្ធសាស្ត្រដូចខាងក្រោម។ ភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលមានរន្ធញើសត្រូវបានរៀបចំតាមនីតិវិធីដែលបានផ្តល់ឱ្យនៅក្នុងការបោះពុម្ពផ្សាយមុនរបស់យើងជាមួយនឹងការកែប្រែមួយចំនួនចំពោះពិធីការរៀបចំ។ សមាមាត្រនៃ urea, polyethylene glycol (PEG), TMOS, ទឹក អាស៊ីតអាសេទិក ត្រូវបានកែសម្រួលដើម្បីរៀបចំភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលមានទំហំរន្ធញើសធំ។ ទីពីរ សារធាតុ ligand ថ្មីមួយគឺ phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate ត្រូវបានសំយោគ និងប្រើដើម្បីបំលែងភាគល្អិតស៊ីលីកាដើម្បីរៀបចំដំណាក់កាលស្ថានីដែលបង្កប់ដោយប៉ូល។ ដំណាក់កាលស្ថានីលទ្ធផលត្រូវបានវេចខ្ចប់ទៅក្នុងជួរឈរដែកអ៊ីណុក (100 × 1.8 mm id) ដោយប្រើគ្រោងការណ៍វេចខ្ចប់ដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើង។ ការវេចខ្ចប់ជួរឈរត្រូវបានជួយដោយរំញ័រមេកានិចដើម្បីធានាថាគ្រែដូចគ្នាត្រូវបានបង្កើតឡើងនៅក្នុងជួរឈរ។ វាយតម្លៃការបំបែកជួរឈរដែលវេចខ្ចប់នៃល្បាយ peptide ដែលមាន peptides ចំនួនប្រាំ; (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) និងការរំលាយ Trypsin នៃអាល់ប៊ុយមីនសេរ៉ូមរបស់មនុស្ស (HAS)។ ល្បាយប៉ិបទីត និងការរំលាយទ្រីបស៊ីននៃ HSA ត្រូវបានគេសង្កេតឃើញថាបំបែកចេញពីគ្នាជាមួយនឹងគុណភាពបង្ហាញ និងប្រសិទ្ធភាពល្អ។ ការអនុវត្តការបំបែកនៃជួរឈរ PMP ត្រូវបានប្រៀបធៀបជាមួយនឹងជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide។ ទាំងប៉ិបទីត និងប្រូតេអ៊ីនត្រូវបានគេសង្កេតឃើញថារលាយបានល្អ និងមានប្រសិទ្ធភាពនៅលើជួរឈរ PMP ដែលមានប្រសិទ្ធភាពជាងជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide។
PEG (ប៉ូលីអេទីឡែន គ្លីកូល), អ៊ុយរ៉េអា, អាស៊ីតអាសេទិក, ទ្រីមេតូស៊ី អ័រថូស៊ីលីកេត (TMOS), ទ្រីមេទីល ក្លរ៉ូស៊ីឡាន (TMCS), ទ្រីបស៊ីន, អាល់ប៊ុយមីនសេរ៉ូមរបស់មនុស្ស (HSA), អាម៉ូញ៉ូម ក្លរួ, អ៊ុយរ៉េអា, ហិចសាន មេទីលឌីស៊ីឡាហ្សាន (HMDS), មេតាគ្រីឡូអ៊ីល ក្លរួ (MC), ស្ទីរ៉ែន, 4-អ៊ីដ្រូស៊ី-តេមប៉ូ, បេនហ្សូអ៊ីល ប៉េរ៉ុកស៊ីត (BPO), អាសេតូនីទ្រីល ថ្នាក់ HPLC (ACN), មេតាណុល, 2-ប្រូផាណុល និង អាសេតូន ទិញពី Sigma-Aldrich (សាំងល្វីស, រដ្ឋមីសសួរី, សហរដ្ឋអាមេរិក)។
ល្បាយនៃអ៊ុយរ៉េ (៨ក្រាម) ប៉ូលីអេទីឡែនគ្លីកូល (៨ក្រាម) និងអាស៊ីតអាសេទិក ០,០១ ណាណូលីត្រ ចំនួន ៨មីលីលីត្រ ត្រូវបានកូររយៈពេល ១០នាទី ហើយបន្ទាប់មក TMOS ចំនួន ២៤មីលីលីត្រ ត្រូវបានបន្ថែមទៅក្នុងនោះក្រោមលក្ខខណ្ឌត្រជាក់ខ្លាំង។ ល្បាយប្រតិកម្មត្រូវបានកំដៅនៅសីតុណ្ហភាព ៤០អង្សាសេ រយៈពេល ៦ម៉ោង ហើយបន្ទាប់មកនៅសីតុណ្ហភាព ១២០អង្សាសេ រយៈពេល ៨ម៉ោង ក្នុងឡដុតដែកអ៊ីណុក។ ទឹកត្រូវបានចាក់ចេញ ហើយសម្ភារៈដែលនៅសល់ត្រូវបានសម្ងួតនៅសីតុណ្ហភាព ៧០អង្សាសេ រយៈពេល ១២ម៉ោង។ ម៉ាស់ទន់ស្ងួតត្រូវបានកិនឱ្យរលោងនៅក្នុងឡ ហើយដុតនៅសីតុណ្ហភាព ៥៥០អង្សាសេ រយៈពេល ១២ម៉ោង។ បាច់ចំនួនបីត្រូវបានរៀបចំ និងកំណត់លក្ខណៈ ដើម្បីពិនិត្យមើលភាពអាចផលិតឡើងវិញបានក្នុងទំហំភាគល្អិត ទំហំរន្ធ និងផ្ទៃ។
តាមរយៈការកែប្រែផ្ទៃនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាជាមួយលីហ្គែន phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) ដែលបានសំយោគជាមុន បន្តដោយប៉ូលីមែររ៉ាឌីកាល់ជាមួយ styrene សមាសធាតុដែលមានក្រុមប៉ូលត្រូវបានរៀបចំ។ ដំណាក់កាលស្ថានីសម្រាប់សារធាតុប្រមូលផ្តុំ និងខ្សែសង្វាក់ប៉ូលីស្ទីរ៉ែន។ ដំណើរការរៀបចំត្រូវបានពិពណ៌នាខាងក្រោម។
N-phenylmaleimide (200 មីលីក្រាម) និង methyl vinyl isocyanate (100 មីលីក្រាម) ត្រូវបានរំលាយក្នុង toluene ស្ងួត ហើយ 0.1 មីលីលីត្រ នៃ 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ត្រូវបានបន្ថែមទៅក្នុងដបប្រតិកម្មដើម្បីរៀបចំ phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate copolymer (PMCP)។ ល្បាយនេះត្រូវបានកំដៅនៅសីតុណ្ហភាព 60°C រយៈពេល 3 ម៉ោង ត្រង និងសម្ងួតក្នុងឡនៅសីតុណ្ហភាព 40°C រយៈពេល 3 ម៉ោង។
ភាគល្អិតស៊ីលីកាស្ងួត (2 ក្រាម) ត្រូវបានបំបែកក្នុង toluene ស្ងួត (100 មីលីលីត្រ) កូរ និងបង្កើតសំឡេងនៅក្នុងដបបាតមូល 500 មីលីលីត្ររយៈពេល 10 នាទី។ PMCP (10 មីលីក្រាម) ត្រូវបានរំលាយក្នុង toluene ហើយបន្ថែមទៅក្នុងដបប្រតិកម្មតាមលំដាប់ទម្លាក់។ ល្បាយនេះត្រូវបានចាក់ឡើងវិញនៅសីតុណ្ហភាព 100°C រយៈពេល 8 ម៉ោង ត្រង និងលាងសម្អាតជាមួយ acetone ហើយសម្ងួតនៅសីតុណ្ហភាព 60°C រយៈពេល 3 ម៉ោង។ បន្ទាប់មក ភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលភ្ជាប់ជាមួយ PMCP (100 ក្រាម) ត្រូវបានរំលាយក្នុង toluene (200 មីលីលីត្រ) និង 4-hydroxy-TEMPO (2 មីលីលីត្រ) ត្រូវបានបន្ថែមនៅក្នុងវត្តមាននៃ dibutyltin dilaurate 100 µL ជាកាតាលីករ។ ល្បាយនេះត្រូវបានកូរនៅសីតុណ្ហភាព 50°C រយៈពេល 8 ម៉ោង ត្រង និងសម្ងួតនៅសីតុណ្ហភាព 50°C រយៈពេល 3 ម៉ោង។
ស្ទីរ៉ែន (1 មីលីលីត្រ) ប៊េនហ្សូអ៊ីល ប៉េរ៉ុកស៊ីត BPO (0.5 មីលីលីត្រ) និងភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលភ្ជាប់ជាមួយ TEMPO-PMCP (1.5 ក្រាម) ត្រូវបានបំបែកនៅក្នុង toluene ហើយបន្សុទ្ធដោយអាសូត។ ការធ្វើប៉ូលីមែរនៃស្ទីរ៉ែនត្រូវបានអនុវត្តនៅសីតុណ្ហភាព 100°C រយៈពេល 12 ម៉ោង។ ផលិតផលលទ្ធផលត្រូវបានលាងសម្អាតជាមួយមេតាណុល ហើយសម្ងួតនៅសីតុណ្ហភាព 60°C ពេញមួយយប់។ គ្រោងការណ៍ប្រតិកម្មទាំងមូលត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 1។
គំរូត្រូវបានបន្សាបឧស្ម័ននៅសីតុណ្ហភាព 393 K រយៈពេល 1 ម៉ោង ដើម្បីទទួលបានសម្ពាធសំណល់តិចជាង 10-3 Torr។ បរិមាណ N2 ដែលស្រូបយកនៅសម្ពាធទាក់ទង P/P0 = 0.99 ត្រូវបានប្រើដើម្បីកំណត់បរិមាណរន្ធញើសសរុប។ រូបរាងនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាទទេ និងភាគល្អិតស៊ីលីកាភ្ជាប់ជាមួយលីហ្គែន ត្រូវបានពិនិត្យដោយមីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុងស្កេន (Hitachi High Technologies, តូក្យូ, ជប៉ុន)។ គំរូស្ងួត (ស៊ីលីកាទទេ និងភាគល្អិតស៊ីលីកាភ្ជាប់ជាមួយលីហ្គែន) ត្រូវបានដាក់នៅលើជួរឈរអាលុយមីញ៉ូមដោយប្រើកាសែតកាបូនស្អិត។ មាសត្រូវបានស្រោបលើគំរូដោយប្រើឧបករណ៍ស្រោប Q150T ហើយស្រទាប់ Au 5 nm ត្រូវបានដាក់លើគំរូ។ នេះធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវប្រសិទ្ធភាពដំណើរការដោយប្រើវ៉ុលទាប និងផ្តល់នូវគ្រាប់ល្អិតៗ និងការស្រោបត្រជាក់។ ឧបករណ៍វិភាគធាតុ Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112 ត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការវិភាគធាតុ។ ឧបករណ៍វិភាគទំហំភាគល្អិត Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 ត្រូវបានប្រើដើម្បីទទួលបានការចែកចាយទំហំភាគល្អិត។ ស៊ីលីកាទទេ ភាគល្អិត និងភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលភ្ជាប់ជាមួយលីហ្គែន (៥ មីលីក្រាមក្នុងមួយៗ) ត្រូវបានបំបែកក្នុងអ៊ីសូប្រូផាណុល ៥ មីលីលីត្រ បញ្ចេញសំឡេងរយៈពេល ១០ នាទី បង្វិលរយៈពេល ៥ នាទី ហើយដាក់លើតុអុបទិករបស់ Mastersizer។ ការវិភាគទែម៉ូក្រាវីម៉ែត្រិចត្រូវបានអនុវត្តក្នុងអត្រា ៥ អង្សាសេក្នុងមួយនាទីលើជួរសីតុណ្ហភាពពី ៣០ ទៅ ៨០០ អង្សាសេ។
ជួរឈរ​ដែកអ៊ីណុក​រាង​តូច​ចង្អៀត​ដែល​មាន​ស្រទាប់​កញ្ចក់​ដែល​មាន​វិមាត្រ (100 × 1.8 ម.ម.) ត្រូវ​បាន​វេច​ខ្ចប់​ដោយ​ប្រើ​វិធីសាស្ត្រ​វេច​ខ្ចប់​ដោយ​សារធាតុ​រាវ ដោយ​អនុវត្ត​នីតិវិធី​ដូចគ្នា​ដែល​បាន​ប្រើ​ក្នុង​ឯកសារ​យោង។ ៣១. ជួរឈរដែកអ៊ីណុកមួយ (មានស្រទាប់កញ្ចក់ ទំហំ 100 × 1.8 ម.ម) ដែលមានប្រដាប់ភ្ជាប់ចេញដែលមានស្រទាប់ហ្វ្រីត 1 µm ត្រូវបានភ្ជាប់ទៅនឹងម៉ាស៊ីនវេចខ្ចប់សារធាតុរាវ (Alltech Deerfield, IL, USA)។ រៀបចំសារធាតុរាវដំណាក់កាលឋិតិវន្តដោយផ្អាកសារធាតុរាវដំណាក់កាលឋិតិវន្តចំនួន 150 មីលីក្រាមក្នុងមេតាណុល 1.2 មីលីលីត្រ ហើយផ្ញើវាទៅជួរឈរផ្ទុក។ មេតាណុលត្រូវបានប្រើជាសារធាតុរំលាយសារធាតុរាវ ក៏ដូចជាសារធាតុរំលាយជំរុញ។ បំពេញជួរឈរជាបន្តបន្ទាប់ដោយដាក់សម្ពាធ 100 MP រយៈពេល 10 នាទី 80 MP រយៈពេល 15 នាទី និង 60 MP រយៈពេល 30 នាទី។ អំឡុងពេលវេចខ្ចប់ រំញ័រមេកានិចត្រូវបានអនុវត្តជាមួយឧបករណ៍ញ័រជួរឈរ GC ពីរ (Alltech, Deerfield, IL, USA) ដើម្បីធានាបាននូវការវេចខ្ចប់ឯកសណ្ឋាននៃជួរឈរ។ បិទម៉ាស៊ីនវេចខ្ចប់សារធាតុរាវ ហើយបញ្ចេញសម្ពាធយឺតៗ ដើម្បីការពារការខូចខាតណាមួយនៅក្នុងជួរឈរ។ ផ្តាច់ជួរឈរចេញពីអង្គភាពវេចខ្ចប់សារធាតុរាវ ហើយភ្ជាប់ប្រដាប់ភ្ជាប់មួយទៀតទៅនឹងច្រកចូល និងទៅប្រព័ន្ធ LC ដើម្បីពិនិត្យមើលដំណើរការរបស់វា។
ម៉ាស៊ីនបូម LC (10AD Shimadzu, ជប៉ុន) ម៉ាស៊ីនចាក់ (Valco (សហរដ្ឋអាមេរិក) C14 W.05) ជាមួយនឹងរង្វិលជុំចាក់ 50nL ឧបករណ៍បន្សាបឧស្ម័នភ្នាស (Shimadzu DGU-14A) បង្អួចសរសៃឈាម UV-VIS ត្រូវបានសាងសង់ឡើង។ ឧបករណ៍ចាប់សញ្ញាឧបករណ៍ µLC ពិសេស (UV-2075) និងមីក្រូជួរឈរដែលមានស្រទាប់កញ្ចក់។ ប្រើបំពង់ភ្ជាប់តូចចង្អៀត និងខ្លីខ្លាំង ដើម្បីកាត់បន្ថយឥទ្ធិពលនៃការពង្រីកជួរបន្ថែម។ បន្ទាប់ពីការវេចខ្ចប់ សរសៃឈាមតូចៗ (50 μm id 365 និងសរសៃឈាមតូចៗនៃសហជីពកាត់បន្ថយ (50 μm) ត្រូវបានដំឡើងនៅច្រកចេញ 1/16″ នៃសហជីពកាត់បន្ថយ។ ការប្រមូលទិន្នន័យ និងដំណើរការក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីត្រូវបានធ្វើឡើងដោយប្រើកម្មវិធី Multichro 2000។ ការត្រួតពិនិត្យនៅ 254 nm ឧបករណ៍វិភាគត្រូវបានសាកល្បងសម្រាប់ការស្រូបយកកាំរស្មីយូវី។ ទិន្នន័យក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីត្រូវបានវិភាគដោយ OriginPro8 (Northampton, MA)។
អាល់ប៊ុយមីនពីសេរ៉ូមរបស់មនុស្ស ម្សៅស្ងួត ≥ 96% (អាហ្គារ៉ូសជែលអេឡិចត្រូផូរីស) 3 មីលីក្រាម លាយជាមួយទ្រីបស៊ីន (1.5 មីលីក្រាម) អ៊ុយរ៉េ 4.0 M (1 មីលីលីត្រ) និងអាម៉ូញ៉ូមប៊ីកាបូណាត 0.2 M (1 មីលីលីត្រ)។ ដំណោះស្រាយត្រូវបានកូររយៈពេល 10 នាទី ហើយរក្សាទុកក្នុងអាងងូតទឹកនៅសីតុណ្ហភាព 37°C រយៈពេល 6 ម៉ោង បន្ទាប់មកពន្លត់ជាមួយ TFA 0.1% 1 មីលីលីត្រ។ ត្រងដំណោះស្រាយ ហើយរក្សាទុកក្រោម 4°C។
ការបំបែកល្បាយ peptide និងការរំលាយ trypsin HSA ត្រូវបានវាយតម្លៃដោយឡែកពីគ្នានៅលើជួរឈរ PMP។ សូមពិនិត្យមើលការបំបែកល្បាយ peptide និងការរំលាយ trypsin នៃ HSA ដោយជួរឈរ PMP ហើយប្រៀបធៀបលទ្ធផលទៅនឹងជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide។ លេខបន្ទះទ្រឹស្តីត្រូវបានគណនាដូចខាងក្រោម៖
រូបភាព SEM នៃភាគល្អិតស៊ីលីកាទទេ និងភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលភ្ជាប់ជាមួយលីហ្គែន ត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 2។ រូបភាព SEM នៃភាគល្អិតស៊ីលីកាទទេ (A, B) បង្ហាញថា ផ្ទុយពីការសិក្សាពីមុនរបស់យើង ភាគល្អិតទាំងនេះមានរាងស្វ៊ែរ ដែលភាគល្អិតទាំងនោះមានរាងវែង ឬមានស៊ីមេទ្រីមិនទៀងទាត់។ ផ្ទៃនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលភ្ជាប់ជាមួយលីហ្គែន (C, D) គឺរលោងជាងផ្ទៃនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាទទេ ដែលអាចបណ្តាលមកពីការស្រោបខ្សែសង្វាក់ប៉ូលីស្ទីរ៉ែននៅលើផ្ទៃនៃភាគល្អិតស៊ីលីកា។
រូបភាពមីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុងស្កេននៃភាគល្អិតស៊ីលីកាទទេ (A, B) និងភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលភ្ជាប់ជាមួយលីហ្គែន (C, D)។
ការចែកចាយទំហំភាគល្អិតនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាទទេ និងភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលភ្ជាប់ជាមួយសារធាតុ ligand ត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 3(ក)។ ខ្សែកោងចែកចាយទំហំភាគល្អិតដែលមានមូលដ្ឋានលើបរិមាណបានបង្ហាញថាទំហំនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាបានកើនឡើងបន្ទាប់ពីការកែប្រែគីមី (រូបភាពទី 3A)។ ទិន្នន័យចែកចាយទំហំភាគល្អិតនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាពីការសិក្សាបច្ចុប្បន្ន និងការសិក្សាមុនត្រូវបានប្រៀបធៀបនៅក្នុងតារាងទី 1(ក)។ ទំហំភាគល្អិតដែលមានមូលដ្ឋានលើបរិមាណ d(0.5) នៃ PMP គឺ 3.36 μm បើប្រៀបធៀបទៅនឹងការសិក្សាមុនរបស់យើងជាមួយនឹងតម្លៃ ad(0.5) 3.05 μm (ភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលចងភ្ជាប់ជាមួយប៉ូលីស្ទីរ៉ែន)34។ បាច់នេះមានការចែកចាយទំហំភាគល្អិតតូចចង្អៀតបើប្រៀបធៀបទៅនឹងការសិក្សាមុនរបស់យើងដោយសារតែសមាមាត្រខុសៗគ្នានៃ PEG, urea, TMOS និងអាស៊ីតអាសេទិកនៅក្នុងល្បាយប្រតិកម្ម។ ទំហំភាគល្អិតនៃដំណាក់កាល PMP គឺធំជាងបន្តិចជាងដំណាក់កាលភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលចងភ្ជាប់ជាមួយប៉ូលីស្ទីរ៉ែនដែលយើងបានសិក្សាពីមុន។ នេះមានន័យថាមុខងារផ្ទៃនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាជាមួយស្ទីរ៉ែនបានដាក់ស្រទាប់ប៉ូលីស្ទីរ៉ែន (0.97 µm) នៅលើផ្ទៃស៊ីលីកា ចំណែកឯនៅក្នុងដំណាក់កាល PMP កម្រាស់ស្រទាប់គឺ... ១,៣៨ មីក្រូម៉ែត្រ។
ការចែកចាយទំហំភាគល្អិត (ក) និងការចែកចាយទំហំរន្ធញើស (ខ) នៃភាគល្អិតស៊ីលីកាទទេ និងភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលចងភ្ជាប់ជាមួយលីហ្គែន។
ទំហំរន្ធញើស បរិមាណរន្ធញើស និងផ្ទៃនៃភាគល្អិតស៊ីលីកានៃការសិក្សាបច្ចុប្បន្នត្រូវបានផ្តល់ឱ្យនៅក្នុងតារាងទី 1 (ខ)។ ទម្រង់ PSD នៃភាគល្អិតស៊ីលីកាទទេ និងភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលភ្ជាប់ជាមួយលីហ្គែនត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 3 (ខ)។ លទ្ធផលគឺអាចប្រៀបធៀបទៅនឹងការសិក្សាពីមុនរបស់យើង។ ទំហំរន្ធញើសនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាទទេ និងភ្ជាប់ជាមួយលីហ្គែនគឺ 310 និង 241 រៀងគ្នា ដែលបង្ហាញថាទំហំរន្ធញើសថយចុះ 69 បន្ទាប់ពីការកែប្រែគីមី ដូចបង្ហាញក្នុងតារាងទី 1 (ខ) ហើយការផ្លាស់ប្តូរខ្សែកោងត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 3 (ខ)។ ស្រដៀងគ្នានេះដែរ បរិមាណរន្ធញើសនៃភាគល្អិតស៊ីលីកាបានថយចុះពី 0.67 ទៅ 0.58 សង់ទីម៉ែត្រគូប/ក្រាម បន្ទាប់ពីការកែប្រែគីមី។ ផ្ទៃជាក់លាក់នៃភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលបានសិក្សាបច្ចុប្បន្នគឺ 116 ម៉ែត្រការ៉េ/ក្រាម ដែលអាចប្រៀបធៀបទៅនឹងការសិក្សាពីមុនរបស់យើង (124 ម៉ែត្រការ៉េ/ក្រាម)។ ដូចដែលបង្ហាញក្នុងតារាងទី 1 (ខ) ផ្ទៃ (ម៉ែត្រការ៉េ/ក្រាម) នៃភាគល្អិតស៊ីលីកាក៏បានថយចុះពី 116 ម៉ែត្រការ៉េ/ក្រាម មកត្រឹម 105... m2/g បន្ទាប់ពីការកែប្រែគីមី។
លទ្ធផលនៃការវិភាគធាតុនៃដំណាក់កាលស្ថានីត្រូវបានបង្ហាញក្នុងតារាងទី 2។ ការផ្ទុកកាបូននៃដំណាក់កាលស្ថានីបច្ចុប្បន្នគឺ 6.35% ដែលទាបជាងការផ្ទុកកាបូននៃការសិក្សាពីមុនរបស់យើង (ភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលភ្ជាប់ជាមួយប៉ូលីស្ទីរ៉ែន 7.93%35 និង 10.21% រៀងគ្នា) 42. ការផ្ទុកកាបូននៃដំណាក់កាលស្ថានីបច្ចុប្បន្នគឺទាប ពីព្រោះនៅក្នុងការរៀបចំ SP បច្ចុប្បន្ន បន្ថែមពីលើស្ទីរ៉ែន សារធាតុភ្ជាប់ប៉ូលមួយចំនួនដូចជា phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) និង 4-hydroxy-TEMPO ត្រូវបានប្រើប្រាស់។ ភាគរយទម្ងន់អាសូតនៃដំណាក់កាលស្ថានីបច្ចុប្បន្នគឺ 2.21% បើប្រៀបធៀបទៅនឹង 0.1735 និង 0.85% តាមទម្ងន់នៃអាសូតនៅក្នុងការសិក្សាពីមុនរៀងៗខ្លួន។ នេះមានន័យថា ទម្ងន់អាសូត % គឺខ្ពស់ជាងនៅក្នុងដំណាក់កាលស្ថានីបច្ចុប្បន្នដោយសារតែ phenylmaleimide។ ដូចគ្នានេះដែរ ការផ្ទុកកាបូននៃផលិតផល (4) និង (5) គឺ 2.7% និង 2.9% រៀងគ្នា ខណៈពេលដែលការផ្ទុកកាបូននៃ ផលិតផលចុងក្រោយ (6) គឺ 6.35% ដូចបង្ហាញក្នុងតារាងទី 2។ ការសម្រកទម្ងន់ត្រូវបានត្រួតពិនិត្យជាមួយដំណាក់កាលស្ថានី PMP ហើយខ្សែកោង TGA ត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 4។ ខ្សែកោង TGA បង្ហាញពីការសម្រកទម្ងន់ 8.6% ដែលស្របគ្នាយ៉ាងល្អជាមួយនឹងការផ្ទុកកាបូន (6.35%) ពីព្រោះសារធាតុចងមិនត្រឹមតែមាន C ប៉ុណ្ណោះទេ ប៉ុន្តែថែមទាំងមាន N, O និង H ផងដែរ។
សារធាតុ phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ligand ត្រូវបានជ្រើសរើសសម្រាប់ការកែប្រែផ្ទៃនៃភាគល្អិតស៊ីលីកា ពីព្រោះវាមានក្រុម phenylmaleimide ប៉ូល និងក្រុម vinylisocyanate។ ក្រុម Vinyl isocyanate អាចមានប្រតិកម្មបន្ថែមទៀតជាមួយ styrene ដោយប្រតិកម្មប៉ូលីមែររ៉ាឌីកាល់រស់។ ហេតុផលទីពីរគឺដើម្បីបញ្ចូលក្រុមដែលមានអន្តរកម្មកម្រិតមធ្យមជាមួយ analyte និងគ្មានអន្តរកម្មអេឡិចត្រូស្តាទិចខ្លាំងរវាង analyte និងដំណាក់កាលស្ថានី ចាប់តាំងពីផ្នែក phenylmaleimide មិនមានបន្ទុកនិម្មិតនៅ pH ធម្មតា។ ប៉ូលារីតេនៃដំណាក់កាលស្ថានីអាចត្រូវបានគ្រប់គ្រងដោយបរិមាណល្អបំផុតនៃ styrene និងពេលវេលាប្រតិកម្មនៃប៉ូលីមែររ៉ាឌីកាល់សេរី។ ជំហានចុងក្រោយនៃប្រតិកម្ម (ប៉ូលីមែររ៉ាឌីកាល់សេរី) គឺមានសារៈសំខាន់ ហើយអាចផ្លាស់ប្តូរប៉ូលារីតេនៃដំណាក់កាលស្ថានី។ ការវិភាគធាតុត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីពិនិត្យមើលការផ្ទុកកាបូននៃដំណាក់កាលស្ថានីទាំងនេះ។ វាត្រូវបានគេសង្កេតឃើញថាការបង្កើនបរិមាណ styrene និងពេលវេលាប្រតិកម្មបានបង្កើនការផ្ទុកកាបូននៃដំណាក់កាលស្ថានី និងច្រាសមកវិញ។ SPs ដែលរៀបចំជាមួយនឹងកំហាប់ផ្សេងៗគ្នានៃ styrene មានបន្ទុកកាបូនខុសៗគ្នា។ ជាថ្មីម្តងទៀត ផ្ទុកដំណាក់កាលស្ថានីទាំងនេះទៅក្នុងជួរឈរដែកអ៊ីណុក ហើយពិនិត្យមើលដំណើរការក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរបស់វា។ (ការជ្រើសរើស កម្រិតភាពច្បាស់ តម្លៃ N ជាដើម)។ ដោយផ្អែកលើការពិសោធន៍ទាំងនេះ រូបមន្តដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងត្រូវបានជ្រើសរើសដើម្បីរៀបចំដំណាក់កាលស្ថានី PMP ដើម្បីធានាបាននូវប៉ូលារីតេដែលបានគ្រប់គ្រង និងការរក្សាសារធាតុវិភាគបានល្អ។
ល្បាយ peptide ចំនួនប្រាំ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) ក៏ត្រូវបានវាយតម្លៃដោយប្រើជួរឈរ PMP ដោយប្រើដំណាក់កាលចល័តផងដែរ។ 60/40 (v/v) អាសេតូនីទ្រីល/ទឹក (0.1% TFA) ក្នុងអត្រាលំហូរ 80 μL/នាទី។ ក្រោមលក្ខខណ្ឌនៃការរំលាយល្អបំផុត លេខបន្ទះទ្រឹស្តី (N) ក្នុងមួយជួរឈរ (100 × 1.8 mm id) គឺ 20,000 ± 100 (200,000 បន្ទះ/ម៉ែត្រការ៉េ)។ តារាងទី 3 ផ្តល់តម្លៃ N សម្រាប់ជួរឈរ PMP ទាំងបី និងក្រូម៉ាតូក្រាមត្រូវបានបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 5A។ ការវិភាគរហ័សលើជួរឈរ PMP ក្នុងអត្រាលំហូរខ្ពស់ (700 μL/នាទី) ប៉ិបទីតចំនួនប្រាំត្រូវបានរំលាយក្នុងរយៈពេលមួយនាទី តម្លៃ N គឺល្អណាស់ 13,500 ± 330 ក្នុងមួយជួរឈរ (100 × 1.8 mm id) ត្រូវគ្នាទៅនឹង 135,000 បន្ទះ/ម៉ែត្រការ៉េ (រូបភាពទី 5B)។ ជួរឈរដែលមានទំហំដូចគ្នាបី (100 × 1.8 mm id) ត្រូវបានខ្ចប់ជាមួយនឹងឡូត៍បីផ្សេងគ្នានៃដំណាក់កាលស្ថានី PMP ដើម្បីពិនិត្យមើលភាពអាចផលិតឡើងវិញ។ ឧបករណ៍វិភាគ កំហាប់សម្រាប់ជួរឈរនីមួយៗត្រូវបានកត់ត្រាដោយប្រើលក្ខខណ្ឌ elution ល្អបំផុត និងចំនួនបន្ទះទ្រឹស្តី N និងពេលវេលារក្សាទុកដើម្បីបំបែកល្បាយសាកល្បងដូចគ្នានៅលើជួរឈរនីមួយៗ។ ទិន្នន័យអំពីសមត្ថភាពផលិតឡើងវិញសម្រាប់ជួរឈរ PMP ត្រូវបានបង្ហាញក្នុងតារាងទី 4។ សមត្ថភាពផលិតឡើងវិញនៃជួរឈរ PMP មានទំនាក់ទំនងល្អជាមួយតម្លៃ %RSD ទាបខ្លាំង ដូចបង្ហាញក្នុងតារាងទី 3។
ការបំបែកល្បាយ peptide នៅលើជួរឈរ PMP (B) និងជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide (A); ដំណាក់កាលចល័ត 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), វិមាត្រជួរឈរ PMP (100 × 1.8 mm id); លំដាប់វិភាគនៃសមាសធាតុ៖ 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) និង 5 (leucine) អាស៊ីត enkephalin))។
ជួរឈរ PMP (ទំហំ 100 × 1.8 ម.ម. id) ត្រូវបានវាយតម្លៃសម្រាប់ការបំបែកសារធាតុរំលាយ tryptic នៃអាល់ប៊ុយមីនសេរ៉ូមរបស់មនុស្សនៅក្នុងក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវដំណើរការខ្ពស់។ ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីក្នុងរូបភាពទី 6 បង្ហាញថាគំរូត្រូវបានបំបែកយ៉ាងល្អ ហើយគុណភាពបង្ហាញគឺល្អណាស់។ សារធាតុរំលាយ HSA ត្រូវបានវិភាគដោយប្រើអត្រាលំហូរ 100 µL/នាទី ដំណាក់កាលចល័ត 70/30 អាសេតូនីទ្រីល/ទឹក និង 0.1% TFA។ ដូចដែលបានបង្ហាញក្នុងក្រូម៉ាតូក្រាហ្វី (រូបភាពទី 6) ការរំលាយ HSA ត្រូវបានបំបែកទៅជាកំពូលចំនួន 17 ដែលត្រូវគ្នានឹង peptide ចំនួន 17។ ប្រសិទ្ធភាពបំបែកនៃកំពូលនីមួយៗនៅក្នុងការរំលាយ HSA ត្រូវបានគណនា ហើយតម្លៃត្រូវបានផ្តល់ឱ្យក្នុងតារាងទី 5។
ការរំលាយដោយ tryptic នៃ HSA (100 × 1.8 mm id) ត្រូវបានបំបែកនៅលើជួរឈរ PMP; អត្រាលំហូរ (100 µL/នាទី) ដំណាក់កាលចល័ត 60/40 acetonitrile/ទឹក ជាមួយ TFA 0.1%។
ដែល L ជាប្រវែងជួរឈរ η ជា viscosity នៃដំណាក់កាលចល័ត ΔP ជាសម្ពាធខាងក្រោយជួរឈរ និង u ជាល្បឿនលីនេអ៊ែរនៃដំណាក់កាលចល័ត។ ភាពជ្រាបចូលនៃជួរឈរ PMP គឺ 2.5 × 10-14 m2 អត្រាលំហូរគឺ 25 μL/នាទី ហើយ 60/40 v/v ACN/ទឹកត្រូវបានប្រើប្រាស់។ ភាពជ្រាបចូលនៃជួរឈរ PMP (100 × 1.8 mm id) គឺស្រដៀងគ្នាទៅនឹងការសិក្សាពីមុនរបស់យើង ឯកសារយោង 34។ ភាពជ្រាបចូលនៃជួរឈរដែលពោរពេញទៅដោយភាគល្អិត porous គឺ៖ 1.7 × 10-15 សម្រាប់ភាគល្អិត 1.3 μm, 3.1 × 10-15 សម្រាប់ភាគល្អិត 1.7 μm, 5.2 × 10-15 និង 2.5 × 10-14 m2 សម្រាប់ភាគល្អិត 2.6 μm សម្រាប់ភាគល្អិត 5 μm។ 43. ដូច្នេះ ភាពជ្រាបចូលនៃដំណាក់កាល PMP គឺស្រដៀងគ្នាទៅនឹងភាគល្អិត core-shell ទំហំ 5 μm។
ដែល Wx ជាទម្ងន់នៃជួរឈរដែលខ្ចប់ដោយក្លរ៉ូហ្វម Wy ជាទម្ងន់នៃជួរឈរដែលខ្ចប់ដោយមេតាណុល និង ρ ជាដង់ស៊ីតេនៃសារធាតុរំលាយ។ ដង់ស៊ីតេនៃមេតាណុល (ρ = 0.7866) និងក្លរ៉ូហ្វម (ρ = 1.484)។ ភាពរលុងសរុបនៃជួរឈរភាគល្អិតស៊ីលីកា-C18 (100 × 1.8 mm id) 34 និងជួរឈរ C18-Urea 31 ដែលយើងបានសិក្សាពីមុនគឺ 0.63 និង 0.55 រៀងគ្នា។ នេះមានន័យថាវត្តមាននៃសារធាតុភ្ជាប់អ៊ុយរ៉េកាត់បន្ថយភាពជ្រាបចូលនៃដំណាក់កាលស្ថានី។ ម្យ៉ាងវិញទៀត ភាពរលុងសរុបនៃជួរឈរ PMP (100 × 1.8 mm id) គឺ 0.60។ ភាពជ្រាបចូលនៃជួរឈរ PMP គឺទាបជាងជួរឈរដែលខ្ចប់ដោយភាគល្អិតស៊ីលីកាដែលភ្ជាប់ជាមួយ C18 ពីព្រោះនៅក្នុងដំណាក់កាលស្ថានីប្រភេទ C18 សារធាតុភ្ជាប់ C18 ត្រូវបានភ្ជាប់ទៅនឹងភាគល្អិតស៊ីលីកាជាខ្សែសង្វាក់លីនេអ៊ែរ ខណៈពេលដែលនៅក្នុងដំណាក់កាលស្ថានីប្រភេទប៉ូលីស្ទីរ៉ែន ស្រទាប់ប៉ូលីមែរ A ក្រាស់ជាង។ ត្រូវបានបង្កើតឡើងជុំវិញវា។ នៅក្នុងការពិសោធន៍ធម្មតាមួយ ភាពរលុងនៃជួរឈរត្រូវបានគណនាដូចខាងក្រោម៖
រូបភាពទី 7A,B បង្ហាញជួរឈរ PMP (100 × 1.8 mm id) និងជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 mm id) ដោយប្រើលក្ខខណ្ឌ elution ដូចគ្នា (ឧ. 60/40 ACN/H2O និង 0.1% TFA)។ ) នៃគ្រោង van Deemter។ ល្បាយប៉ិបទីតដែលបានជ្រើសរើស (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) ត្រូវបានរៀបចំក្នុងអត្រា 20 µL/នាទី។ អត្រាលំហូរអប្បបរមាសម្រាប់ជួរឈរទាំងពីរគឺ 800 µL/នាទី។ តម្លៃ HETP អប្បបរមានៅអត្រាលំហូរល្អបំផុត (80 µL/នាទី) សម្រាប់ជួរឈរ PMP និងជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide គឺ 2.6 µm និង 3.9 µm រៀងគ្នា។ តម្លៃ HETP បង្ហាញថាប្រសិទ្ធភាពបំបែកនៃជួរឈរ PMP (100 × 1.8 mm id) គឺល្អជាងជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 mm id) ដែលមានលក់នៅលើទីផ្សារ។ គ្រោង van Deemter ក្នុងរូបភាពទី 7(A) បង្ហាញថាការថយចុះនៃតម្លៃ N ជាមួយនឹងការកើនឡើងនៃលំហូរគឺមិនសំខាន់ទេបើប្រៀបធៀបទៅនឹងការសិក្សាពីមុនរបស់យើង។ ប្រសិទ្ធភាពបំបែកខ្ពស់នៃជួរឈរ PMP (100 × 1.8 mm id) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide គឺផ្អែកលើការកែលម្អរូបរាងភាគល្អិត ទំហំ និងនីតិវិធីវេចខ្ចប់ជួរឈរស្មុគស្មាញដែលប្រើក្នុងការងារបច្ចុប្បន្ន34។
(ក) គំនូសតាង van Deemter (HETP ទល់នឹងល្បឿនលីនេអ៊ែរដំណាក់កាលចល័ត) ដែលទទួលបានដោយប្រើជួរឈរ PMP (100 × 1.8 mm id) ក្នុង 60/40 ACN/H2O ជាមួយ 0.1% TFA។ (ខ) គំនូសតាង van Deemter (HETP ទល់នឹងល្បឿនលីនេអ៊ែរដំណាក់កាលចល័ត) ដែលទទួលបានដោយប្រើជួរឈរ Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 mm id) ក្នុង 60/40 ACN/H2O ជាមួយ 0.1% TFA។
ដំណាក់កាលស្ថានីប៉ូលីស្ទីរ៉ែនដែលបង្កប់ដោយប៉ូលត្រូវបានរៀបចំ និងវាយតម្លៃសម្រាប់ការបំបែកល្បាយប៉ិបទីតសំយោគ និងការរំលាយទ្រីបស៊ីននៃអាល់ប៊ុយមីនសេរ៉ូមរបស់មនុស្ស (HAS) នៅក្នុងក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវដែលមានដំណើរការខ្ពស់។ ដំណើរការក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីនៃជួរឈរ PMP សម្រាប់ល្បាយប៉ិបទីតគឺល្អឥតខ្ចោះក្នុងប្រសិទ្ធភាពបំបែក និងគុណភាពបង្ហាញ។ ដំណើរការបំបែកដែលប្រសើរឡើងនៃជួរឈរ PMP គឺដោយសារតែហេតុផលជាច្រើន ដូចជាទំហំភាគល្អិត និងទំហំរន្ធញើសនៃភាគល្អិតស៊ីលីកា ការសំយោគដែលគ្រប់គ្រងនៃដំណាក់កាលស្ថានី និងការវេចខ្ចប់ជួរឈរស្មុគស្មាញ។ បន្ថែមពីលើប្រសិទ្ធភាពបំបែកខ្ពស់ សម្ពាធខាងក្រោយជួរឈរទាបនៅអត្រាលំហូរខ្ពស់គឺជាគុណសម្បត្តិមួយទៀតនៃដំណាក់កាលស្ថានីនេះ។ ជួរឈរ PMP បង្ហាញពីភាពអាចបង្កើតឡើងវិញបានល្អ និងអាចត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការវិភាគល្បាយប៉ិបទីត និងការរំលាយទ្រីបស៊ីននៃប្រូតេអ៊ីនផ្សេងៗ។ យើងមានបំណងប្រើជួរឈរនេះសម្រាប់ការបំបែកផលិតផលធម្មជាតិ សមាសធាតុជីវសកម្មពីរុក្ខជាតិឱសថ និងសារធាតុចម្រាញ់ពីផ្សិតនៅក្នុងក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវ។ នៅពេលអនាគត ជួរឈរ PMP ក៏នឹងត្រូវបានវាយតម្លៃសម្រាប់ការបំបែកប្រូតេអ៊ីន និងអង្គបដិប្រាណម៉ូណូក្លូណាល់ផងដែរ។
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ការស្រាវជ្រាវលើប្រព័ន្ធបំបែកប៉ិបទីតដោយក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីដំណាក់កាលបញ្ច្រាស ផ្នែកទី I៖ ការអភិវឌ្ឍពិធីការកំណត់លក្ខណៈជួរឈរ។J. Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019)។
Gomez, B. et al. ប៉ិបទីតសកម្មដែលបានកែលម្អដែលត្រូវបានរចនាឡើងសម្រាប់ការព្យាបាលជំងឺឆ្លង។ Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018)។
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. និង Khrestchatisky, M. ប៉ិបទីតសំយោគសម្រាប់ព្យាបាល៖ វិទ្យាសាស្ត្រ និងទីផ្សារ។ ការរកឃើញថ្នាំ។ ១៥ (១-២) ថ្ងៃនេះ, ៤០-៥៦។ https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (២០១០)។
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវប្រូតេអូមិកកម្រិតខ្ពស់.J. ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វី.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. វិសាលគមមាត្រ​រាវ​កម្រិតខ្ពស់​អាច​ឱ្យ​មាន​ការ​ដាក់​បញ្ចូល​មេតាបូលីក​ និង​ប្រូតេអូមិក​ដែល​មាន​គោលដៅ​ទូលំទូលាយ។ anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019)។
Chesnut, SM & Salisbury, JJ តួនាទីរបស់ UHPLC ក្នុងការអភិវឌ្ឍឱសថ។ J. Sep. Sci.30(8), 1183-1190 (2007)។
Wu, N. & Clausen, AM ទិដ្ឋភាពជាមូលដ្ឋាន និងជាក់ស្តែងនៃក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវសម្ពាធខ្ពស់សម្រាប់ការបំបែករហ័ស។ J. Sep. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007)។
Wren, SA & Tchelitcheff, P. ការអនុវត្តក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវដំណើរការខ្ពស់ក្នុងការអភិវឌ្ឍឱសថ។J. Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006)។
Gu, H. et al. អ៊ីដ្រូជែល​ម៉ាក្រូផូរុស​ម៉ូណូលីទីក​ដែល​រៀបចំ​ពី​សារធាតុ emulsion ដំណាក់កាល​ខាងក្នុង​ខ្ពស់​ដែល​មាន​ប្រេង​ក្នុង​ទឹក​សម្រាប់​ការ​បន្សុទ្ធ​មេរោគ​អង់តេរ៉ូវីរុស​ប្រកប​ដោយ​ប្រសិទ្ធភាព។ Chemical.Britain.J. 401, 126051 (2020)។
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA តួនាទីរបស់ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរាវក្នុងប្រូតេអូមិក។ J. Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004)។
Fekete, S., Veuthey, J.-L. និង Guillarme, D. និន្នាការ​ថ្មីៗ​ក្នុង​ការ​បំបែក​ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វី​រាវ​ដំណាក់កាល​បញ្ច្រាស​នៃ​ប៉ិបទីត​ព្យាបាល និង​ប្រូតេអ៊ីន៖ ទ្រឹស្តី និង​ការ​អនុវត្ត។ J. Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012)។
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC ការបំបែក peptides ពីរវិមាត្រដោយប្រើប្រព័ន្ធ RP-RP-HPLC ដោយប្រើតម្លៃ pH ផ្សេងៗគ្នានៅក្នុងវិមាត្របំបែកទីមួយ និងទីពីរ។J. Sep. Sci.28(14), 1694-1703 (2005)។
Feletti, S. et al. លក្ខណៈនៃការផ្ទេរម៉ាស និងដំណើរការចលនវិទ្យានៃជួរឈរក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីដែលមានប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់ដែលពោរពេញទៅដោយភាគល្អិត C18 ក្រោម 2 μm ដែលមានរន្ធញើសពេញលេញ និងមានសភាពស្រពិចស្រពិលត្រូវបានស៊ើបអង្កេត។ J. Sep. Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020)។
Piovesana, S. et al. និន្នាការថ្មីៗ និងបញ្ហាប្រឈមផ្នែកវិភាគក្នុងការញែក ការកំណត់អត្តសញ្ញាណ និងការផ្ទៀងផ្ទាត់ប៉ិបទីតជីវសកម្មរុក្ខជាតិ។ anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018)។
Mueller, JB et al. ទេសភាពប្រូតេអូមិចនៃនគរជីវិត។ ធម្មជាតិ 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020)។
DeLuca, C. et al. ដំណើរការ​ខាងក្រោម​នៃ peptide ព្យាបាល​ដោយ​វិធីសាស្ត្រ​ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វី​រាវ​ត្រៀម​ខ្លួន។ ម៉ូលេគុល (បាសែល ស្វីស) 26(15), 4688(2021)។
យ៉ាង, យ. និង ហ្គេង, អ៊ិច. ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីរបៀបចម្រុះ និងការអនុវត្តរបស់វាទៅលើជីវប៉ូលីមែរ។ ជេ. ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វី. អេ 1218(49), 8813–8825 (2011)។
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. លីហ្គែនសម្រាប់ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វីប្រូតេអ៊ីនរបៀបចម្រុះ៖ គោលការណ៍ ការកំណត់លក្ខណៈ និងការរចនា។ J. Biotechnology.144(1), 3-11 (2009)។