Nature.com تي اچڻ لاءِ مهرباني. توهان جيڪو برائوزر ورجن استعمال ڪري رهيا آهيو ان ۾ CSS لاءِ محدود سپورٽ آهي. بهترين تجربي لاءِ، اسان سفارش ڪريون ٿا ته توهان هڪ اپڊيٽ ٿيل برائوزر استعمال ڪريو (يا انٽرنيٽ ايڪسپلورر ۾ مطابقت واري موڊ کي بند ڪريو). ساڳئي وقت، مسلسل سپورٽ کي يقيني بڻائڻ لاءِ، اسان سائيٽ کي اسٽائل ۽ جاوا اسڪرپٽ کان سواءِ ڏيکارينداسين.
پورس سليڪا ذرڙا سول-جيل طريقي سان تيار ڪيا ويا هئا جن ۾ ڪجهه ترميمن سان ميڪروپورس ذرڙا حاصل ڪيا ويا هئا. انهن ذرڙن کي اين-فينائل ميليمائيڊ-ميٿيل وينائليسوسائنيٽ (پي ايم آءِ) ۽ اسٽائرين سان ريورسيبل ايڊيشن فريگمينٽيشن چين ٽرانسفر (آر اي ايف ٽي) پوليمرائيزيشن ذريعي اخذ ڪيو ويو ته جيئن پولسٽريئر (پي ايم پي) اسٽيشنري مرحلي جي اين-فينائل ميليمائيڊ انٽرڪليشن تيار ڪري سگهجي. تنگ بور اسٽينلیس اسٽيل ڪالم (100 × 1.8 ملي ايم آئي ڊي) کي سلري پيڪنگ ذريعي پيڪ ڪيو ويو. پيپٽائيڊ مرکب جي پي ايم پي ڪالم جي علحدگي جو جائزو ورتو ويو جنهن ۾ پنج پيپٽائڊس (گلائي-ٽائر، گلائي-ليو-ٽائر، گلائي-گلائي-ٽائر-آرگ، ٽائر-آئل-گلائي-سر-آرگ، ليوسين اينڪيفالين) ڪروميٽوگرافڪ ڪارڪردگي) ۽ انساني سيرم البومين (HAS) جي ٽرپسن هضم شامل آهن. بهترين ايليوشن حالتن هيٺ، پيپٽائيڊ مرکب جي نظرياتي پليٽ ڳڻپ 280,000 پليٽون/m² جيتري آهي. ترقي يافته ڪالم جي علحدگي جي ڪارڪردگي جو تجارتي سان مقابلو ڪندي ايسينٽس ايڪسپريس آر پي-امائيڊ ڪالم ۾، اهو ڏٺو ويو ته پي ايم پي ڪالم جي علحدگي جي ڪارڪردگي علحدگي جي ڪارڪردگي ۽ ريزوليوشن جي لحاظ کان ڪمرشل ڪالم کان بهتر هئي.
تازن سالن ۾، بايو فارماسوٽيڪل انڊسٽري هڪ وڌندڙ عالمي مارڪيٽ بڻجي چڪي آهي جنهن ۾ مارڪيٽ شيئر ۾ ڪافي واڌ ٿي آهي. بايو فارماسوٽيڪل انڊسٽري 1,2,3 جي ڌماڪيدار واڌ سان، پيپٽائڊس ۽ پروٽين جو تجزيو انتهائي گهربل آهي. ٽارگيٽ پيپٽائڊ کان علاوه، پيپٽائڊس جي جوڙجڪ دوران ڪيتريون ئي نجاستون پيدا ٿين ٿيون، اهڙيءَ طرح گهربل پاڪائي جي پيپٽائڊس حاصل ڪرڻ لاءِ ڪروميٽوگرافڪ صفائي جي ضرورت آهي. جسم جي رطوبتن، ٽشوز ۽ سيلز ۾ پروٽين جو تجزيو ۽ خاصيت هڪ انتهائي چئلينجنگ ڪم آهي ڇاڪاڻ ته هڪ نموني ۾ امڪاني طور تي ڳولڻ لائق نسلن جي وڏي تعداد جي ڪري. جيتوڻيڪ ماس اسپيڪٽروميٽري پيپٽائڊس ۽ پروٽين جي ترتيب لاءِ هڪ مؤثر اوزار آهي، جيڪڏهن اهڙا نمونا هڪ ​​پاس ۾ ماس اسپيڪٽروميٽر ۾ داخل ڪيا وڃن، ته علحدگي مثالي نه هوندي. هن مسئلي کي ايم ايس تجزيي کان اڳ مائع ڪروميٽوگرافي (ايل سي) علحدگي کي لاڳو ڪندي گهٽائي سگهجي ٿو، جيڪو هڪ ڏنل وقت تي ماس اسپيڪٽروميٽر ۾ داخل ٿيندڙ تجزين جي تعداد کي گهٽائي ڇڏيندو 4,5,6. ان کان علاوه، مائع مرحلي جي علحدگي دوران، تجزين کي تنگ علائقن ۾ مرڪوز ڪري سگهجي ٿو، ان ڪري انهن تجزين کي مرڪوز ڪري سگهجي ٿو ۽ ايم ايس جي ڳولا جي حساسيت کي بهتر بڻائي سگهجي ٿو. مائع ڪروميٽوگرافي (LC) گذريل ڏهاڪي ۾ تمام گهڻي ترقي ڪئي آهي ۽ پروٽومڪ تجزيو ۾ هڪ مشهور ٽيڪنڪ بڻجي چڪي آهي 7،8،9،10.
ريورسڊ-فيز مائع ڪروميٽوگرافي (RP-LC) وڏي پيماني تي پيپٽائيڊ مرکبن جي صفائي ۽ الڳ ڪرڻ لاءِ استعمال ڪئي ويندي آهي جيئن آڪٽيڊيسيل-موڊفائيڊ سليڪا (ODS) کي اسٽيشنري مرحلي 11,12,13 طور استعمال ڪيو ويندو آهي. بهرحال، آر پي اسٽيشنري مرحلا پيپٽائڊس ۽ پروٽين جي اطمينان بخش علحدگي فراهم نٿا ڪن ڇاڪاڻ ته انهن جي پيچيده ساخت ۽ ايمفيفيلڪ فطرت 14,15 آهي. تنهن ڪري، خاص طور تي ٺهيل اسٽيشنري مرحلا پيپٽائڊس ۽ پروٽين جو تجزيو ڪرڻ لاءِ گهربل آهن جيڪي پولر ۽ غير پولر موئيٽيز سان انهن تجزين سان لهه وچڙ ۽ برقرار رکندا آهن 16. مخلوط موڊ ڪروميٽوگرافي، جيڪا ملٽي موڊل رابطي فراهم ڪري ٿي، پيپٽائڊس، پروٽين، ۽ ٻين پيچيده مرکبن جي الڳ ٿيڻ لاءِ RP-LC جو متبادل ٿي سگهي ٿي. ڪيترائي مخلوط موڊ اسٽيشنري مرحلا تيار ڪيا ويا آهن، ۽ انهن مرحلن سان ڀريل ڪالم پيپٽائڊس ۽ پروٽين جي الڳ ٿيڻ لاءِ استعمال ڪيا ويا آهن 17,18,19,20,21. مخلوط موڊ اسٽيشنري مرحلا (WAX/RPLC، HILIC/RPLC، پولر انٽرڪليشن/RPLC) پيپٽائڊس ۽ پروٽين لاءِ موزون آهن. قطبي ۽ غير قطبي ٻنهي گروپن جي موجودگي جي ڪري علحدگي 22,23,24,25,26,27,28 . ساڳئي طرح، قطبي انٽرڪليٽنگ اسٽيشنري فيزز ڪوويلنٽلي بانڊڊ پولر گروپن سان سٺي علحدگي جي طاقت ۽ پولر ۽ غير قطبي تجزياتي لاءِ منفرد چونڊ ڏيکارين ٿا، ڇاڪاڻ ته علحدگي تجزياتي ۽ اسٽيشنري فيز جي وچ ۾ رابطي تي منحصر آهي. ملٽي موڊل تعامل 29, 30, 31, 32. تازو، ژانگ ۽ ٻيا. 30 هڪ ڊوڊيسيل ختم ٿيل پوليامين اسٽيشنري مرحلو تيار ڪيو ۽ ڪاميابي سان هائيڊرو ڪاربن، اينٽي ڊيپريسنٽس، فليونوائيڊس، نيوڪليوسائيڊس، ايسٽروجن، ۽ ٻيا ڪيترائي تجزيا الڳ ڪيا. پولر انٽرڪليٽر ۾ پولر ۽ غير پولر ٻئي گروپ آهن، تنهن ڪري ان کي پيپٽائڊس ۽ پروٽين کي الڳ ڪرڻ لاءِ استعمال ڪري سگهجي ٿو جن ۾ هائيڊروفوبڪ ۽ هائيڊروفيلڪ ٻئي موئيٽيز آهن. پولر-ايمبيڊڊ ڪالم (مثال طور، ايمبيڊڊ-ايمبيڊڊ C18 ڪالم) تجارتي طور تي ايسنٽس ايڪسپريس آر پي-ايمائيڊ ڪالم جي نالي سان موجود آهن، پر اهي ڪالم صرف امائن 33 جي تجزيي لاءِ استعمال ڪيا ويندا آهن.
موجوده مطالعي ۾، هڪ پولر-ايمبيڊڊ اسٽيشنري مرحلو (اين-فينائل ميليمائيڊ-ايمبيڊڊ پولسٽريئر) تيار ڪيو ويو ۽ HSA جي پيپٽائڊس ۽ ٽرپسن ڊائجسٽ جي الڳ ڪرڻ لاءِ جائزو ورتو ويو. اسٽيشنري مرحلو هيٺ ڏنل حڪمت عملي استعمال ڪندي تيار ڪيو ويو. پورس سليڪا ذرات اسان جي پوئين اشاعت ۾ ڏنل طريقيڪار مطابق تيار ڪيا ويا تياري جي پروٽوڪول ۾ ڪجهه ترميمن سان. يوريا، پوليٿيلين گلائڪول (PEG)، TMOS، پاڻي ايسٽڪ ايسڊ جو تناسب وڏي سوراخ سائيز سان سليڪا ذرات تيار ڪرڻ لاءِ ترتيب ڏنو ويو. ٻيو، هڪ نئون ليگنڊ، فينائل ميليمائيڊ-ميٿائل وينائل آئوسوسينيٽ، کي سنٿيسائيز ڪيو ويو ۽ پولر ايمبيڊڊ اسٽيشنري مرحلو تيار ڪرڻ لاءِ سليڪا ذرڙن کي ڊيريويٽيز ڪرڻ لاءِ استعمال ڪيو ويو. نتيجي ۾ اسٽيشنري مرحلو هڪ اسٽينلیس اسٽيل ڪالم (100 × 1.8 ملي ايم آئي ڊي) ۾ آپٽمائزڊ پيڪنگ اسڪيم استعمال ڪندي پيڪ ڪيو ويو. ڪالم پيڪنگ کي ميڪيڪل وائبريشن سان مدد ڪئي وئي آهي ته جيئن ڪالم اندر هڪجهڙائي واري بستري کي يقيني بڻائي سگهجي. پنج پيپٽائڊس تي مشتمل پيپٽائڊ مرکب جي پيڪ ٿيل ڪالم جي الڳ ڪرڻ جو جائزو وٺو؛ (گلائي-ٽائر، گلائي-ليو-ٽائر، گلائي-گلائي-ٽائر-آرگ، ٽائر-آئل-گلائي-سر-آرگ، ليوسين اينڪيفالين) ۽ انساني سيرم البومين (HAS) جو ٽرپسن ڊائجسٽ. HSA جو پيپٽائيڊ مرکب ۽ ٽرپسن ڊائجسٽ سٺي ريزوليوشن ۽ ڪارڪردگي سان الڳ ٿيڻ جو مشاهدو ڪيو ويو. PMP ڪالمن جي الڳ ٿيڻ جي ڪارڪردگي جو مقابلو Ascentis Express RP-Amide ڪالمن سان ڪيو ويو. PMP ڪالمن تي پيپٽائڊس ۽ پروٽين ٻنهي کي چڱي طرح حل ٿيل ۽ ڪارآمد ڏٺو ويو، جيڪو Ascentis Express RP-Amide ڪالمن کان وڌيڪ ڪارآمد هو.
پي اي جي (پوليٿيلين گلائڪول)، يوريا، ايسٽڪ ايسڊ، ٽرائيميٿوڪسي آرٿوسيليڪيٽ (TMOS)، ٽرائيميٿائل ڪلوروسيلين (TMCS)، ٽرائيپسن، هيومن سيرم البومين (HSA)، امونيم ڪلورائڊ، يوريا، هيڪسين ميٿائلڊسيلازين (HMDS)، ميٿاڪريلوئل ڪلورائڊ (MC)، اسٽائرين، 4-هائيڊروڪسي-ٽيمپو، بينزوئل پيرو آڪسائيڊ (BPO)، HPLC گريڊ ايسٽونيٽرائل (ACN)، ميٿانول، 2-پروپينول، ۽ ايسٽون سگما-الڊرچ (سينٽ لوئس، MO، USA) کان خريد ڪيا ويا.
يوريا (8 گرام)، پوليٿيلين گلائڪول (8 گرام)، ۽ 0.01 اين ايسٽڪ ايسڊ جي 8 ايم ايل جو مرکب 10 منٽن لاءِ هلايو ويو، ۽ پوءِ برف جي ٿڌي حالتن ۾ ان ۾ 24 ايم ايل ٽي ايم او ايس شامل ڪيو ويو. رد عمل واري مرکب کي 40 ڊگري سينٽي گريڊ تي 6 ڪلاڪن لاءِ ۽ پوءِ 120 ڊگري سينٽي گريڊ تي 8 ڪلاڪن لاءِ اسٽينلیس اسٽيل آٽو ڪليو ۾ گرم ڪيو ويو. پاڻي ڀريو ويو ۽ باقي مواد کي 12 ڪلاڪن لاءِ 70 ڊگري سينٽي گريڊ تي سڪيو ويو. خشڪ نرم ماس کي تندور ۾ هموار ڪيو ويو ۽ 12 ڪلاڪن لاءِ 550 ڊگري سينٽي گريڊ تي ڪيلسائن ڪيو ويو. ذرات جي سائيز، سوراخ جي سائيز ۽ مٿاڇري واري علائقي ۾ پيداوار جي صلاحيت کي جانچڻ لاءِ ٽي بيچ تيار ڪيا ويا ۽ خاصيت ڪئي وئي.
سليڪا ذرڙن جي مٿاڇري ۾ اڳ-سنٿيسائزڊ ليگينڊ فينائل ميليمائيڊ-ميٿيل ونائليسوسائنيٽ (PCMP) سان مٿاڇري ۾ تبديلي ڪرڻ کان پوءِ اسٽائرين سان ريڊيل پوليمرائيزيشن ذريعي، هڪ پولر گروپ تي مشتمل مرڪب تيار ڪيو ويو. مجموعي ۽ پولسٽريئر زنجيرن لاءِ اسٽيشنري مرحلو. تياري جو عمل هيٺ بيان ڪيو ويو آهي.
اين-فينائل ميليمائيڊ (200 ملي گرام) ۽ ميٿائل وينائل آئوسوسائينٽ (100 ملي گرام) کي خشڪ ٽوليوين ۾ حل ڪيو ويو، ۽ فينائل ميليمائيڊ-ميٿائل وينائل آئوسوسائينٽ ڪوپوليمر (PMPC) تيار ڪرڻ لاءِ رد عمل واري فلاسڪ ۾ 0.1 ايم ايل 2,2′-ازوئيسوبوٽيرونائٽريل (AIBN) شامل ڪيو ويو. مرکب کي 60 ° C تي 3 ڪلاڪن لاءِ گرم ڪيو ويو، فلٽر ڪيو ويو ۽ 40 ° C تي 3 ڪلاڪن لاءِ تندور ۾ خشڪ ڪيو ويو.
خشڪ سليڪا ذرڙا (2 گرام) خشڪ ٽوليوين (100 ملي ليٽر) ۾ ورهايا ويا، 500 ملي ليٽر گول هيٺان فلاسڪ ۾ 10 منٽن لاءِ هلايا ۽ سونيڪٽ ڪيا ويا. پي ايم سي پي (10 ملي ليٽر) ٽوليوين ۾ حل ڪيو ويو ۽ ڊراپنگ فنل ذريعي رد عمل فلاسڪ ۾ ڊراپ وائيز شامل ڪيو ويو. مرکب کي 8 ڪلاڪن لاءِ 100 ° C تي ريفلڪس ڪيو ويو، ايسٽون سان فلٽر ڪيو ويو ۽ ڌويو ويو ۽ 60 ° C تي 3 ڪلاڪن لاءِ خشڪ ڪيو ويو. پوءِ، پي ايم سي پي سان ڳنڍيل سليڪا ذرڙا (100 گرام) ٽوليوين (200 ملي ليٽر) ۾ حل ڪيا ويا ۽ 100 µL ڊبيوٽيليٽن ڊيلوريٽ جي موجودگي ۾ ڪيٽالسٽ جي طور تي 4-هائيڊروڪسي-ٽيمپو (2 ملي ليٽر) شامل ڪيو ويو. مرکب کي 8 ڪلاڪن لاءِ 50 ° C تي هلايو ويو، 3 ڪلاڪن لاءِ 50 ° C تي فلٽر ڪيو ويو ۽ خشڪ ڪيو ويو.
اسٽائرين (1 ايم ايل)، بينزول پيرو آڪسائيڊ بي پي او (0.5 ايم ايل)، ۽ ٽيمپو-پي ايم سي پي سان ڳنڍيل سليڪا ذرات (1.5 گرام) ٽوليون ۾ ورهايا ويا ۽ نائٽروجن سان صاف ڪيا ويا. اسٽائرين جي پوليمرائيزيشن 100 ° C تي 12 ڪلاڪن لاءِ ڪئي وئي. نتيجي ۾ پيدا ٿيندڙ پراڊڪٽ کي ميٿانول سان ڌوئي ويو ۽ رات جو 60 ° C تي خشڪ ڪيو ويو. مجموعي رد عمل جو منصوبو شڪل 1 ۾ ڏيکاريو ويو آهي.
نمونن کي 10-3 Torr کان گهٽ جي باقي دٻاءُ حاصل ڪرڻ لاءِ 1 ڪلاڪ لاءِ 393 K تي ڊيگيس ڪيو ويو. P/P0 = 0.99 جي نسبتي دٻاءُ تي جذب ٿيل N2 جي مقدار کي ڪل سوراخ جي مقدار کي طئي ڪرڻ لاءِ استعمال ڪيو ويو. ننگي ۽ ليگنڊ-بانڊڊ سليڪا ذرڙن جي مورفولوجي کي اسڪيننگ اليڪٽران مائڪروسڪوپي سان جانچيو ويو (هٽاچي هاءِ ٽيڪنالاجيز، ٽوڪيو، جاپان). خشڪ نمونا (ننگي سليڪا ۽ ليگنڊ-بانڊڊ سليڪا ذرڙا) چپڪندڙ ڪاربن ٽيپ استعمال ڪندي ايلومينيم ڪالم تي رکيا ويا. Q150T اسپٽر ڪوٽر استعمال ڪندي نمونن تي سون جي پليٽ ڪئي وئي، ۽ نمونن تي 5 nm Au پرت جمع ڪئي وئي. اهو گهٽ وولٽيج استعمال ڪندي عمل جي ڪارڪردگي کي بهتر بڻائي ٿو ۽ باریک اناج، ٿڌو اسپٽرنگ فراهم ڪري ٿو. عنصري تجزيي لاءِ هڪ ٿرمو اليڪٽران (والٿم، ايم اي، آمريڪا) فليش EA1112 عنصري تجزيي استعمال ڪئي وئي. ذري جي سائيز جي ورڇ حاصل ڪرڻ لاءِ هڪ مالورن (ورسٽرشائر، برطانيه) ماسٽرائزر 2000 ذري جي سائيز تجزيي استعمال ڪيو ويو. ننگي سليڪا ذرات ۽ ليگنڊ-بانڊڊ سليڪا ذرات (هر هڪ 5 ملي گرام) 5 ايم ايل آئسوپروپنول ۾ منتشر ڪيا ويا، 10 منٽن لاءِ سونيڪٽ ڪيو ويو، 5 منٽن لاءِ وورٽيڪس ڪيو ويو، ۽ ماسٽرائزر جي آپٽيڪل بينچ تي رکيو ويو. ٿرموگراويميٽرڪ تجزيو 30 کان 800 °C جي درجه حرارت جي حد تي 5 °C في منٽ جي شرح سان ڪيو ويو.
شيشي جي قطار واري اسٽينلیس سٹیل جي تنگ بور ڪالمن جي طول و عرض (100 × 1.8 ملي ميٽر آئي ڊي) کي سلري پيڪنگ جي طريقي سان پيڪ ڪيو ويو، ساڳئي طريقي کي لاڳو ڪندي جيڪو ريفرنس ۾ استعمال ڪيو ويو آهي. 31. هڪ اسٽينلیس اسٽيل ڪالم (شيشي جي قطار وارو، 100 × 1.8 ملي ميٽر آئي ڊي) هڪ آئوٽ ليٽ فٽنگ سان جنهن ۾ 1 µm فريٽ شامل هو، هڪ سلري پيڪر (آل ٽيڪ ڊيئر فيلڊ، آئي ايل، آمريڪا) سان ڳنڍيل هو. 1.2 ايم ايل ميٿانول ۾ 150 ملي گرام اسٽيشنري فيز کي معطل ڪندي هڪ اسٽيشنري فيز سلري تيار ڪريو ۽ ان کي اسٽوريج ڪالم ڏانهن موڪليو. ميٿانول کي سلري سالوينٽ ۽ پروپيلنگ سالوينٽ طور استعمال ڪيو ويو. 10 منٽن لاءِ 100 ايم پي، 15 منٽن لاءِ 80 ايم پي، ۽ 30 منٽن لاءِ 60 ايم پي جو دٻاءُ لاڳو ڪندي ڪالم کي ترتيب وار ڀريو. پيڪنگ دوران، ڪالم جي هڪجهڙائي پيڪنگ کي يقيني بڻائڻ لاءِ ٻن جي سي ڪالم شيڪرز (آل ٽيڪ، ڊيئر فيلڊ، آئي ايل، آمريڪا) سان ميڪيڪل وائبريشن لاڳو ڪئي وئي. سلري پيڪر کي بند ڪريو ۽ ڪالم اندر ڪنهن به نقصان کي روڪڻ لاءِ دٻاءُ کي آهستي آهستي ڇڏي ڏيو. ڪالم کي سلري پيڪنگ يونٽ کان ڌار ڪريو ۽ ان جي ڪارڪردگي کي جانچڻ لاءِ ٻي فٽنگ کي انليٽ ۽ ايل سي سسٽم سان ڳنڍيو.
هڪ LC پمپ (10AD Shimadzu، جاپان)، انجيڪٽر (Valco (USA) C14 W.05) 50nL انجيڪشن لوپ سان، ميمبرين ڊيگاسر (Shimadzu DGU-14A)، UV-VIS ڪيپيلري ونڊو ٺاهي وئي خاص µLC ڊيوائس ڊيڪٽر (UV-2075) ۽ شيشي جي قطار وارا مائڪرو ڪالمن. اضافي ڪالمن بينڊ وسيع ڪرڻ جي اثر کي گھٽائڻ لاءِ تمام تنگ ۽ مختصر ڪنيڪٽنگ ٽيوبنگ استعمال ڪريو. پيڪنگنگ کان پوءِ، ڪيپيلري (50 μm id 365 ۽ ريڊيوسنگ يونين ڪيپيلري (50 μm) ريڊيوسنگ يونين جي 1/16″ آئوٽ ليٽ تي نصب ڪيا ويا. ڊيٽا گڏ ڪرڻ ۽ ڪروميٽوگرافڪ پروسيسنگ ملٽي ڪرو 2000 سافٽ ويئر استعمال ڪندي ڪئي وئي. 254 nm تي نگراني تجزياتي UV جذب لاءِ جانچ ڪئي وئي. ڪروميٽوگرافڪ ڊيٽا جو تجزيو OriginPro8 (Northampton, MA) پاران ڪيو ويو.
انساني سيرم مان البومين، لائوفيلائيزڊ پائوڊر، ≥ 96٪ (اگروز جيل اليڪٽرروفورسس) 3 ملي گرام ٽرپسن (1.5 ملي گرام)، 4.0 ملي گرام يوريا (1 ملي گرام)، ۽ 0.2 ملي گرام امونيم بائي ڪاربونيٽ (1 ملي گرام) سان ملايو ويو. محلول کي 10 منٽن لاءِ هلايو ويو ۽ 37 ڊگري سينٽي گريڊ تي 6 ڪلاڪن لاءِ پاڻي جي غسل ۾ رکيو ويو، پوءِ 0.1٪ TFA جي 1 ملي گرام سان بجھايو ويو. محلول کي فلٽر ڪريو ۽ 4 ڊگري سينٽي گريڊ کان هيٺ ذخيرو ڪريو.
پيپٽائيڊ مرکب ۽ ايڇ ايس اي ٽرپسن ڊائجسٽ جي الڳ ٿيڻ جو جائزو پي ايم پي ڪالمن تي الڳ الڳ ڪيو ويو. پي ايم پي ڪالمن ذريعي پيپٽائيڊ مرکب ۽ ايڇ ايس اي جي ٽرپسن ڊائجسٽ جي الڳ ٿيڻ جي جانچ ڪريو ۽ نتيجن جو مقابلو ايسينٽس ايڪسپريس آر پي-امائيڊ ڪالمن سان ڪريو. نظرياتي پليٽ نمبر هن ريت ڳڻيو ويو آهي:
ننگي سليڪا ذرڙن ۽ ليگنڊ-بانڊڊ سليڪا ذرڙن جون SEM تصويرون شڪل 2 ۾ ڏيکاريل آهن. ننگي سليڪا ذرڙن (A، B) جون SEM تصويرون ڏيکارين ٿيون ته، اسان جي پوئين مطالعي جي برعڪس، اهي ذرڙا گول آهن جن ۾ ذرات ڊگھا آهن يا غير منظم هم آهنگي آهن. ليگنڊ-بانڊڊ سليڪا ذرڙن (C، D) جي مٿاڇري ننگي سليڪا ذرڙن جي ڀيٽ ۾ هموار آهي، جيڪا شايد سليڪا ذرڙن جي مٿاڇري تي پولسٽريئر زنجيرن جي ڪوٽنگ جي ڪري هجي.
ننگي سليڪا ذرڙن (A، B) ۽ ليگنڊ-بانڊڊ سليڪا ذرڙن (C، D) جي اليڪٽران خوردبيني تصويرن کي اسڪين ڪندي.
ننگي سليڪا ذرڙن ۽ ليگينڊ-بانڊڊ سليڪا ذرڙن جي پارٽيڪل سائيز ورڇ شڪل 3(A) ۾ ڏيکاريل آهن. حجم تي ٻڌل پارٽيڪل سائيز ورڇ وکر ڏيکاريا ته سليڪا ذرڙن جي سائيز ڪيميائي ترميم کان پوءِ وڌي وئي (شڪل 3A). موجوده مطالعي ۽ پوئين مطالعي مان سليڪا ذرڙن جي پارٽيڪل سائيز ورڇ ڊيٽا جو مقابلو جدول 1(A) ۾ ڪيو ويو آهي. حجم تي ٻڌل پارٽيڪل سائيز، d(0.5)، PMP جو 3.36 μm آهي، اسان جي پوئين مطالعي جي مقابلي ۾ ad(0.5) قدر 3.05 μm (پولي اسٽائرين-بانڊ سليڪا ذرات) سان 34. رد عمل جي مرکب ۾ PEG، يوريا، TMOS، ۽ ايسٽڪ ايسڊ جي مختلف تناسب جي ڪري هن بيچ ۾ اسان جي پوئين مطالعي جي مقابلي ۾ هڪ تنگ پارٽيڪل سائيز ورڇ هئي. PMP مرحلي جو پارٽيڪل سائيز پولسٽريئر-بانڊ سليڪا ذرڙن جي مرحلي کان ٿورو وڏو آهي جيڪو اسان اڳ ۾ مطالعو ڪيو هو. ان جو مطلب آهي ته اسٽائرين سان سليڪا ذرڙن جي مٿاڇري جي فنڪشنلائيزيشن صرف سليڪا جي مٿاڇري تي پولسٽريئر پرت (0.97 μm) جمع ڪئي، جڏهن ته PMP ۾ مرحلي ۾ پرت جي ٿولهه 1.38 µm هئي.
ننگي سليڪا ذرڙن ۽ ليگنڊ سان ڳنڍيل سليڪا ذرڙن جي پارٽيڪل سائيز ورڇ (A) ۽ پوئر سائيز ورڇ (B).
موجوده مطالعي جي سليڪا ذرڙن جي سوراخ جي سائيز، سوراخ جي مقدار ۽ مٿاڇري واري ايراضي جدول 1(B) ۾ ڏنل آهي. ننگي سليڪا ذرڙن ۽ ليگينڊ-بانڊڊ سليڪا ذرڙن جا PSD پروفائل شڪل 3(B) ۾ ڏيکاريا ويا آهن. نتيجا اسان جي پوئين مطالعي جي مقابلي ۾ آهن. ننگي ۽ ليگينڊ-بانڊڊ سليڪا ذرڙن جي سوراخ جي سائيز ترتيب وار 310 ۽ 241 آهن، جيڪو ظاهر ڪري ٿو ته ڪيميائي ترميم کان پوءِ سوراخ جي سائيز 69 گهٽجي ويندي آهي، جيئن جدول 1(B) ۾ ڏيکاريل آهي، ۽ وکر جي تبديلي شڪل 3(B) ۾ ڏيکاريل آهي. ساڳئي طرح، ڪيميائي ترميم کان پوءِ سليڪا ذرڙن جي سوراخ جي مقدار 0.67 کان 0.58 cm3/g تائين گهٽجي وئي. هن وقت مطالعي ڪيل سليڪا ذرڙن جي مخصوص مٿاڇري واري ايراضي 116 m2/g آهي، جيڪا اسان جي پوئين مطالعي (124 m2/g) جي مقابلي ۾ آهي. جيئن جدول 1(B) ۾ ڏيکاريل آهي، سليڪا ذرڙن جي مٿاڇري واري ايراضي (m2/g) پڻ 116 m2/g کان گهٽجي وئي. ڪيميائي ترميم کان پوءِ 105 m2/g.
اسٽيشنري مرحلي جي عنصري تجزيي جا نتيجا جدول 2 ۾ ڏيکاريا ويا آهن. موجوده اسٽيشنري مرحلي جي ڪاربن لوڊنگ 6.35٪ آهي، جيڪا اسان جي پوئين مطالعي جي ڪاربن لوڊنگ کان گهٽ آهي (پولي اسٽائرين بانڊڊ سليڪا ذرات، ترتيب وار 7.93٪ 35 ۽ 10.21٪) 42. موجوده اسٽيشنري مرحلي جي ڪاربن لوڊنگ گهٽ آهي، ڇاڪاڻ ته موجوده ايس پي جي تياري ۾، اسٽائرين کان علاوه، ڪجهه پولر ليگنڊ جهڙوڪ فينائل ميليمائيڊ-ميٿيل وينائليسوسائنيٽ (PCMP) ۽ 4-هائيڊروڪسي-ٽيمپو استعمال ڪيا ويا هئا. موجوده اسٽيشنري مرحلي جو نائٽروجن وزن سيڪڙو 2.21٪ آهي، پوئين مطالعي ۾ نائٽروجن جي وزن جي لحاظ کان ترتيب وار 0.1735 ۽ 0.85٪ جي مقابلي ۾. ان جو مطلب آهي ته فينائل ميليمائيڊ جي ڪري موجوده اسٽيشنري مرحلي ۾ نائٽروجن جو wt٪ وڌيڪ آهي. ساڳئي طرح، شين جي ڪاربن لوڊنگ (4) ۽ (5) ترتيب وار 2.7٪ ۽ 2.9٪ هئي، جڏهن ته آخري پراڊڪٽ (6) جي ڪاربن لوڊنگ 6.35٪ هئي، جيئن جدول 2 ۾ ڏيکاريل آهي. وزن جي گھٽتائي کي PMP اسٽيشنري مرحلي سان جانچيو ويو، ۽ TGA وکر شڪل 4 ۾ ڏيکاريو ويو آهي. TGA وکر 8.6٪ وزن جي گھٽتائي ڏيکاري ٿو، جيڪو ڪاربن لوڊنگ (6.35٪) سان سٺي معاهدي ۾ آهي ڇاڪاڻ ته ليگنڊ ۾ نه رڳو C پر N، O، ۽ H پڻ شامل آهن.
فينائل ميليمائيڊ-ميٿيل ونائل آئسوسائينٽ ليگنڊ کي سليڪا ذرڙن جي مٿاڇري جي ترميم لاءِ چونڊيو ويو ڇاڪاڻ ته ان ۾ پولر فينائل ميليمائيڊ گروپ ۽ ونائل آئسوسائينٽ گروپ آهن. ونائل آئسوسائينٽ گروپ اسٽائرين سان وڌيڪ رد عمل ڪري سگهن ٿا زنده ريڊيڪل پوليمرائيزيشن ذريعي. ٻيو سبب اهو آهي ته هڪ گروپ داخل ڪيو وڃي جنهن جو تجزيه نگار سان هڪ معتدل تعامل هجي ۽ تجزيه نگار ۽ اسٽيشنري مرحلي جي وچ ۾ ڪو مضبوط اليڪٽرو اسٽيٽڪ تعامل نه هجي، ڇاڪاڻ ته فينائل ميليمائيڊ جي حصي ۾ عام پي ايڇ تي ڪو به ورچوئل چارج نه هوندو آهي. اسٽيشنري مرحلي جي قطبيت کي اسٽائرين جي بهترين مقدار ۽ فري ريڊيڪل پوليمرائيزيشن جي رد عمل جي وقت ذريعي ڪنٽرول ڪري سگهجي ٿو. رد عمل جو آخري مرحلو (فري ريڊيڪل پوليمرائيزيشن) نازڪ آهي ۽ اسٽيشنري مرحلي جي قطبيت کي تبديل ڪري سگهي ٿو. انهن اسٽيشنري مرحلن جي ڪاربن لوڊنگ کي جانچڻ لاءِ بنيادي تجزيو ڪيو ويو. اهو ڏٺو ويو ته اسٽائرين جي مقدار ۽ رد عمل جي وقت کي وڌائڻ سان اسٽيشنري مرحلي جي ڪاربن لوڊنگ ۾ اضافو ٿيو ۽ ان جي برعڪس. اسٽائرين جي مختلف ڪنسنٽريشن سان تيار ڪيل ايس پيز ۾ مختلف ڪاربن لوڊنگ آهن. ٻيهر، انهن اسٽيشنري مرحلن کي اسٽينلیس اسٽيل ڪالمن ۾ لوڊ ڪريو ۽ انهن جي چيڪ ڪريو ڪروميٽوگرافڪ ڪارڪردگي (چونڊڻ، ريزوليوشن، اين ويليو، وغيره). انهن تجربن جي بنياد تي، ڪنٽرول ٿيل پولارٽي ۽ سٺي تجزياتي برقرار رکڻ کي يقيني بڻائڻ لاءِ پي ايم پي اسٽيشنري مرحلي کي تيار ڪرڻ لاءِ هڪ بهتر فارموليشن چونڊيو ويو.
پنج پيپٽائيڊ مرکب (گلائي-ٽائر، گلائي-ليو-ٽائر، گلائي-گلائي-ٽائر-آرگ، ٽائر-آئل-گلائي-سر-آرگ، ليوسين اينڪيفالين) جو پڻ پي ايم پي ڪالم استعمال ڪندي موبائل فيز استعمال ڪندي جائزو ورتو ويو؛ 60/40 (v/v) ايسٽونائيٽريل/پاڻي (0.1% TFA) 80 μL/منٽ جي وهڪري جي شرح تي. بهترين ايليوشن حالتن ۾، نظرياتي پليٽ نمبر (N) في ڪالم (100 × 1.8 mm id) 20,000 ± 100 (200,000 پليٽون/m²) آهي. جدول 3 ٽن PMP ڪالمن لاءِ N قدر ڏئي ٿو ۽ ڪروميٽوگرام شڪل 5A ۾ ڏيکاريا ويا آهن. تيز وهڪري جي شرح (700 μL/منٽ) تي PMP ڪالمن تي تيز تجزيو، هڪ منٽ اندر پنج پيپٽائڊس ايليوٽ ڪيا ويا، N قدر تمام سٺا هئا، 13,500 ± 330 في ڪالم (100 × 1.8 mm id)، 135,000 پليٽون/m (شڪل 5B) سان مطابقت رکي ٿو. ٽي هڪجهڙا سائيز جا ڪالم (100 × 1.8 mm id) چيڪ ڪرڻ لاءِ PMP اسٽيشنري مرحلي جي ٽن مختلف لاٽن سان ڀريل هئا. هر ڪالم لاءِ تجزياتي ڪنسنٽريشن کي بهترين ايليوشن حالتن ۽ نظرياتي پليٽن جي تعداد N ۽ برقرار رکڻ جي وقت کي استعمال ڪندي رڪارڊ ڪيو ويو ته جيئن هر ڪالم تي ساڳئي ٽيسٽ مرکب کي الڳ ڪري سگهجي. PMP ڪالمن لاءِ ريپروڊيڪبلٽي ڊيٽا ٽيبل 4 ۾ ڏيکاريل آهي. PMP ڪالمن جي ريپروڊيڪبلٽي تمام گهٽ %RSD قدرن سان سٺي نموني سان لاڳاپيل آهي، جيئن ٽيبل 3 ۾ ڏيکاريل آهي.
پي ايم پي ڪالم (بي) ۽ ايسنٽس ايڪسپريس آر پي-امائيڊ ڪالم (اي) تي پيپٽائيڊ مرکب جي الڳ ٿيڻ؛ موبائل فيز 60/40 اي سي اين/ايڇ 2 او (ٽي ايف اي 0.1٪)، پي ايم پي ڪالم جي طول و عرض (100 × 1.8 ملي ميٽر آئي ڊي)؛ تجزياتي مرڪبن جي خارج ٿيڻ جو حڪم: 1 (گلائي-ٽائر)، 2 (گلائي-ليو-ٽائر)، 3 (گلائي-گلائي-ٽائر-آرگ)، 4 (ٽائر-آئل-گلائي-سر-آرگ) ۽ 5 (ليوسين) ايسڊ اينڪيفالين)).
اعليٰ ڪارڪردگي واري مائع ڪروميٽوگرافي ۾ انساني سيرم البومين جي ٽرپٽڪ ڊائجسٽ جي الڳ ٿيڻ لاءِ هڪ PMP ڪالم (100 × 1.8 ملي ميٽر آئي ڊي) جو جائزو ورتو ويو. شڪل 6 ۾ ڪروميٽوگرام ڏيکاري ٿو ته نمونو چڱي طرح الڳ ٿيل آهي ۽ ريزوليوشن تمام سٺو آهي. HSA ڊائجسٽ جو تجزيو 100 µL/منٽ جي وهڪري جي شرح، موبائل فيز 70/30 ايسٽونائيٽريل/پاڻي ۽ 0.1٪ TFA استعمال ڪندي ڪيو ويو. جيئن ڪروميٽوگرام (شڪل 6) ۾ ڏيکاريل آهي، HSA هضم کي 17 پيپٽائڊس سان ملندڙ 17 چوٽين ۾ ورهايو ويو آهي. HSA ڊائجسٽ ۾ هر چوٽي جي الڳ ٿيڻ جي ڪارڪردگي جو حساب ڪيو ويو ۽ قدر جدول 5 ۾ ڏنل آهن.
HSA (100 × 1.8 mm id) جو هڪ ٽرپٽڪ ڊائجسٽ هڪ PMP ڪالم تي الڳ ڪيو ويو؛ وهڪري جي شرح (100 µL/منٽ)، موبائل فيز 60/40 ايسٽونائيٽرائيل/پاڻي 0.1٪ TFA سان.
جتي L ڪالمن جي ڊيگهه آهي، η موبائل مرحلي جي ويسڪوسيٽي آهي، ΔP ڪالمن جي پوئتي دٻاءُ آهي، ۽ u موبائل مرحلي جي لڪير واري رفتار آهي. PMP ڪالمن جي پارگميتا 2.5 × 10-14 m2 هئي، وهڪري جي شرح 25 μL/منٽ هئي، ۽ 60/40 v/v ACN/پاڻي استعمال ڪيو ويو. PMP ڪالمن (100 × 1.8 mm id) جي پارگميتا اسان جي پوئين مطالعي جي Ref.34 جي برابر هئي. سطحي طور تي سوراخ ٿيل ذرڙن سان ڀريل ڪالمن جي پارگميتا آهي: 1.3 μm ذرڙن لاءِ 1.7 × 10-15، 1.7 μm ذرڙن لاءِ 3.1 × 10-15، 5.2 × 10-15 ۽ 2.6 μm ذرڙن لاءِ 2.5 × 10-14 m2 5 μm ذرڙن لاءِ 43. تنهن ڪري، PMP مرحلي جي پارگميتا 5 μm جي برابر آهي. ڪور-شيل ذرڙا.
جتي Wx ڪلوروفارم سان ڀريل ڪالم جو وزن آهي، Wy ميٿانول سان ڀريل ڪالم جو وزن آهي، ۽ ρ محلول جي کثافت آهي. ميٿانول جي کثافت (ρ = 0.7866) ۽ ڪلوروفارم (ρ = 1.484). SILICA PARTICLES-C18 ڪالمن (100 × 1.8 mm id) 34 ۽ C18-Urea ڪالمن 31 جي ڪل پورسيٽي، جنهن جو اسان اڳ ۾ مطالعو ڪيو هو، ترتيب وار 0.63 ۽ 0.55 هئي. ان جو مطلب آهي ته يوريا ليگنڊ جي موجودگي اسٽيشنري مرحلي جي پارگميتا کي گهٽائي ٿي. ٻئي طرف، PMP ڪالمن (100 × 1.8 mm id) جي ڪل پورسيٽي 0.60 آهي. PMP ڪالمن جي پارگميتا C18-بانڊڊ سليڪا ذرڙن سان ڀريل ڪالمن جي ڀيٽ ۾ گهٽ آهي ڇاڪاڻ ته C18-قسم جي اسٽيشنري مرحلن ۾ C18 ليگنڊ سليڪا ذرڙن سان لڪير واري زنجيرن جي طور تي ڳنڍيل آهن، جڏهن ته پولسٽريئر قسم جي اسٽيشنري مرحلن ۾، ان جي چوڌاري هڪ نسبتاً ٿلهو پوليمر پرت ٺهيل آهي. هڪ عام تجربي ۾، ڪالمن جي پورسيٽي جو حساب هن ريت ڪيو ويندو آهي:
شڪل 7A، B ۾ وين ڊيمٽر پلاٽ جي ساڳين ايليوشن حالتن (يعني، 60/40 ACN/H2O ۽ 0.1% TFA) کي استعمال ڪندي PMP ڪالم (100 × 1.8 mm id) ۽ ايسنٽس ايڪسپريس RP-امائيڊ ڪالم (100 × 1.8 mm id) ڏيکاريو ويو آهي. چونڊيل پيپٽائيڊ مرکب (Gly-Tyr، Gly-Leu-Tyr، Gly-Gly-Tyr-Arg، Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg، Leucine Enkephalin) 20 µL/ ۾ تيار ڪيا ويا. ٻنهي ڪالمن لاءِ گھٽ ۾ گھٽ وهڪري جي شرح 800 µL/منٽ آهي. PMP ڪالمن ۽ Ascentis Express RP-Amide ڪالمن لاءِ وڌ ۾ وڌ وهڪري جي شرح (80 µL/منٽ) تي گھٽ ۾ گھٽ HETP قدر ترتيب وار 2.6 µm ۽ 3.9 µm هئا. HETP قدر ظاهر ڪن ٿا ته PMP ڪالمن (100 × 1.8 mm id) جي علحدگي جي ڪارڪردگي تجارتي طور تي موجود Ascentis Express RP-Amide ڪالمن (100 × 1.8 mm id) کان تمام بهتر آهي. شڪل 7(A) ۾ وان ڊيمٽر پلاٽ ڏيکاري ٿو ته وڌندڙ وهڪري سان N قدر ۾ گهٽتائي اسان جي پوئين مطالعي جي مقابلي ۾ اهم نه آهي. PMP جي اعلي علحدگي جي ڪارڪردگي ايسنٽس ايڪسپريس آر پي-امائيڊ ڪالم جي مقابلي ۾ ڪالم (100 × 1.8 ملي ميٽر آئي ڊي) موجوده ڪم ۾ استعمال ٿيندڙ ذرڙن جي شڪل، سائيز، ۽ پيچيده ڪالم پيڪنگ جي طريقيڪار ۾ بهتري تي ٻڌل آهي34.
(الف) وين ڊيمٽر پلاٽ (HETP بمقابلہ موبائل فيز لائينئر ويلوسيٽي) 0.1٪ TFA سان 60/40 ACN/H2O ۾ PMP ڪالم (100 × 1.8 mm id) استعمال ڪندي حاصل ڪيو ويو. (ب) وين ڊيمٽر پلاٽ (HETP بمقابلہ موبائل فيز لائينئر ويلوسيٽي) 0.1٪ TFA سان 60/40 ACN/H2O ۾ Ascentis Express RP-Amide ڪالم (100 × 1.8 mm id) استعمال ڪندي حاصل ڪيو ويو.
اعليٰ ڪارڪردگي واري مائع ڪروميٽوگرافي ۾ مصنوعي پيپٽائيڊ مرکبن ۽ انساني سيرم البومين (HAS) جي ٽرپسن هضم کي الڳ ڪرڻ لاءِ هڪ پولر-ايمبيڊڊ پولسٽريئر اسٽيشنري مرحلو تيار ڪيو ويو ۽ جائزو ورتو ويو. پيپٽائيڊ مرکبن لاءِ پي ايم پي ڪالمن جي ڪروميٽوگرافڪ ڪارڪردگي الڳ ڪرڻ جي ڪارڪردگي ۽ ريزوليوشن ۾ بهترين آهي. پي ايم پي ڪالمن جي بهتر الڳ ڪرڻ جي ڪارڪردگي مختلف سببن جي ڪري آهي، جهڙوڪ سليڪا ذرڙن جي ذرڙي جي سائيز ۽ سوراخ جي سائيز، اسٽيشنري مرحلي جي ڪنٽرول ٿيل سنٿيسس، ۽ پيچيده ڪالمن پيڪنگ. اعليٰ علحدگي جي ڪارڪردگي کان علاوه، تيز وهڪري جي شرح تي گهٽ ڪالمن جي پوئتي دٻاءُ هن اسٽيشنري مرحلي جو هڪ ٻيو فائدو آهي. پي ايم پي ڪالمن سٺي پيداوار جي صلاحيت ڏيکاري ٿو ۽ مختلف پروٽين جي پيپٽائيڊ مرکبن جي تجزيي ۽ ٽرپسن هضم لاءِ استعمال ڪري سگهجي ٿو. اسان هن ڪالمن کي قدرتي شين جي الڳ ڪرڻ، دوائن جي ٻوٽن مان بايو ايڪٽو مرکبات ۽ مائع ڪروميٽوگرافي ۾ فنگل عرق لاءِ استعمال ڪرڻ جو ارادو رکون ٿا. مستقبل ۾، پي ايم پي ڪالمن جو پروٽين ۽ مونوڪلونل اينٽي باڊيز جي الڳ ڪرڻ لاءِ پڻ جائزو ورتو ويندو.
فيلڊ، جي ڪي، يوربي، ايم آر، لاؤ، جي.، ٿوگرسن، ايڇ. ۽ پيٽرسن، پي. ريورسڊ فيز ڪروميٽوگرافي ذريعي پيپٽائيڊ سيپريشن سسٽم تي ريسرچ حصو I: ڪالمن ڪيڪٽرائيزيشن پروٽوڪول جي ترقي. جي ڪروميٽوگرافي.1603، 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
گومز، بي. وغيره. متعدي بيمارين جي علاج لاءِ ٺهيل بهتر فعال پيپٽائڊس. بايو ٽيڪنالاجي. ايڊوانسڊ.36(2)، 415-429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
وِليگهي، پي.، ليسووسڪي، وي.، مارٽينز، جي. ۽ ڪرسٽچيٽسڪي، ايم. مصنوعي علاج وارا پيپٽائڊس: سائنس ۽ مارڪيٽ. دوا جي دريافت. 15 (1-2) اڄ، 40-56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
زئي، ايف.، سمٿ، آر ڊي ۽ شين، وائي. ايڊوانسڊ پروٽومڪ لڪوئيڊ ڪروميٽوگرافي. جي. ڪروميٽوگرافي. اي 1261، 78-90 (2012).
ليو، ڊبليو. وغيره. ايڊوانسڊ مائع ڪروميٽوگرافي-ماس اسپيڪٽروميٽري وسيع طور تي نشانو بڻايل ميٽابولومڪس ۽ پروٽومڪس کي شامل ڪرڻ جي قابل بڻائي ٿي. انوس. چيم. ايڪٽا 1069، 89-97 (2019).
چيسنوٽ، ايس ايم ۽ سالسبري، جي جي دوا جي ترقي ۾ يو ايڇ پي ايل سي جو ڪردار. جي. سيپٽمبر سائنس. 30(8)، 1183-1190 (2007).
وو، اين. ۽ ڪلوسن، اي ايم تيز علحدگي لاءِ الٽرا هاءِ پريشر مائع ڪروميٽوگرافي جا بنيادي ۽ عملي پهلو. جي. سيپٽمبر. سائنس. 30(8)، 1167-1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
رين، ايس اي ۽ ٽيچيلچيف، پي. دوا جي ترقي ۾ الٽرا هاءِ پرفارمنس مائع ڪروميٽوگرافي جو استعمال. جي. ڪروميٽوگرافي.1119(1-2)، 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
گو، ايڇ. وغيره. اينٽرو وائرس جي موثر صفائي لاءِ تيل-ان-پاڻيءَ جي اعليٰ اندروني مرحلي جي ايمولشن مان تيار ڪيل مونوليٿڪ ميڪروپورس هائيڊروجيل. ڪيميڪل. برطانيه. جي. 401، 126051 (2020).
شي، وائي، شيانگ، آر، هورواٿ، سي ۽ ولڪنز، جي اي پروٽومڪس ۾ مائع ڪروميٽوگرافي جو ڪردار. جي ڪروميٽوگرافي. اي 1053(1-2)، 27-36 (2004).
فيڪيٽ، ايس.، ويوٿي، جي.-ايل. ۽ گلارمي، ڊي. علاج واري پيپٽائڊس ۽ پروٽين جي ريورسڊ فيز مائع ڪروميٽوگرافي جي الڳ ٿيڻ ۾ اڀرندڙ رجحانات: نظريو ۽ ايپليڪيشنون. جي. فارميسي. بايو ميڊيڪل سائنس. anus.69، 9-27 (2012).
گيلر، ايم.، اوليووا، پي.، ڊيلي، اي اي ۽ گبلر، جي سي پهرين ۽ ٻئي علحدگي جي طول و عرض ۾ مختلف پي ايڇ قدرن کي استعمال ڪندي آر پي-آر پي-ايڇ پي ايل سي سسٽم استعمال ڪندي پيپٽائڊس جي ٻه طرفي علحدگي. جي. سيپٽمبر. سائنس.28(14)، 1694-1703 (2005).
فيليٽي، ايس. وغيره. C18 ذيلي-2 μm سان ڀريل اعليٰ ڪارڪردگي واري ڪروميٽوگرافڪ ڪالمن جي ماس ٽرانسفر خاصيتون ۽ حرڪي ڪارڪردگي جي جاچ ڪئي وئي. جي. سيپٽمبر. سائنس. 43 (9-10)، 1737-1745 (2020).
پيوويسانا، ايس. وغيره. ٻوٽن جي حياتياتي پيپٽائڊس جي اڪيلائي، سڃاڻپ ۽ تصديق ۾ تازيون رجحانات ۽ تجزياتي چئلينجز.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
مولر، جي بي وغيره. زندگي جي بادشاهي جو پروٽومڪ نظارو. فطرت 582(7813)، 592-596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
ڊيلوڪا، سي. وغيره. تياري واري مائع ڪروميٽوگرافي ذريعي علاج واري پيپٽائڊس جي ڊائون اسٽريم پروسيسنگ. ماليڪيول (بيسل، سوئٽزرلينڊ) 26(15)، 4688(2021).
يانگ، وائي ۽ گينگ، ايڪس. مخلوط موڊ ڪروميٽوگرافي ۽ بايوپوليمر تي ان جو اطلاق. جي. ڪروميٽوگرافي. اي 1218(49)، 8813–8825 (2011).
زاؤ، جي.، ڊونگ، ايڪس.-وائي. ۽ سن، وائي. مخلوط موڊ پروٽين ڪروميٽوگرافي لاءِ ليگينڊز: اصول، ڪردار نگاري، ۽ ڊيزائن. جي. بايو ٽيڪنالاجي.144(1)، 3-11 (2009).