Nature.com saytına daxil olduğunuz üçün təşəkkür edirik. İstifadə etdiyiniz brauzer versiyasında CSS üçün məhdud dəstək var. Ən yaxşı təcrübə üçün sizə yenilənmiş brauzerdən istifadə etməyi (və ya Internet Explorer-də uyğunluq rejimini söndürməyi) tövsiyə edirik. Bu arada, davamlı dəstəyi təmin etmək üçün saytı üslub və JavaScript olmadan göstərəcəyik.
Məsaməli silisium hissəcikləri makroməsaməli hissəcikləri əldə etmək üçün bəzi modifikasiyalarla sol-gel üsulu ilə hazırlanmışdır. Bu hissəciklər N-fenilmaleimid-metilvinilizosiyanat (PMI) və stirol ilə reversiv əlavə parçalanma zənciri transferi (RAFT) ilə polimerləşmə yolu ilə əldə edilmişdir. faza.Dar delikli paslanmayan polad sütunlar (100 × 1,8 mm id) məhlul qablaşdırma ilə qablaşdırıldı. Beş peptiddən ibarət peptid qarışığının qiymətləndirilmiş PMP sütunu ayrılması (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ileucle-Argly, Tyr-Sleucle-Argly-Arg) xromatoqrafik performans) və insan serum albuminin (HAS) tripsin həzm. Optimal elüsyon şəraitində peptid qarışığının nəzəri boşqab sayı 280.000 boşqab/m² qədər yüksəkdir. Hazırlanmış sütunun ayırma performansını kommersiya Ascentis Express RP-Amide sütunu ilə müqayisə etdikdə, PMP sütununun ayırma kolonunun kommersiya səmərəliliyi və ya super səmərəliliyi olduğu müşahidə edildi. qətnamə.
Son illərdə biofarmasevtika sənayesi bazar payının əhəmiyyətli dərəcədə artması ilə genişlənən qlobal bazara çevrilmişdir.Biofarmasevtika sənayesinin1,2,3 sürətlə böyüməsi ilə peptidlərin və zülalların təhlili çox arzu edilir. Hədəf peptidlə yanaşı, peptid sintezi zamanı bir sıra çirklər əmələ gəlir, beləliklə, peptidlərin xromatoqrafiyasının əldə edilməsi arzu edilir. təmizlik. Bədən mayelərində, toxumalarında və hüceyrələrində zülalların təhlili və xarakteristikası bir nümunədə çox sayda potensial aşkar edilə bilən növlərin olması səbəbindən son dərəcə çətin bir işdir. Kütləvi spektrometriya peptid və zülal ardıcıllığı üçün təsirli bir vasitə olsa da, belə nümunələr kütlə spektrometrinə bir keçiddə yeridilərsə, mayenin ayrılması ideal olmayacaqdır. MS analizindən əvvəl ayırmalar, bu da müəyyən vaxtda kütlə spektrometrinə daxil olan analitlərin sayını azaldacaq4,5,6. Bundan əlavə, maye fazanın ayrılması zamanı analitlər dar bölgələrə fokuslana bilər, bununla da bu analitlər cəmləşir və MS aşkarlama həssaslığı yaxşılaşır.Maye xromatoqrafiyası (LC) son on ildə əhəmiyyətli dərəcədə irəliləmişdir və son illərdə məşhur bir texnika olmuşdur. təhlil7,8,9,10.
Əks fazalı maye xromatoqrafiyası (RP-LC) stasionar faza kimi oktadesillə modifikasiya olunmuş silisium (ODS) istifadə edərək peptid qarışıqlarının təmizlənməsi və ayrılması üçün geniş istifadə olunur11,12,13. Bununla belə, RP stasionar fazaları mürəkkəb quruluşuna və amfilik quruluşuna görə peptidlərin və zülalların qənaətbəxş ayrılmasını təmin etmir14. Bu analitlərlə qarşılıqlı əlaqədə olmaq və onları saxlamaq üçün qütblü və qeyri-qütblü peptidləri və zülalları təhlil etmək üçün xüsusi hazırlanmış stasionar fazalar tələb olunur16. Multimodal qarşılıqlı əlaqəni təmin edən qarışıq rejimli xromatoqrafiya peptidlərin, zülalların və digər kompleks qarışıqların ayrılması üçün RP-LC-yə alternativ ola bilər. peptid və zülalların ayrılması üçün istifadə edilmişdir17,18,19,20,21. Qarışıq rejimli stasionar fazalar (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC) həm qütb, həm də qeyri-qütblü qrupların mövcudluğuna görə peptid və zülal ayrılması üçün uyğundur22,23,24,275,228, stansiyalararası, polar 28. kovalent bağlı qütb qrupları olan fazalar qütblü və qeyri-qütblü analitlər üçün yaxşı ayırma gücü və unikal seçicilik nümayiş etdirir, çünki ayrılma analit və stasionar faza arasındakı qarşılıqlı təsirdən asılıdır. Multimodal qarşılıqlı əlaqə 29, 30, 31, 32. Son zamanlarda Zhang et al. 30 dodesillə bitən poliamin stasionar fazasını hazırladı və karbohidrogenləri, antidepresanları, flavonoidləri, nukleozidləri, estrogenləri və bir sıra digər analitikləri uğurla ayırdı. Qütb interkalator həm qütb, həm də qeyri-polyar qruplara malikdir, ona görə də həm hidrofobik, həm də hidropofilik sütunlu peptidləri və zülalları ayırmaq üçün istifadə edilə bilər. amidlə daxil edilmiş C18 sütunları) ticarətdə Ascentis Express RP-Amide sütunları adı altında mövcuddur, lakin bu sütunlar yalnız amin 33-ün təhlili üçün istifadə olunur.
Hazırkı tədqiqatda HSA-nın peptidləri və tripsin həzmlərinin ayrılması üçün qütblə gömülü stasionar faza (N-fenilmaleimidlə gömülü polistirol) hazırlanmış və qiymətləndirilmişdir. Stasionar faza aşağıdakı strategiyadan istifadə etməklə hazırlanmışdır. Məsaməli silisium hissəcikləri əvvəlki nəşrimizdə verilmiş prosedura uyğun olaraq, bəzi modifikasiyalarla polietilenin hazırlanması nisbəti ilə hazırlanmışdır. qlikol (PEG), TMOS, su sirkə turşusu böyük məsamə ölçüsünə malik silisium hissəciklərini hazırlamaq üçün tənzimləndi. İkincisi, yeni bir liqand, fenilmaleimid-metil vinil izosiyanat sintez edildi və qütbdə yerləşdirilmiş stasionar faza hazırlamaq üçün silisium hissəciklərini əldə etmək üçün istifadə edildi. 1.8 mm id) optimallaşdırılmış qablaşdırma sxemindən istifadə etməklə. Sütun içərisində homojen yatağın əmələ gəlməsini təmin etmək üçün sütunun qablaşdırılması mexaniki vibrasiya ilə kömək edir. Beş peptiddən ibarət peptid qarışıqlarının qablaşdırılmış sütun ayrılmasını qiymətləndirin; (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) və tripsin həzm insan serum albumin (HAS). HSA-nın peptid qarışığı və tripsin həzminin yaxşı rezolyusiya və effektivliklə ayrılması müşahidə edildi. RP-Amid sütunu. Ascentis Express RP-Amide sütunundan daha səmərəli olan PMP sütununda həm peptidlərin, həm də zülalların yaxşı həll olunduğu və effektiv olduğu müşahidə edildi.
PEG (polietilen qlikol), karbamid, sirkə turşusu, trimetoksi ortosilikat (TMOS), trimetil xlorosilan (TMCS), tripsin, insan zərdabında albumin (HSA), ammonium xlorid, karbamid, heksan metildisilazan (HMDS), xlorid (metakrilo), 4-Hidroksi-TEMPO, Benzoil Peroksid (BPO), HPLC Dərəcəli Asetonitril (ACN), Metanol, 2-Propanol və Aseton Sigma-Aldrichdən (Sent-Luis, MO, ABŞ) alınıb.
Karbamid (8 q), polietilen qlikol (8 q) və 8 mL 0,01 N sirkə turşusu qarışığı 10 dəqiqə qarışdırıldı və sonra buz kimi soyuq şəraitdə 24 mL TMOS əlavə edildi. Reaksiya qarışığı 40 ° C-də 6 saat qızdırıldı və sonra 120 ° C suda 8 saat suda saxlanıldı. töküldü və qalıq material 12 saat ərzində 70°C-də quruduldu. Qurudulmuş yumşaq kütlə sobada hamar üyüdüldü və 12 saat ərzində 550°C-də kalsifikasiya edildi. Hissəcik ölçüsü, məsamə ölçüsü və səth sahəsində təkrarlanma qabiliyyətini yoxlamaq üçün üç partiya hazırlanmış və xarakterizə edilmişdir.
Əvvəlcədən sintez edilmiş fenilmaleimid-metilvinilizosiyanat (PCMP) ilə silisium hissəciklərinin səthi modifikasiyası və ardınca stirol ilə radial polimerləşmə yolu ilə qütblü qrup tərkibli birləşmə hazırlanmışdır. Aqreqatlar və polistirol zəncirləri üçün stasionar mərhələ. Hazırlıq prosesi aşağıda təsvir edilmişdir.
N-fenilmaleimid (200 mq) və metil vinil izosiyanat (100 mq) quru toluolda həll edildi və 0,1 mL 2,2′-azoizobutironitril (AIBN) fenilmaleimid-metil vinil CPPM qarışığı hazırlamaq üçün reaksiya kolbasına əlavə edildi. 60°C-də 3 saat, süzülür və sobada 40°C-də 3 saat qurudulur.
Qurudulmuş silisium hissəcikləri (2 q) quru toluolda (100 ml) səpildi, qarışdırıldı və 10 dəqiqə ərzində 500 ml-lik yuvarlaq dibli kolbada sonikləşdirildi. PMCP (10 mq) toluolda həll edildi və damcı huni vasitəsilə reaksiya qabına əlavə edildi. Qarışıq 1 saat ərzində süzüldü və süzüldü. aseton və 60°C-də 3 saat qurudulur. Sonra PMCP ilə bağlanmış silisium hissəcikləri (100 q) toluolda (200 ml) həll edildi və 4-hidroksi-TEMPO (2 ml) 100 µL dibutiltin dilaurat varlığında əlavə edildi, qarışıq 5°C-də katalizator kimi süzüldü. və 50°C-də 3 saat qurudulur.
Stirol (1 ml), benzoil peroksid BPO (0,5 mL) və TEMPO-PMCP ilə birləşdirilmiş silisium hissəcikləri (1,5 q) toluolda dispers edildi və azotla təmizləndi. Stirolun polimerləşməsi 100°C-də 12 saat ərzində aparıldı. Nəticədə məhsul metillə yuyuldu60. ümumi reaksiya sxemi Şəkil 1-də göstərilmişdir.
Nümunələr 10-3 Torr-dan az qalıq təzyiq əldə etmək üçün 1 saat ərzində 393 K temperaturda qazsızlaşdırıldı. P/P0 = 0,99 nisbi təzyiqdə adsorbsiya olunan N2 miqdarı ümumi məsamə həcmini müəyyən etmək üçün istifadə edildi. Çılpaq və liqandla birləşmiş silisium hissəciklərinin morfologiyası yüksək texnologiyalı skan edilmiş (elektrotexniki üsullarla) yoxlanılmışdır. Tokio, Yaponiya).Qurudulmuş nümunələr (çılpaq silisium və liqandla bağlanmış silisium hissəcikləri) yapışan karbon lentindən istifadə edərək alüminium sütuna yerləşdirildi. Q150T püskürtmə örtüyünün köməyi ilə nümunələrin üzərinə qızıl örtüldü və nümunələrin üzərinə 5 nm Au təbəqəsi çökdü. (Waltham, MA, ABŞ) Elementar analiz üçün Flash EA1112 element analizatorundan istifadə edilmişdir. Hissəcik ölçüsünün paylanmasını əldə etmək üçün Malvern (Worcestershire, Böyük Britaniya) Mastersizer 2000 hissəcik ölçüsü analizatorundan istifadə edilmişdir. Çılpaq silisium hissəcikləri və liqandla bağlanmış silisium hissəcikləri (hər biri 5 mq) 100 mq həcmində səpilmiş, kükürdlü 5 mq 5 dəqiqə ərzində vorteksləndi və Mastersizerin optik skamyasına yerləşdirildi. Termoqravimetrik analiz 30 ilə 800 °C temperatur diapazonunda dəqiqədə 5 °C sürətlə aparıldı.
Şüşə astarlı paslanmayan poladdan dar deşikli sütunlar (100 × 1,8 mm id) Ref. 31. Paslanmayan polad sütun (şüşə astarlı, 100 × 1,8 mm id) 1 µm fritdən ibarət çıxış fitinqi ilə məhlul qablaşdırıcıya (Alltech Deerfield, IL, ABŞ) qoşulmuşdur. kolon. Metanol məhlul həlledicisi, eləcə də hərəkətverici həlledici kimi istifadə edilmişdir. 10 dəqiqə ərzində 100 MP, 15 dəqiqə ərzində 80 MP və 30 dəqiqə ərzində 60 MP təzyiqlər tətbiq edərək sütunu ardıcıl olaraq doldurun. Qablaşdırma zamanı iki GC sütunu sarsıdıcısı ilə mexaniki vibrasiya tətbiq edildi, USA, Defield techformunun vahidliyini təmin edin. sütun. Sümük qablaşdırıcısını bağlayın və sütunda hər hansı zədələnmənin qarşısını almaq üçün təzyiqi yavaş-yavaş buraxın. Sütunu məhlulun qablaşdırma qurğusundan ayırın və onun işini yoxlamaq üçün girişə və LC sisteminə başqa fitinq qoşun.
LC nasosu (10AD Shimadzu, Yaponiya), 50 nL enjeksiyon döngəsi, membran deqazatoru (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS kapilyar pəncərəsi olan injektor (Valco (ABŞ) C14 W.05) Xüsusi µLC cihaz detektoru (UV-2075) və şüşəni çox qısaltmaq üçün mikroi birləşdirən və küvetləri qısaltmaq üçün hazırlanmışdır. əlavə sütun zolağının genişlənməsinin təsiri. Qablaşdırmadan sonra kapilyarlar (50 μm id 365 və azaldıcı birləşmə kapilyarları (50 μm) azaldıcı birləşmənin 1/16″ çıxışına quraşdırılmışdır. Məlumatların toplanması və xromatoqrafik emal Multichro 2000 proqram təminatından istifadə etməklə həyata keçirilmişdir. Xromatografik analiz U2000 üçün test edilmişdir. məlumatlar OriginPro8 (Northampton, MA) tərəfindən təhlil edilmişdir.
İnsan zərdabından albumin, liyofilləşdirilmiş toz, ≥ 96% (agaroz gel elektroforezi) 3 mq tripsin (1,5 mq), 4,0 M karbamid (1 mL) və 0,2 M ammonium bikarbonat (1 mL) ilə qarışdırılır. Məhlul 10 dəqiqə qarışdırılır və sonra 7 ° C temperaturda su banyosunda 7 saat saxlanılır. ml 0,1% TFA. Məhlulu süzün və 4 °C-dən aşağı temperaturda saxlayın.
Peptid qarışıqlarının və HSA tripsin həzmlərinin ayrılması PMP sütunlarında ayrıca qiymətləndirilir. HSA-nın peptid qarışığının və tripsin həzminin PMP sütunu ilə ayrılmasını yoxlayın və nəticələri Ascentis Express RP-Amide sütunu ilə müqayisə edin. Nəzəri boşqab nömrəsi aşağıdakı kimi hesablanır:
Çılpaq silisium hissəciklərinin və liqandla bağlanmış silisium hissəciklərinin SEM şəkilləri ŞEKİL-də göstərilmişdir. 2 .Çılpaq silisium hissəciklərinin (A, B) SEM təsvirləri göstərir ki, əvvəlki tədqiqatlarımızdan fərqli olaraq, bu hissəciklər sferikdir, burada hissəciklər uzanır və ya qeyri-müntəzəm simmetriyaya malikdir. silisium hissəciklərinin səthi.
Çılpaq silisium hissəciklərinin (A, B) və liqandla bağlanmış silisium hissəciklərinin (C, D) skan edilən elektron mikroskop şəkilləri.
Çılpaq silisium hissəciklərinin və liqandla bağlanmış silisium hissəciklərinin hissəcik ölçüsü paylamaları Şəkil 3(A)-da göstərilmişdir. Həcmə əsaslanan hissəcik ölçüsü paylanması əyriləri göstərdi ki, silisium hissəciklərinin ölçüsü kimyəvi modifikasiyadan sonra artıb (Şəkil 3A). Silisium hissəciklərinin hissəcik ölçüsü paylanması məlumatları cari tədqiqatdan və əvvəlki tədqiqdə T-əsaslı hissəciklərin ölçüsü ilə müqayisə edilir. d(0,5), PMP, ad(0,5) dəyəri 3,05 μm (polistirollə bağlı silisium hissəcikləri)34 olan əvvəlki tədqiqatımızla müqayisədə 3,36 μm-dir. əvvəllər tədqiq etdiyimiz polistirolla bağlı silisium hissəcik fazasından daha böyükdür. Bu o deməkdir ki, silisium hissəciklərinin stirol ilə səthi funksionallaşması yalnız silisium səthində polistirol təbəqəsini (0,97 µm) çökdürdü, PMP mərhələsində isə təbəqənin qalınlığı 1,38 µm idi.
Çılpaq silisium hissəciklərinin və liqandla bağlı silisium hissəciklərinin hissəcik ölçüsünün paylanması (A) və məsamə ölçüsünün paylanması (B).
Cari tədqiqatın məsamə ölçüsü, məsamə həcmi və silisium hissəciklərinin səth sahəsi Cədvəl 1(B)-də verilmişdir. Çılpaq silisium hissəciklərinin və liqandla bağlanmış silisium hissəciklərinin PSD profilləri Şəkil 3(B)-də göstərilmişdir. Nəticələr bizim əvvəlki tədqiqatımızla müqayisə edilə bilər. müvafiq olaraq, kimyəvi modifikasiyadan sonra məsamə ölçüsünün Cədvəl 1(B)-də göstərildiyi kimi 69 azaldığını və əyrinin dəyişməsi Şəkil 3(B)-də göstərildiyini göstərir. Eynilə, silisium hissəciklərinin məsamə həcmi kimyəvi modifikasiyadan sonra 0,67-dən 0,58 sm3/q-a qədər azalmışdır. Hal-hazırda silisium hissəciklərinin xüsusi səthi m2/q, bu bizim əvvəlki tədqiqatımızla müqayisə oluna bilər (124 m2/q).
Stasionar fazanın elementar analizinin nəticələri Cədvəl 2-də göstərilmişdir. Cari stasionar fazanın karbon yüklənməsi 6,35% təşkil edir ki, bu da bizim əvvəlki tədqiqatımızın karbon yükündən azdır (polistirollə birləşdirilmiş silisium hissəcikləri, müvafiq olaraq 7,93%35 və 10,21%) 42. Çünki stasionar fazanın cari yüklənməsi azdır. SP, stiroldan əlavə, fenilmaleimid-metilvinilizosiyanat (PCMP) və 4-hidroksi-TEMPO kimi bəzi qütb liqandlarından istifadə edilmişdir. Cari stasionar fazanın azot çəkisi faizi 2,21%, əvvəlki tədqiqatlar ilə müqayisədə 0,1735 və 0,85% idi. azot cari stasionar fazada fenilmaleimid hesabına daha yüksəkdir. Eynilə, (4) və (5) məhsulların karbon yüklənməsi müvafiq olaraq 2,7% və 2,9%, son məhsulun (6) karbon yüklənməsi isə Cədvəl 2-də göstərildiyi kimi 6,35% təşkil etmişdir. Çəki itkisi Şəkil 2-də göstərildiyi kimi, TGA ilə yoxlanılmış və TMP əyrisi ilə TGA əyrisi göstərilmişdir. əyri 8,6% çəki itkisini göstərir ki, bu da karbon yüklənməsi (6,35%) ilə yaxşı uyğunlaşır, çünki liqandlarda təkcə C deyil, həm də N, O və H var.
Fenilmaleimid-metilvinilizosiyanat liqandı silisium hissəciklərinin səthinin modifikasiyası üçün seçilmişdir, çünki o, qütb fenilmaleimid qruplarına və vinilizosiyanat qruplarına malikdir. analit və stasionar faza, çünki fenilmaleimid hissəsinin normal pH-də virtual yükü yoxdur. Stasionar fazanın polaritesi stirolun optimal miqdarı və sərbəst radikal polimerləşmənin reaksiya müddəti ilə idarə oluna bilər. Reaksiyanın son mərhələsi (sərbəst radikal polimerləşmə) kritikdir və stasionar fazanın polaritesini dəyişdirə bilər. stirolun miqdarının və reaksiya vaxtının artırılmasının stasionar fazanın karbon yüklənməsini artırdığını və əksinə. Müxtəlif konsentrasiyalarda stirol ilə hazırlanmış SP-lərin müxtəlif karbon yüklənmələri var. Yenə də bu stasionar fazaları paslanmayan polad sütunlara yükləyin və onların xromatoqrafik göstəricilərini yoxlayın (seçmə qabiliyyəti, ayırdetmə qabiliyyəti, N dəyəri və s.). idarə olunan polarite və yaxşı analitin saxlanması.
Beş peptid qarışığı (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) həmçinin mobil fazadan istifadə edərək PMP sütunundan istifadə etməklə qiymətləndirilmişdir; 60/40 (v/v) asetonitril/su (0,1% TFA) 80 μL/dəq axın sürətində. Optimal elüsyon şəraitində hər sütun üçün nəzəri boşqab nömrəsi (N) (100 × 1,8 mm id) 20,000 ± 100 (200,000 N/m²T plitə üçün üç N/m²T dəyər verir). sütunlar və xromatoqramlar Şəkil 5A-da göstərilmişdir. Yüksək axın sürətində (700 μL/dəq) bir PMP sütununda sürətli analiz, bir dəqiqə ərzində beş peptid çıxarıldı, N dəyərləri çox yaxşı idi, hər sütun üçün 13,500 ± 330 (100 × 1,8 mm id), 5-ə uyğundur, 0 0 mkL/dəq. 5B). Üç eyni ölçülü sütun (100 × 1.8 mm id) təkrar istehsal qabiliyyətini yoxlamaq üçün üç müxtəlif PMP stasionar faza ilə doludur. Hər sütun üçün analitin konsentrasiyası optimal elüsiya şərtlərindən və nəzəri boşqabların sayı N və hər bir sütunda eyni sınaq qarışığını ayırmaq üçün saxlama müddətindən istifadə etməklə qeydə alınmışdır. PMP sütununun təkrar istehsal qabiliyyəti Cədvəl 3-də göstərildiyi kimi çox aşağı %RSD dəyərləri ilə yaxşı əlaqələndirilir.
PMP sütununda (B) və Ascentis Express RP-Amid sütununda (A) peptid qarışığının ayrılması; mobil faza 60/40 ACN/H2O (TFA 0,1%), PMP sütun ölçüləri (100 × 1,8 mm id); Analitik birləşmələrin elüsyon sırası: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) və 5 (leucine) acid enkephalin)).
PMP sütunu (100 × 1.8 mm id) yüksək performanslı maye xromatoqrafiyada insan serum albumininin triptik həzmlərinin ayrılması üçün qiymətləndirilmişdir. Şəkil 6-dakı xromatoqram nümunənin yaxşı ayrıldığını və ayırdetmə qabiliyyətinin çox yaxşı olduğunu göstərir. HSA həzmləri 100 µL/su, mobil faza 300 l/dəq axın sürətindən istifadə etməklə təhlil edilmişdir. 0,1% TFA. Xromatoqramda göstərildiyi kimi (Şəkil 6), HSA həzmi 17 peptidə uyğun gələn 17 zirvəyə bölünmüşdür. HSA həzmində hər bir pikin ayrılma səmərəliliyi hesablanmış və dəyərlər Cədvəl 5-də verilmişdir.
HSA-nın triptik həzmi (100 × 1.8 mm id) PMP sütununda ayrıldı; axın sürəti (100 µL/dəq), mobil faza 60/40 asetonitril/0,1% TFA ilə su.
burada L sütunun uzunluğu, η mobil fazanın özlülüyü, ΔP sütunun arxa təzyiqi və u mobil fazanın xətti sürətidir. PMP sütununun keçiriciliyi 2,5 × 10-14 m2, axın sürəti 25 μL/dəq və 60/40 v/vAC0M sütunu istifadə edilmişdir. 1.8 mm id) əvvəlki tədqiqatımıza bənzəyirdi Ref.34. Səthi məsaməli hissəciklərlə dolu sütunun keçiriciliyi: 1.3 μm hissəciklər üçün 1.7 × 10-15, 1.7 μm hissəciklər üçün 3.1 × 10-15, 5.2 × 14 və 5.2 × 14 m2 üçün. 2.6 μm hissəciklər 5 μm hissəciklər üçün 43. Buna görə də, PMP fazasının keçiriciliyi 5 μm nüvə qabığı hissəciklərinin keçiriciliyinə bənzəyir.
burada Wx xloroformla dolu sütunun çəkisi, Wy metanolla dolu sütunun çəkisi, ρ isə həlledicinin sıxlığıdır. Metanol (ρ = 0,7866) və xloroformun (ρ = 1,484) sıxlığı. Ümumi məsaməlilik (SILICA-18101 mm CLESTICA-18) id) 34 və C18-karbamid sütunları 31 əvvəllər tədqiq etdiyimiz müvafiq olaraq 0,63 və 0,55 idi. Bu o deməkdir ki, karbamid liqandlarının olması stasionar fazanın keçiriciliyini azaldır. Digər tərəfdən, PMP sütununun ümumi məsaməliliyi (100 × 1,8) PMP sütununun id60-dan aşağı olmasıdır. C18 tipli stasionar fazalarda C18 liqandları silisium hissəciklərinə xətti zəncir kimi bağlandığından, polistirol tipli stasionar fazalarda onun ətrafında nisbətən qalın A polimer təbəqəsi əmələ gəldiyi üçün C18 ilə bağlanmış silisium hissəcikləri ilə dolu sütunların məsaməliliyi hesablanır.
Şəkil 7A, B eyni elüsiya şərtlərindən (yəni, 60/40 ACN/H2O və 0,1% TFA) istifadə edərək PMP sütununu (100 × 1,8 mm id) və Ascentis Express RP-Amide sütununu (100 × 1,8 mm id) göstərir. ) Van Deemter sahəsi. Seçilmiş peptid qarışıqları (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) 20 µL/Hər iki sütun üçün minimum axın sürəti 800 µL/dəqdir. sütunu və Ascentis Express RP-Amide sütunu müvafiq olaraq 2,6 µm və 3,9 µm idi. HETP dəyərləri PMP sütununun ayırma səmərəliliyinin (100 × 1,8 mm id) kommersiyada mövcud Ascentis Express RP-Amide sütunundan (100 × 1,8 mm-də) daha yaxşı olduğunu göstərir. artan axın ilə N dəyərinin azalması əvvəlki araşdırmamızla müqayisədə əhəmiyyətli deyil. Ascentis Express RP-Amide sütunu ilə müqayisədə PMP sütununun (100 × 1.8 mm id) daha yüksək ayırma səmərəliliyi cari işdə istifadə edilən hissəcik formasında, ölçüsündə və mürəkkəb sütun qablaşdırma prosedurlarında təkmilləşdirmələrə əsaslanır34.
(A) 0,1% TFA ilə 60/40 ACN/H2O-da PMP sütunundan (100 × 1,8 mm id) istifadə edilməklə əldə edilmiş van Deemter qrafiki (HTP-yə qarşı mobil faza xətti sürəti).(B) Van Deemter qrafiki (HTP-yə qarşı mobil faza xətti sürət) Ekspress RP-10mi sütunundan istifadə etməklə əldə edilmişdir. id) 0,1% TFA ilə 60/40 ACN/H2O-da.
Yüksək performanslı maye xromatoqrafiyada insan serum albumininin (HAS) sintetik peptid qarışıqlarının və tripsin həzmlərinin ayrılması üçün qütbdə yerləşdirilmiş polistirol stasionar faza hazırlanmış və qiymətləndirilmişdir. Peptid qarışıqları üçün PMP sütunlarının xromatoqrafik performansı ayırma səmərəliliyi və həlli baxımından əladır. Təkmilləşdirilmiş ayırma performansı PMP sütununun ölçüsü və poliklinq müxtəlifliyinə görədir. silisium hissəciklərinin ölçüsü, stasionar fazanın idarə olunan sintezi və kompleks sütun qablaşdırması. Yüksək ayırma səmərəliliyinə əlavə olaraq, yüksək axın sürətlərində aşağı sütun arxa təzyiqi bu stasionar fazanın digər üstünlüyüdür. PMP sütunları yaxşı təkrarlanma qabiliyyətinə malikdir və peptid qarışıqlarının təhlili və müxtəlif zülalların tripsinin həzm edilməsi üçün istifadə edilə bilər. maye xromatoqrafiyada dərman bitkiləri və göbələk ekstraktları. Gələcəkdə PMP sütunları zülalların və monoklonal antikorların ayrılması üçün də qiymətləndiriləcək.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Peptid Separation Systems on Reversed Phase Xromatography by Hisse I: A Column Characterization Protocol.J. Xromatoqrafiya.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.İnfeksion xəstəliklərin müalicəsi üçün nəzərdə tutulmuş təkmilləşdirilmiş aktiv peptidlər.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Sintetik terapevtik peptidlər: elm və bazar.dərman kəşfi.15 (1-2) bu gün, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.209 (1010).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J. Xromatoqrafiya.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Qabaqcıl maye xromatoqrafiya-kütləvi spektrometriya geniş hədəflənmiş metabolomikanın və proteomikanın birləşməsinə imkan verir.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Dərman inkişafında UHPLC-nin rolu.J. Sentyabr Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Sürətli ayrılmalar üçün ultra yüksək təzyiqli maye xromatoqrafiyasının əsas və praktiki aspektləri.J. Sentyabr Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelicheff, P. Dərman inkişafında ultra yüksək performanslı maye xromatoqrafiyasının tətbiqi.J. Xromatoqrafiya.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. və başqaları. Enterovirusların səmərəli təmizlənməsi üçün suda neft yüksək daxili fazalı emulsiyalardan hazırlanmış monolitik makroməsaməli hidrogellər.Chemical.Britain.J. 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Proteomikada maye xromatoqrafiyanın rolu.J. Xromatoqrafiya.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Terapevtik peptidlərin və zülalların tərs fazalı maye xromatoqrafiya ayırmalarında yaranan tendensiyalar: nəzəriyyə və tətbiqlər.J. Aptek.Biotibbi Elm.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Birinci və ikinci ayırma ölçülərində müxtəlif pH dəyərlərindən istifadə edərək RP-RP-HPLC sistemindən istifadə edərək peptidlərin iki ölçülü ayrılması.J. Sentyabr Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. və başqaları. C18 sub-2 μm tam və səthi məsaməli hissəciklərlə dolu yüksək effektiv xromatoqrafik sütunların kütlə ötürmə xüsusiyyətləri və kinetik performansı tədqiq edilmişdir.J. Sentyabr Elmi.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. və başqaları. Bitki bioaktiv peptidlərinin təcrid edilməsi, identifikasiyası və təsdiqində son tendensiyalar və analitik problemlər.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s002168-02 (s002168-0).
Mueller, JB et al.The proteomik landşaft of the life of the Kingdom.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al. Preparativ maye xromatoqrafiyası ilə terapevtik peptidlərin aşağı emalı. Molekul (Bazel, İsveçrə) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Qarışıq rejimli xromatoqrafiya və onun biopolimerlərə tətbiqi.J. Xromatoqrafiya.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Qarışıq rejimli protein xromatoqrafiyası üçün liqandlar: prinsip, xarakteristikası və dizaynı.J. Biotexnologiya.144(1), 3-11 (2009).