Nature.com ला भेट दिल्याबद्दल धन्यवाद. तुम्ही वापरत असलेल्या ब्राउझर आवृत्तीमध्ये CSS साठी मर्यादित समर्थन आहे. सर्वोत्तम अनुभवासाठी, आम्ही शिफारस करतो की तुम्ही अपडेटेड ब्राउझर वापरा (किंवा इंटरनेट एक्सप्लोररमध्ये सुसंगतता मोड बंद करा). दरम्यान, सतत समर्थन सुनिश्चित करण्यासाठी, आम्ही शैली आणि जावास्क्रिप्टशिवाय साइट प्रदर्शित करू.
मॅक्रोपोरस कण मिळविण्यासाठी काही सुधारणांसह सच्छिद्र सिलिका कण सोल-जेल पद्धतीने तयार केले गेले. पॉलिस्टीरिन (पीएमपी) स्थिर टप्प्याचे एन-फेनिलमॅलेमाइड इंटरकॅलेशन तयार करण्यासाठी हे कण रिव्हर्सिबल अॅडिशन फ्रॅगमेंटेशन चेन ट्रान्सफर (RAFT) पॉलिमरायझेशनद्वारे N-फेनिलमॅलेमाइड-मिथाइलव्हिनिलिसोसायनेट (PMI) आणि स्टायरीनसह व्युत्पन्न केले गेले. अरुंद-बोअर स्टेनलेस स्टील कॉलम (100 × 1.8 मिमी आयडी) स्लरी पॅकिंगद्वारे पॅक केले गेले. पाच पेप्टाइड्स (ग्लाय-टायर, ग्लाय-ल्यू-टायर, ग्लाय-ग्लाय-टायर-आर्ग, टायर-इल-ग्लाय-सेर-आर्ग, ल्युसीन एन्केफॅलिन) क्रोमॅटोग्राफिक कामगिरी) आणि मानवी सीरम अल्ब्युमिन (HAS) चे ट्रिप्सिन पचन असलेल्या पेप्टाइड मिश्रणाचे मूल्यांकन केलेले PMP कॉलम पृथक्करण. इष्टतम एल्युशन परिस्थितीत, पेप्टाइड मिश्रणाची सैद्धांतिक प्लेट संख्या 280,000 प्लेट्स/m² इतकी जास्त असते. व्यावसायिकांसह विकसित कॉलमच्या पृथक्करण कामगिरीची तुलना करणे असेंटिस एक्सप्रेस आरपी-अमाइड कॉलममध्ये, असे आढळून आले की पीएमपी कॉलमचे सेपरेशन परफॉर्मन्स पृथक्करण कार्यक्षमता आणि रिझोल्यूशनच्या बाबतीत व्यावसायिक कॉलमपेक्षा श्रेष्ठ होते.
अलिकडच्या वर्षांत, बायोफार्मास्युटिकल उद्योग हा जागतिक बाजारपेठेत वाढणारा बाजारपेठ बनला आहे. बायोफार्मास्युटिकल उद्योगाच्या स्फोटक वाढीसह 1,2,3, पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांचे विश्लेषण अत्यंत अपेक्षित आहे. लक्ष्य पेप्टाइड व्यतिरिक्त, पेप्टाइड संश्लेषणादरम्यान अनेक अशुद्धता निर्माण होतात, त्यामुळे इच्छित शुद्धतेचे पेप्टाइड्स मिळविण्यासाठी क्रोमॅटोग्राफिक शुद्धीकरण आवश्यक असते. एकाच नमुन्यात मोठ्या संख्येने संभाव्य शोधण्यायोग्य प्रजाती असल्याने शरीरातील द्रव, ऊती आणि पेशींमध्ये प्रथिनांचे विश्लेषण आणि वैशिष्ट्यीकरण हे अत्यंत आव्हानात्मक काम आहे. जरी मास स्पेक्ट्रोमेट्री हे पेप्टाइड आणि प्रथिने अनुक्रमणासाठी एक प्रभावी साधन असले तरी, जर असे नमुने एकाच पासमध्ये मास स्पेक्ट्रोमीटरमध्ये इंजेक्ट केले गेले तर, पृथक्करण आदर्श होणार नाही. एमएस विश्लेषणापूर्वी लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी (एलसी) पृथक्करण लागू करून ही समस्या कमी केली जाऊ शकते, ज्यामुळे दिलेल्या वेळी मास स्पेक्ट्रोमीटरमध्ये प्रवेश करणाऱ्या विश्लेषकांची संख्या कमी होईल4,5,6. याव्यतिरिक्त, द्रव टप्प्यातील पृथक्करणादरम्यान, विश्लेषक अरुंद प्रदेशांमध्ये केंद्रित केले जाऊ शकतात, ज्यामुळे या विश्लेषकांना केंद्रित केले जाऊ शकते आणि एमएस शोध संवेदनशीलता सुधारते. लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी (LC) गेल्या दशकात लक्षणीयरीत्या प्रगती केली आहे आणि प्रोटिओमिक विश्लेषणामध्ये एक लोकप्रिय तंत्र बनले आहे7,8,9,10.
ऑक्टाडेसिल-मॉडिफाइड सिलिका (ODS) ला स्थिर टप्पा म्हणून वापरून पेप्टाइड मिश्रणांचे शुद्धीकरण आणि पृथक्करण करण्यासाठी रिव्हर्स्ड-फेज लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी (RP-LC) मोठ्या प्रमाणावर वापरली जाते. तथापि, RP स्थिर टप्पे त्यांच्या जटिल रचनेमुळे आणि अँफिफिलिक स्वरूपामुळे पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांचे समाधानकारक पृथक्करण प्रदान करत नाहीत 14,15 . म्हणून, या विश्लेषणांशी संवाद साधण्यासाठी आणि टिकवून ठेवण्यासाठी ध्रुवीय आणि नॉन-ध्रुवीय भागांसह पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांचे विश्लेषण करण्यासाठी विशेषतः डिझाइन केलेले स्थिर टप्पे आवश्यक आहेत16. मिक्स्ड-मोड क्रोमॅटोग्राफी, जी मल्टीमॉडल परस्परसंवाद प्रदान करते, पेप्टाइड्स, प्रथिने आणि इतर जटिल मिश्रणांच्या पृथक्करणासाठी RP-LC चा पर्याय असू शकते. अनेक मिश्र-मोड स्थिर टप्पे तयार केले गेले आहेत आणि पेप्टाइड आणि प्रथिने पृथक्करणासाठी या टप्प्यांसह पॅक केलेले स्तंभ वापरले गेले आहेत17,18,19,20,21. मिश्र-मोड स्थिर टप्पे (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, ध्रुवीय इंटरकॅलेशन/RPLC) पेप्टाइड आणि प्रथिनांसाठी योग्य आहेत. ध्रुवीय आणि अध्रुवीय गटांच्या उपस्थितीमुळे होणारे पृथक्करण 22,23,24,25,26,27,28 . त्याचप्रमाणे, सहसंयोजक बंध असलेल्या ध्रुवीय गटांसह ध्रुवीय इंटरकॅलेटिंग स्थिर टप्पे ध्रुवीय आणि अध्रुवीय विश्लेषकांसाठी चांगली पृथक्करण शक्ती आणि अद्वितीय निवडकता दर्शवतात, कारण पृथक्करण विश्लेषक आणि स्थिर टप्प्यातील परस्परसंवादावर अवलंबून असते. बहुविध संवाद 29, 30, 31, 32. अलिकडेच, झांग आणि इतर. ३० ने डोडेसिल-टर्मिनेटेड पॉलीमाइन स्थिर टप्पा तयार केला आणि हायड्रोकार्बन्स, अँटीडिप्रेसेंट्स, फ्लेव्होनॉइड्स, न्यूक्लियोसाइड्स, इस्ट्रोजेन आणि इतर अनेक विश्लेषकांना यशस्वीरित्या वेगळे केले. ध्रुवीय इंटरकॅलेटरमध्ये ध्रुवीय आणि नॉन-ध्रुवीय दोन्ही गट असतात, म्हणून ते पेप्टाइड्स आणि प्रथिने वेगळे करण्यासाठी वापरले जाऊ शकते ज्यामध्ये हायड्रोफोबिक आणि हायड्रोफिलिक दोन्ही भाग असतात. ध्रुवीय-एम्बेडेड कॉलम (उदा., अमाइड-एम्बेडेड C18 कॉलम) व्यावसायिकरित्या असेंटिस एक्सप्रेस आरपी-अमाइड कॉलम्स या व्यापारी नावाने उपलब्ध आहेत, परंतु हे कॉलम फक्त अमाइन ३३ च्या विश्लेषणासाठी वापरले जातात.
सध्याच्या अभ्यासात, HSA च्या पेप्टाइड्स आणि ट्रिप्सिन डायजेस्ट्स वेगळे करण्यासाठी ध्रुवीय-एम्बेडेड स्थिर टप्पा (N-फेनिलमॅलेइमाइड-एम्बेडेड पॉलिस्टीरिन) तयार करण्यात आला आणि त्याचे मूल्यांकन करण्यात आले. स्थिर टप्पा खालील धोरण वापरून तयार करण्यात आला. तयारी प्रोटोकॉलमध्ये काही बदल करून आमच्या मागील प्रकाशनात दिलेल्या प्रक्रियेनुसार सच्छिद्र सिलिका कण तयार करण्यात आले. मोठ्या छिद्र आकाराचे सिलिका कण तयार करण्यासाठी युरिया, पॉलीथिलीन ग्लायकॉल (PEG), TMOS, वॉटर एसिटिक अॅसिडचे गुणोत्तर समायोजित करण्यात आले. दुसरे म्हणजे, एक नवीन लिगँड, फेनिलमॅलेइमाइड-मिथाइल व्हाइनिल आयसोसायनेट, संश्लेषित केले गेले आणि ध्रुवीय एम्बेडेड स्थिर टप्पा तयार करण्यासाठी सिलिका कणांचे व्युत्पन्न करण्यासाठी वापरले गेले. परिणामी स्थिर टप्पा ऑप्टिमाइझ्ड पॅकिंग स्कीम वापरून स्टेनलेस स्टील कॉलम (100 × 1.8 मिमी आयडी) मध्ये पॅक करण्यात आला. कॉलममध्ये एकसंध बेड तयार झाला आहे याची खात्री करण्यासाठी कॉलम पॅकिंगला यांत्रिक कंपनाने मदत केली जाते. पाच पेप्टाइड्स असलेल्या पेप्टाइड मिश्रणांचे पॅक केलेले कॉलम पृथक्करण मूल्यांकन करा; (ग्लाय-टायर, ग्लाय-ल्यू-टायर, ग्लाय-ग्लाय-टायर-आर्ग, टायर-इल-ग्लाय-सेर-आर्ग, ल्युसीन एन्केफॅलिन) आणि मानवी सीरम अल्ब्युमिन (एचएएस) चे ट्रिप्सिन डायजेस्ट. एचएसएचे पेप्टाइड मिश्रण आणि ट्रिप्सिन डायजेस्ट चांगले रिझोल्यूशन आणि कार्यक्षमतेने वेगळे झाल्याचे दिसून आले. पीएमपी कॉलमच्या पृथक्करण कामगिरीची तुलना एसेंटिस एक्सप्रेस आरपी-अमाइड कॉलमशी करण्यात आली. पीएमपी कॉलमवर पेप्टाइड्स आणि प्रथिने दोन्ही चांगले रिझोल्यूशन आणि कार्यक्षम असल्याचे दिसून आले, जे एसेंटिस एक्सप्रेस आरपी-अमाइड कॉलमपेक्षा अधिक कार्यक्षम होते.
PEG (पॉलिथिलीन ग्लायकोल), युरिया, अ‍ॅसिटिक अ‍ॅसिड, ट्रायमेथॉक्सी ऑर्थोसिलिकेट (TMOS), ट्रायमिथाइल क्लोरोसिलेन (TMCS), ट्रिप्सिन, ह्यूमन सीरम अल्ब्युमिन (HSA), अमोनियम क्लोराइड, युरिया, हेक्सेन मेथिलडिसिलॅझेन (HMDS), मेथाक्रिलॉयल क्लोराइड (MC), स्टायरीन, ४-हायड्रॉक्सी-टेम्पो, बेंझॉयल पेरोक्साइड (BPO), HPLC ग्रेड अ‍ॅसिटोनिट्राइल (ACN), मिथेनॉल, २-प्रोपेनॉल आणि अ‍ॅसिटोन सिग्मा-अल्ड्रिच (सेंट लुईस, MO, USA) येथून खरेदी केलेले.
युरिया (८ ग्रॅम), पॉलीथिलीन ग्लायकॉल (८ ग्रॅम) आणि ८ मिली ०.०१ नॅनोअँटिस अॅसिड यांचे मिश्रण १० मिनिटे ढवळले गेले आणि नंतर बर्फाळ परिस्थितीत त्यात २४ मिली टीएमओएस टाकण्यात आले. अभिक्रिया मिश्रण ४०°C वर ६ तासांसाठी आणि नंतर १२०°C वर ८ तासांसाठी स्टेनलेस स्टील ऑटोक्लेव्हमध्ये गरम केले गेले. पाणी ओतण्यात आले आणि उर्वरित पदार्थ ७०°C वर १२ तासांसाठी वाळवण्यात आला. वाळलेल्या मऊ वस्तुमानाला ओव्हनमध्ये गुळगुळीत केले गेले आणि १२ तासांसाठी ५५०°C वर कॅल्साइन केले गेले. कण आकार, छिद्र आकार आणि पृष्ठभागाच्या क्षेत्रफळात पुनरुत्पादनक्षमता तपासण्यासाठी तीन बॅचेस तयार करण्यात आल्या आणि त्यांचे वैशिष्ट्यीकरण करण्यात आले.
पूर्व-संश्लेषित लिगँड फेनिलमॅलेइमाइड-मिथाइलव्हिनिलिसोसायनेट (पीसीएमपी) सह सिलिका कणांच्या पृष्ठभागावरील बदल करून आणि त्यानंतर स्टायरीनसह रेडियल पॉलिमरायझेशन करून, ध्रुवीय गट-युक्त संयुग तयार केले गेले. समुच्चय आणि पॉलिस्टीरिन साखळ्यांसाठी स्थिर टप्पा. तयारी प्रक्रिया खाली वर्णन केली आहे.
N-फेनिलमलेइमाइड (२०० मिग्रॅ) आणि मिथाइल व्हाइनिल आयसोसायनेट (१०० मिग्रॅ) कोरड्या टोल्युइनमध्ये विरघळवले गेले आणि फेनिलमलेइमाइड-मिथाइल व्हाइनिल आयसोसायनेट कोपॉलिमर (PMPC) तयार करण्यासाठी रिअॅक्शन फ्लास्कमध्ये ०.१ मिली २,२′-अ‍ॅझोइसोब्युटायरोनिट्राइल (AIBN) जोडले गेले. मिश्रण ६०°C वर ३ तास ​​गरम केले गेले, फिल्टर केले गेले आणि ४०°C वर ओव्हनमध्ये ३ तास ​​वाळवले गेले.
वाळलेल्या सिलिका कण (२ ग्रॅम) कोरड्या टोल्युइन (१०० मिली) मध्ये विखुरले गेले, ५०० मिली गोल तळाच्या फ्लास्कमध्ये १० मिनिटांसाठी ढवळले आणि सोनिकेट केले गेले. पीएमसीपी (१० मिलीग्राम) टोल्युइनमध्ये विरघळले आणि ड्रॉपिंग फनेलद्वारे रिअॅक्शन फ्लास्कमध्ये ड्रॉपवाइज जोडले गेले. मिश्रण १००°C वर ८ तासांसाठी रिफ्लक्स केले गेले, एसीटोनने फिल्टर केले आणि धुतले गेले आणि ६०°C वर ३ तासांसाठी वाळवले गेले. त्यानंतर, पीएमसीपी-बॉन्डेड सिलिका कण (१०० ग्रॅम) टोल्युइन (२०० मिली) मध्ये विरघळले गेले आणि उत्प्रेरक म्हणून १०० µL डायब्युटिलटिन डायलॉरेटच्या उपस्थितीत ४-हायड्रॉक्सी-टेम्पो (२ मिली) जोडले गेले. मिश्रण ५०°C वर ८ तासांसाठी ढवळले गेले, ५०°C वर ३ तासांसाठी फिल्टर केले आणि वाळवले गेले.
स्टायरीन (१ मिली), बेंझॉयल पेरोक्साइड बीपीओ (०.५ मिली), आणि टेम्पो-पीएमसीपी-संलग्न सिलिका कण (१.५ ग्रॅम) टोल्युइनमध्ये विखुरले गेले आणि नायट्रोजनने शुद्ध केले गेले. स्टायरीनचे पॉलिमरायझेशन १००°C वर १२ तासांसाठी केले गेले. परिणामी उत्पादन मिथेनॉलने धुतले गेले आणि रात्रभर ६०°C वर वाळवले गेले. एकूण प्रतिक्रिया योजना आकृती १ मध्ये दर्शविली आहे.
१०-३ टॉर पेक्षा कमी अवशिष्ट दाब मिळविण्यासाठी नमुने १ तासासाठी ३९३ के वर डिगॅस केले गेले. एकूण छिद्रांचे प्रमाण निश्चित करण्यासाठी P/P0 = ०.९९ च्या सापेक्ष दाबाने शोषलेल्या N2 चे प्रमाण वापरले गेले. स्कॅनिंग इलेक्ट्रॉन मायक्रोस्कोपी (हिताची हाय टेक्नॉलॉजीज, टोकियो, जपान) वापरून बेअर आणि लिगँड-बॉन्डेड सिलिका कणांचे आकारविज्ञान तपासले गेले. वाळलेले नमुने (बेअर सिलिका आणि लिगँड-बॉन्डेड सिलिका कण) अॅडहेसिव्ह कार्बन टेप वापरून अॅल्युमिनियम स्तंभावर ठेवण्यात आले. Q150T स्पटर कोटर वापरून नमुन्यांवर सोन्याचा प्लेट लावण्यात आला आणि नमुन्यांवर 5 nm Au थर जमा करण्यात आला. हे कमी व्होल्टेज वापरून प्रक्रिया कार्यक्षमता सुधारते आणि बारीक धान्य, थंड स्पटरिंग प्रदान करते. एलिमेंटल विश्लेषणासाठी थर्मो इलेक्ट्रॉन (वॉल्थम, एमए, यूएसए) फ्लॅश EA1112 एलिमेंटल अॅनालायझर वापरण्यात आला. कण आकार वितरण मिळविण्यासाठी माल्व्हर्न (वॉर्स्टरशायर, यूके) मास्टरसायझर २००० कण आकार विश्लेषक वापरण्यात आला. नग्न सिलिका कण आणि लिगँड-बॉन्डेड सिलिका कण (प्रत्येकी ५ मिग्रॅ) ५ मिली आयसोप्रोपॅनॉलमध्ये विखुरले गेले, १० मिनिटांसाठी सोनिकेट केले गेले, ५ मिनिटांसाठी व्हर्टेक्स केले गेले आणि मास्टरसायझरच्या ऑप्टिकल बेंचवर ठेवले गेले. ३० ते ८०० डिग्री सेल्सिअस तापमान श्रेणीवर ५ डिग्री सेल्सिअस प्रति मिनिट या दराने थर्मोग्राव्हिमेट्रिक विश्लेषण केले गेले.
काचेच्या रेषांनी बांधलेले स्टेनलेस स्टीलचे अरुंद-बोअर आकाराचे स्तंभ (१०० × १.८ मिमी आयडी) स्लरी पॅकिंग पद्धतीने पॅक केले गेले, संदर्भ मध्ये वापरल्या जाणाऱ्या समान प्रक्रियेचा वापर करून. ३१. १ µm फ्रिट असलेल्या आउटलेट फिटिंगसह एक स्टेनलेस स्टील कॉलम (काचेचे रेषा असलेला, १०० × १.८ मिमी आयडी) स्लरी पॅकरशी जोडला गेला (ऑलटेक डीअरफिल्ड, आयएल, यूएसए). १.२ मिली मिथेनॉलमध्ये १५० मिलीग्राम स्थिर फेज सस्पेंड करून स्थिर फेज स्लरी तयार करा आणि ते स्टोरेज कॉलममध्ये पाठवा. स्लरी सॉल्व्हेंट तसेच प्रोपेलिंग सॉल्व्हेंट म्हणून मिथेनॉलचा वापर केला गेला. १० मिनिटांसाठी १०० एमपी, १५ मिनिटांसाठी ८० एमपी आणि ३० मिनिटांसाठी ६० एमपी दाब देऊन कॉलम क्रमाने भरा. पॅकिंग दरम्यान, कॉलमचे एकसमान पॅकिंग सुनिश्चित करण्यासाठी दोन जीसी कॉलम शेकर (ऑलटेक, डीअरफिल्ड, आयएल, यूएसए) वापरून यांत्रिक कंपन लागू केले गेले. कॉलममध्ये कोणतेही नुकसान टाळण्यासाठी स्लरी पॅकर बंद करा आणि हळूहळू दाब सोडा. स्लरी पॅकिंग युनिटमधून कॉलम डिस्कनेक्ट करा आणि त्याची कार्यक्षमता तपासण्यासाठी इनलेट आणि एलसी सिस्टमशी दुसरी फिटिंग जोडा.
एक LC पंप (10AD Shimadzu, जपान), 50nL इंजेक्शन लूपसह इंजेक्टर (Valco (USA) C14 W.05), मेम्ब्रेन डिगॅसर (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS केशिका विंडो तयार करण्यात आली. विशेष µLC डिव्हाइस डिटेक्टर (UV-2075) आणि काचेच्या रेषेसह मायक्रोकॉलम. अतिरिक्त कॉलम बँड ब्रॉडनिंगचा प्रभाव कमी करण्यासाठी खूप अरुंद आणि लहान कनेक्टिंग ट्यूबिंग वापरा. ​​पॅकेजिंगनंतर, रिड्यूसिंग युनियनच्या 1/16″ आउटलेटवर केशिका (50 μm id 365 आणि रिड्यूसिंग युनियन केशिका (50 μm) स्थापित केल्या गेल्या. मल्टीक्रो 2000 सॉफ्टवेअर वापरून डेटा संकलन आणि क्रोमॅटोग्राफिक प्रक्रिया केली गेली. UV शोषणासाठी 254 nm विश्लेषणांवर देखरेख करण्यात आली. क्रोमॅटोग्राफिक डेटाचे विश्लेषण OriginPro8 (नॉर्थम्प्टन, MA) द्वारे केले गेले.
मानवी सीरममधून अल्ब्युमिन, लायोफिलाइज्ड पावडर, ≥ 96% (अ‍ॅगारोज जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस) 3 मिलीग्राम ट्रिप्सिन (1.5 मिलीग्राम), 4.0 मिलीग्राम युरिया (1 मिलीग्राम) आणि 0.2 मिलीग्राम अमोनियम बायकार्बोनेट (1 मिलीग्राम) मिसळून. द्रावण 10 मिनिटे ढवळले गेले आणि 37°C वर 6 तासांसाठी वॉटर बाथमध्ये ठेवले गेले, नंतर 0.1% TFA च्या 1 मिलीग्रामने ते शांत केले गेले. द्रावण फिल्टर करा आणि 4°C पेक्षा कमी तापमानात साठवा.
पेप्टाइड मिश्रण आणि HSA ट्रिप्सिन डायजेस्टचे पृथक्करण PMP कॉलमवर स्वतंत्रपणे केले गेले. PMP कॉलमद्वारे पेप्टाइड मिश्रण आणि HSA च्या ट्रिप्सिन डायजेस्टचे पृथक्करण तपासा आणि निकालांची तुलना Ascentis Express RP-Amide कॉलमशी करा. सैद्धांतिक प्लेट नंबर खालीलप्रमाणे मोजला जातो:
बेअर सिलिका कण आणि लिगँड-बॉन्डेड सिलिका कणांच्या SEM प्रतिमा आकृती 2 मध्ये दर्शविल्या आहेत. बेअर सिलिका कणांच्या (A, B) SEM प्रतिमा दर्शवितात की, आमच्या मागील अभ्यासांच्या विपरीत, हे कण गोलाकार आहेत ज्यामध्ये कण लांबलचक आहेत किंवा अनियमित सममिती आहेत. लिगँड-बॉन्डेड सिलिका कणांची पृष्ठभाग (C, D) बेअर सिलिका कणांपेक्षा गुळगुळीत आहे, जी सिलिका कणांच्या पृष्ठभागावर पॉलिस्टीरिन साखळ्यांच्या आवरणामुळे असू शकते.
स्कॅनिंग इलेक्ट्रॉन मायक्रोस्कोपमधील बेअर सिलिका कण (A, B) आणि लिगँड-बॉन्डेड सिलिका कण (C, D) यांच्या प्रतिमा.
बेअर सिलिका कण आणि लिगँड-बॉन्डेड सिलिका कणांचे कण आकार वितरण आकृती 3(A) मध्ये दाखवले आहे. रासायनिक बदलानंतर सिलिका कणांचा आकार वाढल्याचे व्हॉल्यूम-आधारित कण आकार वितरण वक्रांवरून दिसून आले (आकृती 3A). सध्याच्या अभ्यासातील आणि मागील अभ्यासातील सिलिका कणांच्या कण आकार वितरण डेटाची तुलना तक्ता 1(A) मध्ये केली आहे. PMP चा आकारमान-आधारित कण आकार, d(0.5), 3.36 μm आहे, जो आमच्या मागील अभ्यासाच्या तुलनेत ad(0.5) मूल्य 3.05 μm (पॉलिस्टीरिन-बॉन्ड सिलिका कण)34 आहे. प्रतिक्रिया मिश्रणात PEG, युरिया, TMOS आणि एसिटिक ऍसिडचे वेगवेगळे गुणोत्तर असल्यामुळे आमच्या मागील अभ्यासाच्या तुलनेत या बॅचमध्ये कण आकार वितरण कमी होते. PMP टप्प्याचा कण आकार आम्ही पूर्वी अभ्यास केलेल्या पॉलिस्टीरिन-बॉन्ड सिलिका कण टप्प्यापेक्षा थोडा मोठा आहे. याचा अर्थ असा की स्टायरीनसह सिलिका कणांचे पृष्ठभाग कार्यात्मकीकरण केल्याने सिलिका पृष्ठभागावर फक्त पॉलिस्टीरिन थर (0.97 μm) जमा झाला, तर पीएमपी टप्प्यात थराची जाडी १.३८ µm होती.
उघड्या सिलिका कणांचे आणि लिगँड-बद्ध सिलिका कणांचे कण आकार वितरण (A) आणि छिद्र आकार वितरण (B).
सध्याच्या अभ्यासातील सिलिका कणांचे छिद्र आकार, छिद्र आकारमान आणि पृष्ठभागाचे क्षेत्रफळ तक्ता 1(B) मध्ये दिले आहे. बेअर सिलिका कण आणि लिगँड-बॉन्डेड सिलिका कणांचे PSD प्रोफाइल आकृती 3(B) मध्ये दर्शविले आहेत. निकाल आमच्या मागील अभ्यासाशी तुलनात्मक आहेत. बेअर आणि लिगँड-बॉन्डेड सिलिका कणांचे छिद्र आकार अनुक्रमे 310 आणि 241 आहेत, जे दर्शविते की रासायनिक सुधारणानंतर छिद्र आकार 69 ने कमी होतो, जसे की तक्ता 1(B) मध्ये दर्शविले आहे, आणि वक्र बदल आकृती 3(B) मध्ये दर्शविले आहे. त्याचप्रमाणे, रासायनिक सुधारणानंतर सिलिका कणांचे छिद्र आकारमान 0.67 वरून 0.58 cm3/g पर्यंत कमी झाले. सध्या अभ्यासलेल्या सिलिका कणांचे विशिष्ट पृष्ठभाग क्षेत्रफळ 116 m2/g आहे, जे आमच्या मागील अभ्यासाशी तुलनात्मक आहे (124 m2/g). तक्ता 1(B) मध्ये दर्शविल्याप्रमाणे, सिलिका कणांचे पृष्ठभाग क्षेत्रफळ (m2/g) देखील 116 m2/g वरून कमी झाले आहे रासायनिक बदलानंतर १०५ चौरस मीटर/ग्रॅम.
स्थिर टप्प्याच्या मूलभूत विश्लेषणाचे निकाल तक्ता २ मध्ये दर्शविले आहेत. चालू स्थिर टप्प्याचे कार्बन लोडिंग ६.३५% आहे, जे आमच्या मागील अभ्यासाच्या कार्बन लोडिंगपेक्षा कमी आहे (पॉलिस्टीरिन बंधनकारक सिलिका कण, अनुक्रमे ७.९३%३५ आणि १०.२१%) ४२. चालू स्थिर टप्प्याचे कार्बन लोडिंग कमी आहे, कारण चालू एसपी तयार करताना, स्टायरीन व्यतिरिक्त, काही ध्रुवीय लिगँड जसे की फेनिलमलेइमाइड-मिथाइलव्हिनिलिसोसायनेट (पीसीएमपी) आणि ४-हायड्रॉक्सी-टेम्पो वापरले गेले होते. चालू स्थिर टप्प्याचे नायट्रोजन वजन टक्केवारी २.२१% आहे, मागील अभ्यासांमध्ये नायट्रोजनच्या वजनाने अनुक्रमे ०.१७३५ आणि ०.८५% होती. याचा अर्थ असा की फिनिलमलेइमाइडमुळे चालू स्थिर टप्प्यात नायट्रोजनचे वजन% जास्त आहे. त्याचप्रमाणे, उत्पादनांचे कार्बन लोडिंग (४) आणि (५) अनुक्रमे २.७% आणि २.९% होते, तर अंतिम उत्पादनाचे कार्बन लोडिंग (6) 6.35% होते, जसे की तक्ता 2 मध्ये दर्शविले आहे. वजन कमी होणे PMP स्थिर टप्प्याने तपासले गेले आणि TGA वक्र आकृती 4 मध्ये दर्शविले आहे. TGA वक्र 8.6% वजन कमी दर्शविते, जे कार्बन लोडिंगशी चांगले सुसंगत आहे (6.35%) कारण लिगँडमध्ये केवळ Cच नाही तर N, O आणि H देखील असतात.
सिलिका कणांच्या पृष्ठभागावरील बदलासाठी फिनाइलमलेइमाइड-मिथाइलव्हिनाइलिसोसायनेट लिगँड निवडण्यात आले कारण त्यात ध्रुवीय फिनाइलमलेइमाइड गट आणि व्हायनाइलिसोसायनेट गट असतात. व्हिनाइल आयसोसायनेट गट जिवंत रॅडिकल पॉलिमरायझेशनद्वारे स्टायरीनशी अधिक प्रतिक्रिया देऊ शकतात. दुसरे कारण म्हणजे असा गट समाविष्ट करणे ज्याचा विश्लेषकाशी मध्यम संवाद असतो आणि विश्लेषक आणि स्थिर टप्प्यामध्ये मजबूत इलेक्ट्रोस्टॅटिक परस्परसंवाद नसतो, कारण फिनाइलमलेइमाइडच्या अंशात सामान्य pH वर कोणतेही आभासी शुल्क नसते. स्थिर टप्प्याची ध्रुवीयता स्टायरीनच्या इष्टतम प्रमाणात आणि मुक्त रॅडिकल पॉलिमरायझेशनच्या प्रतिक्रिया वेळेद्वारे नियंत्रित केली जाऊ शकते. प्रतिक्रियेचा शेवटचा टप्पा (फ्री-रॅडिकल पॉलिमरायझेशन) महत्त्वपूर्ण आहे आणि स्थिर टप्प्याची ध्रुवीयता बदलू शकतो. या स्थिर टप्प्यांचे कार्बन लोडिंग तपासण्यासाठी प्राथमिक विश्लेषण केले गेले. असे आढळून आले की स्टायरीनचे प्रमाण आणि प्रतिक्रिया वेळ वाढल्याने स्थिर टप्प्याचे कार्बन लोडिंग वाढले आणि उलट. स्टायरीनच्या वेगवेगळ्या सांद्रतेसह तयार केलेल्या SP मध्ये वेगवेगळे कार्बन लोडिंग असतात. पुन्हा, हे स्थिर टप्प्या स्टेनलेस स्टीलच्या स्तंभांमध्ये लोड करा आणि त्यांचे तपासा क्रोमॅटोग्राफिक कामगिरी (निवडकता, रिझोल्यूशन, एन मूल्य, इ.). या प्रयोगांवर आधारित, नियंत्रित ध्रुवीयता आणि चांगले विश्लेषण धारणा सुनिश्चित करण्यासाठी पीएमपी स्थिर टप्पा तयार करण्यासाठी एक ऑप्टिमाइझ केलेले सूत्र निवडले गेले.
पाच पेप्टाइड मिश्रणे (ग्लाय-टायर, ग्लाय-ल्यू-टायर, ग्लाय-ग्लाय-टायर-आर्ग, टायर-इल-ग्लाय-सेर-आर्ग, ल्युसीन एन्केफॅलिन) देखील मोबाइल फेज वापरून पीएमपी कॉलम वापरून मूल्यांकन करण्यात आली; ६०/४० (v/v) एसीटोनिट्राइल/पाणी (०.१% TFA) ८० μL/मिनिटाच्या प्रवाह दराने. इष्टतम एल्युशन परिस्थितीत, प्रति कॉलम (१०० × १.८ मिमी आयडी) सैद्धांतिक प्लेट नंबर (N) २०,००० ± १०० (२००,००० प्लेट्स/मीटर²) आहे. तक्ता ३ मध्ये तीन पीएमपी कॉलमसाठी एन मूल्ये दिली आहेत आणि क्रोमॅटोग्राम आकृती ५अ मध्ये दाखवले आहेत. उच्च फ्लो रेट (७०० μL/मिनिट) वर पीएमपी कॉलमवर जलद विश्लेषण, एका मिनिटात पाच पेप्टाइड्स एल्युट केले गेले, एन व्हॅल्यूज खूप चांगले होते, प्रति कॉलम १३,५०० ± ३३० (१०० × १.८ मिमी आयडी), १३५,००० प्लेट्स/मीटरशी संबंधित (आकृती ५ब). तीन समान आकाराचे कॉलम (१०० × १.८ मिमी आयडी) तपासण्यासाठी पीएमपी स्थिर टप्प्याच्या तीन वेगवेगळ्या लॉटसह पॅक केले गेले होते. पुनरुत्पादनक्षमता. प्रत्येक स्तंभासाठी विश्लेषणात्मक सांद्रता इष्टतम एल्युशन परिस्थिती आणि सैद्धांतिक प्लेट्सची संख्या N आणि धारणा वेळ वापरून प्रत्येक स्तंभावर समान चाचणी मिश्रण वेगळे करण्यासाठी रेकॉर्ड केली गेली. PMP स्तंभांसाठी पुनरुत्पादनक्षमता डेटा तक्ता 4 मध्ये दर्शविला आहे. तक्ता 3 मध्ये दर्शविल्याप्रमाणे, PMP स्तंभाची पुनरुत्पादनक्षमता खूप कमी %RSD मूल्यांशी चांगल्या प्रकारे संबंधित आहे.
पीएमपी कॉलम (बी) आणि एसेंटिस एक्सप्रेस आरपी-अमाइड कॉलम (ए) वर पेप्टाइड मिश्रणाचे पृथक्करण; मोबाइल फेज 60/40 एसीएन/एच2ओ (टीएफए 0.1%), पीएमपी कॉलम परिमाणे (100 × 1.8 मिमी आयडी); विश्लेषणात्मक संयुगांचा उत्सर्जन क्रम: 1 (ग्लाय-टायर), 2 (ग्लाय-ल्यू-टायर), 3 (ग्लाय-ग्लाय-टायर-आर्ग), 4 (टायर-इल-ग्लाय-सेर-आर्ग) आणि 5 (ल्युसीन) अॅसिड एन्केफॅलिन)).
उच्च कार्यक्षमता असलेल्या द्रव क्रोमॅटोग्राफीमध्ये मानवी सीरम अल्ब्युमिनच्या ट्रिप्टिक डायजेस्ट्स वेगळे करण्यासाठी पीएमपी कॉलम (१०० × १.८ मिमी आयडी) चे मूल्यांकन केले गेले. आकृती ६ मधील क्रोमॅटोग्राम दर्शविते की नमुना चांगला वेगळा आहे आणि रिझोल्यूशन खूप चांगले आहे. १०० µL/मिनिट, मोबाइल फेज ७०/३० एसीटोनिट्राइल/पाणी आणि ०.१% TFA चा प्रवाह दर वापरून HSA डायजेस्ट्सचे विश्लेषण केले गेले. क्रोमॅटोग्राम (आकृती ६) मध्ये दर्शविल्याप्रमाणे, HSA डायजेस्ट १७ पेप्टाइड्सशी संबंधित १७ शिखरांमध्ये विभागले गेले आहे. HSA डायजेस्टमधील प्रत्येक शिखराची पृथक्करण कार्यक्षमता मोजली गेली आणि मूल्ये तक्ता ५ मध्ये दिली आहेत.
पीएमपी कॉलमवर एचएसए (१०० × १.८ मिमी आयडी) चे ट्रिप्टिक डायजेस्ट वेगळे केले गेले; फ्लो रेट (१०० µL/मिनिट), मोबाईल फेज ६०/४० एसीटोनिट्राइल/पाणी ०.१% टीएफएसह.
जिथे L ही स्तंभाची लांबी आहे, η ही गतिमान टप्प्याची चिकटपणा आहे, ΔP हा स्तंभाचा मागील दाब आहे आणि u हा गतिमान टप्प्याचा रेषीय वेग आहे. PMP स्तंभाची पारगम्यता 2.5 × 10-14 m2 होती, प्रवाह दर 25 μL/मिनिट होता आणि 60/40 v/v ACN/पाणी वापरले गेले. PMP स्तंभाची पारगम्यता (100 × 1.8 मिमी आयडी) आमच्या मागील अभ्यासासारखीच होती. संदर्भ 34. वरवरच्या सच्छिद्र कणांनी भरलेल्या स्तंभाची पारगम्यता आहे: 1.3 μm कणांसाठी 1.7 × 10-15, 1.7 μm कणांसाठी 3.1 × 10-15, 5.2 × 10-15 आणि 2.6 μm कणांसाठी 2.5 × 10-14 m2 5 μm कणांसाठी 43. म्हणून, PMP टप्प्याची पारगम्यता 5 μm सारखीच आहे. कोर-शेल कण.
जिथे Wx हे क्लोरोफॉर्मने भरलेल्या स्तंभाचे वजन आहे, Wy हे मिथेनॉलने भरलेल्या स्तंभाचे वजन आहे आणि ρ हे द्रावकाची घनता आहे. मिथेनॉलची घनता (ρ = 0.7866) आणि क्लोरोफॉर्म (ρ = 1.484). आम्ही पूर्वी अभ्यासलेल्या SILICA PARTICLES-C18 स्तंभ (100 × 1.8 mm id) 34 आणि C18-युरिया स्तंभ 31 ची एकूण सच्छिद्रता अनुक्रमे 0.63 आणि 0.55 होती. याचा अर्थ असा की युरिया लिगँड्सची उपस्थिती स्थिर टप्प्याची पारगम्यता कमी करते. दुसरीकडे, PMP स्तंभाची एकूण सच्छिद्रता (100 × 1.8 mm id) 0.60 आहे. PMP स्तंभांची पारगम्यता C18-बंधित सिलिका कणांनी भरलेल्या स्तंभांपेक्षा कमी आहे कारण C18-प्रकारच्या स्थिर टप्प्यांमध्ये C18 लिगँड्स सिलिका कणांना रेषीय साखळी म्हणून जोडलेले असतात, तर पॉलिस्टीरिन-प्रकारच्या स्थिर टप्प्यांमध्ये, त्याच्याभोवती तुलनेने जाड पॉलिमर थर तयार होतो. एका सामान्य प्रयोगात, स्तंभ सच्छिद्रता खालीलप्रमाणे मोजली जाते:
आकृती 7A,B मध्ये व्हॅन डीएम्टर प्लॉटच्या समान एल्युशन परिस्थिती (म्हणजेच, 60/40 ACN/H2O आणि 0.1% TFA) वापरून PMP कॉलम (100 × 1.8 मिमी आयडी) आणि असेंटिस एक्सप्रेस RP-अमाइड कॉलम (100 × 1.8 मिमी आयडी) दर्शविले आहेत. निवडलेले पेप्टाइड मिश्रण (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) २० µL/ मध्ये तयार केले गेले. दोन्ही स्तंभांसाठी किमान प्रवाह दर ८०० µL/मिनिट आहे. PMP स्तंभ आणि Ascentis Express RP-Amide स्तंभासाठी इष्टतम प्रवाह दर (८० µL/मिनिट) वर किमान HETP मूल्ये अनुक्रमे २.६ µm आणि ३.९ µm होती. HETP मूल्ये दर्शवितात की PMP स्तंभाची पृथक्करण कार्यक्षमता (१०० × १.८ मिमी आयडी) व्यावसायिकरित्या उपलब्ध असलेल्या Ascentis Express RP-Amide स्तंभ (१०० × १.८ मिमी आयडी) पेक्षा खूपच चांगली आहे. आकृती ७(A) मधील व्हॅन डीएम्टर प्लॉट दर्शविते की वाढत्या प्रवाहासह N मूल्यातील घट आमच्या मागील अभ्यासाच्या तुलनेत लक्षणीय नाही. PMP ची उच्च पृथक्करण कार्यक्षमता असेंटिस एक्सप्रेस आरपी-अमाइड कॉलमच्या तुलनेत कॉलम (१०० × १.८ मिमी आयडी) कण आकार, आकार आणि सध्याच्या कामात वापरल्या जाणाऱ्या जटिल कॉलम पॅकिंग प्रक्रियेतील सुधारणांवर आधारित आहे34.
(अ) ०.१% TFA सह ६०/४० ACN/H2O मध्ये PMP कॉलम (१०० × १.८ मिमी आयडी) वापरून मिळवलेला व्हॅन डीएमटर प्लॉट (HETP विरुद्ध मोबाइल फेज रेषीय वेग). (ब) ०.१% TFA सह ६०/४० ACN/H2O मध्ये Ascentis Express RP-Amide कॉलम (१०० × १.८ मिमी आयडी) वापरून मिळवलेला व्हॅन डीएमटर प्लॉट (HETP विरुद्ध मोबाइल फेज रेषीय वेग).
उच्च कार्यक्षमता असलेल्या द्रव क्रोमॅटोग्राफीमध्ये मानवी सीरम अल्ब्युमिन (HAS) च्या सिंथेटिक पेप्टाइड मिश्रण आणि ट्रिप्सिन डायजेस्ट वेगळे करण्यासाठी ध्रुवीय-एम्बेडेड पॉलीस्टीरिन स्थिर टप्पा तयार करण्यात आला आणि त्याचे मूल्यांकन करण्यात आले. पेप्टाइड मिश्रणांसाठी PMP स्तंभांचे क्रोमॅटोग्राफिक कार्यप्रदर्शन पृथक्करण कार्यक्षमता आणि रिझोल्यूशनमध्ये उत्कृष्ट आहे. PMP स्तंभांचे सुधारित पृथक्करण कार्यप्रदर्शन विविध कारणांमुळे आहे, जसे की सिलिका कणांचा कण आकार आणि छिद्र आकार, स्थिर टप्प्याचे नियंत्रित संश्लेषण आणि जटिल स्तंभ पॅकिंग. उच्च पृथक्करण कार्यक्षमतेव्यतिरिक्त, उच्च प्रवाह दरांवर कमी स्तंभ बॅक प्रेशर हा या स्थिर टप्प्याचा आणखी एक फायदा आहे. PMP स्तंभ चांगली पुनरुत्पादनक्षमता प्रदर्शित करतात आणि पेप्टाइड मिश्रणांचे विश्लेषण आणि विविध प्रथिनांच्या ट्रिप्सिन पचनासाठी वापरले जाऊ शकतात. द्रव क्रोमॅटोग्राफीमध्ये नैसर्गिक उत्पादने, औषधी वनस्पतींपासून जैविकरित्या सक्रिय संयुगे आणि बुरशीजन्य अर्क वेगळे करण्यासाठी या स्तंभाचा वापर करण्याचा आमचा मानस आहे. भविष्यात, प्रथिने आणि मोनोक्लोनल अँटीबॉडीज वेगळे करण्यासाठी PMP स्तंभांचे मूल्यांकन देखील केले जाईल.
फील्ड, जेके, युअरबी, एमआर, लाऊ, जे., थोगरसन, एच. आणि पीटरसन, पी. रिव्हर्स्ड फेज क्रोमॅटोग्राफीद्वारे पेप्टाइड सेपरेशन सिस्टम्सवर संशोधन भाग १: कॉलम कॅरेक्टरायझेशन प्रोटोकॉलचा विकास. जे. क्रोमॅटोग्राफी.१६०३, ११३–१२९.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (२०१९).
गोमेझ, बी. आणि इतर. संसर्गजन्य रोगांच्या उपचारांसाठी डिझाइन केलेले सुधारित सक्रिय पेप्टाइड्स.बायोटेक्नॉलॉजी.अ‍ॅडव्हान्स्ड.३६(२), ४१५-४२९.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (२०१८).
व्लीघे, पी., लिसोव्स्की, व्ही., मार्टिनेझ, जे. आणि ख्रेस्टचाटिस्की, एम. सिंथेटिक थेरप्यूटिक पेप्टाइड्स: विज्ञान आणि बाजार.औषध शोध.१५ (१-२) आज, ४०-५६.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (२०१०).
झी, एफ., स्मिथ, आरडी आणि शेन, वाय. अॅडव्हान्स्ड प्रोटिओमिक लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी.जे. क्रोमॅटोग्राफी.ए १२६१, ७८–९० (२०१२).
लिऊ, डब्ल्यू. आणि इतर. प्रगत द्रव क्रोमॅटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री व्यापकपणे लक्ष्यित चयापचय आणि प्रोटीओमिक्सचा समावेश करण्यास सक्षम करते.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019).
चेसनट, एसएम आणि सॅलिसबरी, जेजे औषध विकासात यूएचपीएलसीची भूमिका. जे. सप्टेंबर. विज्ञान.३०(८), ११८३-११९० (२००७).
वू, एन. आणि क्लॉसेन, एएम जलद पृथक्करणासाठी अतिउच्च दाब द्रव क्रोमॅटोग्राफीचे मूलभूत आणि व्यावहारिक पैलू. जे. सप्टेंबर. विज्ञान.३०(८), ११६७-११८२. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (२००७).
रेन, एसए आणि चेलिचेफ, पी. औषध विकासात अल्ट्रा-हाय परफॉर्मन्स लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीचा वापर. जे. क्रोमॅटोग्राफी.११९(१-२), १४०-१४६.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (२००६).
गु, एच. आणि इतर. एन्टरोव्हायरसच्या कार्यक्षम शुद्धीकरणासाठी तेल-इन-वॉटर हाय इंटरनल फेज इमल्शनपासून तयार केलेले मोनोलिथिक मॅक्रोपोरस हायड्रोजेल.केमिकल.ब्रिटन.जे. ४०१, १२६०५१ (२०२०).
शी, वाय., झियांग, आर., हॉर्वाथ, सी. आणि विल्किन्स, जेए प्रोटीओमिक्समध्ये द्रव क्रोमॅटोग्राफीची भूमिका. जे. क्रोमॅटोग्राफी.ए १०५३(१-२), २७-३६ (२००४).
फेकेटे, एस., व्ह्यूथे, जे.-एल. आणि गिलार्मे, डी. उपचारात्मक पेप्टाइड्स आणि प्रथिनांच्या रिव्हर्स्ड-फेज लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी पृथक्करणातील उदयोन्मुख ट्रेंड: सिद्धांत आणि अनुप्रयोग. जे. फार्मसी.बायोमेडिकल सायन्स.अनुस.६९, ९-२७ (२०१२).
गिलार, एम., ऑलिव्होवा, पी., डेली, एई आणि गेबलर, जेसी पहिल्या आणि दुसऱ्या पृथक्करण परिमाणांमध्ये वेगवेगळ्या पीएच मूल्यांचा वापर करून आरपी-आरपी-एचपीएलसी प्रणाली वापरून पेप्टाइड्सचे द्विमितीय पृथक्करण. जे. सप्टेंबर. विज्ञान.२८(१४), १६९४-१७०३ (२००५).
फेलेट्टी, एस. आणि इतर. C18 सब-2 μm पूर्णपणे आणि वरवरच्या सच्छिद्र कणांनी भरलेल्या उच्च-कार्यक्षमतेच्या क्रोमॅटोग्राफिक स्तंभांच्या वस्तुमान हस्तांतरण वैशिष्ट्ये आणि गतिज कामगिरीची तपासणी करण्यात आली. जे. सप्टेंबर. विज्ञान.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
पिओवेसाना, एस. आणि इतर. वनस्पती जैवक्रिय पेप्टाइड्सच्या अलगाव, ओळख आणि प्रमाणीकरणातील अलीकडील ट्रेंड आणि विश्लेषणात्मक आव्हाने.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
म्युलर, जेबी आणि इतर. जीवनाच्या साम्राज्याचे प्रोटिओमिक लँडस्केप. निसर्ग 582(7813), 592-596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
डेलुका, सी. आणि इतर. प्रिपरेटिव्ह लिक्विड क्रोमॅटोग्राफीद्वारे उपचारात्मक पेप्टाइड्सची डाउनस्ट्रीम प्रक्रिया. रेणू (बेसेल, स्वित्झर्लंड) 26(15), 4688(2021).
यांग, वाय. आणि गेंग, एक्स. मिश्र-मोड क्रोमॅटोग्राफी आणि बायोपॉलिमरमध्ये त्याचा वापर. जे. क्रोमॅटोग्राफी.ए १२१८(४९), ८८१३–८८२५ (२०११).
झाओ, जी., डोंग, एक्स.-वाय. आणि सन, वाय. मिश्र-मोड प्रोटीन क्रोमॅटोग्राफीसाठी लिगँड्स: तत्व, वैशिष्ट्यीकरण आणि डिझाइन. जे. बायोटेक्नॉलॉजी.१४४(१), ३-११ (२००९).