Salamat sa pagbisita sa Nature.com. Ang bersyon ng browser na iyong ginagamit ay may limitadong suporta para sa CSS. Para sa pinakamahusay na karanasan, inirerekomenda namin na gumamit ka ng na-update na browser (o i-off ang compatibility mode sa Internet Explorer). Pansamantala, upang matiyak ang patuloy na suporta, ipapakita namin ang site nang walang mga istilo at JavaScript.
Ang mga porous na silica na particle ay inihanda sa pamamagitan ng isang sol-gel method na may ilang mga pagbabago upang makakuha ng macroporous particle. Ang mga particle na ito ay hinango sa pamamagitan ng reversible addition fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization na may N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) at styrene upang ihanda ang N-phenylmaleimide phase na hindi kinakalawang na haligi ng polystyrene na intercalation ng N-phenylmaleimide (PMP) polystyrene. (100 × 1.8 mm id) ay nakaimpake sa pamamagitan ng slurry packing. Nasuri ang PMP column separation ng isang peptide mixture na binubuo ng limang peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) na pagganap ng album ng leucine encephalic, leucine encephalin. (HAS).Sa ilalim ng pinakamainam na kondisyon ng elution, ang theoretical plate count ng peptide mixture ay kasing taas ng 280,000 plates/m². Ang paghahambing ng separation performance ng binuo na column sa commercial Ascentis Express RP-Amide column, napansin na ang separation performance ng PMP column ay mas mataas kaysa commercial column sa mga tuntunin ng separation efficiency at resolution.
Sa mga nagdaang taon, ang industriya ng biopharmaceutical ay naging isang lumalawak na pandaigdigang merkado na may malaking pagtaas sa bahagi ng merkado. Sa paputok na paglaki ng industriya ng biopharmaceutical1,2,3, ang pagsusuri ng mga peptides at protina ay lubos na ninanais. Bilang karagdagan sa target na peptide, maraming mga impurities ang nabuo sa panahon ng peptide synthesis, kaya nangangailangan ng purification ng chromatographic na pagtatasa at pag-aaral ng peptide, kaya nangangailangan ng purification ng chromatographic na katangian ng mga protina sa mga likido ng katawan, mga tisyu at mga selula ay isang napakahirap na gawain dahil sa malaking bilang ng mga potensyal na matukoy na species sa isang sample. Bagama't ang mass spectrometry ay isang epektibong tool para sa peptide at sequencing ng protina, kung ang mga naturang sample ay na-injected sa mass spectrometer sa isang pass, ang paghihiwalay ay hindi magiging perpekto. Ang problemang ito ay maaaring mabawasan sa pamamagitan ng pagpapatupad ng mga naunang numero ng MS chromat (LC) analytes na pumapasok sa mass spectrometer sa isang takdang oras4,5,6.Sa karagdagan, sa panahon ng liquid phase separation, ang mga analyte ay maaaring ituon sa makitid na mga rehiyon, sa gayo'y natutuon ang mga analyte na ito at nagpapabuti sa MS detection sensitivity. Ang liquid chromatography (LC) ay umunlad nang malaki sa nakalipas na dekada at naging popular na pamamaraan sa proteomic analysis.
Ang reversed-phase liquid chromatography (RP-LC) ay malawakang ginagamit para sa purification at separation ng peptide mixtures gamit ang octadecyl-modified silica (ODS) bilang stationary phase11,12,13.Gayunpaman, ang RP stationary phases ay hindi nagbibigay ng kasiya-siyang paghihiwalay ng mga peptide at proteins dahil sa kanilang likas na kumplikadong 14,philore na istraktura at amphiore15 na idinisenyo. ang mga phase ay kinakailangan upang pag-aralan ang mga peptide at protina na may mga polar at non-polar moieties upang makipag-ugnayan at mapanatili ang mga analyte na ito16. Ang mixed-mode chromatography, na nagbibigay ng multimodal na mga interaksyon, ay maaaring maging alternatibo sa RP-LC para sa paghihiwalay ng mga peptides, protina, at iba pang kumplikadong mixtures. Ilang mixed-mode na mga phase at column na peptide ang naihanda na para sa mga phase na ito ng mga nakatigil at protina. mga paghihiwalay17,18,19,20,21. Ang mga mixed-mode na nakatigil na phase (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC) ay angkop para sa peptide at protein separations dahil sa pagkakaroon ng parehong polar at non-polar groups22,23,24,25,26,27,28 na magkakaugnay na phase na may magkatulad na magkakaugnay na bahagi. Ang mga bonded polar group ay nagpapakita ng magandang separation power at natatanging selectivity para sa polar at non-polar analytes, dahil ang paghihiwalay ay nakasalalay sa interaksyon sa pagitan ng analyte at stationary phase. Multimodal na pakikipag-ugnayan 29, 30, 31, 32. Kamakailan lamang, Zhang et al. 30 ay naghanda ng dodecyl-terminated polyamine stationary phase at matagumpay na pinaghihiwalay ang mga hydrocarbon, antidepressant, flavonoids, nucleosides, estrogens, at ilang iba pang analytes. Ang polar intercalator ay may parehong polar at non-polar group, kaya maaari itong magamit upang paghiwalayin ang mga peptide at protina na parehong may hydrophobic at hydrophilic-embedded na mga moieties. columns) ay komersyal na magagamit sa ilalim ng trade name na Ascentis Express RP-Amide column, ngunit ang mga column na ito ay ginagamit para sa pagsusuri ng amine 33 lamang.
Sa kasalukuyang pag-aaral, isang polar-embedded stationary phase (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) ang inihanda at sinuri para sa paghihiwalay ng peptides at trypsin digests ng HSA. Ang stationary phase ay inihanda gamit ang sumusunod na diskarte. ang acid ay inayos upang maghanda ng mga silica particle na may malaking sukat ng butas. Pangalawa, ang isang bagong ligand, phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate, ay na-synthesize at ginamit upang i-derivatize ang mga particle ng silica upang maghanda ng isang polar na naka-embed na nakatigil na yugto. Ang nagresultang nakatigil na bahagi ay naka-pack sa isang hindi kinakalawang na haligi na asero (100 × 1.8 mm na may naka-optimize na pag-iimpake ng column) gamit ang naka-optimize na column id) tiyaking isang homogenous na kama ang nabuo sa loob ng column.Suriin ang naka-pack na column separation ng peptide mixtures na binubuo ng limang peptides; (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) at Trypsin digest ng human serum albumin (HAS) Kolum na RP-Amide. Ang parehong mga peptide at protina ay naobserbahang mahusay na nalutas at mahusay sa column ng PMP, na mas mahusay kaysa sa column ng Ascentis Express RP-Amide.
PEG (Polyethylene Glycol), Urea, Acetic Acid, Trimethoxy Orthosilicate (TMOS), Trimethyl Chlorosilane (TMCS), Trypsin, Human Serum Albumin (HSA), Ammonium Chloride, Urea, Hexane Methyldisilazane (HMDS), Methacryloyl Chloride (MC-Hydroxy-Oxide) HPLC Grade Acetonitrile (ACN), Methanol, 2-Propanol, at Acetone na Binili mula sa Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).
Ang pinaghalong urea (8 g), polyethylene glycol (8 g), at 8 mL ng 0.01 N acetic acid ay hinalo sa loob ng 10 minuto, at pagkatapos ay idinagdag doon ang 24 mL ng TMOS sa ilalim ng malamig na mga kondisyon. Ang reaksyong timpla ay pinainit sa 40°C sa loob ng 6 na oras at pagkatapos ay sa 120°C na tubig ay ibinuhos ng tubig sa loob ng 8 oras. ay pinatuyo sa 70 ° C sa loob ng 12 oras. Ang pinatuyong malambot na masa ay makinis na lupa sa isang oven at na-calcined sa 550 ° C sa loob ng 12 oras. Tatlong batch ang inihanda at nailalarawan upang suriin ang reproducibility sa laki ng butil, laki ng butas at lugar sa ibabaw.
Sa pamamagitan ng pagbabago sa ibabaw ng mga particle ng silica na may pre-synthesized ligand phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) na sinusundan ng radial polymerization na may styrene, isang polar group-containing compound ang inihanda. Stationary phase para sa aggregates at polystyrene chain. Ang proseso ng paghahanda ay inilarawan sa ibaba.
Ang N-phenylmaleimide (200 mg) at methyl vinyl isocyanate (100 mg) ay natunaw sa dry toluene, at 0.1 mL ng 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ay idinagdag sa reaction flask upang ihanda ang phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate copolymer (PMC000) na na-filter sa 6 na oras. tuyo sa oven sa 40°C sa loob ng 3 oras.
Pinatuyong silica particle (2 g) ay dispersed sa dry toluene (100 mL), hinalo at sonicated sa isang 500 ML round bottom flask para sa 10 min. PMCP (10 mg) ay dissolved sa toluene at idinagdag dropwise sa reaction flask sa pamamagitan ng isang dropping funnel. 60°C sa loob ng 3 oras.Pagkatapos, ang PMCP-bonded silica particle (100 g) ay natunaw sa toluene (200 ml) at 4-hydroxy-TEMPO (2 mL) ay idinagdag sa pagkakaroon ng 100 µL ng dibutyltin dilaurate bilang isang katalista. Ang halo ay hinalo sa 850°C na mga oras na na-filter at 0°C na na-filter sa loob ng 3 oras.
Ang Styrene (1 mL), benzoyl peroxide BPO (0.5 mL), at TEMPO-PMCP-attached silica particles (1.5 g) ay dispersed sa toluene at nilinis ng nitrogen. Ang polymerization ng styrene ay isinagawa sa 100°C sa loob ng 12 oras. Ang resultang produkto ay hinugasan ng methanol at pinatuyo ang pangkalahatang pamamaraan sa 60°C.
Ang mga sample ay na-degassed sa 393 K sa loob ng 1 oras upang makakuha ng natitirang presyon na mas mababa sa 10-3 Torr. Ang halaga ng N2 na na-adsorbed sa isang kamag-anak na presyon ng P/P0 = 0.99 ay ginamit upang matukoy ang kabuuang dami ng pore. Ang morphology ng hubad at ligand-bonded silica particle ay napagmasdan gamit ang pag-scan ng mga electron micros, H silicari ng Japan na sample ng Japan. at ligand-bonded silica particle) ay inilagay sa isang aluminum column gamit ang adhesive carbon tape. Nilagyan ng ginto ang mga sample gamit ang Q150T sputter coater, at isang 5 nm Au layer ang idineposito sa mga sample. Pinapabuti nito ang kahusayan ng proseso gamit ang mababang boltahe at nagbibigay ng pinong butil, malamig na sputtering. Isang Thermo Electron (Waltham, MA11) ang ginamit na elemento ng Flash na pagsusuri. Ginamit ang Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 particle size analyzer upang makuha ang pamamahagi ng laki ng particle. Ang mga hubad na silica particle at ligand-bonded silica particle (5 mg bawat isa) ay dispersed sa 5 mL ng isopropanol, na-sonicated sa loob ng 10 min, vortexed para sa 5 min, at inilagay sa optical bench ng Masters 5 na rate ng pag-aaral. saklaw ng temperatura na 30 hanggang 800 °C.
Ang mga glass-lined stainless steel narrow-bore column ng mga dimensyon (100 × 1.8 mm id) ay nakaimpake gamit ang slurry packing method, na inilalapat ang parehong pamamaraan na ginamit sa Ref. 31. Isang column na hindi kinakalawang na asero (glass-lined, 100 × 1.8 mm id) na may outlet fitting na naglalaman ng 1 µm frit ay ikinonekta sa isang slurry packer (Alltech Deerfield, IL, USA). slurry solvent pati na rin ang propelling solvent. Punan ang column nang sunud-sunod sa pamamagitan ng paglalapat ng mga pressure na 100 MP sa loob ng 10 minuto, 80 MP sa loob ng 15 minuto, at 60 MP sa loob ng 30 minuto. Sa panahon ng pag-iimpake, inilapat ang mechanical vibration gamit ang dalawang GC column shakers (Alltech, Deerfield, IL, USA) para matiyak na mabagal ang pag-release ng pressure packing ng column at USA. upang maiwasan ang anumang pinsala sa loob ng column. Idiskonekta ang column mula sa slurry packing unit at ikonekta ang isa pang fitting sa inlet at sa LC system upang suriin ang performance nito.
Isang LC pump (10AD Shimadzu, Japan), injector (Valco (USA) C14 W.05) na may 50nL injection loop, membrane degasser (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS capillary window ay ginawa Espesyal na µLC device detector (UV-2075) at glass-lined na napakaliit na mga microcolumns at napakaliit na epekto ng column na kumukonekta sa column. pagpapalawak.Pagkatapos ng packaging, ang mga capillary (50 μm id 365 at ang pagbabawas ng mga capillary ng unyon (50 μm) ay na-install sa 1/16″ outlet ng pagbabawas ng unyon. Ang pagkolekta ng data at pagpoproseso ng chromatographic ay ginawa gamit ang Multichro 2000 software. Ang pagsubaybay sa 254 nm na pagsusuri ng data ay sinuri ng Chromatographic Analytes para sa pagsipsip ng UV ng UV. (Northampton, MA).
Albumin mula sa human serum, lyophilized powder, ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 mg na may halong trypsin (1.5 mg), 4.0 M urea (1 mL), at 0.2 M ammonium bicarbonate (1 mL). Ang solusyon ay hinalo sa loob ng 10 minuto at itinago sa isang water bath sa 67,1°C na oras. 0.1% TFA. I-filter ang solusyon at iimbak sa ibaba 4 °C.
Ang paghihiwalay ng mga peptide mixture at HSA trypsin digests ay nasuri nang hiwalay sa mga column ng PMP. Suriin ang paghihiwalay ng peptide mixture at trypsin digest ng HSA sa pamamagitan ng PMP column at ihambing ang mga resulta sa Ascentis Express RP-Amide column. Ang theoretical plate number ay kinakalkula tulad ng sumusunod:
Ang mga imahe ng SEM ng mga hubad na silica na particle at ligand-bonded silica particle ay ipinapakita sa FIG. 2. Ang SEM na mga larawan ng hubad na mga particle ng silica (A, B) ay nagpapakita na, sa kaibahan sa aming mga nakaraang pag-aaral, ang mga particle na ito ay spherical kung saan ang mga particle ay pinahaba o may hindi regular na simetrya.
Pag-scan ng mga larawan ng electron microscope ng mga hubad na silica particle (A, B) at ligand-bonded silica particle (C, D).
Ang mga distribusyon ng laki ng particle ng mga hubad na particle ng silica at ligand-bonded na silica particle ay ipinapakita sa Figure 3(A). Ang mga curve ng distribution size ng particle na nakabatay sa volume ay nagpakita na ang laki ng mga particle ng silica ay tumaas pagkatapos ng kemikal na pagbabago (Fig. 3A). μm, kumpara sa aming nakaraang pag-aaral na may ad(0.5) value na 3.05 μm (polystyrene-bound silica particles)34. Ang batch na ito ay may mas makitid na particle size distribution kumpara sa aming nakaraang pag-aaral dahil sa iba't ibang ratios ng PEG, urea, TMOS, at acetic acid sa reaction mixture. surface functionalization ng silica particles na may styrene ay nagdeposito lamang ng polystyrene layer (0.97 µm) sa silica surface, samantalang sa PMP phase ang kapal ng layer ay 1.38 µm.
Pamamahagi ng laki ng butil (A) at pamamahagi ng laki ng butas (B) ng mga hubad na particle ng silica at mga particle ng silica na nakagapos sa ligand.
Ang laki ng butas, dami ng butas at lugar ng ibabaw ng mga particle ng silica ng kasalukuyang pag-aaral ay ibinibigay sa Talahanayan 1(B). Ang mga profile ng PSD ng mga hubad na particle ng silica at mga particle ng silica na may ligand-bonded ay ipinapakita sa Figure 3(B). Ang mga resulta ay maihahambing sa aming nakaraang pag-aaral. sa pamamagitan ng 69 pagkatapos ng pagbabago ng kemikal, tulad ng ipinapakita sa Talahanayan 1(B), at ang pagbabago ng kurba ay ipinapakita sa Fig. 3(B). Katulad nito, ang dami ng pore ng mga particle ng silica ay nabawasan mula 0.67 hanggang 0.58 cm3/g pagkatapos ng pagbabago ng kemikal. Ang tiyak na surface area ng kasalukuyang pinag-aaralan na mga silica comparable ay 116 (116) m2/g). Gaya ng ipinapakita sa Talahanayan 1(B), ang surface area (m2/g) ng mga particle ng silica ay bumaba rin mula 116 m2/g hanggang 105 m2/g pagkatapos ng pagbabago ng kemikal.
Ang mga resulta ng elemental analysis ng stationary phase ay ipinapakita sa Talahanayan 2. Ang carbon loading ng kasalukuyang stationary phase ay 6.35%, na mas mababa kaysa sa carbon loading ng aming nakaraang pag-aaral (polystyrene bonded silica particle, 7.93%35 at 10.21%, ayon sa pagkakabanggit) 42. Ang carbon loading ng kasalukuyang stationary phase, dahil ang ilang SPlar stationary phase ay mababa sa, dahil ang ilang bahagi ng SPlar stationary ay mababa sa paghahanda. Ang mga ligand tulad ng phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) at 4-hydroxy-TEMPO ay ginamit. Ang nitrogen weight percent ng kasalukuyang stationary phase ay 2.21%, kumpara sa 0.1735 at 0.85% by weight ng nitrogen sa mga nakaraang pag-aaral, ayon sa pagkakabanggit. Nangangahulugan ito na ang wt % ng carbonny.imilar phase ay mas mataas sa kasalukuyang stationary phase. ang pag-load ng mga produkto (4) at (5) ay 2.7% at 2.9%, ayon sa pagkakabanggit, habang ang carbon loading ng panghuling produkto (6) ay 6.35%, tulad ng ipinapakita sa Talahanayan 2. Sinuri ang pagbaba ng timbang gamit ang PMP stationary phase, at ang TGA curve ay ipinapakita sa Figure 4. Ang TGA curve ay nagpapakita ng pagbabawas ng timbang na 8.6%, na kung saan ay 8.6% na kasunduan sa pag-load ng carbon. Ang mga ligand ay naglalaman ng hindi lamang C kundi pati na rin ang N, O, at H.
Ang phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ligand ay pinili para sa pagbabago sa ibabaw ng mga particle ng silica dahil mayroon itong mga polar na grupo ng phenylmaleimide at mga grupo ng vinylisocyanate. Ang mga grupo ng vinyl isocyanate ay maaaring higit pang tumugon sa styrene sa pamamagitan ng nabubuhay na radical polymerization. Ang pangalawang dahilan ay upang magpasok ng isang grupo na may katamtamang pakikipag-ugnayan sa electrostatic at walang interaksyon sa pagitan ng electrostatic phase at walang malakas na interaksyon. Ang phenylmaleimide moiety ay walang virtual charge sa normal na pH. Ang polarity ng stationary phase ay maaaring kontrolin ng pinakamainam na dami ng styrene at ang oras ng reaksyon ng free radical polymerization. Ang huling hakbang ng reaksyon (free-radical polymerization) ay kritikal at maaaring baguhin ang polarity ng stationary phase. Ang elemental na pagsusuri ay isinagawa upang suriin ang carbon loading ng mga carbon loading na ito ay ang pagtaas ng oras ng reaksyon ng mga styrene na ito. paglo-load ng stationary phase at vice versa. Ang mga SP na inihanda na may iba't ibang konsentrasyon ng styrene ay may iba't ibang carbon loadings. Muli, i-load ang mga stationary phase na ito sa mga column na hindi kinakalawang na asero at suriin ang kanilang chromatographic performance (selectivity, resolution, N value, atbp.).
Limang peptide mixtures (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) ay nasuri din gamit ang PMP column gamit ang mobile phase; 60/40 (v/v) acetonitrile/water (0.1% TFA) sa rate ng daloy na 80 μL/min. Sa ilalim ng pinakamainam na kondisyon ng elution, ang theoretical plate number (N) bawat column (100 × 1.8 mm id) ay 20,000 ± 100 (200,000 na mga column ng T ²) na nagbibigay ng mga halaga ng P3/m². at ang mga chromatograms ay ipinapakita sa Figure 5A. Mabilis na pagsusuri sa isang haligi ng PMP sa mataas na rate ng daloy (700 μL / min), limang peptides ay na-eluted sa loob ng isang minuto, ang mga halaga ng N ay napakahusay, 13,500 ± 330 bawat haligi (100 × 1.8 mm id), Katugma sa 5000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000,000. Ang mga column na magkapareho ang laki (100 × 1.8 mm id) ay naka-pack na may tatlong magkakaibang lot ng PMP stationary phase upang suriin ang reproducibility. Ang analyte concentration para sa bawat column ay naitala gamit ang pinakamainam na kondisyon ng elution at ang bilang ng theoretical plates N at retention time upang paghiwalayin ang parehong test mixture sa bawat column. mababang %RSD na halaga, tulad ng ipinapakita sa Talahanayan 3.
Paghihiwalay ng peptide mixture sa PMP column (B) at Ascentis Express RP-Amide column (A); mobile phase 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), mga dimensyon ng column ng PMP (100 × 1.8 mm id); analytical Ang pagkakasunud-sunod ng elution ng mga compound: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) at 5 (leucine) acid enkephalin)).
Sinuri ang isang column ng PMP (100 × 1.8 mm id) para sa paghihiwalay ng mga tryptic digest ng serum albumin ng tao sa high performance liquid chromatography. Ang chromatogram sa Figure 6 ay nagpapakita na ang sample ay mahusay na pinaghihiwalay at ang resolution ay napakahusay. Ang mga HSA digest ay nasuri gamit ang rate ng daloy na 100 µL/30% ng acetonitrile/min, mobile na tubig. TFA. Gaya ng ipinapakita sa chromatogram (Larawan 6), ang HSA digestion ay nahati sa 17 peak na tumutugma sa 17 peptides. Ang kahusayan sa paghihiwalay ng bawat peak sa HSA digest ay kinakalkula at ang mga halaga ay ibinigay sa Talahanayan 5.
Ang isang tryptic digest ng HSA (100 × 1.8 mm id) ay pinaghiwalay sa isang haligi ng PMP; rate ng daloy (100 µL/min), mobile phase 60/40 acetonitrile/tubig na may 0.1% TFA.
kung saan ang L ay ang haba ng column, ang η ay ang lagkit ng mobile phase, ang ΔP ay ang column back pressure, at u ang linear velocity ng mobile phase. Ang permeability ng PMP column ay 2.5 × 10-14 m2, ang flow rate ay 25 μL/min, at 60/40 v/v. mm id) ay katulad ng sa aming nakaraang pag-aaral Ref.34. Ang permeability ng column na naka-pack na may mababaw na porous na mga particle ay: 1.7 × 10-15 para sa 1.3 μm na particle, 3.1 × 10-15 para sa 1.7 μm na particle, 5.2 × 10-15 at 2.5 μm para sa 10-15 at 2.5 μm. μm particle 43. Samakatuwid, ang permeability ng PMP phase ay katulad ng 5 μm core-shell particle.
kung saan ang Wx ay ang bigat ng column na naka-pack na may chloroform, ang Wy ay ang bigat ng column na naka-pack na may methanol, at ang ρ ay ang density ng solvent. Densidad ng methanol (ρ = 0.7866) at chloroform (ρ = 1.484). Ang kabuuang porosity ng SILICA PARTIKLES-C18 × i. Ang C18-Urea columns 31 na dati naming pinag-aralan ay 0.63 at 0.55, ayon sa pagkakabanggit. Nangangahulugan ito na ang pagkakaroon ng urea ligand ay binabawasan ang permeability ng stationary phase. Sa kabilang banda, ang kabuuang porosity ng PMP column (100 × 1.8 mm id) ay 0.60. silica particle dahil sa C18-type stationary phase ang C18 ligands ay nakakabit sa mga silica particle bilang linear chain, habang sa polystyrene-type stationary phase, ang A medyo makapal na polymer layer ay nabuo sa paligid nito. Sa isang tipikal na eksperimento, ang column porosity ay kinakalkula bilang:
Ipinapakita ng Figure 7A,B ang column ng PMP (100 × 1.8 mm id) at column ng Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 mm id) gamit ang parehong mga kondisyon ng elution (ibig sabihin, 60/40 ACN/H2O at 0.1% TFA). ) ng plot ng van Deemter. Ang mga piling pinaghalong peptide (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) ay inihanda sa 20 µL/ Ang pinakamababang rate ng daloy para sa parehong column ay 800 µL/min. Ang pinakamababang halaga ng HETPµL/min. column at ang column ng Ascentis Express RP-Amide ay 2.6 µm at 3.9 µm, ayon sa pagkakabanggit. Isinasaad ng mga HETP value na ang kahusayan sa paghihiwalay ng column ng PMP (100 × 1.8 mm id) ay higit na mas mahusay kaysa sa commercial na available na Ascentis Express RP-Amide na column (100 i × 1.8) na column (100 id. ang pagbaba sa halaga ng N na may pagtaas ng daloy ay hindi makabuluhan kumpara sa aming nakaraang pag-aaral. Ang mas mataas na kahusayan sa paghihiwalay ng column ng PMP (100 × 1.8 mm id) kumpara sa column ng Ascentis Express RP-Amide ay batay sa mga pagpapabuti sa hugis ng particle, laki, at kumplikadong mga pamamaraan ng pag-pack ng column na ginagamit sa kasalukuyang gawain34.
(A) van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity) nakuha gamit ang PMP column (100 × 1.8 mm id) sa 60/40 ACN/H2O na may 0.1% TFA.(B) van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity) na nakuha gamit ang Ascentis Express RP-Amide velocity/06 × 1 column (10 mm Amide 1. ACN/H2O na may 0.1% TFA.
Ang isang polar-embedded polystyrene stationary phase ay inihanda at sinuri para sa paghihiwalay ng synthetic peptide mixtures at trypsin digests ng human serum albumin (HAS) sa high performance liquid chromatography. Ang chromatographic performance ng PMP columns para sa peptide mixtures ay mahusay sa separation efficiency at resolution. particle, kinokontrol na synthesis ng stationary phase, at complex column packing.Bilang karagdagan sa mataas na separation efficiency, mababang column back pressure sa mataas na flow rate ay isa pang bentahe ng stationary phase na ito.PMP columns exhibit good reproducibility and can be used for the analysis of peptide mixtures and trypsin digestion of various proteins.We intention to use this column for the separation of medicinal compounds natural products, chromatography.Sa hinaharap, susuriin din ang mga column ng PMP para sa paghihiwalay ng mga protina at monoclonal antibodies.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Pananaliksik sa Peptide Separation System sa pamamagitan ng Reversed Phase Chromatography Bahagi I: Pagbuo ng Column Characterization Protocol.J. Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez.
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides: science and the market.drug discovery.15 (1-2) ngayon, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced na Proteomic Liquid Chromatography.J. Chromatography.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al.Ang advanced na liquid chromatography-mass spectrometry ay nagbibigay-daan sa pagsasama ng malawak na target na metabolomics at proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Ang papel ng UHPLC sa pagpapaunlad ng droga.J. Set Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Pangunahin at praktikal na aspeto ng ultrahigh pressure liquid chromatography para sa mabilis na paghihiwalay.J. Set. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Application ng ultra-high performance liquid chromatography sa pagbuo ng gamot.J. Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al.Monolithic macroporous hydrogels na inihanda mula sa oil-in-water high internal phase emulsions para sa mahusay na paglilinis ng mga enterovirus.Chemical.Britain.J. 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Ang papel ng liquid chromatography sa proteomics.J. Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L.& Guillarme, D. Mga umuusbong na uso sa reversed-phase liquid chromatography separations ng mga therapeutic peptides at proteins: theory and applications.J. Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Dalawang-dimensional na paghihiwalay ng mga peptide gamit ang isang RP-RP-HPLC system na gumagamit ng iba't ibang pH value sa una at pangalawang dimensyon ng paghihiwalay.J. Set Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al.Ang mga katangian ng mass transfer at kinetic na pagganap ng mga high-efficiency chromatographic column na naka-pack na may C18 sub-2 μm na ganap at mababaw na porous na mga particle ay sinisiyasat.J. Set Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Mga kamakailang uso at analytical na hamon sa paghihiwalay, pagkilala at pagpapatunay ng mga bioactive peptides ng halaman.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-2018-08-x.
Mueller, JB et al.The proteomic landscape ng kaharian ng buhay.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al.Downstream processing ng therapeutic peptides sa pamamagitan ng preparative liquid chromatography.Molecule (Basel, Switzerland) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Mixed-mode chromatography at ang paggamit nito sa biopolymers.J. Chromatography.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Ligands para sa mixed-mode protein chromatography: prinsipyo, characterization, at disenyo.J. Biotechnology.144(1), 3-11 (2009).