Nature.com ની મુલાકાત લેવા બદલ આભાર. તમે જે બ્રાઉઝર વર્ઝનનો ઉપયોગ કરી રહ્યા છો તેમાં CSS માટે મર્યાદિત સપોર્ટ છે. શ્રેષ્ઠ અનુભવ માટે, અમે ભલામણ કરીએ છીએ કે તમે અપડેટેડ બ્રાઉઝરનો ઉપયોગ કરો (અથવા ઇન્ટરનેટ એક્સપ્લોરરમાં સુસંગતતા મોડ બંધ કરો). આ દરમિયાન, સતત સપોર્ટ સુનિશ્ચિત કરવા માટે, અમે શૈલીઓ અને જાવાસ્ક્રિપ્ટ વિના સાઇટ પ્રદર્શિત કરીશું.
છિદ્રાળુ સિલિકા કણો સોલ-જેલ પદ્ધતિ દ્વારા તૈયાર કરવામાં આવ્યા હતા જેમાં મેક્રોપોરસ કણો મેળવવા માટે કેટલાક ફેરફારો કરવામાં આવ્યા હતા. પોલિસ્ટરીન (PMP) સ્ટેશનરી ફેઝના N-ફિનાઇલમેલેમાઇડ ઇન્ટરકેલેશન તૈયાર કરવા માટે N-ફિનાઇલમેલેમાઇડ-મિથાઇલવિનાઇલિસોસાયનેટ (PMI) અને સ્ટાયરીન સાથે રિવર્સિબલ એડિશન ફ્રેગમેન્ટેશન ચેઇન ટ્રાન્સફર (RAFT) પોલિમરાઇઝેશન દ્વારા આ કણોનું વ્યુત્પન્ન કરવામાં આવ્યું હતું. સાંકડી-બોર સ્ટેનલેસ સ્ટીલ સ્તંભો (100 × 1.8 mm id) સ્લરી પેકિંગ દ્વારા પેક કરવામાં આવ્યા હતા. પાંચ પેપ્ટાઇડ્સ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) ક્રોમેટોગ્રાફિક પ્રદર્શન) અને માનવ સીરમ આલ્બ્યુમિન (HAS) ના ટ્રિપ્સિન પાચન ધરાવતા પેપ્ટાઇડ મિશ્રણના PMP સ્તંભ વિભાજનનું મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું હતું. શ્રેષ્ઠ એલ્યુશન પરિસ્થિતિઓમાં, પેપ્ટાઇડ મિશ્રણની સૈદ્ધાંતિક પ્લેટ ગણતરી 280,000 પ્લેટ્સ/m² જેટલી ઊંચી છે. વિકસિત સ્તંભના વિભાજન પ્રદર્શનની વ્યાપારી સાથે સરખામણી કરીને એસેન્ટિસ એક્સપ્રેસ આરપી-એમાઇડ કોલમમાં, એવું જોવા મળ્યું કે પીએમપી કોલમનું સેપરેશન પર્ફોર્મન્સ સેપરેશન કાર્યક્ષમતા અને રિઝોલ્યુશનના સંદર્ભમાં કોમર્શિયલ કોલમ કરતાં શ્રેષ્ઠ હતું.
તાજેતરના વર્ષોમાં, બાયોફાર્માસ્યુટિકલ ઉદ્યોગ બજાર હિસ્સામાં નોંધપાત્ર વધારો સાથે વિસ્તરતું વૈશ્વિક બજાર બની ગયું છે. બાયોફાર્માસ્યુટિકલ ઉદ્યોગ 1,2,3 ના વિસ્ફોટક વિકાસ સાથે, પેપ્ટાઇડ્સ અને પ્રોટીનનું વિશ્લેષણ ખૂબ ઇચ્છનીય છે. લક્ષ્ય પેપ્ટાઇડ ઉપરાંત, પેપ્ટાઇડ સંશ્લેષણ દરમિયાન ઘણી અશુદ્ધિઓ ઉત્પન્ન થાય છે, આમ ઇચ્છિત શુદ્ધતાના પેપ્ટાઇડ્સ મેળવવા માટે ક્રોમેટોગ્રાફિક શુદ્ધિકરણની જરૂર પડે છે. એક જ નમૂનામાં સંભવિત રીતે શોધી શકાય તેવી પ્રજાતિઓની મોટી સંખ્યાને કારણે શરીરના પ્રવાહી, પેશીઓ અને કોષોમાં પ્રોટીનનું વિશ્લેષણ અને લાક્ષણિકતા એક અત્યંત પડકારજનક કાર્ય છે.જોકે માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રી પેપ્ટાઇડ અને પ્રોટીન સિક્વન્સિંગ માટે એક અસરકારક સાધન છે, જો આવા નમૂનાઓને એક પાસમાં માસ સ્પેક્ટ્રોમીટરમાં ઇન્જેક્ટ કરવામાં આવે છે, તો વિભાજન આદર્શ રહેશે નહીં. MS વિશ્લેષણ પહેલાં લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી (LC) વિભાજન લાગુ કરીને આ સમસ્યાને ઘટાડી શકાય છે, જે આપેલ સમયે માસ સ્પેક્ટ્રોમીટરમાં પ્રવેશતા વિશ્લેષકોની સંખ્યા ઘટાડશે4,5,6.વધુમાં, પ્રવાહી તબક્કાના વિભાજન દરમિયાન, વિશ્લેષકોને સાંકડા પ્રદેશોમાં કેન્દ્રિત કરી શકાય છે, જેનાથી આ વિશ્લેષકોને કેન્દ્રિત કરી શકાય છે અને MS શોધ સંવેદનશીલતામાં સુધારો થાય છે.લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી (LC) છેલ્લા દાયકામાં નોંધપાત્ર રીતે આગળ વધ્યું છે અને પ્રોટીઓમિક વિશ્લેષણમાં એક લોકપ્રિય તકનીક બની ગયું છે7,8,9,10.
ઓક્ટાડેસીલ-મોડિફાઇડ સિલિકા (ODS) ને સ્થિર તબક્કા તરીકે ઉપયોગ કરીને પેપ્ટાઇડ મિશ્રણના શુદ્ધિકરણ અને અલગ કરવા માટે રિવર્સ્ડ-ફેઝ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી (RP-LC) નો વ્યાપકપણે ઉપયોગ થાય છે11,12,13. જો કે, RP સ્થિર તબક્કાઓ તેમની જટિલ રચના અને એમ્ફિફિલિક પ્રકૃતિ 14,15 ને કારણે પેપ્ટાઇડ્સ અને પ્રોટીનનું સંતોષકારક વિભાજન પૂરું પાડતા નથી. તેથી, આ વિશ્લેષકો સાથે ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરવા અને જાળવી રાખવા માટે ધ્રુવીય અને બિન-ધ્રુવીય ભાગોવાળા પેપ્ટાઇડ્સ અને પ્રોટીનનું વિશ્લેષણ કરવા માટે ખાસ રચાયેલ સ્થિર તબક્કાઓ જરૂરી છે16. મિશ્ર-મોડ ક્રોમેટોગ્રાફી, જે મલ્ટિમોડલ ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ પૂરી પાડે છે, પેપ્ટાઇડ્સ, પ્રોટીન અને અન્ય જટિલ મિશ્રણોના અલગ કરવા માટે RP-LC નો વિકલ્પ બની શકે છે. ઘણા મિશ્ર-મોડ સ્થિર તબક્કાઓ તૈયાર કરવામાં આવ્યા છે, અને આ તબક્કાઓથી ભરેલા કૉલમનો ઉપયોગ પેપ્ટાઇડ અને પ્રોટીન અલગ કરવા માટે કરવામાં આવ્યો છે17,18,19,20,21. મિશ્ર-મોડ સ્થિર તબક્કાઓ (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, ધ્રુવીય ઇન્ટરકેલેશન/RPLC) પેપ્ટાઇડ અને પ્રોટીન માટે યોગ્ય છે. ધ્રુવીય અને બિન-ધ્રુવીય બંને જૂથોની હાજરીને કારણે વિભાજન 22,23,24,25,26,27,28 .તે જ રીતે, સહસંયોજક રીતે બંધાયેલા ધ્રુવીય જૂથો સાથે ધ્રુવીય ઇન્ટરકેલેટીંગ સ્થિર તબક્કાઓ ધ્રુવીય અને બિન-ધ્રુવીય વિશ્લેષકો માટે સારી વિભાજન શક્તિ અને અનન્ય પસંદગી દર્શાવે છે, કારણ કે વિભાજન વિશ્લેષક અને સ્થિર તબક્કા વચ્ચેની ક્રિયાપ્રતિક્રિયા પર આધાર રાખે છે. બહુવિધ ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ 29, 30, 31, 32.તાજેતરમાં, ઝાંગ એટ અલ. 30 એ ડોડેસીલ-ટર્મિનેટેડ પોલિઆમાઇન સ્ટેશનરી ફેઝ તૈયાર કર્યો અને હાઇડ્રોકાર્બન, એન્ટીડિપ્રેસન્ટ્સ, ફ્લેવોનોઇડ્સ, ન્યુક્લિયોસાઇડ્સ, એસ્ટ્રોજેન્સ અને અન્ય ઘણા વિશ્લેષકોને સફળતાપૂર્વક અલગ કર્યા. ધ્રુવીય ઇન્ટરકેલેટરમાં ધ્રુવીય અને બિન-ધ્રુવીય બંને જૂથો હોય છે, તેથી તેનો ઉપયોગ પેપ્ટાઇડ્સ અને પ્રોટીનને અલગ કરવા માટે થઈ શકે છે જેમાં હાઇડ્રોફોબિક અને હાઇડ્રોફિલિક બંને મોઇટીઝ હોય છે. ધ્રુવીય-એમ્બેડેડ કૉલમ (દા.ત., એમાઇડ-એમ્બેડેડ C18 કૉલમ) વ્યાપારી રીતે એસેન્ટિસ એક્સપ્રેસ RP-એમાઇડ કૉલમ નામ હેઠળ ઉપલબ્ધ છે, પરંતુ આ કૉલમનો ઉપયોગ ફક્ત એમાઇન 33 ના વિશ્લેષણ માટે થાય છે.
વર્તમાન અભ્યાસમાં, HSA ના પેપ્ટાઇડ્સ અને ટ્રિપ્સિન ડાયજેસ્ટ્સને અલગ કરવા માટે ધ્રુવીય-એમ્બેડેડ સ્ટેશનરી ફેઝ (N-ફેનાઇલમેલેઇમાઇડ-એમ્બેડેડ પોલિસ્ટરીન) તૈયાર કરવામાં આવ્યો હતો અને તેનું મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું હતું. સ્થિર ફેઝ નીચેની વ્યૂહરચનાનો ઉપયોગ કરીને તૈયાર કરવામાં આવ્યો હતો. છિદ્રાળુ સિલિકા કણો અમારા અગાઉના પ્રકાશનમાં આપેલી પ્રક્રિયા અનુસાર તૈયાર કરવામાં આવ્યા હતા જેમાં તૈયારી પ્રોટોકોલમાં કેટલાક ફેરફારો કરવામાં આવ્યા હતા. મોટા છિદ્ર કદવાળા સિલિકા કણો તૈયાર કરવા માટે યુરિયા, પોલિઇથિલિન ગ્લાયકોલ (PEG), TMOS, પાણી એસિટિક એસિડનો ગુણોત્તર ગોઠવવામાં આવ્યો હતો. બીજું, એક નવું લિગાન્ડ, ફિનાઇલમેલેઇમાઇડ-મિથાઇલ વિનાઇલ આઇસોસાયનેટ, સંશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું અને ધ્રુવીય એમ્બેડેડ સ્ટેશનરી ફેઝ તૈયાર કરવા માટે સિલિકા કણોને વ્યુત્પન્ન કરવા માટે ઉપયોગમાં લેવાયું હતું. પરિણામી સ્થિર ફેઝને ઑપ્ટિમાઇઝ્ડ પેકિંગ સ્કીમનો ઉપયોગ કરીને સ્ટેનલેસ સ્ટીલ કોલમ (100 × 1.8 mm id) માં પેક કરવામાં આવ્યું હતું. કોલમ પેકિંગને યાંત્રિક કંપન દ્વારા સહાય કરવામાં આવે છે જેથી ખાતરી થાય કે કોલમની અંદર એક સમાન બેડ રચાય છે. પાંચ પેપ્ટાઇડ્સ ધરાવતા પેપ્ટાઇડ મિશ્રણના પેક્ડ કોલમ અલગતાનું મૂલ્યાંકન કરો; (ગ્લાય-ટાયર, ગ્લાય-લ્યુ-ટાયર, ગ્લાય-ગ્લાય-ટાયર-આર્ગ, ટાયર-ઇલ-ગ્લાય-સેર-આર્ગ, લ્યુસીન એન્કેફાલિન) અને માનવ સીરમ આલ્બ્યુમિન (HAS) નું ટ્રિપ્સિન ડાયજેસ્ટ. HSA નું પેપ્ટાઇડ મિશ્રણ અને ટ્રિપ્સિન ડાયજેસ્ટ સારા રિઝોલ્યુશન અને કાર્યક્ષમતા સાથે અલગ જોવા મળ્યું. PMP કોલમના વિભાજન પ્રદર્શનની તુલના એસેન્ટિસ એક્સપ્રેસ RP-એમાઇડ કોલમ સાથે કરવામાં આવી. PMP કોલમ પર પેપ્ટાઇડ્સ અને પ્રોટીન બંને સારી રીતે રિઝોલ્યુશન અને કાર્યક્ષમ જોવા મળ્યા, જે એસેન્ટિસ એક્સપ્રેસ RP-એમાઇડ કોલમ કરતાં વધુ કાર્યક્ષમ હતા.
PEG (પોલિઇથિલિન ગ્લાયકોલ), યુરિયા, એસિટિક એસિડ, ટ્રાઇમેથોક્સી ઓર્થોસિલિકેટ (TMOS), ટ્રાઇમિથાઇલ ક્લોરોસિલેન (TMCS), ટ્રિપ્સિન, હ્યુમન સીરમ આલ્બ્યુમિન (HSA), એમોનિયમ ક્લોરાઇડ, યુરિયા, હેક્સેન મેથાઇલડિસિલેઝેન (HMDS), મેથાક્રિલોઇલ ક્લોરાઇડ (MC), સ્ટાયરીન, 4-હાઇડ્રોક્સી-ટેમ્પો, બેન્ઝોઇલ પેરોક્સાઇડ (BPO), HPLC ગ્રેડ એસેટોનાઇટ્રાઇલ (ACN), મિથેનોલ, 2-પ્રોપેનોલ અને એસીટોન સિગ્મા-એલ્ડ્રિચ (સેન્ટ લૂઇસ, MO, USA) માંથી ખરીદેલ.
યુરિયા (8 ગ્રામ), પોલિઇથિલિન ગ્લાયકોલ (8 ગ્રામ), અને 0.01 N એસિટિક એસિડના 8 મિલી મિશ્રણને 10 મિનિટ સુધી હલાવવામાં આવ્યું, અને પછી બરફ જેવી ઠંડી સ્થિતિમાં તેમાં 24 મિલી TMOS ઉમેરવામાં આવ્યું. પ્રતિક્રિયા મિશ્રણને સ્ટેનલેસ સ્ટીલ ઓટોક્લેવમાં 40°C પર 6 કલાક અને પછી 120°C પર 8 કલાક માટે ગરમ કરવામાં આવ્યું. પાણી રેડવામાં આવ્યું અને બાકી રહેલી સામગ્રીને 70°C પર 12 કલાક માટે સૂકવવામાં આવી. સૂકા નરમ માસને ઓવનમાં સુંવાળી પીસીને 12 કલાક માટે 550°C પર કેલ્સાઈન કરવામાં આવ્યો. કણોના કદ, છિદ્ર કદ અને સપાટીના ક્ષેત્રમાં પ્રજનનક્ષમતા તપાસવા માટે ત્રણ બેચ તૈયાર કરવામાં આવી અને લાક્ષણિકતા આપવામાં આવી.
સિલિકા કણોના સપાટી પરના ફેરફાર દ્વારા પૂર્વ-સંશ્લેષિત લિગાન્ડ ફિનાઇલમેલેમાઇડ-મિથાઈલવિનાઇલિસોસાયનેટ (PCMP) અને ત્યારબાદ સ્ટાયરીન સાથે રેડિયલ પોલિમરાઇઝેશન દ્વારા, ધ્રુવીય જૂથ ધરાવતું સંયોજન તૈયાર કરવામાં આવ્યું. એગ્રીગેટ્સ અને પોલિસ્ટરીન સાંકળો માટે સ્થિર તબક્કો. તૈયારી પ્રક્રિયા નીચે વર્ણવેલ છે.
N-ફિનાઇલમેલાઇમાઇડ (200 મિલિગ્રામ) અને મિથાઇલ વિનાઇલ આઇસોસાયનેટ (100 મિલિગ્રામ) ને ડ્રાય ટોલ્યુએનમાં ઓગાળવામાં આવ્યા હતા, અને ફિનાઇલમેલાઇમાઇડ-મિથાઇલ વિનાઇલ આઇસોસાયનેટ કોપોલિમર (PMPC) તૈયાર કરવા માટે રિએક્શન ફ્લાસ્કમાં 0.1 મિલી 2,2′-એઝોઇસોબ્યુટીરોનિટ્રાઇલ (AIBN) ઉમેરવામાં આવ્યું હતું. મિશ્રણને 60°C પર 3 કલાક માટે ગરમ કરવામાં આવ્યું હતું, ફિલ્ટર કરવામાં આવ્યું હતું અને 40°C પર 3 કલાક માટે ઓવનમાં સૂકવવામાં આવ્યું હતું.
સૂકા સિલિકા કણો (2 ગ્રામ) ને સૂકા ટોલ્યુએન (100 મિલી) માં વિખેરવામાં આવ્યા, 500 મિલી ગોળાકાર તળિયાના ફ્લાસ્કમાં 10 મિનિટ માટે હલાવવામાં આવ્યા અને સોનિકેટેડ કરવામાં આવ્યા. PMPC (10 મિલીગ્રામ) ને ટોલ્યુએનમાં ઓગાળીને ડ્રોપિંગ ફનલ દ્વારા રિએક્શન ફ્લાસ્કમાં ડ્રોપવાઇઝ ઉમેરવામાં આવ્યું. મિશ્રણને 8 કલાક માટે 100°C પર રિફ્લક્સ કરવામાં આવ્યું, એસીટોનથી ફિલ્ટર અને ધોવામાં આવ્યું અને 60°C પર 3 કલાક માટે સૂકવવામાં આવ્યું. પછી, PMCP-બોન્ડેડ સિલિકા કણો (100 ગ્રામ) ને ટોલ્યુએન (200 મિલી) માં ઓગાળવામાં આવ્યા અને ઉત્પ્રેરક તરીકે 100 µL ડિબ્યુટિલ્ટિન ડાયલોરેટની હાજરીમાં 4-હાઇડ્રોક્સી-ટેમ્પો (2 મિલી) ઉમેરવામાં આવ્યું. મિશ્રણને 8 કલાક માટે 50°C પર હલાવવામાં આવ્યું, 3 કલાક માટે 50°C પર ફિલ્ટર અને સૂકવવામાં આવ્યું.
સ્ટાયરીન (1 મિલી), બેન્ઝોયલ પેરોક્સાઇડ BPO (0.5 મિલી), અને TEMPO-PMPC-જોડાયેલા સિલિકા કણો (1.5 ગ્રામ) ટોલ્યુએનમાં વિખેરાઈ ગયા અને નાઇટ્રોજનથી શુદ્ધ કરવામાં આવ્યા. સ્ટાયરીનનું પોલિમરાઇઝેશન 100°C પર 12 કલાક માટે કરવામાં આવ્યું. પરિણામી ઉત્પાદનને મિથેનોલથી ધોવામાં આવ્યું અને રાતોરાત 60°C પર સૂકવવામાં આવ્યું. એકંદર પ્રતિક્રિયા યોજના આકૃતિ 1 માં બતાવવામાં આવી છે.
10-3 ટોર કરતા ઓછા શેષ દબાણ મેળવવા માટે નમૂનાઓને 1 કલાક માટે 393 K પર ડિગેસ કરવામાં આવ્યા હતા. કુલ છિદ્ર વોલ્યુમ નક્કી કરવા માટે P/P0 = 0.99 ના સંબંધિત દબાણ પર શોષિત N2 ની માત્રાનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો. સ્કેનિંગ ઇલેક્ટ્રોન માઇક્રોસ્કોપી (હિટાચી હાઇ ટેક્નોલોજીસ, ટોક્યો, જાપાન) દ્વારા ખુલ્લા અને લિગાન્ડ-બોન્ડેડ સિલિકા કણોના આકારશાસ્ત્રની તપાસ કરવામાં આવી હતી. સૂકા નમૂનાઓ (બેર સિલિકા અને લિગાન્ડ-બોન્ડેડ સિલિકા કણો) એડહેસિવ કાર્બન ટેપનો ઉપયોગ કરીને એલ્યુમિનિયમ સ્તંભ પર મૂકવામાં આવ્યા હતા. Q150T સ્પટર કોટરનો ઉપયોગ કરીને નમૂનાઓ પર સોનાનો ઢોળ ચઢાવવામાં આવ્યો હતો, અને નમૂનાઓ પર 5 nm Au સ્તર જમા કરવામાં આવ્યું હતું. આ ઓછા વોલ્ટેજનો ઉપયોગ કરીને પ્રક્રિયા કાર્યક્ષમતામાં સુધારો કરે છે અને બારીક અનાજ, ઠંડા સ્પટરિંગ પ્રદાન કરે છે. એલિમેન્ટલ વિશ્લેષણ માટે થર્મો ઇલેક્ટ્રોન (વોલ્થમ, MA, USA) ફ્લેશ EA1112 એલિમેન્ટલ વિશ્લેષકનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો. કણ કદ વિતરણ મેળવવા માટે માલવર્ન (વોર્સેસ્ટરશાયર, UK) માસ્ટરાઇઝર 2000 કણ કદ વિશ્લેષકનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો. નગ્ન સિલિકા કણો અને લિગાન્ડ-બોન્ડેડ સિલિકા કણો (દરેક 5 મિલિગ્રામ) 5 મિલી આઇસોપ્રોપેનોલમાં વિખેરાઈ ગયા, 10 મિનિટ માટે સોનિકેટેડ, 5 મિનિટ માટે વમળમાં ફેરવાઈ ગયા, અને માસ્ટરસાઈઝરના ઓપ્ટિકલ બેન્ચ પર મૂકવામાં આવ્યા. થર્મોગ્રેવિમેટ્રિક વિશ્લેષણ 30 થી 800 °C તાપમાન શ્રેણીમાં પ્રતિ મિનિટ 5 °C ના દરે કરવામાં આવ્યું.
ગ્લાસ-લાઇનવાળા સ્ટેનલેસ સ્ટીલના સાંકડા-બોરના પરિમાણો (100 × 1.8 મીમી id) ના સ્તંભોને સ્લરી પેકિંગ પદ્ધતિનો ઉપયોગ કરીને પેક કરવામાં આવ્યા હતા, જે સંદર્ભમાં વપરાયેલી સમાન પ્રક્રિયાનો ઉપયોગ કરીને કરવામાં આવ્યા હતા. ૩૧. એક સ્ટેનલેસ સ્ટીલ કોલમ (કાચથી લાઇન કરેલો, ૧૦૦ × ૧.૮ મીમી id) જેમાં ૧ µm ફ્રિટ ધરાવતી આઉટલેટ ફિટિંગ હતી, તેને સ્લરી પેકર (ઓલટેક ડીયરફિલ્ડ, IL, USA) સાથે જોડવામાં આવી હતી. ૧.૨ mL મિથેનોલમાં ૧૫૦ મિલિગ્રામ સ્ટેશનરી ફેઝ સસ્પેન્ડ કરીને સ્ટેશનરી ફેઝ સ્લરી તૈયાર કરો અને તેને સ્ટોરેજ કોલમમાં મોકલો. મિથેનોલનો ઉપયોગ સ્લરી સોલવન્ટ તેમજ પ્રોપેલિંગ સોલવન્ટ તરીકે કરવામાં આવ્યો હતો. ૧૦ મિનિટ માટે ૧૦૦ MP, ૧૫ મિનિટ માટે ૮૦ MP અને ૩૦ મિનિટ માટે ૬૦ MP નું દબાણ લાગુ કરીને કોલમને ક્રમિક રીતે ભરો. પેકિંગ દરમિયાન, કોલમનું એકસમાન પેકિંગ સુનિશ્ચિત કરવા માટે બે GC કોલમ શેકર્સ (ઓલટેક, ડીયરફિલ્ડ, IL, USA) સાથે યાંત્રિક કંપન લાગુ કરવામાં આવ્યું હતું. સ્લરી પેકર બંધ કરો અને કોલમની અંદર કોઈપણ નુકસાન અટકાવવા માટે ધીમે ધીમે દબાણ છોડો. કોલમને સ્લરી પેકિંગ યુનિટથી ડિસ્કનેક્ટ કરો અને તેની કામગીરી તપાસવા માટે ઇનલેટ અને LC સિસ્ટમ સાથે બીજી ફિટિંગ જોડો.
એક LC પંપ (10AD Shimadzu, જાપાન), 50nL ઇન્જેક્શન લૂપ સાથે ઇન્જેક્ટર (Valco (USA) C14 W.05), મેમ્બ્રેન ડિગેસર (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS કેશિલરી વિન્ડો બનાવવામાં આવી હતી. ખાસ µLC ડિવાઇસ ડિટેક્ટર (UV-2075) અને ગ્લાસ-લાઇનવાળા માઇક્રોકોલમ. વધારાના કોલમ બેન્ડ બ્રોડનિંગની અસરને ઘટાડવા માટે ખૂબ જ સાંકડી અને ટૂંકી કનેક્ટિંગ ટ્યુબિંગનો ઉપયોગ કરો. પેકેજિંગ પછી, રિડ્યુસિંગ યુનિયનના 1/16″ આઉટલેટ પર કેશિલરી (50 μm id 365 અને રિડ્યુસિંગ યુનિયન કેશિલરી (50 μm) ઇન્સ્ટોલ કરવામાં આવી હતી. મલ્ટિક્રો 2000 સોફ્ટવેરનો ઉપયોગ કરીને ડેટા કલેક્શન અને ક્રોમેટોગ્રાફિક પ્રોસેસિંગ કરવામાં આવ્યું હતું. UV શોષણ માટે 254 nm એનાલિટિક્સ પર મોનિટરિંગનું પરીક્ષણ કરવામાં આવ્યું હતું. ક્રોમેટોગ્રાફિક ડેટાનું વિશ્લેષણ OriginPro8 (નોર્થમ્પ્ટન, MA) દ્વારા કરવામાં આવ્યું હતું.
માનવ સીરમમાંથી આલ્બ્યુમિન, લિયોફિલાઈઝ્ડ પાવડર, ≥ 96% (એગારોઝ જેલ ઇલેક્ટ્રોફોરેસિસ) 3 મિલિગ્રામ ટ્રિપ્સિન (1.5 મિલિગ્રામ), 4.0 મિલિગ્રામ યુરિયા (1 મિલિગ્રામ), અને 0.2 મિલિગ્રામ એમોનિયમ બાયકાર્બોનેટ (1 મિલિગ્રામ) સાથે મિશ્રિત. દ્રાવણને 10 મિનિટ સુધી હલાવવામાં આવ્યું અને 37°C પર 6 કલાક માટે પાણીના સ્નાનમાં રાખવામાં આવ્યું, પછી 0.1% TFA ના 1 મિલિગ્રામથી શાંત કરવામાં આવ્યું. દ્રાવણને ફિલ્ટર કરો અને 4 °C થી નીચે સ્ટોર કરો.
PMP કોલમ પર પેપ્ટાઇડ મિશ્રણ અને HSA ટ્રિપ્સિન ડાયજેસ્ટના વિભાજનનું મૂલ્યાંકન અલગથી કરવામાં આવ્યું હતું. PMP કોલમ દ્વારા પેપ્ટાઇડ મિશ્રણ અને HSA ના ટ્રિપ્સિન ડાયજેસ્ટના વિભાજનને તપાસો અને પરિણામોની તુલના એસેન્ટિસ એક્સપ્રેસ RP-Amide કોલમ સાથે કરો. સૈદ્ધાંતિક પ્લેટ નંબરની ગણતરી નીચે મુજબ કરવામાં આવે છે:
ખુલ્લા સિલિકા કણો અને લિગાન્ડ-બોન્ડેડ સિલિકા કણોની SEM છબીઓ આકૃતિ 2 માં બતાવવામાં આવી છે. ખુલ્લા સિલિકા કણો (A, B) ની SEM છબીઓ દર્શાવે છે કે, અમારા અગાઉના અભ્યાસોથી વિપરીત, આ કણો ગોળાકાર છે જેમાં કણો વિસ્તરેલ છે અથવા અનિયમિત સમપ્રમાણતા ધરાવે છે. લિગાન્ડ-બોન્ડેડ સિલિકા કણો (C, D) ની સપાટી ખુલ્લા સિલિકા કણો કરતાં સરળ છે, જે સિલિકા કણોની સપાટી પર પોલિસ્ટરીન સાંકળોના આવરણને કારણે હોઈ શકે છે.
ખુલ્લા સિલિકા કણો (A, B) અને લિગાન્ડ-બોન્ડેડ સિલિકા કણો (C, D) ની ઇલેક્ટ્રોન માઇક્રોસ્કોપ છબીઓનું સ્કેનિંગ.
ખુલ્લા સિલિકા કણો અને લિગાન્ડ-બોન્ડેડ સિલિકા કણોના કણ કદનું વિતરણ આકૃતિ 3(A) માં બતાવવામાં આવ્યું છે. વોલ્યુમ-આધારિત કણ કદ વિતરણ વળાંક દર્શાવે છે કે રાસાયણિક ફેરફાર પછી સિલિકા કણોનું કદ વધ્યું છે (આકૃતિ 3A). વર્તમાન અભ્યાસ અને અગાઉના અભ્યાસમાંથી સિલિકા કણોના કણ કદ વિતરણ ડેટાની તુલના કોષ્ટક 1(A) માં કરવામાં આવી છે. PMP નું વોલ્યુમ-આધારિત કણ કદ, d(0.5), 3.36 μm છે, જે અમારા અગાઉના અભ્યાસની સરખામણીમાં ad(0.5) મૂલ્ય 3.05 μm (પોલિસ્ટરીન-બાઉન્ડ સિલિકા કણો)34 સાથે છે. પ્રતિક્રિયા મિશ્રણમાં PEG, યુરિયા, TMOS અને એસિટિક એસિડના વિવિધ ગુણોત્તરને કારણે અમારા અગાઉના અભ્યાસની સરખામણીમાં આ બેચમાં કણ કદનું વિતરણ સાંકડું હતું. PMP તબક્કાનું કણ કદ અમે અગાઉ અભ્યાસ કરેલા પોલિસ્ટરીન-બાઉન્ડ સિલિકા કણ તબક્કા કરતા થોડું મોટું છે. આનો અર્થ એ છે કે સ્ટાયરીન સાથે સિલિકા કણોના સપાટી કાર્યાત્મકકરણથી સિલિકા સપાટી પર ફક્ત પોલિસ્ટરીન સ્તર (0.97 μm) જમા થયો હતો, જ્યારે PMP માં તબક્કા દરમિયાન સ્તરની જાડાઈ 1.38 µm હતી.
ખુલ્લા સિલિકા કણો અને લિગાન્ડ-બાઉન્ડ સિલિકા કણોનું કણ કદ વિતરણ (A) અને છિદ્ર કદ વિતરણ (B).
વર્તમાન અભ્યાસના સિલિકા કણોનું છિદ્ર કદ, છિદ્ર વોલ્યુમ અને સપાટી ક્ષેત્રફળ કોષ્ટક 1(B) માં આપવામાં આવ્યું છે. એકદમ સિલિકા કણો અને લિગાન્ડ-બોન્ડેડ સિલિકા કણોની PSD પ્રોફાઇલ્સ આકૃતિ 3(B) માં બતાવવામાં આવી છે. પરિણામો અમારા અગાઉના અભ્યાસ સાથે તુલનાત્મક છે. એકદમ અને લિગાન્ડ-બાઉન્ડ સિલિકા કણોના છિદ્ર કદ અનુક્રમે 310 અને 241 છે, જે દર્શાવે છે કે રાસાયણિક ફેરફાર પછી છિદ્ર કદ 69 ઘટે છે, જેમ કે કોષ્ટક 1(B) માં દર્શાવવામાં આવ્યું છે, અને વળાંકમાં ફેરફાર આકૃતિ 3(B) માં દર્શાવવામાં આવ્યો છે. તેવી જ રીતે, રાસાયણિક ફેરફાર પછી સિલિકા કણોનું છિદ્ર વોલ્યુમ 0.67 થી ઘટીને 0.58 cm3/g થયું છે. હાલમાં અભ્યાસ કરાયેલ સિલિકા કણોનું ચોક્કસ સપાટી ક્ષેત્રફળ 116 m2/g છે, જે અમારા અગાઉના અભ્યાસ (124 m2/g) સાથે તુલનાત્મક છે. કોષ્ટક 1(B) માં બતાવ્યા પ્રમાણે, સિલિકા કણોનું સપાટી ક્ષેત્રફળ (m2/g) પણ 116 m2/g થી ઘટીને રાસાયણિક ફેરફાર પછી ૧૦૫ મીટર ૨/ગ્રામ.
સ્થિર તબક્કાના તત્વ વિશ્લેષણના પરિણામો કોષ્ટક 2 માં દર્શાવવામાં આવ્યા છે. વર્તમાન સ્થિર તબક્કાનું કાર્બન લોડિંગ 6.35% છે, જે અમારા અગાઉના અભ્યાસના કાર્બન લોડિંગ કરતા ઓછું છે (પોલિસ્ટરીન બોન્ડેડ સિલિકા કણો, અનુક્રમે 7.93%35 અને 10.21%) 42. વર્તમાન સ્થિર તબક્કાનું કાર્બન લોડિંગ ઓછું છે, કારણ કે વર્તમાન SP ની તૈયારીમાં, સ્ટાયરીન ઉપરાંત, ફિનાઇલમેલાઇમાઇડ-મિથાઇલવિનાઇલિસોસાયનેટ (PCMP) અને 4-હાઇડ્રોક્સી-ટેમ્પો જેવા કેટલાક ધ્રુવીય લિગાન્ડનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો. વર્તમાન સ્થિર તબક્કાના નાઇટ્રોજન વજન ટકાવારી 2.21% છે, જે અગાઉના અભ્યાસોમાં નાઇટ્રોજનના વજન દ્વારા અનુક્રમે 0.1735 અને 0.85% છે. આનો અર્થ એ છે કે ફિનાઇલમેલાઇમાઇડને કારણે વર્તમાન સ્થિર તબક્કામાં નાઇટ્રોજનનું wt % વધારે છે. તેવી જ રીતે, ઉત્પાદનો (4) અને (5) ના કાર્બન લોડિંગ અનુક્રમે 2.7% અને 2.9% હતા, જ્યારે કોષ્ટક 2 માં બતાવ્યા પ્રમાણે, અંતિમ ઉત્પાદન (6) નું કાર્બન લોડિંગ 6.35% હતું. વજન ઘટાડાને PMP સ્ટેશનરી ફેઝ સાથે તપાસવામાં આવ્યું હતું, અને TGA વળાંક આકૃતિ 4 માં બતાવવામાં આવ્યો છે. TGA વળાંક 8.6% વજન ઘટાડા દર્શાવે છે, જે કાર્બન લોડિંગ (6.35%) સાથે સારા કરારમાં છે કારણ કે લિગાન્ડમાં માત્ર C જ નહીં પણ N, O અને H પણ હોય છે.
સિલિકા કણોના સપાટી ફેરફાર માટે ફિનાઇલમેલાઇમાઇડ-મિથાઇલવિનાઇલિસોસાયનેટ લિગાન્ડ પસંદ કરવામાં આવ્યું હતું કારણ કે તેમાં ધ્રુવીય ફિનાઇલમેલાઇમાઇડ જૂથો અને વિનીલિસોસાયનેટ જૂથો છે.વિનાઇલ આઇસોસાયનેટ જૂથો જીવંત રેડિકલ પોલિમરાઇઝેશન દ્વારા સ્ટાયરીન સાથે વધુ પ્રતિક્રિયા આપી શકે છે.બીજું કારણ એ છે કે એવા જૂથને દાખલ કરવું જે વિશ્લેષક સાથે મધ્યમ ક્રિયાપ્રતિક્રિયા ધરાવે છે અને વિશ્લેષક અને સ્થિર તબક્કા વચ્ચે કોઈ મજબૂત ઇલેક્ટ્રોસ્ટેટિક ક્રિયાપ્રતિક્રિયા નથી, કારણ કે ફિનાઇલમેલાઇમાઇડ ટુકડામાં સામાન્ય pH પર કોઈ વર્ચ્યુઅલ ચાર્જ નથી.સ્થિર તબક્કાની ધ્રુવીયતાને સ્ટાયરીનની શ્રેષ્ઠ માત્રા અને મુક્ત રેડિકલ પોલિમરાઇઝેશનના પ્રતિક્રિયા સમય દ્વારા નિયંત્રિત કરી શકાય છે.પ્રક્રિયાનું છેલ્લું પગલું (ફ્રી-રેડિકલ પોલિમરાઇઝેશન) મહત્વપૂર્ણ છે અને સ્થિર તબક્કાની ધ્રુવીયતાને બદલી શકે છે.આ સ્થિર તબક્કાઓના કાર્બન લોડિંગને ચકાસવા માટે પ્રાથમિક વિશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું.એવું જોવા મળ્યું હતું કે સ્ટાયરીનનું પ્રમાણ અને પ્રતિક્રિયા સમય વધારવાથી સ્થિર તબક્કાના કાર્બન લોડિંગમાં વધારો થયો છે અને તેનાથી વિપરીત.સ્ટાયરીનની વિવિધ સાંદ્રતા સાથે તૈયાર કરાયેલા SP માં વિવિધ કાર્બન લોડિંગ હોય છે.ફરીથી, આ સ્થિર તબક્કાઓને સ્ટેનલેસ સ્ટીલ સ્તંભોમાં લોડ કરો અને તેમના તપાસો ક્રોમેટોગ્રાફિક કામગીરી (પસંદગી, રીઝોલ્યુશન, N મૂલ્ય, વગેરે). આ પ્રયોગોના આધારે, નિયંત્રિત ધ્રુવીયતા અને સારી વિશ્લેષણાત્મક રીટેન્શન સુનિશ્ચિત કરવા માટે PMP સ્થિર તબક્કા તૈયાર કરવા માટે એક ઑપ્ટિમાઇઝ ફોર્મ્યુલેશન પસંદ કરવામાં આવ્યું હતું.
મોબાઇલ ફેઝનો ઉપયોગ કરીને PMP કોલમનો ઉપયોગ કરીને પાંચ પેપ્ટાઇડ મિશ્રણો (ગ્લાય-ટાયર, ગ્લાય-લ્યુ-ટાયર, ગ્લાય-ગ્લાય-ટાયર-આર્ગ, ટાયર-ઇલ-ગ્લાય-સેર-આર્ગ, લ્યુસીન એન્કેફાલિન) નું પણ મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું હતું; 80 μL/મિનિટના પ્રવાહ દરે 60/40 (v/v) એસેટોનિટ્રાઇલ/પાણી (0.1% TFA). શ્રેષ્ઠ ઉત્સર્જન પરિસ્થિતિઓમાં, સૈદ્ધાંતિક પ્લેટ નંબર (N) પ્રતિ કૉલમ (100 × 1.8 mm id) 20,000 ± 100 (200,000 પ્લેટ/m²) છે. કોષ્ટક 3 ત્રણ PMP કૉલમ માટે N મૂલ્યો આપે છે અને ક્રોમેટોગ્રામ આકૃતિ 5A માં દર્શાવેલ છે. ઉચ્ચ પ્રવાહ દર (700 μL/મિનિટ) પર PMP કૉલમ પર ઝડપી વિશ્લેષણ, એક મિનિટમાં પાંચ પેપ્ટાઇડ્સ એલ્યુટ કરવામાં આવ્યા હતા, N મૂલ્યો ખૂબ સારા હતા, 13,500 ± 330 પ્રતિ કૉલમ (100 × 1.8 mm id), 135,000 પ્લેટ/m (આકૃતિ 5B) ને અનુરૂપ છે. ત્રણ સમાન કદના કૉલમ (100 × 1.8 mm id) તપાસવા માટે PMP સ્થિર તબક્કાના ત્રણ અલગ અલગ લોટથી પેક કરવામાં આવ્યા હતા. પ્રજનનક્ષમતા. દરેક સ્તંભ માટે વિશ્લેષણાત્મક સાંદ્રતા શ્રેષ્ઠ ઉત્સર્જન પરિસ્થિતિઓ અને સૈદ્ધાંતિક પ્લેટોની સંખ્યા N અને રીટેન્શન સમયનો ઉપયોગ કરીને રેકોર્ડ કરવામાં આવી હતી જેથી દરેક સ્તંભ પર સમાન પરીક્ષણ મિશ્રણને અલગ કરી શકાય. PMP સ્તંભો માટે પ્રજનનક્ષમતા ડેટા કોષ્ટક 4 માં દર્શાવવામાં આવ્યો છે. કોષ્ટક 3 માં બતાવ્યા પ્રમાણે, PMP સ્તંભની પ્રજનનક્ષમતા ખૂબ ઓછા %RSD મૂલ્યો સાથે સારી રીતે સંબંધિત છે.
PMP કોલમ (B) અને એસેન્ટિસ એક્સપ્રેસ RP-Amide કોલમ (A) પર પેપ્ટાઇડ મિશ્રણનું વિભાજન; મોબાઇલ ફેઝ 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP કોલમ પરિમાણો (100 × 1.8 mm id); વિશ્લેષણાત્મક સંયોજનોનો ઉત્સર્જન ક્રમ: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) અને 5 (leucine) એસિડ એન્કેફાલિન)).
ઉચ્ચ પ્રદર્શન પ્રવાહી ક્રોમેટોગ્રાફીમાં માનવ સીરમ આલ્બ્યુમિનના ટ્રિપ્ટિક ડાયજેસ્ટને અલગ કરવા માટે PMP કોલમ (100 × 1.8 mm id) નું મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું હતું. આકૃતિ 6 માં ક્રોમેટોગ્રામ દર્શાવે છે કે નમૂના સારી રીતે અલગ થયેલ છે અને રિઝોલ્યુશન ખૂબ સારું છે. 100 µL/મિનિટના પ્રવાહ દર, મોબાઇલ ફેઝ 70/30 એસિટોનિટ્રાઇલ/પાણી અને 0.1% TFA નો ઉપયોગ કરીને HSA ડાયજેસ્ટનું વિશ્લેષણ કરવામાં આવ્યું હતું. ક્રોમેટોગ્રામ (આકૃતિ 6) માં બતાવ્યા પ્રમાણે, HSA ડાયજેસ્ટને 17 પેપ્ટાઇડ્સને અનુરૂપ 17 શિખરોમાં વિભાજિત કરવામાં આવ્યું છે. HSA ડાયજેસ્ટમાં દરેક શિખરની વિભાજન કાર્યક્ષમતાની ગણતરી કરવામાં આવી હતી અને મૂલ્યો કોષ્ટક 5 માં આપવામાં આવ્યા છે.
PMP કોલમ પર HSA (100 × 1.8 mm id) નું ટ્રિપ્ટિક ડાયજેસ્ટ અલગ કરવામાં આવ્યું હતું; ફ્લો રેટ (100 µL/મિનિટ), મોબાઇલ ફેઝ 60/40 એસિટોનિટ્રાઇલ/પાણી 0.1% TFA સાથે.
જ્યાં L એ સ્તંભની લંબાઈ છે, η એ મોબાઇલ તબક્કાની સ્નિગ્ધતા છે, ΔP એ કોલમ બેક પ્રેશર છે, અને u એ મોબાઇલ તબક્કાનો રેખીય વેગ છે. PMP કોલમની અભેદ્યતા 2.5 × 10-14 m2 હતી, પ્રવાહ દર 25 μL/મિનિટ હતો, અને 60/40 v/v ACN/પાણીનો ઉપયોગ કરવામાં આવ્યો હતો. PMP કોલમ (100 × 1.8 mm id) ની અભેદ્યતા અમારા અગાઉના અભ્યાસ જેવી જ હતી. સંદર્ભ 34. સુપરફિસિયલ છિદ્રાળુ કણોથી ભરેલા કોલમની અભેદ્યતા છે: 1.3 μm કણો માટે 1.7 × 10-15, 1.7 μm કણો માટે 3.1 × 10-15, 5.2 × 10-15 અને 2.6 μm કણો માટે 2.5 × 10-14 m2 5 μm કણો માટે 43. તેથી, PMP તબક્કાની અભેદ્યતા 5 μm જેટલી જ છે. કોર-શેલ કણો.
જ્યાં Wx એ ક્લોરોફોર્મથી ભરેલા સ્તંભનું વજન છે, Wy એ મિથેનોલથી ભરેલા સ્તંભનું વજન છે, અને ρ એ દ્રાવકની ઘનતા છે. મિથેનોલની ઘનતા (ρ = 0.7866) અને ક્લોરોફોર્મ (ρ = 1.484). SILICA PARTICLES-C18 સ્તંભો (100 × 1.8 mm id) 34 અને C18-યુરિયા સ્તંભો 31 ની કુલ છિદ્રાળુતા જેનો આપણે અગાઉ અભ્યાસ કર્યો હતો તે અનુક્રમે 0.63 અને 0.55 હતી. આનો અર્થ એ છે કે યુરિયા લિગાન્ડ્સની હાજરી સ્થિર તબક્કાની અભેદ્યતા ઘટાડે છે. બીજી બાજુ, PMP સ્તંભ (100 × 1.8 mm id) ની કુલ છિદ્રાળુતા 0.60 છે. PMP સ્તંભોની અભેદ્યતા C18-બોન્ડેડ સિલિકા કણોથી ભરેલા સ્તંભો કરતા ઓછી છે કારણ કે C18-પ્રકારના સ્થિર તબક્કાઓમાં C18 લિગાન્ડ્સ સિલિકા કણો સાથે રેખીય સાંકળ તરીકે જોડાયેલા હોય છે, જ્યારે પોલિસ્ટરીન-પ્રકારમાં સ્થિર તબક્કાઓ, તેની આસપાસ પ્રમાણમાં જાડા પોલિમર સ્તર રચાય છે. એક લાક્ષણિક પ્રયોગમાં, સ્તંભ છિદ્રાળુતાની ગણતરી નીચે મુજબ કરવામાં આવે છે:
આકૃતિ 7A,B વાન ડીમ્ટર પ્લોટના સમાન એલ્યુશન શરતો (એટલે ​​કે, 60/40 ACN/H2O અને 0.1% TFA) નો ઉપયોગ કરીને PMP કોલમ (100 × 1.8 mm id) અને એસેન્ટિસ એક્સપ્રેસ RP-Amide કોલમ (100 × 1.8 mm id) દર્શાવે છે. પસંદ કરેલા પેપ્ટાઇડ મિશ્રણો (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) 20 µL/ માં તૈયાર કરવામાં આવ્યા હતા. બંને સ્તંભો માટે લઘુત્તમ પ્રવાહ દર 800 µL/મિનિટ છે. PMP સ્તંભ અને Ascentis Express RP-Amide સ્તંભ માટે શ્રેષ્ઠ પ્રવાહ દર (80 µL/મિનિટ) પર લઘુત્તમ HETP મૂલ્યો અનુક્રમે 2.6 µm અને 3.9 µm હતા. HETP મૂલ્યો દર્શાવે છે કે PMP સ્તંભ (100 × 1.8 mm id) ની વિભાજન કાર્યક્ષમતા વ્યાપારી રીતે ઉપલબ્ધ Ascentis Express RP-Amide સ્તંભ (100 × 1.8 mm id) કરતા ઘણી સારી છે. આકૃતિ 7(A) માં વાન ડીમીટર પ્લોટ દર્શાવે છે કે વધતા પ્રવાહ સાથે N મૂલ્યમાં ઘટાડો અમારા અગાઉના અભ્યાસની તુલનામાં નોંધપાત્ર નથી. PMP સ્તંભની ઉચ્ચ વિભાજન કાર્યક્ષમતા (100 × 1.8 mm id) એસેંટિસ એક્સપ્રેસ RP-Amide કોલમની સરખામણીમાં, વર્તમાન કાર્ય34 માં ઉપયોગમાં લેવાતા કણોના આકાર, કદ અને જટિલ કોલમ પેકિંગ પ્રક્રિયાઓમાં સુધારા પર આધારિત છે.
(A) 0.1% TFA સાથે 60/40 ACN/H2O માં PMP કોલમ (100 × 1.8 mm id) નો ઉપયોગ કરીને મેળવેલ વાન ડીમીટર પ્લોટ (HETP વિરુદ્ધ મોબાઇલ ફેઝ રેખીય વેગ). (B) 0.1% TFA સાથે 60/40 ACN/H2O માં એસેન્ટિસ એક્સપ્રેસ RP-Amide કોલમ (100 × 1.8 mm id) નો ઉપયોગ કરીને મેળવેલ વાન ડીમીટર પ્લોટ (HETP વિરુદ્ધ મોબાઇલ ફેઝ રેખીય વેગ).
ઉચ્ચ પ્રદર્શન પ્રવાહી ક્રોમેટોગ્રાફીમાં કૃત્રિમ પેપ્ટાઇડ મિશ્રણ અને માનવ સીરમ આલ્બ્યુમિન (HAS) ના ટ્રિપ્સિન ડાયજેસ્ટને અલગ કરવા માટે ધ્રુવીય-એમ્બેડેડ પોલિસ્ટરીન સ્થિર તબક્કો તૈયાર કરવામાં આવ્યો હતો અને તેનું મૂલ્યાંકન કરવામાં આવ્યું હતું. પેપ્ટાઇડ મિશ્રણ માટે PMP સ્તંભોનું ક્રોમેટોગ્રાફિક પ્રદર્શન અલગ કરવાની કાર્યક્ષમતા અને રિઝોલ્યુશનમાં ઉત્તમ છે. PMP સ્તંભોનું સુધારેલું અલગ કરવાની કામગીરી વિવિધ કારણોસર છે, જેમ કે સિલિકા કણોના કણ કદ અને છિદ્ર કદ, સ્થિર તબક્કાનું નિયંત્રિત સંશ્લેષણ અને જટિલ સ્તંભ પેકિંગ. ઉચ્ચ વિભાજન કાર્યક્ષમતા ઉપરાંત, ઉચ્ચ પ્રવાહ દરે નીચું સ્તંભ બેક દબાણ આ સ્થિર તબક્કાનો બીજો ફાયદો છે. PMP સ્તંભો સારી પ્રજનનક્ષમતા દર્શાવે છે અને તેનો ઉપયોગ પેપ્ટાઇડ મિશ્રણના વિશ્લેષણ અને વિવિધ પ્રોટીનના ટ્રિપ્સિન પાચન માટે થઈ શકે છે. અમે આ સ્તંભનો ઉપયોગ કુદરતી ઉત્પાદનો, ઔષધીય છોડમાંથી બાયોએક્ટિવ સંયોજનો અને ફૂગના અર્કને અલગ કરવા માટે પ્રવાહી ક્રોમેટોગ્રાફીમાં કરવાનો ઇરાદો રાખીએ છીએ. ભવિષ્યમાં, પ્રોટીન અને મોનોક્લોનલ એન્ટિબોડીઝના અલગ કરવા માટે PMP સ્તંભોનું પણ મૂલ્યાંકન કરવામાં આવશે.
ફીલ્ડ, જેકે, યુર્બી, એમઆર, લાઉ, જે., થોગરસન, એચ. અને પીટરસન, પી. રિવર્સ્ડ ફેઝ ક્રોમેટોગ્રાફી દ્વારા પેપ્ટાઇડ સેપરેશન સિસ્ટમ્સ પર સંશોધન ભાગ I: કોલમ કેરેક્ટરાઇઝેશન પ્રોટોકોલનો વિકાસ.જે. ક્રોમેટોગ્રાફી.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
ગોમેઝ, બી. એટ અલ. ચેપી રોગોની સારવાર માટે રચાયેલ સુધારેલ સક્રિય પેપ્ટાઇડ્સ. બાયોટેકનોલોજી.એડવાન્સ્ડ.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
વ્લીઘે, પી., લિસોવસ્કી, વી., માર્ટિનેઝ, જે. અને ખ્રેસ્ટચેટિસ્કી, એમ. સિન્થેટિક થેરાપ્યુટિક પેપ્ટાઇડ્સ: વિજ્ઞાન અને બજાર. દવા શોધ.15 (1-2) આજે, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
ઝી, એફ., સ્મિથ, આરડી અને શેન, વાય. એડવાન્સ્ડ પ્રોટીઓમિક લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી.જે. ક્રોમેટોગ્રાફી.એ 1261, 78–90 (2012).
લિયુ, ડબલ્યુ. એટ અલ. એડવાન્સ્ડ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી-માસ સ્પેક્ટ્રોમેટ્રી વ્યાપક રીતે લક્ષિત મેટાબોલોમિક્સ અને પ્રોટીઓમિક્સનો સમાવેશ સક્ષમ બનાવે છે.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019).
ચેસ્નટ, એસએમ અને સેલિસ્બરી, જેજે દવાના વિકાસમાં યુએચપીએલસીની ભૂમિકા.જે. સપ્ટે. સાય.30(8), 1183-1190 (2007).
વુ, એન. અને ક્લોસેન, એએમ. ઝડપી વિભાજન માટે અલ્ટ્રાહાઇ પ્રેશર લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફીના મૂળભૂત અને વ્યવહારુ પાસાં. જે. સપ્ટે. સાય.30(8), 1167-1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
રેન, એસએ અને ચેલિટેચેફ, પી. દવા વિકાસમાં અલ્ટ્રા-હાઇ પરફોર્મન્સ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફીનો ઉપયોગ. જે. ક્રોમેટોગ્રાફી.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
ગુ, એચ. એટ અલ. એન્ટરવાયરસના કાર્યક્ષમ શુદ્ધિકરણ માટે તેલ-ઇન-વોટર હાઇ ઇન્ટરનલ ફેઝ ઇમલ્સનમાંથી તૈયાર કરાયેલ મોનોલિથિક મેક્રોપોરસ હાઇડ્રોજેલ્સ.કેમિકલ.બ્રિટન.જે. 401, 126051 (2020).
શી, વાય., ઝિયાંગ, આર., હોર્વાથ, સી. અને વિલ્કિન્સ, જેએ પ્રોટીઓમિક્સમાં પ્રવાહી ક્રોમેટોગ્રાફીની ભૂમિકા. જે. ક્રોમેટોગ્રાફી. એ 1053(1-2), 27-36 (2004).
ફેકેટે, એસ., વેઉથે, જે.-એલ. અને ગિલાર્મે, ડી. ઉપચારાત્મક પેપ્ટાઇડ્સ અને પ્રોટીનના રિવર્સ્ડ-ફેઝ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી સેપરેશનમાં ઉભરતા વલણો: સિદ્ધાંત અને એપ્લિકેશનો.જે. ફાર્મસી.બાયોમેડિકલ સાયન્સ.એનસ.69, 9-27 (2012).
ગિલર, એમ., ઓલિવોવા, પી., ડેલી, એઇ અને ગેબલર, જેસી. પ્રથમ અને બીજા વિભાજન પરિમાણોમાં વિવિધ pH મૂલ્યોનો ઉપયોગ કરીને RP-RP-HPLC સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરીને પેપ્ટાઇડ્સનું દ્વિ-પરિમાણીય વિભાજન.જે. સપ્ટે. Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
ફેલેટ્ટી, એસ. એટ અલ. C18 સબ-2 μm સંપૂર્ણ અને સુપરફિસિયલ છિદ્રાળુ કણોથી ભરેલા ઉચ્ચ-કાર્યક્ષમતાવાળા ક્રોમેટોગ્રાફિક સ્તંભોની માસ ટ્રાન્સફર લાક્ષણિકતાઓ અને ગતિ પ્રદર્શનની તપાસ કરવામાં આવી હતી.જે. સપ્ટેમ્બર. સાયન્સ.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
પિઓવેસાના, એસ. એટ અલ. છોડના બાયોએક્ટિવ પેપ્ટાઇડ્સના અલગતા, ઓળખ અને માન્યતામાં તાજેતરના વલણો અને વિશ્લેષણાત્મક પડકારો.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
મુલર, જેબી એટ અલ. જીવનના રાજ્યનો પ્રોટીઓમિક લેન્ડસ્કેપ. કુદરત 582(7813), 592-596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
ડેલુકા, સી. એટ અલ. પ્રિપેરેટિવ લિક્વિડ ક્રોમેટોગ્રાફી દ્વારા ઉપચારાત્મક પેપ્ટાઇડ્સની ડાઉનસ્ટ્રીમ પ્રોસેસિંગ. મોલેક્યુલ (બેઝલ, સ્વિટ્ઝર્લૅન્ડ) 26(15), 4688(2021).
યાંગ, વાય. અને ગેંગ, એક્સ. મિશ્ર-મોડ ક્રોમેટોગ્રાફી અને બાયોપોલિમર્સમાં તેનો ઉપયોગ. જે. ક્રોમેટોગ્રાફી.એ 1218(49), 8813–8825 (2011).
ઝાઓ, જી., ડોંગ, એક્સ.-વાય. અને સન, વાય. મિશ્ર-મોડ પ્રોટીન ક્રોમેટોગ્રાફી માટે લિગાન્ડ્સ: સિદ્ધાંત, લાક્ષણિકતા અને ડિઝાઇન.જે. બાયોટેકનોલોજી.144(1), 3-11 (2009).