Nature.com сайтад зочилсонд баярлалаа. Таны ашиглаж буй хөтчийн хувилбар нь CSS-г хязгаарлагдмал дэмждэг. Хамгийн сайн ашиглахын тулд бид танд шинэчилсэн хөтөч ашиглахыг зөвлөж байна (эсвэл Internet Explorer дээр нийцтэй байдлын горимыг унтраах). Энэ хооронд үргэлжлүүлэн дэмжлэг үзүүлэхийн тулд бид сайтыг загвар болон JavaScript-гүй харуулах болно.
Сүвэрхэг цахиурын тоосонцорыг соль-гелийн аргаар бэлтгэж, макро сүвэрхэг хэсгүүдийг гаргаж авсан. Эдгээр хэсгүүдийг N-фенилмалеймид-метилвинилизоцианат (PMI) ба стиролоор урвуу нэмэлт хуваагдах гинжин дамжуулалт (RAFT) полимержилтоор гаргаж авч, N-фенилмалеймидын полимеример (н-фенилмалеимид)-ийн стиролыг бэлтгэсэн. үе шат. Нарийн цооногтой зэвэрдэггүй ган багануудыг (100 × 1.8 мм-ийн id) зутангаар савласан. Таван пептид (Гли-Тир, Гли-Лью-Тир, Гли-Гли-Тир-Арг, Тир-Иле-ал-Арг, Тир-Иле-Арг-Арг)-аас бүрдэх пептидийн хольцыг PMP баганаар ялгах. хроматографийн гүйцэтгэл) болон хүний ​​ийлдэс альбумин (HAS) -ийн трипсин задрал. Оновчтой шүүрлийн нөхцөлд пептидийн хольцын онолын хавтангийн тоо 280,000 хавтан/м² хүртэл өндөр байна. Боловсруулсан баганын салгах үзүүлэлтийг арилжааны Ascentis Express RP-Amide баганатай харьцуулж үзэхэд PMP баганын арилжааны үр ашиг болон ялгах баганын үр ашигтай байдал ажиглагдсан. тогтоол.
Сүүлийн жилүүдэд био эмийн үйлдвэр нь зах зээлд эзлэх хувь мэдэгдэхүйц нэмэгдэж, дэлхийн зах зээл болж өргөжин тэлж байна. Био эм үйлдвэрлэлийн салбар эрчимтэй хөгжиж байгаатай холбоотойгоор пептид, уургийн шинжилгээ маш их эрэлт хэрэгцээтэй байна. Зорилтот пептидээс гадна пептидийн нийлэгжилтийн явцад хэд хэдэн хольц үүсдэг тул пептидийн нийлэгжилтийг хроматографийн аргаар авахыг шаарддаг. цэвэр байдал. Биеийн шингэн, эд, эс дэх уургийн шинжилгээ, шинж чанарыг тодорхойлох нь нэг дээжинд олон тооны илрэх боломжтой зүйлүүд байдаг тул маш хэцүү ажил юм. Масс спектрометр нь пептид ба уургийн дарааллыг тогтоох үр дүнтэй хэрэгсэл боловч хэрэв ийм дээжийг масс спектрометрт нэг дамжлагад оруулбал шингэнийг ялгах нь оновчтой биш байх болно. MS шинжилгээний өмнө ялгах, энэ нь тухайн үед масс спектрометрт орж буй аналитийн тоог бууруулна4,5,6. Үүнээс гадна шингэн фазын салгах явцад аналитуудыг нарийн бүс нутагт төвлөрүүлж, улмаар эдгээр аналитуудыг төвлөрүүлж, MS илрүүлэх мэдрэмжийг сайжруулдаг. Шингэн хроматографи (LC) нь сүүлийн жилүүдэд ихээхэн хөгжиж, сүүлийн үед түгээмэл хэрэглэгддэг арга болжээ. шинжилгээ7,8,9,10.
Урвуу фазын шингэний хроматографи (RP-LC) нь октадецилийн өөрчилсөн цахиур (ODS) ашиглан пептидийн хольцыг цэвэршүүлэх, салгахад өргөн хэрэглэгддэг11,12,13. Гэсэн хэдий ч RP стационар фазууд нь нарийн төвөгтэй бүтэц14, амфиль шинж чанараараа пептид, уургийг хангалттай ялгаж чаддаггүй14. Эдгээр аналитуудтай харилцан үйлчилж, тэдгээрийг хадгалахын тулд туйл ба туйл бус хэсэг бүхий пептид, уурагуудыг шинжлэхийн тулд тусгайлан зохион бүтээсэн суурин фазууд шаардлагатай байдаг16. Мультимодал харилцан үйлчлэлийг хангадаг холимог горимын хроматограф нь пептид, уураг болон бусад нарийн төвөгтэй хольцыг салгахад RP-LC-ийн өөр хувилбар байж болно. have been used for peptide and protein separations17,18,19,20,21.Mixed-mode stationary phases (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC) are suitable for peptide and protein separations due to the presence of both polar and non-polar groups22,23,24,25,26,27,28 .Similarly, polar intercalating stationary Ковалентын холболттой туйлын бүлгүүдтэй фазууд нь ялгах чадвар сайтай, туйл ба туйл бус шинжлүүлэгчдийн өвөрмөц сонгомол чанарыг харуулдаг тул ялгах нь шинжлэгдэх бодис ба суурин фазын харилцан үйлчлээс хамаардаг. Multimodal харилцан үйлчлэл 29, 30, 31, 32. Саяхан, Zhang et al. 30 нь додецил төгсгөлтэй полиамин стационар фазыг бэлтгэж, нүүрсустөрөгч, антидепрессант, флавоноид, нуклеозид, эстроген болон бусад хэд хэдэн аналитуудыг амжилттай ялгаж салгасан. Туйл интеркалатор нь туйлшрал ба туйлшралгүй бүлгүүдтэй тул пептид ба уургийг гидрофоб ба гидрофоби, гидрофоб багана, уургийг ялгахад ашиглаж болно. амид суулгагдсан C18 багана) нь Ascentis Express RP-Amide багана худалдааны нэрээр худалдаалагдаж байгаа боловч эдгээр багануудыг зөвхөн амин 33-ын шинжилгээнд ашигладаг.
Одоогийн судалгаанд туйлтай суурин фазыг (N-фенилмалеймидэд агуулагдсан полистирол) бэлтгэж, HSA-ийн пептид ба трипсин задралыг ялгах зорилгоор үнэлэв. Тогтвортой үе шатыг дараах стратеги ашиглан бэлтгэсэн. Сүвэрхэг цахиурын тоосонцорыг манай өмнөх хэвлэлд өгөгдсөн журмын дагуу бэлтгэсэн бөгөөд зарим өөрчлөлтийн дагуу полиэтиленийн харьцаатай. гликол (PEG), TMOS, усны цууны хүчлийг том нүхтэй цахиурын тоосонцор бэлтгэхийн тулд тохируулсан. Хоёрдугаарт, шинэ лиганд болох фенилмалеймид-метил винил изоцианатыг нийлэгжүүлж, цахиурын тоосонцорыг гарган авахдаа туйлширсан суурин фазыг (үр дүнд нь тогтворгүй ган фаз болгон хувиргахад ашигласан ×0) 1.8 мм id) оновчтой баглаа боодлын схемийг ашиглан. Баганын савлагаа нь механик чичиргээний тусламжтайгаар баганын дотор нэгэн төрлийн давхарга үүсэхийг баталгаажуулдаг. Таван пептидээс бүрдэх пептидийн хольцын савласан баганын салалтыг үнэлэх; (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) болон хүний ​​ийлдэс альбумины трипсин задрал (HAS). Пептидийн холимог болон HSA-ийн трипсин задрал нь сайн нягтаршилтай, ялгах чадвар нь PMP-ийн гүйцэтгэлтэй харьцуулахад ажиглагдсан. RP-Amide багана. Ascentis Express RP-Amide баганаас илүү үр дүнтэй PMP багана дээр пептид болон уураг хоёулаа сайн шийдэгдэж, үр дүнтэй байгаа нь ажиглагдсан.
PEG (полиэтилен гликол), мочевин, цууны хүчил, триметокси ортосиликат (TMOS), триметил хлорсилан (TMCS), трипсин, хүний ​​ийлдэс альбумин (HSA), аммонийн хлорид, мочевин, гексан метилдисилазан (HMDS), хлорид, хлорид, ст. 4-Hydroxy-TEMPO, Benzoyl Peroxide (BPO), HPLC зэрэглэлийн ацетонитрил (ACN), метанол, 2-пропанол, ацетоныг Сигма-Алдрих (Сент-Луис, MO, АНУ)-аас худалдаж авсан.
Мочевин (8 гр), полиэтилен гликол (8 гр), 8 мл 0.01 Н цууны хүчлийн холимогийг 10 минутын турш хутгаж, дараа нь мөс шиг хүйтэн нөхцөлд 24 мл TMOS нэмсэн. Урвалын хольцыг 40 ° C-т 6 цагийн турш халааж, дараа нь 120 ° C-т гангаар 8 цаг байлгана. асгаж, үлдэгдэл материалыг 70°С-т 12 цагийн турш хатаана. Хатаасан зөөлөн массыг зууханд жигд нунтаглаж, 550°С-т 12 цагийн турш кальцилсан. Гурван багцыг бэлтгэж, бөөмийн хэмжээ, нүх сүвний хэмжээ, гадаргуугийн талбайн нөхөн үржих чадварыг шалгахын тулд тодорхойлсон.
Урьдчилан нийлэгжүүлсэн фенилмалеймид-метилвинилизоцианат (PCMP)-ийн тусламжтайгаар цахиурын тоосонцорыг гадаргуугийн хувиргаж, дараа нь стиролоор радиаль полимержүүлснээр туйлын бүлэг агуулсан нэгдэл бэлтгэсэн. Дүүргэгч болон полистирол гинжний суурин үе шат.Бэлтгэх үйл явцыг доор тайлбарлав.
N-фенилмалеймид (200 мг) ба метил винил изоцианатыг (100 мг) хуурай толуолд уусгаж, 0.1 мл 2,2′-азоизобутиронитрил (AIBN)-ийг урвалын колбонд нэмж фенилмалеймид-метил винилполиполимерийг халааж бэлтгэнэ. 60 градусын температурт 3 цаг, шүүж, 40 градусын температурт зууханд 3 цагийн турш хатаана.
Хатаасан цахиурын тоосонцорыг (2 гр) хуурай толуолд (100 мл) тарааж, хутгаж, 500 мл дугуй ёроолтой колбонд 10 минутын турш дуу алддаг. PMCP (10 мг) толуолд уусгаж, дуслын юүлүүрээр урвалын колбонд дуслаар нэмсэн. Холимогийг 1 цагийн турш шүүж, шүүнэ. ацетон хийж, 60°С-т 3 цагийн турш хатаана. Дараа нь PMCP-тай холбогдсон цахиурын тоосонцорыг (100 гр) толуолд (200 мл) уусгаж, 4-гидрокси-TEMPO (2 мл) 100 мкл дибутилтин дилаураттай холиод 58 цагийн турш катализатор болгон шүүнэ. ба 50°С-т 3 цагийн турш хатаана.
Стирол (1 мл), бензоил хэт исэл BPO (0.5 мл), TEMPO-PMCP-тэй хавсарсан цахиурын тоосонцор (1.5 гр)-ийг толуолд тарааж, азотоор цэвэрлэв. Стиролын полимержилтийг 100 градусын температурт 12 цагийн турш явуулна. Үүссэн бүтээгдэхүүнийг метолоор угааж, шөнийн цагаар угаана. урвалын ерөнхий схемийг Зураг 1-т үзүүлэв.
Дээжийг 10-3 Торр-аас бага үлдэгдэл даралтыг олж авахын тулд 393 К-т 1 цагийн турш хийгүйжүүлсэн. P/P0 = 0.99 харьцангуй даралтад шингэсэн N2-ийн хэмжээг нийт нүхний эзэлхүүнийг тодорхойлоход ашигласан. Нүцгэн болон лиганд-холбогдсон цахиурын тоосонцоруудын морфологийг өндөр технологийн сканнер, электроникийн шинжилгээгээр шалгасан. Токио, Япон).Хатаасан дээжийг (нүцгэн цахиур ба лиганд-холбогдсон цахиурын тоосонцор) наалдамхай нүүрстөрөгчийн соронзон хальс ашиглан хөнгөн цагаан багана дээр байрлуулсан. Дээж дээр Q150T цацагч бүрээсийг ашиглан алтыг бүрж, дээж дээр 5 нм Au давхаргыг бүрхсэн. Энэ нь бага хүчдэлийг ашиглан үйл явцын үр ашгийг дээшлүүлж, нарийн хүйтнээр ялгаруулдаг E. (Waltham, Ma, MA, MA, USAL EA1112 ALERESEREAL EALEALEALEALE-ийг ЭНД ДАРГА (БАРИЛГА, БУПЕРАЦИАГИЙН ХӨГЖЛИЙН ХӨГЖИЛТЭЙ ХӨДӨЛГӨӨНИЙ ХӨГЖИЛТЭЙ АЖИЛЛАГААНЫ ХӨГЖҮҮЛЭГЧДИЙН ХӨГЖИЛТЭЙ (5 МЭ) -ийг evoproced and siceColes (5 мг) хэрэглэж байсан. 5 минутын турш эргүүлээд Mastersizer-ийн оптик вандан сандал дээр байрлуулсан. Термогравиметрийн шинжилгээг 30-аас 800 ° C-ийн температурын хязгаарт минутанд 5 ° C-ийн хурдаар хийсэн.
Шилэн доторлогоотой зэвэрдэггүй ган нарийн цооног багануудыг (100х1.8 мм) хэмжээсүүд нь зутангаар савлах аргыг ашиглан, 1-р зүйлд ашигласан ижил процедурыг ашиглан савласан. 31. Зэвэрдэггүй ган багана (шилэн доторлогоотой, 100 × 1.8 мм хэмжээтэй) 1 μм фрит агуулсан гаралтын холбох хэрэгсэл нь зутан савлагчтай (Alltech Deerfield, IL, USA) холбогдсон байна. 150 мг суурин фазын уусмал бэлтгэж, 1 мет.2 стационар фазын хадгалалтанд илгээнэ. колонк. Метанолыг зутан уусгагч болон хөдөлгөгч уусгагч болгон ашигласан. 10 минут 100 МП, 15 минутын турш 80 МП, 30 минутын турш 60 МП даралтаар баганыг дарааллаар дүүргэнэ. Савлах явцад механик чичиргээг хоёр GC баганын сэгсрэгч (All tech), АНУ-ын баглаа боодлын сэгсрэгч (All tech) ашиглан хийсэн. багана. Зуух савлагчийг хааж, баганын дотор гэмтэл гарахаас сэргийлж даралтыг аажмаар суллана. Баганыг зутан савлах хэсгээс салгаж, оролт болон LC системд өөр холбох хэрэгслийг холбоно уу.
LC насос (10AD Shimadzu, Япон), форсунк (Valco (АНУ) C14 W.05) нь 50 нл тарилгын гогцоо, мембран хийгүйжүүлэгч (Shimadzu DGU-14A), хэт ягаан туяаны-VIS хялгасан судасны цонхыг тусгай µLC төхөөрөмж илрүүлэгч (UV-2075), шилэн хоолойг маш нарийн холбосон шилэн бүрээстэй хийсэн. баганын нэмэлт зурвасын өргөтгөлийн нөлөө. Сав баглаа боодлын дараа бууруулагчийн нэгдлийн 1/16″ гаралтын хэсэгт хялгасан судсуудыг (50 μм id 365 ба редукцийн хялгасан судас (50 μм)) суурилуулсан. Мэдээлэл цуглуулах, хроматографийн боловсруулалтыг Multichro 2000 программ хангамж ашиглан хийсэн. Uhromnm25-ийн сорилтыг UxromMat4-ийн сорилтоор хийсэн. өгөгдөлд OriginPro8 (Northampton, MA) дүн шинжилгээ хийсэн.
Хүний ийлдэсээс альбумин, лиофилжсэн нунтаг, ≥ 96% (агароз гель электрофорез) 3 мг трипсин (1.5 мг), 4.0 М мочевин (1 мл), 0.2 М аммонийн бикарбонат (1 мл) хольсон. Уусмалыг 10 минутын турш хутгаж, дараа нь 10 ° C-т усан ваннд 7 цаг байлгана. мл 0.1% TFA. Уусмалыг шүүж, 4 °C-аас доош температурт хадгална.
Пептидийн холимог болон HSA трипсиний задралыг PMP баганууд дээр тусад нь үнэлэв. PMP баганаар HSA-ийн пептидийн хольц ба трипсин задралын салалтыг шалгаж, үр дүнг Ascentis Express RP-Amide баганатай харьцуулна уу. Онолын хавтангийн дугаарыг дараах байдлаар тооцоолно.
Нүцгэн цахиурын тоосонцор болон лиганд-холбогдсон цахиурын хэсгүүдийн SEM зургийг Зураг дээр үзүүлэв. 2 .Нүцгэн цахиурын хэсгүүдийн (A, B) SEM зураг нь бидний өмнөх судалгаанаас ялгаатай нь эдгээр хэсгүүд нь бөмбөрцөг хэлбэртэй бөгөөд тэдгээр нь хэсгүүд нь уртассан эсвэл жигд бус тэгш хэмтэй байдаг. цахиурын хэсгүүдийн гадаргуу.
Цахиурын нүцгэн тоосонцор (A, B) болон лиганд-холбогдсон цахиурын тоосонцор (C, D) -ийн электрон микроскопын зураг.
Нүцгэн цахиурын тоосонцор болон лиганд-холбогдсон цахиурын хэсгүүдийн ширхэгийн хэмжээтэй тархалтыг Зураг 3(A)-д үзүүлэв. Эзлэхүүнд суурилсан бөөмийн хэмжээ хуваарилалтын муруй нь химийн өөрчлөлтийн дараа цахиурын тоосонцрын хэмжээ нэмэгдсэнийг харуулсан (Зураг 3А). Цахиурын тоосонцоруудын тоосонцрын хэмжээ тархалтын өгөгдөл нь одоогийн судалгаа болон өмнөх судалгаанд суурилсан тоосонцрын хэмжээ (T-1)-д харьцуулсан болно. d(0.5), PMP нь 3.36 μм байна. Энэ нь өмнөх судалгаатай харьцуулахад ad(0.5) 3.05 μм (полистирол холбогдсон цахиурын ислийн тоосонцор)34. Энэ багц нь PEG, мочевин, TMOS хүчил, урвалын фазын хэмжээ нь харилцан адилгүй байснаас бидний өмнөх судалгаатай харьцуулахад нарийн ширхэгийн хэмжээтэй тархалттай байсан. Бидний өмнө нь судалж байсан полистирол холбогдсон цахиурын тоосонцрын үе шатаас илүү том байна. Энэ нь стирол бүхий цахиурын хэсгүүдийн гадаргуугийн функциональ байдал нь цахиурын гадаргуу дээр зөвхөн полистирол давхаргыг (0.97 мкм) хуримтлуулсан бол PMP үе шатанд давхаргын зузаан нь 1.38 мкм байсан гэсэн үг юм.
Нүцгэн цахиурын тоосонцор болон лигандтай холбогдсон цахиурын хэсгүүдийн ширхэгийн хэмжээтэй тархалт (A) ба нүх сүвний хэмжээ (B).
Одоогийн судалгааны цахиурын хэсгүүдийн нүх сүвний хэмжээ, нүх сүвний хэмжээ, гадаргуугийн талбайг Хүснэгт 1(B)-д үзүүлэв. Нүцгэн цахиурын тоосонцор болон лиганд-холбогдсон цахиурын хэсгүүдийн PSD профайлыг Зураг 3(B)-д үзүүлэв. Үр дүн нь бидний өмнөх судалгаатай харьцуулж байна. Нүцгэн цахиурын хэсгүүдийн нүх сүвний хэмжээ 1(B) байна. Энэ нь химийн өөрчлөлтийн дараа нүх сүвний хэмжээ 69-р багасч байгааг Хүснэгт 1(B)-д харуулсан ба муруйн өөрчлөлтийг Зураг 3(B)-д үзүүлэв. Үүний нэгэн адил химийн өөрчлөлтийн дараа цахиурын хэсгүүдийн нүх сүвний хэмжээ 0.67-аас 0.58 см3/г хүртэл буурсан байна. Одоогийн байдлаар цахиурын хэсгүүдийн тодорхой талбай 16 байна. м2/г байгаа нь бидний өмнөх судалгаатай (124 м2/г) харьцуулж болохуйц байна.Хүснэгт 1(B)-д үзүүлснээр химийн өөрчлөлтийн дараа цахиурын хэсгүүдийн гадаргуугийн талбай (м2/г) мөн 116 м2/г-аас 105 м2/г болж буурсан байна.
Хөдөлгөөнгүй фазын элементийн шинжилгээний үр дүнг Хүснэгт 2-т үзүүлэв. Одоогийн суурин фазын нүүрстөрөгчийн ачаалал 6.35% байгаа нь бидний өмнөх судалгааны нүүрстөрөгчийн ачааллаас бага байна (полистирол холбогдсон цахиурын тоосонцор, 7.93%35, 10.21% тус тус) 42. Учир нь одоогийн суурин фазын нүүрстөрөгчийн ачаалал бага байна. SP, стиролоос гадна фенилмалеймид-метилвинилизоцианат (PCMP) болон 4-гидрокси-TEMPO зэрэг зарим туйлтай лигандуудыг ашигласан. Одоогийн суурин фазын азотын жин 2.21%, өмнөх судалгаагаар 0.1735, 0.85% байна. Фенилмалеймидын нөлөөгөөр азот нь одоогийн хөдөлгөөнгүй үе шатанд өндөр байна. Үүний нэгэн адил бүтээгдэхүүн (4) ба (5)-ын нүүрстөрөгчийн ачаалал 2.7% ба 2.9% байсан бол эцсийн бүтээгдэхүүний (6) нүүрстөрөгчийн ачаалал 6.35% байгааг Хүснэгт 2-т үзүүлэв. Жингийн алдагдлыг TGA-р зурагт үзүүлэв. муруй нь 8.6%-ийн жингийн алдагдалыг харуулж байгаа бөгөөд энэ нь нүүрстөрөгчийн ачаалалтай сайн тохирч байна (6.35%), учир нь лигандууд нь зөвхөн C төдийгүй N, O, H агуулдаг.
Фенилмалеймид-метилвинилизоцианатын лиганд нь туйлын фенилмалеймидын бүлгүүд болон винилизоцианатын бүлгүүдтэй тул цахиурын тоосонцорыг гадаргууг өөрчлөхөд сонгосон. Винил изоцианатын бүлгүүд нь амьд радикал полимержих замаар стиролтой цаашид урвалд ордог. Хоёрдахь шалтгаан нь электростатик болон дунд зэргийн харилцан үйлчлэлгүй хүчтэй харилцан үйлчлэлтэй бүлгийг оруулах явдал юм. фенилмалеймидын хэсэг нь хэвийн рН-д виртуал цэнэггүй байдаг тул фенилмалеймидын хэсэг нь стиролын оновчтой хэмжээ болон чөлөөт радикал полимержих урвалын хугацаа зэргээр хянагдаж болно. Урвалын сүүлчийн алхам (чөлөөт радикал полимержих) нь маш чухал бөгөөд тэдгээр нь суурин фазын туйлшралыг өөрчлөх боломжтой байдаг. Стиролын хэмжээ болон урвалын хугацааг нэмэгдүүлэх нь хөдөлгөөнгүй фазын нүүрстөрөгчийн ачааллыг ихэсгэх ба эсрэгээр. Янз бүрийн концентрацитай стиролоор бэлтгэсэн SP нь өөр өөр нүүрстөрөгчийн ачаалалтай байдаг. Дахин хэлэхэд эдгээр суурин фазуудыг зэвэрдэггүй ган баганад ачаалж, хроматографийн гүйцэтгэлийг шалгана уу (сонголт, нягтрал, N утга гэх мэт). хяналттай туйлшрал ба аналитийн сайн хадгалалт.
Таван пептидийн хольцыг (Гли-Тир, Гли-Лью-Тир, Гли-Гли-Тир-Арг, Тир-Иле-Гли-Сер-Арг, лейцин энкефалин) мөн хөдөлгөөнт фаз ашиглан PMP багана ашиглан үнэлэв; 60/40 (v/v) ацетонитрил/ус (0.1% TFA) 80 мкл/мин урсгалын хурдаар. Оновчтой шүүрлийн нөхцөлд нэг баганын онолын хавтангийн дугаар (N) (100 × 1.8 мм id) нь 20,000 ± 100 (200,000 ± 100 P/m²T хавтангийн хувьд 3 MP3 утгыг өгдөг). багана ба хроматограммыг Зураг 5А-д үзүүлэв. Өндөр урсгалын хурдтай (700 мкл/мин) PMP баганад хурдан шинжилгээ хийсэн, нэг минутын дотор таван пептид ялгарсан, N-ийн утга маш сайн, нэг баганад 13,500 ± 330 (100 × 1.8 мм id), 0 0 1 гр (Fi 5, 0 1 г) тохирч байна. 5В). Гурван ижил хэмжээтэй баганыг (100 × 1.8 мм id) давтагдах чадварыг шалгахын тулд гурван өөр багц PMP суурин фазаар савласан. Багана тус бүрийн анализийн концентрацийг хамгийн оновчтой шүүрэлтийн нөхцөл, онолын хавтангийн N тоо болон багана тус бүр дээр ижил туршилтын хольцыг салгах хадгалах хугацааг ашиглан тэмдэглэв. PMP баганын давтагдах чадвар нь 3-р хүснэгтэд үзүүлсэн шиг маш бага %RSD утгуудтай сайн уялдаж байна.
PMP багана (B) ба Ascentis Express RP-Amide багана (A) дээр пептидийн хольцыг салгах; хөдөлгөөнт фаз 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP баганын хэмжээс (100 × 1.8 мм id); аналитик Нэгдлүүдийн ялгарлын дараалал: 1 (Гли-Тир), 2 (Гли-Лью-Тир), 3 (Гли-Гли-Тир-Арг), 4 (Тир-Иле-Гли-Сер-Арг) ба 5 (лейцин) хүчил энкефалин)).
PMP багана (100 × 1.8 мм id) хүний ​​ийлдэс альбуминыг триптик задралыг өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматографийн аргаар ялгаж авахын тулд үнэлэв. Зураг 6-д үзүүлсэн хроматограмм нь дээжийг сайтар ялгаж, нягтрал нь маш сайн байгааг харуулж байна. HSA задралыг 100 мкл/л/ус, хөдөлгөөнт фазын урсгалын хурдыг ашиглан шинжилэв. 0.1% TFA. Хроматограммд үзүүлснээр (Зураг 6) HSA задралыг 17 пептидтэй харгалзах 17 оргилд хуваасан. HSA задралын оргил бүрийн салгах үр ашгийг тооцоолж, утгыг Хүснэгт 5-д өгсөн болно.
HSA (100 × 1.8 мм id)-ийн триптик задралыг PMP багана дээр тусгаарласан; урсгалын хурд (100 мкл/мин), хөдөлгөөнт фаз 60/40 ацетонитрил/0.1% TFA-тай ус.
Энд L нь баганын урт, η нь хөдөлгөөнт фазын зуурамтгай чанар, ΔP нь баганын арын даралт, u нь хөдөлгөөнт фазын шугаман хурд юм. PMP баганын нэвчилт нь 2.5 × 10-14 м2, урсгалын хурд 25 мкЛ/мин, баганын 60/40 в/vAC0M (хэрэглэгдсэн ус AC0N) 1.8 мм id) нь бидний өмнөх судалгааны Ref.34-тэй төстэй байсан. Өнгөц сүвэрхэг тоосонцороор дүүрсэн баганын нэвчилт нь: 1.3 μм хэмжээтэй хэсгүүдэд 1.7 × 10-15, 1.7 μм хэсгүүдэд 3.1 × 10-15, 5.2 × 5 × 10.-10.-10.-1. 2.6 μм тоосонцор 5 μм хэмжээтэй хэсгүүдийн хувьд 43.Иймд PMP фазын нэвчилт нь 5 μм-ийн гол бүрхүүлийн хэсгүүдтэй төстэй байна.
Энд Wx нь хлороформоор савласан баганын жин, Wy нь метанолоор савласан баганын жин, ρ нь уусгагчийн нягт юм. Метанол (ρ = 0.7866) ба хлороформ (ρ = 1.484). Нийт сүвэрхэг чанар (SILICA-18 PARX18 мм. id) Бидний өмнө нь судалж байсан 34 ба C18-Мочевин багана 31 тус тус 0.63 ба 0.55 байна. Энэ нь мочевин лиганд байгаа нь хөдөлгөөнгүй фазын нэвчилтийг бууруулдаг гэсэн үг юм. Нөгөөтэйгүүр, PMP баганын нийт сүвэрхэг чанар (100 × 1.8 мм-ээс бага байна. id.60). C18 төрлийн суурин фазуудад C18 лигандууд цахиурын хэсгүүдэд шугаман гинж хэлбэрээр холбогддог бол полистирол төрлийн суурин фазын эргэн тойронд харьцангуй зузаан полимер давхарга үүсдэг. Ердийн туршилтаар баганын сүвэрхэг чанарыг дараах байдлаар тооцдог.
Зураг 7A,B-д PMP багана (100 × 1.8 мм id) болон Ascentis Express RP-Amide багана (100 × 1.8 мм id) -ийг ижил тунгалгийн нөхцөлд (жишээ нь, 60/40 ACN/H2O ба 0.1% TFA) ашиглан харуулав. ) van Deemter талбайн. Сонгосон пептидийн хольцыг (Гли-Тир, Гли-Лью-Тир, Гли-Гли-Тир-Арг, Тир-Иле-Гли-Сер-Арг, Лейцин Энкефалин) 20 мкл-д бэлтгэсэн/ Хоёр баганын хамгийн бага урсгалын хурд нь 800 мкл/мин байна. багана болон Ascentis Express RP-Amide багана тус тус 2.6 μм ба 3.9 μм байв. HETP-ийн утгууд нь PMP баганын (100 × 1.8 мм id) тусгаарлах үр ашиг нь худалдаанд байгаа Ascentis Express RP-Amide баганаас (100 × 1.8 мм-ээр) хамаагүй дээр байгааг харуулж байна. Урсгал нэмэгдэхийн хэрээр N-ийн үнэ цэнийн бууралт нь бидний өмнөх судалгаатай харьцуулахад тийм ч чухал биш юм. Ascentis Express RP-Amide баганатай харьцуулахад PMP баганын (100 × 1.8 мм id) тусгаарлах үр ашиг нь одоогийн ажилд ашиглагдаж буй бөөмийн хэлбэр, хэмжээ, нарийн төвөгтэй багана савлах процедурын сайжруулалт дээр суурилдаг34.
(A) 0.1% TFA-тай 60/40 ACN/H2O-д PMP багана (100 × 1.8 мм id) ашиглан олж авсан ван Деемтерийн график (ХӨТБ ба хөдөлгөөнт фазын шугаман хурд).(B) ван Димтерийн график (ХӨХХБ-ын эсрэг хөдөлгөөнт фазын шугаман хурд) Экспресс (RP-10mi) багана ашиглан олж авсан мм-Asis. id) 0.1% TFA-тай 60/40 ACN/H2O-д.
Өндөр хүчин чадалтай шингэн хроматографийн аргаар хүний ​​ийлдэс альбумин (HAS)-ийн синтетик пептидийн хольц болон трипсин задралыг ялгах зорилгоор туйлтай полистиролын суурин фазыг бэлтгэж, үнэлэв. Пептидийн хольцын PMP баганын хроматографийн гүйцэтгэл нь салгах үр ашиг, нягтралаараа маш сайн байдаг. PMP баганын хэмжээ, олон төрлийн ялгах чадвар зэрэг нь PMP баганын ялгах чадварын шалтгаан юм. цахиурын тоосонцрын хэмжээ, суурин фазын хяналттай синтез, нарийн төвөгтэй баганын савлагаа. Өндөр салгах үр ашгаас гадна баганын арын даралт өндөр байх нь энэ суурин фазын бас нэг давуу тал юм. PMP багана нь сайн давтагдах чадварыг харуулдаг бөгөөд пептидийн хольцыг шинжлэх, төрөл бүрийн уургийн трипсин задралд ашиглах боломжтой. Шингэн хроматографид эмийн ургамал, мөөгөнцрийн ханд. Ирээдүйд PMP баганыг уураг болон моноклональ эсрэгбиемүүдийг ялгах зорилгоор мөн үнэлнэ.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Урвуу фазын хроматографийн аргаар пептид салгах системийн судалгаа I хэсэг: Баганын шинж чанарыг тодорхойлох протокол боловсруулах.Ж. Хроматографи.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Халдварт өвчний эмчилгээнд зориулагдсан сайжруулсан идэвхтэй пептидүүд.Биотехнологи.Дэвшилтэт.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Синтетик эмчилгээний пептидүүд: шинжлэх ухаан ба зах зээл. эмийн нээлт.15 (1-2) өнөөдөр, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.200.2010.
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J. Хроматографи.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Нарийвчилсан шингэн хроматографи-масс спектрометр нь өргөн зорилтот метаболомик ба протеомикийг нэгтгэх боломжийг олгодог.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Эмийн хөгжилд UHPLC-ийн үүрэг.Ж. Sep. Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM. Хурдан салгахад зориулсан хэт өндөр даралтын шингэн хроматографийн үндсэн ба практик талууд.Ж. 9-р сарын Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelicheff, P. Эмийн боловсруулалтад хэт өндөр үзүүлэлттэй шингэн хроматографийн хэрэглээ.J. Хроматографи.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al. Энтеровирусыг үр дүнтэй цэвэршүүлэх зорилгоор усан дахь тос өндөр дотоод фазын эмульсээс бэлтгэсэн цул макро сүвэрхэг гидрогель.Хими.Британи.Ж. 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Протеомик дахь шингэн хроматографийн үүрэг.Ж. Хроматографи.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. Эмчилгээний пептид ба уургийн урвуу фазын шингэн хроматографийн салалтад гарч ирж буй чиг хандлага: онол ба хэрэглээ.Ж. Эмийн сан.Биоанагаахын шинжлэх ухаан.анус.69, 9-27 (2012).
Гилар, М., Оливова, П., Дэйли, АЕ, Геблер, ЖК. Эхний болон хоёр дахь тусгаарлах хэмжигдэхүүн дэх өөр өөр рН-ийн утгыг ашиглан RP-RP-HPLC системийг ашиглан пептидүүдийг хоёр хэмжээст тусгаарлах. Sep. Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al. C18 дэд 2 мкм бүрэн ба өнгөц сүвэрхэг хэсгүүдээр савласан өндөр үр ашигтай хроматографийн баганын масс дамжуулах шинж чанар ба кинетик гүйцэтгэлийг судалсан.J. 9-р сар Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al. Ургамлын биоидэвхтэй пептидүүдийг тусгаарлах, тодорхойлох, баталгаажуулах сүүлийн үеийн чиг хандлага ба аналитик сорилтууд.анус.биологийн анус.Химийн.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s002168-02 (s002168-0).
Мюллер, Ж.Б. нар. Амьдралын хаант улсын протеомик ландшафт. Байгаль 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al. Эмчилгээний пептидүүдийг бэлдмэлийн шингэн хроматографийн аргаар боловсруулах. Молекул (Базель, Швейцарь) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Холимог горимын хроматографи ба биополимеруудад хэрэглэх.Ж. Хроматографи.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Жао, Г., Дун, X.-Y.& Sun, Y. Холимог горимын уургийн хроматографийн лигандууд: зарчим, шинж чанар, дизайн.Ж. Биотехнологи.144(1), 3-11 (2009).