د Nature.com د لیدنې لپاره مننه. هغه براوزر نسخه چې تاسو یې کاروئ د CSS لپاره محدود ملاتړ لري. د غوره تجربې لپاره، موږ سپارښتنه کوو چې تاسو یو تازه شوی براوزر وکاروئ (یا په انټرنیټ اکسپلورر کې د مطابقت حالت بند کړئ). په ورته وخت کې، د دوامداره ملاتړ ډاډ ترلاسه کولو لپاره، موږ به سایټ پرته له سټایلونو او جاواسکریپټ څخه وښیو.
د سیلیکا سوري ذرات د سول-جیل میتود لخوا د میکروپورس ذراتو ترلاسه کولو لپاره د ځینې تعدیلاتو سره چمتو شوي. دا ذرات د N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) او سټایرین سره د بیرته راګرځیدونکي اضافه ټوټې کولو زنځیر لیږد (RAFT) پولیمرائزیشن لخوا اخذ شوي ترڅو د پولی سټیرین (PMP) سټیشنري مرحلې N-phenylmaleimide انټرکلیشن چمتو کړي. د تنګ بور سټینلیس سټیل ستنې (100 × 1.8 ملي میتر id) د سلیري بسته بندۍ لخوا بسته شوي. د پیپټایډ مخلوط د PMP کالم جلا کول ارزول شوي چې پکې پنځه پیپټایډونه (ګلی-ټایر، ګلی-لیو-ټایر، ګلی-ګلی-ټایر-ارګ، ټایر-ایل-ګلی-سر-ارګ، لیوسین اینکیفالین) کروماتګرافیک فعالیت) او د انسان سیرم البومین (HAS) ټریپسن هضم شامل دي. د غوره اخراج شرایطو لاندې، د پیپټایډ مخلوط تیوریکي پلیټ شمیر تر 280,000 پلیټونو/m² پورې لوړ دی. د سوداګریز سره د پرمختللي کالم د جلا کولو فعالیت پرتله کول د اسینټیس ایکسپریس RP-Amide کالم کې، دا لیدل شوې چې د PMP کالم د جلا کولو فعالیت د جلا کولو موثریت او حل له پلوه د سوداګریز کالم څخه غوره و.
په دې وروستیو کلونو کې، د بایوفارماسیوټیکل صنعت په یوه پراخیدونکې نړیواله بازار بدل شوی چې د بازار ونډه یې د پام وړ زیاتوالی موندلی دی. د بایوفارماسیوټیکل صنعت 1,2,3 د چاودیدونکي ودې سره، د پیپټایډونو او پروټینونو تحلیل خورا مطلوب دی. د هدف پیپټایډ سربیره، د پیپټایډ ترکیب په جریان کې ډیری ناپاکۍ رامینځته کیږي، پدې توګه د مطلوب پاکوالي پیپټایډونو ترلاسه کولو لپاره کروماتګرافیک پاکولو ته اړتیا ده. د بدن مایعاتو، نسجونو او حجرو کې د پروټینونو تحلیل او ځانګړتیا یو خورا ننګونکی کار دی ځکه چې په یوه نمونه کې د احتمالي کشف وړ ډولونو لوی شمیر شتون لري. که څه هم ډله ایز سپیکٹرومیټرۍ د پیپټایډ او پروټین ترتیب لپاره یوه مؤثره وسیله ده، که چیرې دا ډول نمونې په یوه پاس کې د ډله ایز سپیکٹرومیټر ته داخل شي، جلا کول به مثالی نه وي. دا ستونزه د MS تحلیل دمخه د مایع کروماتګرافي (LC) جلا کولو پلي کولو سره کم کیدی شي، کوم چې به په ټاکل شوي وخت کې ډله ایز سپیکٹرومیټر ته د ننوتلو تحلیل کونکو شمیر کم کړي 4,5,6. برسېره پردې، د مایع مرحلې جلا کولو پرمهال، تحلیل کونکي کولی شي په تنګ سیمو کې متمرکز شي، په دې توګه دا تحلیلونه متمرکز کړي او د MS کشف حساسیت ښه کړي. د مایع کروماتګرافي (LC) په تیرو لسیزو کې د پام وړ پرمختګ کړی او د پروټومیک تحلیل 7,8,9,10 کې یو مشهور تخنیک ګرځیدلی دی.
د معکوس پړاو مایع کروماتګرافي (RP-LC) په پراخه کچه د پیپټایډ مخلوطونو پاکولو او جلا کولو لپاره د اکټاډیسیل-تعدیل شوي سیلیکا (ODS) په کارولو سره د سټیشنري مرحلې 11,12,13 په توګه کارول کیږي. په هرصورت، د RP سټیشنري مرحلې د دوی د پیچلي جوړښت او امفیفیلیک طبیعت 14,15 له امله د پیپټایډونو او پروټینونو قناعت بخښونکي جلا کول نه چمتو کوي. له همدې امله، په ځانګړي ډول ډیزاین شوي سټیشنري مرحلې اړینې دي چې د قطبي او غیر قطبي برخو سره پیپټایډونه او پروټینونه تحلیل کړي ترڅو د دې تحلیلونو سره تعامل وکړي او وساتي16. مخلوط حالت کروماتګرافي، کوم چې څو ماډل تعاملات چمتو کوي، د پیپټایډونو، پروټینونو او نورو پیچلي مرکبونو جلا کولو لپاره د RP-LC بدیل کیدی شي. څو مخلوط حالت سټیشنري مرحلې چمتو شوي، او د دې مرحلو سره ډک شوي کالمونه د پیپټایډ او پروټین جلا کولو لپاره کارول شوي17,18,19,20,21. مخلوط حالت سټیشنري مرحلې (WAX/RPLC، HILIC/RPLC، قطبي انټرکلیشن/RPLC) د پیپټایډ او پروټین لپاره مناسب دي. د قطبي او غیر قطبي ډلو د شتون له امله جلاوالی 22,23,24,25,26,27,28 . په ورته ډول، د قطبي انټرکلیټینګ سټیشنري مرحلې د همغږه تړل شوي قطبي ډلو سره د قطبي او غیر قطبي تحلیل کونکو لپاره ښه جلا کولو ځواک او ځانګړی انتخاب ښیې، ځکه چې جلا کول د تحلیل کونکي او سټیشنري مرحلې ترمنځ تعامل پورې اړه لري. څو ماډل تعاملات 29, 30, 31, 32. په دې وروستیو کې، ژانګ او نور. 30 د ډوډیسیل-ختم شوي پولیمین سټیشنري مرحله چمتو کړه او په بریالیتوب سره یې هایدروکاربنونه، انټي ډیپریسنټونه، فلاوونایډونه، نیوکلیوسایډونه، ایسټروجنونه او څو نور تحلیلونه جلا کړل. قطبي انټرکلیټر دواړه قطبي او غیر قطبي ګروپونه لري، نو دا د پیپټایډونو او پروټینونو جلا کولو لپاره کارول کیدی شي چې دواړه هایدروفوبیک او هایدروفیلیک برخې لري. قطبي-ایمبیډ شوي ستنې (د مثال په توګه، امبیډ شوي C18 ستنې) په سوداګریزه توګه د اسینټیس ایکسپریس RP-امایډ ستنې د سوداګریز نوم لاندې شتون لري، مګر دا ستنې یوازې د امین 33 تحلیل لپاره کارول کیږي.
په اوسنۍ څیړنه کې، د HSA د پیپټایډونو او ټریپسین هضمونو جلا کولو لپاره د قطبي-ایمبیډډ سټیشنري مرحله (N-فینیلمالیمایډ-ایمبیډډ پولی سټیرین) چمتو او ارزول شوې. سټیشنري مرحله د لاندې ستراتیژۍ په کارولو سره چمتو شوې. د سیلیکا ذرې زموږ په تیرو خپرونو کې ورکړل شوي طرزالعمل سره سم چمتو شوي چې د چمتووالي پروتوکول کې ځینې تعدیلات لري. د یوریا، پولیټین ګلایکول (PEG)، TMOS، د اوبو اسیتیک اسید تناسب د لوی سوري اندازې سره د سیلیکا ذراتو چمتو کولو لپاره تنظیم شوی و. دوهم، یو نوی لیګنډ، فینیلمالیمایډ-میتیل وینیل اسوسیانیټ، ترکیب شوی و او د سیلیکا ذراتو د استخراج لپاره کارول شوی ترڅو د قطبي ایمبیډډ سټیشنري مرحله چمتو کړي. پایله لرونکی سټیشنري مرحله د غوره شوي بسته بندۍ سکیم په کارولو سره د سټینلیس سټیل کالم (100 × 1.8 ملي میتر id) کې بسته شوې وه. د کالم بسته بندي د میخانیکي وایبریشن سره مرسته کیږي ترڅو ډاډ ترلاسه شي چې د کالم دننه یو همجنس بستر جوړ شوی. د پیپټایډ مخلوطونو بسته شوي کالم جلا کول ارزونه وکړئ چې پنځه پیپټایډونه لري؛ (ګلای-ټایر، ګلای-لیو-ټایر، ګلای-ګالی-ټایر-ارګ، ټایر-ایل-ګالی-سر-ارګ، لیوسین اینکیفالین) او د انسان سیرم البومین (HAS) ټریپسین هضم. د HSA د پیپټایډ مخلوط او ټریپسین هضم د ښه ریزولوشن او موثریت سره جلا شوي لیدل شوي. د PMP کالم د جلا کولو فعالیت د اسینټیس ایکسپریس RP-امایډ کالم سره پرتله شوی. دواړه پیپټایډونه او پروټینونه د PMP کالم کې ښه حل شوي او موثریت لیدل شوي، کوم چې د اسینټیس ایکسپریس RP-امایډ کالم په پرتله ډیر موثر وو.
PEG (پولیتیلین ګلایکول)، یوریا، اسیټیک اسید، ټریمیتوکسي اورتوسیلیکیټ (TMOS)، ټریمیتیل کلوروسیلین (TMCS)، ټریپسین، د انسان سیرم البومین (HSA)، امونیم کلورایډ، یوریا، هیکسین میتیل ډیسلازن (HMDS)، میتاکریلویل کلورایډ (MC)، سټیرین، 4-هایډروکسي-ټیمپو، بینزویل پیرو اکسایډ (BPO)، HPLC درجې اسټونیټریل (ACN)، میتانول، 2-پروپانول، او اسټون د سیګما-الډریچ (سینټ لوئس، MO، USA) څخه اخیستل شوي.
د یوریا (۸ ګرامه)، پولیتیلین ګلایکول (۸ ګرامه)، او ۸ ملی لیتر ۰.۰۱ نایتروجن اسیتیک اسید مخلوط د ۱۰ دقیقو لپاره وخوړل شو، او بیا ۲۴ ملی لیتر TMOS د یخ په سړو شرایطو کې اضافه شو. د تعامل مخلوط د ۶ ساعتونو لپاره په ۴۰ درجو سانتي ګراد او بیا په ۱۲۰ درجو سانتي ګراد کې د ۸ ساعتونو لپاره په سټینلیس سټیل آټوکلیو کې تودوخه شو. اوبه توی شوې او پاتې مواد د ۱۲ ساعتونو لپاره په ۷۰ درجو سانتي ګراد کې وچ شول. وچه نرمه ډله په تنور کې نرمه ځمکه وه او د ۱۲ ساعتونو لپاره په ۵۵۰ درجو سانتي ګراد کې کیلسین شوه. درې ډلې چمتو شوې او ځانګړتیاوې یې درلودې ترڅو د ذراتو اندازه، د سوریو اندازه او د سطحې ساحه کې د تکثیر وړتیا معاینه کړي.
د سیلیکا ذراتو د سطحې تعدیل سره چې مخکې له مخکې ترکیب شوي لیګنډ فینیلمالیمایډ-میتیل وینیل ایزوسیانیټ (PCMP) سره تعقیب کیږي او بیا د سټیرین سره د ریډیل پولیمرائزیشن سره، د قطبي ګروپ لرونکي مرکب چمتو شو. د مجموعو او پولی سټیرین زنځیرونو لپاره سټیشنري مرحله. د چمتووالي پروسه لاندې تشریح شوې.
N-phenylmaleimide (200 mg) او methyl vinyl isocyanate (100 mg) په وچو toluene کې حل شول، او د 0.1 mL 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) د عکس العمل فلاسک ته اضافه شو ترڅو د phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate copolymer (PMCP) چمتو کړي. مخلوط د 3 ساعتونو لپاره په 60 درجو سانتي ګراد کې تودوخه شوی، فلټر شوی او په تنور کې د 3 ساعتونو لپاره په 40 درجو سانتي ګراد کې وچ شوی.
وچ سیلیکا ذرات (2 ګرامه) په وچو ټولوین (100 ملی لیتر) کې خپاره شول، د 10 دقیقو لپاره په 500 ملی لیتر ګرد لاندې فلاسک کې وخوړل شول او سونیکیټ شول. PMPC (10 ملی ګرامه) په ټولوین کې حل شو او د غورځیدونکي فنل له لارې د عکس العمل فلاسک ته د څاڅکو په څیر اضافه شو. مخلوط د 8 ساعتونو لپاره په 100 درجو سانتي ګراد کې ریفلکس شو، فلټر شو او د اسیټون سره مینځل شو او د 3 ساعتونو لپاره په 60 درجو سانتي ګراد کې وچ شو. بیا، د PMCP سره تړلي سیلیکا ذرات (100 ګرامه) په ټولوین (200 ملی لیتر) کې حل شول او 4-هایډروکسی-ټیمپو (2 ملی لیتر) د 100 µL ډیبوټیلټین ډیلوریټ په شتون کې د کتلست په توګه اضافه شو. مخلوط د 8 ساعتونو لپاره په 50 درجو سانتي ګراد کې مخلوط شو، فلټر شو او د 3 ساعتونو لپاره په 50 درجو سانتي ګراد کې وچ شو.
سټایرین (۱ ملی لیتر)، بینزویل پیرو اکسایډ BPO (۰.۵ ملی لیتر)، او د ټیمپو-PMCP سره تړلي سیلیکا ذرات (۱.۵ ګرامه) په ټولوین کې خپاره شول او د نایتروجن سره پاک شول. د سټایرین پولیمرائزیشن د ۱۲ ساعتونو لپاره په ۱۰۰ درجو سانتی ګراد کې ترسره شو. پایله لرونکی محصول د میتانول سره مینځل شو او د شپې په ۶۰ درجو سانتی ګراد کې وچ شو. د عکس العمل ټولیز سکیم په ۱ شکل کې ښودل شوی.
نمونې د 1 ساعت لپاره په 393 K کې ګاز شوي ترڅو د 10-3 Torr څخه کم پاتې فشار ترلاسه کړي. د P/P0 = 0.99 نسبي فشار کې د جذب شوي N2 مقدار د ټول سوري حجم ټاکلو لپاره کارول شوی و. د بربنډ او لیګنډ سره تړل شوي سیلیکا ذراتو مورفولوژي د سکین کولو الیکټرون مایکروسکوپي سره معاینه شوې (هیتاچي عالي ټیکنالوژیانې، ټوکیو، جاپان). وچې نمونې (بربنډ سیلیکا او لیګنډ سره تړل شوي سیلیکا ذرات) د چپکونکي کاربن ټیپ په کارولو سره په المونیم کالم کې ځای په ځای شوي. د Q150T سپټر کوټر په کارولو سره په نمونو باندې سره زر پلیټ شوی و، او په نمونو کې د 5 nm Au طبقه زیرمه شوې وه. دا د ټیټ ولټاژونو په کارولو سره د پروسې موثریت ښه کوي او ښه غله، سړه سپټرینګ چمتو کوي. د عنصر تحلیل لپاره د ترمو الیکټرون (والټم، MA، USA) فلش EA1112 عنصري تحلیل کونکی کارول شوی و. د مالورن (ورچیسټرشایر، انګلستان) ماسټرائزر 2000 د ذرې اندازې تحلیل کونکی د ذرې اندازې ویش ترلاسه کولو لپاره کارول شوی و. بربنډ سیلیکا ذرات او د لیګنډ سره تړلي سیلیکا ذرات (هر یو 5 ملی ګرامه) د 5 ملی لیتر ایزوپروپانول کې خپاره شول، د 10 دقیقو لپاره سونیکیټ شوي، د 5 دقیقو لپاره وورټیکس شوي، او د ماسټرسایزر په آپټیکل بینچ کې ځای په ځای شوي. د ترموګراویمیتریک تحلیل د 30 څخه تر 800 درجو سانتي ګراد د تودوخې حد کې په یوه دقیقه کې د 5 درجو سانتي ګراد په کچه ترسره شو.
د شیشې په لیکه شوي سټینلیس سټیل تنګ بور ستنې د ابعادو (100 × 1.8 ملي میتر id) د سلیري بسته کولو میتود په کارولو سره بسته شوي، د ورته پروسې په کارولو سره چې په ریف کې کارول شوې. ۳۱. د سټینلیس سټیل یوه ستنه (شیشه لرونکې، ۱۰۰ × ۱.۸ ملي میتره id) چې د ۱ µm فریټ سره د آوټ لیټ فټینګ سره د سلیري پیکر (آلټیک ډیرفیلډ، IL، USA) سره وصل شوه. د سټیشنري فیز سلیري چمتو کړئ د ۱۵۰ ملی ګرامه سټیشنري فیز په ۱.۲ ملی لیتر میتانول کې ځړول او د ذخیره کولو ستون ته یې واستوئ. میتانول د سلیري محلول او همدارنګه د پروپیلنګ محلول په توګه کارول شوی و. د ۱۰ دقیقو لپاره د ۱۰۰ MP، د ۱۵ دقیقو لپاره د ۸۰ MP، او د ۳۰ دقیقو لپاره د ۶۰ MP فشارونو په پلي کولو سره ستون په ترتیب سره ډک کړئ. د بسته بندۍ په جریان کې، میخانیکي وایبریشن د دوو GC کالم شیکرونو (آلټیک، ډیرفیلډ، IL، USA) سره تطبیق شو ترڅو د ستون یونیفورم بسته بندي یقیني شي. د سلیري پیکر وتړئ او فشار ورو ورو خوشې کړئ ترڅو ستون کې د هر ډول زیان مخه ونیول شي. ستون د سلیري پیکینګ واحد څخه جلا کړئ او بل فټینګ د داخلي او LC سیسټم سره وصل کړئ ترڅو د هغې فعالیت وګوري.
یو LC پمپ (10AD Shimadzu، جاپان)، انجیکټر (Valco (USA) C14 W.05) د 50nL انجیکشن لوپ سره، د جھلی ډیګاسر (Shimadzu DGU-14A)، د UV-VIS کیپلیري کړکۍ جوړه شوه. د ځانګړي µLC وسیلې کشف کونکی (UV-2075) او د شیشې سره تړلي مایکرو کالمونه. د اضافي کالم بینډ پراخولو اغیز کمولو لپاره خورا تنګ او لنډ نښلونکي ټیوب وکاروئ. د بسته بندۍ وروسته، کیپلیري (50 μm id 365 او د کمولو یونین کیپلیري (50 μm) د کمولو یونین په 1/16″ بهر کې نصب شوي. د معلوماتو راټولول او کروماتګرافیک پروسس د ملټيکرو 2000 سافټویر په کارولو سره ترسره شو. د UV جذب لپاره د 254 nm تحلیلونو څارنه ازمول شوې. د کروماتګرافیک معلومات د OriginPro8 (نورټامپټون، MA) لخوا تحلیل شوي.
د انسان د سیرم څخه البومین، لیوفیل شوی پوډر، ≥ 96٪ (اګروز جیل الیکروفوریسس) 3 ملی ګرامه د ټریپسین (1.5 ملی ګرامه)، 4.0 ملی ګرامه یوریا (1 ملی لیتر)، او 0.2 ملی لیتر امونیم بای کاربونیټ (1 ملی لیتر) سره مخلوط شوی. محلول د 10 دقیقو لپاره مخلوط شو او د اوبو په حمام کې د 37 درجو سانتی ګراد په تودوخه کې د 6 ساعتونو لپاره وساتل شو، بیا د 0.1٪ TFA د 1 ملی لیتر سره آرام شو. محلول فلټر کړئ او د 4 درجو سانتی ګراد څخه ښکته ذخیره کړئ.
د پیپټایډ مخلوط او د HSA ټریپسین هضم جلا کول د PMP کالمونو کې په جلا توګه ارزول شوي. د PMP کالم لخوا د HSA د پیپټایډ مخلوط او ټریپسین هضم جلا کول وګورئ او پایلې یې د اسینټیس ایکسپریس RP-امایډ کالم سره پرتله کړئ. د تیوریکي پلیټ شمیره په لاندې ډول محاسبه کیږي:
د خالي سیلیکا ذراتو او لیګنډ سره تړلي سیلیکا ذراتو SEM انځورونه په FIG کې ښودل شوي دي. 2. د خالي سیلیکا ذراتو (A، B) SEM انځورونه ښیي چې، زموږ د پخوانیو مطالعاتو برعکس، دا ذرات کروي دي چې ذرات پکې اوږد شوي یا غیر منظم توازن لري. د لیګنډ سره تړلي سیلیکا ذراتو (C، D) سطح د خالي سیلیکا ذراتو په پرتله نرم دی، کوم چې ممکن د سیلیکا ذراتو په سطحه د پولی سټیرین زنځیرونو د پوښ له امله وي.
د الکترون مایکروسکوپ سکین کول د سیلیکا ذراتو (A، B) او لیګنډ سره تړلي سیلیکا ذراتو (C، D) انځورونه.
د خالي سیلیکا ذراتو او لیګنډ سره تړلي سیلیکا ذراتو د ذراتو د اندازې ویش په شکل 3(A) کې ښودل شوي دي. د حجم پر بنسټ د ذراتو د اندازې ویش منحني ښودلې چې د کیمیاوي تعدیل وروسته د سیلیکا ذراتو اندازه زیاته شوې (شکل 3A). د اوسني مطالعې او پخوانۍ مطالعې څخه د سیلیکا ذراتو د ذراتو د اندازې ویش ډیټا په جدول 1(A) کې پرتله شوي. د PMP د حجم پر بنسټ د ذراتو اندازه، d(0.5)، زموږ د پخوانۍ مطالعې په پرتله 3.36 μm ده، د ad(0.5) ارزښت 3.05 μm (پولی سټیرین سره تړلي سیلیکا ذرات) سره. دا ډله زموږ د پخوانۍ مطالعې په پرتله د ذراتو د اندازې ویش تنګ کړی و ځکه چې د عکس العمل مخلوط کې د PEG، یوریا، TMOS، او اسټیک اسید مختلف تناسبونه شتون لري. د PMP مرحلې د ذراتو اندازه د پولی سټیرین سره تړلي سیلیکا ذراتو مرحلې په پرتله یو څه لویه ده چې موږ یې دمخه مطالعه کړې وه. دا پدې مانا ده چې د سټیرین سره د سیلیکا ذراتو د سطحې فعالیت یوازې د سیلیکا سطحې باندې د پولی سټیرین پرت (0.97 μm) زیرمه کړی، پداسې حال کې چې په PMP کې د پړاو په اوږدو کې د طبقې ضخامت ۱.۳۸ µm وو.
د خلاصو سیلیکا ذراتو او لیګنډ پورې تړلو سیلیکا ذراتو د ذراتو د اندازې ویش (A) او د سوریو د اندازې ویش (B).
د اوسني مطالعې د سیلیکا ذراتو د سوریو اندازه، د سوریو حجم او د سطحې ساحه په جدول 1 (B) کې ورکړل شوې ده. د خلاص سیلیکا ذراتو او لیګنډ سره تړلي سیلیکا ذراتو PSD پروفایلونه په شکل 3 (B) کې ښودل شوي. پایلې زموږ د پخوانۍ مطالعې سره پرتله کیدونکې دي. د خلاص او لیګنډ سره تړلي سیلیکا ذراتو د سوریو اندازه په ترتیب سره 310 او 241 دي، کوم چې دا په ګوته کوي چې د کیمیاوي تعدیل وروسته د سوریو اندازه 69 کمیږي، لکه څنګه چې په جدول 1 (B) کې ښودل شوي، او د منحني بدلون په شکل 3 (B) کې ښودل شوی. په ورته ډول، د سیلیکا ذراتو د سوریو حجم د کیمیاوي تعدیل وروسته له 0.67 څخه 0.58 cm3/g ته راټیټ شو. د اوسني مطالعې شوي سیلیکا ذراتو ځانګړې سطحه 116 m2/g ده، کوم چې زموږ د پخوانۍ مطالعې (124 m2/g) سره پرتله کیدونکې ده. لکه څنګه چې په جدول 1 (B) کې ښودل شوي، د سیلیکا ذراتو د سطحې ساحه (m2/g) هم له 116 m2/g څخه راټیټه شوه د کیمیاوي تعدیل وروسته ۱۰۵ متر مربع/ګرام.
د سټیشنري مرحلې د عنصري تحلیل پایلې په جدول 2 کې ښودل شوي دي. د اوسني سټیشنري مرحلې د کاربن بار کول 6.35٪ دي، کوم چې زموږ د پخوانۍ مطالعې د کاربن بار کولو څخه ټیټ دي (په ترتیب سره د پولیسټرین تړل شوي سیلیکا ذرات، 7.93٪ 35 او 10.21٪) 42. د اوسني سټیشنري مرحلې د کاربن بار کول ټیټ دي، ځکه چې د اوسني SP په چمتو کولو کې، د سټیرین سربیره، ځینې قطبي لیګنډونه لکه فینیلمالیمایډ-میتیل وینیلائسوسیانیټ (PCMP) او 4-هایډروکسی-ټیمپو کارول شوي. د اوسني سټیشنري مرحلې د نایتروجن وزن سلنه 2.21٪ ده، په تیرو مطالعاتو کې د نایتروجن وزن له مخې په ترتیب سره 0.1735 او 0.85٪ په پرتله. دا پدې مانا ده چې د نایتروجن وزن٪ په اوسني سټیشنري مرحلې کې د فینیلمالیمایډ له امله لوړ دی. په ورته ډول، د محصولاتو (4) او (5) د کاربن بار کول په ترتیب سره 2.7٪ او 2.9٪ وو، پداسې حال کې چې د وروستي محصول (6) کاربن بار کول 6.35٪ وو، لکه څنګه چې په جدول 2 کې ښودل شوي. د وزن کمول د PMP سټیشنري مرحلې سره معاینه شوي، او د TGA منحنی په شکل 4 کې ښودل شوی. د TGA منحنی د 8.6٪ وزن کمول ښیې، کوم چې د کاربن بار کولو (6.35٪) سره ښه موافق دی ځکه چې لیګنډونه نه یوازې C بلکې N، O، او H هم لري.
د سیلیکا ذراتو د سطحې تعدیل لپاره د فینیلمالیمایډ-میتیل وینیلاسوسیانیټ لیګنډ غوره شوی و ځکه چې دا د قطبي فینیلمالیمایډ ګروپونه او وینیلاسوسیانیټ ګروپونه لري. د وینیل اسوسیانیټ ګروپونه کولی شي د ژوندي رادیکال پولیمرائزیشن له لارې د سټیرین سره نور عکس العمل ښکاره کړي. دوهم دلیل دا دی چې یو داسې ګروپ داخل کړئ چې د تحلیل کونکي سره معتدل تعامل ولري او د تحلیل کونکي او سټیشنري مرحلې ترمنځ قوي الکتروسټاتیک تعامل ونلري، ځکه چې د فینیلمالیمایډ برخه په نورمال pH کې هیڅ مجازی چارج نلري. د سټیشنري مرحلې قطبیت د سټیرین د مطلوب مقدار او د آزاد رادیکال پولیمرائزیشن د عکس العمل وخت لخوا کنټرول کیدی شي. د عکس العمل وروستی مرحله (فری راډیکال پولیمرائزیشن) خورا مهم دی او کولی شي د سټیشنري مرحلې قطبیت بدل کړي. د دې سټیشنري مرحلو د کاربن بارولو چک کولو لپاره لومړني تحلیل ترسره شو. دا ولیدل شوه چې د سټیشنري مرحلې مقدار او د عکس العمل وخت زیاتول د سټیشنري مرحلې د کاربن بارولو کچه لوړه کړه او برعکس. د سټیشنري مرحلې د مختلف غلظت سره چمتو شوي SPs مختلف کاربن بارونه لري. بیا، دا سټیشنري مرحلې په سټینلیس سټیل ستنو کې بار کړئ او د دوی چیک کړئ د کروماتګرافیک فعالیت (انتخاب، ریزولوشن، N ارزښت، او نور). د دې تجربو پراساس، د PMP سټیشنري مرحلې چمتو کولو لپاره یو مطلوب فورمول غوره شو ترڅو کنټرول شوي قطبي او ښه تحلیلي ساتنه یقیني شي.
پنځه پیپټایډ مخلوطونه (ګلای-ټایر، ګلای-لیو-ټایر، ګلای-ګالی-ټایر-ارګ، ټایر-ایل-ګالی-سر-ارګ، لیوسین اینکیفالین) هم د ګرځنده پړاو په کارولو سره د PMP کالم په کارولو سره ارزول شوي؛ 60/40 (v/v) اسټونایټریل/اوبه (0.1% TFA) د 80 μL/min د جریان په کچه. د غوره اخراج شرایطو لاندې، د هر کالم (100 × 1.8 mm id) تیوریکي پلیټ شمیره (N) 20,000 ± 100 (200,000 پلیټونه/m²) ده. جدول 3 د دریو PMP ستنو لپاره د N ارزښتونه ورکوي او کروماتګرامونه په شکل 5A کې ښودل شوي. د لوړ جریان په کچه (700 μL/min) کې د PMP ستنې په اړه چټک تحلیل، پنځه پیپټایډونه په یوه دقیقه کې خارج شوي، د N ارزښتونه خورا ښه وو، په هر کالم کې 13,500 ± 330 (100 × 1.8 mm id)، د 135,000 پلیټونو/m سره مطابقت لري (شکل 5B). درې ورته اندازې کالمونه (100 × 1.8 mm id) د PMP سټیشنري مرحلې درې مختلف لوټونو سره بسته شوي ترڅو چیک شي. د هر ستون لپاره د تحلیل غلظت د غوره اخراج شرایطو او د تیوریکي پلیټونو N او ساتلو وخت په کارولو سره ثبت شوی ترڅو په هر ستون کې ورته ازموینې مخلوط جلا کړي. د PMP ستونونو لپاره د تکثیر کولو معلومات په جدول 4 کې ښودل شوي. د PMP ستون د تکثیر کولو وړتیا د خورا ټیټ %RSD ارزښتونو سره ښه اړیکه لري، لکه څنګه چې په جدول 3 کې ښودل شوي.
د پیپټایډ مخلوط جلا کول د PMP کالم (B) او اسینټیس ایکسپریس RP-امایډ کالم (A) باندې؛ د ګرځنده مرحله 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1٪)، د PMP کالم ابعاد (100 × 1.8 ملي میتر id)؛ تحلیلي د مرکبونو د ایستلو ترتیب: 1 (Gly-Tyr)، 2 (Gly-Leu-Tyr)، 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg)، 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) او 5 (leucine) اسید انکیفالین)).
د لوړ فعالیت مایع کروماتګرافي کې د انسان سیرم البومین د ټریپټیک هضمونو د جلا کولو لپاره د PMP کالم (100 × 1.8 ملي میتر id) ارزول شوی و. په شکل 6 کې کروماتګرام ښیې چې نمونه ښه جلا شوې او ریزولوشن یې خورا ښه دی. د HSA هضمونه د 100 µL/min د جریان کچه، د ګرځنده مرحله 70/30 acetonitrile/اوبو او 0.1٪ TFA په کارولو سره تحلیل شوي. لکه څنګه چې په کروماتګرام (شکل 6) کې ښودل شوي، د HSA هضم په 17 پیپټایډونو سره مطابقت لرونکي 17 څوکو ویشل شوی. د HSA هضم کې د هرې څوکې د جلا کولو موثریت محاسبه شوی او ارزښتونه یې په جدول 5 کې ورکړل شوي دي.
د HSA (100 × 1.8 ملي میتر id) یو ټریپټیک ډایجسټ د PMP په ستون کې جلا شو؛ د جریان کچه (100 µL/min)، ګرځنده مرحله 60/40 اسیتونټریل/اوبه د 0.1٪ TFA سره.
چیرې چې L د ستنې اوږدوالی دی، η د ګرځنده پړاو واسکاسیټي ده، ΔP د ستنې شاته فشار دی، او u د ګرځنده پړاو خطي سرعت دی. د PMP ستنې د نفوذ وړتیا 2.5 × 10-14 m2 وه، د جریان کچه 25 μL/min وه، او 60/40 v/v ACN/اوبه کارول شوې وه. د PMP ستنې د نفوذ وړتیا (100 × 1.8 mm id) زموږ د پخوانۍ مطالعې سره ورته وه Ref.34. د ستنې د نفوذ وړتیا چې د سطحي سوري ذراتو سره ډکه ده: 1.7 × 10-15 د 1.3 μm ذراتو لپاره، 3.1 × 10-15 د 1.7 μm ذراتو لپاره، 5.2 × 10-15 او 2.5 × 10-14 m2 د 2.6 μm ذراتو لپاره د 5 μm ذراتو لپاره 43. له همدې امله، د PMP پړاو د نفوذ وړتیا د 5 μm سره ورته ده د کور-شیل ذرات.
چیرې چې Wx د کلوروفارم سره ډک شوي ستنې وزن دی، Wy د میتانول سره ډک شوي ستنې وزن دی، او ρ د محلول کثافت دی. د میتانول کثافت (ρ = 0.7866) او کلوروفارم (ρ = 1.484). د SILICA PARTICLES-C18 ستنو (100 × 1.8 mm id) 34 او C18-Urea ستنو 31 ټول porosity چې موږ مخکې مطالعه کړې وه په ترتیب سره 0.63 او 0.55 وو. دا پدې مانا ده چې د یوریا لیګنډونو شتون د سټیشنري مرحلې نفوذ کموي. له بلې خوا، د PMP ستنې (100 × 1.8 mm id) ټول porosity 0.60 دی. د PMP ستنو نفوذ د C18-بند شوي سیلیکا ذراتو سره ډک شوي ستنو په پرتله ټیټ دی ځکه چې د C18 ډول سټیشنري مرحلو کې C18 لیګنډونه د سیلیکا ذراتو سره د خطي زنځیرونو په توګه وصل دي، پداسې حال کې چې په د پولی سټیرین ډوله سټیشنري پړاوونو کې، د هغې شاوخوا یو نسبتا موټی پولیمر طبقه جوړیږي. په یوه عادي تجربه کې، د ستنې مساحت په لاندې ډول محاسبه کیږي:
شکل 7A، B د وین ډیمټر پلاټ د ورته اخراج شرایطو (یعنې، 60/40 ACN/H2O او 0.1٪ TFA) په کارولو سره د PMP کالم (100 × 1.8 ملي میتر id) او اسینټیس ایکسپریس RP-امایډ کالم (100 × 1.8 ملي میتر id) ښیې. د پیپټایډ غوره شوي مخلوطونه (ګلای-ټایر، ګلای-لیو-ټایر، ګلای-ګلای-ټایر-ارګ، ټایر-ایل-ګلای-سر-ارګ، لیوسین اینکیفالین) په 20 µL/ کې چمتو شوي وو. د دواړو ستنو لپاره لږترلږه د جریان کچه 800 µL/min ده. د PMP کالم او د اسینټیس ایکسپریس RP-امایډ کالم لپاره د غوره جریان کچه (80 µL/min) کې لږترلږه HETP ارزښتونه په ترتیب سره 2.6 µm او 3.9 µm وو. د HETP ارزښتونه ښیي چې د PMP کالم (100 × 1.8 mm id) د جلا کولو موثریت د سوداګریزې شتون لرونکي اسینټیس ایکسپریس RP-امایډ کالم (100 × 1.8 mm id) په پرتله خورا ښه دی. په شکل 7(A) کې د وین ډیمټر پلاټ ښیې چې د جریان زیاتوالي سره د N ارزښت کمیدل زموږ د تیرو مطالعې په پرتله د پام وړ ندي. د PMP کالم لوړ جلا کولو موثریت (۱۰۰ × ۱.۸ ملي میتر id) د اسینټیس ایکسپریس RP-Amide کالم په پرتله د ذراتو شکل، اندازې، او پیچلي کالم بسته بندۍ پروسیجرونو کې د ښه والي پراساس دی چې په اوسني کار کې کارول کیږي34.
(الف) د وین ډیمټر پلاټ (HETP د ګرځنده فیز خطي سرعت په مقابل کې) د PMP کالم (100 × 1.8 ملي میتر id) په کارولو سره په 60/40 ACN/H2O کې د 0.1٪ TFA سره ترلاسه شوی. (ب) د وین ډیمټر پلاټ (HETP د ګرځنده فیز خطي سرعت په مقابل کې) د 60/40 ACN/H2O کې د 0.1٪ TFA سره د اسینټیس ایکسپریس RP-امایډ کالم (100 × 1.8 ملي میتر id) په کارولو سره ترلاسه شوی.
د لوړ فعالیت مایع کروماتګرافي کې د مصنوعي پیپټایډ مخلوط او د انسان سیرم البومین (HAS) ټریپسین هضمونو جلا کولو لپاره د قطبي-ایمبیډ شوي پولی سټیرین سټیشنري مرحله چمتو او ارزول شوې. د پیپټایډ مخلوط لپاره د PMP کالمونو کروماتګرافیک فعالیت د جلا کولو موثریت او حل کې عالي دی. د PMP کالمونو د جلا کولو ښه فعالیت د مختلفو دلیلونو له امله دی، لکه د سیلیکا ذراتو د ذراتو اندازه او د سوري اندازه، د سټیشنري مرحلې کنټرول شوی ترکیب، او پیچلي کالم بسته بندي. د لوړ جلا کولو موثریت سربیره، د لوړ جریان نرخونو کې د کالم شاته ټیټ فشار د دې سټیشنري مرحلې بله ګټه ده. د PMP کالمونه ښه تولیدي وړتیا ښیې او د پیپټایډ مرکبونو تحلیل او د مختلف پروټینونو ټریپسین هضم لپاره کارول کیدی شي. موږ اراده لرو چې دا کالم د طبیعي محصولاتو جلا کولو لپاره وکاروو، د درملو بوټو څخه بایو فعال مرکبات او د مایع کروماتګرافي کې د فنګسي استخراج. په راتلونکي کې، د PMP کالمونه به د پروټینونو او مونوکلونل انټي باډیز جلا کولو لپاره هم ارزول شي.
فیلډ، جي کې، یوربي، ایم آر، لاو، جي، توګرسن، ایچ او پیټرسن، پي. د معکوس شوي پړاو کروماتګرافي لخوا د پیپټایډ جلا کولو سیسټمونو په اړه څیړنه لومړۍ برخه: د ستون ځانګړتیا پروتوکول پراختیا. جي کې کروماتګرافي.۱۶۰۳، ۱۱۳–۱۲۹.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (۲۰۱۹).
ګومیز، بي. او نور. د ساري ناروغیو د درملنې لپاره ډیزاین شوي فعال پیپټایډونه ښه شوي. بایو ټیکنالوژي. پرمختللی. 36(2)، 415-429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
ویلیګ، پي.، لیسوسکي، وي.، مارتینز، جي. او کریسټچاټیسکي، ایم. مصنوعي معالجوي پیپټایډونه: ساینس او ​​بازار. د درملو کشف. ۱۵ (۱-۲) نن، ۴۰-۵۶. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (۲۰۱۰).
ژی، ایف.، سمیټ، آر ډي او شین، وای. پرمختللی پروټومیک مایع کروماتګرافی. جي. کروماتګرافی. اې ۱۲۶۱، ۷۸-۹۰ (۲۰۱۲).
لیو، ډبلیو او نور. پرمختللی مایع کروماتګرافي-ماس سپیکٹرومیټري د پراخه هدف لرونکي میټابولومیکونو او پروټومیکونو یوځای کولو ته اجازه ورکوي. انوس. چیم. ایکټا 1069، 89-97 (2019).
چیسنوټ، ایس ایم او سالیسبري، جي جي د مخدره توکو په پراختیا کې د UHPLC رول. جي. سپتمبر. ساینس. 30(8), 1183-1190 (2007).
وو، این او کلاوزن، اې ایم د چټک جلا کولو لپاره د الټرا لوړ فشار مایع کروماتګرافي بنسټیز او عملي اړخونه. جي. سپتمبر. ساینس. 30(8), 1167-1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
رین، ایس اے او چیلیچیف، پي. د درملو په پراختیا کې د الټرا لوړ فعالیت مایع کروماتګرافي کارول. جي. کروماتګرافي.1119(1-2)، 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
ګو، ایچ. او نور. د انټرو ویروسونو د اغیزمن پاکولو لپاره د تیلو په اوبو کې د لوړ داخلي پړاو ایمولشنونو څخه جوړ شوي مونولیتیک میکروپورس هایدروجیلونه. کیمیاوي. بریتانیا. جي. ۴۰۱، ۱۲۶۰۵۱ (۲۰۲۰).
شي، ي.، ژیانګ، آر.، هوروات، سي. او ویلکینز، جي. اې. په پروټومکس کې د مایع کروماتګرافۍ رول. جي. کروماتګرافي. اې ۱۰۵۳(۱-۲)، ۲۷-۳۶ (۲۰۰۴).
فیکیټ، ایس، ویوتهي، جي.-ایل. او ګیلرمي، ډي. د معالجوي پیپټایډونو او پروټینونو د بیرته راګرځیدونکي مرحلې مایع کروماتګرافي جلا کولو کې راڅرګندیدونکي رجحانات: تیوري او غوښتنلیکونه. جي. فارمسي. بایو میډیکل ساینس. انوس. 69، 9-27 (2012).
ګیلار، ایم.، اولیووا، پی.، ډیلي، ای ای او ګیبلر، جي سي د پیپټایډونو دوه اړخیزه جلا کول د RP-RP-HPLC سیسټم په کارولو سره د لومړي او دوهم جلا کولو ابعادو کې د مختلف pH ارزښتونو په کارولو سره. جي. سپتمبر. Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
فیلیټي، ایس. او نور. د لوړ موثریت کروماتګرافیک ستنو د ډله ایز لیږد ځانګړتیاوې او متحرک فعالیت چې د C18 فرعي 2 μm سره ډک شوي په بشپړ ډول او سطحي ډول سوري ذراتو سره وڅیړل شول. J. سپتمبر. Sci.43 (9-10)، 1737-1745 (2020).
پیوویسانا، ایس. او نور. د نباتاتو د بایو اکټیو پیپټایډونو په جلا کولو، پیژندنه او اعتبار کې وروستي رجحانات او تحلیلي ننګونې.anus.biological anus.Chemical.410(15)، 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
مولر، جي بي او نور. د ژوند د سلطنت پروټومیک منظره. طبیعت 582(7813)، 592-596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
ډیلوکا، سي. او نور. د چمتووالي مایع کروماتګرافي په واسطه د معالجوي پیپټایډونو ښکته جریان پروسس کول. مالیکول (بیسل، سویزرلینډ) 26(15)، 4688(2021).
یانګ، وای او ګینګ، ایکس. مخلوط حالت کروماتګرافي او د بایوپولیمرونو لپاره یې کارول. جي. کروماتګرافي. اې ۱۲۱۸(۴۹)، ۸۸۱۳–۸۸۲۵ (۲۰۱۱).
ژاو، جي.، ډونګ، ایکس.-ی. او سن، وای. د مخلوط حالت پروټین کروماتګرافي لپاره لیګنډونه: اصل، ځانګړتیا، او ډیزاین. جي. بایو ټیکنالوژي.144(1)، 3-11 (2009).