Nature.com သို့ ဝင်ရောက်ကြည့်ရှုသည့်အတွက် ကျေးဇူးတင်ပါသည်။ သင်အသုံးပြုနေသော browser ဗားရှင်းတွင် CSS အတွက် ပံ့ပိုးမှု အကန့်အသတ်ရှိသည်။ အကောင်းဆုံးအတွေ့အကြုံအတွက်၊ အပ်ဒိတ်လုပ်ထားသော browser ကို အသုံးပြုရန် (သို့မဟုတ် Internet Explorer ရှိ compatibility mode ကို ပိတ်ရန်) အကြံပြုအပ်ပါသည်။ ထိုအတောအတွင်း၊ ဆက်လက်ပံ့ပိုးမှုရရှိစေရန်အတွက်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် styles နှင့် JavaScript မပါဘဲ site ကို ပြသပါမည်။
macroporous အမှုန်များရရှိရန် ပြုပြင်မွမ်းမံမှုအချို့ဖြင့် sol-gel နည်းလမ်းဖြင့် porous silica အမှုန်များကို ပြင်ဆင်ခဲ့သည်။ ဤအမှုန်များကို polystyrene (PMP) stationary phase ၏ N-phenylmaleimide intercalation ကိုပြင်ဆင်ရန် N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) နှင့် styrene တို့ဖြင့် reversible addition fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization ဖြင့် derivative လုပ်ခဲ့သည်။ narrow-bore stainless steel columns (100 × 1.8 mm id) ကို slurry packing ဖြင့်ထုပ်ပိုးခဲ့သည်။ peptide ငါးမျိုး (Gly-Tyr၊ Gly-Leu-Tyr၊ Gly-Gly-Tyr-Arg၊ Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg၊ leucine enkephalin) chromatographic performance) နှင့် human serum albumin (HAS) ၏ trypsin digestion တို့ပါဝင်သော peptide mixture ၏ PMP column ခွဲထုတ်မှုကို အကဲဖြတ်ခဲ့သည်။ အကောင်းဆုံး elution အခြေအနေများအောက်တွင် peptide mixture ၏ theoretical plate count သည် plates/m² 280,000 အထိမြင့်မားသည်။ ဖွံ့ဖြိုးပြီး column ၏ separation performance ကို နှိုင်းယှဉ်ခြင်း စီးပွားဖြစ် Ascentis Express RP-Amide ကော်လံတွင်၊ ခွဲထုတ်မှုစွမ်းဆောင်ရည်နှင့် ကြည်လင်ပြတ်သားမှုအရ PMP ကော်လံ၏ ခွဲထုတ်မှုစွမ်းဆောင်ရည်သည် စီးပွားဖြစ်ကော်လံထက် သာလွန်ကြောင်း သတိပြုမိပါသည်။
မကြာသေးမီနှစ်များအတွင်း ဇီဝဆေးဝါးလုပ်ငန်းသည် ဈေးကွက်ဝေစုသိသိသာသာတိုးလာသည့် ကျယ်ပြန့်လာသော ကမ္ဘာလုံးဆိုင်ရာဈေးကွက်တစ်ခုဖြစ်လာခဲ့သည်။ ဇီဝဆေးဝါးလုပ်ငန်း၏ ပေါက်ကွဲမှုကြီးထွားမှုနှင့်အတူ1,2,3၊ peptides နှင့် ပရိုတင်းများကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းသည် အလွန်လိုလားဖွယ်ကောင်းသည်။ ပစ်မှတ် peptide အပြင်၊ peptide ပေါင်းစပ်မှုအတွင်း မသန့်စင်မှုများစွာ ထွက်ပေါ်လာသောကြောင့် လိုချင်သော သန့်ရှင်းစင်ကြယ်မှုရှိသော peptides များရရှိရန် chromatographic သန့်စင်မှု လိုအပ်ပါသည်။ ခန္ဓာကိုယ်အရည်များ၊ တစ်ရှူးများနှင့် ဆဲလ်များရှိ ပရိုတင်းများကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းနှင့် လက္ခဏာရပ်ဖော်ထုတ်ခြင်းသည် နမူနာတစ်ခုတည်းတွင် ရှာဖွေတွေ့ရှိနိုင်သော မျိုးစိတ်များစွာရှိသောကြောင့် အလွန်စိန်ခေါ်မှုရှိသော အလုပ်တစ်ခုဖြစ်သည်။ mass spectrometry သည် peptide နှင့် ပရိုတင်း sequencing အတွက် ထိရောက်သောကိရိယာတစ်ခုဖြစ်သော်လည်း၊ ထိုကဲ့သို့သောနမူနာများကို mass spectrometer ထဲသို့ တစ်ကြိမ်တည်းထိုးသွင်းပါက ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုသည် အကောင်းဆုံးမဟုတ်ပါ။ MS ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုမပြုမီ အရည် chromatography (LC) ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုများကို အကောင်အထည်ဖော်ခြင်းဖြင့် ဤပြဿနာကို လျော့ပါးစေနိုင်ပြီး သတ်မှတ်ထားသောအချိန်တွင် mass spectrometer ထဲသို့ ဝင်ရောက်လာသော analytes အရေအတွက်ကို လျှော့ချပေးမည်ဖြစ်သည်။ ထို့အပြင်၊ အရည်အဆင့်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွင်း analytes များကို ကျဉ်းမြောင်းသောဒေသများတွင် အာရုံစိုက်နိုင်ပြီး ဤ analytes များကို အာရုံစူးစိုက်စေပြီး MS ထောက်လှမ်းမှုကို တိုးတက်စေသည်။ အာရုံခံနိုင်စွမ်း။ အရည်ခရိုမာတိုဂရပ်ဖီ (LC) သည် လွန်ခဲ့သောဆယ်စုနှစ်အတွင်း သိသိသာသာတိုးတက်လာပြီး ပရိုတီယိုမစ်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုတွင် ရေပန်းစားသောနည်းပညာတစ်ခုဖြစ်လာသည်7,8,9,10။
ပြောင်းပြန်အဆင့်အရည်ခရိုမာတိုဂရပ်ဖီ (RP-LC) ကို octadecyl-modified silica (ODS) ကို stationary phase အဖြစ်အသုံးပြု၍ peptide ရောစပ်မှုများကို သန့်စင်ခြင်းနှင့် ခွဲထုတ်ခြင်းအတွက် ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့်အသုံးပြုကြသည်11,12,13။ သို့သော်၊ RP stationary phase များသည် ၎င်းတို့၏ရှုပ်ထွေးသောဖွဲ့စည်းပုံနှင့် amphiphilic သဘောသဘာဝကြောင့် peptide များနှင့် ပရိုတင်းများကို ကျေနပ်လောက်သောခွဲထုတ်မှုကို မပေးစွမ်းနိုင်ပါ14,15။ ထို့ကြောင့်၊ polar နှင့် non-polar moieties များဖြင့် peptide များနှင့် ပရိုတင်းများကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်အတွက် အထူးဒီဇိုင်းထုတ်ထားသော stationary phase များ လိုအပ်ပါသည်16။ multimodal interaction များကို ပေးစွမ်းသော Mixed-mode chromatography သည် peptide များ၊ ပရိုတင်းများနှင့် အခြားရှုပ်ထွေးသော ရောစပ်မှုများကို ခွဲထုတ်ရန်အတွက် RP-LC အစားထိုးနည်းလမ်းတစ်ခု ဖြစ်နိုင်သည်။ ရောနှောထားသော mode stationary phase အများအပြားကို ပြင်ဆင်ထားပြီးဖြစ်ပြီး၊ ဤအဆင့်များဖြင့်ထုပ်ပိုးထားသောကော်လံများကို peptide နှင့် ပရိုတင်းခွဲထုတ်ခြင်းအတွက် အသုံးပြုခဲ့သည်17,18,19,20,21။ ရောနှောထားသော mode stationary phase များ (WAX/RPLC၊ HILIC/RPLC၊ polar intercalation/RPLC) သည် peptide နှင့် ပရိုတင်းခွဲထုတ်ခြင်းအတွက် သင့်လျော်ပါသည်။ ဝင်ရိုးစွန်းနှင့် ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်သော အုပ်စုနှစ်မျိုးလုံးရှိနေခြင်း22,23,24,25,26,27,28။ အလားတူပင်၊ covalently bonded polar အုပ်စုများပါ၀င်သည့် polar intercalating stationary phase များသည် ခွဲထုတ်ခြင်းသည် analyte နှင့် stationary phase အကြား အပြန်အလှန် ဆက်သွယ်မှုပေါ်တွင် မူတည်သောကြောင့် polar နှင့် non-polar analytes များအတွက် ကောင်းမွန်သော ခွဲထုတ်နိုင်စွမ်းနှင့် ထူးခြားသော ရွေးချယ်မှုတို့ကို ပြသသည်။ Multimodal interactions 29, 30, 31, 32။ မကြာသေးမီက၊ Zhang et al. 30 သည် dodecyl-terminated polyamine stationary phase ကို ပြင်ဆင်ခဲ့ပြီး hydrocarbons၊ antidepressants၊ flavonoids၊ nucleosides၊ estrogens နှင့် အခြား analytes အများအပြားကို အောင်မြင်စွာ ခွဲထုတ်ခဲ့သည်။ polar intercalator တွင် ဝင်ရိုးစွန်းနှင့် ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်သော အုပ်စုနှစ်မျိုးလုံးရှိသောကြောင့် hydrophobic နှင့် hydrophilic moieties နှစ်မျိုးလုံးရှိသော peptides နှင့် proteins များကို ခွဲထုတ်ရန် အသုံးပြုနိုင်သည်။ Polar-embedded columns (ဥပမာ၊ amide-embedded C18 columns) ကို Ascentis Express RP-Amide columns ဟူသော trade name အောက်တွင် စီးပွားဖြစ်ရရှိနိုင်သော်လည်း ဤ columns များကို amine 33 ကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်အတွက်သာ အသုံးပြုသည်။
လက်ရှိလေ့လာမှုတွင်၊ polar-embedded stationary phase (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) ကို HSA ၏ peptides နှင့် trypsin digests များခွဲထုတ်ရန်ပြင်ဆင်ပြီး အကဲဖြတ်ခဲ့သည်။ stationary phase ကို အောက်ပါဗျူဟာကို အသုံးပြု၍ ပြင်ဆင်ခဲ့သည်။ porous silica အမှုန်များကို ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်ထုတ်ဝေမှုတွင်ပေးထားသောလုပ်ထုံးလုပ်နည်းအရ ပြင်ဆင်မှုပရိုတိုကောကို ပြုပြင်မွမ်းမံမှုအချို့ဖြင့် ပြင်ဆင်ခဲ့သည်။ urea၊ polyethylene glycol (PEG)၊ TMOS၊ ရေ acetic acid အချိုးကို pore အရွယ်အစားကြီးမားသော silica အမှုန်များကိုပြင်ဆင်ရန် ချိန်ညှိခဲ့သည်။ ဒုတိယအနေဖြင့် ligand အသစ်တစ်ခုဖြစ်သော phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate ကို ပေါင်းစပ်ပြီး polar embedded stationary phase ကိုပြင်ဆင်ရန် silica အမှုန်များကို derivatize လုပ်ရန်အသုံးပြုခဲ့သည်။ ရလဒ် stationary phase ကို အကောင်းဆုံး packing ပုံစံကို အသုံးပြု၍ stainless steel column (100 × 1.8 mm id) ထဲသို့ထုပ်ပိုးခဲ့သည်။ column အတွင်း homogeneous bed ဖွဲ့စည်းကြောင်းသေချာစေရန် column packing ကို mechanical vibration ဖြင့်ကူညီသည်။ peptides ငါးမျိုးပါဝင်သော peptide ရောစပ်မှုများ၏ packed column ခွဲထုတ်မှုကို အကဲဖြတ်ပါ။ (Gly-Tyr၊ Gly-Leu-Tyr၊ Gly-Gly-Tyr-Arg၊ Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg၊ Leucine Enkephalin) နှင့် human serum albumin (HAS) ၏ Trypsin digest။ peptide ရောစပ်မှုနှင့် HSA ၏ trypsin digest တို့သည် ကောင်းမွန်သော resolution နှင့် efficiency ဖြင့် ခွဲထုတ်သည်ကို တွေ့ရှိရသည်။ PMP column ၏ ခွဲထုတ်မှုစွမ်းဆောင်ရည်ကို Ascentis Express RP-Amide column ၏ ခွဲထုတ်မှုစွမ်းဆောင်ရည်နှင့် နှိုင်းယှဉ်ခဲ့သည်။ PMP column တွင် peptide နှင့် ပရိုတင်းနှစ်မျိုးလုံးသည် Ascentis Express RP-Amide column ထက် ပိုမိုထိရောက်မှုရှိကြောင်း တွေ့ရှိခဲ့ရပါသည်။
PEG (ပိုလီအီသလင်း ဂလိုင်ကော)၊ ယူရီးယား၊ အက်စီတစ် အက်ဆစ်၊ ထရိုင်မီသော်ဆီလီကိတ် (TMOS)၊ ထရိုင်မီသိုင်း ကလိုရိုဆိုင်လိန်း (TMCS)၊ ထရစ်ပဆင်၊ လူ့သွေးရည်ကြည် အယ်လ်ဘူမင် (HSA)၊ အမိုးနီယမ် ကလိုရိုက်၊ ယူရီးယား၊ ဟက်ဇန်း မီသိုင်းဒိုင်ဆီလာဇန်း (HMDS)၊ မီသာခရီလွိုင်း ကလိုရိုက် (MC)၊ စတိုင်ရင်း၊ ၄-ဟိုက်ဒရောက်စီ-တီအမ်အို၊ ဘန်ဇွိုင်း ပါအောက်ဆိုဒ် (BPO)၊ HPLC အဆင့် အက်စီတိုနိုက်ထရိုက် (ACN)၊ မီသနော၊ ၂-ပရိုပနော နှင့် အက်စီတုန်းတို့ကို Sigma-Aldrich (စိန့်လူးဝစ်၊ မစ်ဆူရီ၊ အမေရိကန်) မှ ဝယ်ယူထားသည်။
ယူရီးယား (၈ ဂရမ်)၊ ပိုလီအီလီသီယမ် ဂလိုင်ကော (၈ ဂရမ်) နှင့် ၀.၀၁ နိုက် အက်စီတစ် အက်ဆစ် ၈ မီလီလီတာ ရောစပ်ထားသော အရောအနှောကို ၁၀ မိနစ်ကြာ မွှေပြီးနောက် ရေခဲကဲ့သို့ အေးသော အခြေအနေတွင် TMOS ၂၄ မီလီလီတာ ထည့်ခဲ့သည်။ ဓာတ်ပြုမှု အရောအနှောကို ၄၀°C တွင် ၆ နာရီကြာ အပူပေးပြီးနောက် သံမဏိ အော်တိုကလေဗ်တွင် ၁၂၀°C တွင် ၈ နာရီကြာ အပူပေးခဲ့သည်။ ရေကို သွန်ထုတ်ပြီး ကျန်ရှိသော ပစ္စည်းကို ၇၀°C တွင် ၁၂ နာရီကြာ အခြောက်ခံခဲ့သည်။ ခြောက်သွေ့သော ပျော့ပျောင်းသော အမှုန်အမွှားကို မီးဖိုတွင် ချောမွေ့စွာ ကြိတ်ချေပြီး ၅၅၀°C တွင် ၁၂ နာရီကြာ ကာလစင်အောင် ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ အမှုန်အရွယ်အစား၊ အပေါက်အရွယ်အစားနှင့် မျက်နှာပြင်ဧရိယာတို့တွင် ပြန်လည်ထုတ်လုပ်နိုင်မှုကို စစ်ဆေးရန် အသုတ်သုံးသုတ်ကို ပြင်ဆင်ပြီး လက္ခဏာရပ်များ ပြသခဲ့သည်။
ဆီလီကာအမှုန်များ၏ မျက်နှာပြင်ပြုပြင်မွမ်းမံခြင်းနှင့်အတူ ကြိုတင်ပေါင်းစပ်ထားသော လီဂန်း phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) ဖြင့် စတိုင်ရင်းဖြင့် ရေဒီယယ်ပိုလီမာရိုက်ဇေးရှင်းပြုလုပ်ခြင်းဖြင့် ပိုလာအုပ်စုပါဝင်သော ဒြပ်ပေါင်းကို ပြင်ဆင်ခဲ့သည်။ ကျောက်စရစ်များနှင့် ပိုလီစတိုင်ရင်းကွင်းဆက်များအတွက် တည်ငြိမ်သောအဆင့်။ ပြင်ဆင်မှုလုပ်ငန်းစဉ်ကို အောက်တွင်ဖော်ပြထားသည်။
N-phenylmaleimide (၂၀၀ မီလီဂရမ်) နှင့် methyl vinyl isocyanate (၁၀၀ မီလီဂရမ်) တို့ကို ခြောက်သွေ့သော toluene တွင် ပျော်ဝင်စေပြီး phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate copolymer (PMCP) ကို ပြင်ဆင်ရန်အတွက် 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ၀.၁ mL ကို ဓာတ်ပြုဖန်ခွက်ထဲသို့ ထည့်ပြီး phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate copolymer (PMCP) ကို ပြင်ဆင်ခဲ့သည်။ အရောအနှောကို ၆၀°C တွင် ၃ နာရီကြာ အပူပေးကာ စစ်ထုတ်ကာ ၄၀°C တွင် ၃ နာရီကြာ အခြောက်ခံခဲ့သည်။
ခြောက်သွေ့သော ဆီလီကာ အမှုန်များ (၂ ဂရမ်) ကို ခြောက်သွေ့သော တိုလူရင်း (၁၀၀ မီလီလီတာ) တွင် ပျံ့နှံ့စေပြီး မွှေကာ ၅၀၀ မီလီလီတာဆံ့ အောက်ခြေဝိုင်းသော ပုလင်းထဲတွင် ၁၀ မိနစ်ကြာ sonicated လုပ်ခဲ့သည်။ PMCP (၁၀ မီလီဂရမ်) ကို တိုလူရင်းတွင် ပျော်ဝင်စေပြီး dropping funnel မှတစ်ဆင့် reaction flask ထဲသို့ dropping funnel မှတစ်ဆင့် ထည့်ပါ။ အရောအနှောကို ၁၀၀°C တွင် ၈ နာရီကြာ reflux လုပ်ကာ စစ်ထုတ်ပြီး acetone ဖြင့် ဆေးကြောကာ ၆၀°C တွင် ၃ နာရီကြာ အခြောက်ခံခဲ့သည်။ ထို့နောက် PMCP-bonded ဆီလီကာ အမှုန်များ (၁၀၀ ဂရမ်) ကို တိုလူရင်း (၂၀၀ မီလီလီတာ) တွင် ပျော်ဝင်စေပြီး catalyst အဖြစ် dibutyltin dilaurate ၁၀၀ µL ရှိနေချိန်တွင် 4-hydroxy-TEMPO (၂ မီလီလီတာ) ကို ထည့်ပါ။ အရောအနှောကို ၅၀°C တွင် ၈ နာရီကြာ မွှေပြီး စစ်ထုတ်ကာ ၅၀°C တွင် ၃ နာရီကြာ အခြောက်ခံခဲ့သည်။
စတိုင်ရင်း (1 mL)၊ ဘန်ဇိုဝိုင်ပါအောက်ဆိုဒ် BPO (0.5 mL) နှင့် TEMPO-PMCP နှင့် တွဲဖက်ထားသော ဆီလီကာ အမှုန်များ (1.5 g) ကို တိုလူရင်းတွင် ပျံ့နှံ့စေပြီး နိုက်ထရိုဂျင်ဖြင့် သန့်စင်ပေးခဲ့သည်။ စတိုင်ရင်း ပေါ်လီမာရိုက်ဇေးရှင်းကို 100°C တွင် 12 နာရီကြာ ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ ရရှိလာသော ထုတ်ကုန်ကို မီသနောဖြင့် ဆေးကြောပြီး 60°C တွင် တစ်ညလုံး အခြောက်ခံခဲ့သည်။ အလုံးစုံ ဓာတ်ပြုမှုပုံစံကို ပုံ ၁ တွင် ပြသထားသည်။
10-3 Torr အောက် ကျန်ရှိသောဖိအားရရှိရန် နမူနာများကို 393 K တွင် 1 နာရီကြာ degassed လုပ်ခဲ့သည်။ P/P0 = 0.99 ၏ ဆွေမျိုးဖိအားတွင် စုပ်ယူထားသော N2 ပမာဏကို စုစုပေါင်း pore volume ကို ဆုံးဖြတ်ရန် အသုံးပြုခဲ့သည်။ bare နှင့် ligand-bonded silica အမှုန်များ၏ morphology ကို scanning electron microscopy (Hitachi High Technologies, Tokyo, Japan) ဖြင့် စစ်ဆေးခဲ့သည်။ အခြောက်ခံထားသော နမူနာများ (bare silica နှင့် ligand-bonded silica အမှုန်များ) ကို adhesive carbon tape ကို အသုံးပြု၍ အလူမီနီယမ်ကော်လံပေါ်တွင် ထားခဲ့သည်။ Q150T sputter coater ကို အသုံးပြု၍ နမူနာများပေါ်တွင် ရွှေကို ချထားပြီး 5 nm Au အလွှာကို နမူနာများပေါ်တွင် တင်ထားသည်။ ၎င်းသည် ဗို့အားနိမ့်များကို အသုံးပြု၍ လုပ်ငန်းစဉ်ထိရောက်မှုကို တိုးတက်စေပြီး ကောင်းမွန်သော အမှုန်အမွှား၊ cold sputtering ကို ပေးစွမ်းသည်။ ဒြပ်စင်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက် Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112 elemental analyzer ကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ အမှုန်အရွယ်အစား ဖြန့်ဖြူးမှုကို ရရှိရန် Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 particle size analyzer ကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ Naked silica အမှုန်များနှင့် ligand-bonded silica အမှုန်များ (တစ်ခုလျှင် 5 mg) ကို isopropanol 5 mL တွင် ပျံ့နှံ့စေပြီး 10 မိနစ်ကြာ sonicated လုပ်ကာ 5 မိနစ်ကြာ vortexed လုပ်ကာ Mastersizer ၏ optical bench ပေါ်တွင် တင်ခဲ့သည်။ Thermogravimetric ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုကို 30 မှ 800 °C အပူချိန်အပိုင်းအခြားတွင် တစ်မိနစ်လျှင် 5 °C နှုန်းဖြင့် ပြုလုပ်ခဲ့သည်။
ဖန်ဖြင့်ကာရံထားသော သံမဏိဖြင့်ပြုလုပ်ထားသော ကျဉ်းမြောင်းသောအပေါက် (100 × 1.8 mm id) အတိုင်းအတာရှိသော ကော်လံများကို Ref. တွင်အသုံးပြုသည့်အတိုင်း slurry packing နည်းလမ်းကို အသုံးပြု၍ ထုပ်ပိုးထားသည်။ ၃၁။ ဖန်သားဖြင့် ကာရံထားသော၊ 100 × 1.8 mm id) 1 µm frit ပါ၀င်သည့် outlet fitting ပါရှိသော stainless steel column တစ်ခုကို slurry packer (Alltech Deerfield, IL, USA) နှင့် ချိတ်ဆက်ထားသည်။ stationary phase 150 mg ကို methanol 1.2 mL တွင် ဆိုင်းငံ့ထားခြင်းဖြင့် stationary phase slurry ကို ပြင်ဆင်ပြီး storage column သို့ ပို့ပါ။ Methanol ကို slurry solvent အဖြစ်ရော propelling solvent အဖြစ်ပါ အသုံးပြုသည်။ 100 MP ကို ​​10 မိနစ်၊ 80 MP ကို ​​15 မိနစ် နှင့် 60 MP ကို ​​30 မိနစ် ဖိအားပေးခြင်းဖြင့် column ကို အစဉ်လိုက် ဖြည့်ပါ။ packing လုပ်နေစဉ်အတွင်း column ၏ uniform packing ကို သေချာစေရန် GC column shakers နှစ်ခု (Alltech, Deerfield, IL, USA) ဖြင့် စက်ပိုင်းဆိုင်ရာ တုန်ခါမှုကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ column အတွင်း မည်သည့်ပျက်စီးမှုကိုမဆို ကာကွယ်ရန် slurry packing ကို ပိတ်ပြီး ဖိအားကို ဖြည်းဖြည်းချင်း လွှတ်ပါ။ slurry packing unit မှ column ကို ဖြုတ်ပြီး ၎င်း၏စွမ်းဆောင်ရည်ကို စစ်ဆေးရန် inlet နှင့် LC system သို့ အခြား fitting တစ်ခုကို ချိတ်ဆက်ပါ။
LC ပန့် (10AD Shimadzu၊ ဂျပန်)၊ 50nL ထိုးသွင်းကွင်း၊ အမြှေးပါး degasser (Shimadzu DGU-14A)၊ UV-VIS capillary window ပါရှိသော injector (Valco (USA) C14 W.05) ကို တည်ဆောက်ထားသည်။ အထူး µLC device detector (UV-2075) နှင့် ဖန်ဖြင့်စီထားသော microcolumns များ။ extra column band broadening ၏အကျိုးသက်ရောက်မှုကို လျှော့ချရန် အလွန်ကျဉ်းမြောင်းပြီး တိုတောင်းသော ချိတ်ဆက်ပြွန်များကို အသုံးပြုပါ။ ထုပ်ပိုးပြီးနောက်၊ capillaries (50 μm id 365) နှင့် reducing union capillaries (50 μm) များကို reducing union ၏ 1/16″ outlet တွင် တပ်ဆင်ထားသည်။ အချက်အလက်စုဆောင်းခြင်းနှင့် chromatographic processing ကို Multichro 2000 software ကို အသုံးပြု၍ ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ 254 nm တွင် စောင့်ကြည့်ခြင်းကို UV absorbance အတွက် Analytes များကို စမ်းသပ်ခဲ့သည်။ Chromatographic data ကို OriginPro8 (Northampton, MA) မှ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။
လူ့သွေးရည်ကြည်မှရရှိသော အယ်လ်ဘူမင်၊ ခြောက်သွေ့အောင်ပြုလုပ်ထားသော အမှုန့်၊ ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 mg ကို trypsin (1.5 mg)၊ 4.0 M urea (1 mL) နှင့် 0.2 M ammonium bicarbonate (1 mL) တို့ဖြင့် ရောစပ်ထားသည်။ ပျော်ရည်ကို မိနစ် ၁၀ မွှေပြီး 37°C တွင် ရေကန်ထဲတွင် ၆ နာရီကြာ ထားပါ၊ ထို့နောက် 0.1% TFA 1 mL ဖြင့် အအေးခံပါ။ ပျော်ရည်ကို စစ်ထုတ်ပြီး ၄°C အောက်တွင် သိမ်းဆည်းပါ။
peptide ရောစပ်မှုများနှင့် HSA trypsin ချေဖျက်မှုများ ခွဲထုတ်ခြင်းကို PMP ကော်လံများတွင် သီးခြားစီ အကဲဖြတ်ခဲ့သည်။ PMP ကော်လံဖြင့် HSA ၏ peptide ရောစပ်မှုများနှင့် trypsin ချေဖျက်မှုများ ခွဲထုတ်မှုကို စစ်ဆေးပြီး ရလဒ်များကို Ascentis Express RP-Amide ကော်လံနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါ။ သီအိုရီဆိုင်ရာ ပြားနံပါတ်ကို အောက်ပါအတိုင်း တွက်ချက်သည်။
bare silica အမှုန်များနှင့် ligand-bonded silica အမှုန်များ၏ SEM ပုံများကို ပုံ ၂ တွင် ပြသထားသည်။ bare silica အမှုန်များ၏ SEM ပုံများ (A၊ B) သည် ကျွန်ုပ်တို့၏ ယခင်လေ့လာမှုများနှင့် ဆန့်ကျင်ဘက်အနေဖြင့် ဤအမှုန်များသည် ရှည်လျားသည် သို့မဟုတ် မမှန်သော ဆ៊ီမက်ထရီရှိသည့် လုံးဝိုင်းပုံသဏ္ဍာန်ရှိကြောင်း ပြသသည်။ ligand-bonded silica အမှုန်များ၏ မျက်နှာပြင် (C၊ D) သည် bare silica အမှုန်များထက် ချောမွေ့ပြီး ၎င်းသည် silica အမှုန်များ၏ မျက်နှာပြင်ပေါ်ရှိ polystyrene ကွင်းဆက်များကို ဖုံးအုပ်ထားခြင်းကြောင့် ဖြစ်နိုင်သည်။
ဆီလီကာအမှုန်အမွှားများ (A၊ B) နှင့် လီဂန်းချိတ်ဆက်ထားသော ဆီလီကာအမှုန်အမွှားများ (C၊ D) တို့၏ စကင်န်ဖတ်အီလက်ထရွန် မိုက်ခရိုစကုပ်ပုံရိပ်များ။
bare silica အမှုန်များနှင့် ligand-bonded silica အမှုန်များ၏ အမှုန်အရွယ်အစား ဖြန့်ဖြူးမှုကို ပုံ ၃(က) တွင် ပြသထားသည်။ Volume-based particle size distribution curves များက silica အမှုန်များ၏ အရွယ်အစားသည် ဓာတုဗေဒ ပြုပြင်မွမ်းမံပြီးနောက် တိုးလာကြောင်း ပြသသည် (ပုံ ၃က)။ လက်ရှိလေ့လာမှုနှင့် ယခင်လေ့လာမှုမှ silica အမှုန်များ၏ အမှုန်အရွယ်အစား ဖြန့်ဖြူးမှုဒေတာကို ဇယား ၁(က) တွင် နှိုင်းယှဉ်ထားသည်။ PMP ၏ volume-based particle size, d(0.5) သည် ad(0.5) တန်ဖိုး 3.05 μm (polystyrene-bound silica အမှုန်များ)34 ဖြင့် ကျွန်ုပ်တို့၏ ယခင်လေ့လာမှုနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက 3.36 μm ရှိသည်။ ဤအသုတ်တွင် ဓာတ်ပြုမှု ရောစပ်မှုတွင် PEG၊ urea၊ TMOS နှင့် acetic acid အချိုးအစား ကွဲပြားမှုကြောင့် ကျွန်ုပ်တို့၏ ယခင်လေ့လာမှုနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက အမှုန်အရွယ်အစား ဖြန့်ဖြူးမှု ပိုမိုကျဉ်းမြောင်းသည်။ PMP phase ၏ အမှုန်အရွယ်အစားသည် ကျွန်ုပ်တို့ ယခင်က လေ့လာခဲ့သော polystyrene-bound silica အမှုန်အဆင့်ထက် အနည်းငယ်ပိုကြီးသည်။ ဆိုလိုသည်မှာ styrene ပါသော silica အမှုန်များ၏ မျက်နှာပြင်လုပ်ဆောင်ချက်သည် silica မျက်နှာပြင်ပေါ်တွင် polystyrene အလွှာ (0.97 µm) ကိုသာ စုပုံစေပြီး PMP phase တွင် အလွှာအထူမှာ ၁.၃၈ မိုက်ခရိုမီတာ။
ဗလာဆီလီကာအမှုန်များနှင့် လီဂန်းနှောင်ထားသော ဆီလီကာအမှုန်များ၏ အမှုန်အရွယ်အစား ဖြန့်ဖြူးမှု (A) နှင့် အပေါက်အရွယ်အစား ဖြန့်ဖြူးမှု (B)။
လက်ရှိလေ့လာမှု၏ ဆီလီကာအမှုန်များ၏ အပေါက်အရွယ်အစား၊ အပေါက်ထုထည်နှင့် မျက်နှာပြင်ဧရိယာကို ဇယား ၁(ခ) တွင် ဖော်ပြထားသည်။ bare silica အမှုန်များနှင့် ligand-bonded silica အမှုန်များ၏ PSD ပရိုဖိုင်များကို ပုံ ၃(ခ) တွင် ပြသထားသည်။ ရလဒ်များသည် ကျွန်ုပ်တို့၏ ယခင်လေ့လာမှုနှင့် နှိုင်းယှဉ်နိုင်သည်။ bare နှင့် ligand-bound silica အမှုန်များ၏ အပေါက်အရွယ်အစားများသည် အသီးသီး ၃၁၀ နှင့် ၂၄၁ ရှိပြီး၊ ဇယား ၁(ခ) တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း ဓာတုဗေဒပြုပြင်မွမ်းမံပြီးနောက် အပေါက်အရွယ်အစားသည် ၆၉ လျော့ကျသွားကြောင်း ညွှန်ပြပြီး curve ၏ပြောင်းလဲမှုကို ပုံ ၃(ခ) တွင် ပြသထားသည်။ အလားတူပင် ဆီလီကာအမှုန်များ၏ အပေါက်ထုထည်သည် ဓာတုဗေဒပြုပြင်မွမ်းမံပြီးနောက် ၀.၆၇ မှ ၀.၅၈ cm3/g အထိ လျော့ကျသွားသည်။ လက်ရှိလေ့လာထားသော ဆီလီကာအမှုန်များ၏ သီးခြားမျက်နှာပြင်ဧရိယာမှာ ၁၁၆ m2/g ဖြစ်ပြီး ကျွန်ုပ်တို့၏ ယခင်လေ့လာမှု (၁၂၄ m2/g) နှင့် နှိုင်းယှဉ်နိုင်သည်။ ဇယား ၁(ခ) တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း ဆီလီကာအမှုန်များ၏ မျက်နှာပြင်ဧရိယာ (m2/g) သည်လည်း ၁၁၆ m2/g မှ ၁၀၅ m2/g အထိ လျော့ကျသွားသည်။ ဓာတုဗေဒပြုပြင်မွမ်းမံပြီးနောက် m2/g။
stationary phase ၏ elemental analysis ရလဒ်များကို ဇယား ၂ တွင် ပြသထားသည်။ လက်ရှိ stationary phase ၏ carbon loading သည် 6.35% ဖြစ်ပြီး ကျွန်ုပ်တို့၏ ယခင်လေ့လာမှု၏ carbon loading ထက် နိမ့်ကျသည် (polystyrene bonded silica အမှုန်အမွှားများ၊ အသီးသီး 7.93%35 နှင့် 10.21%)42။ လက်ရှိ stationary phase ၏ carbon loading သည် နိမ့်ကျသည်၊ အဘယ်ကြောင့်ဆိုသော် လက်ရှိ SP ကို ​​ပြင်ဆင်ရာတွင် styrene အပြင် phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) နှင့် 4-hydroxy-TEMPO ကဲ့သို့သော polar ligands အချို့ကိုအသုံးပြုထားသောကြောင့်ဖြစ်သည်။ လက်ရှိ stationary phase ၏ နိုက်ထရိုဂျင်အလေးချိန်ရာခိုင်နှုန်းသည် ယခင်လေ့လာမှုများတွင် နိုက်ထရိုဂျင်၏ အလေးချိန်အားဖြင့် 0.1735 နှင့် 0.85% အသီးသီးနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက 2.21% ဖြစ်သည်။ ဆိုလိုသည်မှာ phenylmaleimide ကြောင့် လက်ရှိ stationary phase တွင် နိုက်ထရိုဂျင်၏ wt % ပိုမိုမြင့်မားသည်။ အလားတူပင်၊ ထုတ်ကုန်များ (4) နှင့် (5) ၏ carbon loading များသည် အသီးသီး 2.7% နှင့် 2.9% ရှိပြီး၊ ၏ carbon loading မှာ ဇယား ၂ တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း နောက်ဆုံးထုတ်ကုန် (6) သည် ၆.၃၅% ရှိသည်။ PMP stationary phase ဖြင့် ကိုယ်အလေးချိန်ကျဆင်းမှုကို စစ်ဆေးခဲ့ပြီး TGA curve ကို ပုံ ၄ တွင် ပြသထားသည်။ TGA curve သည် ကိုယ်အလေးချိန်ကျဆင်းမှုကို ၈.၆% ပြသထားပြီး ligands များတွင် C သာမက N, O နှင့် H ပါ ပါဝင်သောကြောင့် carbon loading (၆.၃၅%) နှင့် ကောင်းမွန်စွာ ကိုက်ညီပါသည်။
phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ligand ကို silica အမှုန်များ၏ မျက်နှာပြင်ပြုပြင်မွမ်းမံမှုအတွက် ရွေးချယ်ခဲ့ခြင်းမှာ ၎င်းတွင် polar phenylmaleimide အုပ်စုများနှင့် vinylisocyanate အုပ်စုများပါဝင်သောကြောင့်ဖြစ်သည်။ Vinyl isocyanate အုပ်စုများသည် styrene နှင့် ဆက်လက်ဓာတ်ပြုနိုင်သည်။ ဒုတိယအကြောင်းရင်းမှာ analyte နှင့် အသင့်အတင့် အပြန်အလှန်အကျိုးသက်ရောက်မှုရှိပြီး analyte နှင့် stationary phase အကြားတွင် ပြင်းထန်သော electrostatic အပြန်အလှန်အကျိုးသက်ရောက်မှုမရှိသော အုပ်စုတစ်ခုကို ထည့်သွင်းရန်ဖြစ်သည်၊ အဘယ်ကြောင့်ဆိုသော် phenylmaleimide moiety သည် ပုံမှန် pH တွင် virtual charge မရှိသောကြောင့်ဖြစ်သည်။ stationary phase ၏ polarity ကို styrene ၏ အကောင်းဆုံးပမာဏနှင့် free radical polymerization ၏ တုံ့ပြန်မှုအချိန်ဖြင့် ထိန်းချုပ်နိုင်သည်။ တုံ့ပြန်မှု၏ နောက်ဆုံးအဆင့် (free-radical polymerization) သည် အရေးကြီးပြီး stationary phase ၏ polarity ကို ပြောင်းလဲနိုင်သည်။ ဤ stationary phase များ၏ carbon loading ကိုစစ်ဆေးရန် elemental analysis ကို ပြုလုပ်ခဲ့သည်။ styrene ပမာဏနှင့် reaction time တိုးမြှင့်ခြင်းသည် stationary phase ၏ carbon loading ကို တိုးစေပြီး အပြန်အလှန်အကျိုးသက်ရောက်မှုကို တိုးစေကြောင်း တွေ့ရှိခဲ့သည်။ styrene ၏ မတူညီသော အာရုံစူးစိုက်မှုဖြင့် ပြင်ဆင်ထားသော SP များတွင် မတူညီသော carbon loading များရှိသည်။ ထပ်မံ၍ ဤ stationary phase များကို stainless steel columns များထဲသို့ ထည့်သွင်းပြီး ၎င်းတို့၏ chromatographic စွမ်းဆောင်ရည်ကို စစ်ဆေးပါ။ (ရွေးချယ်မှု၊ ကြည်လင်ပြတ်သားမှု၊ N တန်ဖိုး၊ စသည်)။ ဤစမ်းသပ်မှုများအပေါ်အခြေခံ၍ ထိန်းချုပ်ထားသော polarity နှင့် ကောင်းမွန်သော analyte ထိန်းသိမ်းမှုကို သေချာစေရန် PMP stationary phase ကိုပြင်ဆင်ရန် အကောင်းဆုံးဖော်မြူလာကို ရွေးချယ်ခဲ့သည်။
peptide ရောစပ်ပစ္စည်းငါးမျိုး (Gly-Tyr၊ Gly-Leu-Tyr၊ Gly-Gly-Tyr-Arg၊ Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg၊ leucine enkephalin) ကိုလည်း mobile phase ကို အသုံးပြု၍ PMP column ကို အသုံးပြု၍ အကဲဖြတ်ခဲ့သည်။ 60/40 (v/v) acetonitrile/ရေ (0.1% TFA) ကို 80 μL/min စီးဆင်းမှုနှုန်းဖြင့် ဖြန်းပါ။ အကောင်းဆုံး elution အခြေအနေများအောက်တွင်၊ ကော်လံတစ်ခုလျှင် သီအိုရီအရ plate number (N) သည် 20,000 ± 100 (200,000 plates/m²) ဖြစ်သည်။ ဇယား 3 တွင် PMP ကော်လံသုံးခုအတွက် N တန်ဖိုးများကို ပေးထားပြီး chromatograms များကို ပုံ 5A တွင် ပြသထားသည်။ မြင့်မားသော flow rate (700 μL/min) ရှိ PMP ကော်လံတွင် မြန်ဆန်သော analysis ဖြင့်၊ peptide ငါးခုကို တစ်မိနစ်အတွင်း elution လုပ်ခဲ့ပြီး N တန်ဖိုးများသည် အလွန်ကောင်းမွန်ခဲ့ပြီး ကော်လံတစ်ခုလျှင် 13,500 ± 330 (100 × 1.8 mm id)၊ plates/m2 135,000 နှင့် ကိုက်ညီသည် (ပုံ 5B)။ အရွယ်အစားတူညီသော ကော်လံသုံးခု (100 × 1.8 mm id) ကို ပြန်လည်ထုတ်လုပ်နိုင်မှုကို စစ်ဆေးရန်အတွက် PMP stationary phase အသုတ်သုံးခုဖြင့် ထုပ်ပိုးထားသည်။ analyte သည် အကောင်းဆုံး elution အခြေအနေများနှင့် သီအိုရီပြား N အရေအတွက်နှင့် ကော်လံတစ်ခုစီတွင် တူညီသောစမ်းသပ်အရောအနှောကို ခွဲထုတ်ရန် ထိန်းသိမ်းထားသည့်အချိန်ကို အသုံးပြု၍ ကော်လံတစ်ခုစီအတွက် ပါဝင်မှုကို မှတ်တမ်းတင်ခဲ့သည်။ PMP ကော်လံများအတွက် ပြန်လည်ထုတ်လုပ်နိုင်သောဒေတာကို ဇယား ၄ တွင် ပြသထားသည်။ PMP ကော်လံ၏ ပြန်လည်ထုတ်လုပ်နိုင်မှုသည် ဇယား ၃ တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း အလွန်နိမ့်သော %RSD တန်ဖိုးများနှင့် ကောင်းစွာဆက်စပ်နေသည်။
PMP ကော်လံ (B) နှင့် Ascentis Express RP-Amide ကော်လံ (A) တွင် peptide ရောစပ်မှုကို ခွဲထုတ်ခြင်း၊ မိုဘိုင်းအဆင့် 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%)၊ PMP ကော်လံအတိုင်းအတာ (100 × 1.8 mm id)၊ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း ဒြပ်ပေါင်းများ၏ elution အစီအစဉ်- 1 (Gly-Tyr)၊ 2 (Gly-Leu-Tyr)၊ 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg)၊ 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) နှင့် 5 (leucine) acid enkephalin))။
မြင့်မားသောစွမ်းဆောင်ရည်ရှိသောအရည်ခရိုမာတိုဂရပ်ဖီတွင် လူ့သွေးရည်ကြည်အယ်လ်ဘူမင်၏ tryptic digest များကို ခွဲထုတ်ရန်အတွက် PMP ကော်လံ (100 × 1.8 mm id) ကို အကဲဖြတ်ခဲ့သည်။ ပုံ ၆ ရှိ ခရိုမာတိုဂရပ်ဖီက နမူနာကို ကောင်းစွာခွဲထုတ်ထားပြီး resolution အလွန်ကောင်းမွန်ကြောင်းပြသသည်။ HSA digest များကို 100 µL/min စီးဆင်းမှုနှုန်း၊ mobile phase 70/30 acetonitrile/ရေနှင့် 0.1% TFA ကို အသုံးပြု၍ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခဲ့သည်။ ခရိုမာတိုဂရပ်ဖီ (ပုံ ၆) တွင်ပြထားသည့်အတိုင်း၊ HSA digest ကို peptide ၁၇ ခုနှင့်ကိုက်ညီသော peak ၁၇ ခုအဖြစ် ပိုင်းခြားထားသည်။ HSA digest တွင် peak တစ်ခုစီ၏ ခွဲထုတ်စွမ်းဆောင်ရည်ကို တွက်ချက်ပြီး တန်ဖိုးများကို ဇယား ၅ တွင် ဖော်ပြထားသည်။
HSA (100 × 1.8 mm id) ၏ tryptic digest ကို PMP column ပေါ်တွင် ခွဲထုတ်ခဲ့သည်။ စီးဆင်းမှုနှုန်း (100 µL/min)၊ ရွေ့လျားအဆင့် 60/40 acetonitrile/ရေ၊ 0.1% TFA ပါရှိသည်။
L သည် ကော်လံအရှည်၊ η သည် မိုဘိုင်းအဆင့်၏ viscosity၊ ΔP သည် ကော်လံနောက်ကျောဖိအားနှင့် u သည် မိုဘိုင်းအဆင့်၏ linear velocity ဖြစ်သည်။ PMP ကော်လံ၏ permeability မှာ 2.5 × 10-14 m2 ဖြစ်ပြီး၊ flow rate မှာ 25 μL/min ဖြစ်ပြီး 60/40 v/v ACN/water ကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ PMP ကော်လံ (100 × 1.8 mm id) ၏ permeability သည် ကျွန်ုပ်တို့၏ ယခင်လေ့လာမှု Ref.34 နှင့် ဆင်တူသည်။ အပေါ်ယံ porous အမှုန်များဖြင့် ပြည့်နေသော ကော်လံ၏ permeability မှာ- 1.3 μm အမှုန်များအတွက် 1.7 × 10-15၊ 1.7 μm အမှုန်များအတွက် 3.1 × 10-15၊ 2.6 μm အမှုန်များအတွက် 5.2 × 10-15 နှင့် 2.5 × 10-14 m2 ဖြစ်သည်။ 5 μm အမှုန်များအတွက် ၄၃။ ထို့ကြောင့် PMP အဆင့်၏ permeability သည် 5 μm core-shell အမှုန်များနှင့် ဆင်တူသည်။
Wx သည် ကလိုရိုဖောင်းဖြင့်ထုပ်ပိုးထားသောကော်လံ၏အလေးချိန်ဖြစ်ပြီး Wy သည် မီသနောဖြင့်ထုပ်ပိုးထားသောကော်လံ၏အလေးချိန်ဖြစ်ပြီး ρ သည် ပျော်ရည်၏သိပ်သည်းဆဖြစ်သည်။ မီသနော၏သိပ်သည်းဆ (ρ = 0.7866) နှင့် ကလိုရိုဖောင်း (ρ = 1.484)။ ကျွန်ုပ်တို့ယခင်လေ့လာခဲ့သော SILICA PARTICLES-C18 ကော်လံများ (100 × 1.8 mm id) 34 နှင့် C18-Urea ကော်လံ 31 ၏ စုစုပေါင်း porosity မှာ အသီးသီး 0.63 နှင့် 0.55 ဖြစ်သည်။ ဆိုလိုသည်မှာ urea ligands ရှိနေခြင်းသည် stationary phase ၏ permeability ကို လျော့နည်းစေသည်။ အခြားတစ်ဖက်တွင်၊ PMP ကော်လံ (100 × 1.8 mm id) ၏ စုစုပေါင်း porosity မှာ 0.60 ဖြစ်သည်။ PMP ကော်လံများ၏ permeability သည် C18-bonded silica အမှုန်များပါရှိသောကော်လံများထက် နိမ့်ကျသည်၊ အဘယ်ကြောင့်ဆိုသော် C18-type stationary phases များတွင် C18 ligands များသည် silica အမှုန်များနှင့် linear chains များအဖြစ် ချိတ်ဆက်ထားပြီး polystyrene-type stationary phases များတွင် A အတော်လေးထူသော polymer အလွှာဖြစ်သည်။ ၎င်းပတ်လည်တွင် ဖွဲ့စည်းထားသည်။ ပုံမှန်စမ်းသပ်မှုတစ်ခုတွင် ကော်လံ၏ porosity ကို အောက်ပါအတိုင်း တွက်ချက်သည်-
ပုံ ၇A၊B တွင် van Deemter plot ၏ elution အခြေအနေများ (ဆိုလိုသည်မှာ 60/40 ACN/H2O နှင့် 0.1% TFA) ကို အသုံးပြု၍ PMP column (100 × 1.8 mm id) နှင့် Ascentis Express RP-Amide column (100 × 1.8 mm id) ကို ပြသထားသည်။ ရွေးချယ်ထားသော peptide ရောစပ်မှုများ (Gly-Tyr၊ Gly-Leu-Tyr၊ Gly-Gly-Tyr-Arg၊ Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg၊ Leucine Enkephalin) ကို 20 µL/ ဖြင့် ပြင်ဆင်ခဲ့သည်။ ကော်လံနှစ်ခုလုံးအတွက် အနည်းဆုံးစီးဆင်းမှုနှုန်းမှာ 800 µL/min ဖြစ်သည်။ PMP ကော်လံနှင့် Ascentis Express RP-Amide ကော်လံအတွက် အကောင်းဆုံးစီးဆင်းမှုနှုန်း (80 µL/min) တွင် အနည်းဆုံး HETP တန်ဖိုးများသည် အသီးသီး 2.6 µm နှင့် 3.9 µm ဖြစ်သည်။ HETP တန်ဖိုးများက PMP ကော်လံ (100 × 1.8 mm id) ၏ ခွဲထုတ်မှုစွမ်းဆောင်ရည်သည် စီးပွားဖြစ်ရရှိနိုင်သော Ascentis Express RP-Amide ကော်လံ (100 × 1.8 mm id) ထက် များစွာပိုကောင်းကြောင်း ဖော်ပြသည်။ ပုံ 7(A) ရှိ van Deemter plot သည် စီးဆင်းမှုတိုးလာသည်နှင့်အမျှ N တန်ဖိုးလျော့ကျမှုသည် ကျွန်ုပ်တို့၏ယခင်လေ့လာမှုနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက အရေးမကြီးကြောင်း ပြသသည်။ PMP ကော်လံ (100 × ၏ ပိုမိုမြင့်မားသော ခွဲထုတ်မှုစွမ်းဆောင်ရည် Ascentis Express RP-Amide ကော်လံနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက 1.8 mm id) သည် လက်ရှိလုပ်ငန်း၃၄ တွင် အသုံးပြုသော အမှုန်ပုံသဏ္ဍာန်၊ အရွယ်အစားနှင့် ရှုပ်ထွေးသော ကော်လံထုပ်ပိုးခြင်းလုပ်ထုံးလုပ်နည်းများတွင် တိုးတက်မှုများအပေါ် အခြေခံထားသည်။
(က) 0.1% TFA ရှိသော 60/40 ACN/H2O တွင် PMP column (100 × 1.8 mm id) ကို အသုံးပြု၍ ရရှိလာသော van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity)။(ခ) 0.1% TFA ရှိသော 60/40 ACN/H2O တွင် Ascentis Express RP-Amide column (100 × 1.8 mm id) ကို အသုံးပြု၍ ရရှိလာသော van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity)။
မြင့်မားသောစွမ်းဆောင်ရည်ရှိသောအရည် chromatography တွင် ဓာတု peptide ရောစပ်မှုများနှင့် human serum albumin (HAS) ၏ trypsin digests များကို ခွဲထုတ်ရန်အတွက် polar-embedded polystyrene stationary phase ကို ပြင်ဆင်ပြီး အကဲဖြတ်ခဲ့သည်။ peptide ရောစပ်မှုများအတွက် PMP columns များ၏ chromatographic စွမ်းဆောင်ရည်သည် ခွဲထုတ်မှုစွမ်းဆောင်ရည်နှင့် resolution တွင် အလွန်ကောင်းမွန်သည်။ PMP columns များ၏ ခွဲထုတ်မှုစွမ်းဆောင်ရည်တိုးတက်လာခြင်းသည် silica အမှုန်များ၏ အမှုန်အရွယ်အစားနှင့် pore အရွယ်အစား၊ stationary phase ၏ ထိန်းချုပ်ထားသော ပေါင်းစပ်မှုနှင့် complex column packing ကဲ့သို့သော အကြောင်းရင်းများစွာကြောင့်ဖြစ်သည်။ ခွဲထုတ်မှုစွမ်းဆောင်ရည်မြင့်မားခြင်းအပြင်၊ မြင့်မားသောစီးဆင်းမှုနှုန်းတွင် column back pressure နိမ့်ခြင်းသည် ဤ stationary phase ၏ နောက်ထပ်အားသာချက်တစ်ခုဖြစ်သည်။ PMP columns များသည် ကောင်းမွန်သော ပြန်လည်ထုတ်လုပ်နိုင်မှုကို ပြသပြီး peptide ရောစပ်မှုများကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းနှင့် ပရိုတင်းအမျိုးမျိုး၏ trypsin digestion အတွက် အသုံးပြုနိုင်သည်။ ကျွန်ုပ်တို့သည် ဤ column ကို အရည် chromatography တွင် သဘာဝထုတ်ကုန်များ၊ ဆေးဖက်ဝင်အပင်များမှ bioactive ဒြပ်ပေါင်းများနှင့် မှိုထုတ်ယူမှုများကို ခွဲထုတ်ရန်အတွက် အသုံးပြုရန် ရည်ရွယ်ထားသည်။ အနာဂတ်တွင် PMP columns များကို ပရိုတင်းများနှင့် monoclonal antibodies များကို ခွဲထုတ်ရန်အတွက်လည်း အကဲဖြတ်မည်ဖြစ်သည်။
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ပြောင်းပြန်အဆင့် ခရိုမာတိုဂရပ်ဖီဖြင့် ပက်ပတိုက်ခွဲထုတ်ခြင်းစနစ်များဆိုင်ရာ သုတေသန အပိုင်း I: ကော်လံ လက္ခဏာရပ်ဆိုင်ရာ ပရိုတိုကော ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်မှု။ J. Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (၂၀၁၉)။
Gomez၊ B. et al.ကူးစက်ရောဂါများကိုကုသရန်ဒီဇိုင်းထုတ်ထားသော တိုးတက်ကောင်းမွန်သော တက်ကြွသော peptides များ။Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. ဓာတုဗေဒနည်းဖြင့် ကုထုံးဆိုင်ရာ peptides များ- သိပ္ပံနှင့် ဈေးကွက်။ ဆေးဝါးရှာဖွေတွေ့ရှိမှု။ ၁၅ (၁-၂) ယနေ့၊ ၄၀-၅၆။ https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (၂၀၁၀)။
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. အဆင့်မြင့် ပရိုတီယိုမစ် အရည် ခရိုမာတိုဂရပ်ဖီ.J. Chromatography.A 1261, 78–90 (2012).
Liu၊ W. et al. အဆင့်မြင့် အရည် chromatography-mass spectrometry သည် ကျယ်ပြန့်စွာ ပစ်မှတ်ထားသော metabolomics နှင့် proteomics.anus.Chim.Acta 1069၊ 89–97 (2019) တို့ကို ထည့်သွင်းနိုင်စေပါသည်။
Chesnut, SM & Salisbury, JJ ဆေးဝါးဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်ရေးတွင် UHPLC ၏ အခန်းကဏ္ဍ။ J. Sep. Sci.30(8), 1183-1190 (2007)။
Wu, N. & Clausen, AM လျင်မြန်စွာ ခွဲထုတ်ရန်အတွက် အလွန်မြင့်မားသောဖိအား အရည် ခရိုမာတိုဂရပ်ဖီ၏ အခြေခံနှင့် လက်တွေ့ကျသော ရှုထောင့်များ။ J. Sep. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. ဆေးဝါးဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်ရေးတွင် အလွန်မြင့်မားသောစွမ်းဆောင်ရည်ရှိသော အရည်ခရိုမာတိုဂရပ်ဖီ၏ အသုံးချမှု။ J. Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (၂၀၀၆)။
Gu၊ H. et al. အင်တာရိုဗိုင်းရပ်စ်များကို ထိရောက်စွာ သန့်စင်ရန်အတွက် ဆီတွင်ပါဝင်သော ရေတွင်ပါဝင်သော မြင့်မားသော အတွင်းပိုင်းအဆင့် emulsion များမှ ပြင်ဆင်ထားသော monolithic macroporous hydrogels။ Chemical.Britain.J. 401, 126051 (2020)။
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA ပရိုတီအိုမစ်စ်တွင် အရည်ခရိုမာတိုဂရပ်ဖီ၏ အခန်းကဏ္ဍ။ J. Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004)။
Fekete, S., Veuthey, J.-L.& Guillarme, D. ကုထုံးဆိုင်ရာ peptides နှင့် ပရိုတင်းများကို ပြောင်းပြန်အဆင့် အရည် chromatography ခွဲထုတ်ခြင်းတွင် ပေါ်ပေါက်လာသော လမ်းကြောင်းများ- သီအိုရီနှင့် အသုံးချမှုများ။ J. Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012)။
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC ပထမနှင့် ဒုတိယခွဲထုတ်မှုအတိုင်းအတာများတွင် မတူညီသော pH တန်ဖိုးများကို အသုံးပြု၍ RP-RP-HPLC စနစ်ကို အသုံးပြု၍ peptides များကို နှစ်ဘက်မြင်ခွဲထုတ်ခြင်း။ J. Sep. Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti၊ S. et al. C18 sub-2 μm အပြည့်အဝနှင့် မျက်နှာပြင်ဆိုင်ရာ porous အမှုန်များဖြင့်ထုပ်ပိုးထားသော မြင့်မားသောစွမ်းဆောင်ရည်ရှိသော chromatographic columns များ၏ mass transfer ဝိသေသလက္ခဏာများနှင့် kinetic စွမ်းဆောင်ရည်ကို စုံစမ်းစစ်ဆေးခဲ့သည်။ J. Sep. Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020)။
Piovesana၊ S. et al.အပင်ဇီဝတက်ကြွသော peptides များကို ခွဲထုတ်ခြင်း၊ ခွဲခြားသတ်မှတ်ခြင်းနှင့် အတည်ပြုခြင်းတွင် လတ်တလောခေတ်ရေစီးကြောင်းများနှင့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုဆိုင်ရာစိန်ခေါ်မှုများ။anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018)။
Mueller၊ JB et al. အသက်၏နိုင်ငံတော်၏ ပရိုတီယိုမစ်ရှုခင်း။ Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (၂၀၂၀)။
DeLuca၊ C. et al. ပြင်ဆင်မှုအရည် ခရိုမာတိုဂရပ်ဖီဖြင့် ကုထုံးဆိုင်ရာ peptide များ၏ နောက်ဆက်တွဲလုပ်ဆောင်မှု။ မော်လီကျူး (ဘေဆယ်၊ ဆွစ်ဇာလန်) 26(15)၊ 4688(2021)။
Yang, Y. & Geng, X. ရောနှောမုဒ်ခရိုမာတိုဂရပ်ဖီနှင့် ဇီဝပိုလီမာများတွင် ၎င်း၏အသုံးချမှု။ J. Chromatography.A 1218(49), 8813–8825 (2011)။
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. ရောနှောထားသောမုဒ်ပရိုတိန်းခရိုမာတိုဂရပ်ဖီအတွက် လီဂန်းများ- မူ၊ လက္ခဏာရပ်ဖော်ပြချက်နှင့် ဒီဇိုင်း။J. Biotechnology.144(1), 3-11 (2009).