א דאנק פארן באזוכן Nature.com. די בראַוזער ווערסיע וואָס איר ניצט האט באַגרענעצטע שטיצע פֿאַר CSS. פֿאַר דער בעסטער דערפאַרונג, מיר רעקאָמענדירן אַז איר ניצט אַן דערהייַנטיקטן בראַוזער (אָדער דיאַקטיווירן קאָמפּאַטאַבילאַטי מאָדע אין אינטערנעט עקספּלאָרער). אין דער דערווייל, צו ענשור קאַנטיניואַס שטיצע, וועלן מיר ווייַזן די וועבזייטל אָן סטיילז און דזשאַוואַסקריפּט.
פּאָרעזע סיליקאַ פּאַרטיקלען זענען צוגעגרייט געוואָרן דורך אַ סאָל-געל מעטאָד מיט עטלעכע מאָדיפיקאַציעס צו באַקומען מאַקראָפּאָרעזע פּאַרטיקלען. די פּאַרטיקלען זענען דעריוואַטיזירט געוואָרן דורך ריווערסאַבאַל אַדישאַן פראַגמענטאַטיאָן קייט טראַנספער (RAFT) פּאָלימעריזאַציע מיט N-פֿענילמאַלעאימיד-מעטהילוויניליסאָסיאַנאַט (PMI) און סטירענע צו צוגרייטן N-פֿענילמאַלעאימיד אינטערקאַלאַציע פֿון פּאָליסטירען (PMP) סטאַציאָנערע פֿאַזע. שמאָל-באָר ומבאַפלעקט שטאָל קאָלומס (100 × 1.8 מם id) זענען פּאַקט געוואָרן דורך סלערי פּאַקינג. עוואַלואַטעד PMP קאָלום צעשיידונג פֿון אַ פּעפּטייד געמיש באַשטייענדיק פֿון פֿינף פּעפּטיידן (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leusine enkephalin) כראָמאַטאָגראַפֿיש פאָרשטעלונג) און טריפּסין דיידזשעסטשאַן פֿון מענטשלעך סערום אַלבומין (HAS). אונטער אָפּטימאַלע עלושאַן באדינגונגען, די טעאָרעטיש פּלאַטע ציילן פֿון די פּעפּטייד געמיש איז אַזוי הויך ווי 280,000 פּלאַטעס/מ². קאַמפּערינג די צעשיידונג פאָרשטעלונג פֿון די דעוועלאָפּעד קאָלום מיט די קאמערציעלע Ascentis Express. RP-אַמיד קאָלום, עס איז באמערקט געוואָרן אַז די צעשיידונג פאָרשטעלונג פון דער PMP קאָלום איז געווען העכער ווי די קאמערציעלע קאָלום אין טערמינען פון צעשיידונג עפעקטיווקייט און רעזאָלוציע.
אין די לעצטע יאָרן, איז די ביאָפאַרמאַסוטיקאַל אינדוסטריע געוואָרן אַן עקספּאַנדירנדיקער גלאָבאַלער מאַרק מיט אַ באַדייטנדיקער פאַרגרעסערונג אין מאַרק טיילן. מיטן עקספּלאָזיוון וואוקס פון דער ביאָפאַרמאַסוטיקאַל אינדוסטריע1,2,3, איז די אַנאַליז פון פּעפּטיידן און פּראָטעאינען שטאַרק געוואונטשן. אין דערצו צו דעם ציל פּעפּטייד, ווערן עטלעכע אומריינקייטן גענערירט בעת פּעפּטייד סינטעז, אַזוי דאַרף כראָמאַטאָגראַפֿיש רייניקונג צו באַקומען פּעפּטיידן פון דער געוואונטשער ריינקייט. די אַנאַליז און כאַראַקטעריזאַציע פון ​​פּראָטעאינען אין גוף פלוידס, געוועבן און צעלן איז אַן עקסטרעם טשאַלאַנדזשינג אַרבעט רעכט צו דער גרויסער צאָל פון פּאָטענציעל דעטעקטאַבאַל מינים אין אַן איינציקן מוסטער. כאָטש מאַסע ספּעקטראָמעטרי איז אַן עפעקטיוו געצייַג פֿאַר פּעפּטייד און פּראָטעין סיקוואַנסינג, אויב אַזאַ מוסטערן ווערן ינדזשעקטעד אין דעם מאַסע ספּעקטראָמעטער אין איין דורכגאַנג, וועט די צעשיידונג נישט זיין ידעאַל. דאָס פּראָבלעם קען ווערן פאַרמינערט דורך ימפּלאַמענטינג פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע (LC) צעשיידונגען איידער MS אַנאַליז, וואָס וועט רעדוצירן די צאָל פון אַנאַליטן וואָס אַרייַן דעם מאַסע ספּעקטראָמעטער אין אַ געגעבענער צייט4,5,6. אין דערצו, בעת פליסיק פאַסע צעשיידונג, קענען אַנאַליטן ווערן פאָקוסירט אין שמאָלע געגנטן, דערמיט קאָנצענטרירן די אַנאַליטן און פֿאַרבעסערן MS דעטעקשאַן סענסיטיוויטי. פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע (LC) איז באַדייטנדיק אַוואַנסירטע איבער די לעצטע יאָרצענדלינג און איז געוואָרן אַ פּאָפּולערע... טעכניק אין פּראָטעאָמישער אַנאַליז 7,8,9,10.
ריווערסט-פאזע פליסיג כראמאטאגראפיע (RP-LC) ווערט ברייט גענוצט פאר דער רייניקונג און צעשיידונג פון פּעפּטיד געמישן ניצנדיק אקטאדעציל-מאדיפיצירטע סיליקא (ODS) אלס די סטאַציאָנערע פאזע11,12,13. אבער, RP סטאַציאָנערע פאזעס צושטעלן נישט צופרידנשטעלנדיקע צעשיידונג פון פּעפּטיידן און פּראָטעאינען צוליב זייער קאָמפּלעקסער סטרוקטור און אַמפיפילישער נאַטור14,15. דעריבער, ספּעציעל דיזיינד סטאַציאָנערע פאזעס זענען פארלאנגט צו אנאליזירן פּעפּטיידן און פּראָטעאינען מיט פּאָלאַרע און ניט-פּאָלאַרע מאָיעטיס צו ינטעראַקט מיט און האַלטן די אַנאַליטעס16. געמישט-מאָד כראמאטאגראפיע, וואָס גיט מולטימאָדאַל ינטעראַקשאַנז, קען זיין אַן אָלטערנאַטיוו צו RP-LC פֿאַר דער צעשיידונג פון פּעפּטיידן, פּראָטעאינען און אנדערע קאָמפּלעקס געמישן. עטלעכע געמישט-מאָד סטאַציאָנערע פאזעס זענען צוגעגרייט געוואָרן, און קאָלאָנען פּאַקט מיט די פאזעס זענען גענוצט געוואָרן פֿאַר פּעפּטיד און פּראָטעין צעשיידונגען17,18,19,20,21. געמישט-מאָד סטאַציאָנערע פאזעס (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, פּאָלאַרע אינטערקאַליישאַן/RPLC) זענען פּאַסיק פֿאַר פּעפּטיד און פּראָטעין צעשיידונגען צוליב דער בייַזייַן פון ביידע פּאָלאַרע און ניט-פּאָלאַרע. גרופעס22,23,24,25,26,27,28. ענליך, פאלארע אינטערקאלירנדע סטאציאנערע פאזעס מיט קאוואלענט געבונדענע פאלארע גרופעס ווייזן גוטע צעשיידונגס-קראפט און אייגנארטיגע סעלעקטיוויטעט פאר פאלארע און נישט-פאלארע אנאליטן, ווייל צעשיידונג ווענדט זיך אין דער אינטעראקציע צווישן אנאליט און סטאציאנערער פאזע. מולטימאדאלע אינטעראקציעס29, 30, 31, 32. לעצטנס, האבן זשאנג עט אל.30 צוגעגרייט א דאדעציל-טערמינירטע פאליאמין סטאציאנערער פאזע און מצליח געווען צו צעשיידן הידראקארבאנען, אנטידעפּרעסאנטן, פלאוואנאידן, נוקלעאסידן, עסטראגענס, און עטליכע אנדערע אנאליטן. דער פאלארער אינטערקאלאטאר האט ביידע פאלארע און נישט-פאלארע גרופעס, אזוי קען מען עס נוצן צו צעשיידן פעפטידן און פראטעאינען וואס האבן ביידע הידראפאבע און הידראפילישע מאטעריאלן. פאלאר-איינגעבעטענע קאלום'ס (למשל, אמיד-איינגעבעטענע C18 קאלום'ס) זענען קאמערציעל בנימצא אונטערן האנדל-נאמען אסענטיס עקספרעס רפ-אמיד קאלום'ס, אבער די קאלום'ס ווערן גענוצט נאר פאר דער אנאליז פון אמין 33.
אין דער איצטיקער שטודיע, איז א פּאָלאַר-איינגעבעטענע סטאַציאָנערע פאַזע (N-פֿענילמאַלעאימיד-איינגעבעטענע פּאָליסטירענע) צוגעגרייט און עוואַלויִרט געוואָרן פֿאַר צעשיידונג פֿון פּעפּטיידן און טריפּסין דיידזשעסטן פֿון HSA. די סטאַציאָנערע פאַזע איז צוגעגרייט געוואָרן מיט דער פֿאָלגנדיקער סטראַטעגיע. פּאָרעזע סיליקאַ פּאַרטיקלען זענען צוגעגרייט געוואָרן לויט דער פּראָצעדור געגעבן אין אונדזער פֿריִערדיקער פּובליקאַציע מיט עטלעכע מאָדיפֿיקאַציעס צו דעם צוגרייטונג פּראָטאָקאָל. די פּראָפּאָרציע פֿון אורעאַ, פּאָליעטילען גליקאָל (PEG), TMOS, וואַסער עסיק זויער איז אַדזשאַסטיד געוואָרן צו צוגרייטן סיליקאַ פּאַרטיקלען מיט גרויסע פּאָרע גרייס. צווייטנס, איז אַ נייַ ליגאַנד, פֿענילמאַלעאימיד-מעטיל וויניל איזאָסיאַנאַטע, סינטעזירט און געניצט געוואָרן צו דעריוואַטיזירן סיליקאַ פּאַרטיקלען צו צוגרייטן אַ פּאָלאַר-איינגעבעטענע סטאַציאָנערע פאַזע. די רעזולטאַט סטאַציאָנערע פאַזע איז פּאַקט געוואָרן אין אַ ומבאַפלעקט שטאָל קאָלום (100 × 1.8 מם id) מיט דער אָפּטימיזירטער פּאַקינג סכעמע. די קאָלום פּאַקינג ווערט אַסיסטירט מיט מעכאַנישע ווייבריישאַן צו ענשור אַז אַ האָמאָגענע בעט ווערט געשאַפֿן אין דער קאָלום. עוואַלויִרן פּאַקט קאָלום צעשיידונג פֿון פּעפּטייד מישונגען באַשטייענדיק פֿון פֿינף פּעפּטיידן; (גלי-טיר, גלי-לעו-טיר, גלי-גלי-טיר-ארג, טיר-אילע-גלי-סער-ארג, לעוסין ענקעפאלין) און טריפסין דיידזשעסט פון מענטשלעכן סערום אַלבומין (HAS). די פּעפּטיד געמיש און טריפסין דיידזשעסט פון HSA זענען באמערקט געוואָרן צו צעשיידן זיך מיט גוטער רעזאָלוציע און עפעקטיווקייט. די צעשיידונג פאָרשטעלונג פון דער PMP קאָלום איז געווען קאַמפּערד מיט יענער פון דער אַסענטיס עקספּרעסס RP-אַמיד קאָלום. ביידע פּעפּטיידן און פּראָטעאינען זענען באמערקט געוואָרן צו זיין גוט רעזאָלוירט און עפעקטיוו אויף דער PMP קאָלום, וואָס איז געווען מער עפעקטיוו ווי די אַסענטיס עקספּרעסס RP-אַמיד קאָלום.
PEG (פּאָליעטאַלין גליקאָל), אורעאַ, עסיק זויער, טרימעטהאָקסי אָרטאָסיליקאַט (TMOS), טרימעטיל כלאָראָסילאַן (TMCS), טריפּסין, מענטשלעכע סערום אַלבומין (HSA), אַמאָניום קלאָריד, אורעאַ, העקסאַן מעטילדיסילאַזאַן (HMDS), מעטאַקרילאָיל קלאָריד (MC), סטירענע, 4-הידראָקסי-טעמפּאָ, בענזאָיל פּעראַקסייד (BPO), HPLC גראַד אַצעטאָניטריל (ACN), מעטאַנאָל, 2-פּראָפּאַנאָל, און אַצעטאָן געקויפט פון סיגמאַ-אַלדריטש (סעינט לואיס, מאָ, USA).
א געמיש פון אורעאַ (8 ג), פּאָליעטילען גליקאָל (8 ג), און 8 מל פון 0.01 N עסיק זויער איז געווען גערודערט פֿאַר 10 מינוט, און דערנאָך 24 מל פון TMOS איז צוגעגעבן געוואָרן אונטער אייז-קאַלטע באַדינגונגען. די רעאַקציע געמיש איז געווען געהייצט ביי 40°C פֿאַר 6 שעה און דערנאָך ביי 120°C פֿאַר 8 שעה אין אַ ומבאַפלעקט שטאָל אַוטאָקלאַוו. די וואַסער איז אַוועקגעגאָסן און די רעשט מאַטעריאַל איז געטריקנט ביי 70°C פֿאַר 12 שעה. די געטריקנטע ווייכע מאַסע איז גלאַט צעמאָלן אין אַן אויוון און קאַלסינירט ביי 550°C פֿאַר 12 שעה. דריי באַטשעס זענען צוגעגרייט און כאַראַקטעריזירט צו ונטערזוכן רעפּראָדוסיביליטי אין פּאַרטיקל גרייס, פּאָרע גרייס און ייבערפלאַך שטח.
דורך אויבערפלאַך מאָדיפיקאַציע פון ​​סיליקאַ פּאַרטיקלען מיט פאַר-סינטעזירט ליגאַנד פענילמאַלעאימיד-מעטהילוויניליסאָסיאַנאַט (PCMP) נאכגעגאנגען דורך ראַדיאַל פּאָלימעריזאַציע מיט סטירענע, איז אַ פּאָלאַר גרופּע-האַלטנדיק קאַמפּאַונד צוגעגרייט געוואָרן. סטאַציאָנאַרע פאַזע פֿאַר אַגרעגאַטעס און פּאָליסטירען קייטן. דער צוגרייטונג פּראָצעס איז באַשריבן אונטן.
N-פֿענילמאַלעימיד (200 מג) און מעטיל וויניל איזאָסיאַנייט (100 מג) זענען אויפֿגעלייזט געוואָרן אין טרוקענעם טאָלוען, און 0.1 מל פֿון 2,2′-אַזאָיסאָבוטיראָניטריל (AIBN) איז צוגעגעבן געוואָרן צום רעאַקציע־פֿלאַש צו צוגרייטן פֿענילמאַלעימיד-מעטיל וויניל איזאָסיאַנייט קאָפּאָלימער (PMCP). די געמיש איז געהייצט געוואָרן ביי 60°C פֿאַר 3 שעה, פֿילטרירט און געטריקנט אין אַן אויוון ביי 40°C פֿאַר 3 שעה.
געטריקנטע סיליקאַ פּאַרטיקלען (2 ג) זענען צעשפּרייט געוואָרן אין טרוקענעם טאָלוען (100 מל), גערודערט און סאָניקירט אין אַ 500 מל קייַלעכדיקן באָדן פלאַש פֿאַר 10 מינוט. PMCP (10 מג) איז אויפגעלייזט געוואָרן אין טאָלוען און צוגעגעבן טראָפּנסווייז צו דער רעאַקציע פלאַש דורך אַ טראָפּן טריכטער. די געמיש איז געקאָכט געוואָרן ביי 100°C פֿאַר 8 שעה, געפילטערט און געוואַשן מיט אַצעטאָן און געטריקנט ביי 60°C פֿאַר 3 שעה. דערנאָך, PMCP-געבונדענע סיליקאַ פּאַרטיקלען (100 ג) זענען אויפגעלייזט געוואָרן אין טאָלוען (200 מל) און 4-הידראָקסי-טעמפּאָ (2 מל) איז צוגעגעבן געוואָרן אין דער אנוועזנהייט פון 100 µL פון דיבוטילטין דילאַוראַט ווי אַ קאַטאַליסט. די געמיש איז גערודערט געוואָרן ביי 50°C פֿאַר 8 שעה, געפילטערט און געטריקנט ביי 50°C פֿאַר 3 שעה.
סטירען (1 מל), בענזאָיל פּעראָקסייד BPO (0.5 מל), און TEMPO-PMCP-אַטאַטשט סיליקאַ פּאַרטיקלען (1.5 ג) זענען דיספּערסט געוואָרן אין טאָלוען און אויסגערייניקט מיט שטיקשטאָף. די פּאָלימעריזאַציע פון ​​סטירען איז דורכגעפירט געוואָרן ביי 100°C פֿאַר 12 שעה. דער רעזולטאַט איז געוואַשן געוואָרן מיט מעטאַנאָל און געטריקנט ביי 60°C איבער נאַכט. די אַלגעמיינע רעאַקציע סכעמע איז געוויזן אין פיגור 1.
די מוסטערן זענען דעגאזירט געווארן ביי 393 ק פאר 1 שעה צו באקומען א רעזידועל דרוק פון ווייניגער ווי 10-3 טאר. די צאל N2 אדסארבירט ביי א רעלאטיוון דרוק פון P/P0 = 0.99 איז גענוצט געווארן צו באשטימען דעם גאנצן פארע וואליום. די מארפאלאגיע פון ​​נאַקעט און ליגאַנד-געבונדענע סיליקאַ פּאַרטיקלען איז געפּrüפט געווארן מיט סקאַנינג עלעקטראָן מיקראָסקאָפּיע (Hitachi High Technologies, טאָקיאָ, יאַפּאַן). געטריקנטע מוסטערן (נאַקעט סיליקאַ און ליגאַנד-געבונדענע סיליקאַ פּאַרטיקלען) זענען געשטעלט געווארן אויף אן אַלומינום זייל מיט קלעפּיקע קאַרבאָן טייפּ. גאָלד איז געווען פּלייטאַד אויף די מוסטערן מיט א Q150T ספּאַטער קאָוטער, און א 5 נם Au שיכט איז געווען דעפּאַזיטירט אויף די מוסטערן. דאָס פֿאַרבעסערט פּראָצעס עפעקטיווקייט מיט נידעריקע וואָולטידזשעס און גיט פיין קערל, קאַלט ספּאַטערינג. א טערמאָ עלעקטראָן (וואָלטהאַם, מאַ, USA) פלאַש EA1112 עלעמענטאַל אַנאַליזער איז גענוצט געווארן פֿאַר עלעמענטאַל אַנאַליז. א מאַלווערן (וואָרקעסטערשיר, וק) מאַסטערסייזער 2000 פּאַרטיקל גרייס אַנאַליזער איז גענוצט געווארן צו באקומען די פּאַרטיקל גרייס פאַרשפּרייטונג. נאַקעט סיליקאַ פּאַרטיקלען און ליגאַנד-געבונדענע סיליקאַ פּאַרטיקלען. (5 מג יעדער) זענען דיספּערסט געוואָרן אין 5 מל איזאָפּראָפּאַנאָל, סאָניקירט פֿאַר 10 מינוט, געוואָרטעקסט פֿאַר 5 מינוט, און געשטעלט אויף דער אָפּטישער באַנק פֿון דעם מאַסטערסייזער. טערמאָגראַווימעטרישע אַנאַליז איז דורכגעפֿירט געוואָרן מיט אַ קורס פֿון 5 °C פּער מינוט איבער אַ טעמפּעראַטור קייט פֿון 30 ביז 800 °C.
גלאָז-באַדעקטע ומבאַפלעקט שטאָל שמאָל-באָר זיילן מיט דימענסיעס (100 × 1.8 מם אינדעקס) זענען פּאַקט געוואָרן מיטן סלערי פּאַקינג מעטאָד, אַפּליקירנדיק די זעלבע פּראָצעדור געניצט אין רעף. 31. א נישט-ראסטיקע שטאל זייל (גלאז-באדעקט, 100 × 1.8 מ"מ אינדאר) מיט אן אויסגאנג פיטינג מיט א 1 מיקראמעטער פריט איז פארבונדן געווארן צו א סלערי פּאַקער (אלטעק דירפילד, אילינאי, USA).צוגרייט א סטאציאנערע פאזע סלערי דורך סוספענדירן 150 מג פון סטאציאנערע פאזע אין 1.2 מל מעטאנאל און שיקן עס צו דער סטאָרידזש זייל.מעטאנאל איז גענוצט געווארן אלס דער סלערי סאָלווענט און אויך אלס דער פּראָפּעלינג סאָלווענט.פילט די זייל סיקווענשעל דורך צולייגן דרוק פון 100 MP פאר 10 מינוט, 80 MP פאר 15 מינוט, און 60 MP פאר 30 מינוט.בעשאַס פּאַקינג, איז מעכאנישע ווייבריישאַן געווענדט געווארן מיט צוויי GC זייל שעיקערס (אלטעק, דירפילד, אילינאי, USA) צו ענשור גלייכמעסיגע פּאַקינג פון דער זייל.שליסט דעם סלערי פּאַקער און לאָזט דעם דרוק לאַנגזאַם אַרויס צו פאַרמייַדן קיין שעדיקן אין דער זייל.אָפּטיילט די זייל פון דער סלערי פּאַקינג אַפּאַראַט און פאַרבינדט אן אנדער פיטינג צום אַרייַנגאַנג און צום LC סיסטעם צו קאָנטראָלירן זיין פאָרשטעלונג.
אן LC פאמפע (10AD Shimadzu, יאפאן), אינדזשעקטאר (Valco (USA) C14 W.05) מיט 50nL אינדזשעקציע שלייף, מעמבראן דעגאסער (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS קאפילאר פענצטער איז קאנסטרואירט געווארן. ספעציעלע µLC דעווייס דעטעקטאר (UV-2075) און גלאז-געפונענע מיקרא-זיילונגען. ניצן זייער שמאלע און קורצע פארבינדונג רערן צו מינימיזירן דעם עפעקט פון עקסטרע זייל באנד פארברייטערונג. נאך פאקעדזשינג, קאפילארן (50 μm id 365) און רעדוצירנדיקע יוניאן קאפילארן (50 μm) זענען אינסטאלירט געווארן ביים 1/16″ ארויסגאנג פון די רעדוצירנדיקע יוניאן. דאטן זאמלונג און כראמאטאגראפישע באארבעטונג זענען געטאן געווארן מיט Multichro 2000 ווייכווארג. מאניטארינג ביי 254 nm אנאליטן זענען געטעסט געווארן פאר UV אבזארבאנץ. כראמאטאגראפישע דאטן זענען אנאליזירט געווארן דורך OriginPro8 (Northampton, MA).
אַלבומין פֿון מענטשלעכן סערום, ליאָפֿיליזירט פּודער, ≥ 96% (אַגאַראָזע געל עלעקטראָפֿאָרעזיס) 3 מג געמישט מיט טריפּסין (1.5 מג), 4.0 M אורעאַ (1 מל), און 0.2 M אַמאָניום ביקאַרבאָנאַט (1 מל). די לייזונג איז גערודערט געוואָרן פֿאַר 10 מינוט און געהאַלטן אין אַ וואַסער־וואַנע ביי 37°C פֿאַר 6 שעה, און דערנאָך פֿאַרלעשט מיט 1 מל פֿון 0.1% TFA. פֿילטער די לייזונג און לאַגערן אונטער 4°C.
די צעשיידונג פון פּעפּטיד געמישן און HSA טריפּסין דיידזשעסטס זענען עוואַלויִרט געוואָרן באַזונדער אויף PMP קאָלומס. קאָנטראָלירט די צעשיידונג פון די פּעפּטיד געמיש און טריפּסין דיידזשעסט פון HSA דורך די PMP קאָלום און פאַרגלייכט די רעזולטאַטן צו די Ascentis Express RP-Amide קאָלום. די טעאָרעטישע פּלאַטע נומער איז קאַלקיאַלייטיד ווי גייט:
SEM בילדער פון נאַקעטע סיליקאַ פּאַרטיקלען און ליגאַנד-געבונדענע סיליקאַ פּאַרטיקלען ווערן געוויזן אין פיגור 2. SEM בילדער פון נאַקעטע סיליקאַ פּאַרטיקלען (A, B) ווייַזן אַז, אין קאַנטראַסט צו אונדזער פריערדיקע שטודיעס, די פּאַרטיקלען זענען ספעריש אין וועלכע די פּאַרטיקלען זענען פֿאַרלענגערט אָדער האָבן ירעגולערע סימעטריע. די ייבערפלאַך פון די ליגאַנד-געבונדענע סיליקאַ פּאַרטיקלען (C, D) איז גלאַטער ווי די פון די נאַקעטע סיליקאַ פּאַרטיקלען, וואָס קען זיין רעכט צו דער קאָוטינג פון פּאָליסטירען קייטן אויף דער ייבערפלאַך פון די סיליקאַ פּאַרטיקלען.
סקאַנינג עלעקטראָן מיקראָסקאָפּ בילדער פון נאַקעטע סיליקאַ פּאַרטיקלען (A, B) און ליגאַנד-געבונדענע סיליקאַ פּאַרטיקלען (C, D).
די פּאַרטיקל גרייס פאַרשפּרייטונג פון נאַקעטע סיליקאַ פּאַרטיקלען און ליגאַנד-געבונדענע סיליקאַ פּאַרטיקלען ווערן געוויזן אין פיגור 3(A). וואָלומען-באַזירטע פּאַרטיקל גרייס פאַרשפּרייטונג קורוועס האָבן געוויזן אַז די גרייס פון די סיליקאַ פּאַרטיקלען איז געוואַקסן נאָך כעמישער מאָדיפיקאַציע (פיגור 3A). די פּאַרטיקל גרייס פאַרשפּרייטונג דאַטן פון די סיליקאַ פּאַרטיקלען פון דער איצטיקער שטודיע און דער פריערדיקער שטודיע ווערן פאַרגליכן אין טאַבעלע 1(A). די וואָלומען-באַזירטע פּאַרטיקל גרייס, d(0.5), פון PMP איז 3.36 μm, פאַרגליכן מיט אונדזער פריערדיקער שטודיע מיט ad(0.5) ווערט פון 3.05 μm (פּאָליסטירין-געבונדענע סיליקאַ פּאַרטיקלען)34. די באַטש האָט געהאַט אַ שמאָלערע פּאַרטיקל גרייס פאַרשפּרייטונג פאַרגליכן מיט אונדזער פריערדיקער שטודיע רעכט צו די וועריינג פּראָפּאָרציעס פון PEG, ורעאַ, TMOS, און עסיק זויער אין דער רעאַקציע געמיש. די פּאַרטיקל גרייס פון דער PMP פאַזע איז אַ ביסל גרעסער ווי די פון דער פּאָליסטירין-געבונדענער סיליקאַ פּאַרטיקל פאַזע וואָס מיר האָבן פריער געלערנט. דאָס מיינט אַז ייבערפלאַך פאַנגקשאַנאַליזאַציע פון ​​סיליקאַ פּאַרטיקלען מיט סטירין האָט בלויז דעפּאַזאַטירט אַ פּאָליסטירין שיכט (0.97 μm) אויף דער סיליקאַ ייבערפלאַך, כוועראַז אין דער PMP פאַזע איז די שיכט גרעב געווען. 1.38 מיקראָמעטער.
פּאַרטיקל גרייס פאַרשפּרייטונג (A) און פּאָרע גרייס פאַרשפּרייטונג (B) פון נאַקעטע סיליקאַ פּאַרטיקאַלז און ליגאַנד-געבונדענע סיליקאַ פּאַרטיקאַלז.
די פּאָרע גרייס, פּאָרע באַנד און ייבערפלאַך שטח פון די סיליקאַ פּאַרטיקאַלז פון דער איצטיקער שטודיע ווערן געגעבן אין טאַבעלע 1(B). די PSD פּראָופילן פון נאַקעטע סיליקאַ פּאַרטיקאַלז און ליגאַנד-געבונדענע סיליקאַ פּאַרטיקאַלז ווערן געוויזן אין פיגור 3(B). די רעזולטאַטן זענען פאַרגלייַכלעך צו אונדזער פריערדיקער שטודיע. די פּאָרע גרייסן פון די נאַקעטע און ליגאַנד-געבונדענע סיליקאַ פּאַרטיקאַלז זענען 310 און 241, ריספּעקטיוולי, וואָס ווייזט אַז די פּאָרע גרייס פאַרקלענערט זיך מיט 69 נאָך כעמישער מאָדיפיקאַציע, ווי געוויזן אין טאַבעלע 1(B), און די ענדערונג פון דער קורווע ווערט געוויזן אין פיג. 3(B). ענלעך, די פּאָרע באַנד פון די סיליקאַ פּאַרטיקאַלז איז פאַרקלענערט געוואָרן פון 0.67 צו 0.58 cm3/g נאָך כעמישער מאָדיפיקאַציע. די ספּעציפֿישע ייבערפלאַך שטח פון די איצט שטודירטע סיליקאַ פּאַרטיקאַלז איז 116 m2/g, וואָס איז פאַרגלייַכלעך צו אונדזער פריערדיקער שטודיע (124 m2/g). ווי געוויזן אין טאַבעלע 1(B), די ייבערפלאַך שטח (m2/g) פון די סיליקאַ פּאַרטיקאַלז איז אויך פאַרקלענערט געוואָרן פון 116 m2/g צו 105 m2/g נאָך כעמישער מאָדיפיקאַציע. מאָדיפיקאַציע.
די רעזולטאטן פון עלעמענטארער אנאליז פון דער סטאציאנערער פאזע ווערן געוויזן אין טאבעלע 2. די קוילן-לאדונג פון דער איצטיקער סטאציאנערער פאזע איז 6.35%, וואס איז נידעריגער ווי די קוילן-לאדונג פון אונזער פריערדיגער שטודיע (פאליסטירין געבונדענע סיליקא פארטיקלען, 7.93%35 און 10.21%, בהתאמה) 42. די קוילן-לאדונג פון דער איצטיקער סטאציאנערער פאזע איז נידעריג, ווייל אין דער צוגרייטונג פון דער איצטיקער SP, אין צוגאב צו סטירין, זענען גענוצט געווארן עטלעכע פאלארע ליגאנדס ווי פענילמאלעימיד-מעטהילוויניליסאסיאנאט (PCMP) און 4-הידראקסי-TEMPO. דער שטיקשטאף וואג פראצענט פון דער איצטיקער סטאציאנערער פאזע איז 2.21%, אין פארגלייך מיט 0.1735 און 0.85% לויט וואג פון שטיקשטאף אין פריערדיגע שטודיעס, בהתאמה. דאס מיינט אז די וואג פראצענט פון שטיקשטאף איז העכער אין דער איצטיקער סטאציאנערער פאזע צוליב פענילמאלעימיד. ענליך, די קוילן-לאדונגען פון פראדוקטן (4) און (5) זענען געווען 2.7% און 2.9%, בהתאמה, בשעת די קוילן-לאדונג פון דעם לעצטן פראדוקט (6) איז געווען 6.35%, ווי געוויזן אין טאַבעלע 2. דער וואָג אָנווער איז געווען געטשעקט מיט PMP סטאַציאָנערע פאַזע, און די TGA קורווע איז געוויזן אין פיגור 4. די TGA קורווע ווייזט אַ וואָג אָנווער פון 8.6%, וואָס איז אין גוטער הסכמה מיט די טשאַד לאָודינג (6.35%) ווייַל די ליגאַנדז אַנטהאַלטן ניט בלויז C אָבער אויך N, O, און H.
דער פענילמאַלעימיד-מעטהילוויניליסאָסיאַנייט ליגאַנד איז אויסגעקליבן געוואָרן פֿאַר אויבערפלאַך מאָדיפיקאַציע פֿון סיליקאַ פּאַרטיקלען ווײַל עס האט פּאָליאַרע פענילמאַלעימיד גרופּעס און ווינילאיזאָסיאַנייט גרופּעס. וויניל איזאָסיאַנייט גרופּעס קענען ווײַטער רעאַגירן מיט סטײַרען דורך לעבעדיקע ראַדיקאַל פּאָלימעריזאַציע. די צווייטע סיבה איז צו אַרײַנשטעלן אַ גרופּע וואָס האט אַ מיטלמעסיקע אינטעראַקציע מיטן אַנאַליט און קיין שטאַרקע עלעקטראָסטאַטישע אינטעראַקציע צווישן דעם אַנאַליט און דער סטאַציאָנאַרער פֿאַזע, ווײַל די פענילמאַלעימיד מאָיעטי האט נישט קיין ווירטואַלע לאָד בײַ נאָרמאַלן pH. די פּאָלאַריטעט פֿון דער סטאַציאָנאַרער פֿאַזע קען קאָנטראָלירט ווערן דורך דער אָפּטימאַלער מאָס סטײַרען און די רעאַקציע צײַט פֿון פֿרײַער ראַדיקאַל פּאָלימעריזאַציע. דער לעצטער שריט פֿון דער רעאַקציע (פֿרײַ-ראַדיקאַל פּאָלימעריזאַציע) איז קריטיש און קען ענדערן די פּאָלאַריטעט פֿון דער סטאַציאָנאַרער פֿאַזע. עלעמענטאַרע אַנאַליז איז דורכגעפֿירט געוואָרן צו קאָנטראָלירן די קאַרבאָן לאָודינג פֿון די סטאַציאָנאַרע פֿאַזעס. עס איז באַאָבאַכטעט געוואָרן אַז פֿאַרגרעסערן די מאָס סטײַרען און די רעאַקציע צײַט האָט פֿאַרגרעסערט די קאַרבאָן לאָודינג פֿון דער סטאַציאָנאַרער פֿאַזע און פֿאַרקערט. SPs צוגעגרייט מיט פֿאַרשידענע קאָנצענטראַציעס פֿון סטײַרען האָבן פֿאַרשידענע קאַרבאָן לאָודינגס. ווידער, לאָדן די סטאַציאָנאַרע פֿאַזעס אין ומבאַפלעקט שטאָל קאָלומס און קאָנטראָלירן זייער כראָמאַטאָגראַפֿישע פאָרשטעלונג (סעלעקטיוויטי, רעזאָלוציע, N ווערט, אאז"וו).באַזירט אויף די עקספּערימענטן, איז אַן אָפּטימיזירטע פאָרמולאַציע אויסגעקליבן געוואָרן צו צוגרייטן די PMP סטאַציאָנערע פאַזע צו ענשור קאָנטראָלירטע פּאָלאַריטעט און גוטע אַנאַליטע ריטענשאַן.
פינף פּעפּטיד מישונגען (גלי-טיר, גלי-לעו-טיר, גלי-גלי-טיר-אַרג, טיר-אילע-גלי-סער-אַרג, לעוסין ענקעפאַלין) זענען אויך עוואַלויִרט געוואָרן מיט אַ PMP קאָלום מיט אַ מאָבילער פאַזע; 60/40 (v/v) אַצעטאָניטריל/וואַסער (0.1% TFA) ביי אַ לויפן קורס פון 80 μL/min. אונטער אָפּטימאַלע עלוציע באדינגונגען, די טעאָרעטישע פּלאַטע נומער (N) פּער קאָלום (100 × 1.8 מם id) איז 20,000 ± 100 (200,000 פּלאַטעס/m²). טאַבעלע 3 גיט די N ווערטן פֿאַר די דריי PMP קאָלום און די כראָמאַטאָגראַמען זענען געוויזן אין פיגור 5A. שנעלע אַנאַליז אויף אַ PMP קאָלום ביי הויך לויפן קורס (700 μL/min), פינף פּעפּטיידן זענען עלוטעד אין איין מינוט, N ווערטן זענען געווען זייער גוט, 13,500 ± 330 פּער קאָלום (100 × 1.8 מם id), קאָרעספּאָנדירט צו 135,000 פּלאַטעס/m (פיגור 5B). דריי אידענטיש גרייס קאָלום (100 × 1.8 מם id) זענען פּאַקט מיט דריי פאַרשידענע לאָטס פון PMP סטאַציאָנערי פאַסע צו קאָנטראָלירן רעפּראָדוסיביליטי. די די אנאליט קאנצענטראציע פאר יעדער זייל איז רעקארדירט ​​געווארן ניצנדיק די אפטימאלע עלוציע באדינגונגען און די צאל טעארעטישע פלאטעס N און רעטענשאן צייט צו צעשיידן די זעלבע טעסט געמיש אויף יעדער זייל. די רעפראדוסירבארקייט דאטן פאר די PMP זיילן ווערן געוויזן אין טאבעלע 4. די רעפראדוסירבארקייט פון די PMP זייל קארעלירט גוט מיט זייער נידעריגע %RSD ווערטן, ווי געוויזן אין טאבעלע 3.
צעשיידונג פון פּעפּטיד געמיש אויף PMP קאָלום (B) און Ascentis Express RP-Amide קאָלום (A); מאָביל פאַזע 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP קאָלום דימענסיעס (100 × 1.8 מם id); אַנאַליטיש די עלוציע סדר פון די קאַמפּאַונדז: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) און 5 (לוצין) זויער ענקעפאַלין)).
א PMP זייַל (100 × 1.8 מם אינדעקס) איז געוואָרן עוואַלויִרט פֿאַר צעשיידונג פֿון טריפּטישע דיידזשעסטן פֿון מענטשלעכן סערום אַלבומין אין הויך-פּערפאָרמאַנס פֿליסיגער כראָמאַטאָגראַם. דער כראָמאַטאָגראַם אין פֿיגור 6 ווײַזט אַז דער מוסטער איז גוט צעשיידט און די רעזאָלוציע איז זייער גוט. HSA דיידזשעסטן זענען אַנאַליזירט געוואָרן מיט אַ פֿלוס ראַטע פֿון 100 µL/min, מאָבילער פֿאַזע 70/30 אַצעטאָניטריל/וואַסער און 0.1% TFA. ווי געוויזן אין כראָמאַטאָגראַם (פֿיגור 6), איז די HSA דיידזשעסטשאַן צעטיילט געוואָרן אין 17 שפּיצן וואָס קאָרעספּאָנדירן צו 17 פּעפּטיידן. די צעשיידונג עפֿעקטיווקייט פֿון יעדן שפּיץ אין דעם HSA דיידזשעסט איז געוואָרן קאַלקולירט און די ווערטן ווערן געגעבן אין טאַבעלע 5.
א טריפּטישע דיידזשעסט פון HSA (100 × 1.8 מם אינדעקס) איז געווען אפגעזונדערט אויף אַ PMP קאָלום; לויפן קורס (100 µL/min), מאָבילע פאַזע 60/40 אַצעטאָניטריל/וואַסער מיט 0.1% TFA.
וואו L איז די זייל לענג, η איז די וויסקאָסיטי פון דער מאָבילער פאַזע, ΔP איז דער זייל צוריק דרוק, און u איז די לינעאַרע גיכקייט פון דער מאָבילער פאַזע. די דורכדרינגלעכקייט פון דער PMP זייל איז געווען 2.5 × 10-14 m2, די לויפן קורס איז געווען 25 μL/min, און 60/40 v/v ACN/וואַסער איז געניצט געוואָרן. די דורכדרינגלעכקייט פון דער PMP זייל (100 × 1.8 מם id) איז געווען ענלעך צו יענע פון ​​אונדזער פריערדיקער שטודיע רעף.34. די דורכדרינגלעכקייט פון דער זייל פּאַקט מיט סופּערפישאַלי פּאָרעזע פּאַרטיקאַלז איז: 1.7 × 10-15 פֿאַר 1.3 μm פּאַרטיקאַלז, 3.1 × 10-15 פֿאַר 1.7 μm פּאַרטיקאַלז, 5.2 × 10-15 און 2.5 × 10-14 m2 פֿאַר 2.6 μm פּאַרטיקאַלז פֿאַר 5 μm פּאַרטיקאַלז 43. דעריבער, די דורכדרינגלעכקייט פון דער PMP פאַזע איז ענלעך צו יענע פון ​​5 μm קערן-שאָל פּאַרטיקאַלז.
וואו Wx איז די וואָג פון דער קאָלום פּאַקט מיט כלאָראָפאָרם, Wy איז די וואָג פון דער קאָלום פּאַקט מיט מעטאַנאָל, און ρ איז די געדיכטקייט פון דעם סאָלוואַנט. געדיכטקייטן פון מעטאַנאָל (ρ = 0.7866) און כלאָראָפאָרם (ρ = 1.484). די גאַנץ פּאָראָסיטי פון סיליקאַ פּאַרטיקאַלז-C18 קאָלומס (100 × 1.8 מם id) 34 און C18-ורעאַ קאָלומס 31 וואָס מיר פריער געלערנט זענען געווען 0.63 און 0.55, ריספּעקטיוולי. דאָס מיינט אַז די בייַזייַן פון ורעאַ ליגאַנדז ראַדוסאַז די פּערמעאַביליטי פון די סטאַציאָנאַרי פאַסע. אויף די אנדערע האַנט, די גאַנץ פּאָראָסיטי פון די PMP קאָלום (100 × 1.8 מם id) איז 0.60. די פּערמעאַביליטי פון PMP קאָלומס איז נידעריקער ווי די פון קאָלומס פּאַקט מיט C18-געבונדן סיליקאַ פּאַרטיקאַלז ווייַל אין C18-טיפּ סטאַציאָנאַרי פאַסעס די C18 ליגאַנדז זענען אַטאַטשט צו די סיליקאַ פּאַרטיקאַלז ווי לינעאַר קייטן, בשעת אין פּאָליסטירין-טיפּ סטאַציאָנאַרי פאַסעס, די א רעלאַטיוו דיק פּאָלימער שיכט ווערט געשאפן אַרום אים. אין אַ טיפּישן עקספּערימענט, ווערט די קאָלום פּאָראָסיטי אויסגערעכנט ווי:
פיגור 7א,ב ווײַזן די PMP קאָלום (100 × 1.8 מם אינדעקס) און Ascentis Express RP-Amide קאָלום (100 × 1.8 מם אינדעקס) ניצנדיק די זעלבע עלוציע באַדינגונגען (ד.ה., 60/40 ACN/H2O און 0.1% TFA).) פון די וואַן דיעמטער פּלאַנעווען. אויסגעקליבענע פּעפּטיד מישונגען (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) זענען צוגעגרייט געוואָרן אין 20 µL/ די מינימום לויף ראטע פֿאַר ביידע קאָלאָנען איז 800 µL/min. די מינימום HETP ווערטן ביי דער אָפּטימאַלער לויף ראטע (80 µL/min) פֿאַר דער PMP קאָלאָן און דער Ascentis Express RP-Amide קאָלאָן זענען געווען 2.6 µm און 3.9 µm, ריספּעקטיוולי. די HETP ווערטן ווײַזן אַז די צעשיידונג עפעקטיווקייט פון דער PMP קאָלאָן (100 × 1.8 mm id) איז פיל בעסער ווי די קאמערציעל בנימצא Ascentis Express RP-Amide קאָלאָן (100 × 1.8 mm id). די van Deemter פּלאַנעווען אין בילד 7(A) ווײַזט אַז די פאַרקלענערונג אין N ווערט מיט וואַקסנדיק לויף איז נישט באַטייטיק קאַמפּערד צו אונדזער פריערדיקער שטודיע. די העכערע צעשיידונג עפעקטיווקייט פון דער PMP קאָלאָן (100 × 1.8 mm id) קאַמפּערד צו די Ascentis Express RP-Amide קאָלום איז באַזירט אויף פֿאַרבעסערונגען אין פּאַרטיקל פאָרעם, גרייס, און קאָמפּלעקס קאָלום פּאַקינג פּראָוסידזשערז געניצט אין דער איצטיקער אַרבעט34.
(א) וואן דימטער פלאט (HETP קעגן מאבילע פאזע לינעארע גיכקייט) באקומען מיט א PMP קאלום (100 × 1.8 מ״מ אינדערפרי) אין 60/40 ACN/H2O מיט 0.1% TFA. (ב) וואן דימטער פלאט (HETP קעגן מאבילע פאזע לינעארע גיכקייט) באקומען מיט אן Ascentis Express RP-Amide קאלום (100 × 1.8 מ״מ אינדערפרי) אין 60/40 ACN/H2O מיט 0.1% TFA.
א פּאָלאַר-איינגעבעטעטע פּאָליסטירענע סטאַציאָנערע פאַזע איז צוגעגרייט און עוואַלויִרט געוואָרן פֿאַר צעשיידונג פון סינטעטישע פּעפּטיד מישונגען און טריפּסין דיידזשעסטס פון מענטשלעכן סערום אַלבומין (HAS) אין הויך-פאָרשטעלונג פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע. די כראָמאַטאָגראַפֿישע פאָרשטעלונג פון PMP קאָלומס פֿאַר פּעפּטיד מישונגען איז אויסגעצייכנט אין צעשיידונג עפעקטיווקייט און רעזאָלוציע. די פֿאַרבעסערטע צעשיידונג פאָרשטעלונג פון PMP קאָלומס איז רעכט צו אַ פאַרשיידנקייט פון סיבות, אַזאַ ווי די פּאַרטיקל גרייס און פּאָרע גרייס פון די סיליקאַ פּאַרטיקאַלז, קאָנטראָלירטע סינטעז פון די סטאַציאָנערע פאַזע, און קאָמפּלעקס קאָלום פּאַקינג. אין דערצו צו הויך צעשיידונג עפעקטיווקייט, נידעריק קאָלום צוריק דרוק ביי הויך לויפן ראַטעס איז נאָך אַ מייַלע פון ​​דעם סטאַציאָנערע פאַזע. PMP קאָלומס ווייַזן גוט רעפּראָדוסיביליטי און קענען זיין געניצט פֿאַר די אַנאַליסיס פון פּעפּטיד מישונגען און טריפּסין דיידזשעסטשאַן פון פאַרשידענע פּראָטעינס. מיר פּלאַנירן צו נוצן דעם קאָלום פֿאַר די צעשיידונג פון נאַטירלעך פּראָדוקטן, ביאָאַקטיוו קאַמפּאַונדז פון מעדיציניש געוויקסן און פונגאַל עקסטראַקטן אין פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע. אין דער צוקונפֿט, PMP קאָלומס וועלן אויך זיין עוואַלויִרט פֿאַר די צעשיידונג פון פּראָטעינס און מאָנאָקלאָנאַל אַנטיבאָדיעס.
פעלד, דזש.ק., עוערבי, עם.ר., לאו, דזש., טהעגערסען, ה. & פּעטערסאָן, פּ. פאָרשונג אויף פּעפּטייד סעפּאַראַציע סיסטעמען דורך ריווערסט פאַזע כראָמאַטאָגראַפֿיע טייל 1: אַנטוויקלונג פון אַ קאָלום כאַראַקטעריזאַציע פּראָטאָקאָל. דזש. כראָמאַטאָגראַפֿיע. 1603, 113–129. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
גאָמעז, ב. און אַנדערע. פֿאַרבעסערטע אַקטיווע פּעפּטיידן דיזיינד פֿאַר דער באַהאַנדלונג פֿון אינפֿעקציעזע קראַנקייטן. ביאָטעכנאָלאָגיע. אַדוואַנסט. 36(2), 415-429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
פליגע, פ., ליסאווסקי, וו., מארטינעז, דזש. & כרעסטטשאַטיסקי, מ. סינטעטישע טעראַפּעווטישע פּעפּטיידן: וויסנשאַפֿט און דער מאַרק. מעדיצין אויפדעקונג. 15 (1-2) היינט, 40-56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
קסיע, פ., סמיט, ר.ד. און שען, י. אדוואנסירטע פראטעאמישע פליסיקע כראמאטאגראפיע.דזש. כראמאטאגראפיע.א 1261, 78–90 (2012).
ליו, וו. און אנדערע. פארגעשריטענע פליסיקע כראמאטאגראפיע-מאסע ספעקטראמעטריע ערמעגליכט די איינפיר פון ברייט געצילטע מעטאבאלאמיקס און פראטעאמיקס. אנוס. טשים. אקטא 1069, 89–97 (2019).
טשעסנאט, ס.מ. און סאליסבורי, דזש.דזש. די ראלע פון ​​UHPLC אין מעדיצין אנטוויקלונג.דזש. סעפּ. סיי.30(8), 1183-1190 (2007).
וואו, נ. און קלאוזען, א.מ. פונדאַמענטאַלע און פּראַקטישע אַספּעקטן פון אולטראַהויך דרוק פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע פֿאַר שנעלע צעשיידונגען. דזש. סעפּ. סיי. 30(8), 1167-1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
רען, ס.א. און טשעליטשעף, פ. אנווענדונג פון אולטרא-הויך פערפארמענס פליסיק כראמאטאגראפיע אין מעדיצין אנטוויקלונג. דזש. כראמאטאגראפיע.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
גו, ה. און אנדערע. מאָנאָליטישע מאַקראָפּאָרעזע הידראָגעלס צוגעגרייט פון אויל-אין-וואַסער הויך אינערלעכע פאַזע עמולסיעס פֿאַר עפעקטיוו רייניקונג פון ענטעראָווירוסעס. כעמישער. בריטאַן. דזש. 401, 126051 (2020).
שי, י., קסיאַנג, ר., האָרוואַט, ק. & ווילקינס, דזש.אַ. די ראָלע פון ​​פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע אין פּראָטעאָמיקס.דזש. כראָמאַטאָגראַפֿיע.אַ 1053(1-2), 27-36 (2004).
פעקעטע, ס., וועוטי, דזש.-ל. & גילאַרמע, ד. אויפקומענדיקע טרענדס אין ריווערסט-פאַסע פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע סעפּאַראַציעס פון טעראַפּעווטישע פּעפּטיידן און פּראָטעאינען: טעאָריע און אַפּליקאַציעס. דזש. פאַרמאַסי. ביאָמעדיקאַל סייענס. אַנוס. 69, 9-27 (2012).
גילאַר, מ., אָליוואָוואַ, פּ., דאַלי, עי.עי. און געבלער, דזש.סי. צוויי-דימענסיאָנעלע צעשיידונג פון פּעפּטיידן ניצנדיק אַ RP-RP-HPLC סיסטעם ניצנדיק פֿאַרשידענע pH ווערטן אין דער ערשטער און צווייטער צעשיידונג דימענסיעס.דזש. סעפּ. סיי.28(14), 1694-1703 (2005).
פעלעטי, ס. און אנדערע. די מאַסע טראַנספער קעראַקטעריסטיקס און קינעטישע פאָרשטעלונג פון הויך-עפעקטיווקייַט כראָמאַטאָגראַפיק קאָלאָנעס פּאַקט מיט C18 סוב-2 μm גאָר און סופּערפישאַלי פּאָרעזע פּאַרטיקאַלז זענען געווען אויסגעפאָרשט. דזש. סעפּ. סיי. 43 (9-10), 1737-1745 (2020).
פּיאָוועסאַנאַ, ס. און אַנדערע. לעצטע טרענדס און אַנאַליטישע טשאַלאַנדזשיז אין דער איזאָלאַציע, אידענטיפֿיקאַציע און וואַלידאַציע פון ​​פלאַנצן ביאָאַקטיווע פּעפּטיידז. אַנוס. ביאָלאָגישער אַנוס. כעמישער. 410(15), 3425–3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Mueller, JB et al. די פּראָטעאָמישע לאַנדשאַפט פון דעם מלכות פון לעבן. נאַטור 582(7813), 592-596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
דעלוקאַ, סי. עט על. דאַונסטרים פּראַסעסינג פון טעראַפּעווטישע פּעפּטיידן דורך פּרעפּעראַטיוו פליסיק כראָמאַטאָגראַפֿיע. מאָלעקול (באַזעל, שווייץ) 26(15), 4688(2021).
יאַנג, י. און גענג, קס. געמישט-מאָד כראָמאַטאָגראַפֿיע און איר אַפּליקאַציע צו ביאָפּאָלימערן. דזש. כראָמאַטאָגראַפֿיע. א 1218(49), 8813–8825 (2011).
זשאַאָ, ג., דונג, קס.-י. און זון, י. ליגאַנדן פֿאַר געמישט-מאָד פּראָטעין כראָמאַטאָגראַפֿיע: פּרינציפּ, כאַראַקטעריזאַציע, און פּלאַן. דזש. ביאָטעכנאָלאָגיע. 144(1), 3-11 (2009).