Nature.com தளத்திற்கு வருகை தந்ததற்கு நன்றி. நீங்கள் பயன்படுத்தும் உலாவியில் CSS-க்கான ஆதரவு குறைவாக உள்ளது. சிறந்த அனுபவத்தைப் பெற, மேம்படுத்தப்பட்ட உலாவியைப் பயன்படுத்துமாறு (அல்லது இன்டர்நெட் எக்ஸ்ப்ளோரரில் இணக்கப் பயன்முறையை அணைக்குமாறு) பரிந்துரைக்கிறோம். இதற்கிடையில், தொடர்ச்சியான ஆதரவை உறுதிசெய்யும் வகையில், நாங்கள் இந்தத் தளத்தை ஸ்டைல்கள் மற்றும் ஜாவாஸ்கிரிப்ட் இல்லாமல் காண்பிப்போம்.
பெரிய நுண்துளைத் துகள்களைப் பெறுவதற்காக, சில மாற்றங்களுடன் ஒரு கரைசல்-கூழ்ம (sol-gel) முறையில் நுண்துளை சிலிக்கா துகள்கள் தயாரிக்கப்பட்டன. இந்தத் துகள்கள், N-ஃபினைல்மேலிமைடு-மெத்தில்வினைல்ஐசோசயனேட் (PMI) மற்றும் ஸ்டைரீன் ஆகியவற்றைக் கொண்டு மீளக்கூடிய கூட்டல் சிதைவு சங்கிலிப் பரிமாற்ற (RAFT) பலபடியாக்கல் மூலம் வழிப்பொருளாக்கப்பட்டு, பாலிஸ்டைரீனின் N-ஃபினைல்மேலிமைடு இடைச்செருகல் (PMP) நிலைத்த கட்டம் தயாரிக்கப்பட்டது. குறுகிய துளை கொண்ட துருப்பிடிக்காத எஃகுத் தூண்கள் (100 × 1.8 மிமீ உள்விட்டம்) கூழ்ம நிரப்புதல் மூலம் நிரப்பப்பட்டன. ஐந்து பெப்டைடுகளைக் (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, லூசின் என்கெஃபாலின்) கொண்ட ஒரு பெப்டைட் கலவையின் PMP தூண் பிரிப்பு, நிறப்பிரிகைச் செயல்திறன் மற்றும் மனித சீரம் அல்புமினின் (HAS) டிரிப்சின் செரிமானம் ஆகியவை மதிப்பீடு செய்யப்பட்டன. உகந்த கரைத்தல் நிலைமைகளின் கீழ், பெப்டைட் கலவையின் கோட்பாட்டுத் தட்டு எண்ணிக்கை 280,000 வரை அதிகமாக உள்ளது. தட்டுகள்/மீ². உருவாக்கப்பட்ட நிரலின் பிரிப்புச் செயல்திறனை வணிக ரீதியான அசென்டிஸ் எக்ஸ்பிரஸ் RP-அமைடு நிரலுடன் ஒப்பிடுகையில், பிரிப்புத் திறன் மற்றும் பிரிதிறன் ஆகியவற்றின் அடிப்படையில் PMP நிரலின் பிரிப்புச் செயல்திறன் வணிக ரீதியான நிரலை விடச் சிறந்தது என்பது கண்டறியப்பட்டது.
சமீபத்திய ஆண்டுகளில், உயிரிமருந்துத் தொழில், சந்தைப் பங்கில் கணிசமான அதிகரிப்புடன், விரிவடைந்து வரும் ஒரு உலகளாவிய சந்தையாக உருவெடுத்துள்ளது. உயிரிமருந்துத் தொழிலின் அதிவேக வளர்ச்சியால்¹,²,³, பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களின் பகுப்பாய்வு மிகவும் விரும்பப்படுகிறது. இலக்கு பெப்டைடுடன் கூடுதலாக, பெப்டைடு தொகுப்பின் போது பல அசுத்தங்கள் உருவாகின்றன, இதனால் விரும்பிய தூய்மையுடன் கூடிய பெப்டைடுகளைப் பெற நிறப்பிரிகை சுத்திகரிப்பு தேவைப்படுகிறது. ஒரே மாதிரியில் கண்டறியக்கூடிய இனங்களின் எண்ணிக்கை அதிகமாக இருப்பதால், உடல் திரவங்கள், திசுக்கள் மற்றும் செல்களில் உள்ள புரதங்களின் பகுப்பாய்வு மற்றும் பண்பறிதல் என்பது மிகவும் சவாலான ஒரு பணியாகும். பெப்டைடு மற்றும் புரத வரிசைப்படுத்தலுக்கு நிறை நிறமாலையியல் ஒரு பயனுள்ள கருவியாக இருந்தாலும், அத்தகைய மாதிரிகள் ஒரே முறையில் நிறை நிறமாலையியலுக்குள் செலுத்தப்பட்டால், பிரிப்பு சிறந்ததாக இருக்காது. நிறை நிறமாலையியல் பகுப்பாய்விற்கு முன்னர் திரவ நிறப்பிரிகை (LC) பிரிப்புகளைச் செயல்படுத்துவதன் மூலம் இந்தப் பிரச்சனையைத் தணிக்க முடியும், இது ஒரு குறிப்பிட்ட நேரத்தில் நிறை நிறமாலையியலுக்குள் நுழையும் பகுப்பாய்வுகளின் எண்ணிக்கையைக் குறைக்கும்⁴,⁵,⁶. கூடுதலாக, திரவ நிலை பிரிப்பின் போது, ​​பகுப்பாய்வுகளைக் குறுகிய பகுதிகளில் குவிக்க முடியும், இதன் மூலம் இந்தப் பகுப்பாய்வுகளை ஒருமுகப்படுத்தி, நிறை நிறமாலையியல் கண்டறிதல் உணர்திறனை மேம்படுத்தலாம். குரோமடோகிராபி (LC) கடந்த பத்தாண்டுகளில் குறிப்பிடத்தக்க முன்னேற்றம் அடைந்து, புரோட்டியோமிக் பகுப்பாய்வில் ஒரு பிரபலமான நுட்பமாக மாறியுள்ளது7,8,9,10.
ஆக்டாடெசில்-மாற்றியமைக்கப்பட்ட சிலிக்காவை (ODS) நிலையான கட்டமாகப் பயன்படுத்தி, பெப்டைட் கலவைகளைத் தூய்மைப்படுத்தவும் பிரிக்கவும் தலைகீழ்-கட்ட திரவ நிறப்பிரிகை (RP-LC) பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது¹¹,¹²,¹³. இருப்பினும், RP நிலையான கட்டங்கள், பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களின் சிக்கலான அமைப்பு மற்றும் இருமுனை இயல்பு காரணமாக, திருப்திகரமான பிரித்தலை வழங்குவதில்லை¹⁴,¹⁵. எனவே, பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களைப் பகுப்பாய்வு செய்ய, துருவ மற்றும் துருவமற்ற பகுதிகளைக் கொண்ட, இந்த பகுப்பாய்வுப் பொருட்களுடன் தொடர்பு கொண்டு அவற்றைத் தக்கவைக்க, சிறப்பாக வடிவமைக்கப்பட்ட நிலையான கட்டங்கள் தேவைப்படுகின்றன¹⁶. பலவகை இடைவினைகளை வழங்கும் கலப்பு-முறை நிறப்பிரிகை, பெப்டைடுகள், புரதங்கள் மற்றும் பிற சிக்கலான கலவைகளைப் பிரிப்பதற்கு RP-LC-க்கு ஒரு மாற்றாக இருக்க முடியும். பல கலப்பு-முறை நிலையான கட்டங்கள் தயாரிக்கப்பட்டுள்ளன, மேலும் இந்தக் கட்டங்கள் நிரப்பப்பட்ட நிரல்கள் பெப்டைட் மற்றும் புரதப் பிரித்தல்களுக்குப் பயன்படுத்தப்பட்டுள்ளன¹⁷,¹⁸,¹⁹,²⁰,²¹. கலப்பு-முறை நிலையான கட்டங்கள் (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, போலார் இன்டர்கேலேஷன்/RPLC போன்றவை, போலார் மற்றும் நான்-போலார் குழுக்கள் இரண்டும் இருப்பதால் பெப்டைடு மற்றும் புரதப் பிரிப்புகளுக்கு ஏற்றவை²²⁻²³⁻²⁴,²⁵,²⁶,²⁷,²⁸. இதேபோல், சகப்பிணைப்புடன் இணைக்கப்பட்ட போலார் குழுக்களைக் கொண்ட போலார் இன்டர்கேலேட்டிங் நிலையான கட்டங்கள், போலார் மற்றும் நான்-போலார் பகுப்பாய்வுகளுக்கு நல்ல பிரிப்புத் திறனையும் தனித்துவமான தேர்ந்தெடுக்கும் தன்மையையும் காட்டுகின்றன, ஏனெனில் பிரிப்பு என்பது பகுப்பாய்வுப் பொருளுக்கும் நிலையான கட்டத்திற்கும் இடையிலான இடைவினையைச் சார்ந்துள்ளது. பன்முறைமை இடைவினைகள்²⁹,³⁰,³¹,³². சமீபத்தில், ஜாங் மற்றும் பலர். 30 டோடிசில்-முனைய பாலிஅமைன் நிலையான கட்டத்தைத் தயாரித்து, ஹைட்ரோகார்பன்கள், மன அழுத்த எதிர்ப்பு மருந்துகள், ஃபிளாவனாய்டுகள், நியூக்ளியோசைடுகள், ஈஸ்ட்ரோஜன்கள் மற்றும் பல பிற பகுப்பாய்வுப் பொருட்களை வெற்றிகரமாகப் பிரித்தது. துருவ இடைச்செருகியானது துருவ மற்றும் துருவமற்ற குழுக்கள் இரண்டையும் கொண்டுள்ளது, எனவே நீர்வெறுப்பு மற்றும் நீர்விருப்பப் பகுதிகள் இரண்டையும் கொண்ட பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களைப் பிரிக்க இதைப் பயன்படுத்தலாம். துருவ-உட்பொதிந்த நிரல்கள் (எ.கா., அமைடு-உட்பொதிந்த C18 நிரல்கள்) அசென்டிஸ் எக்ஸ்பிரஸ் RP-அமைடு நிரல்கள் என்ற வர்த்தகப் பெயரில் வணிகரீதியாகக் கிடைக்கின்றன, ஆனால் இந்த நிரல்கள் அமைன் 33-இன் பகுப்பாய்விற்கு மட்டுமே பயன்படுத்தப்படுகின்றன.
தற்போதைய ஆய்வில், பெப்டைடுகள் மற்றும் HSA-வின் டிரிப்சின் செரிமானங்களைப் பிரிப்பதற்காக, ஒரு முனைவு-உட்பொதிந்த நிலையான கட்டம் (N-ஃபினைல்மேலிமைடு-உட்பொதிந்த பாலிஸ்டிரீன்) தயாரிக்கப்பட்டு மதிப்பீடு செய்யப்பட்டது. இந்த நிலையான கட்டம் பின்வரும் உத்தியைப் பயன்படுத்தித் தயாரிக்கப்பட்டது. நுண்துளைகள் கொண்ட சிலிக்கா துகள்கள், தயாரிப்பு நெறிமுறையில் சில மாற்றங்களுடன், எங்களின் முந்தைய வெளியீட்டில் கொடுக்கப்பட்டுள்ள நடைமுறையின்படி தயாரிக்கப்பட்டன. பெரிய நுண்துளை அளவு கொண்ட சிலிக்கா துகள்களைத் தயாரிப்பதற்காக, யூரியா, பாலிஎதிலீன் கிளைக்கால் (PEG), TMOS, நீர் மற்றும் அசிட்டிக் அமிலம் ஆகியவற்றின் விகிதம் சரிசெய்யப்பட்டது. இரண்டாவதாக, ஃபினைல்மேலிமைடு-மெத்தில் வினைல் ஐசோசயனேட் என்ற ஒரு புதிய லிகண்ட் தொகுக்கப்பட்டு, ஒரு முனைவு-உட்பொதிந்த நிலையான கட்டத்தைத் தயாரிப்பதற்காக சிலிக்கா துகள்களை வழிப்பொருளாக்கப் பயன்படுத்தப்பட்டது. இதன் விளைவாகக் கிடைத்த நிலையான கட்டம், உகந்த நிரப்புதல் திட்டத்தைப் பயன்படுத்தி ஒரு துருப்பிடிக்காத எஃகுத் தூணில் (100 × 1.8 மிமீ உள்விட்டம்) நிரப்பப்பட்டது. தூணுக்குள் ஒரு சீரான படுகை உருவாகுவதை உறுதி செய்வதற்காக, இந்த நிரப்புதல் இயந்திர அதிர்வு மூலம் எளிதாக்கப்பட்டது. ஐந்து பெப்டைடுகளைக் கொண்ட பெப்டைட் கலவைகளின் நிரப்பப்பட்ட தூண் பிரித்தலை மதிப்பீடு செய்யவும்; (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, லூசின் என்கெஃபாலின்) மற்றும் மனித சீரம் அல்புமினின் (HAS) டிரிப்சின் செரிமானம். பெப்டைட் கலவை மற்றும் HSA-வின் டிரிப்சின் செரிமானம் ஆகியவை நல்ல பிரிப்புத்திறன் மற்றும் செயல்திறனுடன் பிரிவது காணப்பட்டது. PMP நிரலின் பிரிப்புச் செயல்திறன், அசென்டிஸ் எக்ஸ்பிரஸ் RP-அமைடு நிரலின் செயல்திறனுடன் ஒப்பிடப்பட்டது. பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்கள் இரண்டும் PMP நிரலில் நன்கு பிரிக்கப்பட்டு திறமையாகச் செயல்படுவது காணப்பட்டது, இது அசென்டிஸ் எக்ஸ்பிரஸ் RP-அமைடு நிரலை விட அதிக செயல்திறன் மிக்கதாக இருந்தது.
PEG (பாலியெத்திலீன் கிளைக்கால்), யூரியா, அசிட்டிக் அமிலம், ட்ரைமெத்தாக்ஸி ஆர்த்தோசிலிகேட் (TMOS), ட்ரைமெத்தில் குளோரோசிலேன் (TMCS), ட்ரைப்சின், மனித சீரம் அல்புமின் (HSA), அம்மோனியம் குளோரைடு, யூரியா, ஹெக்ஸேன் மெத்தில்டைசிலசேன் (HMDS), மெத்தாக்ரிலோயில் குளோரைடு (MC), ஸ்டைரீன், 4-ஹைட்ராக்ஸி-TEMPO, பென்சாயில் பெராக்சைடு (BPO), HPLC தர அசிட்டோநைட்ரைல் (ACN), மெத்தனால், 2-புரோப்பனால், மற்றும் அசிட்டோன் ஆகியவை சிக்மா-ஆல்ட்ரிச் (செயின்ட் லூயிஸ், MO, USA) நிறுவனத்திடமிருந்து வாங்கப்பட்டன.
யூரியா (8 கிராம்), பாலிஎதிலீன் கிளைக்கால் (8 கிராம்) மற்றும் 8 மிலி 0.01 N அசிட்டிக் அமிலம் ஆகியவற்றின் கலவை 10 நிமிடங்கள் கலக்கப்பட்டது, பின்னர் பனிக்கட்டி குளிர் நிலையில் 24 மிலி TMOS அதனுடன் சேர்க்கப்பட்டது. வினைக்கலவை ஒரு துருப்பிடிக்காத எஃகு ஆட்டோகிளேவில் 40°C வெப்பநிலையில் 6 மணி நேரமும், பின்னர் 120°C வெப்பநிலையில் 8 மணி நேரமும் சூடுபடுத்தப்பட்டது. நீர் வடிக்கப்பட்டு, மீதமுள்ள பொருள் 70°C வெப்பநிலையில் 12 மணி நேரம் உலர்த்தப்பட்டது. உலர்த்தப்பட்ட மென்மையான திண்மம் ஒரு சூளையில் மென்மையாக அரைக்கப்பட்டு, 550°C வெப்பநிலையில் 12 மணி நேரம் சுட்டெரிக்கப்பட்டது. துகள் அளவு, துளை அளவு மற்றும் மேற்பரப்புப் பரப்பளவு ஆகியவற்றில் மீண்டும் மீண்டும் பெறும் தன்மையை ஆராய்வதற்காக மூன்று தொகுதிகள் தயாரிக்கப்பட்டு பண்புப்படுத்தப்பட்டன.
முன்னரே தயாரிக்கப்பட்ட ஃபினைல்மேலிமைடு-மெத்தில்வினைல்ஐசோசயனேட் (PCMP) என்ற லிகண்டைக் கொண்டு சிலிக்கா துகள்களின் மேற்பரப்பை மாற்றியமைத்து, அதனைத் தொடர்ந்து ஸ்டைரீனுடன் ஆரப் பலபடியாக்கம் செய்வதன் மூலம், முனைவுள்ள குழுக்களைக் கொண்ட ஒரு சேர்மம் தயாரிக்கப்பட்டது. திரள்கள் மற்றும் பாலிஸ்டைரீன் சங்கிலிகளுக்கான நிலைத்த கட்டம். தயாரிப்பு செயல்முறை கீழே விவரிக்கப்பட்டுள்ளது.
N-ஃபினைல்மேலிமைடு (200 மி.கி) மற்றும் மெத்தில் வினைல் ஐசோசயனேட் (100 மி.கி) ஆகியவை உலர்ந்த டோலுயீனில் கரைக்கப்பட்டு, ஃபினைல்மேலிமைடு-மெத்தில் வினைல் ஐசோசயனேட் கோபாலிமரை (PMCP) தயாரிப்பதற்காக 0.1 மிலி 2,2′-அசோஐசோபியூட்டிரோநைட்ரைல் (AIBN) வினைக்குழாயில் சேர்க்கப்பட்டது. இந்தக் கலவை 3 மணி நேரம் 60°C வெப்பநிலையில் சூடுபடுத்தப்பட்டு, வடிகட்டப்பட்டு, பின்னர் 3 மணி நேரம் 40°C வெப்பநிலையில் ஒரு சூளையில் உலர்த்தப்பட்டது.
உலர்ந்த சிலிக்கா துகள்கள் (2 கிராம்) உலர்ந்த டோலுயீனில் (100 மிலி) சிதறடிக்கப்பட்டு, 500 மிலி உருளை வடிவக் குடுவையில் 10 நிமிடங்களுக்குக் கலக்கப்பட்டு, மீயொலி அலைகளுக்கு உட்படுத்தப்பட்டன. PMCP (10 மி.கி) டோலுயீனில் கரைக்கப்பட்டு, ஒரு சொட்டுக் புனல் வழியாக வினைக்குடுவையில் துளித்துளியாகச் சேர்க்கப்பட்டது. இந்தக் கலவை 100°C வெப்பநிலையில் 8 மணி நேரம் பின்னொழுக்கு செய்யப்பட்டு, வடிகட்டப்பட்டு, அசிட்டோனால் கழுவப்பட்டு, 60°C வெப்பநிலையில் 3 மணி நேரம் உலர்த்தப்பட்டது. பின்னர், PMCP-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள் (100 கிராம்) டோலுயீனில் (200 மிலி) கரைக்கப்பட்டு, வினையூக்கியாக 100 µL டைபியூட்டில்டின் டைலாரேட் முன்னிலையில் 4-ஹைட்ராக்ஸி-TEMPO (2 மிலி) சேர்க்கப்பட்டது. இந்தக் கலவை 50°C வெப்பநிலையில் 8 மணி நேரம் கலக்கப்பட்டு, வடிகட்டப்பட்டு, 50°C வெப்பநிலையில் 3 மணி நேரம் உலர்த்தப்பட்டது.
ஸ்டைரீன் (1 மிலி), பென்சாயில் பெராக்சைடு (BPO) (0.5 மிலி), மற்றும் TEMPO-PMCP இணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள் (1.5 கி) ஆகியவை டோலுயீனில் சிதறடிக்கப்பட்டு, நைட்ரஜனால் சுத்திகரிக்கப்பட்டன. ஸ்டைரீனின் பாலிமரைசேஷன் 100°C வெப்பநிலையில் 12 மணி நேரம் மேற்கொள்ளப்பட்டது. இதன் விளைவாகக் கிடைத்த தயாரிப்பு மெத்தனால் கொண்டு கழுவப்பட்டு, இரவு முழுவதும் 60°C வெப்பநிலையில் உலர்த்தப்பட்டது. ஒட்டுமொத்த வினைத் திட்டம் படம் 1-இல் காட்டப்பட்டுள்ளது.
10-3 Torr-க்கும் குறைவான எஞ்சிய அழுத்தத்தைப் பெறுவதற்காக, மாதிரிகள் 393 K வெப்பநிலையில் 1 மணி நேரத்திற்கு வாயு நீக்கம் செய்யப்பட்டன. P/P0 = 0.99 என்ற சார்பு அழுத்தத்தில் உறிஞ்சப்பட்ட N2-வின் அளவு, மொத்த துளைக் கனஅளவைத் தீர்மானிக்கப் பயன்படுத்தப்பட்டது. வெறும் மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் புறவமைப்பு, ஸ்கேனிங் எலக்ட்ரான் மைக்ரோஸ்கோபி (ஹிட்டாச்சி ஹை டெக்னாலஜிஸ், டோக்கியோ, ஜப்பான்) மூலம் ஆய்வு செய்யப்பட்டது. உலர்ந்த மாதிரிகள் (வெறும் சிலிக்கா மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள்) ஒட்டும் கார்பன் நாடாவைப் பயன்படுத்தி ஒரு அலுமினியத் தூணில் வைக்கப்பட்டன. Q150T ஸ்பட்டர் கோட்டரைப் பயன்படுத்தி மாதிரிகளின் மீது தங்கம் பூசப்பட்டது, மேலும் மாதிரிகளின் மீது 5 nm Au அடுக்கு படியவைக்கப்பட்டது. இது குறைந்த மின்னழுத்தங்களைப் பயன்படுத்தி செயல்முறைத் திறனை மேம்படுத்துகிறது மற்றும் நுண் தானிய, குளிர் ஸ்பட்டரிங்கை வழங்குகிறது. தனிமப் பகுப்பாய்விற்காக தெர்மோ எலக்ட்ரான் (வால்தாம், MA, USA) ஃபிளாஷ் EA1112 தனிமப் பகுப்பாய்வி பயன்படுத்தப்பட்டது. துகள் அளவுப் பரவலைப் பெறுவதற்காக மால்வர்ன் (வொர்செஸ்டர்ஷைர், UK) மாஸ்டர்சைசர் 2000 துகள் அளவுப் பகுப்பாய்வி பயன்படுத்தப்பட்டது. வெறும் சிலிக்கா துகள்கள் மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள் (ஒவ்வொன்றும் 5 மி.கி) 5 மி.லி ஐசோபுரோப்பனாலில் சிதறடிக்கப்பட்டு, 10 நிமிடங்கள் மீயொலிக்கு உட்படுத்தப்பட்டு, 5 நிமிடங்கள் சுழற்றப்பட்டு, மாஸ்டர்சைசரின் ஒளியியல் மேசையில் வைக்கப்பட்டன. வெப்ப எடையியல் பகுப்பாய்வானது, 30 முதல் 800 °C வரையிலான வெப்பநிலை வரம்பில், நிமிடத்திற்கு 5 °C என்ற விகிதத்தில் நிகழ்த்தப்பட்டது.
(100 × 1.8 மிமீ உள்விட்டம்) பரிமாணங்களைக் கொண்ட, கண்ணாடி பூசப்பட்ட துருப்பிடிக்காத எஃகினால் ஆன குறுகிய துளைத் தூண்கள், மேற்கோளில் பயன்படுத்தப்பட்ட அதே செயல்முறையைப் பின்பற்றி, கூழ் நிரப்பும் முறையைப் பயன்படுத்தி நிரப்பப்பட்டன. 31. 1 µm ஃபிரிட் கொண்ட ஒரு அவுட்லெட் ஃபிட்டிங்குடன் கூடிய ஒரு துருப்பிடிக்காத எஃகு காலம் (கண்ணாடி பூசப்பட்டது, 100 × 1.8 மிமீ உள்விட்டம்) ஒரு ஸ்லரி பேக்கருடன் (Alltech Deerfield, IL, USA) இணைக்கப்பட்டது. 150 மி.கி ஸ்டேஷனரி ஃபேஸை 1.2 மி.லி மெத்தனாலில் கரைத்து ஒரு ஸ்டேஷனரி ஃபேஸ் ஸ்லரியைத் தயாரித்து, அதை சேமிப்புக் காலத்திற்கு அனுப்பவும். மெத்தனால் ஸ்லரி கரைப்பானாகவும், உந்தும் கரைப்பானாகவும் பயன்படுத்தப்பட்டது. 10 நிமிடங்களுக்கு 100 MP, 15 நிமிடங்களுக்கு 80 MP, மற்றும் 30 நிமிடங்களுக்கு 60 MP அழுத்தங்களைப் பயன்படுத்தி, காலத்தை வரிசையாக நிரப்பவும். நிரப்பும் போது, ​​காலத்தின் சீரான நிரப்புதலை உறுதி செய்வதற்காக இரண்டு GC காலம் ஷேக்கர்களைக் (Alltech, Deerfield, IL, USA) கொண்டு இயந்திர அதிர்வு பயன்படுத்தப்பட்டது. காலத்திற்குள் எந்த சேதமும் ஏற்படாமல் தடுக்க, ஸ்லரி பேக்கரை மூடி, அழுத்தத்தை மெதுவாக வெளியிடவும். காலத்தை ஸ்லரி பேக்கிங் யூனிட்டிலிருந்து துண்டித்து, மற்றொரு ஃபிட்டிங்கை இன்லெட் மற்றும் LC அமைப்புடன் இணைக்கவும். அதன் செயல்திறனைச் சரிபார்க்கவும்.
ஒரு LC பம்ப் (10AD ஷிமாட்சு, ஜப்பான்), 50nL ஊசி வளையத்துடன் கூடிய இன்ஜெக்டர் (வால்கோ (அமெரிக்கா) C14 W.05), மென்படல வாயு நீக்கி (ஷிமாட்சு DGU-14A), UV-VIS நுண்குழாய் சாளரம், சிறப்பு µLC சாதன உணரி (UV-2075) மற்றும் கண்ணாடி பூசப்பட்ட நுண்குழாய்கள் ஆகியவற்றைக் கொண்டு இது கட்டமைக்கப்பட்டது. கூடுதல் நெடுவரிசை பட்டை அகலமாதலின் விளைவைக் குறைக்க, மிகவும் குறுகிய மற்றும் குட்டையான இணைப்புக் குழாய்கள் பயன்படுத்தப்பட்டன. பேக்கேஜிங்கிற்குப் பிறகு, ரிட்யூசிங் யூனியனின் 1/16″ வெளிவழியில் நுண்குழாய்கள் (50 μm உள்விட்டம்) மற்றும் ரிட்யூசிங் யூனியன் நுண்குழாய்கள் (50 μm) நிறுவப்பட்டன. மல்டிகுரோ 2000 மென்பொருளைப் பயன்படுத்தி தரவு சேகரிப்பு மற்றும் குரோமடோகிராஃபிக் செயலாக்கம் செய்யப்பட்டன. 254 nm-ல் கண்காணிப்பு மேற்கொள்ளப்பட்டது. பகுப்பாய்வுப் பொருட்கள் UV உறிஞ்சலுக்காக சோதிக்கப்பட்டன. குரோமடோகிராஃபிக் தரவுகள் ஆரிஜின்ப்ரோ8 (நார்தாம்ப்டன், MA) மூலம் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன.
மனித சீரத்திலிருந்து பெறப்பட்ட அல்புமின், உறைந்த உலர்ந்த தூள், ≥ 96% (அகரோஸ் ஜெல் எலக்ட்ரோஃபோரெசிஸ்) 3 மி.கி, டிரிப்சின் (1.5 மி.கி), 4.0 M யூரியா (1 மி.லி), மற்றும் 0.2 M அம்மோனியம் பைகார்பனேட் (1 மி.லி) ஆகியவற்றுடன் கலக்கப்பட்டது. இந்தக் கரைசல் 10 நிமிடங்கள் கலக்கப்பட்டு, 37°C வெப்பநிலையில் உள்ள நீர்த் தொட்டியில் 6 மணி நேரம் வைக்கப்பட்டது. பின்னர், 1 மி.லி 0.1% TFA கொண்டு திடீரெனக் குளிர்விக்கப்பட்டது. கரைசலை வடிகட்டி, 4°C-க்குக் கீழ் சேமிக்கவும்.
பெப்டைட் கலவைகள் மற்றும் HSA டிரிப்சின் செரிமானங்களின் பிரிப்பு, PMP நிரல்களில் தனித்தனியாக மதிப்பிடப்பட்டது. PMP நிரல் மூலம் பெப்டைட் கலவை மற்றும் HSA-வின் டிரிப்சின் செரிமானத்தின் பிரிப்பைச் சரிபார்த்து, முடிவுகளை Ascentis Express RP-Amide நிரலுடன் ஒப்பிடவும். கோட்பாட்டுத் தட்டு எண் பின்வருமாறு கணக்கிடப்படுகிறது:
படம் 2-இல், வெறும் சிலிக்கா துகள்கள் மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் SEM படங்கள் காட்டப்பட்டுள்ளன. வெறும் சிலிக்கா துகள்களின் (A, B) SEM படங்கள், எங்களின் முந்தைய ஆய்வுகளுக்கு மாறாக, இந்தத் துகள்கள் கோள வடிவத்தில் இருப்பதையும், அவற்றில் துகள்கள் நீளமாகவோ அல்லது ஒழுங்கற்ற சமச்சீருடனோ இருப்பதையும் காட்டுகின்றன. லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் (C, D) மேற்பரப்பு, வெறும் சிலிக்கா துகள்களின் மேற்பரப்பை விட மென்மையாக உள்ளது; இது சிலிக்கா துகள்களின் மேற்பரப்பில் பாலிஸ்டிரீன் சங்கிலிகள் பூசப்பட்டிருப்பதால் இருக்கலாம்.
வெற்று சிலிக்கா துகள்கள் (A, B) மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள் (C, D) ஆகியவற்றின் ஸ்கேனிங் எலக்ட்ரான் மைக்ரோஸ்கோப் படங்கள்.
வெற்று சிலிக்கா துகள்கள் மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் துகள் அளவுப் பரவல்கள் படம் 3(A)-இல் காட்டப்பட்டுள்ளன. கன அளவு அடிப்படையிலான துகள் அளவுப் பரவல் வளைவுகள், வேதியியல் மாற்றியமைப்பிற்குப் பிறகு சிலிக்கா துகள்களின் அளவு அதிகரித்ததைக் காட்டின (படம் 3A). தற்போதைய ஆய்வு மற்றும் முந்தைய ஆய்விலிருந்து பெறப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் துகள் அளவுப் பரவல் தரவுகள் அட்டவணை 1(A)-இல் ஒப்பிடப்பட்டுள்ளன. PMP-இன் கன அளவு அடிப்படையிலான துகள் அளவு, d(0.5), 3.36 μm ஆகும். இது, பாலிஸ்டைரீன்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களான எங்களின் முந்தைய ஆய்வில் ad(0.5) மதிப்பு 3.05 μm ஆக இருந்ததோடு ஒப்பிடப்படுகிறது³⁴. வினைக்கலவையில் PEG, யூரியா, TMOS மற்றும் அசிட்டிக் அமிலம் ஆகியவற்றின் மாறுபட்ட விகிதங்கள் காரணமாக, எங்களின் முந்தைய ஆய்வுடன் ஒப்பிடும்போது இந்தத் தொகுதி ஒரு குறுகிய துகள் அளவுப் பரவலைக் கொண்டிருந்தது. PMP கட்டத்தின் துகள் அளவு, நாங்கள் முன்பு ஆய்வு செய்த பாலிஸ்டைரீன்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள் கட்டத்தை விட சற்றே பெரியதாக உள்ளது. இதன் பொருள், ஸ்டைரீனைக் கொண்டு சிலிக்கா துகள்களின் மேற்பரப்புச் செயல்பாடாக்கம் ஒரு பாலிஸ்டைரீன் அடுக்கை (0.97 µm) மட்டுமே படிய வைத்துள்ளது என்பதாகும். சிலிக்கா மேற்பரப்பில், அதேசமயம் PMP கட்டத்தில் அடுக்கின் தடிமன் 1.38 µm ஆக இருந்தது.
வெற்று சிலிக்கா துகள்கள் மற்றும் பிணைப்பி-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் துகள் அளவுப் பரவல் (A) மற்றும் துளை அளவுப் பரவல் (B).
தற்போதைய ஆய்வின் சிலிக்கா துகள்களின் துளை அளவு, துளைக் கன அளவு மற்றும் மேற்பரப்புப் பரப்பளவு ஆகியவை அட்டவணை 1(B)-இல் கொடுக்கப்பட்டுள்ளன. வெறும் சிலிக்கா துகள்கள் மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் PSD விவரங்கள் படம் 3(B)-இல் காட்டப்பட்டுள்ளன. முடிவுகள் நமது முந்தைய ஆய்வுடன் ஒப்பிடத்தக்கவையாக உள்ளன. வெறும் மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் துளை அளவுகள் முறையே 310 மற்றும் 241 ஆகும், இது வேதியியல் மாற்றத்திற்குப் பிறகு துளை அளவு 69 குறைகிறது என்பதைக் குறிக்கிறது, இது அட்டவணை 1(B)-இல் காட்டப்பட்டுள்ளது, மேலும் வளைவின் மாற்றம் படம் 3(B)-இல் காட்டப்பட்டுள்ளது. இதேபோல், வேதியியல் மாற்றத்திற்குப் பிறகு சிலிக்கா துகள்களின் துளைக் கன அளவு 0.67-இலிருந்து 0.58 cm³/g ஆகக் குறைந்தது. தற்போது ஆய்வு செய்யப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் குறிப்பிட்ட மேற்பரப்புப் பரப்பளவு 116 m²/g ஆகும், இது நமது முந்தைய ஆய்வுடன் (124 m²/g) ஒப்பிடத்தக்கது. அட்டவணை 1(B)-இல் காட்டப்பட்டுள்ளபடி, சிலிக்கா துகள்களின் மேற்பரப்புப் பரப்பளவும் (m²/g) 116-இலிருந்து குறைந்துள்ளது. வேதியியல் மாற்றத்திற்குப் பிறகு m2/g இலிருந்து 105 m2/g ஆக.
நிலையான கட்டத்தின் தனிமப் பகுப்பாய்வின் முடிவுகள் அட்டவணை 2-இல் காட்டப்பட்டுள்ளன. தற்போதைய நிலையான கட்டத்தின் கார்பன் சுமை 6.35% ஆகும், இது நமது முந்தைய ஆய்வின் (பாலிஸ்டைரீன் பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள், முறையே 7.93%35 மற்றும் 10.21%) கார்பன் சுமையை விடக் குறைவாகும் 42. தற்போதைய நிலையான கட்டத்தின் கார்பன் சுமை குறைவாக இருப்பதற்குக் காரணம், தற்போதைய SP-ஐத் தயாரிக்கும்போது, ​​ஸ்டைரீனுடன் கூடுதலாக, ஃபினைல்மேலிமைடு-மெத்தில்வினைல்ஐசோசயனேட் (PCMP) மற்றும் 4-ஹைட்ராக்ஸி-TEMPO போன்ற சில முனைவுள்ள ஈந்தணைவிகள் பயன்படுத்தப்பட்டன. தற்போதைய நிலையான கட்டத்தின் நைட்ரஜன் எடை சதவீதம் 2.21% ஆகும், இது முந்தைய ஆய்வுகளில் முறையே 0.1735 மற்றும் 0.85% நைட்ரஜன் எடையுடன் ஒப்பிடப்படுகிறது. ஃபினைல்மேலிமைடு காரணமாக தற்போதைய நிலையான கட்டத்தில் நைட்ரஜனின் எடை சதவீதம் அதிகமாக உள்ளது என்பதே இதன் பொருள். இதேபோல், தயாரிப்புகள் (4) மற்றும் (5) ஆகியவற்றின் கார்பன் சுமைகள் 2.7% மற்றும் 2.9% ஆக இருந்தன. அட்டவணை 2 இல் காட்டப்பட்டுள்ளபடி, இறுதி தயாரிப்பின் (6) கார்பன் சுமை 6.35% ஆக இருந்தது. எடை இழப்பு PMP நிலையான கட்டத்துடன் சரிபார்க்கப்பட்டது, மேலும் TGA வளைவு படம் 4 இல் காட்டப்பட்டுள்ளது. TGA வளைவு 8.6% எடை இழப்பைக் காட்டுகிறது, இது கார்பன் சுமையுடன் (6.35%) நன்றாக ஒத்துப்போகிறது, ஏனெனில் லிகண்டுகளில் C மட்டுமல்லாமல் N, O மற்றும் H ஆகியவையும் உள்ளன.
சிலிக்கா துகள்களின் மேற்பரப்பு மாற்றத்திற்காக ஃபினைல்மேலிமைடு-மெத்தில்வினைல்ஐசோசயனேட் லிகண்ட் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டது, ஏனெனில் அது முனைவுள்ள ஃபினைல்மேலிமைடு குழுக்களையும் வினைல்ஐசோசயனேட் குழுக்களையும் கொண்டுள்ளது. வினைல்ஐசோசயனேட் குழுக்கள், உயிருள்ள ரேடிகல் பாலிமரைசேஷன் மூலம் ஸ்டைரீனுடன் மேலும் வினைபுரிய முடியும். இரண்டாவது காரணம், பகுப்பாய்வுப் பொருளுடன் மிதமான இடைவினையைக் கொண்ட ஒரு குழுவைச் செருகுவதாகும், மேலும் பகுப்பாய்வுப் பொருளுக்கும் நிலையான கட்டத்திற்கும் இடையில் வலுவான நிலைமின் இடைவினை இல்லை, ஏனெனில் ஃபினைல்மேலிமைடு பகுதிக்கு சாதாரண pH-இல் மெய்நிகர் மின்னூட்டம் இல்லை. நிலையான கட்டத்தின் முனைவுத்தன்மையை, ஸ்டைரீனின் உகந்த அளவு மற்றும் ஃப்ரீ ரேடிகல் பாலிமரைசேஷன் வினை நேரம் ஆகியவற்றைக் கொண்டு கட்டுப்படுத்தலாம். வினையின் கடைசிப் படி (ஃப்ரீ ரேடிகல் பாலிமரைசேஷன்) முக்கியமானதாகும், மேலும் அது நிலையான கட்டத்தின் முனைவுத்தன்மையை மாற்றக்கூடும். இந்த நிலையான கட்டங்களின் கார்பன் சுமையைச் சரிபார்க்க தனிமப் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது. ஸ்டைரீனின் அளவையும் வினை நேரத்தையும் அதிகரிப்பது நிலையான கட்டத்தின் கார்பன் சுமையை அதிகரித்தது மற்றும் நேர்மாறாகவும் நிகழ்ந்தது என்பது கவனிக்கப்பட்டது. வெவ்வேறு செறிவுகளில் ஸ்டைரீனுடன் தயாரிக்கப்பட்ட SP-கள் வெவ்வேறு கார்பன் சுமைகளைக் கொண்டுள்ளன. மீண்டும், இந்த நிலையான கட்டங்களை துருப்பிடிக்காத எஃகுத் தூண்களில் இட்டு, அவற்றின் நிறப்பிரிகைச் செயல்திறனை (தேர்ந்தெடுப்புத்திறன், பிரிதிறன், N மதிப்பு போன்றவை) சரிபார்க்கவும். இந்தச் சோதனைகளின் அடிப்படையில், கட்டுப்படுத்தப்பட்ட முனைவுத்தன்மை மற்றும் நல்ல பகுப்பாய்வுப் பொருள் தக்கவைப்பை உறுதி செய்வதற்காக, PMP நிலையான கட்டத்தைத் தயாரிக்க ஒரு உகந்த சூத்திரம் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டது.
நகரும் கட்டத்தைப் பயன்படுத்தி, PMP நிரல் ஒன்றின் மூலம் ஐந்து பெப்டைட் கலவைகளும் (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, லூசின் என்கெஃபாலின்) மதிப்பீடு செய்யப்பட்டன; 80 μL/நிமிடம் பாய்வு விகிதத்தில் 60/40 (v/v) அசிட்டோநைட்ரைல்/நீர் (0.1% TFA). உகந்த எலுஷன் நிலைமைகளின் கீழ், ஒரு நிரலுக்கு (100 × 1.8 மிமீ உள்விட்டம்) கோட்பாட்டு ரீதியான தட்டு எண்ணிக்கை (N) 20,000 ± 100 (200,000 தட்டுகள்/மீ²) ஆகும். அட்டவணை 3 மூன்று PMP நிரல்களுக்கான N மதிப்புகளை வழங்குகிறது மற்றும் குரோமட்டோகிராம்கள் படம் 5A இல் காட்டப்பட்டுள்ளன. அதிக பாய்வு விகிதத்தில் (700 μL/நிமிடம்) ஒரு PMP நிரலில் விரைவான பகுப்பாய்வு, ஐந்து பெப்டைடுகள் ஒரு நிமிடத்திற்குள் எலுட் செய்யப்பட்டன, N மதிப்புகள் மிகவும் நன்றாக இருந்தன, ஒரு நிரலுக்கு (100 × 1.8 மிமீ உள்விட்டம்) 13,500 ± 330, இது 135,000 தட்டுகள்/மீ க்கு சமம் (படம் 5B). மூன்று ஒரே அளவிலான மீண்டும் மீண்டும் பெறும் தன்மையைச் சரிபார்க்க, மூன்று வெவ்வேறு தொகுதிகளைச் சேர்ந்த PMP நிலையான கட்டத்தைக் கொண்டு நிரல்கள் (100 × 1.8 மிமீ உள்விட்டம்) நிரப்பப்பட்டன. ஒவ்வொரு நிரலிலும் ஒரே சோதனைக் கலவையைப் பிரிப்பதற்கு, உகந்த கரைத்தல் நிலைமைகள், கோட்பாட்டுத் தட்டுகளின் எண்ணிக்கை N மற்றும் தக்கவைப்பு நேரம் ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி, ஒவ்வொரு நிரலுக்குமான பகுப்பாய்வுப் பொருளின் செறிவு பதிவு செய்யப்பட்டது. PMP நிரல்களுக்கான மீண்டும் மீண்டும் பெறும் தன்மைத் தரவுகள் அட்டவணை 4-இல் காட்டப்பட்டுள்ளன. அட்டவணை 3-இல் காட்டப்பட்டுள்ளபடி, PMP நிரலின் மீண்டும் மீண்டும் பெறும் தன்மையானது மிகக் குறைந்த %RSD மதிப்புகளுடன் நன்கு ஒத்துப்போகிறது.
PMP காலம் (B) மற்றும் அசென்டிஸ் எக்ஸ்பிரஸ் RP-அமைடு காலம் (A) ஆகியவற்றில் பெப்டைட் கலவையின் பிரிப்பு; நகரும் நிலை 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP காலம் பரிமாணங்கள் (100 × 1.8 மிமீ உள்விட்டம்); சேர்மங்களின் பகுப்பாய்வு வெளியேற்ற வரிசை: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) மற்றும் 5 (லூசின்) அமிலம் என்கெஃபாலின்)).
உயர் செயல்திறன் திரவ நிறப்பிரிகை முறையில் மனித சீரம் அல்புமினின் டிரிப்டிக் செரிமானங்களைப் பிரிப்பதற்காக ஒரு PMP நெடுவரிசை (100 × 1.8 மிமீ உள்விட்டம்) மதிப்பீடு செய்யப்பட்டது. படம் 6-இல் உள்ள நிறப்பிரிகை வரைபடம், மாதிரி நன்கு பிரிக்கப்பட்டிருப்பதையும், பிரிதிறன் மிகவும் நன்றாக இருப்பதையும் காட்டுகிறது. HSA செரிமானங்கள் 100 µL/நிமிடம் பாய்வு வீதம், 70/30 அசிட்டோநைட்ரைல்/நீர் நகரும் நிலை மற்றும் 0.1% TFA ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன. நிறப்பிரிகை வரைபடத்தில் (படம் 6) காட்டப்பட்டுள்ளபடி, HSA செரிமானம் 17 பெப்டைடுகளுக்கு இணையான 17 சிகரங்களாகப் பிரிக்கப்பட்டுள்ளது. HSA செரிமானத்தில் உள்ள ஒவ்வொரு சிகரத்தின் பிரிப்புத் திறனும் கணக்கிடப்பட்டு, அதன் மதிப்புகள் அட்டவணை 5-இல் கொடுக்கப்பட்டுள்ளன.
HSA-வின் (100 × 1.8 மிமீ உள்விட்டம்) டிரிப்டிக் டைஜெஸ்ட், ஒரு PMP நிரலில் பிரிக்கப்பட்டது; பாய்வு விகிதம் (100 µL/நிமிடம்), நகரும் நிலை 0.1% TFA உடன் கூடிய 60/40 அசிட்டோநைட்ரைல்/நீர்.
இதில் L என்பது நெடுவரிசையின் நீளம், η என்பது நகரும் கட்டத்தின் பாகுத்தன்மை, ΔP என்பது நெடுவரிசையின் பின் அழுத்தம், மற்றும் u என்பது நகரும் கட்டத்தின் நேரியல் திசைவேகம் ஆகும். PMP நெடுவரிசையின் ஊடுருவுத்திறன் 2.5 × 10⁻¹⁴ மீ² ஆகவும், பாய்வு விகிதம் 25 μL/நிமிடமாகவும் இருந்தது, மேலும் 60/40 v/v ACN/நீர் பயன்படுத்தப்பட்டது. PMP நெடுவரிசையின் (100 × 1.8 மிமீ உள்விட்டம்) ஊடுருவுத்திறன், எங்களின் முந்தைய ஆய்வான Ref.34-இல் உள்ளதைப் போலவே இருந்தது. மேலோட்டமாக நுண்துளைகள் கொண்ட துகள்களால் நிரப்பப்பட்ட நெடுவரிசையின் ஊடுருவுத்திறன்: 1.3 μm துகள்களுக்கு 1.7 × 10⁻¹⁵, 1.7 μm துகள்களுக்கு 3.1 × 10⁻¹⁵, மற்றும் 2.6 μm துகள்களுக்கு 5.2 × 10⁻¹⁵ மற்றும் 2.5 × 10⁻¹⁴ மீ² ஆகும். 43. எனவே, PMP கட்டத்தின் ஊடுருவுத்திறன் 5 μm உள்ளகம்-மேலோடு துகள்களின் ஊடுருவுத்திறனை ஒத்திருக்கிறது.
இதில் Wx என்பது குளோரோஃபார்ம் நிரப்பப்பட்ட நிரலின் எடை, Wy என்பது மெத்தனால் நிரப்பப்பட்ட நிரலின் எடை, மற்றும் ρ என்பது கரைப்பானின் அடர்த்தி ஆகும். மெத்தனால் (ρ = 0.7866) மற்றும் குளோரோஃபார்ம் (ρ = 1.484) ஆகியவற்றின் அடர்த்திகள். நாங்கள் முன்பு ஆய்வு செய்த சிலிக்கா துகள்கள்-C18 நிரல்கள் (100 × 1.8 மிமீ உள்விட்டம்) 34 மற்றும் C18-யூரியா நிரல்கள் 31 ஆகியவற்றின் மொத்த நுண்துளைத்தன்மை முறையே 0.63 மற்றும் 0.55 ஆக இருந்தது. இதன் பொருள், யூரியா லிகண்டுகளின் இருப்பு நிலையான கட்டத்தின் ஊடுருவுத்திறனைக் குறைக்கிறது என்பதாகும். மறுபுறம், PMP நிரலின் (100 × 1.8 மிமீ உள்விட்டம்) மொத்த நுண்துளைத்தன்மை 0.60 ஆகும். C18-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களால் நிரப்பப்பட்ட நிரல்களை விட PMP நிரல்களின் ஊடுருவுத்திறன் குறைவாக உள்ளது, ஏனெனில் C18-வகை நிலையான கட்டங்களில் C18 லிகண்டுகள் சிலிக்காவுடன் இணைக்கப்பட்டுள்ளன. துகள்கள் நேரியல் சங்கிலிகளாக உள்ளன, அதேசமயம் பாலிஸ்டிரீன் வகை நிலையான கட்டங்களில், அதைச் சுற்றி ஒப்பீட்டளவில் தடிமனான பாலிமர் அடுக்கு உருவாகிறது. ஒரு வழக்கமான சோதனையில், நெடுவரிசையின் நுண்துளைத்தன்மை பின்வருமாறு கணக்கிடப்படுகிறது:
படம் 7A,B ஆனது, ஒரே மாதிரியான எலுஷன் நிலைமைகளைப் (அதாவது, 60/40 ACN/H2O மற்றும் 0.1% TFA) பயன்படுத்தி, PMP காலம் (100 × 1.8 மிமீ உள்விட்டம்) மற்றும் அசென்டிஸ் எக்ஸ்பிரஸ் RP-அமைடு காலம் (100 × 1.8 மிமீ உள்விட்டம்) ஆகியவற்றைக் காட்டுகிறது. வான் டீம்டர் வரைபடத்தின். தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட பெப்டைட் கலவைகள் (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, லூசின் என்கெஃபாலின்) 20 µL/நிமிடத்தில் தயாரிக்கப்பட்டன. இரண்டு நிரல்களுக்குமான குறைந்தபட்ச பாய்வு விகிதம் 800 µL/நிமிடம் ஆகும். உகந்த பாய்வு விகிதத்தில் (80 µL/நிமிடம்) PMP நிரல் மற்றும் அசென்டிஸ் எக்ஸ்பிரஸ் RP-அமைடு நிரலுக்கான குறைந்தபட்ச HETP மதிப்புகள் முறையே 2.6 µm மற்றும் 3.9 µm ஆக இருந்தன. இந்த HETP மதிப்புகள், வணிகரீதியாகக் கிடைக்கும் அசென்டிஸ் எக்ஸ்பிரஸ் RP-அமைடு நிரலை (100 × 1.8 மிமீ உள்விட்டம்) விட PMP நிரலின் (100 × 1.8 மிமீ உள்விட்டம்) பிரிப்புத் திறன் மிகவும் சிறந்தது என்பதைக் காட்டுகின்றன. படம் 7(A)-இல் உள்ள வான் டீம்டர் வரைபடம், பாய்வு அதிகரிக்கும்போது N மதிப்பு குறைவதைக் காட்டுகிறது. எங்கள் முந்தைய ஆய்வுடன் ஒப்பிடும்போது இது குறிப்பிடத்தக்கதல்ல. அசென்டிஸ் எக்ஸ்பிரஸ் RP-அமைடு நிரலுடன் ஒப்பிடும்போது PMP நிரலின் (100 × 1.8 மிமீ உள்விட்டம்) அதிக பிரிப்புத் திறன், தற்போதைய பணியில் பயன்படுத்தப்பட்ட துகள் வடிவம், அளவு மற்றும் சிக்கலான நிரல் நிரப்புதல் நடைமுறைகளில் உள்ள மேம்பாடுகளை அடிப்படையாகக் கொண்டது34.
(A) 0.1% TFA உடன் கூடிய 60/40 ACN/H2O கரைசலில், ஒரு PMP நிரலைப் (100 × 1.8 மிமீ உள்விட்டம்) பயன்படுத்திப் பெறப்பட்ட வான் டீம்டர் வரைபடம் (HETP எதிர் நகரும் கட்டத்தின் நேரியல் திசைவேகம்). (B) 0.1% TFA உடன் கூடிய 60/40 ACN/H2O கரைசலில், ஒரு Ascentis Express RP-Amide நிரலைப் (100 × 1.8 மிமீ உள்விட்டம்) பயன்படுத்திப் பெறப்பட்ட வான் டீம்டர் வரைபடம் (HETP எதிர் நகரும் கட்டத்தின் நேரியல் திசைவேகம்).
உயர் செயல்திறன் திரவ நிறப்பிரிகை முறையில், செயற்கை பெப்டைட் கலவைகள் மற்றும் மனித சீரம் அல்புமினின் (HAS) டிரிப்சின் செரிமானங்களைப் பிரிப்பதற்காக, துருவ-உட்பொதிந்த பாலிஸ்டிரீன் நிலையான கட்டம் ஒன்று தயாரிக்கப்பட்டு மதிப்பீடு செய்யப்பட்டது. பெப்டைட் கலவைகளுக்கான PMP நிரல்களின் நிறப்பிரிகை செயல்திறன், பிரிப்புத் திறன் மற்றும் பிரிதிறனில் மிகச் சிறப்பாக உள்ளது. PMP நிரல்களின் மேம்பட்ட பிரிப்பு செயல்திறனுக்கு, சிலிக்கா துகள்களின் துகள் அளவு மற்றும் துளை அளவு, நிலையான கட்டத்தின் கட்டுப்படுத்தப்பட்ட தொகுப்பு மற்றும் சிக்கலான நிரல் பொதிவு போன்ற பல்வேறு காரணங்கள் உள்ளன. உயர் பிரிப்புத் திறனுடன் கூடுதலாக, அதிக பாய்வு விகிதங்களில் குறைந்த நிரல் பின் அழுத்தம் இந்த நிலையான கட்டத்தின் மற்றொரு நன்மையாகும். PMP நிரல்கள் நல்ல மறுஉருவாக்கத்திறனைக் காட்டுகின்றன, மேலும் பெப்டைட் கலவைகளின் பகுப்பாய்வு மற்றும் பல்வேறு புரதங்களின் டிரிப்சின் செரிமானத்திற்குப் பயன்படுத்தப்படலாம். திரவ நிறப்பிரிகை முறையில் இயற்கை பொருட்கள், மருத்துவ தாவரங்களிலிருந்து பெறப்படும் உயிரியல் செயல்பாட்டுக் கலவைகள் மற்றும் பூஞ்சை சாறுகளைப் பிரிப்பதற்கு இந்த நிரலைப் பயன்படுத்த நாங்கள் உத்தேசித்துள்ளோம். எதிர்காலத்தில், புரதங்கள் மற்றும் மோனோகுளோனல் ஆன்டிபாடிகளைப் பிரிப்பதற்கும் PMP நிரல்கள் மதிப்பீடு செய்யப்படும்.
ஃபீல்ட், ஜே.கே., யூர்பி, எம்.ஆர்., லாவ், ஜே., தோகர்சென், எச். & பீட்டர்சன், பி. தலைகீழ் கட்ட நிறப்பிரிகை மூலம் பெப்டைட் பிரிப்பு அமைப்புகள் குறித்த ஆராய்ச்சி பகுதி I: ஒரு நெடுவரிசை பண்புக்கூறு நெறிமுறையின் உருவாக்கம். ஜே. குரோமடோகிராஃபி. 1603, 113–129. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
கோமஸ், பி. மற்றும் பலர். தொற்று நோய்களுக்கான சிகிச்சைக்காக வடிவமைக்கப்பட்ட மேம்படுத்தப்பட்ட செயல்திறன் மிக்க பெப்டைடுகள். பயோடெக்னாலஜி. அட்வான்ஸ்டு. 36(2), 415-429. https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
வ்லீகே, பி., லிசோவ்ஸ்கி, வி., மார்டினெஸ், ஜே. & க்ரெஸ்ட்சாடிஸ்கி, எம். செயற்கை சிகிச்சை பெப்டைடுகள்: அறிவியலும் சந்தையும். மருந்து கண்டுபிடிப்பு. 15 (1-2) டுடே, 40-56. https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
ஷீ, எஃப்., ஸ்மித், ஆர்.டி. & ஷென், ஒய். மேம்பட்ட புரோட்டியோமிக் திரவ நிறப்பிரிகை. ஜே. க்ரோமடோகிராஃபி. ஏ 1261, 78–90 (2012).
லியு, டபிள்யூ. மற்றும் பலர். மேம்பட்ட திரவ நிறப்பிரிகை-நிறை நிறமாலையியல், பரந்த இலக்குடைய வளர்சிதைமாற்றவியல் மற்றும் புரதவியல் ஆகியவற்றை இணைக்க உதவுகிறது. அனஸ்.சிம்.ஆக்டா 1069, 89–97 (2019).
செஸ்நட், எஸ்.எம் & சாலிஸ்பரி, ஜே.ஜே மருந்து மேம்பாட்டில் UHPLC இன் பங்கு. ஜே. செப். சயின்ஸ். 30(8), 1183-1190 (2007).
வூ, என். & கிளாசென், ஏ.எம். விரைவான பிரித்தல்களுக்கான அதி உயர் அழுத்த திரவ நிறப்பிரிகையின் அடிப்படை மற்றும் நடைமுறை அம்சங்கள். ஜே. செப். சை. 30(8), 1167-1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
ரென், எஸ்.ஏ. & செலிட்செஃப், பி. மருந்து மேம்பாட்டில் அதி உயர் செயல்திறன் திரவ நிறப்பிரிகை பயன்பாடு. ஜே. க்ரோமடோகிராஃபி. 1119(1-2), 140-146. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
கு, எச். மற்றும் பலர். என்டிரோவைரஸ்களைத் திறமையாகத் தூய்மைப்படுத்துவதற்காக, எண்ணெய்-நீர்க் உயர் உள் கட்டக் குழம்புகளிலிருந்து தயாரிக்கப்பட்ட ஒற்றைக்கல் பெருந்துளை நீர்க்கூழ்மங்கள். கெமிக்கல். பிரிட்டன். ஜே. 401, 126051 (2020).
ஷி, ஒய்., சியாங், ஆர்., ஹோர்வாத், சி. & வில்கின்ஸ், ஜே.ஏ. புரோட்டியோமிக்ஸில் திரவ நிறப்பிரிகையின் பங்கு. ஜே. குரோமடோகிராபி.ஏ 1053(1-2), 27-36 (2004).
ஃபெகெட்டே, எஸ்., வூதே, ஜே.-எல். & கில்லார்ம், டி. சிகிச்சை பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களின் தலைகீழ்-கட்ட திரவ நிறப்பிரிகை பிரித்தலில் வளர்ந்து வரும் போக்குகள்: கோட்பாடு மற்றும் பயன்பாடுகள். ஜே. பார்மசி. பயோமெடிக்கல் சயின்ஸ். ஆனஸ். 69, 9-27 (2012).
கிலார், எம்., ஒலிவோவா, பி., டேலி, ஏஇ & கெப்லர், ஜேசி முதல் மற்றும் இரண்டாவது பிரிப்பு பரிமாணங்களில் வெவ்வேறு pH மதிப்புகளைப் பயன்படுத்தி ஒரு RP-RP-HPLC அமைப்பைப் பயன்படுத்தி பெப்டைடுகளின் இரு பரிமாண பிரிப்பு. ஜே. செப். சயின்ஸ். 28(14), 1694-1703 (2005).
ஃபெலெட்டி, எஸ். மற்றும் பலர். C18 துணை-2 μm முழுமையான மற்றும் மேலோட்டமான நுண்துளைத் துகள்களால் நிரப்பப்பட்ட உயர்-செயல்திறன் குரோமடோகிராஃபிக் நெடுவரிசைகளின் நிறை பரிமாற்ற பண்புகள் மற்றும் இயக்கவியல் செயல்திறன் ஆராயப்பட்டது. ஜே. செப். சை. 43 (9-10), 1737-1745 (2020).
பியோவெசானா, எஸ். மற்றும் பலர். தாவர உயிரியல் செயல்பாட்டு பெப்டைடுகளைப் பிரித்தெடுத்தல், அடையாளம் காணுதல் மற்றும் சரிபார்ப்பதில் சமீபத்திய போக்குகள் மற்றும் பகுப்பாய்வு சவால்கள். அனஸ். உயிரியல் அனஸ். வேதியியல். 410(15), 3425–3444. https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
முல்லர், ஜே.பி. மற்றும் பலர். உயிரின இராச்சியத்தின் புரோட்டியோமிக் நிலப்பரப்பு. நேச்சர் 582(7813), 592-596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
டெலூகா, சி. மற்றும் பலர். தயாரிப்பு திரவ நிறப்பிரிகை மூலம் சிகிச்சை பெப்டைடுகளின் கீழ்நிலை செயலாக்கம். மூலக்கூறு (பேசல், சுவிட்சர்லாந்து) 26(15), 4688(2021).
யாங், ஒய். & ஜெங், எக்ஸ். கலப்பு-முறை குரோமடோகிராபி மற்றும் உயிரி பாலிமர்களுக்கு அதன் பயன்பாடு. ஜே. குரோமடோகிராபி.ஏ 1218(49), 8813–8825 (2011).
ஜாவோ, ஜி., டோங், எக்ஸ்.-ஒய். & சன், ஒய். கலப்பு-முறை புரத நிறப்பிரிகைக்கான லிகண்டுகள்: கொள்கை, பண்புக்கூறு மற்றும் வடிவமைப்பு. ஜே. பயோடெக்னாலஜி. 144(1), 3-11 (2009).