Nature.com ஐப் பார்வையிட்டதற்கு நன்றி. நீங்கள் பயன்படுத்தும் உலாவி பதிப்பில் CSS-க்கு குறைந்த ஆதரவு உள்ளது. சிறந்த அனுபவத்திற்கு, புதுப்பிக்கப்பட்ட உலாவியைப் பயன்படுத்துமாறு பரிந்துரைக்கிறோம் (அல்லது Internet Explorer இல் இணக்கத்தன்மை பயன்முறையை முடக்கவும்). இதற்கிடையில், தொடர்ச்சியான ஆதரவை உறுதிசெய்ய, ஸ்டைல்கள் மற்றும் ஜாவாஸ்கிரிப்ட் இல்லாமல் தளத்தைக் காண்பிப்போம்.
நுண்துளை சிலிக்கா துகள்கள் சோல்-ஜெல் முறையால் தயாரிக்கப்பட்டு, சில மாற்றங்களுடன் மேக்ரோபோரஸ் துகள்களைப் பெற்றன. இந்த துகள்கள் N-ஃபீனைல்மலேமைடு-மெத்தில்வினைலிசோசயனேட் (PMI) மற்றும் ஸ்டைரீன் ஆகியவற்றைக் கொண்டு மீளக்கூடிய கூட்டல் துண்டு துண்டான சங்கிலி பரிமாற்றம் (RAFT) பாலிமரைசேஷன் மூலம் பெறப்பட்டன, இது பாலிஸ்டிரீன் (PMP) நிலையான கட்டத்தின் N-ஃபீனைல்மலேமைடு இடைக்கணிப்பைத் தயாரிக்கிறது. குறுகிய-துளை துருப்பிடிக்காத எஃகு நெடுவரிசைகள் (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) குழம்பு பேக்கிங் மூலம் பேக் செய்யப்பட்டன. ஐந்து பெப்டைடுகள் (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, லுசின் என்கெஃபாலின்) குரோமடோகிராஃபிக் செயல்திறன்) மற்றும் மனித சீரம் அல்புமினின் டிரிப்சின் செரிமானம் (HAS) ஆகியவற்றைக் கொண்ட பெப்டைட் கலவையின் PMP நெடுவரிசை பிரிப்பு மதிப்பிடப்பட்டது. உகந்த நீக்குதல் நிலைமைகளின் கீழ், பெப்டைட் கலவையின் கோட்பாட்டு தட்டு எண்ணிக்கை 280,000 தட்டுகள்/மீ² வரை அதிகமாக உள்ளது. பிரிப்பு செயல்திறனை ஒப்பிடுகையில் வணிக அசென்டிஸ் எக்ஸ்பிரஸ் RP-அமைடு நெடுவரிசையுடன் உருவாக்கப்பட்ட நெடுவரிசையின், பிரிப்பு செயல்திறன் மற்றும் தெளிவுத்திறன் அடிப்படையில் PMP நெடுவரிசையின் பிரிப்பு செயல்திறன் வணிக நெடுவரிசையை விட உயர்ந்ததாக இருப்பது காணப்பட்டது.
சமீபத்திய ஆண்டுகளில், உயிரி மருந்துத் துறை சந்தைப் பங்கில் கணிசமான அதிகரிப்புடன் விரிவடையும் உலகளாவிய சந்தையாக மாறியுள்ளது. உயிரி மருந்துத் துறையின் வெடிக்கும் வளர்ச்சியுடன்1,2,3, பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களின் பகுப்பாய்வு மிகவும் விரும்பத்தக்கது. இலக்கு பெப்டைடுக்கு கூடுதலாக, பெப்டைட் தொகுப்பின் போது பல அசுத்தங்கள் உருவாக்கப்படுகின்றன, இதனால் விரும்பிய தூய்மையின் பெப்டைட்களைப் பெற குரோமடோகிராஃபிக் சுத்திகரிப்பு தேவைப்படுகிறது. உடல் திரவங்கள், திசுக்கள் மற்றும் செல்களில் உள்ள புரதங்களின் பகுப்பாய்வு மற்றும் தன்மைப்படுத்தல் ஒரு சவாலான பணியாகும், ஏனெனில் ஒரே மாதிரியில் அதிக எண்ணிக்கையிலான கண்டறியக்கூடிய இனங்கள் உள்ளன. பெப்டைட் மற்றும் புரத வரிசைப்படுத்துதலுக்கான மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரி ஒரு பயனுள்ள கருவியாக இருந்தாலும், அத்தகைய மாதிரிகள் ஒரே பாஸில் மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமீட்டரில் செலுத்தப்பட்டால், பிரிப்பு சிறந்ததாக இருக்காது. MS பகுப்பாய்விற்கு முன் திரவ குரோமடோகிராபி (LC) பிரிப்புகளை செயல்படுத்துவதன் மூலம் இந்த சிக்கலைத் தணிக்க முடியும், இது ஒரு குறிப்பிட்ட நேரத்தில் மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமீட்டரில் நுழையும் பகுப்பாய்வுகளின் எண்ணிக்கையைக் குறைக்கும்4,5,6. கூடுதலாக, திரவ கட்டப் பிரிப்பின் போது, ​​பகுப்பாய்வுகளை குறுகிய பகுதிகளில் குவிக்க முடியும், இதன் மூலம் இந்த பகுப்பாய்வுகளை குவிக்கலாம் மற்றும் MS கண்டறிதல் உணர்திறனை மேம்படுத்துதல். திரவ குரோமடோகிராபி (LC) கடந்த பத்தாண்டுகளில் கணிசமாக முன்னேறியுள்ளது மற்றும் புரோட்டியோமிக் பகுப்பாய்வில் பிரபலமான நுட்பமாக மாறியுள்ளது7,8,9,10.
ஆக்டாடெசில்-மாற்றியமைக்கப்பட்ட சிலிக்காவை (ODS) நிலையான கட்டமாகப் பயன்படுத்தி பெப்டைட் கலவைகளை சுத்திகரிப்பு மற்றும் பிரிப்பதற்கு தலைகீழ்-கட்ட திரவ குரோமடோகிராபி (RP-LC) பரவலாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது. இருப்பினும், RP நிலையான கட்டங்கள் அவற்றின் சிக்கலான அமைப்பு மற்றும் ஆம்பிஃபிலிக் தன்மை காரணமாக பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களின் திருப்திகரமான பிரிப்பை வழங்குவதில்லை. 14,15. எனவே, துருவ மற்றும் துருவமற்ற பகுதிகளுடன் பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களை பகுப்பாய்வு செய்ய சிறப்பாக வடிவமைக்கப்பட்ட நிலையான கட்டங்கள் தேவைப்படுகின்றன. இந்த பகுப்பாய்வுகளுடன் தொடர்பு கொள்ளவும் தக்கவைக்கவும்16. மல்டிமாடல் இடைவினைகளை வழங்கும் கலப்பு-முறை குரோமடோகிராபி, பெப்டைடுகள், புரதங்கள் மற்றும் பிற சிக்கலான கலவைகளைப் பிரிப்பதற்கான RP-LC க்கு மாற்றாக இருக்கலாம். பல கலப்பு-முறை நிலையான கட்டங்கள் தயாரிக்கப்பட்டுள்ளன, மேலும் இந்த கட்டங்களுடன் நிரம்பிய நெடுவரிசைகள் பெப்டைட் மற்றும் புரதப் பிரிப்புகளுக்குப் பயன்படுத்தப்பட்டுள்ளன17,18,19,20,21. கலப்பு-முறை நிலையான கட்டங்கள் (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, துருவ இடைக்கணிப்பு/RPLC) துருவ மற்றும் துருவமற்ற குழுக்கள் இரண்டின் இருப்பு காரணமாக பெப்டைட் மற்றும் புரதப் பிரிப்புகளுக்கு ஏற்றது22,23,24,25,26,27,28. இதேபோல், கோவலன்ட் பிணைக்கப்பட்ட துருவக் குழுக்களுடன் துருவ இடைக்கணிப்பு நிலையான கட்டங்கள் நல்ல பிரிப்பு சக்தியையும் துருவ மற்றும் துருவமற்ற பகுப்பாய்வாளர்களுக்கு தனித்துவமான தேர்ந்தெடுப்பையும் காட்டுகின்றன, ஏனெனில் பிரிப்பு பகுப்பாய்வு மற்றும் நிலையான கட்டத்திற்கு இடையிலான தொடர்புகளைப் பொறுத்தது. மல்டிமோடல் இடைவினைகள் 29, 30, 31, 32. சமீபத்தில், ஜாங் மற்றும் பலர். 30 ஒரு டோடெசில்-முடிக்கப்பட்ட பாலிஅமைன் நிலையான கட்டத்தைத் தயாரித்து, ஹைட்ரோகார்பன்கள், ஆண்டிடிரஸண்டுகள், ஃபிளாவனாய்டுகள், நியூக்ளியோசைடுகள், ஈஸ்ட்ரோஜன்கள் மற்றும் பல பிற பகுப்பாய்வுகளை வெற்றிகரமாகப் பிரித்தது. துருவ இடைக்கணிப்பான் துருவ மற்றும் துருவமற்ற குழுக்களைக் கொண்டுள்ளது, எனவே இது ஹைட்ரோபோபிக் மற்றும் ஹைட்ரோஃபிலிக் பகுதிகளைக் கொண்ட பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களைப் பிரிக்கப் பயன்படுகிறது. துருவ-உட்பொதிக்கப்பட்ட நெடுவரிசைகள் (எ.கா., அமைடு-உட்பொதிக்கப்பட்ட C18 நெடுவரிசைகள்) வணிக ரீதியாக அசென்டிஸ் எக்ஸ்பிரஸ் RP-அமைடு நெடுவரிசைகள் என்ற வர்த்தகப் பெயரில் கிடைக்கின்றன, ஆனால் இந்த நெடுவரிசைகள் அமைன் 33 இன் பகுப்பாய்விற்கு மட்டுமே பயன்படுத்தப்படுகின்றன.
தற்போதைய ஆய்வில், HSA இன் பெப்டைடுகள் மற்றும் டிரிப்சின் செரிமானங்களைப் பிரிப்பதற்காக ஒரு துருவ-உட்பொதிக்கப்பட்ட நிலையான கட்டம் (N-phenylmaleimide-உட்பொதிக்கப்பட்ட பாலிஸ்டிரீன்) தயாரிக்கப்பட்டு மதிப்பீடு செய்யப்பட்டது. நிலையான கட்டம் பின்வரும் உத்தியைப் பயன்படுத்தி தயாரிக்கப்பட்டது. தயாரிப்பு நெறிமுறையில் சில மாற்றங்களுடன் எங்கள் முந்தைய வெளியீட்டில் கொடுக்கப்பட்ட நடைமுறையின்படி நுண்துளை சிலிக்கா துகள்கள் தயாரிக்கப்பட்டன. யூரியா, பாலிஎதிலீன் கிளைகோல் (PEG), TMOS, நீர் அசிட்டிக் அமிலம் ஆகியவற்றின் விகிதம் பெரிய துளை அளவு கொண்ட சிலிக்கா துகள்களைத் தயாரிக்க சரிசெய்யப்பட்டது. இரண்டாவதாக, ஒரு புதிய லிகண்ட், ஃபீனைல்மலேமைடு-மெத்தில் வினைல் ஐசோசயனேட், ஒருங்கிணைக்கப்பட்டு, துருவ உட்பொதிக்கப்பட்ட நிலையான கட்டத்தைத் தயாரிக்க சிலிக்கா துகள்களைப் பெறப் பயன்படுத்தப்பட்டது. இதன் விளைவாக நிலையான கட்டம் உகந்த பேக்கிங் திட்டத்தைப் பயன்படுத்தி ஒரு துருப்பிடிக்காத எஃகு நெடுவரிசையில் (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) பேக் செய்யப்பட்டது. நெடுவரிசைக்குள் ஒரு சீரான படுக்கை உருவாகிறது என்பதை உறுதிசெய்ய நெடுவரிசை பேக்கிங் இயந்திர அதிர்வுடன் உதவுகிறது. ஐந்து பெப்டைடுகளைக் கொண்ட பெப்டைட் கலவைகளின் நிரம்பிய நெடுவரிசை பிரிப்பை மதிப்பிடுங்கள்; (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) மற்றும் மனித சீரம் அல்புமினின் (HAS) டிரிப்சின் செரிமானம். HSA இன் பெப்டைட் கலவை மற்றும் டிரிப்சின் செரிமானம் நல்ல தெளிவுத்திறன் மற்றும் செயல்திறனுடன் பிரிக்கப்படுவது காணப்பட்டது. PMP நெடுவரிசையின் பிரிப்பு செயல்திறன் Ascentis Express RP-Amide நெடுவரிசையுடன் ஒப்பிடப்பட்டது. PMP நெடுவரிசையில் பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்கள் இரண்டும் நன்கு தீர்க்கப்பட்டு திறமையாக இருப்பது காணப்பட்டது, இது Ascentis Express RP-Amide நெடுவரிசையை விட மிகவும் திறமையானது.
PEG (பாலிஎதிலீன் கிளைக்கால்), யூரியா, அசிட்டிக் அமிலம், டிரைமெத்தாக்ஸி ஆர்த்தோசிலிகேட் (TMOS), டிரைமெத்தில் குளோரோசிலேன் (TMCS), டிரிப்சின், மனித சீரம் ஆல்புமின் (HSA), அம்மோனியம் குளோரைடு, யூரியா, ஹெக்ஸேன் மெத்தில்டிசிலாசேன் (HMDS), மெதக்ரைலாய்ல் குளோரைடு (MC), ஸ்டைரீன், 4-ஹைட்ராக்ஸி-டெம்போ, பென்சாயில் பெராக்சைடு (BPO), HPLC கிரேடு அசிட்டோனிட்ரைல் (ACN), மெத்தனால், 2-புரோபனால் மற்றும் அசிட்டோன் ஆகியவை சிக்மா-ஆல்ட்ரிச்சிலிருந்து (செயின்ட் லூயிஸ், MO, அமெரிக்கா) வாங்கப்பட்டன.
யூரியா (8 கிராம்), பாலிஎதிலீன் கிளைக்கால் (8 கிராம்), மற்றும் 0.01 N அசிட்டிக் அமிலம் கொண்ட 8 மிலி கலவையை 10 நிமிடங்கள் கிளறி, பின்னர் 24 மிலி TMOS ஐ பனி-குளிர் நிலையில் சேர்க்கப்பட்டது. வினை கலவை 40°C வெப்பநிலையில் 6 மணி நேரம் சூடாக்கப்பட்டு, பின்னர் 120°C வெப்பநிலையில் 8 மணி நேரம் துருப்பிடிக்காத எஃகு ஆட்டோகிளேவில் சூடாக்கப்பட்டது. தண்ணீர் ஊற்றப்பட்டு, மீதமுள்ள பொருள் 70°C வெப்பநிலையில் 12 மணி நேரம் உலர்த்தப்பட்டது. உலர்ந்த மென்மையான நிறை ஒரு அடுப்பில் மென்மையாக அரைக்கப்பட்டு 550°C வெப்பநிலையில் 12 மணி நேரம் சுடப்பட்டது. துகள் அளவு, துளை அளவு மற்றும் மேற்பரப்பு பரப்பளவில் இனப்பெருக்கத்தை ஆராய மூன்று தொகுதிகள் தயாரிக்கப்பட்டு வகைப்படுத்தப்பட்டன.
முன்-தொகுக்கப்பட்ட லிகண்ட் ஃபீனைல்மலேமைடு-மெத்தில்வினைலிசோசயனேட் (PCMP) உடன் சிலிக்கா துகள்களின் மேற்பரப்பு மாற்றத்தின் மூலம், அதைத் தொடர்ந்து ஸ்டைரீனுடன் ரேடியல் பாலிமரைசேஷன் மூலம், ஒரு துருவக் குழு-கொண்ட கலவை தயாரிக்கப்பட்டது. திரட்டுகள் மற்றும் பாலிஸ்டிரீன் சங்கிலிகளுக்கான நிலையான கட்டம். தயாரிப்பு செயல்முறை கீழே விவரிக்கப்பட்டுள்ளது.
N-பீனைல்மலைமைடு (200 மி.கி) மற்றும் மெத்தில் வினைல் ஐசோசயனேட் (100 மி.கி) ஆகியவை உலர்ந்த டோலுயினில் கரைக்கப்பட்டு, 0.1 மில்லி 2,2′-அசோஐசோபியூட்டிரோனிட்ரைல் (AIBN) வினை பிளாஸ்கில் சேர்க்கப்பட்டு பீனைல்மலைமைடு-மெத்தில் வினைல் ஐசோசயனேட் கோபாலிமர் (PMCP) தயாரிக்கப்பட்டது. இந்தக் கலவையை 60°C வெப்பநிலையில் 3 மணி நேரம் சூடாக்கி, வடிகட்டி 40°C வெப்பநிலையில் 3 மணி நேரம் அடுப்பில் உலர்த்தப்பட்டது.
உலர்ந்த சிலிக்கா துகள்கள் (2 கிராம்) உலர்ந்த டோலுயினில் (100 மிலி) சிதறடிக்கப்பட்டு, 500 மிலி வட்ட அடிப்பகுதி பிளாஸ்கில் 10 நிமிடங்களுக்கு கிளறி ஒலியூட்டப்பட்டன. பிஎம்சிபி (10 மி.கி) டோலுயினில் கரைக்கப்பட்டு, ஒரு சொட்டு புனல் வழியாக வினை பிளாஸ்கில் சொட்டு வடிவில் சேர்க்கப்பட்டது. கலவை 100°C இல் 8 மணி நேரம் ரிஃப்ளக்ஸ் செய்யப்பட்டு, வடிகட்டி அசிட்டோனால் கழுவப்பட்டு 60°C இல் 3 மணி நேரம் உலர்த்தப்பட்டது. பின்னர், பிஎம்சிபி-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள் (100 கிராம்) டோலுயினில் (200 மிலி) கரைக்கப்பட்டு, 100 µL டைபியூட்டில்டின் டைலாரேட் வினையூக்கியாக இருப்பதால் 4-ஹைட்ராக்ஸி-டெம்போ (2 மிலி) சேர்க்கப்பட்டது. கலவை 50°C இல் 8 மணி நேரம் கிளறி, வடிகட்டி 50°C இல் 3 மணி நேரம் உலர்த்தப்பட்டது.
ஸ்டைரீன் (1 மிலி), பென்சாயில் பெராக்சைடு பிபிஓ (0.5 மிலி), மற்றும் டெம்போ-பிஎம்சிபி-இணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள் (1.5 கிராம்) ஆகியவை டோலுயினில் சிதறடிக்கப்பட்டு நைட்ரஜனுடன் சுத்திகரிக்கப்பட்டன. ஸ்டைரீனின் பாலிமரைசேஷன் 100°C இல் 12 மணி நேரம் மேற்கொள்ளப்பட்டது. இதன் விளைவாக வந்த தயாரிப்பு மெத்தனால் கழுவப்பட்டு இரவு முழுவதும் 60°C இல் உலர்த்தப்பட்டது. ஒட்டுமொத்த எதிர்வினை திட்டம் படம் 1 இல் காட்டப்பட்டுள்ளது.
10-3 டோரருக்கும் குறைவான எஞ்சிய அழுத்தத்தைப் பெற மாதிரிகள் 1 மணி நேரத்திற்கு 393 K இல் வாயு நீக்கம் செய்யப்பட்டன. P/P0 = 0.99 என்ற ஒப்பீட்டு அழுத்தத்தில் உறிஞ்சப்பட்ட N2 அளவு மொத்த துளை அளவை தீர்மானிக்கப் பயன்படுத்தப்பட்டது. வெற்று மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் உருவவியல் ஸ்கேனிங் எலக்ட்ரான் நுண்ணோக்கி மூலம் ஆராயப்பட்டது (ஹிட்டாச்சி ஹை டெக்னாலஜிஸ், டோக்கியோ, ஜப்பான்). உலர்ந்த மாதிரிகள் (வெற்று சிலிக்கா மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள்) பிசின் கார்பன் டேப்பைப் பயன்படுத்தி ஒரு அலுமினிய நெடுவரிசையில் வைக்கப்பட்டன. Q150T ஸ்பட்டர் கோட்டரைப் பயன்படுத்தி மாதிரிகளில் தங்கம் பூசப்பட்டது, மேலும் மாதிரிகளில் 5 nm Au அடுக்கு படியெடுக்கப்பட்டது. இது குறைந்த மின்னழுத்தங்களைப் பயன்படுத்தி செயல்முறை செயல்திறனை மேம்படுத்துகிறது மற்றும் நுண்ணிய தானியம், குளிர் தெளிப்பை வழங்குகிறது. ஒரு தெர்மோ எலக்ட்ரான் (வால்தம், MA, USA) ஃப்ளாஷ் EA1112 தனிம பகுப்பாய்வி தனிம பகுப்பாய்வி தனிம பகுப்பாய்விக்கு பயன்படுத்தப்பட்டது. ஒரு மால்வெர்ன் (வொர்செஸ்டர்ஷயர், UK) மாஸ்டர்சைசர் 2000 துகள் அளவு பகுப்பாய்வி துகள் அளவு பரவலைப் பெற பயன்படுத்தப்பட்டது. நிர்வாண சிலிக்கா துகள்கள் மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள் (ஒவ்வொன்றும் 5 மி.கி) 5 மில்லி ஐசோபுரோபனாலில் சிதறடிக்கப்பட்டு, 10 நிமிடங்களுக்கு சோனிகேட் செய்யப்பட்டு, 5 நிமிடங்களுக்கு சுழலப்பட்டு, மாஸ்டர்சைசரின் ஆப்டிகல் பெஞ்சில் வைக்கப்பட்டன. தெர்மோகிராவிமெட்ரிக் பகுப்பாய்வு 30 முதல் 800 °C வெப்பநிலை வரம்பில் நிமிடத்திற்கு 5 °C என்ற விகிதத்தில் செய்யப்பட்டது.
கண்ணாடியால் பூசப்பட்ட துருப்பிடிக்காத எஃகு குறுகிய-துளை நெடுவரிசைகள் (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) ஸ்லரி பேக்கிங் முறையைப் பயன்படுத்தி பேக் செய்யப்பட்டன, இது Ref இல் பயன்படுத்தப்பட்ட அதே நடைமுறையைப் பயன்படுத்துகிறது. 31. 1 µm ஃபிரிட்டைக் கொண்ட ஒரு அவுட்லெட் பொருத்துதலுடன் கூடிய ஒரு துருப்பிடிக்காத எஃகு தூண் (கண்ணாடி வரிசையாக, 100 × 1.8 மிமீ ஐடி) ஒரு ஸ்லரி பேக்கருடன் (ஆல்டெக் டீர்ஃபீல்ட், IL, USA) இணைக்கப்பட்டது. 1.2 மில்லி மெத்தனாலில் 150 மி.கி நிலையான கட்டத்தை இடைநிறுத்தி ஒரு நிலையான கட்ட குழம்பை தயார் செய்து சேமிப்பு நெடுவரிசைக்கு அனுப்பவும். மெத்தனால் ஸ்லரி கரைப்பானாகவும் உந்துவிசை கரைப்பானாகவும் பயன்படுத்தப்பட்டது. 10 நிமிடங்களுக்கு 100 MP, 15 நிமிடங்களுக்கு 80 MP மற்றும் 30 நிமிடங்களுக்கு 60 MP அழுத்தங்களைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம் நெடுவரிசையை தொடர்ச்சியாக நிரப்பவும். பேக்கிங்கின் போது, ​​நெடுவரிசையின் சீரான பேக்கிங்கை உறுதிசெய்ய இரண்டு GC நெடுவரிசை ஷேக்கர்களுடன் (ஆல்டெக், டீர்ஃபீல்ட், IL, USA) இயந்திர அதிர்வு பயன்படுத்தப்பட்டது. ஸ்லரி பேக்கரை மூடி, நெடுவரிசைக்குள் எந்த சேதத்தையும் தடுக்க அழுத்தத்தை மெதுவாக விடுங்கள். ஸ்லரி பேக்கரிலிருந்து நெடுவரிசையைத் துண்டித்து, அதன் செயல்திறனைச் சரிபார்க்க மற்றொரு பொருத்தத்தை நுழைவாயிலுக்கும் LC அமைப்பிற்கும் இணைக்கவும்.
ஒரு LC பம்ப் (10AD ஷிமாட்சு, ஜப்பான்), 50nL ஊசி வளையம் கொண்ட இன்ஜெக்டர் (வால்கோ (USA) C14 W.05), சவ்வு டிகாசர் (ஷிமாட்சு DGU-14A), UV-VIS கேபிலரி சாளரம் கட்டப்பட்டது. சிறப்பு µLC சாதன கண்டறிதல் (UV-2075) மற்றும் கண்ணாடி-வரிசைப்படுத்தப்பட்ட மைக்ரோ நெடுவரிசைகள். கூடுதல் நெடுவரிசை பட்டை அகலப்படுத்தலின் விளைவைக் குறைக்க மிகவும் குறுகிய மற்றும் குறுகிய இணைக்கும் குழாய்களைப் பயன்படுத்தவும். பேக்கேஜிங் செய்த பிறகு, குறைக்கும் யூனியனின் 1/16″ வெளியீட்டில் தந்துகிகள் (50 μm ஐடி 365 மற்றும் குறைக்கும் யூனியன் கேபிலரிகள் (50 μm) நிறுவப்பட்டன. தரவு சேகரிப்பு மற்றும் குரோமடோகிராஃபிக் செயலாக்கம் மல்டிக்ரோ 2000 மென்பொருளைப் பயன்படுத்தி செய்யப்பட்டது. 254 nm இல் கண்காணிப்பு பகுப்பாய்வுகள் UV உறிஞ்சுதலுக்காக சோதிக்கப்பட்டன. குரோமடோகிராஃபிக் தரவு OriginPro8 (நார்தாம்ப்டன், MA) ஆல் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது.
மனித சீரத்திலிருந்து பெறப்பட்ட ஆல்புமின், லியோபிலைஸ் செய்யப்பட்ட தூள், ≥ 96% (அகரோஸ் ஜெல் எலக்ட்ரோபோரேசிஸ்) 3 மி.கி. டிரிப்சின் (1.5 மி.கி), 4.0 எம்.யூரியா (1 மி.லி), மற்றும் 0.2 எம்.அமோனியம் பைகார்பனேட் (1 மி.லி) ஆகியவற்றுடன் கலக்கப்பட்டது. கரைசலை 10 நிமிடங்கள் கிளறி, 37°C வெப்பநிலையில் 6 மணி நேரம் தண்ணீர் குளியலில் வைத்து, பின்னர் 1 மி.லி. 0.1% TFA உடன் தணிக்கவும். கரைசலை வடிகட்டி 4°C க்கு கீழே சேமிக்கவும்.
பெப்டைட் கலவைகள் மற்றும் HSA டிரிப்சின் செரிமானங்களைப் பிரிப்பது PMP நெடுவரிசைகளில் தனித்தனியாக மதிப்பிடப்பட்டது. PMP நெடுவரிசையால் HSA இன் பெப்டைட் கலவை மற்றும் டிரிப்சின் செரிமானத்தைப் பிரிப்பதைச் சரிபார்த்து, முடிவுகளை அசென்டிஸ் எக்ஸ்பிரஸ் RP-அமைடு நெடுவரிசையுடன் ஒப்பிடுக. கோட்பாட்டுத் தட்டு எண் பின்வருமாறு கணக்கிடப்படுகிறது:
வெற்று சிலிக்கா துகள்கள் மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் SEM படங்கள் படம் 2 இல் காட்டப்பட்டுள்ளன. வெற்று சிலிக்கா துகள்களின் (A, B) SEM படங்கள், நமது முந்தைய ஆய்வுகளுக்கு மாறாக, இந்த துகள்கள் கோள வடிவமாக உள்ளன, அதில் துகள்கள் நீளமாக உள்ளன அல்லது ஒழுங்கற்ற சமச்சீர்நிலையைக் கொண்டுள்ளன என்பதைக் காட்டுகின்றன. லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் (C, D) மேற்பரப்பு வெற்று சிலிக்கா துகள்களை விட மென்மையானது, இது சிலிக்கா துகள்களின் மேற்பரப்பில் பாலிஸ்டிரீன் சங்கிலிகளின் பூச்சு காரணமாக இருக்கலாம்.
வெற்று சிலிக்கா துகள்கள் (A, B) மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள் (C, D) ஆகியவற்றின் எலக்ட்ரான் நுண்ணோக்கி படங்களை ஸ்கேன் செய்தல்.
வெற்று சிலிக்கா துகள்கள் மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் துகள் அளவு விநியோகம் படம் 3(A) இல் காட்டப்பட்டுள்ளது. தொகுதி அடிப்படையிலான துகள் அளவு விநியோக வளைவுகள் வேதியியல் மாற்றத்திற்குப் பிறகு சிலிக்கா துகள்களின் அளவு அதிகரித்ததைக் காட்டின (படம் 3A). தற்போதைய ஆய்வு மற்றும் முந்தைய ஆய்விலிருந்து சிலிக்கா துகள்களின் துகள் அளவு விநியோகத் தரவு அட்டவணை 1(A) இல் ஒப்பிடப்பட்டுள்ளது. PMP இன் தொகுதி அடிப்படையிலான துகள் அளவு, d(0.5), 3.36 μm ஆகும், இது ad(0.5) மதிப்பு 3.05 μm (பாலிஸ்டிரீன்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள்)34 உடன் எங்கள் முந்தைய ஆய்வோடு ஒப்பிடும்போது. எதிர்வினை கலவையில் PEG, யூரியா, TMOS மற்றும் அசிட்டிக் அமிலத்தின் மாறுபட்ட விகிதங்கள் காரணமாக எங்கள் முந்தைய ஆய்வோடு ஒப்பிடும்போது இந்த தொகுதி குறுகிய துகள் அளவு விநியோகத்தைக் கொண்டிருந்தது. PMP கட்டத்தின் துகள் அளவு, நாம் முன்பு ஆய்வு செய்த பாலிஸ்டிரீன்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள் கட்டத்தை விட சற்று பெரியது. இதன் பொருள் ஸ்டைரீனுடன் சிலிக்கா துகள்களின் மேற்பரப்பு செயல்பாட்டுத்தன்மை சிலிக்கா மேற்பரப்பில் ஒரு பாலிஸ்டிரீன் அடுக்கை (0.97 µm) மட்டுமே டெபாசிட் செய்தது, அதேசமயம் PMP கட்டத்தில் அடுக்கு தடிமன் 1.38 µm ஆக இருந்தது.
வெற்று சிலிக்கா துகள்கள் மற்றும் லிகண்ட்-பிணைப்பு சிலிக்கா துகள்களின் துகள் அளவு பரவல் (A) மற்றும் துளை அளவு பரவல் (B).
தற்போதைய ஆய்வின் சிலிக்கா துகள்களின் துளை அளவு, துளை அளவு மற்றும் மேற்பரப்பு பரப்பளவு அட்டவணை 1(B) இல் கொடுக்கப்பட்டுள்ளன. வெற்று சிலிக்கா துகள்கள் மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் PSD சுயவிவரங்கள் படம் 3(B) இல் காட்டப்பட்டுள்ளன. முடிவுகள் எங்கள் முந்தைய ஆய்வுடன் ஒப்பிடத்தக்கவை. வெற்று மற்றும் லிகண்ட்-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் துளை அளவுகள் முறையே 310 மற்றும் 241 ஆகும், இது அட்டவணை 1(B) இல் காட்டப்பட்டுள்ளபடி, வேதியியல் மாற்றத்திற்குப் பிறகு துளை அளவு 69 ஆகக் குறைகிறது என்பதைக் குறிக்கிறது, மேலும் வளைவின் மாற்றம் படம் 3(B) இல் காட்டப்பட்டுள்ளது. இதேபோல், வேதியியல் மாற்றத்திற்குப் பிறகு சிலிக்கா துகள்களின் துளை அளவு 0.67 இலிருந்து 0.58 செ.மீ3/கிராம் ஆகக் குறைந்தது. தற்போது ஆய்வு செய்யப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களின் குறிப்பிட்ட மேற்பரப்பு பரப்பளவு 116 மீ2/கிராம் ஆகும், இது எங்கள் முந்தைய ஆய்வுக்கு (124 மீ2/கிராம்) ஒப்பிடத்தக்கது. அட்டவணை 1(B) இல் காட்டப்பட்டுள்ளபடி, சிலிக்கா துகள்களின் மேற்பரப்பு பரப்பளவு (மீ2/கிராம்) 116 மீ2/கிராமிலிருந்து குறைந்தது வேதியியல் மாற்றத்திற்குப் பிறகு 105 மீ2/கிராம்.
நிலையான கட்டத்தின் தனிம பகுப்பாய்வின் முடிவுகள் அட்டவணை 2 இல் காட்டப்பட்டுள்ளன. தற்போதைய நிலையான கட்டத்தின் கார்பன் ஏற்றுதல் 6.35% ஆகும், இது எங்கள் முந்தைய ஆய்வின் கார்பன் ஏற்றுதலை விடக் குறைவு (பாலிஸ்டிரீன் பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்கள், முறையே 7.93%35 மற்றும் 10.21%) 42. தற்போதைய நிலையான கட்டத்தின் கார்பன் ஏற்றுதல் குறைவாக உள்ளது, ஏனெனில் தற்போதைய SP தயாரிப்பில், ஸ்டைரீனுடன் கூடுதலாக, ஃபீனைல்மலேமைடு-மெத்தில்வினைலிசோசயனேட் (PCMP) மற்றும் 4-ஹைட்ராக்ஸி-TEMPO போன்ற சில துருவ லிகண்டுகள் பயன்படுத்தப்பட்டன. தற்போதைய நிலையான கட்டத்தின் நைட்ரஜன் எடை சதவீதம் 2.21% ஆகும், இது முந்தைய ஆய்வுகளில் நைட்ரஜனின் எடையில் முறையே 0.1735 மற்றும் 0.85% உடன் ஒப்பிடும்போது. இதன் பொருள் ஃபீனைல்மலேமைடு காரணமாக தற்போதைய நிலையான கட்டத்தில் நைட்ரஜனின் wt % அதிகமாக உள்ளது. இதேபோல், (4) மற்றும் (5) தயாரிப்புகளின் கார்பன் ஏற்றுதல் 2.7% மற்றும் முறையே 2.9%, இறுதி உற்பத்திப் பொருளின் கார்பன் ஏற்றுதல் (6) 6.35% ஆக இருந்தது, அட்டவணை 2 இல் காட்டப்பட்டுள்ளது. எடை இழப்பு PMP நிலையான கட்டத்துடன் சரிபார்க்கப்பட்டது, மேலும் TGA வளைவு படம் 4 இல் காட்டப்பட்டுள்ளது. TGA வளைவு 8.6% எடை இழப்பைக் காட்டுகிறது, இது கார்பன் ஏற்றுதலுடன் (6.35%) நல்ல உடன்பாட்டில் உள்ளது, ஏனெனில் லிகண்ட்களில் C மட்டுமல்ல, N, O மற்றும் H ஆகியவையும் உள்ளன.
சிலிக்கா துகள்களின் மேற்பரப்பு மாற்றத்திற்காக ஃபீனைல்மேலிமைடு-மெத்தில்வினைலிசோசயனேட் லிகண்ட் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டது, ஏனெனில் இது துருவ ஃபீனைல்மேலிமைடு குழுக்கள் மற்றும் வினைலிசோசயனேட் குழுக்களைக் கொண்டுள்ளது. வினைல் ஐசோசயனேட் குழுக்கள் ஸ்டைரீனுடன் மேலும் வினைபுரிந்து உயிருள்ள ரேடிக்கல் பாலிமரைசேஷன் மூலம் வினைபுரியலாம். இரண்டாவது காரணம், அனலைட்டுடன் மிதமான தொடர்பு கொண்ட ஒரு குழுவைச் செருகுவதாகும், அனலைட்டுக்கும் நிலையான கட்டத்திற்கும் இடையில் வலுவான மின்னியல் தொடர்பு இல்லை, ஏனெனில் ஃபீனைல்மேலிமைடு பகுதிக்கு சாதாரண pH இல் மெய்நிகர் கட்டணம் இல்லை. நிலையான கட்டத்தின் துருவமுனைப்பை ஸ்டைரீனின் உகந்த அளவு மற்றும் ஃப்ரீ ரேடிக்கல் பாலிமரைசேஷனின் எதிர்வினை நேரம் மூலம் கட்டுப்படுத்தலாம். வினையின் கடைசி படி (ஃப்ரீ-ரேடிக்கல் பாலிமரைசேஷன்) முக்கியமானது மற்றும் நிலையான கட்டத்தின் துருவமுனைப்பை மாற்ற முடியும். இந்த நிலையான கட்டங்களின் கார்பன் ஏற்றுதலை சரிபார்க்க அடிப்படை பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டது. ஸ்டைரீனின் அளவையும் எதிர்வினை நேரத்தையும் அதிகரிப்பது நிலையான கட்டத்தின் கார்பன் ஏற்றுதலை அதிகரித்தது மற்றும் நேர்மாறாகவும் இருந்தது. ஸ்டைரீனின் வெவ்வேறு செறிவுகளுடன் தயாரிக்கப்பட்ட SPகள் வெவ்வேறு கார்பன் ஏற்றுதல்களைக் கொண்டுள்ளன. மீண்டும், இந்த நிலையான கட்டங்களை துருப்பிடிக்காத எஃகு நெடுவரிசைகளில் ஏற்றவும். மற்றும் அவற்றின் குரோமடோகிராஃபிக் செயல்திறனை (தேர்வுத்திறன், தெளிவுத்திறன், N மதிப்பு, முதலியன) சரிபார்க்கவும். இந்த சோதனைகளின் அடிப்படையில், கட்டுப்படுத்தப்பட்ட துருவமுனைப்பு மற்றும் நல்ல பகுப்பாய்வு தக்கவைப்பை உறுதி செய்வதற்காக PMP நிலையான கட்டத்தைத் தயாரிக்க ஒரு உகந்த சூத்திரம் தேர்ந்தெடுக்கப்பட்டது.
ஐந்து பெப்டைடு கலவைகள் (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) ஒரு மொபைல் கட்டத்தைப் பயன்படுத்தி PMP நெடுவரிசையைப் பயன்படுத்தி மதிப்பீடு செய்யப்பட்டன; 80 μL/நிமிட ஓட்ட விகிதத்தில் 60/40 (v/v) அசிட்டோனிட்ரைல்/நீர் (0.1% TFA). உகந்த கரைப்பு நிலைமைகளின் கீழ், ஒரு நெடுவரிசைக்கு (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) கோட்பாட்டு தட்டு எண் (N) 20,000 ± 100 (200,000 தட்டுகள்/மீ²) ஆகும். அட்டவணை 3 மூன்று PMP நெடுவரிசைகளுக்கான N மதிப்புகளைக் கொடுக்கிறது மற்றும் குரோமடோகிராம்கள் படம் 5A இல் காட்டப்பட்டுள்ளன. அதிக ஓட்ட விகிதத்தில் (700 μL/நிமிடம்) ஒரு PMP நெடுவரிசையில் விரைவான பகுப்பாய்வு, ஒரு நிமிடத்திற்குள் ஐந்து பெப்டைடுகள் நீக்கப்பட்டன, N மதிப்புகள் மிகவும் நன்றாக இருந்தன, ஒரு நெடுவரிசைக்கு 13,500 ± 330 (100 × 1.8 மிமீ ஐடி), 135,000 தட்டுகள்/மீட்டருக்கு ஒத்திருக்கிறது (படம் 5B). ஒரே மாதிரியான மூன்று நெடுவரிசைகள் (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) மூன்று வெவ்வேறு தொகுதி PMP நிலையான கட்டத்துடன் நிரம்பியிருந்தன. மறுஉருவாக்கத்தை சரிபார்க்கவும். ஒவ்வொரு நெடுவரிசையிலும் ஒரே சோதனை கலவையை பிரிக்க உகந்த கரைப்பு நிலைமைகள் மற்றும் கோட்பாட்டு தட்டுகளின் எண்ணிக்கை N மற்றும் தக்கவைப்பு நேரத்தைப் பயன்படுத்தி ஒவ்வொரு நெடுவரிசைக்கும் பகுப்பாய்வு செறிவு பதிவு செய்யப்பட்டது. PMP நெடுவரிசைகளுக்கான மறுஉருவாக்க தரவு அட்டவணை 4 இல் காட்டப்பட்டுள்ளது. PMP நெடுவரிசையின் மறுஉருவாக்க திறன் அட்டவணை 3 இல் காட்டப்பட்டுள்ளபடி மிகக் குறைந்த %RSD மதிப்புகளுடன் நன்கு தொடர்புடையது.
PMP நெடுவரிசை (B) மற்றும் Ascentis Express RP-Amide நெடுவரிசை (A) ஆகியவற்றில் பெப்டைட் கலவையைப் பிரித்தல்; மொபைல் கட்டம் 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP நெடுவரிசை பரிமாணங்கள் (100 × 1.8 மிமீ ஐடி); பகுப்பாய்வு சேர்மங்களின் நீக்குதல் வரிசை: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) மற்றும் 5 (லியூசின்) அமிலம் என்கெஃபாலின்)).
உயர் செயல்திறன் கொண்ட திரவ குரோமடோகிராஃபியில் மனித சீரம் அல்புமினின் டிரிப்டிக் செரிமானங்களைப் பிரிப்பதற்காக ஒரு PMP நெடுவரிசை (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) மதிப்பீடு செய்யப்பட்டது. படம் 6 இல் உள்ள குரோமடோகிராம் மாதிரி நன்கு பிரிக்கப்பட்டுள்ளது மற்றும் தெளிவுத்திறன் மிகவும் நன்றாக உள்ளது என்பதைக் காட்டுகிறது. HSA செரிமானங்கள் 100 µL/நிமிட ஓட்ட விகிதம், மொபைல் கட்டம் 70/30 அசிட்டோனிட்ரைல்/நீர் மற்றும் 0.1% TFA ஆகியவற்றைப் பயன்படுத்தி பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்டன. குரோமடோகிராமில் காட்டப்பட்டுள்ளபடி (படம் 6), HSA செரிமானம் 17 பெப்டைடுகளுடன் தொடர்புடைய 17 சிகரங்களாகப் பிரிக்கப்பட்டுள்ளது. HSA செரிமானத்தில் உள்ள ஒவ்வொரு சிகரத்தின் பிரிப்பு திறன் கணக்கிடப்பட்டு மதிப்புகள் அட்டவணை 5 இல் கொடுக்கப்பட்டுள்ளன.
ஒரு PMP நெடுவரிசையில் HSA (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) இன் டிரிப்டிக் டைஜஸ்ட் பிரிக்கப்பட்டது; ஓட்ட விகிதம் (100 µL/நிமிடம்), மொபைல் கட்டம் 60/40 அசிட்டோனிட்ரைல்/நீர் 0.1% TFA உடன்.
இங்கு L என்பது நெடுவரிசை நீளம், η என்பது நகரும் கட்டத்தின் பாகுத்தன்மை, ΔP என்பது நெடுவரிசை பின் அழுத்தம், மற்றும் u என்பது நகரும் கட்டத்தின் நேரியல் வேகம். PMP நெடுவரிசையின் ஊடுருவல் 2.5 × 10-14 மீ2, ஓட்ட விகிதம் 25 μL/நிமிடம், மற்றும் 60/40 v/v ACN/நீர் பயன்படுத்தப்பட்டது. PMP நெடுவரிசையின் ஊடுருவல் (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) எங்கள் முந்தைய ஆய்வைப் போன்றது Ref.34. மேலோட்டமாக நுண்துளை துகள்களால் நிரம்பிய நெடுவரிசையின் ஊடுருவல்: 1.3 μm துகள்களுக்கு 1.7 × 10-15, 1.7 μm துகள்களுக்கு 3.1 × 10-15, 2.6 μm துகள்களுக்கு 5.2 × 10-15 மற்றும் 2.5 × 10-14 மீ2 5 μm துகள்களுக்கு 43. எனவே, PMP கட்டத்தின் ஊடுருவல் 5 μm ஐப் போன்றது. மைய-ஓட்டு துகள்கள்.
இங்கு Wx என்பது குளோரோஃபார்ம் நிரம்பிய நெடுவரிசையின் எடை, Wy என்பது மெத்தனால் நிரம்பிய நெடுவரிசையின் எடை, மற்றும் ρ என்பது கரைப்பானின் அடர்த்தி. மெத்தனால் (ρ = 0.7866) மற்றும் குளோரோஃபார்ம் (ρ = 1.484) ஆகியவற்றின் அடர்த்தி. முன்னர் நாம் ஆய்வு செய்த SILICA PARTICLES-C18 நெடுவரிசைகள் (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) 34 மற்றும் C18-யூரியா நெடுவரிசைகள் 31 ஆகியவற்றின் மொத்த போரோசிட்டி முறையே 0.63 மற்றும் 0.55 ஆகும். இதன் பொருள் யூரியா லிகண்டுகளின் இருப்பு நிலையான கட்டத்தின் ஊடுருவலைக் குறைக்கிறது. மறுபுறம், PMP நெடுவரிசையின் மொத்த போரோசிட்டி (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) 0.60 ஆகும். PMP நெடுவரிசைகளின் ஊடுருவல் C18-பிணைக்கப்பட்ட சிலிக்கா துகள்களால் நிரம்பிய நெடுவரிசைகளை விட குறைவாக உள்ளது, ஏனெனில் C18-வகை நிலையான கட்டங்களில் C18 லிகண்டுகள் சிலிக்கா துகள்களுடன் நேரியல் சங்கிலிகளாக இணைக்கப்படுகின்றன, அதே நேரத்தில் பாலிஸ்டிரீன் வகை நிலையான கட்டங்களில், அதைச் சுற்றி ஒப்பீட்டளவில் தடிமனான பாலிமர் அடுக்கு உருவாகிறது. ஒரு பொதுவான பரிசோதனையில், நெடுவரிசை போரோசிட்டி இவ்வாறு கணக்கிடப்படுகிறது:
படம் 7A,B, வான் டீம்டர் வரைபடத்தின் அதே கரைப்பு நிலைமைகளைப் (அதாவது, 60/40 ACN/H2O மற்றும் 0.1% TFA) பயன்படுத்தி PMP நெடுவரிசை (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) மற்றும் அசென்டிஸ் எக்ஸ்பிரஸ் RP-அமைடு நெடுவரிசை (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) ஆகியவற்றைக் காட்டுகிறது. தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட பெப்டைட் கலவைகள் (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) 20 µL/ இல் தயாரிக்கப்பட்டன. இரண்டு நெடுவரிசைகளுக்கும் குறைந்தபட்ச ஓட்ட விகிதம் 800 µL/நிமிடம். PMP நெடுவரிசை மற்றும் Ascentis Express RP-Amide நெடுவரிசைக்கான உகந்த ஓட்ட விகிதத்தில் (80 µL/நிமிடம்) குறைந்தபட்ச HETP மதிப்புகள் முறையே 2.6 µm மற்றும் 3.9 µm ஆகும். HETP மதிப்புகள் PMP நெடுவரிசையின் (100 × 1.8 mm id) பிரிப்பு திறன் வணிக ரீதியாக கிடைக்கக்கூடிய Ascentis Express RP-Amide நெடுவரிசையை (100 × 1.8 mm id) விட மிகச் சிறந்தது என்பதைக் குறிக்கிறது. படம் 7(A) இல் உள்ள வான் டீம்டர் வரைபடமானது, அதிகரிக்கும் ஓட்டத்துடன் N மதிப்பில் ஏற்படும் குறைவு நமது முந்தைய ஆய்வுடன் ஒப்பிடும்போது குறிப்பிடத்தக்கதாக இல்லை என்பதைக் காட்டுகிறது. அதிக பிரிப்பு திறன் அசென்டிஸ் எக்ஸ்பிரஸ் ஆர்.பி-அமைடு நெடுவரிசையுடன் ஒப்பிடும்போது பி.எம்.பி நெடுவரிசையின் (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) தற்போதைய பணியில் பயன்படுத்தப்படும் துகள் வடிவம், அளவு மற்றும் சிக்கலான நெடுவரிசை பொதி நடைமுறைகளில் மேம்பாடுகளை அடிப்படையாகக் கொண்டது34.
(A) 0.1% TFA உடன் 60/40 ACN/H2O இல் PMP நெடுவரிசை (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) பயன்படுத்தி பெறப்பட்ட வான் டீம்டர் வரைபடத் தொகுப்பு (HETP vs மொபைல் கட்ட நேரியல் வேகம்). (B) 0.1% TFA உடன் 60/40 ACN/H2O இல் Ascentis Express RP-Amide நெடுவரிசை (100 × 1.8 மிமீ ஐடி) பயன்படுத்தி பெறப்பட்ட வான் டீம்டர் வரைபடத் தொகுப்பு (HETP vs மொபைல் கட்ட நேரியல் வேகம்).
உயர் செயல்திறன் கொண்ட திரவ குரோமடோகிராஃபியில் செயற்கை பெப்டைட் கலவைகள் மற்றும் மனித சீரம் அல்புமினின் (HAS) டிரிப்சின் செரிமானங்களைப் பிரிப்பதற்காக ஒரு துருவ-உட்பொதிக்கப்பட்ட பாலிஸ்டிரீன் நிலையான கட்டம் தயாரிக்கப்பட்டு மதிப்பீடு செய்யப்பட்டது. பெப்டைட் கலவைகளுக்கான PMP நெடுவரிசைகளின் குரோமடோகிராஃபிக் செயல்திறன் பிரிப்பு திறன் மற்றும் தெளிவுத்திறனில் சிறந்தது. PMP நெடுவரிசைகளின் மேம்பட்ட பிரிப்பு செயல்திறன் சிலிக்கா துகள்களின் துகள் அளவு மற்றும் துளை அளவு, நிலையான கட்டத்தின் கட்டுப்படுத்தப்பட்ட தொகுப்பு மற்றும் சிக்கலான நெடுவரிசை பேக்கிங் போன்ற பல்வேறு காரணங்களால் ஏற்படுகிறது. அதிக பிரிப்பு செயல்திறனுடன் கூடுதலாக, அதிக ஓட்ட விகிதங்களில் குறைந்த நெடுவரிசை பின்புற அழுத்தம் இந்த நிலையான கட்டத்தின் மற்றொரு நன்மையாகும். PMP நெடுவரிசைகள் நல்ல இனப்பெருக்கத்தை வெளிப்படுத்துகின்றன மற்றும் பெப்டைட் கலவைகளின் பகுப்பாய்வு மற்றும் பல்வேறு புரதங்களின் டிரிப்சின் செரிமானத்திற்கு பயன்படுத்தப்படலாம். திரவ குரோமடோகிராஃபியில் இயற்கை பொருட்கள், மருத்துவ தாவரங்களிலிருந்து உயிரியல் ரீதியாக செயல்படும் சேர்மங்கள் மற்றும் பூஞ்சை சாறுகளைப் பிரிப்பதற்கு இந்த நெடுவரிசையைப் பயன்படுத்த நாங்கள் உத்தேசித்துள்ளோம். எதிர்காலத்தில், புரதங்கள் மற்றும் மோனோக்ளோனல் ஆன்டிபாடிகளைப் பிரிப்பதற்கும் PMP நெடுவரிசைகள் மதிப்பீடு செய்யப்படும்.
ஃபீல்ட், ஜே.கே., யூர்பி, எம்.ஆர்., லாவ், ஜே., தோகர்சன், எச். & பீட்டர்சன், பி. தலைகீழ் கட்ட குரோமடோகிராஃபி மூலம் பெப்டைட் பிரிப்பு அமைப்புகள் பற்றிய ஆராய்ச்சி பகுதி I: ஒரு நெடுவரிசை குணாதிசய நெறிமுறையின் வளர்ச்சி.ஜே. குரோமடோகிராபி.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
கோமஸ், பி. மற்றும் பலர். தொற்று நோய்களுக்கான சிகிச்சைக்காக வடிவமைக்கப்பட்ட மேம்படுத்தப்பட்ட செயலில் உள்ள பெப்டைடுகள். உயிரி தொழில்நுட்பம். மேம்பட்டது.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
வ்லீகே, பி., லிசோவ்ஸ்கி, வி., மார்டினெஸ், ஜே. & க்ரெஸ்ட்சாடிஸ்கி, எம். செயற்கை சிகிச்சை பெப்டைடுகள்: அறிவியல் மற்றும் சந்தை. மருந்து கண்டுபிடிப்பு.15 (1-2) இன்று, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
ஸீ, எஃப்., ஸ்மித், ஆர்.டி & ஷென், ஒய். அட்வான்ஸ்டு புரோட்டியோமிக் லிக்விட் க்ரோமடோகிராபி.ஜே. க்ரோமடோகிராபி.ஏ 1261, 78–90 (2012).
லியு, டபிள்யூ. மற்றும் பலர். மேம்பட்ட திரவ குரோமடோகிராபி-மாஸ் ஸ்பெக்ட்ரோமெட்ரி பரந்த அளவில் இலக்கு வைக்கப்பட்ட வளர்சிதை மாற்றவியல் மற்றும் புரோட்டியோமிக்ஸ் ஆகியவற்றை இணைக்க உதவுகிறது. அனஸ்.சிம்.ஆக்டா 1069, 89–97 (2019).
செஸ்நட், எஸ்எம் & சாலிஸ்பரி, ஜேஜே மருந்து வளர்ச்சியில் UHPLC இன் பங்கு.ஜே. செப். அறிவியல்.30(8), 1183-1190 (2007).
வு, என். & கிளாசென், ஏஎம். விரைவான பிரிப்புகளுக்கான அல்ட்ராஹை பிரஷர் திரவ குரோமடோகிராஃபியின் அடிப்படை மற்றும் நடைமுறை அம்சங்கள்.ஜே. செப். அறிவியல்.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
ரென், எஸ்.ஏ & டெச்செலிட்செஃப், பி. மருந்து வளர்ச்சியில் அதி-உயர் செயல்திறன் திரவ குரோமடோகிராஃபியின் பயன்பாடு. ஜே. குரோமடோகிராபி.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
கு, எச். மற்றும் பலர். என்டோவைரஸ்களை திறம்பட சுத்திகரிப்பதற்காக எண்ணெயில்-நீரில் உள்ள உயர் உள் கட்ட குழம்புகளிலிருந்து தயாரிக்கப்பட்ட மோனோலிதிக் மேக்ரோபோரஸ் ஹைட்ரோஜெல்கள். கெமிக்கல். பிரிட்டன். ஜே. 401, 126051 (2020).
ஷி, ஒய்., சியாங், ஆர்., ஹார்வத், சி. & வில்கின்ஸ், ஜேஏ. புரோட்டியோமிக்ஸில் திரவ நிறமூர்த்தத்தின் பங்கு. ஜே. குரோமடோகிராபி.ஏ 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. சிகிச்சை பெப்டைடுகள் மற்றும் புரதங்களின் தலைகீழ்-கட்ட திரவ குரோமடோகிராஃபி பிரிப்புகளில் வளர்ந்து வரும் போக்குகள்: கோட்பாடு மற்றும் பயன்பாடுகள்.J. Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
கிலார், எம்., ஒலிவோவா, பி., டேலி, ஏஇ & கெப்லர், ஜேசி முதல் மற்றும் இரண்டாவது பிரிப்பு பரிமாணங்களில் வெவ்வேறு pH மதிப்புகளைப் பயன்படுத்தி RP-RP-HPLC அமைப்பைப் பயன்படுத்தி பெப்டைட்களின் இரு பரிமாணப் பிரிப்பு.ஜே. செப். அறிவியல்.28(14), 1694-1703 (2005).
ஃபெலெட்டி, எஸ். மற்றும் பலர். C18 துணை-2 μm முழுமையாகவும் மேலோட்டமாகவும் நுண்துளை துகள்களால் நிரம்பிய உயர்-செயல்திறன் குரோமடோகிராஃபிக் நெடுவரிசைகளின் நிறை பரிமாற்ற பண்புகள் மற்றும் இயக்க செயல்திறன் ஆராயப்பட்டது.ஜே. செப். அறிவியல்.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
பியோவேசனா, எஸ். மற்றும் பலர். தாவர உயிரியல் ரீதியாக செயல்படும் பெப்டைடுகளின் தனிமைப்படுத்தல், அடையாளம் காணல் மற்றும் சரிபார்ப்பில் சமீபத்திய போக்குகள் மற்றும் பகுப்பாய்வு சவால்கள்.ஆனஸ்.உயிரியல் ஆசனவாய்.வேதியியல்.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
முல்லர், ஜே.பி. மற்றும் பலர். வாழ்க்கை ராஜ்யத்தின் புரோட்டியோமிக் நிலப்பரப்பு. இயற்கை 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
டெலூகா, சி. மற்றும் பலர். தயாரிப்பு திரவ குரோமடோகிராபி மூலம் சிகிச்சை பெப்டைட்களின் கீழ்நோக்கிய செயலாக்கம். மூலக்கூறு (பாசல், சுவிட்சர்லாந்து) 26(15), 4688(2021).
யாங், ஒய். & ஜெங், எக்ஸ். கலப்பு-முறை நிறமூர்த்தவியல் மற்றும் பயோபாலிமர்களுக்கான அதன் பயன்பாடு. ஜே. நிறமூர்த்தவியல்.ஏ 1218(49), 8813–8825 (2011).
ஜாவோ, ஜி., டோங், எக்ஸ்.-ஒய். & சன், ஒய். கலப்பு-முறை புரத குரோமடோகிராஃபிக்கான லிகாண்ட்ஸ்: கொள்கை, குணாதிசயம் மற்றும் வடிவமைப்பு.ஜே. பயோடெக்னாலஜி.144(1), 3-11 (2009).