Nature.com ಗೆ ಭೇಟಿ ನೀಡಿದ್ದಕ್ಕಾಗಿ ಧನ್ಯವಾದಗಳು. ನೀವು ಬಳಸುತ್ತಿರುವ ಬ್ರೌಸರ್ ಆವೃತ್ತಿಯು CSS ಗೆ ಸೀಮಿತ ಬೆಂಬಲವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಉತ್ತಮ ಅನುಭವಕ್ಕಾಗಿ, ನೀವು ನವೀಕರಿಸಿದ ಬ್ರೌಸರ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಬೇಕೆಂದು ನಾವು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡುತ್ತೇವೆ (ಅಥವಾ ಇಂಟರ್ನೆಟ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ಲೋರರ್‌ನಲ್ಲಿ ಹೊಂದಾಣಿಕೆ ಮೋಡ್ ಅನ್ನು ಆಫ್ ಮಾಡಿ). ಈ ಮಧ್ಯೆ, ನಿರಂತರ ಬೆಂಬಲವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು, ನಾವು ಶೈಲಿಗಳು ಮತ್ತು ಜಾವಾಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟ್ ಇಲ್ಲದೆ ಸೈಟ್ ಅನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತೇವೆ.
ಸೋಲ್-ಜೆಲ್ ವಿಧಾನದ ಮೂಲಕ ಸರಂಧ್ರ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳನ್ನು ಕೆಲವು ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳೊಂದಿಗೆ ತಯಾರಿಸಲಾಯಿತು, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಪೋರಸ್ ಕಣಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಯಿತು. ಈ ಕಣಗಳನ್ನು N-ಫೀನೈಲ್‌ಮಲೈಮೈಡ್-ಮೀಥೈಲ್‌ವಿನೈಲಿಸೋಸೈನೇಟ್ (PMI) ಮತ್ತು ಸ್ಟೈರೀನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ರಿವರ್ಸಿಬಲ್ ಸೇರ್ಪಡೆ ವಿಘಟನೆ ಸರಪಳಿ ವರ್ಗಾವಣೆ (RAFT) ಪಾಲಿಮರೀಕರಣದಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಯಿತು, ಇದು ಪಾಲಿಸ್ಟೈರೀನ್ (PMP) ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತದ N-ಫೀನೈಲ್‌ಮಲೈಮೈಡ್ ಇಂಟರ್ಕಲೇಷನ್ ಅನ್ನು ತಯಾರಿಸುತ್ತದೆ. ಕಿರಿದಾದ-ಬೋರ್ ಸ್ಟೇನ್‌ಲೆಸ್ ಸ್ಟೀಲ್ ಕಾಲಮ್‌ಗಳನ್ನು (100 × 1.8 mm ಐಡಿ) ಸ್ಲರಿ ಪ್ಯಾಕಿಂಗ್ ಮೂಲಕ ಪ್ಯಾಕ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಐದು ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳನ್ನು (ಗ್ಲೈ-ಟೈರ್, ಗ್ಲೈ-ಲ್ಯೂ-ಟೈರ್, ಗ್ಲೈ-ಗ್ಲೈ-ಟೈರ್-ಆರ್ಗ್, ಟೈರ್-ಐಲ್-ಗ್ಲೈ-ಸರ್-ಆರ್ಗ್, ಲ್ಯೂಸಿನ್ ಎನ್‌ಕೆಫಾಲಿನ್) ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಫಿಕ್ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆ) ಮತ್ತು ಮಾನವ ಸೀರಮ್ ಅಲ್ಬುಮಿನ್‌ನ ಟ್ರಿಪ್ಸಿನ್ ಜೀರ್ಣಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಮಿಶ್ರಣದ PMP ಕಾಲಮ್ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆಯನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ (HAS). ಸೂಕ್ತ ಎಲುಷನ್ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ, ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಮಿಶ್ರಣದ ಸೈದ್ಧಾಂತಿಕ ಪ್ಲೇಟ್ ಎಣಿಕೆ 280,000 ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳು/m² ವರೆಗೆ ಇರುತ್ತದೆ. ಬೇರ್ಪಡಿಕೆ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯನ್ನು ಹೋಲಿಸುವುದು. ವಾಣಿಜ್ಯ ಅಸೆಂಟಿಸ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ರೆಸ್ ಆರ್‌ಪಿ-ಅಮೈಡ್ ಕಾಲಮ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸಿದ ಕಾಲಮ್‌ನ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಲ್ಲಿ, ಪಿಎಂಪಿ ಕಾಲಮ್‌ನ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆ ದಕ್ಷತೆ ಮತ್ತು ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ವಿಷಯದಲ್ಲಿ ವಾಣಿಜ್ಯ ಕಾಲಮ್‌ಗಿಂತ ಉತ್ತಮವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಇತ್ತೀಚಿನ ವರ್ಷಗಳಲ್ಲಿ, ಜೈವಿಕ ಔಷಧೀಯ ಉದ್ಯಮವು ಮಾರುಕಟ್ಟೆ ಪಾಲಿನಲ್ಲಿ ಗಣನೀಯ ಹೆಚ್ಚಳದೊಂದಿಗೆ ವಿಸ್ತರಿಸುತ್ತಿರುವ ಜಾಗತಿಕ ಮಾರುಕಟ್ಟೆಯಾಗಿದೆ. ಜೈವಿಕ ಔಷಧೀಯ ಉದ್ಯಮದ ಸ್ಫೋಟಕ ಬೆಳವಣಿಗೆಯೊಂದಿಗೆ1,2,3, ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯು ಹೆಚ್ಚು ಅಪೇಕ್ಷಿತವಾಗಿದೆ. ಗುರಿ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಜೊತೆಗೆ, ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹಲವಾರು ಕಲ್ಮಶಗಳು ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುತ್ತವೆ, ಹೀಗಾಗಿ ಅಪೇಕ್ಷಿತ ಶುದ್ಧತೆಯ ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಫಿಕ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣದ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ. ಒಂದೇ ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಸಂಭಾವ್ಯವಾಗಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಬಹುದಾದ ಜಾತಿಗಳ ಕಾರಣದಿಂದಾಗಿ ದೇಹದ ದ್ರವಗಳು, ಅಂಗಾಂಶಗಳು ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶಗಳಲ್ಲಿನ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಮತ್ತು ಗುಣಲಕ್ಷಣವು ಅತ್ಯಂತ ಸವಾಲಿನ ಕೆಲಸವಾಗಿದೆ. ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನುಕ್ರಮಕ್ಕೆ ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೆಟ್ರಿ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಸಾಧನವಾಗಿದ್ದರೂ, ಅಂತಹ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು ಒಂದೇ ಪಾಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೀಟರ್‌ಗೆ ಚುಚ್ಚಿದರೆ, ಬೇರ್ಪಡಿಕೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿರುವುದಿಲ್ಲ. MS ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗೆ ಮೊದಲು ದ್ರವ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ (LC) ಬೇರ್ಪಡಿಕೆಗಳನ್ನು ಕಾರ್ಯಗತಗೊಳಿಸುವ ಮೂಲಕ ಈ ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು ತಗ್ಗಿಸಬಹುದು, ಇದು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಮಾಸ್ ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಮೀಟರ್‌ಗೆ ಪ್ರವೇಶಿಸುವ ವಿಶ್ಲೇಷಕಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ4,5,6. ಇದರ ಜೊತೆಗೆ, ದ್ರವ ಹಂತದ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ವಿಶ್ಲೇಷಕಗಳನ್ನು ಕಿರಿದಾದ ಪ್ರದೇಶಗಳಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸಬಹುದು, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಈ ವಿಶ್ಲೇಷಕಗಳನ್ನು ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು MS ಪತ್ತೆ ಸೂಕ್ಷ್ಮತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುವುದು. ಕಳೆದ ದಶಕದಲ್ಲಿ ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ (LC) ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಮುಂದುವರೆದಿದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟಿಯೋಮಿಕ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯಲ್ಲಿ ಜನಪ್ರಿಯ ತಂತ್ರವಾಗಿದೆ7,8,9,10.
ಆಕ್ಟಾಡೆಸಿಲ್-ಮಾರ್ಪಡಿಸಿದ ಸಿಲಿಕಾ (ODS) ಅನ್ನು ಸ್ಥಿರ ಹಂತವಾಗಿ ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಮಿಶ್ರಣಗಳ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಮತ್ತು ಬೇರ್ಪಡಿಸುವಿಕೆಗೆ ರಿವರ್ಸ್ಡ್-ಫೇಸ್ ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ (RP-LC) ಅನ್ನು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, RP ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತಗಳು ಅವುಗಳ ಸಂಕೀರ್ಣ ರಚನೆ ಮತ್ತು ಆಂಫಿಫಿಲಿಕ್ ಸ್ವಭಾವದಿಂದಾಗಿ ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ತೃಪ್ತಿದಾಯಕ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯನ್ನು ಒದಗಿಸುವುದಿಲ್ಲ. 14,15. ಆದ್ದರಿಂದ, ಈ ವಿಶ್ಲೇಷಕಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂವಹನ ನಡೆಸಲು ಮತ್ತು ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಧ್ರುವೀಯ ಮತ್ತು ಧ್ರುವೀಯವಲ್ಲದ ಭಾಗಗಳೊಂದಿಗೆ ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲು ವಿಶೇಷವಾಗಿ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾದ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತಗಳು ಅಗತ್ಯವಿದೆ. ಮಲ್ಟಿಮೋಡಲ್ ಸಂವಹನಗಳನ್ನು ಒದಗಿಸುವ ಮಿಶ್ರ-ಮೋಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ, ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳು, ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಸಂಕೀರ್ಣ ಮಿಶ್ರಣಗಳ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಗಾಗಿ RP-LC ಗೆ ಪರ್ಯಾಯವಾಗಿರಬಹುದು. ಹಲವಾರು ಮಿಶ್ರ-ಮೋಡ್ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತಗಳನ್ನು ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಈ ಹಂತಗಳೊಂದಿಗೆ ಪ್ಯಾಕ್ ಮಾಡಲಾದ ಕಾಲಮ್‌ಗಳನ್ನು ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಗಳಿಗೆ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ17,18,19,20,21. ಮಿಶ್ರ-ಮೋಡ್ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತಗಳು (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, ಧ್ರುವ ಇಂಟರ್ಕಲೇಷನ್/RPLC) ಧ್ರುವೀಯ ಮತ್ತು ಧ್ರುವೀಯವಲ್ಲದ ಗುಂಪುಗಳೆರಡರ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಿಂದಾಗಿ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆಗಳಿಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿದೆ22,23,24,25,26,27,28. ಅದೇ ರೀತಿ, ಕೋವೆಲೆಂಟ್ಲಿ ಬಂಧಿತ ಧ್ರುವ ಗುಂಪುಗಳೊಂದಿಗೆ ಧ್ರುವೀಯ ಇಂಟರ್ಕಲೇಟಿಂಗ್ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತಗಳು ಉತ್ತಮ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆ ಶಕ್ತಿ ಮತ್ತು ಧ್ರುವೀಯ ಮತ್ತು ಧ್ರುವೀಯವಲ್ಲದ ವಿಶ್ಲೇಷಕಗಳಿಗೆ ವಿಶಿಷ್ಟ ಆಯ್ಕೆಗಳನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆಯು ವಿಶ್ಲೇಷಕ ಮತ್ತು ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತದ ನಡುವಿನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿರುತ್ತದೆ. ಮಲ್ಟಿಮೋಡಲ್ ಸಂವಹನಗಳು 29, 30, 31, 32. ಇತ್ತೀಚೆಗೆ, ಜಾಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು. 30 ಡೋಡೆಸಿಲ್-ಟರ್ಮಿನೇಟೆಡ್ ಪಾಲಿಮೈನ್ ಸ್ಟೇಷನರಿ ಹಂತವನ್ನು ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಿತು ಮತ್ತು ಹೈಡ್ರೋಕಾರ್ಬನ್‌ಗಳು, ಖಿನ್ನತೆ-ಶಮನಕಾರಿಗಳು, ಫ್ಲೇವನಾಯ್ಡ್‌ಗಳು, ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಸೈಡ್‌ಗಳು, ಈಸ್ಟ್ರೋಜೆನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಹಲವಾರು ಇತರ ವಿಶ್ಲೇಷಕಗಳನ್ನು ಯಶಸ್ವಿಯಾಗಿ ಬೇರ್ಪಡಿಸಿತು. ಧ್ರುವೀಯ ಇಂಟರ್ಕಲೇಟರ್ ಧ್ರುವೀಯ ಮತ್ತು ಧ್ರುವೀಯವಲ್ಲದ ಗುಂಪುಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಆದ್ದರಿಂದ ಇದನ್ನು ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಮತ್ತು ಹೈಡ್ರೋಫಿಲಿಕ್ ಎರಡೂ ಭಾಗಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಬಳಸಬಹುದು. ಧ್ರುವೀಯ-ಎಂಬೆಡೆಡ್ ಕಾಲಮ್‌ಗಳು (ಉದಾ, ಅಮೈಡ್-ಎಂಬೆಡೆಡ್ C18 ಕಾಲಮ್‌ಗಳು) ಅಸೆಂಟಿಸ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ರೆಸ್ RP-ಅಮೈಡ್ ಕಾಲಮ್‌ಗಳು ಎಂಬ ವ್ಯಾಪಾರ ಹೆಸರಿನಲ್ಲಿ ವಾಣಿಜ್ಯಿಕವಾಗಿ ಲಭ್ಯವಿದೆ, ಆದರೆ ಈ ಕಾಲಮ್‌ಗಳನ್ನು ಅಮೈನ್ 33 ರ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗೆ ಮಾತ್ರ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಪ್ರಸ್ತುತ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, HSA ಯ ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಟ್ರಿಪ್ಸಿನ್ ಡೈಜೆಸ್ಟ್‌ಗಳನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸಲು ಧ್ರುವ-ಎಂಬೆಡೆಡ್ ಸ್ಟೇಷನರಿ ಹಂತ (N-ಫೀನೈಲ್‌ಮಲೈಮೈಡ್-ಎಂಬೆಡೆಡ್ ಪಾಲಿಸ್ಟೈರೀನ್) ಅನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಈ ಕೆಳಗಿನ ತಂತ್ರವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತವನ್ನು ತಯಾರಿಸಲಾಯಿತು. ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಪ್ರಕಟಣೆಯಲ್ಲಿ ನೀಡಲಾದ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನದ ಪ್ರಕಾರ ತಯಾರಿ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್‌ಗೆ ಕೆಲವು ಮಾರ್ಪಾಡುಗಳೊಂದಿಗೆ ಪೋರಸ್ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಲಾಯಿತು. ಯೂರಿಯಾ, ಪಾಲಿಥಿಲೀನ್ ಗ್ಲೈಕಾಲ್ (PEG), TMOS, ನೀರಿನ ಅಸಿಟಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಅನುಪಾತವನ್ನು ದೊಡ್ಡ ರಂಧ್ರದ ಗಾತ್ರದೊಂದಿಗೆ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಲು ಸರಿಹೊಂದಿಸಲಾಯಿತು. ಎರಡನೆಯದಾಗಿ, ಹೊಸ ಲಿಗಂಡ್, ಫಿನೈಲ್‌ಮಲೈಮೈಡ್-ಮೀಥೈಲ್ ವಿನೈಲ್ ಐಸೊಸೈನೇಟ್ ಅನ್ನು ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಧ್ರುವ ಎಂಬೆಡೆಡ್ ಸ್ಟೇಷನರಿ ಹಂತವನ್ನು ತಯಾರಿಸಲು ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತವನ್ನು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾದ ಪ್ಯಾಕಿಂಗ್ ಯೋಜನೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸ್ಟೇನ್‌ಲೆಸ್ ಸ್ಟೀಲ್ ಕಾಲಮ್‌ಗೆ (100 × 1.8 mm id) ಪ್ಯಾಕ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಕಾಲಮ್‌ನೊಳಗೆ ಏಕರೂಪದ ಹಾಸಿಗೆ ರೂಪುಗೊಳ್ಳುವುದನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಕಾಲಮ್ ಪ್ಯಾಕಿಂಗ್‌ಗೆ ಯಾಂತ್ರಿಕ ಕಂಪನದೊಂದಿಗೆ ಸಹಾಯ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಐದು ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಮಿಶ್ರಣಗಳ ಪ್ಯಾಕ್ಡ್ ಕಾಲಮ್ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆಯನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಿ; (ಗ್ಲೈ-ಟೈರ್, ಗ್ಲೈ-ಲ್ಯೂ-ಟೈರ್, ಗ್ಲೈ-ಗ್ಲೈ-ಟೈರ್-ಆರ್ಗ್, ಟೈರ್-ಐಲ್-ಗ್ಲೈ-ಸರ್-ಆರ್ಗ್, ಲ್ಯೂಸಿನ್ ಎನ್‌ಕೆಫಾಲಿನ್) ಮತ್ತು ಮಾನವ ಸೀರಮ್ ಅಲ್ಬುಮಿನ್‌ನ ಟ್ರಿಪ್ಸಿನ್ ಡೈಜೆಸ್ಟ್ (HAS). HSA ಯ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಮಿಶ್ರಣ ಮತ್ತು ಟ್ರಿಪ್ಸಿನ್ ಡೈಜೆಸ್ಟ್ ಉತ್ತಮ ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ಮತ್ತು ದಕ್ಷತೆಯೊಂದಿಗೆ ಬೇರ್ಪಡುವುದನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು. PMP ಕಾಲಮ್‌ನ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯನ್ನು ಅಸೆಂಟಿಸ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ರೆಸ್ RP-ಅಮೈಡ್ ಕಾಲಮ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಹೋಲಿಸಲಾಯಿತು. PMP ಕಾಲಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ಎರಡೂ ಚೆನ್ನಾಗಿ ಪರಿಹರಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿವೆ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿವೆ ಎಂದು ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು, ಇದು ಅಸೆಂಟಿಸ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ರೆಸ್ RP-ಅಮೈಡ್ ಕಾಲಮ್‌ಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿದೆ.
PEG (ಪಾಲಿಥಿಲೀನ್ ಗ್ಲೈಕಾಲ್), ಯೂರಿಯಾ, ಅಸಿಟಿಕ್ ಆಮ್ಲ, ಟ್ರೈಮೆಥಾಕ್ಸಿ ಆರ್ಥೋಸಿಲಿಕೇಟ್ (TMOS), ಟ್ರೈಮಿಥೈಲ್ ಕ್ಲೋರೋಸಿಲೇನ್ (TMCS), ಟ್ರಿಪ್ಸಿನ್, ಹ್ಯೂಮನ್ ಸೀರಮ್ ಅಲ್ಬುಮಿನ್ (HSA), ಅಮೋನಿಯಂ ಕ್ಲೋರೈಡ್, ಯೂರಿಯಾ, ಹೆಕ್ಸೇನ್ ಮೀಥೈಲ್ಡಿಸಿಲಾಜೇನ್ (HMDS), ಮೆಥಾಕ್ರಿಲಾಯ್ಲ್ ಕ್ಲೋರೈಡ್ (MC), ಸ್ಟೈರೀನ್, 4-ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸಿ-ಟೆಂಪೋ, ಬೆಂಜಾಯ್ಲ್ ಪೆರಾಕ್ಸೈಡ್ (BPO), HPLC ಗ್ರೇಡ್ ಅಸಿಟೋನಿಟ್ರೈಲ್ (ACN), ಮೆಥನಾಲ್, 2-ಪ್ರೊಪನಾಲ್ ಮತ್ತು ಅಸಿಟೋನ್ ಅನ್ನು ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್ (ಸೇಂಟ್ ಲೂಯಿಸ್, MO, USA) ನಿಂದ ಖರೀದಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಯೂರಿಯಾ (8 ಗ್ರಾಂ), ಪಾಲಿಥಿಲೀನ್ ಗ್ಲೈಕಾಲ್ (8 ಗ್ರಾಂ), ಮತ್ತು 0.01 N ನ 8 ಮಿಲಿ ಅಸಿಟಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಬೆರೆಸಿ, ನಂತರ 24 ಮಿಲಿ TMOS ಅನ್ನು ಐಸ್-ಶೀತ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು. ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು 40°C ನಲ್ಲಿ 6 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಮತ್ತು ನಂತರ 120°C ನಲ್ಲಿ 8 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಸ್ಟೇನ್‌ಲೆಸ್ ಸ್ಟೀಲ್ ಆಟೋಕ್ಲೇವ್‌ನಲ್ಲಿ ಬಿಸಿ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ನೀರನ್ನು ಸುರಿಯಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಉಳಿದ ವಸ್ತುವನ್ನು 70°C ನಲ್ಲಿ 12 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಒಣಗಿಸಲಾಯಿತು. ಒಣಗಿದ ಮೃದುವಾದ ದ್ರವ್ಯರಾಶಿಯನ್ನು ಒಲೆಯಲ್ಲಿ ಮೃದುವಾಗಿ ಪುಡಿಮಾಡಿ 550°C ನಲ್ಲಿ 12 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಕ್ಯಾಲ್ಸಿನ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಕಣಗಳ ಗಾತ್ರ, ರಂಧ್ರದ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ಮೇಲ್ಮೈ ವಿಸ್ತೀರ್ಣದಲ್ಲಿ ಪುನರುತ್ಪಾದನಾ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲು ಮೂರು ಬ್ಯಾಚ್‌ಗಳನ್ನು ತಯಾರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ನಿರೂಪಿಸಲಾಯಿತು.
ಪೂರ್ವ-ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ ಲಿಗಂಡ್ ಫಿನೈಲ್‌ಮಲೈಮೈಡ್-ಮೀಥೈಲ್ವಿನೈಲಿಸೋಸೈನೇಟ್ (PCMP) ನೊಂದಿಗೆ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳ ಮೇಲ್ಮೈ ಮಾರ್ಪಾಡು ಮತ್ತು ಸ್ಟೈರೀನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ರೇಡಿಯಲ್ ಪಾಲಿಮರೀಕರಣದ ಮೂಲಕ, ಧ್ರುವೀಯ ಗುಂಪು-ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಸಂಯುಕ್ತವನ್ನು ತಯಾರಿಸಲಾಯಿತು. ಸಮುಚ್ಚಯಗಳು ಮತ್ತು ಪಾಲಿಸ್ಟೈರೀನ್ ಸರಪಳಿಗಳಿಗೆ ಸ್ಥಿರ ಹಂತ. ತಯಾರಿ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಕೆಳಗೆ ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ.
ಎನ್-ಫೀನೈಲ್‌ಮಲೈಮೈಡ್ (200 ಮಿಗ್ರಾಂ) ಮತ್ತು ಮೀಥೈಲ್ ವಿನೈಲ್ ಐಸೊಸೈನೇಟ್ (100 ಮಿಗ್ರಾಂ) ಅನ್ನು ಒಣ ಟೊಲ್ಯೂನ್‌ನಲ್ಲಿ ಕರಗಿಸಿ, 0.1 ಮಿಲಿ 2,2′-ಅಜೋಯಿಸೊಬ್ಯುಟಿರೊನಿಟ್ರೈಲ್ (AIBN) ಅನ್ನು ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಫ್ಲಾಸ್ಕ್‌ಗೆ ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಫಿನೈಲ್‌ಮಲೈಮೈಡ್-ಮೀಥೈಲ್ ವಿನೈಲ್ ಐಸೊಸೈನೇಟ್ ಕೋಪಾಲಿಮರ್ (PMCP) ಅನ್ನು ತಯಾರಿಸಲಾಯಿತು. ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು 60°C ನಲ್ಲಿ 3 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಬಿಸಿ ಮಾಡಿ, ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಿ 40°C ನಲ್ಲಿ 3 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಒಲೆಯಲ್ಲಿ ಒಣಗಿಸಲಾಯಿತು.
ಒಣಗಿದ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳನ್ನು (2 ಗ್ರಾಂ) ಒಣ ಟೊಲುಯೀನ್ (100 ಮಿಲಿ) ನಲ್ಲಿ ಹರಡಿ, 500 ಮಿಲಿ ಸುತ್ತಿನ ತಳದ ಫ್ಲಾಸ್ಕ್‌ನಲ್ಲಿ 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಬೆರೆಸಿ ಸೋನಿಕೇಟ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಪಿಎಂಸಿಪಿ (10 ಮಿಗ್ರಾಂ) ಅನ್ನು ಟೊಲುಯೀನ್‌ನಲ್ಲಿ ಕರಗಿಸಿ, ಡ್ರಾಪಿಂಗ್ ಫನಲ್ ಮೂಲಕ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ ಫ್ಲಾಸ್ಕ್‌ಗೆ ಡ್ರಾಪ್‌ವೈಸ್ ಆಗಿ ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು. ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು 100°C ನಲ್ಲಿ 8 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ರಿಫ್ಲಕ್ಸ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು, ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಿ ಅಸಿಟೋನ್‌ನಿಂದ ತೊಳೆದು 60°C ನಲ್ಲಿ 3 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಒಣಗಿಸಲಾಯಿತು. ನಂತರ, ಪಿಎಂಸಿಪಿ-ಬಂಧಿತ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳನ್ನು (100 ಗ್ರಾಂ) ಟೊಲುಯೀನ್ (200 ಮಿಲಿ) ನಲ್ಲಿ ಕರಗಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 100 µL ಡೈಬ್ಯುಟೈಲ್ಟಿನ್ ಡೈಲಾರೇಟ್ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ವೇಗವರ್ಧಕವಾಗಿ 4-ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸಿ-ಟೆಂಪೊ (2 ಮಿಲಿ) ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು. ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು 50°C ನಲ್ಲಿ 8 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಬೆರೆಸಿ, ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಿ 50°C ನಲ್ಲಿ 3 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಒಣಗಿಸಲಾಯಿತು.
ಸ್ಟೈರೀನ್ (1 ಮಿಲಿ), ಬೆಂಜಾಯ್ಲ್ ಪೆರಾಕ್ಸೈಡ್ ಬಿಪಿಒ (0.5 ಮಿಲಿ), ಮತ್ತು ಟೆಂಪೊ-ಪಿಎಂಸಿಪಿ-ಲಗತ್ತಿಸಲಾದ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳನ್ನು (1.5 ಗ್ರಾಂ) ಟೊಲ್ಯೂನ್‌ನಲ್ಲಿ ಹರಡಿ ಸಾರಜನಕದಿಂದ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಯಿತು. ಸ್ಟೈರೀನ್‌ನ ಪಾಲಿಮರೀಕರಣವನ್ನು 100 ° C ನಲ್ಲಿ 12 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ಮೆಥನಾಲ್‌ನಿಂದ ತೊಳೆದು ರಾತ್ರಿಯಿಡೀ 60 ° C ನಲ್ಲಿ ಒಣಗಿಸಲಾಯಿತು. ಒಟ್ಟಾರೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಯೋಜನೆಯನ್ನು ಚಿತ್ರ 1 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ.
10-3 ಟೋರ್‌ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ಉಳಿದ ಒತ್ತಡವನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಮಾದರಿಗಳನ್ನು 1 ಗಂಟೆಯ ಕಾಲ 393 K ನಲ್ಲಿ ಅನಿಲ ತೆಗೆಯಲಾಯಿತು. P/P0 = 0.99 ರ ಸಾಪೇಕ್ಷ ಒತ್ತಡದಲ್ಲಿ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳಲ್ಪಟ್ಟ N2 ಪ್ರಮಾಣವನ್ನು ಒಟ್ಟು ರಂಧ್ರದ ಪರಿಮಾಣವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಬೇರ್ ಮತ್ತು ಲಿಗಂಡ್-ಬಂಧಿತ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳ ರೂಪವಿಜ್ಞಾನವನ್ನು ಸ್ಕ್ಯಾನಿಂಗ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿಯೊಂದಿಗೆ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು (ಹಿಟಾಚಿ ಹೈ ಟೆಕ್ನಾಲಜೀಸ್, ಟೋಕಿಯೊ, ಜಪಾನ್). ಒಣಗಿದ ಮಾದರಿಗಳನ್ನು (ಬೇರ್ ಸಿಲಿಕಾ ಮತ್ತು ಲಿಗಂಡ್-ಬಂಧಿತ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳು) ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವ ಕಾರ್ಬನ್ ಟೇಪ್ ಬಳಸಿ ಅಲ್ಯೂಮಿನಿಯಂ ಕಾಲಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಯಿತು. Q150T ಸ್ಪಟರ್ ಕೋಟರ್ ಬಳಸಿ ಮಾದರಿಗಳ ಮೇಲೆ ಚಿನ್ನವನ್ನು ಲೇಪಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಮಾದರಿಗಳ ಮೇಲೆ 5 nm Au ಪದರವನ್ನು ಠೇವಣಿ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಇದು ಕಡಿಮೆ ವೋಲ್ಟೇಜ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಉತ್ತಮ ಧಾನ್ಯ, ಶೀತ ಸ್ಪಟರಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತದೆ. ಥರ್ಮೋ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ (ವಾಲ್ಥಮ್, MA, USA) ಫ್ಲ್ಯಾಶ್ EA1112 ಎಲಿಮೆಂಟಲ್ ವಿಶ್ಲೇಷಕವನ್ನು ಧಾತುರೂಪದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗಾಗಿ ಬಳಸಲಾಯಿತು. ಮಾಲ್ವರ್ನ್ (ವೋರ್ಸೆಸ್ಟರ್‌ಶೈರ್, UK) ಮಾಸ್ಟರ್‌ಸೈಜರ್ 2000 ಕಣ ಗಾತ್ರದ ವಿಶ್ಲೇಷಕವನ್ನು ಕಣದ ಗಾತ್ರದ ವಿತರಣೆಯನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಬಳಸಲಾಯಿತು. ನೇಕೆಡ್ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳು ಮತ್ತು ಲಿಗಂಡ್-ಬಂಧಿತ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳನ್ನು (ತಲಾ 5 ಮಿಗ್ರಾಂ) 5 ಮಿಲಿ ಐಸೊಪ್ರೊಪನಾಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಹರಡಿ, 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಸೋನಿಕೇಟ್ ಮಾಡಿ, 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಸುಳಿಯಾಗಿಸಿ, ಮಾಸ್ಟರ್‌ಸೈಜರ್‌ನ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಬೆಂಚ್‌ನಲ್ಲಿ ಇರಿಸಲಾಯಿತು. ಥರ್ಮೋಗ್ರಾವಿಮೆಟ್ರಿಕ್ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು 30 ರಿಂದ 800 °C ತಾಪಮಾನದ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ನಿಮಿಷಕ್ಕೆ 5 °C ದರದಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಯಿತು.
ಗಾಜಿನಿಂದ ಕೂಡಿದ ಸ್ಟೇನ್‌ಲೆಸ್ ಸ್ಟೀಲ್ ಕಿರಿದಾದ-ಬೋರ್ ಕಾಲಮ್‌ಗಳನ್ನು (100 × 1.8 ಮಿಮೀ ಐಡಿ) ಸ್ಲರಿ ಪ್ಯಾಕಿಂಗ್ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪ್ಯಾಕ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ, ಉಲ್ಲೇಖದಲ್ಲಿ ಬಳಸಿದ ಅದೇ ವಿಧಾನವನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸಲಾಗಿದೆ. 31. 1 µm ಫ್ರಿಟ್ ಹೊಂದಿರುವ ಔಟ್ಲೆಟ್ ಫಿಟ್ಟಿಂಗ್ ಹೊಂದಿರುವ ಸ್ಟೇನ್ಲೆಸ್ ಸ್ಟೀಲ್ ಕಾಲಮ್ (ಗಾಜಿನ ಗೆರೆ, 100 × 1.8 mm ಐಡಿ) ಅನ್ನು ಸ್ಲರಿ ಪ್ಯಾಕರ್ (ಆಲ್ಟೆಕ್ ಡೀರ್ಫೀಲ್ಡ್, IL, USA) ಗೆ ಸಂಪರ್ಕಿಸಲಾಗಿದೆ. 1.2 mL ಮೆಥನಾಲ್ನಲ್ಲಿ 150 mg ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತವನ್ನು ಅಮಾನತುಗೊಳಿಸುವ ಮೂಲಕ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತದ ಸ್ಲರಿಯನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ ಮತ್ತು ಅದನ್ನು ಶೇಖರಣಾ ಕಾಲಮ್ಗೆ ಕಳುಹಿಸಿ. ಮೆಥನಾಲ್ ಅನ್ನು ಸ್ಲರಿ ದ್ರಾವಕವಾಗಿ ಮತ್ತು ಪ್ರೊಪೆಲಿಂಗ್ ದ್ರಾವಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಯಿತು. 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 100 MP, 15 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 80 MP ಮತ್ತು 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 60 MP ಒತ್ತಡಗಳನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸುವ ಮೂಲಕ ಕಾಲಮ್ ಅನ್ನು ಅನುಕ್ರಮವಾಗಿ ತುಂಬಿಸಿ. ಪ್ಯಾಕಿಂಗ್ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಕಾಲಮ್ನ ಏಕರೂಪದ ಪ್ಯಾಕಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು ಎರಡು GC ಕಾಲಮ್ ಶೇಕರ್ಗಳೊಂದಿಗೆ (ಆಲ್ಟೆಕ್, ಡೀರ್ಫೀಲ್ಡ್, IL, USA) ಯಾಂತ್ರಿಕ ಕಂಪನವನ್ನು ಅನ್ವಯಿಸಲಾಯಿತು. ಸ್ಲರಿ ಪ್ಯಾಕರ್ ಅನ್ನು ಮುಚ್ಚಿ ಮತ್ತು ಕಾಲಮ್ ಒಳಗೆ ಯಾವುದೇ ಹಾನಿಯನ್ನು ತಡೆಗಟ್ಟಲು ಒತ್ತಡವನ್ನು ನಿಧಾನವಾಗಿ ಬಿಡುಗಡೆ ಮಾಡಿ. ಸ್ಲರಿ ಪ್ಯಾಕಿಂಗ್ ಘಟಕದಿಂದ ಕಾಲಮ್ ಅನ್ನು ಸಂಪರ್ಕ ಕಡಿತಗೊಳಿಸಿ ಮತ್ತು ಅದರ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಲು ಇನ್ಲೆಟ್ ಮತ್ತು LC ವ್ಯವಸ್ಥೆಗೆ ಮತ್ತೊಂದು ಫಿಟ್ಟಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಸಂಪರ್ಕಿಸಿ.
50nL ಇಂಜೆಕ್ಷನ್ ಲೂಪ್ ಹೊಂದಿರುವ LC ಪಂಪ್ (10AD ಶಿಮಾಡ್ಜು, ಜಪಾನ್), ಇಂಜೆಕ್ಟರ್ (ವಾಲ್ಕೊ (USA) C14 W.05), ಮೆಂಬರೇನ್ ಡಿಗ್ಯಾಸರ್ (ಶಿಮಾಡ್ಜು DGU-14A), UV-VIS ಕ್ಯಾಪಿಲ್ಲರಿ ವಿಂಡೋವನ್ನು ನಿರ್ಮಿಸಲಾಗಿದೆ. ವಿಶೇಷ µLC ಸಾಧನ ಪತ್ತೆಕಾರಕ (UV-2075) ಮತ್ತು ಗಾಜಿನಿಂದ ಮುಚ್ಚಿದ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಕಾಲಮ್‌ಗಳು. ಹೆಚ್ಚುವರಿ ಕಾಲಮ್ ಬ್ಯಾಂಡ್ ಅಗಲೀಕರಣದ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಬಹಳ ಕಿರಿದಾದ ಮತ್ತು ಚಿಕ್ಕದಾದ ಸಂಪರ್ಕಿಸುವ ಕೊಳವೆಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ. ಪ್ಯಾಕೇಜಿಂಗ್ ನಂತರ, ಕ್ಯಾಪಿಲ್ಲರಿಗಳು (50 μm ಐಡಿ 365 ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಯೂನಿಯನ್ ಕ್ಯಾಪಿಲ್ಲರಿಗಳು (50 μm) ಅನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಯೂನಿಯನ್‌ನ 1/16″ ಔಟ್‌ಲೆಟ್‌ನಲ್ಲಿ ಸ್ಥಾಪಿಸಲಾಗಿದೆ. ಮಲ್ಟಿಕ್ರೋ 2000 ಸಾಫ್ಟ್‌ವೇರ್ ಬಳಸಿ ಡೇಟಾ ಸಂಗ್ರಹಣೆ ಮತ್ತು ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಫಿಕ್ ಸಂಸ್ಕರಣೆಯನ್ನು ಮಾಡಲಾಯಿತು. 254 nm ನಲ್ಲಿ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆಯನ್ನು UV ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಗಾಗಿ ವಿಶ್ಲೇಷಕಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು. ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಫಿಕ್ ಡೇಟಾವನ್ನು OriginPro8 (ನಾರ್ಥಾಂಪ್ಟನ್, MA) ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಿದೆ.
ಮಾನವ ಸೀರಮ್‌ನಿಂದ ಆಲ್ಬಮಿನ್, ಲೈಯೋಫಿಲೈಸ್ಡ್ ಪೌಡರ್, ≥ 96% (ಅಗರೋಸ್ ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್) 3 ಮಿಗ್ರಾಂ ಅನ್ನು ಟ್ರಿಪ್ಸಿನ್ (1.5 ಮಿಗ್ರಾಂ), 4.0 ಎಂ ಯೂರಿಯಾ (1 ಮಿಲಿ), ಮತ್ತು 0.2 ಎಂ ಅಮೋನಿಯಂ ಬೈಕಾರ್ಬನೇಟ್ (1 ಮಿಲಿ) ನೊಂದಿಗೆ ಬೆರೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ದ್ರಾವಣವನ್ನು 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಬೆರೆಸಿ 37 ° C ನಲ್ಲಿ 6 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ನೀರಿನ ಸ್ನಾನದಲ್ಲಿ ಇಡಲಾಗುತ್ತದೆ, ನಂತರ 0.1% TFA ನ 1 ಮಿಲಿಯೊಂದಿಗೆ ತಣಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಿ ಮತ್ತು 4 ° C ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿ.
ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಮಿಶ್ರಣಗಳು ಮತ್ತು HSA ಟ್ರಿಪ್ಸಿನ್ ಡೈಜೆಸ್ಟ್‌ಗಳ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯನ್ನು PMP ಕಾಲಮ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಯಿತು. PMP ಕಾಲಮ್‌ನಿಂದ HSA ಯ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಮಿಶ್ರಣ ಮತ್ತು ಟ್ರಿಪ್ಸಿನ್ ಡೈಜೆಸ್ಟ್‌ನ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಿ ಮತ್ತು ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಅಸೆಂಟಿಸ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ರೆಸ್ RP-ಅಮೈಡ್ ಕಾಲಮ್‌ಗೆ ಹೋಲಿಕೆ ಮಾಡಿ. ಸೈದ್ಧಾಂತಿಕ ಪ್ಲೇಟ್ ಸಂಖ್ಯೆಯನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನಂತೆ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ:
ಚಿತ್ರ 2 ರಲ್ಲಿ ಬರಿಯ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳು ಮತ್ತು ಲಿಗಂಡ್-ಬಂಧಿತ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳ SEM ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಚಿತ್ರ 2 ರಲ್ಲಿ. ಬರಿಯ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳ (A, B) SEM ಚಿತ್ರಗಳು, ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳಿಗೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿ, ಈ ಕಣಗಳು ಗೋಳಾಕಾರದಲ್ಲಿರುತ್ತವೆ, ಇದರಲ್ಲಿ ಕಣಗಳು ಉದ್ದವಾಗಿರುತ್ತವೆ ಅಥವಾ ಅನಿಯಮಿತ ಸಮ್ಮಿತಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ. ಲಿಗಂಡ್-ಬಂಧಿತ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳ (C, D) ಮೇಲ್ಮೈ ಬರಿಯ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳಿಗಿಂತ ಮೃದುವಾಗಿರುತ್ತದೆ, ಇದು ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳ ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ ಪಾಲಿಸ್ಟೈರೀನ್ ಸರಪಳಿಗಳ ಲೇಪನದಿಂದಾಗಿರಬಹುದು.
ಬರಿಯ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳು (A, B) ಮತ್ತು ಲಿಗಂಡ್-ಬಂಧಿತ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳ (C, D) ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ಸೂಕ್ಷ್ಮದರ್ಶಕದ ಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ಸ್ಕ್ಯಾನ್ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತಿದೆ.
ಚಿತ್ರ 3(A) ರಲ್ಲಿ ಬೇರ್ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳು ಮತ್ತು ಲಿಗಂಡ್-ಬಂಧಿತ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳ ಕಣ ಗಾತ್ರದ ವಿತರಣೆಗಳನ್ನು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಪರಿಮಾಣ-ಆಧಾರಿತ ಕಣ ಗಾತ್ರದ ವಿತರಣಾ ವಕ್ರಾಕೃತಿಗಳು ರಾಸಾಯನಿಕ ಮಾರ್ಪಾಡಿನ ನಂತರ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳ ಗಾತ್ರ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ (ಚಿತ್ರ 3A). ಪ್ರಸ್ತುತ ಅಧ್ಯಯನ ಮತ್ತು ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನದಿಂದ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳ ಕಣ ಗಾತ್ರದ ವಿತರಣಾ ಡೇಟಾವನ್ನು ಕೋಷ್ಟಕ 1(A) ರಲ್ಲಿ ಹೋಲಿಸಲಾಗಿದೆ. PMP ಯ ಪರಿಮಾಣ-ಆಧಾರಿತ ಕಣದ ಗಾತ್ರ, d(0.5), 3.36 μm ಆಗಿದೆ, ad(0.5) ಮೌಲ್ಯದೊಂದಿಗೆ ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಕ್ಕೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ 3.05 μm (ಪಾಲಿಸ್ಟೈರೀನ್-ಬೌಂಡ್ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳು)34. ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾ ಮಿಶ್ರಣದಲ್ಲಿ PEG, ಯೂರಿಯಾ, TMOS ಮತ್ತು ಅಸಿಟಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ವಿಭಿನ್ನ ಅನುಪಾತಗಳಿಂದಾಗಿ ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಕ್ಕೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಈ ಬ್ಯಾಚ್ ಕಿರಿದಾದ ಕಣದ ಗಾತ್ರದ ವಿತರಣೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿತ್ತು. PMP ಹಂತದ ಕಣದ ಗಾತ್ರವು ನಾವು ಹಿಂದೆ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಿದ ಪಾಲಿಸ್ಟೈರೀನ್-ಬೌಂಡ್ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣದ ಹಂತಕ್ಕಿಂತ ಸ್ವಲ್ಪ ದೊಡ್ಡದಾಗಿದೆ. ಇದರರ್ಥ ಸ್ಟೈರೀನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳ ಮೇಲ್ಮೈ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಣೆಯು ಸಿಲಿಕಾ ಮೇಲ್ಮೈಯಲ್ಲಿ ಪಾಲಿಸ್ಟೈರೀನ್ ಪದರವನ್ನು (0.97 µm) ಮಾತ್ರ ಠೇವಣಿ ಮಾಡಿದೆ, ಆದರೆ PMP ಹಂತದಲ್ಲಿ ಪದರದ ದಪ್ಪ 1.38 µm ಆಗಿತ್ತು.
ಬೇರ್ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳು ಮತ್ತು ಲಿಗಂಡ್-ಬೌಂಡ್ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳ ಕಣ ಗಾತ್ರ ವಿತರಣೆ (A) ಮತ್ತು ರಂಧ್ರ ಗಾತ್ರ ವಿತರಣೆ (B).
ಪ್ರಸ್ತುತ ಅಧ್ಯಯನದ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳ ರಂಧ್ರದ ಗಾತ್ರ, ರಂಧ್ರದ ಪ್ರಮಾಣ ಮತ್ತು ಮೇಲ್ಮೈ ವಿಸ್ತೀರ್ಣವನ್ನು ಕೋಷ್ಟಕ 1(B) ನಲ್ಲಿ ನೀಡಲಾಗಿದೆ. ಬೇರ್ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳು ಮತ್ತು ಲಿಗಂಡ್-ಬಂಧಿತ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳ PSD ಪ್ರೊಫೈಲ್‌ಗಳನ್ನು ಚಿತ್ರ 3(B) ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಕ್ಕೆ ಹೋಲಿಸಬಹುದು. ಬೇರ್ ಮತ್ತು ಲಿಗಂಡ್-ಬೌಂಡ್ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳ ರಂಧ್ರದ ಗಾತ್ರಗಳು ಕ್ರಮವಾಗಿ 310 ಮತ್ತು 241 ಆಗಿವೆ, ಇದು ಕೋಷ್ಟಕ 1(B) ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ ರಾಸಾಯನಿಕ ಮಾರ್ಪಾಡಿನ ನಂತರ ರಂಧ್ರದ ಗಾತ್ರವು 69 ರಷ್ಟು ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ವಕ್ರರೇಖೆಯ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ಚಿತ್ರ 3(B) ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಅದೇ ರೀತಿ, ರಾಸಾಯನಿಕ ಮಾರ್ಪಾಡಿನ ನಂತರ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳ ರಂಧ್ರದ ಪ್ರಮಾಣವು 0.67 ರಿಂದ 0.58 cm3/g ಗೆ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ. ಪ್ರಸ್ತುತ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲಾದ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಮೇಲ್ಮೈ ವಿಸ್ತೀರ್ಣ 116 m2/g ಆಗಿದೆ, ಇದು ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಕ್ಕೆ (124 m2/g) ಹೋಲಿಸಬಹುದು. ಕೋಷ್ಟಕ 1(B) ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ, ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳ ಮೇಲ್ಮೈ ವಿಸ್ತೀರ್ಣ (m2/g) ಸಹ 116 m2/g ನಿಂದ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ ರಾಸಾಯನಿಕ ಮಾರ್ಪಾಡಿನ ನಂತರ 105 ಮೀ2/ಗ್ರಾಂ.
ಸ್ಥಿರ ಹಂತದ ಧಾತುರೂಪದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಕೋಷ್ಟಕ 2 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಪ್ರಸ್ತುತ ಸ್ಥಿರ ಹಂತದ ಇಂಗಾಲದ ಲೋಡಿಂಗ್ 6.35% ಆಗಿದೆ, ಇದು ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನದ ಇಂಗಾಲದ ಲೋಡಿಂಗ್ ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ (ಪಾಲಿಸ್ಟೈರೀನ್ ಬಂಧಿತ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳು, ಕ್ರಮವಾಗಿ 7.93%35 ಮತ್ತು 10.21%) 42. ಪ್ರಸ್ತುತ ಸ್ಥಿರ ಹಂತದ ಇಂಗಾಲದ ಲೋಡಿಂಗ್ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಪ್ರಸ್ತುತ SP ತಯಾರಿಕೆಯಲ್ಲಿ, ಸ್ಟೈರೀನ್ ಜೊತೆಗೆ, ಫಿನೈಲ್‌ಮಲೈಮೈಡ್-ಮೀಥೈಲ್ವಿನೈಲಿಸೋಸೈನೇಟ್ (PCMP) ಮತ್ತು 4-ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸಿ-TEMPO ನಂತಹ ಕೆಲವು ಧ್ರುವೀಯ ಲಿಗಂಡ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತಿತ್ತು. ಪ್ರಸ್ತುತ ಸ್ಥಿರ ಹಂತದ ಸಾರಜನಕ ತೂಕದ ಶೇಕಡಾವಾರು 2.21% ಆಗಿದೆ, ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳಲ್ಲಿ ಸಾರಜನಕದ ತೂಕದಿಂದ ಕ್ರಮವಾಗಿ 0.1735 ಮತ್ತು 0.85% ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ. ಇದರರ್ಥ ಫಿನೈಲ್‌ಮಲೈಮೈಡ್‌ನಿಂದಾಗಿ ಪ್ರಸ್ತುತ ಸ್ಥಿರ ಹಂತದಲ್ಲಿ ಸಾರಜನಕದ wt % ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ. ಅದೇ ರೀತಿ, ಉತ್ಪನ್ನಗಳ (4) ಮತ್ತು (5) ಇಂಗಾಲದ ಲೋಡಿಂಗ್‌ಗಳು 2.7% ಮತ್ತು ಕ್ರಮವಾಗಿ 2.9%, ಆದರೆ ಅಂತಿಮ ಉತ್ಪನ್ನದ (6) ಇಂಗಾಲದ ಲೋಡಿಂಗ್ 6.35% ಆಗಿತ್ತು, ಇದನ್ನು ಕೋಷ್ಟಕ 2 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ. ತೂಕ ನಷ್ಟವನ್ನು PMP ಸ್ಥಿರ ಹಂತದೊಂದಿಗೆ ಪರಿಶೀಲಿಸಲಾಗಿದೆ, ಮತ್ತು TGA ವಕ್ರರೇಖೆಯನ್ನು ಚಿತ್ರ 4 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. TGA ವಕ್ರರೇಖೆಯು 8.6% ನಷ್ಟು ತೂಕ ನಷ್ಟವನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಕಾರ್ಬನ್ ಲೋಡಿಂಗ್ (6.35%) ನೊಂದಿಗೆ ಉತ್ತಮ ಒಪ್ಪಂದದಲ್ಲಿದೆ ಏಕೆಂದರೆ ಲಿಗಂಡ್‌ಗಳು C ಮಾತ್ರವಲ್ಲದೆ N, O ಮತ್ತು H ಅನ್ನು ಸಹ ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತವೆ.
ಫಿನೈಲ್‌ಮಲೈಮೈಡ್-ಮೀಥೈಲ್‌ವಿನೈಲಿಸೋಸೈನೇಟ್ ಲಿಗಂಡ್ ಅನ್ನು ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳ ಮೇಲ್ಮೈ ಮಾರ್ಪಾಡಿಗೆ ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಏಕೆಂದರೆ ಅದು ಧ್ರುವೀಯ ಫಿನೈಲ್‌ಮಲೈಮೈಡ್ ಗುಂಪುಗಳು ಮತ್ತು ವಿನೈಲಿಸೋಸೈನೇಟ್ ಗುಂಪುಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ವಿನೈಲ್ ಐಸೋಸೈನೇಟ್ ಗುಂಪುಗಳು ಜೀವಂತ ರಾಡಿಕಲ್ ಪಾಲಿಮರೀಕರಣದ ಮೂಲಕ ಸ್ಟೈರೀನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಮತ್ತಷ್ಟು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸಬಹುದು. ಎರಡನೆಯ ಕಾರಣವೆಂದರೆ, ವಿಶ್ಲೇಷಕದೊಂದಿಗೆ ಮಧ್ಯಮ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಮತ್ತು ವಿಶ್ಲೇಷಕ ಮತ್ತು ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತದ ನಡುವೆ ಬಲವಾದ ಸ್ಥಾಯೀವಿದ್ಯುತ್ತಿನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರದ ಗುಂಪನ್ನು ಸೇರಿಸುವುದು, ಏಕೆಂದರೆ ಫಿನೈಲ್‌ಮಲೈಮೈಡ್ ಭಾಗವು ಸಾಮಾನ್ಯ pH ನಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ವರ್ಚುವಲ್ ಚಾರ್ಜ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದಿಲ್ಲ. ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತದ ಧ್ರುವೀಯತೆಯನ್ನು ಸ್ಟೈರೀನ್‌ನ ಸೂಕ್ತ ಪ್ರಮಾಣ ಮತ್ತು ಮುಕ್ತ ರಾಡಿಕಲ್ ಪಾಲಿಮರೀಕರಣದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾ ಸಮಯದಿಂದ ನಿಯಂತ್ರಿಸಬಹುದು. ಕ್ರಿಯೆಯ ಕೊನೆಯ ಹಂತ (ಸ್ವತಂತ್ರ-ರಾಡಿಕಲ್ ಪಾಲಿಮರೀಕರಣ) ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತದ ಧ್ರುವೀಯತೆಯನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಬಹುದು. ಈ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತಗಳ ಇಂಗಾಲದ ಲೋಡಿಂಗ್ ಅನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಲು ಧಾತುರೂಪದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಸ್ಟೈರೀನ್ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾ ಸಮಯವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುವುದರಿಂದ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತದ ಇಂಗಾಲದ ಲೋಡಿಂಗ್ ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಯಾಗಿ. ಸ್ಟೈರೀನ್‌ನ ವಿಭಿನ್ನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳೊಂದಿಗೆ ತಯಾರಿಸಲಾದ SPಗಳು ವಿಭಿನ್ನ ಇಂಗಾಲದ ಲೋಡಿಂಗ್‌ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ. ಮತ್ತೆ, ಈ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತಗಳನ್ನು ಸ್ಟೇನ್‌ಲೆಸ್ ಸ್ಟೀಲ್ ಕಾಲಮ್‌ಗಳಿಗೆ ಲೋಡ್ ಮಾಡಿ. ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಫಿಕ್ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಿ (ಆಯ್ಕೆ, ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್, N ಮೌಲ್ಯ, ಇತ್ಯಾದಿ). ಈ ಪ್ರಯೋಗಗಳ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ, ನಿಯಂತ್ರಿತ ಧ್ರುವೀಯತೆ ಮತ್ತು ಉತ್ತಮ ವಿಶ್ಲೇಷಕ ಧಾರಣವನ್ನು ಖಚಿತಪಡಿಸಿಕೊಳ್ಳಲು PMP ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತವನ್ನು ತಯಾರಿಸಲು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾದ ಸೂತ್ರೀಕರಣವನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.
ಐದು ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಮಿಶ್ರಣಗಳನ್ನು (ಗ್ಲೈ-ಟೈರ್, ಗ್ಲೈ-ಲ್ಯೂ-ಟೈರ್, ಗ್ಲೈ-ಗ್ಲೈ-ಟೈರ್-ಆರ್ಗ್, ಟೈರ್-ಐಲ್-ಗ್ಲೈ-ಸರ್-ಆರ್ಗ್, ಲ್ಯೂಸಿನ್ ಎನ್ಕೆಫಾಲಿನ್) ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪಿಎಂಪಿ ಕಾಲಮ್ ಬಳಸಿ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಯಿತು; 80 μL/ನಿಮಿಷದ ಹರಿವಿನ ದರದಲ್ಲಿ 60/40 (v/v) ಅಸಿಟೋನಿಟ್ರೈಲ್/ನೀರು (0.1% TFA). ಸೂಕ್ತ ಎಲ್ಯುಷನ್ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ, ಪ್ರತಿ ಕಾಲಮ್‌ಗೆ ಸೈದ್ಧಾಂತಿಕ ಪ್ಲೇಟ್ ಸಂಖ್ಯೆ (N) (100 × 1.8 mm id) 20,000 ± 100 (200,000 ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳು/m²) ಆಗಿದೆ. ಕೋಷ್ಟಕ 3 ಮೂರು PMP ಕಾಲಮ್‌ಗಳಿಗೆ N ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್‌ಗಳನ್ನು ಚಿತ್ರ 5A ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಹೆಚ್ಚಿನ ಹರಿವಿನ ದರದಲ್ಲಿ (700 μL/ನಿಮಿಷ) PMP ಕಾಲಮ್‌ನಲ್ಲಿ ವೇಗದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ, ಒಂದು ನಿಮಿಷದೊಳಗೆ ಐದು ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಯಿತು, N ಮೌಲ್ಯಗಳು ತುಂಬಾ ಉತ್ತಮವಾಗಿದ್ದವು, ಪ್ರತಿ ಕಾಲಮ್‌ಗೆ 13,500 ± 330 (100 × 1.8 mm id), 135,000 ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳು/ಮೀ ಗೆ ಅನುರೂಪವಾಗಿದೆ (ಚಿತ್ರ 5B). ಮೂರು ಒಂದೇ ಗಾತ್ರದ ಕಾಲಮ್‌ಗಳನ್ನು (100 × 1.8 mm id) ಮೂರು ವಿಭಿನ್ನ ಲಾಟ್‌ಗಳ PMP ಸ್ಟೇಷನರಿ ಹಂತದೊಂದಿಗೆ ಪ್ಯಾಕ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ಪುನರುತ್ಪಾದನಾ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಪರಿಶೀಲಿಸಿ. ಪ್ರತಿ ಕಾಲಮ್‌ಗೆ ವಿಶ್ಲೇಷಣಾ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ಸೂಕ್ತ ಎಲ್ಯುಷನ್ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು ಮತ್ತು ಸೈದ್ಧಾಂತಿಕ ಪ್ಲೇಟ್‌ಗಳ ಸಂಖ್ಯೆ N ಮತ್ತು ಪ್ರತಿ ಕಾಲಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಒಂದೇ ಪರೀಕ್ಷಾ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸಲು ಧಾರಣ ಸಮಯವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ದಾಖಲಿಸಲಾಗಿದೆ. PMP ಕಾಲಮ್‌ಗಳ ಪುನರುತ್ಪಾದನಾ ಡೇಟಾವನ್ನು ಕೋಷ್ಟಕ 4 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. PMP ಕಾಲಮ್‌ನ ಪುನರುತ್ಪಾದನಾ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವು ಕೋಷ್ಟಕ 3 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ ಬಹಳ ಕಡಿಮೆ %RSD ಮೌಲ್ಯಗಳೊಂದಿಗೆ ಚೆನ್ನಾಗಿ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿದೆ.
PMP ಕಾಲಮ್ (B) ಮತ್ತು Ascentis Express RP-Amide ಕಾಲಮ್ (A) ನಲ್ಲಿ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸುವುದು; ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತ 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP ಕಾಲಮ್ ಆಯಾಮಗಳು (100 × 1.8 mm id); ವಿಶ್ಲೇಷಣಾತ್ಮಕ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಎಲ್ಯುಷನ್ ಕ್ರಮ: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) ಮತ್ತು 5 (ಲ್ಯೂಸಿನ್) ಆಮ್ಲ ಎನ್‌ಕೆಫಾಲಿನ್)).
ಹೆಚ್ಚಿನ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯ ದ್ರವ ವರ್ಣರೇಖನದಲ್ಲಿ ಮಾನವ ಸೀರಮ್ ಅಲ್ಬುಮಿನ್‌ನ ಟ್ರಿಪ್ಟಿಕ್ ಡೈಜೆಸ್ಟ್‌ಗಳನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸಲು PMP ಕಾಲಮ್ (100 × 1.8 mm id) ಅನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಚಿತ್ರ 6 ರಲ್ಲಿನ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಬೇರ್ಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್ ತುಂಬಾ ಉತ್ತಮವಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. HSA ಡೈಜೆಸ್ಟ್‌ಗಳನ್ನು 100 µL/ನಿಮಿಷದ ಹರಿವಿನ ಪ್ರಮಾಣ, ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತ 70/30 ಅಸಿಟೋನಿಟ್ರೈಲ್/ನೀರು ಮತ್ತು 0.1% TFA ಬಳಸಿ ವಿಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗಿದೆ. ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಮ್‌ನಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ (ಚಿತ್ರ 6), HSA ಜೀರ್ಣಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು 17 ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ 17 ಶಿಖರಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ. HSA ಡೈಜೆಸ್ಟ್‌ನಲ್ಲಿನ ಪ್ರತಿ ಶಿಖರದ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆ ದಕ್ಷತೆಯನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಕೋಷ್ಟಕ 5 ರಲ್ಲಿ ನೀಡಲಾಗಿದೆ.
PMP ಕಾಲಮ್‌ನಲ್ಲಿ HSA (100 × 1.8 mm id) ನ ಟ್ರಿಪ್ಟಿಕ್ ಡೈಜೆಸ್ಟ್ ಅನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸಲಾಯಿತು; ಹರಿವಿನ ಪ್ರಮಾಣ (100 µL/ನಿಮಿಷ), ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತ 60/40 ಅಸಿಟೋನಿಟ್ರೈಲ್/ನೀರು 0.1% TFA ಯೊಂದಿಗೆ.
ಇಲ್ಲಿ L ಎಂಬುದು ಕಾಲಮ್ ಉದ್ದ, η ಎಂಬುದು ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತದ ಸ್ನಿಗ್ಧತೆ, ΔP ಎಂಬುದು ಕಾಲಮ್ ಹಿಂಭಾಗದ ಒತ್ತಡ, ಮತ್ತು u ಎಂಬುದು ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತದ ರೇಖೀಯ ವೇಗ. PMP ಕಾಲಮ್‌ನ ಪ್ರವೇಶಸಾಧ್ಯತೆಯು 2.5 × 10-14 m2 ಆಗಿತ್ತು, ಹರಿವಿನ ಪ್ರಮಾಣ 25 μL/ನಿಮಿಷವಾಗಿತ್ತು, ಮತ್ತು 60/40 v/v ACN/ನೀರನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು. PMP ಕಾಲಮ್‌ನ ಪ್ರವೇಶಸಾಧ್ಯತೆಯು (100 × 1.8 mm id) ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನದಂತೆಯೇ ಇತ್ತು Ref.34. ಮೇಲ್ನೋಟಕ್ಕೆ ಸರಂಧ್ರ ಕಣಗಳಿಂದ ತುಂಬಿದ ಕಾಲಮ್‌ನ ಪ್ರವೇಶಸಾಧ್ಯತೆಯು: 1.3 μm ಕಣಗಳಿಗೆ 1.7 × 10-15, 1.7 μm ಕಣಗಳಿಗೆ 3.1 × 10-15, 2.6 μm ಕಣಗಳಿಗೆ 5.2 × 10-15 ಮತ್ತು 2.5 × 10-14 m2 5 μm ಕಣಗಳಿಗೆ 43. ಆದ್ದರಿಂದ, PMP ಹಂತದ ಪ್ರವೇಶಸಾಧ್ಯತೆಯು 5 μm ಗೆ ಹೋಲುತ್ತದೆ. ಕೋರ್-ಶೆಲ್ ಕಣಗಳು.
ಇಲ್ಲಿ Wx ಎಂಬುದು ಕ್ಲೋರೋಫಾರ್ಮ್‌ನಿಂದ ಪ್ಯಾಕ್ ಮಾಡಲಾದ ಕಾಲಮ್‌ನ ತೂಕ, Wy ಎಂಬುದು ಮೆಥನಾಲ್‌ನಿಂದ ಪ್ಯಾಕ್ ಮಾಡಲಾದ ಕಾಲಮ್‌ನ ತೂಕ ಮತ್ತು ρ ಎಂಬುದು ದ್ರಾವಕದ ಸಾಂದ್ರತೆಯಾಗಿದೆ. ಮೆಥನಾಲ್ (ρ = 0.7866) ಮತ್ತು ಕ್ಲೋರೋಫಾರ್ಮ್ (ρ = 1.484) ಸಾಂದ್ರತೆಗಳು. ನಾವು ಈ ಹಿಂದೆ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಿದ SILICA PARTICLES-C18 ಕಾಲಮ್‌ಗಳು (100 × 1.8 mm id) 34 ಮತ್ತು C18-ಯೂರಿಯಾ ಕಾಲಮ್‌ಗಳು 31 ರ ಒಟ್ಟು ಸರಂಧ್ರತೆಯು ಕ್ರಮವಾಗಿ 0.63 ಮತ್ತು 0.55 ಆಗಿತ್ತು. ಇದರರ್ಥ ಯೂರಿಯಾ ಲಿಗಂಡ್‌ಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯು ಸ್ಥಿರ ಹಂತದ ಪ್ರವೇಶಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಮತ್ತೊಂದೆಡೆ, PMP ಕಾಲಮ್‌ನ ಒಟ್ಟು ಸರಂಧ್ರತೆಯು (100 × 1.8 mm id) 0.60 ಆಗಿದೆ. PMP ಕಾಲಮ್‌ಗಳ ಪ್ರವೇಶಸಾಧ್ಯತೆಯು C18-ಬಂಧಿತ ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳೊಂದಿಗೆ ಪ್ಯಾಕ್ ಮಾಡಲಾದ ಕಾಲಮ್‌ಗಳಿಗಿಂತ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ ಏಕೆಂದರೆ C18-ಮಾದರಿಯ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ C18 ಲಿಗಂಡ್‌ಗಳು ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳಿಗೆ ರೇಖೀಯ ಸರಪಳಿಗಳಾಗಿ ಜೋಡಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿರುತ್ತವೆ, ಆದರೆ ಪಾಲಿಸ್ಟೈರೀನ್-ಮಾದರಿಯಲ್ಲಿ ಸ್ಥಿರ ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ, ಅದರ ಸುತ್ತಲೂ ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ದಪ್ಪವಾದ ಪಾಲಿಮರ್ ಪದರವು ರೂಪುಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ಒಂದು ವಿಶಿಷ್ಟ ಪ್ರಯೋಗದಲ್ಲಿ, ಕಾಲಮ್ ಸರಂಧ್ರತೆಯನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನಂತೆ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ:
ಚಿತ್ರ 7A,B ವ್ಯಾನ್ ಡೀಮ್ಟರ್ ಪ್ಲಾಟ್‌ನ ಅದೇ ಎಲ್ಯುಷನ್ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು (ಅಂದರೆ, 60/40 ACN/H2O ಮತ್ತು 0.1% TFA) ಬಳಸಿಕೊಂಡು PMP ಕಾಲಮ್ (100 × 1.8 mm id) ಮತ್ತು ಅಸೆಂಟಿಸ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ರೆಸ್ RP-ಅಮೈಡ್ ಕಾಲಮ್ (100 × 1.8 mm id) ಅನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಆಯ್ದ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಮಿಶ್ರಣಗಳನ್ನು (ಗ್ಲೈ-ಟೈರ್, ಗ್ಲೈ-ಲ್ಯೂ-ಟೈರ್, ಗ್ಲೈ-ಗ್ಲೈ-ಟೈರ್-ಆರ್ಗ್, ಟೈರ್-ಐಲ್-ಗ್ಲೈ-ಸರ್-ಆರ್ಗ್, ಲ್ಯೂಸಿನ್ ಎನ್‌ಕೆಫಾಲಿನ್) 20 µL/ ನಲ್ಲಿ ತಯಾರಿಸಲಾಯಿತು. ಎರಡೂ ಕಾಲಮ್‌ಗಳಿಗೆ ಕನಿಷ್ಠ ಹರಿವಿನ ಪ್ರಮಾಣ 800 µL/ನಿಮಿಷ. PMP ಕಾಲಮ್ ಮತ್ತು ಅಸೆಂಟಿಸ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ರೆಸ್ RP-ಅಮೈಡ್ ಕಾಲಮ್‌ಗೆ ಸೂಕ್ತ ಹರಿವಿನ ದರದಲ್ಲಿ (80 µL/ನಿಮಿಷ) ಕನಿಷ್ಠ HETP ಮೌಲ್ಯಗಳು ಕ್ರಮವಾಗಿ 2.6 µm ಮತ್ತು 3.9 µm ಆಗಿದ್ದವು. HETP ಮೌಲ್ಯಗಳು PMP ಕಾಲಮ್‌ನ (100 × 1.8 mm id) ಬೇರ್ಪಡಿಕೆ ದಕ್ಷತೆಯು ವಾಣಿಜ್ಯಿಕವಾಗಿ ಲಭ್ಯವಿರುವ ಅಸೆಂಟಿಸ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ರೆಸ್ RP-ಅಮೈಡ್ ಕಾಲಮ್ (100 × 1.8 mm id) ಗಿಂತ ಉತ್ತಮವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಚಿತ್ರ 7(A) ನಲ್ಲಿನ ವ್ಯಾನ್ ಡೀಮ್ಟರ್ ಪ್ಲಾಟ್ ನಮ್ಮ ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಕ್ಕೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಹೆಚ್ಚುತ್ತಿರುವ ಹರಿವಿನೊಂದಿಗೆ N ಮೌಲ್ಯದಲ್ಲಿನ ಇಳಿಕೆ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿಲ್ಲ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಹೆಚ್ಚಿನ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆ ದಕ್ಷತೆ ಅಸೆಂಟಿಸ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ರೆಸ್ ಆರ್‌ಪಿ-ಅಮೈಡ್ ಕಾಲಮ್‌ಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಪಿಎಂಪಿ ಕಾಲಮ್‌ನ (100 × 1.8 ಎಂಎಂ ಐಡಿ) ಪ್ರಸ್ತುತ ಕೆಲಸದಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾದ ಕಣದ ಆಕಾರ, ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ಸಂಕೀರ್ಣ ಕಾಲಮ್ ಪ್ಯಾಕಿಂಗ್ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನಗಳಲ್ಲಿನ ಸುಧಾರಣೆಗಳನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ34.
(A) 0.1% TFA ಹೊಂದಿರುವ 60/40 ACN/H2O ನಲ್ಲಿ PMP ಕಾಲಮ್ (100 × 1.8 mm id) ಬಳಸಿ ಪಡೆದ ವ್ಯಾನ್ ಡೀಮ್ಟರ್ ಪ್ಲಾಟ್ (HETP vs ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತದ ರೇಖೀಯ ವೇಗ). (B) 0.1% TFA ಹೊಂದಿರುವ 60/40 ACN/H2O ನಲ್ಲಿ ಅಸೆಂಟಿಸ್ ಎಕ್ಸ್‌ಪ್ರೆಸ್ RP-ಅಮೈಡ್ ಕಾಲಮ್ (100 × 1.8 mm id) ಬಳಸಿ ಪಡೆದ ವ್ಯಾನ್ ಡೀಮ್ಟರ್ ಪ್ಲಾಟ್ (HETP vs ಮೊಬೈಲ್ ಹಂತದ ರೇಖೀಯ ವೇಗ).
ಹೆಚ್ಚಿನ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯ ದ್ರವ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯಲ್ಲಿ ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಮಿಶ್ರಣಗಳು ಮತ್ತು ಮಾನವ ಸೀರಮ್ ಅಲ್ಬುಮಿನ್ (HAS) ನ ಟ್ರಿಪ್ಸಿನ್ ಡೈಜೆಸ್ಟ್‌ಗಳನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸಲು ಧ್ರುವ-ಎಂಬೆಡೆಡ್ ಪಾಲಿಸ್ಟೈರೀನ್ ಸ್ಟೇಷನರಿ ಹಂತವನ್ನು ತಯಾರಿಸಿ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಮಿಶ್ರಣಗಳಿಗೆ PMP ಕಾಲಮ್‌ಗಳ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಫಿಕ್ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯು ಬೇರ್ಪಡಿಕೆ ದಕ್ಷತೆ ಮತ್ತು ರೆಸಲ್ಯೂಶನ್‌ನಲ್ಲಿ ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾಗಿದೆ. PMP ಕಾಲಮ್‌ಗಳ ಸುಧಾರಿತ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯು ಸಿಲಿಕಾ ಕಣಗಳ ಕಣ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ರಂಧ್ರದ ಗಾತ್ರ, ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತದ ನಿಯಂತ್ರಿತ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ ಮತ್ತು ಸಂಕೀರ್ಣ ಕಾಲಮ್ ಪ್ಯಾಕಿಂಗ್‌ನಂತಹ ವಿವಿಧ ಕಾರಣಗಳಿಂದಾಗಿ. ಹೆಚ್ಚಿನ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆ ದಕ್ಷತೆಯ ಜೊತೆಗೆ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಹರಿವಿನ ದರಗಳಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆ ಕಾಲಮ್ ಹಿಂಭಾಗದ ಒತ್ತಡವು ಈ ಸ್ಥಾಯಿ ಹಂತದ ಮತ್ತೊಂದು ಪ್ರಯೋಜನವಾಗಿದೆ. PMP ಕಾಲಮ್‌ಗಳು ಉತ್ತಮ ಪುನರುತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಮಿಶ್ರಣಗಳ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆ ಮತ್ತು ವಿವಿಧ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಟ್ರಿಪ್ಸಿನ್ ಜೀರ್ಣಕ್ರಿಯೆಗೆ ಬಳಸಬಹುದು. ನೈಸರ್ಗಿಕ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆ, ಔಷಧೀಯ ಸಸ್ಯಗಳಿಂದ ಜೈವಿಕ ಸಕ್ರಿಯ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು ಮತ್ತು ದ್ರವ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯಲ್ಲಿ ಶಿಲೀಂಧ್ರಗಳ ಸಾರಗಳಿಗಾಗಿ ನಾವು ಈ ಕಾಲಮ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಲು ಉದ್ದೇಶಿಸಿದ್ದೇವೆ. ಭವಿಷ್ಯದಲ್ಲಿ, ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಮೊನೊಕ್ಲೋನಲ್ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆಗಾಗಿ PMP ಕಾಲಮ್‌ಗಳನ್ನು ಸಹ ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ.
ಫೀಲ್ಡ್, ಜೆಕೆ, ಯುರ್ಬಿ, ಎಮ್ಆರ್, ಲಾ, ಜೆ., ಥೋಗರ್ಸೆನ್, ಹೆಚ್. & ಪೀಟರ್ಸನ್, ಪಿ. ರಿಸರ್ಚ್ ಆನ್ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ಸೆಪರೇಷನ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ಸ್ ಬೈ ರಿವರ್ಸ್ಡ್ ಫೇಸ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಪಾರ್ಟ್ I: ಡೆವಲಪ್ಮೆಂಟ್ ಆಫ್ ಎ ಕಾಲಮ್ ಕ್ಯಾರೆಕ್ಟರೈಸೇಶನ್ ಪ್ರೋಟೋಕಾಲ್. ಜೆ. ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
ಗೊಮೆಜ್, ಬಿ. ಮತ್ತು ಇತರರು. ಸಾಂಕ್ರಾಮಿಕ ರೋಗಗಳ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಾಗಿ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾದ ಸುಧಾರಿತ ಸಕ್ರಿಯ ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳು. ಬಯೋಟೆಕ್ನಾಲಜಿ. ಅಡ್ವಾನ್ಸ್ಡ್.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
ವ್ಲೀಘೆ, ಪಿ., ಲಿಸೊವ್ಸ್ಕಿ, ವಿ., ಮಾರ್ಟಿನೆಜ್, ಜೆ. & ಕ್ರೆಸ್ಟ್‌ಚಾಟಿಸ್ಕಿ, ಎಂ. ಸಿಂಥೆಟಿಕ್ ಥೆರಪ್ಯೂಟಿಕ್ ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳು: ವಿಜ್ಞಾನ ಮತ್ತು ಮಾರುಕಟ್ಟೆ. ಔಷಧ ಆವಿಷ್ಕಾರ.15 (1-2) ಇಂದು, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
ಕ್ಸಿ, ಎಫ್., ಸ್ಮಿತ್, ಆರ್‌ಡಿ & ಶೆನ್, ವೈ. ಅಡ್ವಾನ್ಸ್ಡ್ ಪ್ರೋಟಿಯೋಮಿಕ್ ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ.ಜೆ. ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ.ಎ 1261, 78–90 (2012).
ಲಿಯು, ಡಬ್ಲ್ಯೂ. ಮತ್ತು ಇತರರು. ಸುಧಾರಿತ ದ್ರವ ವರ್ಣತಂತುಶಾಸ್ತ್ರ-ದ್ರವ್ಯರಾಶಿ ವರ್ಣತಂತು ಮಾಪನವು ವಿಶಾಲ ಗುರಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಚಯಾಪಚಯ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟಿಯೋಮಿಕ್ಸ್‌ನ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ.ಅನಸ್.ಚಿಮ್.ಆಕ್ಟಾ 1069, 89–97 (2019).
ಚೆಸ್ನಟ್, ಎಸ್‌ಎಂ & ಸ್ಯಾಲಿಸ್‌ಬರಿ, ಜೆಜೆ ಔಷಧ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯಲ್ಲಿ ಯುಹೆಚ್‌ಪಿಎಲ್‌ಸಿಯ ಪಾತ್ರ.ಜೆ. ಸೆಪ್ಟೆಂಬರ್ ಸೈ.30(8), 1183-1190 (2007).
ವು, ಎನ್. & ಕ್ಲಾಸೆನ್, ಎಎಮ್ ಕ್ಷಿಪ್ರ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆಗಳಿಗಾಗಿ ಅಲ್ಟ್ರಾಹೈ ಪ್ರೆಶರ್ ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯ ಮೂಲಭೂತ ಮತ್ತು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಅಂಶಗಳು.ಜೆ. ಸೆಪ್ಟೆಂಬರ್. ಸೈ.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
ರೆನ್, ಎಸ್ಎ & ಟ್ಚೆಲಿಟ್ಚೆಫ್, ಪಿ. ಔಷಧ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯಲ್ಲಿ ಅಲ್ಟ್ರಾ-ಹೈ ಪರ್ಫಾರ್ಮೆನ್ಸ್ ಲಿಕ್ವಿಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯ ಅನ್ವಯ. ಜೆ. ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
ಗು, ಹೆಚ್. ಮತ್ತು ಇತರರು. ಎಂಟರೊವೈರಸ್‌ಗಳ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಶುದ್ಧೀಕರಣಕ್ಕಾಗಿ ಎಣ್ಣೆ-ನೀರಿನಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಆಂತರಿಕ ಹಂತದ ಎಮಲ್ಷನ್‌ಗಳಿಂದ ತಯಾರಿಸಿದ ಏಕಶಿಲೆಯ ಮ್ಯಾಕ್ರೋಪೋರಸ್ ಹೈಡ್ರೋಜೆಲ್‌ಗಳು. ಕೆಮಿಕಲ್. ಬ್ರಿಟನ್. ಜೆ. 401, 126051 (2020).
ಶಿ, ವೈ., ಕ್ಸಿಯಾಂಗ್, ಆರ್., ಹೋರ್ವಾತ್, ಸಿ. & ವಿಲ್ಕಿನ್ಸ್, ಜೆಎ ಪ್ರೋಟಿಯೋಮಿಕ್ಸ್‌ನಲ್ಲಿ ದ್ರವ ವರ್ಣರೇಖನದ ಪಾತ್ರ. ಜೆ. ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ. ಎ 1053(1-2), 27-36 (2004).
ಫೆಕೆಟೆ, ಎಸ್., ವೀಥೆ, ಜೆ.-ಎಲ್. & ಗಿಲ್ಲಾರ್ಮೆ, ಡಿ. ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಹಿಮ್ಮುಖ-ಹಂತದ ದ್ರವ ವರ್ಣರೇಖನ ಬೇರ್ಪಡಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ ಉದಯೋನ್ಮುಖ ಪ್ರವೃತ್ತಿಗಳು: ಸಿದ್ಧಾಂತ ಮತ್ತು ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳು. ಜೆ. ಫಾರ್ಮಸಿ. ಬಯೋಮೆಡಿಕಲ್ ಸೈನ್ಸ್. ಅನಸ್.69, 9-27 (2012).
ಗಿಲಾರ್, ಎಂ., ಒಲಿವೋವಾ, ಪಿ., ಡೇಲಿ, ಎಇ & ಗೆಬ್ಲರ್, ಜೆಸಿ ಮೊದಲ ಮತ್ತು ಎರಡನೆಯ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯ ಆಯಾಮಗಳಲ್ಲಿ ವಿಭಿನ್ನ pH ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು RP-RP-HPLC ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳ ಎರಡು ಆಯಾಮದ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆ.ಜೆ. ಸೆಪ್ಟೆಂಬರ್. ಸೈ.28(14), 1694-1703 (2005).
ಫೆಲೆಟ್ಟಿ, ಎಸ್. ಮತ್ತು ಇತರರು. C18 ಸಬ್-2 μm ಸಂಪೂರ್ಣ ಮತ್ತು ಮೇಲ್ನೋಟಕ್ಕೆ ರಂಧ್ರವಿರುವ ಕಣಗಳಿಂದ ತುಂಬಿದ ಹೆಚ್ಚಿನ ದಕ್ಷತೆಯ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಫಿಕ್ ಕಾಲಮ್‌ಗಳ ದ್ರವ್ಯರಾಶಿ ವರ್ಗಾವಣೆ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳು ಮತ್ತು ಚಲನಶೀಲ ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯನ್ನು ತನಿಖೆ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಜೆ. ಸೆಪ್ಟೆಂಬರ್. ವಿಜ್ಞಾನ.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
ಪಿಯೋವೆಸಾನಾ, ಎಸ್. ಮತ್ತು ಇತರರು. ಸಸ್ಯ ಜೈವಿಕ ಸಕ್ರಿಯ ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆ, ಗುರುತಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ಮೌಲ್ಯೀಕರಣದಲ್ಲಿನ ಇತ್ತೀಚಿನ ಪ್ರವೃತ್ತಿಗಳು ಮತ್ತು ವಿಶ್ಲೇಷಣಾತ್ಮಕ ಸವಾಲುಗಳು. ಗುದನಾಳ. ಜೈವಿಕ ಗುದನಾಳ. ರಾಸಾಯನಿಕ.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
ಮುಲ್ಲರ್, ಜೆಬಿ ಮತ್ತು ಇತರರು. ಜೀವನದ ಸಾಮ್ರಾಜ್ಯದ ಪ್ರೋಟಿಯೋಮಿಕ್ ಭೂದೃಶ್ಯ. ನೇಚರ್ 582(7813), 592-596. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
ಡೆಲುಕಾ, ಸಿ. ಮತ್ತು ಇತರರು. ಪೂರ್ವಸಿದ್ಧತಾ ದ್ರವ ವರ್ಣರೇಖನದ ಮೂಲಕ ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳ ಡೌನ್‌ಸ್ಟ್ರೀಮ್ ಸಂಸ್ಕರಣೆ. ಮಾಲಿಕ್ಯೂಲ್ (ಬಾಸೆಲ್, ಸ್ವಿಟ್ಜರ್‌ಲ್ಯಾಂಡ್) 26(15), 4688(2021).
ಯಾಂಗ್, ವೈ. & ಗೆಂಗ್, ಎಕ್ಸ್. ಮಿಶ್ರ-ಮೋಡ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಮತ್ತು ಬಯೋಪಾಲಿಮರ್‌ಗಳಿಗೆ ಅದರ ಅನ್ವಯಿಕೆ. ಜೆ. ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ. ಎ 1218(49), 8813–8825 (2011).
ಝಾವೋ, ಜಿ., ಡಾಂಗ್, ಎಕ್ಸ್.-ವೈ. & ಸನ್, ವೈ. ಲಿಗಾಂಡ್ಸ್ ಫಾರ್ ಮಿಶ್ರ-ಮೋಡ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ: ತತ್ವ, ಗುಣಲಕ್ಷಣ ಮತ್ತು ವಿನ್ಯಾಸ.ಜೆ. ಬಯೋಟೆಕ್ನಾಲಜಿ.144(1), 3-11 (2009).