Terima kasih kerana melawati Nature.com.Versi penyemak imbas yang anda gunakan mempunyai sokongan terhad untuk CSS.Untuk pengalaman terbaik, kami mengesyorkan agar anda menggunakan penyemak imbas yang dikemas kini (atau matikan mod keserasian dalam Internet Explorer).Sementara itu, untuk memastikan sokongan berterusan, kami akan memaparkan tapak tanpa gaya dan JavaScript.
Zarah silika berliang disediakan dengan kaedah sol-gel dengan beberapa pengubahsuaian untuk mendapatkan zarah makroporous. Zarah-zarah ini telah diterbitkan melalui pempolimeran pemindahan rantai pemecahan tambahan boleh balik (RAFT) dengan N-fenillemaleimide-metilvinylisosianat (PMI) dan stirena untuk menyediakan N-fenilmaleimide fasa tahan karat polistiborena (interkalasi tiang keluli tahan karat PMP) polistiborena. (100 × 1.8 mm id) telah dibungkus dengan pembungkusan buburan. Menilai pemisahan lajur PMP bagi campuran peptida yang terdiri daripada lima peptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) prestasi album digesti manusia leusin sekromatografik (HAS).Di bawah keadaan elusi yang optimum, kiraan plat teori bagi campuran peptida adalah setinggi 280,000 plat/m². Membandingkan prestasi pemisahan lajur yang dibangunkan dengan lajur Acentis Express RP-Amide komersial, adalah diperhatikan bahawa prestasi pemisahan lajur PMP adalah lebih baik daripada lajur komersil dari segi kecekapan dan leraian pemisahan.
Dalam tahun-tahun kebelakangan ini, industri biofarmaseutikal telah menjadi pasaran global yang semakin berkembang dengan peningkatan yang ketara dalam bahagian pasaran.Dengan pertumbuhan letupan industri biofarmaseutikal1,2,3, analisis peptida dan protein sangat dikehendaki.Selain peptida sasaran, beberapa kekotoran dihasilkan semasa sintesis peptida.Peptida pencirian yang dikehendaki, dengan itu memerlukan pemurnian kromatografi dan pencirian pemurnian. protein dalam cecair badan, tisu dan sel adalah tugas yang sangat mencabar kerana bilangan besar spesies yang berpotensi dapat dikesan dalam satu sampel. Walaupun spektrometri jisim adalah alat yang berkesan untuk penjujukan peptida dan protein, jika sampel tersebut disuntik ke dalam spektrometer jisim dalam satu laluan, pengasingan tidak akan menjadi ideal. Masalah ini boleh dikurangkan dengan melaksanakan separasi cecair MS (LC) yang akan dikurangkan dengan analisis nombor terdahulu. analit yang memasuki spektrometer jisim pada masa tertentu4,5,6.Selain itu, semasa pengasingan fasa cecair, analit boleh difokuskan di kawasan yang sempit, dengan itu menumpukan analit ini dan meningkatkan kepekaan pengesanan MS.Kromatografi cecair (LC) telah maju dengan ketara sepanjang dekad yang lalu dan telah menjadi teknik yang popular dalam analisis proteomik.
Kromatografi cecair fasa terbalik (RP-LC) digunakan secara meluas untuk penulenan dan pengasingan campuran peptida menggunakan silika terubah suai oktadesil (ODS) sebagai fasa pegun11,12,13. Walau bagaimanapun, fasa pegun RP tidak memberikan pemisahan yang memuaskan bagi peptida dan protein kerana struktur kompleks 14,filarida15 yang direka bentuk khas dan kompleksnya. fasa diperlukan untuk menganalisis peptida dan protein dengan bahagian kutub dan bukan kutub untuk berinteraksi dengan dan mengekalkan analit ini16. Kromatografi mod campuran, yang menyediakan interaksi multimodal, boleh menjadi alternatif kepada RP-LC untuk pengasingan peptida, protein dan campuran kompleks lain. Beberapa peptida mod campuran dan fasa pegun ini telah disediakan untuk fasa pegun dan lajur protein ini. pemisahan17,18,19,20,21.Fasa pegun mod bercampur (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, interkalasi kutub/RPLC) sesuai untuk pemisahan peptida dan protein kerana kehadiran kedua-dua kumpulan kutub dan bukan kutub22,23,24,25,26,27,28 pegun berkutub dengan fasa berselang selia,28 kumpulan kutub terikat menunjukkan kuasa pemisahan yang baik dan selektiviti unik untuk analit polar dan bukan kutub, kerana pemisahan bergantung pada interaksi antara analit dan fasa pegun. Interaksi multimodal 29, 30, 31, 32. Baru-baru ini, Zhang et al. 30 menyediakan fasa pegun poliamina ditamatkan dodesil dan berjaya mengasingkan hidrokarbon, antidepresan, flavonoid, nukleosida, estrogen dan beberapa analit lain. Interkalator kutub mempunyai kedua-dua kumpulan polar dan bukan kutub, jadi ia boleh digunakan untuk memisahkan peptida dan protein yang mempunyai kedua-dua gugus C terbenam hidrofobik dan hidrofilik (politan C8 terbenam. lajur) tersedia secara komersial di bawah nama dagangan lajur Ascentis Express RP-Amide, tetapi lajur ini digunakan untuk analisis amina 33 sahaja.
Dalam kajian semasa, fasa pegun tertanam kutub (polistirena tertanam N-phenylmaleimide) telah disediakan dan dinilai untuk pemisahan peptida dan penghadaman trypsin HSA. Fasa pegun disediakan menggunakan strategi berikut. Zarah silika berliang telah disediakan mengikut prosedur yang diberikan dalam penerbitan kami sebelum ini dengan beberapa pengubahsuaian pada protokol penyediaan, PEG , air polycethylene MOS. asid telah dilaraskan untuk menyediakan zarah silika dengan saiz liang yang besar.Kedua, ligan baharu, phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate, telah disintesis dan digunakan untuk terbitan zarah silika untuk menyediakan fasa pegun tertanam polar. Fasa pegun yang terhasil telah dibungkus ke dalam lajur keluli tahan karat (100 × 1.8 mm pembungkusan mekanikal menggunakan pembungkusan mekanikal yang dioptimumkan) pastikan katil homogen terbentuk di dalam lajur. Nilaikan pemisahan lajur padat campuran peptida yang terdiri daripada lima peptida; (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) dan Pencernaan Trypsin bagi albumin serum manusia (HAS). Campuran peptida dan pencernaan trypsin HSA diperhatikan untuk memisahkan dengan resolusi dan kecekapan yang baik bagi lajur Ekspres PMP. Lajur RP-Amide.Kedua-dua peptida dan protein diperhatikan diselesaikan dengan baik dan cekap pada lajur PMP, yang lebih cekap daripada lajur Ascentis Express RP-Amide.
PEG (Polyethylene Glycol), Urea, Acetic Acid, Trimethoxy Orthosilicate (TMOS), Trimethyl Chlorosilane (TMCS), Trypsin, Human Serum Albumin (HSA), Ammonium Chloride, Urea, Hexane Methyldisilazane (HMDS), Methacryloyl Chloride (MC-TEMP), Stydroxy-Byrene HPLC Gred Acetonitrile (ACN), Metanol, 2-Propanol, dan Acetone Dibeli daripada Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).
Campuran urea (8 g), polietilena glikol (8 g), dan 8 mL asid asetik 0.01 N dikacau selama 10 minit, dan kemudian 24 mL TMOS ditambah padanya dalam keadaan sejuk ais. Campuran tindak balas dipanaskan pada 40°C selama 6 jam dan kemudian pada suhu 120°C dan sisa air dituangkan selama 8 jam. telah dikeringkan pada suhu 70°C selama 12 jam.Jisim lembut kering dikisar halus di dalam ketuhar dan dikalsinasi pada suhu 550°C selama 12 jam.Tiga kelompok telah disediakan dan dicirikan untuk memeriksa kebolehulangan dalam saiz zarah, saiz liang dan luas permukaan.
Dengan pengubahsuaian permukaan zarah silika dengan ligan pra-sintesis phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) diikuti dengan pempolimeran jejari dengan stirena, sebatian yang mengandungi kumpulan polar telah disediakan. Fasa pegun untuk agregat dan rantai polistirena. Proses penyediaan diterangkan di bawah.
N-phenylmaleimide (200 mg) dan metil vinil isosianat (100 mg) telah dilarutkan dalam toluena kering, dan 0.1 mL 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) telah ditambah ke dalam kelalang tindak balas untuk menyediakan phenylmaleimide-methyl vinil isocyanate copolymer (PMC, 6 jam) dan campuran dihematkan selama 6 jam. dikeringkan dalam ketuhar pada suhu 40°C selama 3 jam.
Zarah silika kering (2 g) ditaburkan dalam toluena kering (100 mL), dikacau dan disonikasi dalam kelalang dasar bulat 500 mL selama 10 minit.PMCP (10 mg) telah dilarutkan dalam toluena dan ditambah titisan ke dalam kelalang tindak balas melalui corong titisan. Campuran itu direfluks pada 100°C dan ditapis untuk jam yang dikeringkan. 60°C selama 3 jam.Kemudian, zarah silika terikat PMCP (100 g) telah dilarutkan dalam toluena (200 ml) dan 4-hidroksi-TEMPO (2 mL) ditambah dengan kehadiran 100 µL dibutiltin dilaurat sebagai mangkin. Campuran dikacau pada 850°C selama 0 jam pada suhu 50°C dan ditapis selama 0°C.
Stirena (1 mL), benzoil peroksida BPO (0.5 mL), dan zarah silika melekat TEMPO-PMCP (1.5 g) ditaburkan dalam toluena dan dibersihkan dengan nitrogen. Pempolimeran stirena telah dijalankan pada suhu 100°C selama 12 jam. Hasil yang terhasil dicuci dengan metanol dan dikeringkan secara keseluruhan pada 60°C sepanjang malam.
Sampel telah dinyahgas pada 393 K selama 1 jam untuk mendapatkan tekanan baki kurang daripada 10-3 Torr. Jumlah N2 yang terjerap pada tekanan relatif P/P0 = 0.99 digunakan untuk menentukan jumlah isipadu liang. Morfologi zarah silika terikat dan ligan telah diperiksa dengan pengimbasan mikro elektron, Japan silicari D (sampel Tokyo silicari HighD, Japan). dan zarah silika terikat ligan) diletakkan pada lajur aluminium menggunakan pita karbon pelekat.Emas disalut pada sampel menggunakan pelapis sputter Q150T, dan lapisan Au 5 nm didepositkan pada sampel. Ini meningkatkan kecekapan proses menggunakan voltan rendah dan memberikan butiran halus, sputtering sejuk.A Thermo Electron (Waltham EA1.1A) analisis elemen Flashal (Waltham EA1, USA) digunakan untuk analisis elemen Flash. Malvern (Worcestershire, UK) Penganalisis saiz zarah Mastersizer 2000 digunakan untuk mendapatkan taburan saiz zarah. Zarah silika bogel dan zarah silika terikat ligan (5 mg setiap satu) telah diserakkan dalam 5 mL isopropanol, disonikasi selama 10 minit, dipusing selama 5 minit, dan diletakkan di atas bangku optikal permogravimetrik 5 minit dilakukan di atas bangku optik pengukur 5 °C. julat suhu 30 hingga 800 °C.
Lajur lubang sempit keluli tahan karat bergaris kaca berdimensi (100 × 1.8 mm id) telah dibungkus menggunakan kaedah pembungkusan buburan, menggunakan prosedur yang sama yang digunakan dalam Ruj. 31. Lajur keluli tahan karat (dilapisi kaca, 100 × 1.8 mm id) dengan pemasangan alur keluar yang mengandungi frit 1 µm telah disambungkan kepada pembungkus buburan (Alltech Deerfield, IL, Amerika Syarikat). Sediakan buburan fasa pegun dengan menggantung 150 mg fasa pegun dalam 1.2 mL penyimpanan methanol dan metanol yang digunakan. pelarut buburan serta pelarut pendorong.Isi lajur secara berurutan dengan menggunakan tekanan 100 MP selama 10 minit, 80 MP selama 15 minit, dan 60 MP selama 30 minit. Semasa pembungkusan, getaran mekanikal digunakan dengan dua penggoncang lajur GC (Alltech, Deerfield, IL, IL, USA) untuk memastikan pembungkusan pembungkusan secara perlahan-lahan meratakan lajur dan Amerika Syarikat. untuk mengelakkan sebarang kerosakan dalam lajur.Putuskan sambungan lajur daripada unit pembungkus buburan dan sambungkan satu lagi pemasangan ke salur masuk dan ke sistem LC untuk menyemak prestasinya.
Pam LC (10AD Shimadzu, Jepun), penyuntik (Valco (USA) C14 W.05) dengan gelung suntikan 50nL, degasser membran (Shimadzu DGU-14A), tetingkap kapilari UV-VIS telah dibina Pengesan peranti µLC khas (UV-2075) dan tiub sangat sempit dan lajur bergaris kaca yang sangat kecil untuk menyambung kesan tiub dan tiang pendek. meluas.Selepas pembungkusan, kapilari (50 μm id 365 dan kapilari kesatuan pengurangan (50 μm) telah dipasang pada 1/16″ alur keluar kesatuan pengurangan. Pengumpulan data dan pemprosesan kromatografi dilakukan menggunakan perisian Multichro 2000. Pemantauan pada 254 nm Analytes telah diuji untuk analisis data Chromatographic UV Pro. (Northampton, MA).
Albumin daripada serum manusia, serbuk lyophilized, ≥ 96% (elektroforesis gel agarose) 3 mg dicampur dengan tripsin (1.5 mg), 4.0 M urea (1 mL), dan 0.2 M ammonium bikarbonat (1 mL). Larutan itu dikacau selama 10 minit dan disimpan dalam tab mandi air pada suhu 67,1°C pada suhu 37,1°C selama 3 jam. 0.1% TFA. Tapis larutan dan simpan di bawah 4 °C.
Pengasingan campuran peptida dan penghadaman HSA trypsin dinilai secara berasingan pada lajur PMP. Semak pemisahan campuran peptida dan pencernaan trypsin HSA oleh lajur PMP dan bandingkan hasilnya dengan lajur Ascentis Express RP-Amide. Nombor plat teori dikira seperti berikut:
Imej SEM bagi zarah silika kosong dan zarah silika terikat ligan ditunjukkan dalam Rajah. 2 .Imej SEM bagi zarah silika kosong (A, B) menunjukkan bahawa, berbeza dengan kajian terdahulu kami, zarah ini berbentuk sfera di mana zarahnya memanjang atau mempunyai simetri tidak sekata. Permukaan zarah silika terikat ligan (C, D) adalah lebih licin daripada zarah silika kosong, yang mungkin disebabkan oleh salutan polistirena pada permukaan zarah silika.
Mengimbas imej mikroskop elektron bagi zarah silika kosong (A, B) dan zarah silika terikat ligan (C, D).
Taburan saiz zarah bagi zarah silika kosong dan zarah silika terikat ligan ditunjukkan dalam Rajah 3(A). Keluk taburan saiz zarah berasaskan isipadu menunjukkan bahawa saiz zarah silika meningkat selepas pengubahsuaian kimia (Rajah 3A). Data taburan saiz zarah zarah silika daripada kajian semasa dan kajian terdahulu dibandingkan dalam Jadual 1(A.MP.3 saiz zarah). μm, berbanding kajian terdahulu kami dengan nilai ad(0.5) sebanyak 3.05 μm (zarah silika terikat polistirena)34. Kumpulan ini mempunyai taburan saiz zarah yang lebih sempit berbanding kajian terdahulu kami disebabkan oleh nisbah PEG, urea, TMOS dan asid asetik yang berbeza-beza dalam campuran tindak balas. Saiz zarah fasa terikat PMP ini bermakna lebih besar sedikit daripada fasa silika yang dikaji sebelumnya daripada fasa silika yang dikaji. kefungsian permukaan zarah silika dengan stirena hanya memendapkan lapisan polistirena (0.97 µm) pada permukaan silika, manakala dalam fasa PMP ketebalan lapisan ialah 1.38 µm.
Taburan saiz zarah (A) dan taburan saiz liang (B) zarah silika kosong dan zarah silika terikat ligan.
Saiz liang, isipadu liang dan luas permukaan zarah silika kajian semasa diberikan dalam Jadual 1(B). Profil JPA bagi zarah silika kosong dan zarah silika terikat ligan ditunjukkan dalam Rajah 3(B). Hasilnya adalah setanding dengan kajian kami sebelum ini. Saiz liang bagi silika dan zarah yang terdedah dan terikat ligan masing-masing adalah 2410, yang menunjukkan saiz pori dan zarah masing-masing adalah 2410. sebanyak 69 selepas pengubahsuaian kimia, seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 1(B), dan perubahan lengkung ditunjukkan dalam Rajah. 3(B). Begitu juga, isipadu liang zarah silika berkurangan daripada 0.67 kepada 0.58 cm3/g selepas pengubahsuaian kimia. Luas permukaan khusus bagi zarah silika m2/g,2 yang dikaji sebelum ini ialah 116 m2/g).Seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 1(B), luas permukaan (m2/g) zarah silika juga berkurangan daripada 116 m2/g kepada 105 m2/g selepas pengubahsuaian kimia.
Keputusan analisis unsur fasa pegun ditunjukkan dalam Jadual 2. Pemuatan karbon bagi fasa pegun semasa ialah 6.35%, yang lebih rendah daripada pemuatan karbon dalam kajian terdahulu kami (zarah silika terikat polistirena, masing-masing 7.93%35 dan 10.21%) 42. Pemuatan karbon bagi fasa pegun semasa SP adalah rendah, kerana penyediaan beberapa bahan pegun semasa SP adalah rendah, ligan seperti phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) dan 4-hydroxy-TEMPO telah digunakan. Peratusan berat nitrogen bagi fasa pegun semasa ialah 2.21%, berbanding 0.1735 dan 0.85% mengikut berat nitrogen dalam kajian terdahulu, masing-masing. Ini bermakna bahawa % berat fasa karbonnyimilar semasa adalah lebih tinggi disebabkan oleh % berat fasa karboninilar semasa pegun. pemuatan produk (4) dan (5) masing-masing adalah 2.7% dan 2.9%, manakala pemuatan karbon produk akhir (6) ialah 6.35%, seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 2. Kehilangan berat telah disemak dengan fasa pegun PMP, dan keluk TGA ditunjukkan dalam Rajah 4. Keluk TGA menunjukkan penurunan berat badan sebanyak 8.6%, yang menunjukkan penurunan berat sebanyak 8.6%. ligan mengandungi bukan sahaja C tetapi juga N, O, dan H.
Ligan phenylmaleimide-methylvinylisocyanate telah dipilih untuk pengubahsuaian permukaan zarah silika kerana ia mempunyai kumpulan phenylmaleimide polar dan kumpulan vinilisocyanate. Kumpulan vinil isosianat boleh bertindak balas dengan stirena melalui pempolimeran radikal hidup. Sebab kedua adalah untuk memasukkan kumpulan yang mempunyai interaksi sederhana dengan elektrostatik dan interaksi antara fasa elektrostatik dan analitik yang tidak kuat. bahagian phenylmaleimide tidak mempunyai cas maya pada pH normal. Kekutuban fasa pegun boleh dikawal oleh jumlah stirena yang optimum dan masa tindak balas pempolimeran radikal bebas. Langkah terakhir tindak balas (pempolimeran radikal bebas) adalah kritikal dan boleh mengubah kekutuban fasa pegun. Analisis unsur dilakukan untuk memeriksa pemuatan karbon bagi fasa pegun yang semakin meningkat ini. pemuatan fasa pegun dan sebaliknya.SP yang disediakan dengan kepekatan stirena yang berbeza mempunyai beban karbon yang berbeza. Sekali lagi, muatkan fasa pegun ini ke dalam lajur keluli tahan karat dan periksa prestasi kromatografinya (selektiviti, resolusi, nilai N, dsb.). Berdasarkan eksperimen ini, formulasi yang dioptimumkan telah dipilih untuk menyediakan fasa pegun PMP dan memastikan pengekalan semula terkawal yang baik.
Lima campuran peptida (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) juga dinilai menggunakan lajur PMP menggunakan fasa mudah alih; 60/40 (v/v) asetonitril/air (0.1% TFA) pada kadar alir 80 μL/min. Di bawah keadaan elusi optimum, nombor plat teori (N) bagi setiap lajur (100 × 1.8 mm id) ialah 20,000 ± 100 (200,000 plat boleh N/m²). dan kromatogram ditunjukkan dalam Rajah 5a.fast analisis pada lajur PMP pada kadar aliran tinggi (700 μl/min), lima peptida telah dielakkan dalam masa satu minit, nilai N sangat baik, 13,500 ± 330 setiap lajur (100 × 1.8 mm ID) lajur bersaiz identik (100 × 1.8 mm id) telah dibungkus dengan tiga lot fasa pegun PMP yang berbeza untuk memeriksa kebolehulangan. Kepekatan analit bagi setiap lajur direkodkan menggunakan keadaan elusi optimum dan bilangan plat teori N dan masa pengekalan untuk memisahkan campuran ujian yang sama pada setiap lajur. Data kebolehulangan untuk lajur PMP kebolehulangan sangat ditunjukkan dalam lajur PMP4. nilai %RSD rendah, seperti ditunjukkan dalam Jadual 3.
Pengasingan campuran peptida pada lajur PMP (B) dan lajur RP-Amide Ascentis Express (A); fasa mudah alih 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), dimensi lajur PMP (100 × 1.8 mm id); analitik Susunan elusi bagi sebatian: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) dan 5 (leucine) asid enkephalin)).
Lajur PMP (100 × 1.8 mm id) dinilai untuk pengasingan pencernaan tryptic albumin serum manusia dalam kromatografi cecair berprestasi tinggi. Kromatogram dalam Rajah 6 menunjukkan bahawa sampel diasingkan dengan baik dan resolusinya sangat baik. Pencernaan HSA dianalisis menggunakan kadar alir 100 µL/min, mudah alih 100 µL/min. TFA.Seperti yang ditunjukkan dalam kromatogram (Rajah 6), pencernaan HSA telah dibahagikan kepada 17 puncak bersamaan dengan 17 peptida. Kecekapan pemisahan setiap puncak dalam pencernaan HSA telah dikira dan nilainya diberikan dalam Jadual 5.
Pencernaan tryptic HSA (100 × 1.8 mm id) dipisahkan pada lajur PMP; kadar aliran (100 µL/min), fasa mudah alih 60/40 asetonitril/air dengan 0.1% TFA.
di mana L ialah panjang lajur, η ialah kelikatan fasa mudah alih, ΔP ialah tekanan balik lajur, dan u ialah halaju linear fasa mudah alih. Kebolehtelapan lajur PMP ialah 2.5 × 10-14 m2, kadar alir ialah 25 μL/min, dan 60/40 v/v 1.0 kebolehtelapan PMP digunakan. mm id) adalah serupa dengan kajian terdahulu kami Ruj.34. Kebolehtelapan lajur yang dibungkus dengan zarah berliang cetek ialah: 1.7 × 10-15 untuk zarah 1.3 μm, 3.1 × 10-15 untuk zarah 1.7 μm, 5.2 × 10-15 dan 2.5 μs untuk zarah 2.5 μm. zarah μm 43.Oleh itu, kebolehtelapan fasa PMP adalah serupa dengan zarah kulit teras 5 μm.
dengan Wx ialah berat lajur yang dibungkus dengan kloroform, Wy ialah berat lajur yang dibungkus dengan metanol, dan ρ ialah ketumpatan pelarut. Ketumpatan metanol (ρ = 0.7866) dan kloroform (ρ = 1.484).Jumlah keliangan ZARAH SILIKA-C18 ×d) Lajur C18-Urea 31 yang kami kaji sebelum ini masing-masing ialah 0.63 dan 0.55. Ini bermakna kehadiran ligan urea mengurangkan kebolehtelapan fasa pegun. Sebaliknya, jumlah keliangan lajur PMP (100 × 1.8 mm id) ialah 0.60. Kebolehtelapan lajur PMP lebih rendah daripada lajur PMP yang terbungkus 1. zarah silika kerana dalam fasa pegun jenis C18 ligan C18 dilekatkan pada zarah silika sebagai rantai linear, manakala dalam fasa pegun jenis polistirena, lapisan polimer A yang agak tebal terbentuk di sekelilingnya. Dalam eksperimen biasa, keliangan lajur dikira sebagai:
Rajah 7A,B menunjukkan lajur PMP (100 × 1.8 mm id) dan lajur Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 mm id) menggunakan keadaan elusi yang sama (iaitu, 60/40 ACN/H2O dan 0.1% TFA). ) plot van Deemter. Campuran peptida terpilih (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) telah disediakan dalam 20 µL/ Kadar alir minimum bagi kedua-dua lajur ialah 800 µL/min. pada nilai HETP µL/min 0 minimum) lajur dan lajur Ascentis Express RP-Amide masing-masing ialah 2.6 µm dan 3.9 µm. Nilai HETP menunjukkan bahawa kecekapan pemisahan lajur PMP (100 × 1.8 mm id) adalah lebih baik daripada lajur Ascentis Express RP-Amide yang tersedia secara komersial (100 id × 1.8) lajur van (100 id × 1.8). penurunan nilai N dengan peningkatan aliran adalah tidak ketara berbanding kajian kami sebelum ini. Kecekapan pemisahan yang lebih tinggi bagi lajur PMP (100 × 1.8 mm id) berbanding lajur Ascentis Express RP-Amide adalah berdasarkan penambahbaikan dalam bentuk zarah, saiz dan prosedur pembungkusan lajur kompleks yang digunakan dalam kerja semasa34.
(A) plot van Deemter (HETP berbanding halaju linear fasa mudah alih) diperoleh menggunakan lajur PMP (100 × 1.8 mm id) dalam 60/40 ACN/H2O dengan 0.1% TFA.(B) plot van Deemter (HETP berbanding halaju linear fasa bergerak) yang diperoleh menggunakan lajur Ascentis Express RP-Amide/06 × 1. ACN/H2O dengan 0.1% TFA.
Fasa pegun polistirena tertanam kutub telah disediakan dan dinilai untuk pengasingan campuran peptida sintetik dan penghadaman trypsin bagi albumin serum manusia (HAS) dalam kromatografi cecair berprestasi tinggi. Prestasi kromatografi lajur PMP untuk campuran peptida adalah sangat baik dalam kecekapan pemisahan dan resolusi. Prestasi pemisahan yang lebih baik bagi lajur pelbagai jenis dan pore adalah disebabkan oleh sebab saiz zarah PMP dan pore yang lebih baik disebabkan oleh saiz zarah PMP. zarah, sintesis terkawal fasa pegun, dan pembungkusan lajur kompleks.Selain kecekapan pemisahan yang tinggi, tekanan belakang lajur yang rendah pada kadar alir yang tinggi merupakan satu lagi kelebihan fasa pegun ini.Tiang PMP mempamerkan kebolehulangan yang baik dan boleh digunakan untuk analisis campuran peptida dan pencernaan trypsin pelbagai protein.Kami berhasrat untuk menggunakan lajur ini untuk pengasingan sebatian bioaktif dan tumbuhan cecair kulat ubatan daripada bahan semula jadi. kromatografi.Pada masa hadapan, lajur PMP juga akan dinilai untuk pengasingan protein dan antibodi monoklonal.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Penyelidikan tentang Sistem Pemisahan Peptida oleh Kromatografi Fasa Terbalik Bahagian I: Pembangunan Protokol Pencirian Lajur.J. Kromatografi.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Peptida aktif yang dipertingkatkan direka untuk rawatan penyakit berjangkit.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Peptida terapeutik sintetik: sains dan pasaran.penemuan dadah.15 (1-2) hari ini, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Kromatografi Cecair Proteomik Lanjutan.J. Kromatografi.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al.Kromatografi cecair lanjutan-spektrometri jisim membolehkan penggabungan metabolomik dan proteomik yang disasarkan secara meluas.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Peranan UHPLC dalam pembangunan dadah.J. Sep. Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Aspek asas dan praktikal kromatografi cecair tekanan ultratinggi untuk pemisahan pantas.J. Sep. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Aplikasi kromatografi cecair prestasi ultra tinggi dalam pembangunan ubat.J. Kromatografi.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al.Hidrogel makroporous monolitik yang disediakan daripada emulsi fasa dalaman tinggi minyak dalam air untuk penulenan enterovirus yang cekap.Chemical.Britain.J. 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Peranan kromatografi cecair dalam proteomik.J. Kromatografi.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L.& Guillarme, D. Aliran yang muncul dalam pemisahan kromatografi cecair fasa terbalik bagi peptida dan protein terapeutik: teori dan aplikasi.J. Farmasi.Sains Bioperubatan.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Pemisahan dua dimensi peptida menggunakan sistem RP-RP-HPLC menggunakan nilai pH berbeza dalam dimensi pemisahan pertama dan kedua.J. Sep. Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al.Ciri-ciri pemindahan jisim dan prestasi kinetik lajur kromatografi berkecekapan tinggi yang dibungkus dengan zarah berliang C18 sub-2 μm sepenuhnya dan cetek telah disiasat.J. September Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al.Trend terkini dan cabaran analitikal dalam pengasingan, pengenalpastian dan pengesahan peptida bioaktif tumbuhan.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-0218-08-x.
Mueller, JB et al. Landskap proteomik kerajaan kehidupan.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al.Pemprosesan hiliran peptida terapeutik oleh kromatografi cecair persediaan.Molekul (Basel, Switzerland) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Kromatografi mod campuran dan aplikasinya kepada biopolimer.J. Kromatografi.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Ligan untuk kromatografi protein mod campuran: prinsip, pencirian dan reka bentuk.J. Bioteknologi.144(1), 3-11 (2009).