Mauruuru koe mo te toro ki Nature.com.Ko te putanga tirotiro e whakamahia ana e koe he iti te tautoko mo te CSS.Mo te wheako pai, ka tūtohu kia whakamahia e koe he tirotiro kua whakahoutia (whakawetohia ranei te aratau hototahi ki Internet Explorer).
Ko nga matūriki silica porous i whakaritea e te tikanga sol-gel me etahi whakarereketanga ki te tiki matūriki macroporous. I ahu mai enei matūriki ma te whakahuri whakahuri i te whakawhitinga wehenga wehenga (RAFT) polymerization me te N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) me te styrene ki te whakarite i te N-phenylmaleimide wahanga kowiri tira. (100 × 1.8 mm id) i kikihia e te slurry packing.I arotakehia te wehenga o te pou PMP o te ranunga peptide e rima nga peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) (HAS) .I raro i nga tikanga elution tino pai, ko te tatauranga pereti ariā o te ranunga peptide he nui ki te 280,000 pereti / m². Ko te whakataurite i te mahi wehewehenga o te waahanga kua whakawhanakehia me te waahanga hokohoko Ascentis Express RP-Amide, i kitea ko te mahi wehenga o te pou PMP he pai ake i te waahanga hokohoko mo te pai o te wehewehenga me te whakatau.
I nga tau kua pahure ake nei, ko te ahumahi biopharmaceutical kua piki ake te maakete o te ao me te nui o te pikinga o te maakete. o nga pūmua i roto i nga wai o te tinana, nga kopa me nga pūtau he mahi tino wero na te maha o nga momo ka kitea pea i roto i te tauira kotahi. Ko nga tātari ka uru ki roto i te spectrometer papatipu i te waa kua whakaritea4,5,6. I tua atu, i te wa e wehea ana te wahanga wai, ka taea te aro ki nga rohe whaiti, na reira ka aro ki enei tātari me te whakapai ake i te mohiotanga o te kitenga MS.Ko te chromatography wai (LC) kua tino piki ake i roto i nga tau tekau kua pahure ake nei, kua waiho hei tikanga rongonui i roto i te proteomic10,8,8,9,9,9.
Reversed-phase liquid chromatography (RP-LC) Kei te whakamahia whānuitia mo te purenga me te wehewehenga o nga ranunga peptide ma te whakamahi i te octadecyl-modified silica (ODS) hei waahanga tuuturu11,12,13.Heoi, kaore nga waahanga tuuturu RP e whakarato i te wehewehenga pai o nga peptides me nga pūmua e tika ana ki o raatau hanganga taiao 14, philore, philore peptides motuhake me te amphiore. ka hiahiatia nga wahanga ki te wetewete i nga peptides me nga pūmua me nga wahanga polar me te kore-polar ki te taunekeneke me te pupuri i enei tātari16.Ko te chromatography aratau-whakaranu, e whakarato ana i nga taunekeneke multimodal, ka taea te rereke ki te RP-LC mo te wehenga o nga peptides, nga pūmua, me etahi atu ranunga matatini.He maha nga momo chromatography-a-ahua-whakaranu kua oti te whakarite mo enei wahanga o te peptide me nga poupou. whakawehe17,18,19,20,21.Ko nga waahanga-a-waa-a-waa (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC) he pai mo te wehenga peptide me te pūmua na te mea kei te noho nga roopu polar me nga roopu kore-polar22,23,24,25,26,27,28 me te wahanga whakahiatotanga, poitara. Ko nga roopu polar here e whakaatu ana i te mana wehe pai me te whiriwhiringa ahurei mo nga tātari polar me te kore-polar, i te mea ka whakawhirinaki te wehenga ki te tauwhitinga i waenga i te tātari me te wahanga noho. Nga taunekeneke maha 29, 30, 31, 32. I tata nei, Zhang et al. I whakaritea e 30 tetahi waahanga polyamine kua mutu te dodecyl me te wehe pai i te waiwaro, te antidepressants, te flavonoids, te nucleosides, te estrogens, me te maha atu o nga tātaritanga. Ko te intercalator polar he roopu polar me nga roopu kore-polar, na reira ka taea te whakamahi ki te wehe i nga peptides me nga pūmua kei te rua hydrophobic me te hydrophilic moieties. poupou) e wātea ana ki te hokohoko i raro i te ingoa hokohoko nga pou Ascentis Express RP-Amide, engari ka whakamahia enei pou mo te tātaritanga o te amine 33 anake.
I roto i te rangahau o naianei, i whakaritea he waahanga-polar-embedded polystyrene (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) mo te wehewehenga o te peptides me te trypsin digests o HSA.I whakaritea te waahi noho ma te whakamahi i te rautaki e whai ake nei.I whakaritea nga matūriki silica poroporo kia rite ki te tukanga i homai i roto i to maatau whakaputanga o mua me etahi whakarereketanga ki te kawa whakarite, te polycelenetic o te kawa o te wai, te polycethylene a TMOS. i whakatikatikahia te waikawa ki te whakarite matūriki silica me te rahi pore nui.Tuarua, he hononga hou, phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate, i whakahiatotia ka whakamahia ki te whakaputa i nga matūriki silica ki te whakarite i tetahi waahanga noho polar kua whakauruhia. Ko te wahanga tuutuu ka puta ki roto i te pou kowiri tira (100 × 1.8 mm id te whakamahi i te kaupapa whakamohoao id) Me whakarite he moenga rite te hanga i roto i te poupou.Arotakehia te wehenga o te tiihi kapi o nga ranunga peptide e rima nga peptides; (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) me Trypsin digest o te albumin serum tangata (HAS). Ko te ranunga peptide me te trypsin digest o HSA i kitea ki te wehe me te pai o te whakatau me te pai o te mahi o te Express PMP. RP-Amide column.Ko nga peptides me nga pūmua e rua i kitea he pai te whakatau me te pai i runga i te pou PMP, he pai ake i te waahanga Ascentis Express RP-Amide.
PEG (Polyethylene Glycol), Urea, Acetic Acid, Trimethoxy Orthosilicate (TMOS), Trimethyl Chlorosilane (TMCS), Trypsin, Human Serum Albumin (HSA), Ammonium Chloride, Urea, Hexane Methyldisilazane (HMDS), Methacryloyl Chloride (MC-TEMP), Stydroxyl Chloride (MC-TEMP), Stydroxyl-chloride (MC-TEMP) HPLC Grade Acetonitrile (ACN), Methanol, 2-Propanol, me te Acetone I hokona mai i Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).
Ko te ranunga o te Urea (8 g), te polyethylene glycol (8 g), me te 8 mL o te 0.01 N te waikawa acetic i oho mo te 10 meneti, katahi ka tapirihia te 24 mL o te TMOS ki roto i raro i nga tikanga hukapapa. I whakawerahia te ranunga tauhohenga ki te 40°C mo te 6 haora, katahi ka ringihia ki te 120°C te wai mo te 8 haora. i whakamarokehia i te 70 ° C mo nga haora 12. Ko te papatipu ngohe maroke he maeneene i roto i te oumu me te calcined i te 550 ° C mo nga haora 12. E toru nga waahanga i whakaritea me te tohu ki te tirotiro i te reproducibility i te rahi o te matūriki, te rahi o te pore me te waahi mata.
Na te whakarereketanga o te mata o nga matūriki silica me te ligand phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) kua whakahiato-mua i muri mai i te polymerization radial me te styrene, i whakaritea he puhui kei roto i te roopu polar. Wāhanga pūmau mō ngā whakahiato me ngā mekameka polystyrene. Kei te whakaahuahia te tukanga whakareri i raro nei.
Ko te N-phenylmaleimide (200 mg) me te methyl vinyl isocyanate (100 mg) i whakarewahia i roto i te toluene maroke, me te 0.1 mL o te 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) i whakauruhia ki te pounamu urupare ki te whakarite i te phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate copolymer (PMC) i te 3 haora i te 3. whakamaroke i roto i te oumu i te 40°C mo te 3 haora.
Ko nga matūriki silica maroke (2 g) kua marara ki roto i te toluene maroke (100 mL), te whakaoho me te sonicated i roto i te 500 mL porotaka raro ipu mo te 10 min. PMCP (10 mg) i rewa i roto i te toluene me te tāpiri dropwise ki te ipu tauhohenga mā te kōrere maturuturu. I refluxed te ranunga i te 100°C me te wai whakamaroke haora ki te 100°C me te wai whakamaroke. 60°C mo nga haora 3. Na, ka rewa nga matūriki silica here PMCP (100 g) i roto i te toluene (200 ml) me te 4-hydroxy-TEMPO (2 mL) i tapirihia i te aroaro o te 100 µL o te dibutyltin dilaurate hei whakakorikori. I whakaohohia te ranunga i te 50 °C mo nga haora 50 ° C me te 0 ° C.
Styrene (1 mL), benzoyl peroxide BPO (0.5 mL), me te TEMPO-PMCP-attached silica matūriki (1.5 g) i marara ki te toluene ka purea ki te hauota. Ko te polymerization o te styrene i mahia i te 100°C mo nga haora 12. Ko te hua ka horoia ki te methanol me te whakamaroke i te po katoa.
I whakakorehia nga tauira i te 393 K mo te 1 haora kia whiwhi ai i te pehanga toenga iti iho i te 10-3 Torr.Ko te nui o te N2 i uruhia ki te pehanga whanaunga o P / P0 = 0.99 i whakamahia hei whakatau i te tapeke pore volume.I tirotirohia te morphology o nga matūriki silica korekore me te ligand-here ki te tirotiro i te hikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohikohiko. me nga matūriki silica here-hononga) i whakanohoia ki runga i te pou konumohe ma te whakamahi i te riipene waro piri. I whakakikoruatia te koura ki runga i nga tauira ma te whakamahi i te Q150T sputter coater, a ka waiho he paparanga 5 nm Au ki runga i nga tauira.Ka pai ake te pai o te tukanga ma te whakamahi i nga ngaohiko iti me te whakarato i te witi pai, te pupuhi makariri.A Thermo Electron (Waltham, MA1. Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 i whakamahia te rahi matūriki tātari rahi ki te whiwhi i te tohatoha rahi matūriki. Ko nga matūriki silica tahanga me nga matūriki silica herea ligand-hono (5 mg ia) i marara ki te 5 mL o te isopropanol, ka sonicated mo te 10 min, ka vortexed mo te 5 min, a ka whakanohoia ki runga i te turanga whatu o te pereki o te Masters 5, ka whakanohoia ki runga i te whatu i runga i te taumata o te tohu o te Masters. awhe pāmahana o 30 ki te 800 °C.
Ko nga pou kowiri tira whaiti nga rahi (100 × 1.8 mm id) kua whakakiia ma te whakamahi i te tikanga whakakakahu slurry. 31. He pou kowiri tira (he karaehe-raina, 100 × 1.8 mm id) me te urunga urunga kei roto he 1 µm frit i honoa ki te packer slurry (Alltech Deerfield, IL, USA). Whakapaia he slurry wahanga tuutuu ma te whakatārewa i te 150 mg o te wahanga mau tonu i roto i te methanol me te mL ka tukuna mai i te methanol me te mL. slurry whakarewa tae atu ki te whakarewa turaki. Whakakiia te poupou raupapa ma te whakamahi i nga pehanga o te 100 MP mo te 10 meneti, 80 MP mo te 15 meneti, me te 60 MP mo te 30 meneti. I te wa o te whakakakahu, ka whakamahia te wiri miihini me nga wiri GC e rua (Alltech, Deerfield, IL, USA) ki te whakarite kia pai te tuku i te pehanga o te poupou me te whakakakahu o te pou. kia kore ai he kino i roto i te poupou. Momotuhia te poupou mai i te kohanga whakakakahu slurry ka hono atu tetahi atu taputapu ki te kokoru me te punaha LC hei tirotiro i tana mahi.
He papu LC (10AD Shimadzu, Hapani), he injector (Valco (USA) C14 W.05) me te 50nL i werohia te korowai, degasser membrane (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS matapihi capillary i hangaia He kairapu taputapu µLC motuhake (UV-2075) me te whakakoi i te karaehe hono i nga microcolumns poto me te whakaiti i te hononga o te microcolumns poto me te hono i te karaihe. whakawhänui.I muri i te täkainga, ka whakauruhia nga capillaries (50 μm id 365 me te whakaiti i nga potae uniana (50 μm) ki te 1/16″ putanga o te uniana whakaiti. Ko te kohikohi raraunga me te tukatuka chromatographic i mahia ma te whakamahi i te rorohiko Multichro 2000. Ko te aroturuki i te 254 nmtographic data i whakamatauhia mo te 254 nm. (Northampton, MA).
Ko te Albumin mai i te serum tangata, te paura lyophilized, ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 mg i konatunatua ki te trypsin (1.5 mg), 4.0 M urea (1 mL), me te 0.2 M ammonium bicarbonate (1 mL). I whakaohohia te otinga mo te 10 meneti ka pupuri i roto i te pati wai i te 67, 1°C haora i te 67,1°C. 0.1% TFA.Tatarihia te otinga ka penapena ki raro i te 4 °C.
Ko te wehewehenga o te ranunga peptide me te HSA trypsin digests i arotakea motuhake i runga i nga pou PMP.Tirohia te wehenga o te ranunga peptide me te trypsin digest o HSA ma te pou PMP me te whakataurite i nga hua ki te pou Ascentis Express RP-Amide.Ko te tau pereti ariā ka tatauhia penei:
Ko nga whakaahua SEM o nga matūriki silica karekau me nga matūriki silica here-hononga e whakaatuhia ana i te FIG. 2. Ko nga whakaahua SEM o nga matūriki silica kore noa (A, B) e whakaatu ana, he rereke ki o maatau rangahau o mua, he porowhita enei matūriki e whakaroa ana nga matūriki, he hangarite koretake ranei. Ko te mata o nga matūriki silica herea ligand (C, D) he maeneene atu i tera o nga matūriki silica koretake.
Te matawai i nga whakaahua karu irahiko o nga matūriki silica tahanga (A, B) me nga matūriki silica hono-hononga (C, D).
Ko nga tohatoha rahi o te matūriki o nga matūriki silica tahanga me nga matūriki silica herea ligand e whakaatuhia ana i te Whakaahua 3(A). Ko nga waahanga tohatoha rahi o te matūriki i runga i te rōrahi i whakaatu ko te rahi o nga matūriki silica i piki ake i muri i te whakarereketanga matū (Fig. 3A). μm, ka whakaritea ki ta maatau rangahau o mua me te uara ad(0.5) o 3.05 μm (matūriki silica here-polystyrene) 34. He iti ake te tohatoha o te matūriki o tenei puranga ki ta maatau rangahau o mua na te rereke o nga rereketanga o te PEG, Urea, TMOS, me te waikawa acetic i roto i te ranunga tauhohenga. Ko te mahi o te mata o nga matūriki silica me te styrene ka waiho he paparanga polystyrene (0.97 µm) ki runga i te mata silica, engari i te wahanga PMP ko te 1.38 µm te matotoru paparanga.
Te tohatoha rahi matūriki (A) me te tohatoha rahinga pore (B) o nga matūriki silica koretake me nga matūriki silica herea-ligan.
Ko te rahi o te pore, te rōrahi pore me te mata o nga matūriki silica o te rangahau o naianei kei te Ripanga 1(B). Ko nga whakaaturanga PSD o nga matūriki silica koretake me nga matūriki silica herea-ligan e whakaatuhia ana i te Whakaahua 3(B). He rite nga hua ki ta maatau rangahau o mua. na te 69 i muri i te whakarereketanga matū, penei i te Ripanga 1(B), ka whakaatuhia te huringa o te pihi i te Whakaahua 3(B). Waihoki, ko te pore pore o nga matūriki silica i heke mai i te 0.67 ki te 0.58 cm3/g i muri i te whakarereketanga matū.Ko te waahanga mata motuhake o nga matūriki silica m2 e akohia ana i tenei wa ko te 116 (ko te 116 o nga matūriki silica m2 e akohia ana i tenei wa ko te 116). m2/g) .Ka rite ki te Ripanga 1(B), ka heke ano te mata o te mata (m2/g) o nga matūriki silica mai i te 116 m2/g ki te 105 m2/g i muri i te whakarereketanga matū.
Kei te Ripanga 2 nga hua o te wetewetetanga o te wahanga waro. Ko te uta waro o te wahanga noho o naianei he 6.35%, he iti ake i te uta waro o ta maatau rangahau o mua (matūriki silica here polystyrene, 7.93%35 me 10.21%, ia) 42. Te uta waro o te wahanga waro o naianei i roto i te waahanga o naianei, he iti te taapiri o te SP i roto i te waahanga o naianei, he iti ake te taapiri o te warohiko i roto i te wahanga o naianei SP i roto i te takahanga o naianei. I whakamahia nga hononga penei i te phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) me te 4-hydroxy-TEMPO. Ko te 2.21% te taumaha hauota o te wahanga noho o naianei, ka whakaritea ki te 0.1735 me te 0.85% i te taumaha o te hauota i roto i nga rangahau o mua. Ko te tikanga he nui ake te wt% o te hauota waroimide i roto i te waaawa hauota o naianei. ko te utaina o nga hua (4) me te (5) he 2.7% me te 2.9%, i te mea ko te uta waro o te hua whakamutunga (6) he 6.35%, penei i te Ripanga 2. I tirohia te mate taimaha ki te PMP waahi noho, a ko te TGA curve e whakaatuhia ana i te Whakaahua 4. Ko te TGA curve e whakaatu ana i te mate taimaha o te 8.6%, i te mea he pai te mate o te waro ki te 8.6%, he pai te 8.6%. Kei roto i nga here he C anake engari he N, O, me H.
Ko te phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ligand i whiriwhiria mo te whakarereketanga o te mata o nga matūriki silica na te mea he roopu phenylmaleimide polar me nga roopu vinylisocyanate.Ka taea e nga roopu isocyanate Vinyl te tauhohe atu ki te styrene ma te polymerization tuwhena ora. phenylmaleimide moiety karekau he utu mariko i te pH noa. Ka taea te whakahaere i te polarity o te wahanga pahoho e te nui o te styrene me te wa tauhohenga o te polymerization radical free. He mea tino nui te taahiraa whakamutunga o te tauhohenga (free-radical polymerization) ka taea te whakarereke i te polarity o te wahanga noho. Ko te utaina o te wahanga tuutuu me te rereke. Ko nga SP kua rite ki nga kuhanga rereke o te styrene he rereke nga uta waro. Ano, utaina enei waahanga tuutuu ki roto i nga pou kowiri tira me te tirotiro i o raatau mahi chromatographic (te whiriwhiringa, te whakatau, te uara N, me etahi atu).
E rima nga ranunga peptide (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) i aromatawaihia ma te whakamahi i te pou PMP ma te whakamahi i te waahanga waea; 60/40 (v/v) acetonitrile/wai ​​(0.1% TFA) i te tere rere o te 80 μL/min. I raro i nga tikanga elution tino pai, ko te tau pereti ariā (N) mo ia pou (100 × 1.8 mm id) he 20,000 ± 100 (200,000 T /m² nga uara P3/m²). me nga chromatograms e whakaatuhia ana i roto i te Whakaahua 5A. Te tātari tere i runga i te pou PMP i te tere o te rere (700 μL / min), e rima nga peptides i whakahekehia i roto i te meneti kotahi, he tino pai nga uara N, 13,500 ± 330 mo ia pou (100 × 1.8 mm id), He rite ki te 50000000000000000000000. Ko nga pou rite tonu te rahi (100 × 1.8 mm id) i kikii ki nga momo rereke e toru o te wahanga PMP hei tirotiro i te reproducibility.Ko te kukū tātari mo ia tīwae i tuhia ma te whakamahi i nga tikanga elution tino pai me te maha o nga pereti ariā N me te wa pupuri ki te wehe i te ranunga whakamatautau kotahi ki ia pou. iti %RSD uara, pera i te Ripanga 3.
Te wehenga o te ranunga peptide i runga i te pou PMP (B) me te pourangi Ascentis Express RP-Amide (A); wāhanga pūkoro 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), te rahi o te tīwae PMP (100 × 1.8 mm id); tātari Ko te raupapa elution o nga pūhui: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) me te 5 (leucine) waikawa enkephalin)).
He pou PMP (100 × 1.8 mm id) i aromatawaihia mo te wehewehenga o nga keri tryptic o te albumin serum tangata i roto i te chromatography wai mahi nui. Ko te chromatogram i te Whakaahua 6 e whakaatu ana he pai te wehe o te tauira me te tino pai o te taumira. I tātarihia nga keri HSA ma te whakamahi i te tere rere o te 100 µL/0. TFA.Kei te whakaatuhia i te chromatogram (Whakaahua 6), kua wehea te keri HSA ki nga tihi 17 e rite ana ki nga peptides 17. I tatauhia te pai o te wehenga o ia tihi i roto i te keri HSA ka hoatu nga uara ki te Ripanga 5.
I wehea tetahi kemu tryptic o HSA (100 × 1.8 mm id) i runga i te pou PMP; tere rere (100 µL/min), wahanga pūkoro 60/40 acetonitrile/wai ​​me te 0.1% TFA.
kei hea te L te roa o te pou, ko te η te pokey o te waahanga pūkoro, ko te ΔP te pehanga o muri o te pou, a ko te u te tere tere o te wahanga waea.Ko te uruhanga o te pou PMP ko 2.5 × 10-14 m2, ko te rerenga rere ko 25 μL / min, me te 60/40 v/v i whakamahia te AMP/v1. mm id) he rite tonu ki ta maatau rangahau o mua Ref.34.Ko te uruhanga o te pourangi kua whakakiia ki nga matūriki porous ko: 1.7 × 10-15 mo te 1.3 μm matūriki, 3.1 × 10-15 mo te 1.7 μm matūriki, 5.2 × 10-15 me te 2.5 μm mo te 2.5 μm. μm matūriki 43. No reira, he rite te uruhanga o te wahanga PMP ki te 5 μm matūriki anga-matua.
ko te Wx te taumaha o te pou kua whakakiia ki te chloroform, ko Wy te taumaha o te pou kua whakakiia ki te methanol, a ko te ρ te kiato o te whakarewa. Te kiato o te methanol (ρ = 0.7866) me te chloroform (ρ = 1.484). Ko nga pou C18-Urea 31 i akohia e matou i mua ko te 0.63 me te 0.55. Ko te tikanga ko te noho o nga urea ligands e whakaiti ana i te uruhanga o te wahanga noho. I tetahi atu ringa, ko te tapeke porosity o te pou PMP (100 × 1.8 mm id) he 0.60.Ko te paheketanga o te poupou o te C18 he iti ake i te C18. matūriki silica na te mea i roto i nga wahanga C18-momo ka piri nga herenga C18 ki nga matūriki silica hei mekameka raina, i roto i nga momo momo polystyrene, ka hangaia te paparanga polymer ahua matotoru huri noa.
Ko te ahua 7A,B e whakaatu ana i te pou PMP (100 × 1.8 mm id) me te pou Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 mm id) ma te whakamahi i nga tikanga elution rite (arā, 60/40 ACN/H2O me 0.1% TFA). ) o te waahi van Deemter. Ko nga ranunga peptide kua tohua (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) i whakaritea i roto i te 20 µL/ Ko te reiti rere iti mo nga pou e rua ko te 800 µL/min. Ko te iti rawa o nga uara HETP / min. Ko nga uara HETP e tohu ana ko te pai o te wehewehenga o te pou PMP (100 × 1.8 mm id) he pai ake i te waahanga hokohoko Ascentis Express RP-Amide (100 i × 1.8). ko te hekenga o te uara N me te piki haere o te rere kaore he mea nui ki ta maatau ako o mua.Ko te teitei ake o te pai o te wehewehenga o te pou PMP (100 × 1.8 mm id) ka whakaritea ki te pourangi Ascentis Express RP-Amide e ahu mai ana i runga i nga whakapainga o te ahua matūriki, te rahi, me nga tikanga whakahiato poupou matatini e whakamahia ana i roto i nga mahi o naianei34.
(A) van Deemter maataki (HETP versus te tere tere o te wahanga pūkoro) i whiwhi ma te whakamahi i te pou PMP (100 × 1.8 mm id) i roto i te 60/40 ACN/H2O me te 0.1% TFA.(B) van Deemter maataki (HETP versus te tere tere raina o te wahanga pūkoro) i whiwhi ma te whakamahi i te pourangi Ascentis Express RP-Amide/06 (10 mm Amide 1) i roto i te pou 1000 i ×1. ACN/H2O me te 0.1% TFA.
I whakaritea he waahanga polystyrene kua mau ki te polar, ka arotakehia mo te wehenga o nga ranunga peptide synthetic me te keri trypsin o te albumin serum tangata (HAS) i roto i te chromatography wai tino mahi. matūriki, te kōtuitanga whakahaere o te wāhanga pahoho, me te tarapēke tīwae matatini.I tua atu ki te pai wehenga teitei, raro poupou raro pēhanga i reiti rere tiketike ko tetahi atu painga o tenei wāhanga pahoho.PMP tīwae whakaatu reproducibility pai, me te taea te whakamahi mo te tātaritanga o ranunga peptide me te nakunaku trypsin o ngā momo pūmua.We whakaaro ki te whakamahi i tenei tīwae mo te wehenga o te rongoa rongoa tipu me nga hua ngahau. chromatography.I te wa kei te heke mai, ka arotakehia nga pou PMP mo te wehenga o nga pūmua me nga antibodies monoclonal.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. Rangahau mo te Peptide Separation Systems by Reversed Phase Chromatography Part I: Development of a Column Characterization Protocol.J. Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al.Improved active peptides i hangaia mo te maimoatanga o nga mate hopuhopu.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic peptides therapeutic: science and the market.drug discovery.15 (1-2) i tenei ra, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J. Chromatography.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al.Ka taea e te chromatography-mass spectrometry te whakauru o nga metabolomics whanui me te proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89-97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ Te mahi a te UHPLC ki te whakawhanake tarukino.J. Hepetema Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM Ko nga ahuatanga taketake me te mahi o te chromatography wai pehanga ultrahigh mo te wehe tere.J. Hepetema Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. Te tono o te mahi tino teitei o te chromatography wai i roto i te whanaketanga tarukino.J. Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al.Monolithic macroporous hydrogels i taka mai i te hinu-i roto i te wai whakaehunga o roto teitei mo te purenga pai o enteroviruses.Chemical.Britain.J. 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA Ko te mahi a te chromatography wai i roto i te proteomics.J. Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L.& Guillarme, D. Ka puta nga ahuatanga i roto i te wahanga whakamuri o te wai chromatography wehenga o nga peptides rongoa me nga pūmua: te ariā me nga tono.J. Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC Wehewehenga-rua o nga peptides ma te whakamahi i te punaha RP-RP-HPLC ma te whakamahi i nga uara pH rereke i te waahanga wehe tuatahi me te tuarua.J. Hepetema Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al.Ko nga ahuatanga whakawhiti papatipu me te mahi oro o nga pou chromatographic tino pai kua kikii ki te C18 iti-2 μm kakato me nga matūriki porous papapapa i tirotirohia.J. Hepetema Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al.Ko nga ahuatanga hou me nga wero tātaritanga i roto i te wehe, te tautuhi me te whakamana o te tipu bioactive peptides.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-0218-08-(28-x).
Mueller, JB et al.The proteomic landscape of the kingdom of life.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al.Whakatikanga o raro o nga peptides haumanu na roto i te chromatography wai preparative.Molecule (Basel, Switzerland) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Rahui-aratau chromatography me tona tono ki biopolymers.J. Chromatography.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Nga herenga mo te chromatography pūmua momo whakauru: te kaupapa, te tohu, me te hoahoa.J. Biotechnology.144(1), 3-11 (2009).