ຂໍຂອບໃຈສຳລັບການເຂົ້າເບິ່ງ Nature.com. ເວີຊັນຂອງບຣາວເຊີທີ່ທ່ານກຳລັງໃຊ້ຢູ່ມີການຮອງຮັບ CSS. ສໍາລັບປະສົບການທີ່ດີທີ່ສຸດ, ພວກເຮົາແນະນຳໃຫ້ທ່ານໃຊ້ໂປຣແກຣມທ່ອງເວັບທີ່ອັບເດດແລ້ວ (ຫຼືປິດໂໝດຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ໃນ Internet Explorer). ໃນລະຫວ່າງນີ້, ເພື່ອຮັບປະກັນການສະໜັບສະໜູນຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ, ພວກເຮົາຈະສະແດງເວັບໄຊໂດຍບໍ່ມີຮູບແບບ ແລະ JavaScript.
particles silica porous ໄດ້ຖືກກະກຽມໂດຍວິທີການ sol-gel ທີ່ມີການດັດແກ້ບາງຢ່າງເພື່ອໃຫ້ໄດ້ particles macroporous. particles ເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນໄດ້ມາຈາກການທົດແທນການເພີ່ມເຕີມ reversible fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization ກັບ N-phenylmaleimide-methylvinylvinylisocyanate (PMI) ແລະ styrene ເພື່ອກະກຽມ N-phencalylmaleimiderenation interstation (MP) polystyrene. phase.narrow-bore ຖັນສະແຕນເລດ (100 × 1.8 ມມ id) ໄດ້ຖືກບັນຈຸໂດຍ slurry packing. ການປະເມີນຖັນ PMP ການແຍກສານປະສົມ peptide ປະກອບດ້ວຍຫ້າ peptides (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Glyinpharagraphic, ແລະປະສິດທິພາບ) trypsin ການຍ່ອຍສະຫຼາຍຂອງ albumin serum ຂອງມະນຸດ (HAS).ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂທີ່ດີທີ່ສຸດຂອງ elution, ຈໍານວນແຜ່ນທິດສະດີຂອງປະສົມ peptide ແມ່ນສູງເຖິງ 280,000 plates/m². ເມື່ອປຽບທຽບການປະຕິບັດການແຍກຂອງຖັນທີ່ພັດທະນາກັບຖັນການຄ້າ Ascentis Express RP-Amide, ມັນສັງເກດເຫັນວ່າປະສິດທິພາບການແຍກຂອງຖັນແຍກ PMP ແລະປະສິດທິພາບຂອງຖັນທາງການຄ້າແມ່ນດີກວ່າ.
ໃນຊຸມປີມໍ່ໆມານີ້, ອຸດສາຫະກໍາຢາຊີວະພາບໄດ້ກາຍເປັນຕະຫຼາດໂລກທີ່ຂະຫຍາຍໃຫຍ່ຂື້ນໂດຍມີສ່ວນແບ່ງຕະຫຼາດເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ. ດ້ວຍການຂະຫຍາຍຕົວຢ່າງໃຫຍ່ຫຼວງຂອງອຸດສາຫະກໍາຢາຊີວະພາບ1,2,3, ການວິເຄາະ peptides ແລະທາດໂປຼຕີນແມ່ນຕ້ອງການສູງ. ນອກເຫນືອໄປຈາກ peptide ເປົ້າຫມາຍ, impurities ຈໍານວນຫຼາຍໄດ້ຖືກຜະລິດໃນລະຫວ່າງການສັງເຄາະ peptide, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງຕ້ອງການ peptides ບໍລິສຸດ. purity. ການວິເຄາະແລະລັກສະນະຂອງທາດໂປຼຕີນໃນນ້ໍາຂອງຮ່າງກາຍ, ເນື້ອເຍື່ອແລະຈຸລັງແມ່ນເປັນວຽກງານທີ່ທ້າທາຍທີ່ສຸດເນື່ອງຈາກຈໍານວນຂະຫນາດໃຫຍ່ຂອງຊະນິດທີ່ອາດສາມາດກວດພົບໄດ້ໃນຕົວຢ່າງດຽວ. ເຖິງແມ່ນວ່າ mass spectrometry ເປັນເຄື່ອງມືປະສິດທິພາບສໍາລັບ peptide ແລະລໍາດັບທາດໂປຼຕີນ, ຖ້າຕົວຢ່າງດັ່ງກ່າວຖືກສີດເຂົ້າໄປໃນ spectrometer ມະຫາຊົນໃນຫນຶ່ງຜ່ານ, ການແຍກຕົວນີ້ຈະບໍ່ເປັນບັນຫາທີ່ເຫມາະສົມ (LC. ການແຍກອອກກ່ອນການວິເຄາະ MS, ເຊິ່ງຈະຫຼຸດລົງຈໍານວນຂອງການວິເຄາະເຂົ້າໄປໃນ spectrometer ມະຫາຊົນໃນເວລາທີ່ກໍານົດໄວ້ 4,5,6. ນອກຈາກນັ້ນ, ໃນໄລຍະການແຍກທາດແຫຼວ, ການວິເຄາະສາມາດໄດ້ຮັບການສຸມໃສ່ໃນເຂດແຄບ, ດັ່ງນັ້ນການສຸມໃສ່ການວິເຄາະເຫຼົ່ານີ້ແລະການປັບປຸງ MS detection sensitivity.Chromatography ແຫຼວ (LC) ໄດ້ກ້າວຫນ້າທາງດ້ານເທກນິກທີ່ມີຄວາມນິຍົມຢ່າງຫຼວງຫຼາຍແລະໃນໄລຍະທີ່ຜ່ານມາ. ການວິເຄາະ 7,8,9,10.
Reversed-phase liquid chromatography (RP-LC) ຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງສໍາລັບການຊໍາລະລ້າງແລະການແຍກສານປະສົມ peptide ໂດຍໃຊ້ octadecyl-modified silica (ODS) ເປັນໄລຍະ stationary11,12,13.ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ໄລຍະ stationary RP ບໍ່ໄດ້ສະຫນອງການແຍກ peptides ທີ່ຫນ້າພໍໃຈແລະທາດໂປຼຕີນຈາກ am4, ໂຄງສ້າງພິເສດ 15 ສະລັບສັບຊ້ອນແລະທາດໂປຼຕີນ. ໄລຍະ stationary ທີ່ຖືກອອກແບບແມ່ນຈໍາເປັນໃນການວິເຄາະ peptides ແລະທາດໂປຼຕີນທີ່ມີ moieties ຂົ້ວໂລກແລະບໍ່ມີຂົ້ວໂລກເພື່ອປະຕິສໍາພັນກັບແລະຮັກສາ analytes16.Mixed-mode chromatography ເຫຼົ່ານີ້, ເຊິ່ງສະຫນອງການໂຕ້ຕອບ multimodal, ສາມາດເປັນທາງເລືອກກັບ RP-LC ສໍາລັບການແຍກ peptides, ທາດໂປຼຕີນ, ແລະປະສົມສະລັບສັບຊ້ອນອື່ນໆ. ຖັນປະສົມຫຼາຍໄລຍະໄດ້ຖືກກະກຽມ, ໄລຍະການຫຸ້ມຫໍ່ stationary ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້. peptide ແລະທາດໂປຼຕີນທີ່ແຍກຕ່າງຫາກ17,18,19,20,21.Mixed-mode stationary phases (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC) ແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບການແຍກ peptide ແລະທາດໂປຼຕີນເນື່ອງຈາກມີຂອງທັງສອງຂົ້ວໂລກແລະບໍ່ມີຂົ້ວໂລກໄລຍະ 22,23,24,25,26,27, 27, 27, 22,23,24,25,25,26,27,27,27,27,27 ກຸ່ມຂົ້ວໂລກທີ່ຜູກມັດ covalently ສະແດງໃຫ້ເຫັນພະລັງງານການແຍກທີ່ດີແລະການຄັດເລືອກທີ່ເປັນເອກະລັກສໍາລັບການວິເຄາະຂົ້ວໂລກແລະບໍ່ມີຂົ້ວ, ເນື່ອງຈາກວ່າການແຍກແມ່ນຂຶ້ນກັບການພົວພັນລະຫວ່າງການວິເຄາະແລະໄລຍະ stationary. Multimodal interactions 29, 30, 31, 32.Recently, Zhang et al. 30 ການກະກຽມໄລຍະ stationary polyamine dodecyl-terminated ແລະສົບຜົນສໍາເລັດແຍກ hydrocarbons, antidepressants, flavonoids, nucleosides, estrogens, ແລະການວິເຄາະອື່ນໆຈໍານວນຫນຶ່ງ. intercalator polar ມີທັງກຸ່ມຂົ້ວໂລກແລະບໍ່ມີຂົ້ວໂລກ, ສະນັ້ນມັນສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອແຍກ peptides ແລະທາດໂປຼຕີນທີ່ມີທັງ hydrophobic column, polar-mobic ແລະຄໍລໍາ. amide-embedded C18 columns) ແມ່ນມີຢູ່ໃນການຄ້າພາຍໃຕ້ຊື່ການຄ້າຂອງຖັນ Ascentis Express RP-Amide, ແຕ່ຄໍລໍາເຫຼົ່ານີ້ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການວິເຄາະຂອງ amine 33 ເທົ່ານັ້ນ.
ໃນການສຶກສາໃນປະຈຸບັນ, ໄລຍະ stationary ຝັງຢູ່ຂົ້ວໂລກ (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) ໄດ້ຖືກກະກຽມແລະການປະເມີນສໍາລັບການແຍກ peptides ແລະ trypsin digests ຂອງ HSA. ໄລຍະ stationary ໄດ້ຖືກກະກຽມໂດຍໃຊ້ຍຸດທະສາດດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້. ອະນຸພາກ silica porous ໄດ້ຖືກກະກຽມຕາມຂັ້ນຕອນທີ່ໄດ້ລະບຸໄວ້ໃນການພິມເຜີຍແຜ່ທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາກັບບາງສ່ວນຂອງ protocolene ການກະກຽມ. (PEG), TMOS, ອາຊິດ acetic ນ້ໍາໄດ້ຖືກປັບເພື່ອກະກຽມອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ມີຂະຫນາດ pore ຂະຫນາດໃຫຍ່. ອັນທີສອງ, ເປັນ ligand ໃຫມ່, phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate, ໄດ້ຖືກສັງເຄາະແລະນໍາໃຊ້ເພື່ອແຜ່ກະຈາຍອະນຸພາກຊິລິກາເພື່ອກະກຽມໄລຍະການສະຫມໍ່າສະເຫມີຂົ້ວໂລກໄດ້ຝັງໄວ້. ຜົນໄດ້ຮັບເຂົ້າໄປໃນໄລຍະສະແຕນເລດ 10 ຄໍລໍາ 10 ບັນຈຸ. ຮູບແບບການຫຸ້ມຫໍ່ optimized. ການຫຸ້ມຫໍ່ຄໍລໍາແມ່ນການຊ່ວຍເຫຼືອທີ່ມີການສັ່ນສະເທືອນກົນຈັກເພື່ອຮັບປະກັນການນອນ homogeneous ໄດ້ຖືກສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນພາຍໃນຖັນ. ປະເມີນຜົນການແຍກຖັນ packed ຂອງປະສົມ peptide ປະກອບດ້ວຍຫ້າ peptides; (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) ແລະ Trypsin digest ຂອງ albumin serum ຂອງມະນຸດ (HAS).ສ່ວນປະສົມຂອງ peptide ແລະ trypsin digest ຂອງ HSA ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນວ່າແຍກອອກດ້ວຍຄວາມລະອຽດແລະປະສິດທິພາບທີ່ດີ. ການປະຕິບັດຂອງຖັນ PMP ແມ່ນການແບ່ງອອກເປັນສ່ວນຮ້ອຍຂອງ Express-PMP. column.ທັງສອງ peptides ແລະທາດໂປຼຕີນໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນວ່າໄດ້ຮັບການແກ້ໄຂໄດ້ດີແລະມີປະສິດທິພາບຢູ່ໃນຖັນ PMP, ເຊິ່ງມີປະສິດທິພາບຫຼາຍກ່ວາຖັນ Ascentis Express RP-Amide.
PEG (Polyethylene Glycol), Urea, Acetic Acid, Trimethoxy Orthosilicate (TMOS), Trimethyl Chlorosilane (TMCS), Trypsin, Human Serum Albumin (HSA), Ammonium Chloride, Urea, Hexane Methyldisilazane (HMDS), Methacryloyl Chloride (MC), Steydroxy-4TE, Styne, (BPO), HPLC Grade Acetonitrile (ACN), Methanol, 2-Propanol, ແລະ Acetone ຊື້ຈາກ Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).
ທາດປະສົມຂອງ urea (8 g), polyethylene glycol (8 g), ແລະ 8 mL ຂອງ 0.01 N acetic acid ໄດ້ຖືກ stirred ສໍາລັບ 10 ນາທີ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນ 24 mL ຂອງ TMOS ໄດ້ຖືກຕື່ມໃສ່ໃນນັ້ນພາຍໃຕ້ສະພາບເຢັນເປັນກ້ອນ. ປະສົມປະຕິກິລິຢາແມ່ນໃຫ້ຄວາມຮ້ອນທີ່ 40 ° C ສໍາລັບ 6 ຊົ່ວໂມງແລະຫຼັງຈາກນັ້ນຢູ່ທີ່ 120 ° C. ນ້ໍາສະແຕນເລດເປັນອັດຕະໂນມັດ 8 ຊົ່ວໂມງ. ວັດຖຸທີ່ຕົກຄ້າງໄດ້ຖືກຕາກໃຫ້ແຫ້ງຢູ່ທີ່ 70 ° C ເປັນເວລາ 12 ຊົ່ວໂມງ. ມະຫາຊົນອ່ອນຂອງແຫ້ງແມ່ນເປັນດິນກ້ຽງໃນເຕົາອົບແລະ calcined ທີ່ 550 ° C ເປັນເວລາ 12 ຊົ່ວໂມງ. ສາມຊຸດໄດ້ຖືກກະກຽມແລະມີລັກສະນະເພື່ອກວດກາເບິ່ງການແຜ່ພັນໃນຂະຫນາດອະນຸພາກ, ຂະຫນາດຂອງຮູຂຸມຂົນແລະພື້ນທີ່.
ດ້ວຍການດັດແປງພື້ນຜິວຂອງອະນຸພາກຊິລິກາດ້ວຍ ligand phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) ທີ່ສັງເຄາະກ່ອນໜ້າດ້ວຍໂພລີເມີຊຽມດ້ວຍ styrene, ສານປະສົມທີ່ມີກຸ່ມຂົ້ວໂລກໄດ້ຖືກກະກຽມ. ໄລຍະສະຖານີສໍາລັບການລວບລວມແລະຕ່ອງໂສ້ polystyrene. ຂະບວນການກະກຽມແມ່ນໄດ້ອະທິບາຍຂ້າງລຸ່ມນີ້.
N-phenylmaleimide (200 mg) ແລະ methyl vinyl isocyanate (100 mg) ໄດ້ຖືກລະລາຍໃນ toluene ແຫ້ງ, ແລະ 0.1 mL ຂອງ 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ໄດ້ຖືກເພີ່ມໃສ່ກະເປົ໋າຕິກິຣິຍາເພື່ອກະກຽມ phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate CPPM ທີ່ມີຄວາມຮ້ອນ 3.C. ຊົ່ວໂມງ, ກັ່ນຕອງແລະຕາກໃຫ້ແຫ້ງໃນເຕົາອົບທີ່ອຸນຫະພູມ 40 ອົງສາ C ເປັນເວລາ 3 ຊົ່ວໂມງ.
particles silica ແຫ້ງ (2 g) ໄດ້ຖືກກະແຈກກະຈາຍໃນ toluene ແຫ້ງ (100 mL), stirred ແລະ sonicated ໃນ 500 mL ກະຕຸກລຸ່ມເປັນມົນລະພິດສໍາລັບ 10 min.PMCP (10 mg) ໄດ້ຖືກລະລາຍໃນ toluene ແລະເພີ່ມ dropwise ກັບ flask ປະຕິກິລິຍາໂດຍຜ່ານ funnel ຫຼຸດລົງ. ປະສົມໄດ້ຖືກ refluxed ຢູ່ທີ່ 100 ° C ການກັ່ນຕອງແລະຕາກແດດໃຫ້ແຫ້ງ. 60°C ເປັນເວລາ 3 ຊົ່ວໂມງ.ຈາກນັ້ນ, ອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດ PMCP (100 g) ໄດ້ຖືກລະລາຍໃນ toluene (200 ml) ແລະ 4-hydroxy-TEMPO (2 mL) ໄດ້ຖືກຕື່ມໃສ່ໃນທີ່ປະທັບຂອງ 100 µL ຂອງ dibutyltin dilaurate ເປັນ catalyst. ປະສົມໄດ້ຖືກ stirred ຢູ່ທີ່ 50 ° C ສໍາລັບການກັ່ນຕອງ 8 ຊົ່ວໂມງແລະ 8 ° C.
Styrene (1 mL), benzoyl peroxide BPO (0.5 mL), ແລະອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຕິດຢູ່ TEMPO-PMCP (1.5 g) ຖືກກະແຈກກະຈາຍໃນ toluene ແລະ purified ດ້ວຍໄນໂຕຣເຈນ. ການໂພລີເມີໄຊຂອງສະໄຕຣີນໄດ້ຖືກປະຕິບັດຢູ່ທີ່ 100 ° C ເປັນເວລາ 12 ຊົ່ວໂມງ. ຜະລິດຕະພັນທີ່ໄດ້ຮັບຜົນໄດ້ຖືກລ້າງດ້ວຍ methanol 60 ° C ແລະຕາກໃຫ້ແຫ້ງໃນຄືນ. ຮູບທີ 1.
ຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກ degassed ຢູ່ທີ່ 393 K ເປັນເວລາ 1 ຊົ່ວໂມງເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຄວາມກົດດັນທີ່ຕົກຄ້າງຫນ້ອຍກວ່າ 10-3 Torr. ປະລິມານຂອງ N2 adsorbed ຢູ່ທີ່ຄວາມກົດດັນພີ່ນ້ອງຂອງ P/P0 = 0.99 ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອກໍານົດປະລິມານ pore ທັງຫມົດ. morphology ຂອງ particles ຊິລິກາເປົ່າແລະ ligand-bonded ໄດ້ຖືກກວດສອບດ້ວຍ electron micrologita, ການສະແກນສູງ. ຍີ່ປຸ່ນ).ຕົວຢ່າງແຫ້ງ (ຊິລິກາເປົ່າ ແລະ ອະນຸພາກ silica ຜູກມັດ ligand) ຖືກວາງໃສ່ຖັນອະລູມິນຽມທີ່ໃຊ້ກາວຄາບອນ tape. Gold ໄດ້ຖືກ plated ເທິງຕົວຢ່າງໂດຍໃຊ້ sputter coater Q150T, ແລະຊັ້ນ 5 nm Au ໄດ້ຖືກຝາກໄວ້ໃນຕົວຢ່າງ. ນີ້ປັບປຸງປະສິດທິພາບຂະບວນການໂດຍໃຊ້ແຮງດັນຕ່ໍາແລະສະຫນອງເມັດພືດອັນດີ, ການ sputtering ເຢັນຂອງ MA (USA) . ເຄື່ອງວິເຄາະອົງປະກອບ EA1112 ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການວິເຄາະອົງປະກອບ.A Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 particles analyzer ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຮັບການແຜ່ກະຈາຍຂະຫນາດຂອງ particles.Naked silica particles ແລະ ligand-bonded silica particles (5 mg ແຕ່ລະຄົນ) ຖືກກະແຈກກະຈາຍໃນ 5 mL ຂອງ isopropanol forvort, ແລະ sonic 5 mL ທີ່ຖືກຈັດໃສ່ໃນ minopropanol, 10sonic. ບ່ອນນັ່ງ optical ຂອງ Mastersizer.Thermogravimetric ການວິເຄາະແມ່ນປະຕິບັດໃນອັດຕາຂອງ 5 ° C ຕໍ່ນາທີໃນໄລຍະອຸນຫະພູມຂອງ 30 ຫາ 800 ° C.
ຖັນສະແຕນເລດທີ່ເຮັດດ້ວຍແກ້ວມີຂະໜາດ (100 × 1.8 ມມ id) ໄດ້ຖືກບັນຈຸໂດຍໃຊ້ວິທີການຫຸ້ມຫໍ່ slurry, ນໍາໃຊ້ຂັ້ນຕອນດຽວກັນທີ່ໃຊ້ໃນ Ref. 31.A ຖັນສະແຕນເລດ (ສາຍແກ້ວ, 100 × 1.8 ມມ id) ທີ່ມີເຕົ້າສຽບເຕົ້າສຽບທີ່ປະກອບດ້ວຍ frit 1 µm ໄດ້ເຊື່ອມຕໍ່ກັບເຄື່ອງຫຸ້ມຫໍ່ slurry (Alltech Deerfield, IL, USA).ກະກຽມ slurry ໄລຍະ stationary ໂດຍ suspend 150 ມລກຂອງ stationary phase ໃນ 1.2 mL ຂອງ methan ເກັບຮັກສາໄວ້. slurry solvent ເຊັ່ນດຽວກັນກັບ propelling solvent. ຕື່ມໃສ່ຖັນຕາມລໍາດັບໂດຍນໍາໃຊ້ຄວາມກົດດັນຂອງ 100 MP ສໍາລັບ 10 ນາທີ, 80 MP ສໍາລັບ 15 ນາທີ, ແລະ 60 MP ສໍາລັບ 30 ນາທີ. ໃນລະຫວ່າງການຫຸ້ມຫໍ່, ການສັ່ນສະເທືອນກົນຈັກໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ກັບສອງເຄື່ອງ shakers ຖັນ GC (Alltech, Deerfield, IL, USA) ການຫຸ້ມຫໍ່ຂອງຖັນ slurry ຄວາມກົດດັນ. ຊ້າໆເພື່ອປ້ອງກັນຄວາມເສຍຫາຍພາຍໃນຖັນ.ຖອດຄໍລໍາອອກຈາກຫນ່ວຍບັນຈຸ slurry ແລະເຊື່ອມຕໍ່ fitting ອື່ນກັບ inlet ແລະລະບົບ LC ເພື່ອກວດກາເບິ່ງປະສິດທິພາບຂອງຕົນ.
ປັ໊ມ LC (10AD Shimadzu, ຍີ່ປຸ່ນ), ຫົວສີດ (Valco (USA) C14 W.05) ທີ່ມີ 50nL injection loop, membrane degasser (Shimadzu DGU-14A), ປ່ອງຢ້ຽມ capillary UV-VIS ໄດ້ຖືກສ້າງຂື້ນພິເສດ µLC ອຸປະກອນກວດຈັບອຸປະກອນ (UV-2075) ແລະແກ້ວທີ່ມີສາຍຕໍ່ສາຍ microcolumns ແຄບຫຼາຍຂອງແຖບເຊື່ອມຕໍ່ແລະເສັ້ນຂອບ U. broadning.After packaging, capillaries (50 μm id 365 and reduce union capillaries (50 μm) ໄດ້ຖືກຕິດຕັ້ງຢູ່ທີ່ 1/16″ outlet ຂອງສະຫະພັນການຫຼຸດຜ່ອນ. ການເກັບຂໍ້ມູນແລະການປຸງແຕ່ງ chromatographic ໄດ້ຖືກປະຕິບັດໂດຍໃຊ້ຊອບແວ Multichro 2000. ການຕິດຕາມຢູ່ທີ່ 254 nm Analytes Ornalytes ການວິເຄາະ Chromatographic ໄດ້ຖືກທົດສອບສໍາລັບການວິເຄາະ Chromat. (Northampton, MA).
Albumin ຈາກ serum ຂອງມະນຸດ, ຝຸ່ນ lyophilized, ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 mg ປະສົມກັບ trypsin (1.5 mg), 4.0 M urea (1 mL), ແລະ 0.2 M ammonium bicarbonate (1 mL).ການແກ້ໄຂໄດ້ຖືກ stirred ສໍາລັບ 10 ນາທີແລະເກັບຮັກສາໄວ້ໃນອາບນ້ໍາທີ່ອຸນຫະພູມ 370 ° C, 1 mque ຊົ່ວໂມງຈາກ 37 ° C, 1 mque ຊົ່ວໂມງ. TFA.ກັ່ນຕອງການແກ້ໄຂ ແລະເກັບຮັກສາໄວ້ຕໍ່າກວ່າ 4 °C.
ການແຍກສ່ວນປະສົມຂອງ peptide ແລະ HSA trypsin digests ໄດ້ຖືກປະເມີນແຍກຕ່າງຫາກຢູ່ໃນຖັນ PMP. ກວດເບິ່ງການແຍກສ່ວນປະສົມ peptide ແລະ trypsin digest ຂອງ HSA ໂດຍຖັນ PMP ແລະປຽບທຽບຜົນໄດ້ຮັບກັບຖັນ Ascentis Express RP-Amide. ຈໍານວນແຜ່ນທາງທິດສະດີແມ່ນຄິດໄລ່ດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້:
ຮູບພາບ SEM ຂອງອະນຸພາກ silica ເປົ່າແລະອະນຸພາກ silica ຜູກມັດ ligand ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບ. 2 .SEM ຮູບພາບຂອງອະນຸພາກຊິລິກາເປົ່າ (A, B) ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ, ກົງກັນຂ້າມກັບການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ, particles ເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນ spherical ທີ່ອະນຸພາກໄດ້ຖືກຍືດຕົວຫຼືມີຄວາມສົມດຸນທີ່ບໍ່ສະຫມໍ່າສະເຫມີ. ດ້ານຂອງອະນຸພາກ silica ຜູກມັດ ligand (C, D) ແມ່ນ smoother ກ່ວາຂອງຕ່ອງໂສ້ຂອງ silica ເປົ່າ, ເຊິ່ງອາດຈະເປັນ polystys ຂອງ particles. ດ້ານຂອງອະນຸພາກ silica.
ການສະແກນຮູບພາບກ້ອງຈຸລະທັດເອເລັກໂຕຣນິກຂອງອະນຸພາກຊິລິກາເປົ່າ (A, B) ແລະອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດ ligand (C, D).
ການແຜ່ກະຈາຍຂະໜາດຂອງອະນຸພາກຂອງ silica ເປົ່າ ແລະ ອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດດ້ວຍ ligand ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 3(A).ເສັ້ນໂຄ້ງການແຜ່ກະຈາຍຂະໜາດຂອງອະນຸພາກທີ່ອີງໃສ່ປະລິມານໄດ້ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຂະໜາດຂອງອະນຸພາກຊິລິກາເພີ່ມຂຶ້ນຫຼັງຈາກການປ່ຽນແປງທາງເຄມີ (ຮູບ 3A).ຂໍ້ມູນການແຜ່ກະຈາຍຂະໜາດຂອງອະນຸພາກຂອງອະນຸພາກຊິລິກາຈາກການສຶກສາເມື່ອປຽບທຽບກັບປະລິມານ 1, ຂະໜາດກ່ອນໜ້ານີ້. d(0.5), ຂອງ PMP ແມ່ນ 3.36 μm, ເມື່ອທຽບກັບການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາກັບ ad(0.5) ມູນຄ່າຂອງ 3.05 μm (polystyrene-bound silica particles) 34. batch ນີ້ມີການແຜ່ກະຈາຍຂະຫນາດຂອງອະນຸພາກແຄບເມື່ອທຽບກັບການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາເນື່ອງຈາກອັດຕາສ່ວນທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງ PEG, urea, particles ປະຕິກິລິຍາຂອງອາຊິດ, ແລະ ticarticle ໄລຍະຂອງອາຊິດເລັກນ້ອຍ. ຂະຫນາດໃຫຍ່ກ່ວາໄລຍະອະນຸພາກຊິລິກາ polystyrene ຜູກມັດທີ່ພວກເຮົາໄດ້ສຶກສາກ່ອນຫນ້ານີ້. ນີ້ຫມາຍຄວາມວ່າການທໍາງານຫນ້າຂອງອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ມີ styrene ພຽງແຕ່ຝາກຊັ້ນ polystyrene (0.97 µm) ເທິງຫນ້າດິນຊິລິກາ, ໃນຂະນະທີ່ໃນໄລຍະ PMP ຄວາມຫນາຂອງຊັ້ນແມ່ນ 1.38 µm.
ການແຜ່ກະຈາຍຂະໜາດຂອງອະນຸພາກ (A) ແລະການກະຈາຍຂະໜາດຂອງຮູຂຸມຂົນ (B) ຂອງອະນຸພາກຊິລິກາເປົ່າ ແລະອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດ ligand.
ຂະໜາດຂອງຮູຂຸມຂົນ, ບໍລິມາດຂອງຮູຂຸມຂົນ ແລະພື້ນທີ່ຂອງອະນຸພາກຊິລິກາຂອງການສຶກສາໃນປັດຈຸບັນແມ່ນໃຫ້ຢູ່ໃນຕາຕະລາງ 1(B).ໂປຣໄຟລ໌ PSD ຂອງອະນຸພາກຊິລິກາເປົ່າ ແລະອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດ ligand ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບ 3(B).ຜົນໄດ້ຮັບແມ່ນທຽບກັບການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ. ຂະຫນາດ pore ຂອງ silica ເປົ່າແລະ 10 particles, 23 ຜູກມັດ. ຕາມລໍາດັບ, ເຊິ່ງຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າຂະຫນາດ pore ຫຼຸດລົງ 69 ຫຼັງຈາກການປ່ຽນແປງທາງເຄມີ, ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງ 1(B), ແລະການປ່ຽນແປງຂອງເສັ້ນໂຄ້ງແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 3(B). ເຊັ່ນດຽວກັນ, ປະລິມານ pore ຂອງອະນຸພາກຊິລິກາຫຼຸດລົງຈາກ 0.67 ຫາ 0.58 cm3/g ຫຼັງຈາກການດັດແກ້ຂອງສານເຄມີແມ່ນ 16 ທີ່ຢູ່ໃນປະຈຸບັນ. m2/g, ເຊິ່ງປຽບທຽບກັບການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ (124 m2/g). ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງ 1(B), ພື້ນທີ່ຫນ້າດິນ (m2 / g) ຂອງອະນຸພາກຊິລິກາຍັງຫຼຸດລົງຈາກ 116 m2 / g ເປັນ 105 m2 / g ຫຼັງຈາກການປ່ຽນແປງທາງເຄມີ.
ຜົນໄດ້ຮັບຂອງການວິເຄາະອົງປະກອບຂອງໄລຍະ stationary ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງ 2.The carbon loading ຂອງໄລຍະ stationary ປະຈຸບັນແມ່ນ 6.35%, ເຊິ່ງຕ່ໍາກວ່າການໂຫຼດກາກບອນຂອງການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ (polystyrene ຜູກມັດອະນຸພາກຊິລິກາ, 7.93% 35 ແລະ 10.21%, ຕາມລໍາດັບ) 42. ເນື່ອງຈາກວ່າການໂຫຼດກາກບອນຂອງ SP ເພີ່ມເຕີມໃນໄລຍະປະຈຸບັນ, ການກະກຽມຂອງ stationary ແມ່ນຕ່ໍາ. ບາງ ligands ຂົ້ວໂລກເຊັ່ນ phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) ແລະ 4-hydroxy-TEMPO ຖືກນໍາໃຊ້. ນ້ໍາຫນັກໄນໂຕຣເຈນຂອງໄລຍະ stationary ໃນປັດຈຸບັນແມ່ນ 2.21%, ເມື່ອທຽບກັບ 0.1735 ແລະ 0.85% ໂດຍນ້ໍາຫນັກຂອງໄນໂຕຣເຈນໃນການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາ, ຕາມລໍາດັບ. ນີ້ຫມາຍຄວາມວ່າ wt % ຂອງໄນໂຕຣເຈນໄລຍະປະຈຸບັນແມ່ນສູງກວ່າ. phenylmaleimide.ເຊັ່ນດຽວກັນ, ການໂຫຼດຄາບອນຂອງຜະລິດຕະພັນ (4) ແລະ (5) ແມ່ນ 2.7% ແລະ 2.9%, ຕາມລໍາດັບ, ໃນຂະນະທີ່ການໂຫຼດຄາບອນຂອງຜະລິດຕະພັນສຸດທ້າຍ (6) ແມ່ນ 6.35%, ດັ່ງທີ່ສະແດງໃນຕາຕະລາງ 2. ການສູນເສຍນ້ໍາຫນັກໄດ້ຖືກກວດສອບດ້ວຍໄລຍະປະຈໍາການ PMP, ແລະເສັ້ນໂຄ້ງ TGA ນ້ໍາຫນັກແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນ TGAs 6%. ເສັ້ນໂຄ້ງທີ່ດີ 8. ດ້ວຍການໂຫຼດຄາບອນ (6.35%) ເນື່ອງຈາກວ່າ ligands ບໍ່ພຽງແຕ່ປະກອບດ້ວຍ C ແຕ່ຍັງ N, O, ແລະ H.
phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ligand ໄດ້ຖືກເລືອກສໍາລັບການດັດແປງພື້ນຜິວຂອງອະນຸພາກຊິລິກາເນື່ອງຈາກວ່າມັນມີກຸ່ມ phenylmaleimide ຂົ້ວໂລກແລະກຸ່ມ vinylisocyanate. ກຸ່ມ Vinyl isocyanate ສາມາດປະຕິກິລິຢາເພີ່ມເຕີມກັບ styrene ດ້ວຍການດໍາລົງຊີວິດຂອງ polymerization ຮາກ. ເຫດຜົນທີສອງແມ່ນການໃສ່ກຸ່ມທີ່ມີປະຕິສໍາພັນຂອງສະຖານີ electrostatic ປານກາງທີ່ບໍ່ມີຄວາມເຂັ້ມແຂງແລະປະຕິສໍາພັນລະຫວ່າງ analyte. phenylmaleimide moiety ບໍ່ມີຄ່າ virtual ຢູ່ທີ່ pH ປົກກະຕິ. polarity ຂອງໄລຍະ stationary ສາມາດຄວບຄຸມໄດ້ໂດຍປະລິມານທີ່ດີທີ່ສຸດຂອງ styrene ແລະເວລາຕິກິຣິຍາຂອງ polymerization ຮາກຟຣີ. ຂັ້ນຕອນສຸດທ້າຍຂອງຕິກິຣິຍາ (ໂພລີເມີ radical ຟຣີ) ແມ່ນສໍາຄັນແລະສາມາດປ່ຽນແປງ polarity ຂອງໄລຍະ stationary ໄດ້. ການວິເຄາະອົງປະກອບໄດ້ຖືກປະຕິບັດເພື່ອກວດກາເບິ່ງປະລິມານການໂຫຼດຂອງຄາບອນທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນ. ເວລາຕິກິຣິຍາເພີ່ມການໂຫຼດຄາບອນຂອງໄລຍະ stationary ແລະໃນທາງກັບກັນ.SPs ທີ່ກະກຽມດ້ວຍຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງ styrene ມີການໂຫຼດຄາບອນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ. ອີກເທື່ອຫນຶ່ງ, ໂຫຼດໄລຍະ stationary ເຫຼົ່ານີ້ເຂົ້າໄປໃນຖັນສະແຕນເລດແລະກວດເບິ່ງປະສິດທິພາບ chromatographic ຂອງເຂົາເຈົ້າ (ການຄັດເລືອກ, ຄວາມລະອຽດ, ຄ່າ N, ແລະອື່ນໆ). ໂດຍອີງໃສ່ການທົດລອງເຫຼົ່ານີ້, ສູດທີ່ດີທີ່ສຸດໄດ້ຖືກເລືອກເພື່ອກະກຽມໄລຍະການເກັບຮັກສາ polaryte PMP ເພື່ອຮັບປະກັນການຄວບຄຸມທີ່ດີ.
ຫ້າປະສົມ peptide (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) ຍັງຖືກປະເມີນໂດຍໃຊ້ຖັນ PMP ໂດຍໃຊ້ໄລຍະມືຖື; 60/40 (v/v) acetonitrile/water (0.1% TFA) ໃນອັດຕາການໄຫຼຂອງ 80 μL/ນາທີ. ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂທີ່ດີທີ່ສຸດຂອງ elution, ຈໍານວນແຜ່ນທິດສະດີ (N) ຕໍ່ຖັນ (100 × 1.8 ມມ id) ແມ່ນ 20,000 ± 100 (200,000 T plates). ສາມຖັນ PMP ແລະ chromatograms ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບ 5A. ການວິເຄາະໄວໃນຖັນ PMP ທີ່ມີອັດຕາການໄຫຼສູງ (700 μL / ນາທີ), ຫ້າ peptides ໄດ້ຖືກ eluted ພາຍໃນຫນຶ່ງນາທີ, ຄ່າ N ແມ່ນດີຫຼາຍ, 13,500 ± 330 ຕໍ່ຖັນ (100 × 1.5 ມມ / 0 ມມ), 100 × 1.8 ມມ. (ຮູບ 5B).ສາມຖັນທີ່ມີຂະຫນາດດຽວກັນ (100 × 1.8 ມມ id) ໄດ້ຖືກບັນຈຸດ້ວຍສາມໄລຍະ PMP stationary ທີ່ແຕກຕ່າງກັນເພື່ອກວດສອບການແຜ່ພັນ. ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງການວິເຄາະສໍາລັບແຕ່ລະຖັນໄດ້ຖືກບັນທຶກໄວ້ໂດຍໃຊ້ເງື່ອນໄຂ elution ທີ່ດີທີ່ສຸດແລະຈໍານວນແຜ່ນທິດສະດີ N ແລະເວລາເກັບຮັກສາເພື່ອແຍກສ່ວນປະສົມຂອງ TMP ທີ່ສະແດງຢູ່ໃນແຕ່ລະຖັນ. 4.ການສືບພັນຂອງຖັນ PMP ກ່ຽວຂ້ອງກັນດີກັບຄ່າ % RSD ທີ່ຕໍ່າຫຼາຍ, ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງ 3.
ການແຍກປະສົມ peptide ໃນຖັນ PMP (B) ແລະຖັນ Ascentis Express RP-Amide (A); ໄລຍະມືຖື 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), ຂະໜາດຖັນ PMP (100 × 1.8 mm id); analytical ລໍາດັບ elution ຂອງທາດປະສົມ: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) ແລະ 5 (leucine) ອາຊິດ enkephalin)).
ຖັນ PMP (100 × 1.8 ມມ id) ໄດ້ຖືກປະເມີນສໍາລັບການແຍກການຍ່ອຍສະຫຼາຍ tryptic ຂອງ albumin serum ຂອງມະນຸດໃນ chromatography ຂອງແຫຼວທີ່ມີປະສິດທິພາບສູງ. ໂຄມາໂຕແກຣມໃນຮູບ 6 ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກແຍກອອກໄດ້ດີແລະຄວາມລະອຽດແມ່ນດີຫຼາຍ. ການຍ່ອຍອາຫານຂອງ HSA ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍໃຊ້ອັດຕາການໄຫຼຂອງ 100 µL 70 ໂຕນ / ນາທີ, ມືຖືແລະໄລຍະມືຖື. 0.1% TFA.As ສະແດງໃຫ້ເຫັນໃນ chromatogram (ຮູບ 6), ການຍ່ອຍອາຫານ HSA ໄດ້ຖືກແບ່ງອອກເປັນ 17 ສູງສຸດທີ່ສອດຄ້ອງກັນກັບ 17 peptides. ປະສິດທິພາບການແຍກຂອງແຕ່ລະຈຸດສູງສຸດໃນການຍ່ອຍອາຫານ HSA ໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ແລະຄ່າຕ່າງໆແມ່ນໃຫ້ຢູ່ໃນຕາຕະລາງ 5.
A tryptic digest ຂອງ HSA (100 × 1.8 mm id) ຖືກແຍກຢູ່ໃນຖັນ PMP; ອັດຕາການໄຫຼ (100 µL/ນາທີ), ໄລຍະມືຖື 60/40 acetonitrile/water ກັບ 0.1% TFA.
ບ່ອນທີ່ L ເປັນຄວາມຍາວຂອງຖັນ, η ແມ່ນຄວາມຫນືດຂອງໄລຍະມືຖື, ΔP ແມ່ນຄວາມກົດດັນກັບຄືນໄປບ່ອນຂອງຖັນ, ແລະ u ແມ່ນຄວາມໄວເສັ້ນຂອງໄລຍະມືຖື. ການ permeability ຂອງຖັນ PMP ແມ່ນ 2.5 × 10-14 m2, ອັດຕາການໄຫຼແມ່ນ 25 μL / ນາທີ, ແລະ 60/40 v / v ຖັນ ACN / ນ້ໍາແມ່ນໃຊ້ 10 MP. mm id) ແມ່ນຄ້າຍຄືກັນກັບການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ Ref.34.The permeability ຂອງຖັນ packed ມີອະນຸພາກ porous superficially ແມ່ນ: 1.7 × 10-15 ສໍາລັບ 1.3 μm particles, 3.1 × 10-15 ສໍາລັບ 1.7 μm particles, 5.2 × 102.45 m ແລະ 1.7 μm particles. μm particles ສໍາລັບ 5 μm particles 43. ດັ່ງນັ້ນ, permeability ຂອງໄລຍະ PMP ແມ່ນຄ້າຍຄືກັນກັບ 5 μm core-shell particles.
ບ່ອນທີ່ Wx ແມ່ນນ້ຳໜັກຂອງຖັນທີ່ບັນຈຸດ້ວຍ chloroform, Wy ແມ່ນນ້ຳໜັກຂອງຖັນທີ່ບັນຈຸດ້ວຍ methanol, ແລະ ρ ແມ່ນຄວາມໜາແໜ້ນຂອງສານລະລາຍ. ຄວາມໜາແໜ້ນຂອງ methanol (ρ = 0.7866) ແລະ chloroform (ρ = 1.484).ຄວາມ porosity ທັງໝົດຂອງ SILICA PARTICLES (108 mm). ແລະຄໍລໍາ C18-Urea 31 ທີ່ພວກເຮົາໄດ້ສຶກສາກ່ອນຫນ້ານີ້ແມ່ນ 0.63 ແລະ 0.55 ຕາມລໍາດັບ. ນີ້ຫມາຍຄວາມວ່າການມີທາດຢູເຣນຽມລິການຫຼຸດລົງການ permeability ຂອງໄລຍະ stationary. ໃນອີກດ້ານຫນຶ່ງ, porosity ທັງຫມົດຂອງຖັນ PMP (100 × 1.8 ມມ id) ແມ່ນ 0.60.P ຖັນຂອງ permeability ຕ່ໍາກວ່າຖັນ perme ໄດ້. ອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດ C18 ເພາະວ່າຢູ່ໃນໄລຍະ stationary ປະເພດ C18, ligands C18 ຕິດກັບອະນຸພາກຊິລິກາເປັນສາຍຕ່ອງໂສ້ເສັ້ນ, ໃນຂະນະທີ່ຢູ່ໃນໄລຍະ stationary ປະເພດ polystyrene, ຊັ້ນໂພລີເມີທີ່ຂ້ອນຂ້າງຫນາກໍ່ຖືກສ້າງຂື້ນຢູ່ອ້ອມຮອບມັນ. ໃນການທົດລອງທົ່ວໄປ, porosity ຖັນແມ່ນຄິດໄລ່ເປັນ:
ຮູບ 7A,B ສະແດງຖັນ PMP (100 × 1.8 mm id) ແລະຖັນ Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 mm id) ໂດຍໃຊ້ເງື່ອນໄຂ elution ດຽວກັນ (ເຊັ່ນ: 60/40 ACN/H2O ແລະ 0.1% TFA). ) ຂອງດິນຕອນ Van Deemter. ທາດປະສົມ peptide ທີ່ເລືອກ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) ໄດ້ຖືກກະກຽມໃນ 20 µL/ ອັດຕາການໄຫຼຕໍ່າສຸດຂອງທັງສອງຖັນແມ່ນ 800 µL/min. ອັດຕາການໄຫຼຂອງຖັນ HETP ສູງສຸດ µ0 µMP (ສູງສຸດ 800 µL/ນາທີ). ແລະຖັນ Ascentis Express RP-Amide ແມ່ນ 2.6 µm ແລະ 3.9 µm, ຕາມລໍາດັບ. ຄ່າ HETP ຊີ້ໃຫ້ເຫັນວ່າປະສິດທິພາບການແຍກຂອງຖັນ PMP (100 × 1.8 mm id) ແມ່ນດີກ່ວາຫຼາຍໃນການຄ້າ Ascentis Express RP-Amide ສະແດງໃຫ້ເຫັນຖັນ Deem (100 × 7A8). ການຫຼຸດລົງຂອງຄ່າ N ກັບການເພີ່ມຂຶ້ນຂອງການໄຫຼແມ່ນບໍ່ສໍາຄັນເມື່ອທຽບກັບການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ. ປະສິດທິພາບການແຍກທີ່ສູງຂຶ້ນຂອງຖັນ PMP (100 × 1.8 mm id) ເມື່ອທຽບກັບຄໍລໍາ Ascentis Express RP-Amide ແມ່ນອີງໃສ່ການປັບປຸງຮູບຮ່າງຂອງອະນຸພາກ, ຂະຫນາດ, ແລະຂັ້ນຕອນການຫຸ້ມຫໍ່ຖັນສະລັບສັບຊ້ອນທີ່ໃຊ້ໃນການເຮັດວຽກໃນປະຈຸບັນ 34.
(A) van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity) ທີ່ໄດ້ຮັບໂດຍໃຊ້ຖັນ PMP (100 × 1.8 mm id) ໃນ 60/40 ACN/H2O ກັບ 0.1% TFA.(B) van Deemter plot (HETP versus mobile phase linear velocity) ໄດ້ຮັບໂດຍໃຊ້ຖັນ Ascentis Express (RP10-8 mm) 60/40 ACN/H2O ກັບ 0.1% TFA.
ໄລຍະສະຖານີ polystyrene ຝັງຢູ່ຂົ້ວໂລກໄດ້ຖືກກະກຽມແລະການປະເມີນສໍາລັບການແຍກສານປະສົມ peptide ສັງເຄາະແລະການຍ່ອຍສະຫຼາຍ trypsin ຂອງ albumin serum ຂອງມະນຸດ (HAS) ໃນ chromatography ແຫຼວປະສິດທິພາບສູງ. ການປະຕິບັດ chromatographic ຂອງຖັນ PMP ສໍາລັບ peptide ປະສົມແມ່ນດີເລີດໃນປະສິດທິພາບການແຍກແລະການແກ້ໄຂ. ການປັບປຸງປະສິດທິພາບການແຍກຂອງ PMP ຂະຫນາດຂອງຖັນ, ຂະຫນາດແລະເຫດຜົນດັ່ງກ່າວ. particles silica, ການສັງເຄາະຄວບຄຸມຂອງໄລຍະ stationary, ແລະການຫຸ້ມຫໍ່ຖັນສະລັບສັບຊ້ອນ. ນອກຈາກປະສິດທິພາບການແຍກສູງ, ຄວາມກົດດັນກັບຄືນໄປບ່ອນຖັນຕ່ໍາໃນອັດຕາການໄຫຼສູງແມ່ນປະໂຫຍດອີກຢ່າງຫນຶ່ງຂອງໄລຍະ stationary ນີ້. PMP ຄໍລໍາສະແດງໃຫ້ເຫັນການສືບພັນທີ່ດີແລະສາມາດນໍາໃຊ້ສໍາລັບການວິເຄາະຂອງປະສົມ peptide ແລະການຍ່ອຍສະຫຼາຍ trypsin ຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກຕ່າງໆ. chromatography ຂອງແຫຼວ. ໃນອະນາຄົດ, ຖັນ PMP ຍັງຈະຖືກປະເມີນສໍາລັບການແຍກທາດໂປຼຕີນແລະພູມຕ້ານທານ monoclonal.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ການຄົ້ນຄວ້າກ່ຽວກັບລະບົບການແຍກ Peptide ໂດຍ Reversed Phase Chromatography Part I: ການພັດທະນາ Column Characterization Protocol.J. Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. et al. ປັບປຸງ peptides ທີ່ມີການເຄື່ອນໄຫວທີ່ຖືກອອກແບບມາສໍາລັບການປິ່ນປົວພະຍາດຕິດຕໍ່.Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. Synthetic therapeutic peptides: science and the market.drug discovery.15 (1-2) today, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.10.
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. Advanced Proteomic Liquid Chromatography.J. Chromatography.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. et al. Advanced chromatography-sspectrometry ຂອງແຫຼວ ຊ່ວຍໃຫ້ການລວມຕົວຂອງ metabolomics ເປົ້າໝາຍຢ່າງກວ້າງຂວາງ ແລະ proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ ບົດບາດຂອງ UHPLC ໃນການພັດທະນາຢາເສບຕິດ.J. Sep. Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM ພື້ນຖານແລະພາກປະຕິບັດຂອງ chromatography ຂອງແຫຼວຄວາມກົດດັນສູງສຸດສໍາລັບການແຍກຕ່າງຫາກຢ່າງໄວວາ.J. Sep. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. ຄໍາຮ້ອງສະຫມັກຂອງ chromatography ແຫຼວທີ່ມີປະສິດທິພາບສູງໃນການພັດທະນາຢາ. Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. et al.Monolithic macroporous hydrogels ກະກຽມຈາກ emulsions ໄລຍະພາຍໃນສູງຂອງນ້ໍາມັນໃນນ້ໍາສໍາລັບການຊໍາລະລ້າງປະສິດທິພາບຂອງ enteroviruses.Chemical.Britain.J. 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA ບົດບາດຂອງ chromatography ແຫຼວໃນ proteomics.J. Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L.&Guillarme, D. ທ່າອ່ຽງທີ່ພົ້ນເດັ່ນຂື້ນໃນການແຍກທາດໂຄຣມາໂຕຣຂອງແຫຼວໄລຍະປີ້ນກັນຂອງ peptides ແລະທາດໂປຼຕີນໃນການປິ່ນປົວ: ທິດສະດີ ແລະການນຳໃຊ້.J. Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC ການແຍກ peptides ສອງມິຕິລະດັບໂດຍໃຊ້ລະບົບ RP-RP-HPLC ໂດຍໃຊ້ຄ່າ pH ທີ່ແຕກຕ່າງກັນໃນຂະຫນາດແຍກທໍາອິດແລະທີສອງ.J. Sep. Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. et al. ລັກສະນະການໂອນມະຫາຊົນແລະການປະຕິບັດ kinetic ຂອງຖັນ chromatographic ທີ່ມີປະສິດທິພາບສູງທີ່ບັນຈຸ C18 sub-2 μmຢ່າງເຕັມສ່ວນແລະອະນຸພາກ porous superficially ໄດ້ຖືກສືບສວນ.J. Sep. Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. et al. ແນວໂນ້ມທີ່ຜ່ານມາ ແລະສິ່ງທ້າທາຍໃນການວິເຄາະໃນການໂດດດ່ຽວ, ການກໍານົດ ແລະການກວດສອບຂອງພືດ bioactive peptides.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s0018x2016.
Mueller, JB et al.ພູມສັນຖານ proteomic ຂອງອານາຈັກແຫ່ງຊີວິດ.Nature 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. et al.Downstream processing of therapeutic peptides by preparative liquid chromatography.Molecule (Basel, Switzerland) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. Mixed-mode chromatography ແລະການນໍາໃຊ້ຂອງມັນກັບ biopolymers.J. Chromatography.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y.& Sun, Y. Ligands ສໍາລັບການປະສົມຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກ chromatography: ຫຼັກການ, ລັກສະນະ, ແລະການອອກແບບ.J. Biotechnology.144(1), 3-11 (2009).