ຂອບໃຈທີ່ທ່ານເຂົ້າມາຢ້ຽມຊົມ Nature.com. ໂປຣແກຣມທ່ອງເວັບລຸ້ນທີ່ທ່ານກຳລັງໃຊ້ຢູ່ມີການຮອງຮັບ CSS ທີ່ຈຳກັດ. ເພື່ອປະສົບການທີ່ດີທີ່ສຸດ, ພວກເຮົາແນະນຳໃຫ້ທ່ານໃຊ້ໂປຣແກຣມທ່ອງເວັບທີ່ອັບເດດແລ້ວ (ຫຼືປິດໂໝດຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ໃນ Internet Explorer). ໃນລະຫວ່າງນີ້, ເພື່ອຮັບປະກັນການສະໜັບສະໜູນຢ່າງຕໍ່ເນື່ອງ, ພວກເຮົາຈະສະແດງເວັບໄຊໂດຍບໍ່ມີຮູບແບບ ແລະ JavaScript.
ອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ມີຮູພຸນໄດ້ຖືກກະກຽມໂດຍວິທີການ sol-gel ດ້ວຍການດັດແປງບາງຢ່າງເພື່ອໃຫ້ໄດ້ອະນຸພາກ macroporous. ອະນຸພາກເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ຖືກອະນຸພັນໂດຍການໂພລີເມີໄຣເຊຊັນການແຍກສ່ວນຂອງຕ່ອງໂສ້ການເພີ່ມເຕີມແບບປີ້ນກັບໄດ້ (RAFT) ດ້ວຍ N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) ແລະ styrene ເພື່ອກະກຽມການປະສົມ N-phenylmaleimide ຂອງໂພລີສະໄຕຣີນ (PMP) ໄລຍະຢຸດນິ້ງ. ຖັນເຫຼັກກ້າເຈາະແຄບ (100 × 1.8 ມມ id) ໄດ້ຖືກບັນຈຸໂດຍການຫຸ້ມຫໍ່ slurry. ການປະເມີນຜົນການແຍກຖັນ PMP ຂອງສ່ວນປະສົມ peptide ທີ່ປະກອບດ້ວຍ peptides ຫ້າຊະນິດ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) ແລະ ການຍ່ອຍສະຫຼາຍ trypsin ຂອງ albumin ໃນເລືອດຂອງມະນຸດ (HAS). ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂການລະລາຍທີ່ດີທີ່ສຸດ, ຈຳນວນແຜ່ນທາງທິດສະດີຂອງສ່ວນປະສົມ peptide ແມ່ນສູງເຖິງ 280,000 ແຜ່ນ/m². ການປຽບທຽບປະສິດທິພາບການແຍກຂອງຖັນທີ່ພັດທະນາກັບ ໃນດ້ານປະສິດທິພາບ ແລະ ຄວາມລະອຽດຂອງການແຍກ, ຖັນ Ascentis Express RP-Amide ທາງການຄ້າໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນວ່າປະສິດທິພາບການແຍກຂອງຖັນ PMP ແມ່ນດີກ່ວາຖັນທາງການຄ້າ.
ໃນຊຸມປີມໍ່ໆມານີ້, ອຸດສາຫະກຳຢາຊີວະພາບໄດ້ກາຍເປັນຕະຫຼາດໂລກທີ່ຂະຫຍາຍຕົວດ້ວຍສ່ວນແບ່ງຕະຫຼາດທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນຢ່າງຫຼວງຫຼາຍ. ດ້ວຍການເຕີບໂຕຢ່າງໄວວາຂອງອຸດສາຫະກຳຢາຊີວະພາບ1,2,3, ການວິເຄາະເພບໄທດ໌ ແລະ ໂປຣຕີນແມ່ນເປັນທີ່ຕ້ອງການຢ່າງສູງ. ນອກເໜືອໄປຈາກເພບໄທດ໌ເປົ້າໝາຍ, ສິ່ງເຈືອປົນຫຼາຍຢ່າງຖືກສ້າງຂຶ້ນໃນລະຫວ່າງການສັງເຄາະເພບໄທດ໌, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງຕ້ອງການການກັ່ນຕອງໂຄຣມາໂຕກຣາຟີເພື່ອໃຫ້ໄດ້ເພບໄທດ໌ທີ່ມີຄວາມບໍລິສຸດທີ່ຕ້ອງການ. ການວິເຄາະ ແລະ ລັກສະນະຂອງໂປຣຕີນໃນນ້ຳໃນຮ່າງກາຍ, ເນື້ອເຍື່ອ ແລະ ຈຸລັງແມ່ນວຽກທີ່ທ້າທາຍຫຼາຍເນື່ອງຈາກມີຈຳນວນຫຼາຍຂອງຊະນິດພັນທີ່ອາດຈະກວດພົບໄດ້ໃນຕົວຢ່າງດຽວ. ເຖິງແມ່ນວ່າເຄື່ອງວັດແທກມວນສານເປັນເຄື່ອງມືທີ່ມີປະສິດທິພາບສຳລັບການຈັດລຳດັບເພບໄທດ໌ ແລະ ໂປຣຕີນ, ຖ້າຕົວຢ່າງດັ່ງກ່າວຖືກສັກເຂົ້າໄປໃນເຄື່ອງວັດແທກມວນສານໃນຄັ້ງດຽວ, ການແຍກຈະບໍ່ເໝາະສົມ. ບັນຫານີ້ສາມາດຫຼຸດຜ່ອນໄດ້ໂດຍການຈັດຕັ້ງປະຕິບັດການແຍກໂຄຣມາໂຕກຣາຟີດຂອງແຫຼວ (LC) ກ່ອນການວິເຄາະ MS, ເຊິ່ງຈະຫຼຸດຜ່ອນຈຳນວນຂອງສານວິເຄາະທີ່ເຂົ້າໄປໃນເຄື່ອງວັດແທກມວນສານໃນເວລາກຳນົດ4,5,6. ນອກຈາກນັ້ນ, ໃນລະຫວ່າງການແຍກໄລຍະຂອງແຫຼວ, ສານວິເຄາະສາມາດສຸມໃສ່ໃນພື້ນທີ່ແຄບ, ດັ່ງນັ້ນຈຶ່ງສຸມໃສ່ສານວິເຄາະເຫຼົ່ານີ້ ແລະ ປັບປຸງການກວດຈັບ MS. ຄວາມອ່ອນໄຫວ. ໂຄຣມາໂຕກຣາຟີຂອງແຫຼວ (LC) ໄດ້ກ້າວໜ້າຢ່າງຫຼວງຫຼາຍໃນໄລຍະທົດສະວັດທີ່ຜ່ານມາ ແລະ ໄດ້ກາຍເປັນເຕັກນິກທີ່ໄດ້ຮັບຄວາມນິຍົມໃນການວິເຄາະໂປຣຕີໂອມິກ7,8,9,10.
ໂຄຣມາໂຕກຣາຟີແຫຼວໄລຍະປີ້ນກັບກັນ (RP-LC) ຖືກນໍາໃຊ້ຢ່າງກວ້າງຂວາງສໍາລັບການບໍລິສຸດ ແລະ ການແຍກສ່ວນປະສົມຂອງເພບໄທດ໌ໂດຍໃຊ້ຊິລິກາທີ່ດັດແປງ octadecyl (ODS) ເປັນໄລຍະຄົງທີ່11,12,13. ຢ່າງໃດກໍຕາມ, ໄລຍະຄົງທີ່ RP ບໍ່ໄດ້ໃຫ້ການແຍກເພບໄທດ໌ ແລະ ໂປຣຕີນທີ່ໜ້າພໍໃຈເນື່ອງຈາກໂຄງສ້າງທີ່ສັບສົນ ແລະ ລັກສະນະ amphiphilic ຂອງມັນ14,15. ດັ່ງນັ້ນ, ໄລຍະຄົງທີ່ທີ່ອອກແບບພິເສດແມ່ນຕ້ອງການເພື່ອວິເຄາະເພບໄທດ໌ ແລະ ໂປຣຕີນທີ່ມີ moieties ທີ່ມີຂົ້ວ ແລະ ບໍ່ມີຂົ້ວເພື່ອພົວພັນກັບ ແລະ ຮັກສາການວິເຄາະເຫຼົ່ານີ້16. ໂຄຣມາໂຕກຣາຟີແບບປະສົມ, ເຊິ່ງໃຫ້ການພົວພັນຫຼາຍຮູບແບບ, ສາມາດເປັນທາງເລືອກອື່ນແທນ RP-LC ສໍາລັບການແຍກເພບໄທດ໌, ໂປຣຕີນ ແລະ ສ່ວນປະສົມທີ່ສັບສົນອື່ນໆ. ໄລຍະຄົງທີ່ແບບປະສົມຫຼາຍໄລຍະໄດ້ຖືກກະກຽມ, ແລະ ຖັນທີ່ເຕັມໄປດ້ວຍໄລຍະເຫຼົ່ານີ້ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການແຍກເພບໄທດ໌ ແລະ ໂປຣຕີນ17,18,19,20,21. ໄລຍະຄົງທີ່ແບບປະສົມ (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, ການແຊກແຊງຂົ້ວ/RPLC) ແມ່ນເຫມາະສົມສໍາລັບການແຍກເພບໄທດ໌ ແລະ ໂປຣຕີນເນື່ອງຈາກ ການມີຢູ່ຂອງທັງກຸ່ມທີ່ມີຂົ້ວ ແລະ ບໍ່ມີຂົ້ວ22,23,24,25,26,27,28. ໃນທຳນອງດຽວກັນ, ໄລຍະທີ່ຢູ່ກັບທີ່ທີ່ມີການແຊກຊ້ອນຂອງຂົ້ວກັບກຸ່ມຂົ້ວທີ່ມີພັນທະໂຄວາເລນສະແດງໃຫ້ເຫັນພະລັງການແຍກທີ່ດີ ແລະ ການເລືອກທີ່ເປັນເອກະລັກສຳລັບສານວິເຄາະທີ່ມີຂົ້ວ ແລະ ບໍ່ມີຂົ້ວ, ຍ້ອນວ່າການແຍກແມ່ນຂຶ້ນກັບການພົວພັນລະຫວ່າງສານວິເຄາະ ແລະ ໄລຍະທີ່ຢູ່ກັບທີ່. ການພົວພັນຫຼາຍຮູບແບບ 29, 30, 31, 32. ເມື່ອບໍ່ດົນມານີ້, Zhang ແລະ ຄະນະ 30 ໄດ້ກະກຽມໄລຍະທີ່ຢູ່ກັບໂພລີອາມີນທີ່ມີປາຍໂດເດຊິວ ແລະ ແຍກໄຮໂດຄາບອນ, ຢາຕ້ານອາການຊຶມເສົ້າ, ຟລາໂວນອຍ, ນິວຄລີໂອໄຊ, ເອສໂຕຣເຈນ, ແລະ ສານວິເຄາະອື່ນໆອີກຈຳນວນໜຶ່ງໄດ້ສຳເລັດ. ສານແຊກຊ້ອນຂອງຂົ້ວມີທັງກຸ່ມທີ່ມີຂົ້ວ ແລະ ບໍ່ມີຂົ້ວ, ສະນັ້ນມັນສາມາດໃຊ້ເພື່ອແຍກເພບໄທ ແລະ ໂປຣຕີນທີ່ມີທັງໂມອີຕີທີ່ບໍ່ລະລາຍນ້ຳ ແລະ ບໍ່ລະລາຍນ້ຳ. ຖັນທີ່ຝັງຢູ່ໃນຂົ້ວ (ເຊັ່ນ, ຖັນ C18 ທີ່ຝັງຢູ່ໃນເອມິດ) ມີຂາຍທາງການຄ້າພາຍໃຕ້ຊື່ການຄ້າວ່າຖັນ Ascentis Express RP-Amide, ແຕ່ຖັນເຫຼົ່ານີ້ແມ່ນໃຊ້ສຳລັບການວິເຄາະອາມີນ 33 ເທົ່ານັ້ນ.
ໃນການສຶກສາໃນປະຈຸບັນ, ໄລຍະຢຸດນິ້ງທີ່ຝັງຢູ່ໃນຂົ້ວ (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) ໄດ້ຖືກກະກຽມ ແລະ ປະເມີນຜົນສຳລັບການແຍກ peptides ແລະ trypsin digests ຂອງ HSA. ໄລຍະຢຸດນິ້ງໄດ້ຖືກກະກຽມໂດຍໃຊ້ຍຸດທະສາດຕໍ່ໄປນີ້. ອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ມີຮູພຸນໄດ້ຖືກກະກຽມຕາມຂັ້ນຕອນທີ່ໄດ້ໃຫ້ໄວ້ໃນສິ່ງພິມກ່ອນໜ້ານີ້ຂອງພວກເຮົາດ້ວຍການດັດແປງບາງຢ່າງຕໍ່ໂປໂຕຄອນການກະກຽມ. ອັດຕາສ່ວນຂອງ urea, polyethylene glycol (PEG), TMOS, ນ້ຳ ກົດອະຊິຕິກ ໄດ້ຖືກປັບເພື່ອກະກຽມອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ມີຮູພຸນຂະໜາດໃຫຍ່. ອັນທີສອງ, ligand ໃໝ່, phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate, ໄດ້ຖືກສັງເຄາະ ແລະ ນຳໃຊ້ເພື່ອອະນຸພັນອະນຸພາກຊິລິກາເພື່ອກະກຽມໄລຍະຢຸດນິ້ງທີ່ຝັງຢູ່ໃນຂົ້ວ. ໄລຍະຢຸດນິ້ງທີ່ໄດ້ຮັບໄດ້ຖືກບັນຈຸເຂົ້າໄປໃນຖັນເຫຼັກສະແຕນເລດ (100 × 1.8 ມມ id) ໂດຍໃຊ້ໂຄງການຫຸ້ມຫໍ່ທີ່ດີທີ່ສຸດ. ການຫຸ້ມຫໍ່ຖັນໄດ້ຮັບການຊ່ວຍເຫຼືອດ້ວຍການສັ່ນສະເທືອນກົນຈັກເພື່ອຮັບປະກັນວ່າຕຽງທີ່ເປັນເອກະພາບຖືກສ້າງຂຶ້ນພາຍໃນຖັນ. ປະເມີນການແຍກຖັນທີ່ບັນຈຸຂອງສ່ວນປະສົມ peptide ທີ່ປະກອບດ້ວຍ peptides ຫ້າຊະນິດ; (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) ແລະ ການຍ່ອຍ Trypsin ຂອງ albumin ໃນເລືອດຂອງມະນຸດ (HAS). ສ່ວນປະສົມ peptide ແລະ ການຍ່ອຍ trypsin ຂອງ HSA ໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນວ່າແຍກອອກຈາກກັນດ້ວຍຄວາມລະອຽດ ແລະ ປະສິດທິພາບທີ່ດີ. ປະສິດທິພາບການແຍກຂອງຖັນ PMP ໄດ້ຖືກປຽບທຽບກັບຖັນ Ascentis Express RP-Amide. ທັງ peptides ແລະ ໂປຣຕີນໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນວ່າແຍກອອກມາໄດ້ດີ ແລະ ມີປະສິດທິພາບໃນຖັນ PMP, ເຊິ່ງມີປະສິດທິພາບຫຼາຍກ່ວາຖັນ Ascentis Express RP-Amide.
PEG (ໂພລີເອທິລີນໄກຄໍ), ຢູເຣຍ, ກົດອະຊິຕິກ, ທຣີເມທອກຊີ ອໍໂທຊິລິເຄດ (TMOS), ທຣີເມທິລ ຄລໍໂຣຊິເລນ (TMCS), ທຣິບຊິນ, ອາລະບູມິນໃນເລືອດຂອງມະນຸດ (HSA), ແອມໂມນຽມຄລໍໄຣດ໌, ຢູເຣຍ, ເຮັກເຊນ ເມທິລໄດຊິລານ (HMDS), ເມທາຄຣິລອຍຄລໍໄຣດ໌ (MC), ສະໄຕຣີນ, 4-ໄຮດຣອກຊີ-ເທມໂພ, ເບນໂຊອິລ ເປີອອກໄຊດ໌ (BPO), ອາເຊໂຕໄນໄຕຣ (ACN) ເກຣດ HPLC, ເມທານອນ, 2-ໂປຣພານອລ, ແລະ ອາເຊໂຕນ ຊື້ຈາກ Sigma-Aldrich (ເຊນຫຼຸຍ, ລັດມິສຊູຣີ, ສະຫະລັດອາເມລິກາ).
ສ່ວນປະສົມຂອງຢູເຣຍ (8 ກຣາມ), ໂພລີເອທິລີນໄກຄໍ (8 ກຣາມ), ແລະ ກົດອະຊີຕິກ 0.01 N 8 ມລ ໄດ້ຖືກຄົນເປັນເວລາ 10 ນາທີ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນ TMOS 24 ມລ ໄດ້ຖືກເພີ່ມເຂົ້າໄປໃນນັ້ນພາຍໃຕ້ສະພາບທີ່ເຢັນ. ສ່ວນປະສົມປະຕິກິລິຍາໄດ້ຖືກໃຫ້ຄວາມຮ້ອນທີ່ 40°C ເປັນເວລາ 6 ຊົ່ວໂມງ ແລະ ຫຼັງຈາກນັ້ນທີ່ 120°C ເປັນເວລາ 8 ຊົ່ວໂມງໃນເຕົາອົບສະແຕນເລດ. ນ້ຳໄດ້ຖືກຖອກອອກ ແລະ ວັດສະດຸທີ່ເຫຼືອໄດ້ຖືກເຮັດໃຫ້ແຫ້ງທີ່ 70°C ເປັນເວລາ 12 ຊົ່ວໂມງ. ມວນອ່ອນທີ່ແຫ້ງໄດ້ຖືກບົດໃຫ້ລຽບໃນເຕົາອົບ ແລະ ເຜົາທີ່ 550°C ເປັນເວລາ 12 ຊົ່ວໂມງ. ສາມຊຸດໄດ້ຖືກກະກຽມ ແລະ ມີລັກສະນະເພື່ອກວດສອບຄວາມສາມາດໃນການຜະລິດຊ້ຳໄດ້ໃນຂະໜາດຂອງອະນຸພາກ, ຂະໜາດຮູຂຸມຂົນ ແລະ ພື້ນທີ່ຜິວ.
ໂດຍການດັດແປງພື້ນຜິວຂອງອະນຸພາກຊິລິກາດ້ວຍລີແກນ phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) ທີ່ສັງເຄາະໄວ້ກ່ອນແລ້ວ ຕາມດ້ວຍການໂພລີເມີໄຣເຊຊັນແບບ radial ກັບ styrene, ສານປະກອບທີ່ມີກຸ່ມຂົ້ວໂລກໄດ້ຖືກກະກຽມ. ໄລຍະທີ່ຢູ່ກັບທີ່ສຳລັບກ້ອນຫີນ ແລະ ລະບົບຕ່ອງໂສ້ polystyrene. ຂະບວນການກະກຽມໄດ້ຖືກອະທິບາຍໄວ້ຂ້າງລຸ່ມນີ້.
N-phenylmaleimide (200 ມກ) ແລະ methyl vinyl isocyanate (100 ມກ) ຖືກລະລາຍໃນ toluene ແຫ້ງ, ແລະ 0.1 mL ຂອງ 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) ໄດ້ຖືກເພີ່ມໃສ່ flask ປະຕິກິລິຍາເພື່ອກະກຽມ phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate copolymer (PMCP). ສ່ວນປະສົມດັ່ງກ່າວໄດ້ຖືກໃຫ້ຄວາມຮ້ອນທີ່ 60°C ເປັນເວລາ 3 ຊົ່ວໂມງ, ກັ່ນຕອງ ແລະ ຕາກແຫ້ງໃນເຕົາອົບທີ່ 40°C ເປັນເວລາ 3 ຊົ່ວໂມງ.
ອະນຸພາກຊິລິກາແຫ້ງ (2 ກຣາມ) ຖືກກະຈາຍຢູ່ໃນ toluene ແຫ້ງ (100 ມລ), ຄົນໃຫ້ເຂົ້າກັນ ແລະ ສັ່ນສະເທືອນໃນຂວດມົນ 500 ມລ ເປັນເວລາ 10 ນາທີ. PMCP (10 ມກ) ຖືກລະລາຍໃນ toluene ແລະ ຕື່ມລົງໃນຂວດປະຕິກິລິຍາຜ່ານທໍ່ຢອດ. ສ່ວນປະສົມດັ່ງກ່າວຖືກກັ່ນຄືນທີ່ 100°C ເປັນເວລາ 8 ຊົ່ວໂມງ, ກັ່ນຕອງ ແລະ ລ້າງດ້ວຍ acetone ແລະ ອົບແຫ້ງທີ່ 60°C ເປັນເວລາ 3 ຊົ່ວໂມງ. ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດກັບ PMCP (100 ກຣາມ) ຖືກລະລາຍໃນ toluene (200 ມລ) ແລະ 4-hydroxy-TEMPO (2 ມລ) ໄດ້ຖືກເພີ່ມເຂົ້າໃນທີ່ມີ dibutyltin dilaurate 100 µL ເປັນຕົວເລັ່ງປະຕິກິລິຍາ. ສ່ວນປະສົມດັ່ງກ່າວຖືກຄົນທີ່ 50°C ເປັນເວລາ 8 ຊົ່ວໂມງ, ກັ່ນຕອງ ແລະ ອົບແຫ້ງທີ່ 50°C ເປັນເວລາ 3 ຊົ່ວໂມງ.
ສະໄຕຣີນ (1 ມລ), ເບນໂຊອິລເປີອອກໄຊ BPO (0.5 ມລ), ແລະອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຕິດຢູ່ກັບ TEMPO-PMCP (1.5 ກຣາມ) ໄດ້ຖືກກະຈາຍຢູ່ໃນໂທລູອີນ ແລະ ລ້າງອອກດ້ວຍໄນໂຕຣເຈນ. ການໂພລີເມີໄຣເຊຊັນຂອງສະໄຕຣີນໄດ້ຖືກປະຕິບັດຢູ່ທີ່ 100°C ເປັນເວລາ 12 ຊົ່ວໂມງ. ຜະລິດຕະພັນທີ່ໄດ້ຮັບໄດ້ຖືກລ້າງດ້ວຍເມທານອນ ແລະ ຕາກແຫ້ງທີ່ 60°C ຄ້າງຄືນ. ແຜນການປະຕິກິລິຍາໂດຍລວມແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 1.
ຕົວຢ່າງໄດ້ຖືກ degassed ທີ່ 393 K ເປັນເວລາ 1 ຊົ່ວໂມງເພື່ອໃຫ້ໄດ້ຄວາມກົດດັນທີ່ເຫຼືອໜ້ອຍກວ່າ 10-3 Torr. ປະລິມານຂອງ N2 ທີ່ດູດຊຶມຢູ່ທີ່ຄວາມກົດດັນທຽບເທົ່າຂອງ P/P0 = 0.99 ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອກໍານົດປະລິມານຮູຂຸມຂົນທັງໝົດ. ຮູບຮ່າງຂອງອະນຸພາກຊິລິກາເປົ່າ ແລະ ອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດກັບລີກັນໄດ້ຖືກກວດສອບດ້ວຍກ້ອງຈຸລະທັດອີເລັກໂຕຣນສະແກນ (Hitachi High Technologies, ໂຕກຽວ, ຍີ່ປຸ່ນ). ຕົວຢ່າງແຫ້ງ (ຊິລິກາເປົ່າ ແລະ ອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດກັບລີກັນ) ໄດ້ຖືກວາງໄວ້ເທິງເສົາອາລູມິນຽມໂດຍໃຊ້ເທບກາວກາວ. ຄໍາໄດ້ຖືກຊຸບໃສ່ຕົວຢ່າງໂດຍໃຊ້ເຄື່ອງເຄືອບສະເປ Q150T, ແລະຊັ້ນ Au 5 nm ໄດ້ຖືກວາງໄວ້ເທິງຕົວຢ່າງ. ສິ່ງນີ້ຊ່ວຍປັບປຸງປະສິດທິພາບຂອງຂະບວນການໂດຍໃຊ້ແຮງດັນຕໍ່າ ແລະ ໃຫ້ການສະເປເຢັນທີ່ມີເມັດລະອຽດ. ເຄື່ອງວິເຄາະທາດ Thermo Electron (Waltham, MA, USA) Flash EA1112 ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ສໍາລັບການວິເຄາະທາດ. ເຄື່ອງວິເຄາະຂະໜາດອະນຸພາກ Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 ຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອໄດ້ຮັບການແຈກຢາຍຂະໜາດອະນຸພາກ. ຊິລິກາເປົ່າ ອະນຸພາກ ແລະ ອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດກັບລີແກນ (5 ມກ ແຕ່ລະອັນ) ໄດ້ຖືກກະຈາຍຢູ່ໃນ 5 mL ຂອງ isopropanol, sonicated ເປັນເວລາ 10 ນາທີ, vortexed ເປັນເວລາ 5 ນາທີ, ແລະ ວາງໄວ້ເທິງໂຕະ optical ຂອງ Mastersizer. ການວິເຄາະ thermogravimetric ໄດ້ຖືກປະຕິບັດໃນອັດຕາ 5 °C ຕໍ່ນາທີ ໃນຊ່ວງອຸນຫະພູມ 30 ຫາ 800 °C.
ເສົາເຫຼັກສະແຕນເລດທີ່ມີຮູແຄບທີ່ມີຊັ້ນແກ້ວມີຂະໜາດ (100 × 1.8 ມມ) ໄດ້ຖືກບັນຈຸໂດຍໃຊ້ວິທີການບັນຈຸແບບລະລາຍ, ໂດຍນຳໃຊ້ຂັ້ນຕອນດຽວກັນກັບທີ່ໃຊ້ໃນເອກະສານອ້າງອີງ. 31. ເສົາເຫຼັກສະແຕນເລດ (ມີຊັ້ນແກ້ວ, ຂະໜາດ 100 × 1.8 ມມ) ທີ່ມີຂໍ້ຕໍ່ອອກທີ່ມີ frit 1 µm ໄດ້ຖືກເຊື່ອມຕໍ່ກັບເຄື່ອງຫຸ້ມຫໍ່ນ້ຳຢາ (Alltech Deerfield, IL, USA). ກະກຽມນ້ຳຢາລະລາຍໄລຍະຄົງທີ່ໂດຍການລະລາຍໄລຍະຄົງທີ່ 150 ມກ ໃນ 1.2 ມລ ຂອງ methanol ແລະສົ່ງໄປທີ່ຖັນເກັບຮັກສາ. Methanol ໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນຕົວລະລາຍນ້ຳຢາລະລາຍເຊັ່ນດຽວກັນກັບຕົວລະລາຍຂັບເຄື່ອນ. ຕື່ມຖັນຕາມລໍາດັບໂດຍການໃຊ້ຄວາມກົດດັນ 100 MP ເປັນເວລາ 10 ນາທີ, 80 MP ເປັນເວລາ 15 ນາທີ, ແລະ 60 MP ເປັນເວລາ 30 ນາທີ. ໃນລະຫວ່າງການຫຸ້ມຫໍ່, ການສັ່ນສະເທືອນກົນຈັກໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້ກັບເຄື່ອງສັ່ນຖັນ GC ສອງອັນ (Alltech, Deerfield, IL, USA) ເພື່ອຮັບປະກັນການຫຸ້ມຫໍ່ເປັນເອກະພາບຂອງຖັນ. ປິດເຄື່ອງຫຸ້ມຫໍ່ນ້ຳຢາລະລາຍແລະປ່ອຍຄວາມກົດດັນຊ້າໆເພື່ອປ້ອງກັນຄວາມເສຍຫາຍພາຍໃນຖັນ. ຕັດການເຊື່ອມຕໍ່ຖັນອອກຈາກໜ່ວຍຫຸ້ມຫໍ່ນ້ຳຢາລະລາຍແລະເຊື່ອມຕໍ່ຂໍ້ຕໍ່ອື່ນເຂົ້າກັບທາງເຂົ້າແລະລະບົບ LC ເພື່ອກວດສອບປະສິດທິພາບຂອງມັນ.
ປໍ້າ LC (10AD Shimadzu, ຍີ່ປຸ່ນ), ເຄື່ອງສີດ (Valco (USA) C14 W.05) ພ້ອມດ້ວຍວົງແຫວນສີດ 50nL, ເຄື່ອງລະບາຍອາຍແກັສເຍື່ອ (Shimadzu DGU-14A), ປ່ອງຢ້ຽມ capillary UV-VIS ໄດ້ຖືກສ້າງຂຶ້ນ. ເຄື່ອງກວດຈັບອຸປະກອນ µLC ພິເສດ (UV-2075) ແລະ ຖັນຈຸລະພາກທີ່ປູດ້ວຍແກ້ວ. ໃຊ້ທໍ່ເຊື່ອມຕໍ່ທີ່ແຄບ ແລະ ສັ້ນຫຼາຍເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນຜົນກະທົບຂອງການຂະຫຍາຍແຖບຖັນພິເສດ. ຫຼັງຈາກການຫຸ້ມຫໍ່, ເສັ້ນເລືອດຝອຍ (50 μm id 365 ແລະ ເສັ້ນເລືອດຝອຍ reducing union (50 μm) ໄດ້ຖືກຕິດຕັ້ງຢູ່ທີ່ທາງອອກ 1/16″ ຂອງ reducing union. ການເກັບກຳຂໍ້ມູນ ແລະ ການປະມວນຜົນໂຄຣມາໂຕກຣາຟີໄດ້ເຮັດໂດຍໃຊ້ຊອບແວ Multichro 2000. ການຕິດຕາມກວດກາທີ່ 254 nm Analytes ໄດ້ຖືກທົດສອບສຳລັບການດູດຊຶມ UV. ຂໍ້ມູນໂຄຣມາໂຕກຣາຟີໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍ OriginPro8 (Northampton, MA).
ອາລະບູມິນຈາກເຊລັ່ມຂອງມະນຸດ, ຜົງແຫ້ງ, ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 ມກ ປະສົມກັບ trypsin (1.5 ມກ), 4.0 M urea (1 mL), ແລະ 0.2 M ammonium bicarbonate (1 mL). ສານລະລາຍໄດ້ຖືກຄົນເປັນເວລາ 10 ນາທີ ແລະ ເກັບຮັກສາໄວ້ໃນອ່າງນໍ້າທີ່ອຸນຫະພູມ 37°C ເປັນເວລາ 6 ຊົ່ວໂມງ, ຈາກນັ້ນເຮັດໃຫ້ລະລາຍດ້ວຍ 1 mL ຂອງ 0.1% TFA. ກັ່ນຕອງສານລະລາຍ ແລະ ເກັບຮັກສາໄວ້ໃນອຸນຫະພູມຕໍ່າກວ່າ 4°C.
ການແຍກສ່ວນປະສົມ peptide ແລະ ການຍ່ອຍ trypsin ຂອງ HSA ໄດ້ຖືກປະເມີນແຍກຕ່າງຫາກໃນຖັນ PMP. ກວດສອບການແຍກສ່ວນປະສົມ peptide ແລະ ການຍ່ອຍ trypsin ຂອງ HSA ໂດຍຖັນ PMP ແລະ ປຽບທຽບຜົນໄດ້ຮັບກັບຖັນ Ascentis Express RP-Amide. ເລກທີ່ແຜ່ນທາງທິດສະດີແມ່ນຄິດໄລ່ດັ່ງຕໍ່ໄປນີ້:
ຮູບພາບ SEM ຂອງອະນຸພາກຊິລິກາເປົ່າ ແລະ ອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດດ້ວຍລີແກນແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 2. ຮູບພາບ SEM ຂອງອະນຸພາກຊິລິກາເປົ່າ (A, B) ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າ, ກົງກັນຂ້າມກັບການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ, ອະນຸພາກເຫຼົ່ານີ້ເປັນຮູບຊົງກົມທີ່ອະນຸພາກມີຄວາມຍາວ ຫຼື ມີຄວາມສົມມາດທີ່ບໍ່ສະໝໍ່າສະເໝີ. ໜ້າດິນຂອງອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດດ້ວຍລີແກນ (C, D) ແມ່ນລຽບກວ່າອະນຸພາກຊິລິກາເປົ່າ, ເຊິ່ງອາດຈະເປັນຍ້ອນການເຄືອບຂອງຕ່ອງໂສ້ໂພລີສະໄຕຣີນຢູ່ເທິງໜ້າດິນຂອງອະນຸພາກຊິລິກາ.
ຮູບພາບກ້ອງຈຸລະທັດອີເລັກຕຣອນສະແກນຂອງອະນຸພາກຊິລິກາເປົ່າ (A, B) ແລະ ອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດກັບລີແກນ (C, D).
ການແຈກຢາຍຂະໜາດອະນຸພາກຂອງອະນຸພາກຊິລິກາເປົ່າ ແລະ ອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດດ້ວຍລີແກນແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 3(A). ເສັ້ນໂຄ້ງການແຈກຢາຍຂະໜາດອະນຸພາກທີ່ອີງໃສ່ປະລິມານສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຂະໜາດຂອງອະນຸພາກຊິລິກາເພີ່ມຂຶ້ນຫຼັງຈາກການດັດແປງທາງເຄມີ (ຮູບທີ 3A). ຂໍ້ມູນການແຈກຢາຍຂະໜາດອະນຸພາກຂອງອະນຸພາກຊິລິກາຈາກການສຶກສາໃນປະຈຸບັນ ແລະ ການສຶກສາກ່ອນໜ້ານີ້ໄດ້ຖືກປຽບທຽບໃນຕາຕະລາງທີ 1(A). ຂະໜາດອະນຸພາກທີ່ອີງໃສ່ປະລິມານ, d(0.5), ຂອງ PMP ແມ່ນ 3.36 μm, ເມື່ອທຽບກັບການສຶກສາກ່ອນໜ້ານີ້ຂອງພວກເຮົາທີ່ມີຄ່າ ad(0.5) 3.05 μm (ອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດດ້ວຍໂພລີສະໄຕຣີນ)34. ກຸ່ມນີ້ມີການແຈກຢາຍຂະໜາດອະນຸພາກທີ່ແຄບກວ່າເມື່ອທຽບກັບການສຶກສາກ່ອນໜ້ານີ້ຂອງພວກເຮົາເນື່ອງຈາກອັດຕາສ່ວນທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງ PEG, urea, TMOS, ແລະ ກົດອະຊີຕິກໃນສ່ວນປະສົມປະຕິກິລິຍາ. ຂະໜາດອະນຸພາກຂອງໄລຍະ PMP ແມ່ນໃຫຍ່ກວ່າໄລຍະອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດດ້ວຍໂພລີສະໄຕຣີນເລັກນ້ອຍທີ່ພວກເຮົາໄດ້ສຶກສາກ່ອນໜ້ານີ້. ນີ້ໝາຍຄວາມວ່າການເຮັດວຽກຂອງພື້ນຜິວຂອງອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ມີສະໄຕຣີນພຽງແຕ່ວາງຊັ້ນໂພລີສະໄຕຣີນ (0.97 µm) ໃສ່ພື້ນຜິວຊິລິກາ, ໃນຂະນະທີ່ໃນໄລຍະ PMP ຄວາມໜາຂອງຊັ້ນແມ່ນ 1.38 ໄມຄຣອນ.
ການແຈກຢາຍຂະໜາດຂອງອະນຸພາກ (A) ແລະ ການແຈກຢາຍຂະໜາດຮູຂຸມຂົນ (B) ຂອງອະນຸພາກຊິລິກາເປົ່າ ແລະ ອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດກັບລີແກນ.
ຂະໜາດຮູຂຸມຂົນ, ປະລິມານຮູຂຸມຂົນ ແລະ ພື້ນທີ່ຜິວຂອງອະນຸພາກຊິລິກາຂອງການສຶກສາໃນປະຈຸບັນແມ່ນໄດ້ລະບຸໄວ້ໃນຕາຕະລາງທີ 1(B). ໂປຣໄຟລ໌ PSD ຂອງອະນຸພາກຊິລິກາເປົ່າ ແລະ ອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດກັບລີແກນແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 3(B). ຜົນໄດ້ຮັບແມ່ນທຽບເທົ່າກັບການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ. ຂະໜາດຮູຂຸມຂົນຂອງອະນຸພາກຊິລິກາເປົ່າ ແລະ ອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດກັບລີແກນແມ່ນ 310 ແລະ 241 ຕາມລຳດັບ, ເຊິ່ງຊີ້ບອກວ່າຂະໜາດຮູຂຸມຂົນຫຼຸດລົງ 69 ຫຼັງຈາກການດັດແປງທາງເຄມີ, ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງທີ 1(B), ແລະ ການປ່ຽນແປງຂອງເສັ້ນໂຄ້ງແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 3(B). ເຊັ່ນດຽວກັນ, ປະລິມານຮູຂຸມຂົນຂອງອະນຸພາກຊິລິກາຫຼຸດລົງຈາກ 0.67 ເປັນ 0.58 cm3/g ຫຼັງຈາກການດັດແປງທາງເຄມີ. ພື້ນທີ່ຜິວສະເພາະຂອງອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ໄດ້ສຶກສາໃນປະຈຸບັນແມ່ນ 116 m2/g, ເຊິ່ງທຽບເທົ່າກັບການສຶກສາທີ່ຜ່ານມາຂອງພວກເຮົາ (124 m2/g). ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງທີ 1(B), ພື້ນທີ່ຜິວ (m2/g) ຂອງອະນຸພາກຊິລິກາຍັງຫຼຸດລົງຈາກ 116 m2/g ເປັນ 105 m2/g ຫຼັງຈາກການດັດແປງທາງເຄມີ.
ຜົນຂອງການວິເຄາະທາດຂອງໄລຍະຢຸດນິ້ງແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງທີ 2. ການໂຫຼດຄາບອນຂອງໄລຍະຢຸດນິ້ງໃນປະຈຸບັນແມ່ນ 6.35%, ເຊິ່ງຕໍ່າກວ່າການໂຫຼດຄາບອນຂອງການສຶກສາກ່ອນໜ້ານີ້ຂອງພວກເຮົາ (ອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດດ້ວຍໂພລີສະໄຕຣີນ, 7.93%35 ແລະ 10.21%, ຕາມລຳດັບ) 42. ການໂຫຼດຄາບອນຂອງໄລຍະຢຸດນິ້ງໃນປະຈຸບັນແມ່ນຕໍ່າ, ເນື່ອງຈາກວ່າໃນການກະກຽມ SP ໃນປະຈຸບັນ, ນອກເໜືອໄປຈາກສະໄຕຣີນ, ລີກັນຂົ້ວບາງຊະນິດເຊັ່ນ phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) ແລະ 4-hydroxy-TEMPO ໄດ້ຖືກນຳໃຊ້. ເປີເຊັນນ້ຳໜັກໄນໂຕຣເຈນຂອງໄລຍະຢຸດນິ້ງໃນປະຈຸບັນແມ່ນ 2.21%, ເມື່ອທຽບກັບ 0.1735 ແລະ 0.85% ໂດຍນ້ຳໜັກຂອງໄນໂຕຣເຈນໃນການສຶກສາກ່ອນໜ້ານີ້, ຕາມລຳດັບ. ນີ້ໝາຍຄວາມວ່າ wt % ຂອງໄນໂຕຣເຈນແມ່ນສູງກວ່າໃນໄລຍະຢຸດນິ້ງໃນປະຈຸບັນເນື່ອງຈາກ phenylmaleimide. ເຊັ່ນດຽວກັນ, ການໂຫຼດຄາບອນຂອງຜະລິດຕະພັນ (4) ແລະ (5) ແມ່ນ 2.7% ແລະ 2.9%, ຕາມລຳດັບ, ໃນຂະນະທີ່ການໂຫຼດຄາບອນຂອງ ຜະລິດຕະພັນສຸດທ້າຍ (6) ແມ່ນ 6.35%, ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງທີ 2. ການສູນເສຍນ້ຳໜັກໄດ້ຖືກກວດສອບດ້ວຍໄລຍະຢຸດນິ້ງຂອງ PMP, ແລະເສັ້ນໂຄ້ງ TGA ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 4. ເສັ້ນໂຄ້ງ TGA ສະແດງໃຫ້ເຫັນການສູນເສຍນ້ຳໜັກ 8.6%, ເຊິ່ງສອດຄ່ອງກັບການໂຫຼດຄາບອນ (6.35%) ເພາະວ່າລີກັນບໍ່ພຽງແຕ່ມີ C ເທົ່ານັ້ນແຕ່ຍັງມີ N, O, ແລະ H ນຳອີກ.
ລີກັນ phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ໄດ້ຖືກເລືອກສຳລັບການດັດແປງພື້ນຜິວຂອງອະນຸພາກຊິລິກາ ເພາະມັນມີກຸ່ມ phenylmaleimide ທີ່ມີຂົ້ວ ແລະ ກຸ່ມ vinylisocyanate. ກຸ່ມ vinyl isocyanate ສາມາດປະຕິກິລິຍາກັບ styrene ຕື່ມອີກໂດຍການ polymerization ອະນຸພາກທີ່ມີຊີວິດ. ເຫດຜົນທີສອງແມ່ນເພື່ອໃສ່ກຸ່ມທີ່ມີການພົວພັນປານກາງກັບ analyte ແລະບໍ່ມີການພົວພັນ electrostatic ທີ່ເຂັ້ມແຂງລະຫວ່າງ analyte ແລະໄລຍະຢຸດນິ້ງ, ເນື່ອງຈາກ phenylmaleimide moiety ບໍ່ມີປະຈຸ virtual ຢູ່ທີ່ pH ປົກກະຕິ. ຂົ້ວຂອງໄລຍະຢຸດນິ້ງສາມາດຄວບຄຸມໄດ້ໂດຍປະລິມານທີ່ດີທີ່ສຸດຂອງ styrene ແລະເວລາປະຕິກິລິຍາຂອງການ polymerization ອະນຸພາກເສລີ. ຂັ້ນຕອນສຸດທ້າຍຂອງປະຕິກິລິຍາ (polymerization ອະນຸພາກເສລີ) ແມ່ນມີຄວາມສຳຄັນ ແລະສາມາດປ່ຽນຂົ້ວຂອງໄລຍະຢຸດນິ້ງໄດ້. ການວິເຄາະອົງປະກອບໄດ້ຖືກປະຕິບັດເພື່ອກວດສອບການໂຫຼດຄາບອນຂອງໄລຍະຢຸດນິ້ງເຫຼົ່ານີ້. ມັນໄດ້ຖືກສັງເກດເຫັນວ່າການເພີ່ມປະລິມານຂອງ styrene ແລະເວລາປະຕິກິລິຍາເພີ່ມການໂຫຼດຄາບອນຂອງໄລຍະຢຸດນິ້ງ ແລະໃນທາງກັບກັນ. SPs ທີ່ກະກຽມດ້ວຍຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນທີ່ແຕກຕ່າງກັນຂອງ styrene ມີການໂຫຼດຄາບອນທີ່ແຕກຕ່າງກັນ. ອີກເທື່ອໜຶ່ງ, ໂຫຼດໄລຍະຢຸດນິ້ງເຫຼົ່ານີ້ເຂົ້າໄປໃນຖັນເຫຼັກສະແຕນເລດ ແລະກວດສອບປະສິດທິພາບ chromatographic ຂອງມັນ. (ການເລືອກເຟັ້ນ, ຄວາມລະອຽດ, ຄ່າ N, ແລະອື່ນໆ). ໂດຍອີງໃສ່ການທົດລອງເຫຼົ່ານີ້, ສູດທີ່ດີທີ່ສຸດໄດ້ຖືກເລືອກເພື່ອກະກຽມໄລຍະຢຸດນິ້ງຂອງ PMP ເພື່ອຮັບປະກັນການຄວບຄຸມຂົ້ວ ແລະ ການຮັກສາສານວິເຄາະທີ່ດີ.
ສ່ວນປະສົມ peptide ຫ້າຊະນິດ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) ຍັງໄດ້ຖືກປະເມີນຜົນໂດຍໃຊ້ຖັນ PMP ໂດຍໃຊ້ໄລຍະມືຖື; 60/40 (v/v) ອາເຊໂຕໄນໄຕຣ/ນໍ້າ (0.1% TFA) ທີ່ອັດຕາການໄຫຼ 80 μL/ນາທີ. ພາຍໃຕ້ເງື່ອນໄຂການລະລາຍທີ່ດີທີ່ສຸດ, ໝາຍເລກແຜ່ນທາງທິດສະດີ (N) ຕໍ່ຖັນ (100 × 1.8 ມມ id) ແມ່ນ 20,000 ± 100 (200,000 ແຜ່ນ/ມ²). ຕາຕະລາງທີ 3 ໃຫ້ຄ່າ N ສຳລັບຖັນ PMP ສາມຖັນ ແລະ ໂຄຣມາໂຕແກຣມສະແດງຢູ່ໃນຮູບທີ 5A. ການວິເຄາະໄວໃນຖັນ PMP ທີ່ອັດຕາການໄຫຼສູງ (700 μL/ນາທີ), ເພບໄທຫ້າອັນຖືກລະລາຍພາຍໃນໜຶ່ງນາທີ, ຄ່າ N ແມ່ນດີຫຼາຍ, 13,500 ± 330 ຕໍ່ຖັນ (100 × 1.8 ມມ id), ກົງກັບ 135,000 ແຜ່ນ/ມ (ຮູບທີ 5B). ຖັນທີ່ມີຂະໜາດຄືກັນສາມຖັນ (100 × 1.8 ມມ id) ໄດ້ຖືກບັນຈຸດ້ວຍ PMP ໄລຍະຢຸດນິ້ງສາມຊຸດທີ່ແຕກຕ່າງກັນເພື່ອກວດສອບຄວາມສາມາດໃນການຜະລິດຊ້ຳໄດ້. ການວິເຄາະ ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນສຳລັບແຕ່ລະຖັນໄດ້ຖືກບັນທຶກໄວ້ໂດຍໃຊ້ເງື່ອນໄຂການລະລາຍທີ່ດີທີ່ສຸດ ແລະ ຈຳນວນແຜ່ນທາງທິດສະດີ N ແລະ ເວລາຮັກສາໄວ້ເພື່ອແຍກສ່ວນປະສົມທົດສອບດຽວກັນໃນແຕ່ລະຖັນ. ຂໍ້ມູນຄວາມສາມາດໃນການຜະລິດຊ້ຳໄດ້ສຳລັບຖັນ PMP ແມ່ນສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງທີ 4. ຄວາມສາມາດໃນການຜະລິດຊ້ຳໄດ້ຂອງຖັນ PMP ມີຄວາມສຳພັນກັນໄດ້ດີກັບຄ່າ %RSD ທີ່ຕ່ຳຫຼາຍ, ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນຕາຕະລາງທີ 3.
ການແຍກສ່ວນປະສົມ peptide ໃນຖັນ PMP (B) ແລະຖັນ Ascentis Express RP-Amide (A); ໄລຍະເຄື່ອນທີ່ 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), ຂະໜາດຖັນ PMP (100 × 1.8 ມມ id); ລຳດັບການວິເຄາະ elution ຂອງສານປະກອບ: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) ແລະ 5 (leucine) acid enkephalin)).
ຖັນ PMP (ຂະໜາດ 100 × 1.8 ມມ) ໄດ້ຖືກປະເມີນຜົນສຳລັບການແຍກສານຍ່ອຍ tryptic ຂອງ albumin ໃນເລືອດຂອງມະນຸດໃນໂຄຣມາໂຕກຣາຟີຂອງແຫຼວປະສິດທິພາບສູງ. ໂຄຣມາໂຕກຣາຟີໃນຮູບທີ 6 ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າຕົວຢ່າງຖືກແຍກອອກໄດ້ດີ ແລະ ມີຄວາມລະອຽດດີຫຼາຍ. ສານຍ່ອຍ HSA ໄດ້ຖືກວິເຄາະໂດຍໃຊ້ອັດຕາການໄຫຼ 100 µL/ນາທີ, ໄລຍະເຄື່ອນທີ່ 70/30 acetonitrile/ນໍ້າ ແລະ 0.1% TFA. ດັ່ງທີ່ສະແດງຢູ່ໃນໂຄຣມາໂຕກຣາຟີ (ຮູບທີ 6), ການຍ່ອຍ HSA ໄດ້ຖືກແບ່ງອອກເປັນ 17 ຈຸດສູງສຸດທີ່ສອດຄ້ອງກັບ 17 peptides. ປະສິດທິພາບການແຍກຂອງແຕ່ລະຈຸດສູງສຸດໃນການຍ່ອຍ HSA ໄດ້ຖືກຄິດໄລ່ ແລະ ຄ່າຕ່າງໆໄດ້ຖືກໃຫ້ຢູ່ໃນຕາຕະລາງທີ 5.
ການຍ່ອຍສະຫຼາຍ tryptic ຂອງ HSA (100 × 1.8 ມມ id) ໄດ້ຖືກແຍກອອກໃນຖັນ PMP; ອັດຕາການໄຫຼ (100 µL/ນາທີ), ໄລຍະເຄື່ອນທີ່ 60/40 acetonitrile/ນໍ້າ ທີ່ມີ 0.1% TFA.
ບ່ອນທີ່ L ແມ່ນຄວາມຍາວຂອງຖັນ, η ແມ່ນຄວາມໜືດຂອງໄລຍະເຄື່ອນທີ່, ΔP ແມ່ນຄວາມດັນກັບຄືນຂອງຖັນ, ແລະ u ແມ່ນຄວາມໄວເສັ້ນຊື່ຂອງໄລຍະເຄື່ອນທີ່. ຄວາມຊຶມຜ່ານຂອງຖັນ PMP ແມ່ນ 2.5 × 10-14 m2, ອັດຕາການໄຫຼແມ່ນ 25 μL/ນາທີ, ແລະ 60/40 v/v ACN/ນໍ້າໄດ້ຖືກນໍາໃຊ້. ຄວາມຊຶມຜ່ານຂອງຖັນ PMP (100 × 1.8 mm id) ແມ່ນຄ້າຍຄືກັນກັບການສຶກສາກ່ອນໜ້ານີ້ຂອງພວກເຮົາ Ref.34. ຄວາມຊຶມຜ່ານຂອງຖັນທີ່ເຕັມໄປດ້ວຍອະນຸພາກທີ່ມີຮູພຸນພື້ນຜິວແມ່ນ: 1.7 × 10-15 ສໍາລັບອະນຸພາກ 1.3 μm, 3.1 × 10-15 ສໍາລັບອະນຸພາກ 1.7 μm, 5.2 × 10-15 ແລະ 2.5 × 10-14 m2 ສໍາລັບອະນຸພາກ 2.6 μm ສໍາລັບອະນຸພາກ 5 μm 43. ດັ່ງນັ້ນ, ຄວາມຊຶມຜ່ານຂອງໄລຍະ PMP ແມ່ນຄ້າຍຄືກັນກັບອະນຸພາກເປືອກແກນ 5 μm.
ບ່ອນທີ່ Wx ແມ່ນນ້ຳໜັກຂອງຖັນທີ່ບັນຈຸດ້ວຍຄລໍໂຣຟອມ, Wy ແມ່ນນ້ຳໜັກຂອງຖັນທີ່ບັນຈຸດ້ວຍເມທານອນ, ແລະ ρ ແມ່ນຄວາມໜາແໜ້ນຂອງຕົວລະລາຍ. ຄວາມໜາແໜ້ນຂອງເມທານອນ (ρ = 0.7866) ແລະຄລໍໂຣຟອມ (ρ = 1.484). ຄວາມพรຸນທັງໝົດຂອງຖັນ SILICA PARTICLES-C18 (100 × 1.8 mm id) 34 ແລະຖັນ C18-Urea 31 ທີ່ພວກເຮົາເຄີຍສຶກສາມາກ່ອນແມ່ນ 0.63 ແລະ 0.55 ຕາມລຳດັບ. ນີ້ໝາຍຄວາມວ່າການມີຢູ່ຂອງລີກັນຢູເຣຍຊ່ວຍຫຼຸດຜ່ອນຄວາມຊຶມຜ່ານຂອງໄລຍະຄົງທີ່. ໃນທາງກົງກັນຂ້າມ, ຄວາມพรຸນທັງໝົດຂອງຖັນ PMP (100 × 1.8 mm id) ແມ່ນ 0.60. ຄວາມຊຶມຜ່ານຂອງຖັນ PMP ແມ່ນຕ່ຳກວ່າຖັນທີ່ບັນຈຸດ້ວຍອະນຸພາກຊິລິກາທີ່ຜູກມັດ C18 ເພາະວ່າໃນໄລຍະຄົງທີ່ປະເພດ C18, ລີກັນ C18 ຈະຕິດກັບອະນຸພາກຊິລິກາເປັນຕ່ອງໂສ້ເສັ້ນຊື່, ໃນຂະນະທີ່ໃນໄລຍະຄົງທີ່ປະເພດໂພລີສະໄຕຣີນ, ຊັ້ນໂພລີເມີ A ທີ່ຂ້ອນຂ້າງໜາ. ຖືກສ້າງຂຶ້ນອ້ອມຮອບມັນ. ໃນການທົດລອງທົ່ວໄປ, ຄວາມพรຸນຂອງຖັນຖືກຄິດໄລ່ດັ່ງນີ້:
ຮູບທີ 7A,B ສະແດງຖັນ PMP (100 × 1.8 ມມ id) ແລະຖັນ Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 ມມ id) ໂດຍໃຊ້ເງື່ອນໄຂການລະລາຍດຽວກັນ (ເຊັ່ນ: 60/40 ACN/H2O ແລະ 0.1% TFA) ຂອງຕາຕະລາງ van Deemter. ສ່ວນປະສົມ peptide ທີ່ເລືອກ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) ໄດ້ຖືກກະກຽມໃນ 20 µL/ ອັດຕາການໄຫຼຕໍ່າສຸດສຳລັບທັງສອງຖັນແມ່ນ 800 µL/ນາທີ. ຄ່າ HETP ຕໍ່າສຸດທີ່ອັດຕາການໄຫຼທີ່ດີທີ່ສຸດ (80 µL/ນາທີ) ສຳລັບຖັນ PMP ແລະຖັນ Ascentis Express RP-Amide ແມ່ນ 2.6 µm ແລະ 3.9 µm ຕາມລໍາດັບ. ຄ່າ HETP ຊີ້ບອກວ່າປະສິດທິພາບການແຍກຂອງຖັນ PMP (100 × 1.8 mm id) ແມ່ນດີກ່ວາຖັນ Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 mm id) ທີ່ມີຢູ່ໃນທ້ອງຕະຫຼາດຫຼາຍ. ແຜນວາດ van Deemter ໃນຮູບທີ 7(A) ສະແດງໃຫ້ເຫັນວ່າການຫຼຸດລົງຂອງຄ່າ N ດ້ວຍການໄຫຼທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນບໍ່ມີຄວາມໝາຍເມື່ອທຽບກັບການສຶກສາກ່ອນໜ້ານີ້ຂອງພວກເຮົາ. ປະສິດທິພາບການແຍກທີ່ສູງຂຶ້ນຂອງຖັນ PMP (100 × 1.8 ມມ id) ເມື່ອທຽບກັບຖັນ Ascentis Express RP-Amide ແມ່ນອີງໃສ່ການປັບປຸງຮູບຮ່າງຂອງອະນຸພາກ, ຂະໜາດ, ແລະຂັ້ນຕອນການຫຸ້ມຫໍ່ຖັນທີ່ສັບສົນທີ່ໃຊ້ໃນວຽກງານປະຈຸບັນ34.
(A) ຮູບແຕ້ມ van Deemter (ຄວາມໄວເສັ້ນຊື່ HETP ທຽບກັບຄວາມໄວໄລຍະເຄື່ອນທີ່) ທີ່ໄດ້ຮັບໂດຍໃຊ້ຖັນ PMP (100 × 1.8 ມມ id) ໃນ 60/40 ACN/H2O ດ້ວຍ 0.1% TFA.(B) ຮູບແຕ້ມ van Deemter (ຄວາມໄວເສັ້ນຊື່ HETP ທຽບກັບຄວາມໄວໄລຍະເຄື່ອນທີ່) ທີ່ໄດ້ຮັບໂດຍໃຊ້ຖັນ Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 ມມ id) ໃນ 60/40 ACN/H2O ດ້ວຍ 0.1% TFA.
ໄລຍະຢຸດນິ້ງໂພລີສະໄຕຣີນທີ່ຝັງຢູ່ໃນຂົ້ວໄດ້ຖືກກະກຽມ ແລະ ປະເມີນຜົນສຳລັບການແຍກສ່ວນປະສົມເພບໄທດ໌ສັງເຄາະ ແລະ ການຍ່ອຍທຣິບຊິນຂອງອາລະບູມິນໃນເລືອດຂອງມະນຸດ (HAS) ໃນໂຄຣມາໂຕກຣາຟີແຫຼວປະສິດທິພາບສູງ. ປະສິດທິພາບໂຄຣມາໂຕກຣາຟີຂອງຖັນ PMP ສຳລັບສ່ວນປະສົມເພບໄທດ໌ແມ່ນດີເລີດໃນປະສິດທິພາບການແຍກ ແລະ ຄວາມລະອຽດ. ປະສິດທິພາບການແຍກທີ່ດີຂຶ້ນຂອງຖັນ PMP ແມ່ນຍ້ອນຫຼາຍເຫດຜົນ, ເຊັ່ນ: ຂະໜາດຂອງອະນຸພາກ ແລະ ຂະໜາດຮູຂຸມຂົນຂອງອະນຸພາກຊິລິກາ, ການສັງເຄາະທີ່ຄວບຄຸມຂອງໄລຍະຢຸດນິ້ງ, ແລະ ການຫຸ້ມຫໍ່ຖັນທີ່ສັບສົນ. ນອກເໜືອໄປຈາກປະສິດທິພາບການແຍກສູງ, ຄວາມກົດດັນກັບຄືນຂອງຖັນຕ່ຳໃນອັດຕາການໄຫຼສູງແມ່ນຂໍ້ໄດ້ປຽບອີກອັນໜຶ່ງຂອງໄລຍະຢຸດນິ້ງນີ້. ຖັນ PMP ສະແດງໃຫ້ເຫັນເຖິງຄວາມສາມາດໃນການຜະລິດຊ້ຳທີ່ດີ ແລະ ສາມາດໃຊ້ສຳລັບການວິເຄາະສ່ວນປະສົມເພບໄທດ໌ ແລະ ການຍ່ອຍທຣິບຊິນຂອງໂປຣຕີນຕ່າງໆ. ພວກເຮົາຕັ້ງໃຈທີ່ຈະໃຊ້ຖັນນີ້ສຳລັບການແຍກຜະລິດຕະພັນທຳມະຊາດ, ສານປະກອບຊີວະພາບຈາກພືດສະໝຸນໄພ ແລະ ສານສະກັດຈາກເຊື້ອລາໃນໂຄຣມາໂຕກຣາຟີແຫຼວ. ໃນອະນາຄົດ, ຖັນ PMP ຍັງຈະຖືກປະເມີນຜົນສຳລັບການແຍກໂປຣຕີນ ແລະ ພູມຕ້ານທານໂມໂນໂຄນ.
Field, JK, Euerby, MR, Lau, J., Thøgersen, H. & Petersson, P. ການຄົ້ນຄວ້າກ່ຽວກັບລະບົບການແຍກ peptide ໂດຍວິທີ Reversed Phase Chromatography ພາກທີ I: ການພັດທະນາໂປໂຕຄອນການກຳນົດລັກສະນະຖັນ.J. Chromatography.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019).
Gomez, B. ແລະ ອື່ນໆ. ປັບປຸງ peptides ທີ່ມີການເຄື່ອນໄຫວທີ່ອອກແບບມາສຳລັບການປິ່ນປົວພະຍາດຕິດຕໍ່. Biotechnology.Advanced.36(2), 415-429.https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018).
Vlieghe, P., Lisowski, V., Martinez, J. & Khrestchatisky, M. ເພບໄທດ໌ສັງເຄາະໃນການປິ່ນປົວ: ວິທະຍາສາດ ແລະ ຕະຫຼາດ. ການຄົ້ນພົບຢາ.15 (1-2) ມື້ນີ້, 40-56.https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010).
Xie, F., Smith, RD & Shen, Y. ການວິເຄາະດ້ວຍທາດແຫຼວໂປຣຕີໂອມິກຂັ້ນສູງ.J. ການວິເຄາະດ້ວຍທາດແຫຼວ.A 1261, 78–90 (2012).
Liu, W. ແລະ ອື່ນໆ. ການວິເຄາະດ້ວຍໂຄຣມາໂຕກຣາຟີຂອງແຫຼວແບບພິເສດ-ມວນສານແບບພິເສດຊ່ວຍໃຫ້ສາມາດລວມເອົາການວິເຄາະດ້ວຍວິທີ metabolomics ແລະ proteomics.anus.Chim.Acta 1069, 89–97 (2019).
Chesnut, SM & Salisbury, JJ ບົດບາດຂອງ UHPLC ໃນການພັດທະນາຢາ. J. Sep. Sci.30(8), 1183-1190 (2007).
Wu, N. & Clausen, AM ລັກສະນະພື້ນຖານ ແລະ ການປະຕິບັດຕົວຈິງຂອງໂຄຣມາໂຕກຣາຟີຂອງແຫຼວຄວາມດັນສູງພິເສດ ສຳລັບການແຍກສານຢ່າງໄວວາ. J. Sep. Sci.30(8), 1167-1182.https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007).
Wren, SA & Tchelitcheff, P. ການນຳໃຊ້ໂຄຣມາໂຕກຣາຟີຂອງແຫຼວປະສິດທິພາບສູງໃນການພັດທະນາຢາ. J. Chromatography.1119(1-2), 140-146.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (2006).
Gu, H. ແລະ ອື່ນໆ. ໄຮໂດຣເຈວທີ່ມີຮູພຸນຂະໜາດດຽວທີ່ກະກຽມຈາກອີມັນຊັນທີ່ມີໄລຍະພາຍໃນສູງໃນນ້ຳມັນໃນນ້ຳ ສຳລັບການກັ່ນຕອງເຊື້ອໄວຣັດເອນໂທໂຣໄວຣັສຢ່າງມີປະສິດທິພາບ. Chemical.Britain.J. 401, 126051 (2020).
Shi, Y., Xiang, R., Horváth, C. & Wilkins, JA ບົດບາດຂອງໂຄຣມາໂຕກຣາຟີແຫຼວໃນໂປຣຕີໂອມິກສ໌. J. Chromatography.A 1053(1-2), 27-36 (2004).
Fekete, S., Veuthey, J.-L. & Guillarme, D. ແນວໂນ້ມທີ່ພົ້ນເດັ່ນໃນການແຍກໂຄຣມາໂຕກຣາຟີຂອງແຫຼວໃນໄລຍະປີ້ນກັບກັນຂອງເພບໄທດ໌ ແລະ ໂປຣຕີນໃນການປິ່ນປົວ: ທິດສະດີ ແລະ ການນຳໃຊ້.J. Pharmacy.Biomedical Science.anus.69, 9-27 (2012).
Gilar, M., Olivova, P., Daly, AE & Gebler, JC ການແຍກ peptides ສອງມິຕິໂດຍໃຊ້ລະບົບ RP-RP-HPLC ໂດຍໃຊ້ຄ່າ pH ທີ່ແຕກຕ່າງກັນໃນມິຕິການແຍກທີໜຶ່ງ ແລະ ທີສອງ.J. Sep. Sci.28(14), 1694-1703 (2005).
Feletti, S. ແລະ ອື່ນໆ. ລັກສະນະການຖ່າຍໂອນມວນສານ ແລະ ປະສິດທິພາບທາງດ້ານການເຄື່ອນໄຫວຂອງຖັນໂຄຣມາໂຕກຣາຟີທີ່ມີປະສິດທິພາບສູງທີ່ບັນຈຸດ້ວຍອະນຸພາກທີ່ມີຮູພຸນ C18 ທີ່ມີຂະໜາດນ້ອຍກວ່າ 2 μm ໄດ້ຖືກສືບສວນ. J. Sep. Sci.43 (9-10), 1737-1745 (2020).
Piovesana, S. ແລະ ອື່ນໆ. ແນວໂນ້ມທີ່ຜ່ານມາ ແລະ ສິ່ງທ້າທາຍດ້ານການວິເຄາະໃນການແຍກ, ການກຳນົດ ແລະ ການກວດສອບຄວາມຖືກຕ້ອງຂອງ peptides ທີ່ມີການເຄື່ອນໄຫວທາງຊີວະພາບຂອງພືດ.anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018).
Mueller, JB ແລະ ອື່ນໆ. ພູມສັນຖານໂປຣຕີໂອມຂອງອານາຈັກຊີວິດ. ທຳມະຊາດ 582(7813), 592-596.https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020).
DeLuca, C. ແລະ ອື່ນໆ. ການປຸງແຕ່ງ peptides ໃນການປິ່ນປົວແບບລົງໄປໂດຍວິທີການໂຄຣມາໂຕກຣາຟີແຫຼວແບບກະກຽມ. ໂມເລກຸນ (Basel, ສະວິດເຊີແລນ) 26(15), 4688(2021).
Yang, Y. & Geng, X. ໂຄຣມາໂຕກຣາຟີແບບປະສົມ ແລະ ການນຳໃຊ້ກັບຊີວະໂພລີເມີ. J. Chromatography.A 1218(49), 8813–8825 (2011).
Zhao, G., Dong, X.-Y. & Sun, Y. ລີແກນ ສຳລັບໂຄຣມາໂຕກຣາຟີໂປຣຕີນແບບປະສົມ: ຫຼັກການ, ລັກສະນະ, ແລະ ການອອກແບບ. J. Biotechnology.144(1), 3-11 (2009).