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Sa saunia ni vaega silica porous e ala i le metotia sol-gel faatasi ai ma ni nai suiga e maua ai ni vaega macroporous. O nei vaega na maua mai e ala i le reversible addition fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization ma le N-phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PMI) ma le styrene e saunia ai le N-phenylmaleimide intercalation o le polystyrene (PMP) stationary phase. O koluma u'amea e le gaoia vaapiapi (100 × 1.8 mm id) na fa'aputuina e ala i le slurry packing. Iloiloina le vavae'eseina o le koluma PMP o se paluga peptide e aofia ai peptides e lima (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) chromatographic performance) ma le trypsin digestion o le human serum albumin (HAS). I lalo o tulaga sili ona lelei o le elution, o le numera o le theoretical plate o le paluga peptide e maualuga atu i le 280,000 plates/m². Fa'atusatusa le fa'atinoga o le vavae'eseina o le koluma ua atia'e ma le Ascentis fa'apisinisi. I le koluma Express RP-Amide, na matauina ai o le faatinoga o le vavaeesega o le koluma PMP e sili atu nai lo le koluma faapisinisi i tulaga o le lelei o le vavaeesega ma le fofo.
I tausaga talu ai nei, ua avea le alamanuia o vailaʻau faʻamaʻi ma se maketi faʻavaomalo ua faʻalauteleina faʻatasi ai ma le faʻateleina tele o le sea maketi. Faatasi ai ma le tuputupu aʻe tele o le alamanuia o vailaʻau faʻamaʻi1,2,3, o le auiliiliga o peptides ma porotini e matua manaʻomia lava. I le faʻaopoopoga i le peptide faʻamoemoeina, e tele mea leaga e gaosia i le taimi o le peptide synthesis, ma manaʻomia ai le faʻamamaina o le chromatographic e maua ai peptides o le mama e manaʻomia. O le auiliiliga ma le faʻamatalaina o porotini i vai o le tino, aano ma sela o se galuega faigata tele ona o le tele o ituaiga e ono mafai ona iloa i se faʻataʻitaʻiga e tasi. E ui o le mass spectrometry o se meafaigaluega aoga mo le peptide ma le protein sequencing, afai o ia faʻataʻitaʻiga e tuiina i totonu o le mass spectrometer i le tasi le pasi, o le a le lelei le vavaeʻeseina. O lenei faʻafitauli e mafai ona faʻaitiitia e ala i le faʻatinoina o le liquid chromatography (LC) vavaeʻeseina aʻo leʻi faia le suʻesuʻega MS, lea o le a faʻaitiitia ai le aofaʻi o analytes e ulufale atu i le mass spectrometer i se taimi atofaina4,5,6. I se faʻaopoopoga, i le taimi o le vavaeʻeseina o le vaega vai, e mafai ona taulaʻi analytes i vaega vaapiapi, ma faʻapotopoto ai nei analytes ma faʻaleleia atili ai le MS detection sensitivity. O le liquid chromatography (LC) ua ua matuā alualu i luma i le sefulu tausaga ua tuanaʻi ma ua avea ma se metotia lauiloa i le auʻiliʻiliga o le proteomic7,8,9,10.
O le chromatography vai fa'asolo (RP-LC) e fa'aaogaina lautele mo le fa'amamāina ma le vavae'eseina o fa'afefiloi peptide e fa'aaoga ai le octadecyl-modified silica (ODS) o le vaega tumau11,12,13. Peita'i, o vaega tumau RP e le maua ai le vavae'eseina fa'amalieina o peptides ma porotini ona o lo latou fausaga lavelave ma le natura amphiphilic 14,15. O le mea lea, e mana'omia ai vaega tumau ua mamanuina fa'apitoa e iloilo ai peptides ma porotini ma vaega polar ma non-polar e fegalegaleai ai ma taofia nei analytes16. O le chromatography fa'afefiloi, lea e maua ai fegalegaleaiga multimodal, e mafai ona avea ma se isi auala i le RP-LC mo le vavae'eseina o peptides, porotini, ma isi fa'afefiloi lavelave. E tele vaega tumau fa'afefiloi ua saunia, ma o koluma ua fa'atumuina i nei vaega ua fa'aaogaina mo le vavae'eseina o peptide ma porotini17,18,19,20,21. O vaega tumau fa'afefiloi (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, polar intercalation/RPLC) e talafeagai mo le vavae'eseina o peptide ma porotini ona o le i ai o polar ma vaega e le o ni polar22,23,24,25,26,27,28. E faapena foi, o vaega tumau e fesoʻotaʻi ma vaega polar e fesoʻotaʻi faʻatasi e faʻaalia ai le malosi lelei o le vavaeʻeseina ma le filifiliga tulaga ese mo analytes polar ma non-polar, aua o le vavaeʻeseina e faʻalagolago i le fegalegaleaiga i le va o le analyte ma le vaega tumau. Fesoʻotaʻiga tele-modal 29, 30, 31, 32. Talu ai nei, na saunia ai e Zhang et al. 30 se vaega tumau o le polyamine dodecyl-terminated ma vavaeʻeseina ma le manuia hydrocarbons, antidepressants, flavonoids, nucleosides, estrogens, ma isi analytes. O le intercalator polar e iai vaega polar ma non-polar, o lea e mafai ai ona faʻaaogaina e vavaeʻese ai peptides ma porotini e iai vaega hydrophobic ma hydrophilic. O koluma polar-embedded (e pei o koluma C18 amide-embedded) e maua faapisinisi i lalo o le igoa tau fefaatauaiga Ascentis Express RP-Amide columns, ae o nei koluma e faʻaaogaina mo le auiliiliga o le amine 33.
I le suʻesuʻega o loʻo iai nei, o se vaega tumau e faʻapipiʻiina i le polar (N-phenylmaleimide-embedded polystyrene) na saunia ma iloiloina mo le vavaeʻeseina o peptides ma trypsin digests o le HSA. O le vaega tumau na saunia e faʻaaoga ai le fuafuaga lenei. O vaega silica porous na saunia e tusa ai ma le faiga na tuʻuina atu i la matou lomiga muamua faʻatasi ai ma ni nai suiga i le faʻatulagaga sauniuniga. O le fua faatatau o le urea, polyethylene glycol (PEG), TMOS, vai acetic acid na fetuʻunaʻi e saunia ai vaega silica ma le tele o pu. Lua, o se ligand fou, phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate, na faʻapipiʻiina ma faʻaaoga e faʻatupu ai vaega silica e saunia ai se vaega tumau e faʻapipiʻiina i le polar. O le vaega tumau na maua mai na faʻapipiʻiina i totonu o se koluma uʻamea e le gaoia (100 × 1.8 mm id) e faʻaaoga ai le faʻatulagaga faʻapipiʻi faʻalelei. O le faʻapipiʻiina o le koluma e fesoasoani i le vibration faʻamekanika e faʻamautinoa ai o loʻo faia se moega tutusa i totonu o le koluma. Iloilo le vavaeʻeseina o le koluma ua faʻapipiʻiina o faʻafefiloi peptide e aofia ai peptides e lima; (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) ma le Trypsin digest o le human serum albumin (HAS). Na matauina le vaeluaina o le peptide mixture ma le trypsin digest o le HSA ma le lelei o le iugafono ma le aoga. Na faatusatusa le faatinoga o le vavaeeseina o le koluma PMP ma le koluma Ascentis Express RP-Amide. Na matauina le lelei o le iugafono ma le aoga o peptides ma porotini i luga o le koluma PMP, lea e sili atu le aoga nai lo le koluma Ascentis Express RP-Amide.
PEG (Polyethylene Glycol), Urea, Acetic Acid, Trimethoxy Orthosilicate (TMOS), Trimethyl Chlorosilane (TMCS), Trypsin, Human Serum Albumin (HSA), Ammonium Chloride, Urea, Hexane Methyldisilazane (HMDS), Methacryloyl Chloride (MC), Styrene, 4-Hydroxy-TEMPO, Benzoyl Peroxide (BPO), HPLC Grade Acetonitrile (ACN), Methanol, 2-Propanol, ma le Acetone Fa'atau mai Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, ISA).
O se paluga o le urea (8 kalama), polyethylene glycol (8 kalama), ma le 8 mL o le 0.01 N acetic acid na fa'agae'etia mo le 10 minute, ona fa'aopoopo lea i ai le 24 mL o le TMOS i lalo o tulaga malulu. O le paluga tali na fa'avevela i le 40°C mo le 6 itula ona sosoo ai lea ma le 120°C mo le 8 itula i totonu o se autoclave u'amea e le gaoia. Na sasaa ese le vai ma fa'amago le mea na totoe i le 70°C mo le 12 itula. O le mea vaivai na mago na oloina lamolemole i totonu o se ogaumu ma fa'apala i le 550°C mo le 12 itula. E tolu vaega na saunia ma fa'ailoaina e su'esu'e ai le mafai ona toe gaosia i le tele o vaega, tele o pu ma le lautele o le fogaeleele.
I le suiga o le fogāeleele o fasi silica i le phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) lea na muai faia ai le polymerization radial i le styrene, na saunia ai se vaega e iai le polar group. O le vaega tumau mo aggregates ma polystyrene chains. O le faagasologa o le sauniuniga o loʻo faʻamatalaina i lalo.
O le N-phenylmaleimide (200 mg) ma le methyl vinyl isocyanate (100 mg) na fa'a'asu'uina i le toluene mago, ma le 0.1 mL o le 2,2′-azoisobutyronitrile (AIBN) na fa'aopoopo i totonu o le fagu fa'aola e saunia ai le phenylmaleimide-methyl vinyl isocyanate copolymer (PMCP). Na fa'avevela le paluga i le 60°C mo le 3 itula, fa'amamā ma fa'amago i totonu o le ogaumu i le 40°C mo le 3 itula.
O fasi silica mago (2 g) na fa'asalalauina i totonu o le toluene mago (100 mL), fa'agae'etia ma fa'asusuina i totonu o se fagu pito i lalo e 500 mL mo le 10 minute. O le PMCP (10 mg) na fa'afefiloi i totonu o le toluene ma fa'aopoopo i lalo i le fagu fa'agasolo e ala i se fa'aputuga pa'u. O le paluga na toe fa'avevela i le 100°C mo le 8 itula, fa'amama ma fufulu i le acetone ma fa'amago i le 60°C mo le 3 itula. Ona fa'afefiloi lea o fasi silica PMCP-bond (100 g) i totonu o le toluene (200 ml) ma fa'aopoopo le 4-hydroxy-TEMPO (2 mL) i luma o le 100 µL o le dibutyltin dilaurate o se mea fa'atupu fa'alavelave. O le paluga na fa'agae'etia i le 50°C mo le 8 itula, fa'amama ma fa'amago i le 50°C mo le 3 itula.
O le Styrene (1 mL), benzoyl peroxide BPO (0.5 mL), ma le TEMPO-PMCP-attached silica particles (1.5 g) sa fa'asalalauina i le toluene ma fa'amamāina i le nitrogen. O le polymerization o le styrene sa fa'atinoina i le 100°C mo le 12 itula. O le oloa na maua sa fufuluina i le methanol ma fa'amago i le 60°C i le po atoa. O le fa'atulagaga atoa o le tali atu o lo'o fa'aalia i le Ata 1.
Sa aveese le kasa o faʻataʻitaʻiga i le 393 K mo le 1 itula e maua ai se mamafa o totoe e itiiti ifo i le 10-3 Torr. O le aofaʻi o le N2 na mitiia i le mamafa faʻatatau o le P/P0 = 0.99 na faʻaaogaina e fuafua ai le aofaʻi o le pu. O le morphology o fasi silica e leai ni mea ma le ligand-bonded na suʻesuʻeina i le scanning electron microscopy (Hitachi High Technologies, Tokyo, Iapani). O faʻataʻitaʻiga mago (silica e leai ni mea ma fasi silica e iai ni mea) na tuʻu i luga o se koluma alumini e faʻaaoga ai le lipine carbon adhesive. Sa ufiufi auro i luga o faʻataʻitaʻiga e faʻaaoga ai se Q150T sputter coater, ma sa faʻapipiʻiina se vaega Au 5 nm i luga o faʻataʻitaʻiga. O lenei mea e faʻaleleia atili ai le lelei o le faʻagasologa e faʻaaoga ai voltage maualalo ma maua ai le saito lelei, cold sputtering. O se Thermo Electron (Waltham, MA, ISA) Flash EA1112 elemental analyzer na faʻaaogaina mo le suʻesuʻega o elemene. O se Malvern (Worcestershire, UK) Mastersizer 2000 particle size analyzer na faʻaaogaina e maua ai le tufatufaina o le tele o fasi. O fasi silica e leai ni mea ma le ligand-bonded silica O vaega laiti (5 mg i le vaega ta'itasi) sa fa'asalalauina i le 5 mL o le isopropanol, fa'aosoina i le soni mo le 10 minute, fa'aosoina i le 5 minute, ma tu'u i luga o le laulau va'ai o le Mastersizer. Sa faia le su'esu'ega o le Thermogravimetric i le fua faatatau o le 5 °C i le minute i luga o le vevela o le 30 i le 800 °C.
O poutū u'amea e le gaoia ua fa'apipi'iina i le tioata ma e vaapiapi ona pu (100 × 1.8 mm id) sa fa'apipi'iina e fa'aaoga ai le metotia o le fa'apipi'iina o le slurry, e fa'aaoga ai le faiga lava e tasi na fa'aaogaina i le Ref. 31. O se koluma u'amea e le gaoia (ua laina i le tioata, 100 × 1.8 mm id) fa'atasi ai ma se fa'apipi'i ala i fafo o lo'o i ai se frit 1 µm na fa'apipi'i i se packing slurry (Alltech Deerfield, IL, ISA). Saunia se slurry vaega tumau e ala i le fa'a'ofuina o le 150 mg o le vaega tumau i le 1.2 mL o le methanol ma lafo i le koluma teuina. Na fa'aaogaina le Methanol o se vaila'au fa'asusu slurry fa'apea fo'i ma le vaila'au fa'aoso. Fa'atumu le koluma i le fa'asologa e ala i le fa'aogaina o le mamafa o le 100 MP mo le 10 minute, 80 MP mo le 15 minute, ma le 60 MP mo le 30 minute. I le taimi o le fa'apipi'iina, na fa'aogaina le gatete fa'amekanika i ni lūlū koluma GC se lua (Alltech, Deerfield, IL, ISA) e fa'amautinoa ai le fa'apipi'iina tutusa o le koluma. Tapuni le packing slurry ma fa'asa'oloto malie le mamafa e puipuia ai so'o se fa'aleagaina i totonu o le koluma. Vavae'ese le koluma mai le iunite fa'apipi'i slurry ma fa'apipi'i se isi fa'apipi'i i le auala e ulufale ai ma le faiga LC e siaki ai lana fa'atinoga.
O se pamu LC (10AD Shimadzu, Iapani), injector (Valco (USA) C14 W.05) fa'atasi ai ma le 50nL injection loop, membrane degasser (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS capillary window na fausia. O se masini fa'apitoa e iloa ai le µLC (UV-2075) ma ni microcolumns ua laina i tioata. Faaaoga ni paipa feso'ota'i e matua vaapiapi ma pupuu e fa'aitiitia ai le a'afiaga o le fa'alauteleina o le column band. A mae'a ona afifiina, o capillaries (50 μm id 365 ma reducing union capillaries (50 μm) na fa'apipi'i i le 1/16″ outlet o le reducing union. O le aoina o fa'amaumauga ma le fa'agasologa o chromatographic na faia e fa'aaoga ai le polokalama Multichro 2000. O le mata'ituina i le 254 nm Analytes na fa'ata'ita'iina mo le UV absorbance. O fa'amaumauga chromatographic na au'ili'iliina e le OriginPro8 (Northampton, MA).
Albumin mai le serum o le tagata, pauta lyophilized, ≥ 96% (agarose gel electrophoresis) 3 mg ua palu faatasi ma le trypsin (1.5 mg), 4.0 M urea (1 mL), ma le 0.2 M ammonium bicarbonate (1 mL). Sa fa'agae'e le vaila'au mo le 10 minute ma tu'u i totonu o se vai ta'ele i le 37°C mo le 6 itula, ona fa'amālū lea i le 1 mL o le 0.1% TFA. Fa'amama le vaila'au ma teu i lalo ifo o le 4°C.
O le vaevaeina o paluga peptide ma le HSA trypsin digests na iloiloina eseese i luga o koluma PMP. Siaki le vavaeeseina o le paluga peptide ma le trypsin digest o le HSA e le koluma PMP ma faatusatusa taunuuga i le koluma Ascentis Express RP-Amide. O le numera o le plate theoretical ua fuafuaina e pei ona taua i lalo:
O ata SEM o fasi silica e leai ni mea ma fasi silica e fusifusia i le ligand o loʻo faʻaalia i le ATA 2. O ata SEM o fasi silica e leai ni mea (A, B) o loʻo faʻaalia ai, e ese mai i a matou suʻesuʻega na muamua atu, o nei fasi e lapotopoto ma e faʻaloloa pe le tutusa foʻi. O le fogāeleele o fasi silica e fusifusia i le ligand (C, D) e sili atu le lamolemole nai lo o fasi silica e leai ni mea, lea atonu e mafua mai i le ufiufi o filifili polystyrene i luga o le fogāeleele o fasi silica.
Ata o le microscope eletise o le scanning o fasi silica gaogao (A, B) ma fasi silica e fusifusia i le ligand (C, D).
O le tufatufaina o le tele o vaega o vaega o le silica e leai ni mea ma vaega silica e fusifusia i le ligand o loʻo faʻaalia i le Ata 3(A). O le faʻasologa o le tele o vaega e faʻavae i luga o le voluma na faʻaalia ai le faʻateleina o le tele o vaega silica ina ua maeʻa le suiga o vailaʻau (Ata 3A). O faʻamatalaga o le tufatufaina o le tele o vaega o vaega silica mai le suʻesuʻega o loʻo iai nei ma le suʻesuʻega talu ai ua faʻatusatusa i le Laulau 1(A). O le tele o vaega e faʻavae i luga o le voluma, d(0.5), o le PMP e 3.36 μm, pe a faʻatusatusa i la matou suʻesuʻega talu ai ma le tau o le ad(0.5) o le 3.05 μm (polystyrene-bound silica particles)34. O lenei vaega sa i ai se tufatufaina vaapiapi o le tele o vaega pe a faʻatusatusa i la matou suʻesuʻega talu ai ona o le eseesega o fua faatatau o le PEG, urea, TMOS, ma le acetic acid i le paluga tali. O le tele o vaega o le vaega PMP e laʻititi atu nai lo le vaega o le polystyrene-bound silica particle na matou suʻesuʻeina muamua. O lona uiga o le faʻatinoina o le fogaeleele o vaega silica ma le styrene na naʻo le faʻapipiʻiina o se vaega polystyrene (0.97 µm) i luga o le fogaeleele silica, ae i le vaega PMP o le mafiafia o le vaega sa 1.38 µm.
O le tufatufaina atu o le tele o vaega (A) ma le tufatufaina atu o le tele o pu (B) o vaega silica e leai ni mea ma vaega silica e fusifusia i le ligand.
O le tele o pu, le tele o pu ma le lautele o le pito i luga o fasi silica o le suʻesuʻega o loʻo iai nei o loʻo tuʻuina atu i le Laulau 1(B). O faʻamatalaga PSD o fasi silica gaogao ma fasi silica e fusifusia i le ligand o loʻo faʻaalia i le Ata 3(B). O taunuuga e tutusa ma la matou suʻesuʻega muamua. O le tele o pu o fasi silica gaogao ma fasi silica e fusifusia i le ligand e 310 ma le 241, i le faasologa, lea e faʻaalia ai o le tele o pu e faʻaitiitia i le 69 pe a uma le suiga faʻakemikolo, e pei ona faʻaalia i le Laulau 1(B), ma o le suiga o le piʻo o loʻo faʻaalia i le Ata 3(B). I se tulaga tutusa, o le tele o pu o fasi silica na faʻaitiitia mai le 0.67 i le 0.58 cm3/g pe a uma le suiga faʻakemikolo. O le lautele patino o le pito i luga o fasi silica o loʻo suʻesuʻeina nei e 116 m2/g, lea e tutusa ma la matou suʻesuʻega muamua (124 m2/g). E pei ona faʻaalia i le Laulau 1(B), o le lautele o le pito i luga (m2/g) o fasi silica na faʻaitiitia foi mai le 116 m2/g i le 105 m2/g pe a uma le faʻakemikolo. suiga.
O fa'ai'uga o le su'esu'ega elemene o le vaega tumau o lo'o fa'aalia i le Laulau 2. O le utaina o le kaponi o le vaega tumau o lo'o iai nei e 6.35%, lea e maualalo ifo nai lo le utaina o le kaponi o la matou su'esu'ega muamua (polystyrene bonded silica particles, 7.93%35 ma le 10.21%, i le fa'asologa) 42. O le utaina o le kaponi o le vaega tumau o lo'o iai nei e maualalo, Aua i le sauniuniga o le SP o lo'o iai nei, e fa'aopoopo i le styrene, o nisi o ligands polar e pei o le phenylmaleimide-methylvinylisocyanate (PCMP) ma le 4-hydroxy-TEMPO na fa'aaogaina. O le pasene mamafa o le nitrogen o le vaega tumau o lo'o iai nei e 2.21%, pe a fa'atusatusa i le 0.1735 ma le 0.85% i le mamafa o le nitrogen i su'esu'ega muamua, i le fa'asologa. O lona uiga o le wt % o le nitrogen e maualuga atu i le vaega tumau o lo'o iai nei ona o le phenylmaleimide. I se tulaga tutusa, o utaina o le kaponi o oloa (4) ma le (5) e 2.7% ma le 2.9%, i le fa'asologa, ae o le utaina o le kaponi o le fa'ai'uga O le oloa (6) e 6.35%, e pei ona faaalia i le Laulau 2. O le pa'ū o le mamafa na siakiina i le vaega tumau o le PMP, ma o le pi'o TGA o lo'o faaalia i le Ata 4. O le pi'o TGA o lo'o faaalia ai le pa'ū o le mamafa e 8.6%, lea e ogatasi lelei ma le utaina o le kaponi (6.35%) aua o ligands e le gata o lo'o iai le C ae fa'apea fo'i le N, O, ma le H.
O le phenylmaleimide-methylvinylisocyanate ligand na filifilia mo le suia o luga o fasi silica ona o loʻo i ai vaega polar phenylmaleimide ma vaega vinylisocyanate. E mafai e vaega vinyl isocyanate ona toe tali atu ma le styrene e ala i le ola radical polymerization. O le mafuaʻaga lona lua o le faʻaofiina lea o se vaega e iai se fegalegaleaiga talafeagai ma le analyte ma e leai se fegalegaleaiga eletise malosi i le va o le analyte ma le vaega tumau, talu ai o le vaega phenylmaleimide e leai se totogi faʻapitoa i le pH masani. O le polarity o le vaega tumau e mafai ona pulea e le aofaʻi sili ona lelei o le styrene ma le taimi tali atu o le free radical polymerization. O le laʻasaga mulimuli o le tali atu (free-radical polymerization) e taua tele ma e mafai ona suia le polarity o le vaega tumau. Na faia le suʻesuʻega elemene e siaki ai le utaina o le carbon o nei vaega tumau. Na matauina o le faʻateleina o le aofaʻi o le styrene ma le taimi tali atu na faʻateleina ai le utaina o le carbon o le vaega tumau ma le faʻafeagai. O SPs na saunia ma le eseese o le styrene e iai utaina o le carbon eseese. Toe fai, uta nei vaega tumau i totonu o koluma uʻamea e le gaoia ma siaki a latou faʻatinoga chromatographic. (filifiliga, iugafono, tau N, ma isi). E faʻavae i luga o nei faʻataʻitaʻiga, na filifilia ai se faʻatulagaga faʻaleleia e saunia ai le vaega tumau o le PMP e faʻamautinoa ai le pulea o le polarity ma le lelei o le taofiga o le analyte.
E lima fa'afefiloi peptide (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) na iloiloina fo'i e fa'aaoga ai se koluma PMP e fa'aaoga ai se vaega feavea'i; 60/40 (v/v) acetonitrile/vai (0.1% TFA) i le fua faatatau o le tafe o le 80 μL/min. I lalo o tulaga sili ona lelei o le elution, o le numera o le plate theoretical (N) i le koluma (100 × 1.8 mm id) e 20,000 ± 100 (200,000 plates/m²). O le Laulau 3 o loʻo tuʻuina mai ai tau N mo koluma e tolu o le PMP ma o chromatograms o loʻo faʻaalia i le Ata 5A. Suʻesuʻega vave i luga o le koluma PMP i le fua faatatau maualuga o le tafe (700 μL/min), e lima peptides na eluted i totonu o le tasi le minute, e matua lelei lava tau N, 13,500 ± 330 i le koluma (100 × 1.8 mm id), E fetaui ma le 135,000 plates/m (Ata 5B). E tolu koluma tutusa le lapopoa (100 × 1.8 mm id) na faʻapipiʻiina i ni vaega eseese se tolu o le PMP stationary phase e siaki ai le toe gaosia. O le O le maualuga o le analyte mo koluma taʻitasi na faʻamaumauina e faʻaaoga ai tulaga sili ona lelei o le elution ma le aofaʻi o papatusi faʻateorē N ma le taimi e taofia ai e vavaeʻese ai le paluga faʻataʻitaʻi tutusa i koluma taʻitasi. O faʻamatalaga toe gaosia mo koluma PMP o loʻo faʻaalia i le Laulau 4. O le toe gaosia o le koluma PMP e fesoʻotaʻi lelei ma tau maualalo o le %RSD, e pei ona faʻaalia i le Laulau 3.
Vavaeeseina o le paluga peptide i luga o le koluma PMP (B) ma le koluma Ascentis Express RP-Amide (A); vaega feavea'i 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), fua o le koluma PMP (100 × 1.8 mm id); fa'ata'ita'iga O le fa'asologa o le elution o vaila'au: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) ma le 5 (leucine) acid enkephalin)).
O se koluma PMP (100 × 1.8 mm id) na iloiloina mo le vavaeeseina o tryptic digests o le human serum albumin i le high performance liquid chromatography. O le chromatogram i le Ata 6 o loʻo faʻaalia ai o le faʻataʻitaʻiga ua vaeluaina lelei ma o le iugafono e matua lelei lava. Na iloiloina HSA digests e faʻaaoga ai le fua faatatau o le tafe o le 100 µL/min, mobile phase 70/30 acetonitrile/vai ma le 0.1% TFA. E pei ona faʻaalia i le chromatogram (Ata 6), o le HSA digestion ua vaevaeina i ni tumutumu e 17 e fetaui ma peptides e 17. O le lelei o le vavaeeseina o tumutumu taʻitasi i le HSA digest na fuafuaina ma o tau o loʻo tuʻuina atu i le Laulau 5.
O se tryptic digest o le HSA (100 × 1.8 mm id) na vaevaeina i luga o le koluma PMP; fua faatatau o le tafe (100 µL/min), vaega feaveaʻi 60/40 acetonitrile/vai ma le 0.1% TFA.
lea o le L o le umi o le koluma, o le η o le viscosity o le vaega feaveaʻi, o le ΔP o le mamafa i tua o le koluma, ma o le u o le saoasaoa laina o le vaega feaveaʻi. O le permeability o le koluma PMP o le 2.5 × 10-14 m2, o le fua faatatau o le tafe o le 25 μL/min, ma le 60/40 v/v ACN/vai na faʻaaogaina. O le permeability o le koluma PMP (100 × 1.8 mm id) e tutusa ma le mea na faia i la matou suʻesuʻega muamua Ref.34. O le permeability o le koluma ua faʻatumuina i ni vaega porous superficial e: 1.7 × 10-15 mo vaega 1.3 μm, 3.1 × 10-15 mo vaega 1.7 μm, 5.2 × 10-15 ma le 2.5 × 10-14 m2 mo vaega 2.6 μm Mo vaega 5 μm 43. O le mea lea, o le permeability o le vaega PMP e tutusa ma vaega o le 5 μm core-shell.
lea o le Wx o le mamafa o le koluma ua fa'atumuina i le chloroform, o le Wy o le mamafa o le koluma ua fa'atumuina i le methanol, ma o le ρ o le mafiafia o le solvent. O le mafiafia o le methanol (ρ = 0.7866) ma le chloroform (ρ = 1.484). O le porosity atoa o koluma SILICA PARTICLES-C18 (100 × 1.8 mm id) 34 ma koluma C18-Urea 31 na matou su'esu'eina muamua e 0.63 ma le 0.55, i le faasologa. O lona uiga o le i ai o ligands urea e fa'aitiitia ai le permeability o le vaega tumau. I le isi itu, o le porosity atoa o le koluma PMP (100 × 1.8 mm id) e 0.60. O le permeability o koluma PMP e maualalo ifo nai lo koluma ua fa'atumuina i vaega silica C18-bonded aua i vaega tumau C18 o ligands C18 e fa'apipi'i i vaega silica o ni filifili laina, ae i vaega tumau polystyrene-type, o le A polymer layer e mafiafia tele e fausia i tafatafa. I se faʻataʻitaʻiga masani, o le porosity o le koluma e fuafuaina e pei ona:
O le Ata 7A,B o loʻo faʻaalia ai le koluma PMP (100 × 1.8 mm id) ma le koluma Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 mm id) e faʻaaogaina ai tulaga tutusa o le elution (e pei o le 60/40 ACN/H2O ma le 0.1% TFA). ) o le van Deemter plot. O paluga peptide ua filifilia (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) sa saunia i le 20 µL/. O le fua faatatau maualalo mo koluma uma e lua e 800 µL/min. O tau maualalo o le HETP i le fua faatatau sili ona lelei o le tafe (80 µL/min) mo le koluma PMP ma le koluma Ascentis Express RP-Amide e 2.6 µm ma le 3.9 µm, i le faasologa. O tau o le HETP e faailoa mai ai o le lelei o le vavaeesega o le koluma PMP (100 × 1.8 mm id) e sili atu nai lo le koluma Ascentis Express RP-Amide o loʻo maua i pisinisi (100 × 1.8 mm id). O le van Deemter plot i le Ata 7(A) o loʻo faaalia ai o le faaitiitia o le tau N faatasi ai ma le faateleina o le tafe e le taua pe a faatusatusa i la matou suesuega muamua. O le maualuga o le lelei o le vavaeesega o le koluma PMP (100 × 1.8 mm id) pe a faʻatusatusa i le koluma Ascentis Express RP-Amide e faʻavae i luga o faʻaleleiga i foliga o vaega, tele, ma faiga faigata o le teuina o koluma na faʻaaogaina i le galuega o loʻo iai nei34.
(A) van Deemter plot (HETP e fa'atusatusa i le saoasaoa fa'asolosolo o le vaega feavea'i) na maua e fa'aaoga ai le koluma PMP (100 × 1.8 mm id) i le 60/40 ACN/H2O ma le 0.1% TFA.(B) van Deemter plot (HETP e fa'atusatusa i le saoasaoa fa'asolosolo o le vaega feavea'i) na maua e fa'aaoga ai le koluma Ascentis Express RP-Amide (100 × 1.8 mm id) i le 60/40 ACN/H2O ma le 0.1% TFA.
Sa saunia ma iloiloina se vaega tumau o le polystyrene ua fa'apipi'iina i le polar mo le vavae'eseina o fa'afefiloi peptide fa'apitoa ma trypsin digests o le human serum albumin (HAS) i le chromatography vai maualuga. O le fa'atinoga chromatographic o koluma PMP mo fa'afefiloi peptide e sili ona lelei i le lelei o le vavae'eseina ma le fofo. O le fa'atinoga fa'aleleia o le vavae'eseina o koluma PMP e mafua mai i le tele o mafua'aga, e pei o le tele o le vaega ma le tele o pu o vaega silica, le fa'atonutonuina o le synthesis o le vaega tumau, ma le fa'apipi'iina o koluma faigata. I le fa'aopoopoga i le lelei o le vavae'eseina, o le mamafa maualalo o le koluma i le maualuga o le tafe o le isi lea tulaga lelei o lenei vaega tumau. O koluma PMP e fa'aalia ai le toe gaosia lelei ma e mafai ona fa'aaogaina mo le su'esu'eina o fa'afefiloi peptide ma le trypsin digestion o polotini eseese. Matou te fuafua e fa'aaoga lenei koluma mo le vavae'eseina o oloa masani, vaila'au bioactive mai la'au fa'afoma'i ma fungal extracts i le chromatography vai. I le lumana'i, o le a iloiloina fo'i koluma PMP mo le vavae'eseina o polotini ma monoclonal antibodies.
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