Nature.com ପରିଦର୍ଶନ କରିବା ପାଇଁ ଆପଣଙ୍କୁ ଧନ୍ୟବାଦ। ଆପଣ ବ୍ୟବହାର କରୁଥିବା ବ୍ରାଉଜର ସଂସ୍କରଣରେ CSS ପାଇଁ ସୀମିତ ସମର୍ଥନ ଅଛି। ସର୍ବୋତ୍ତମ ଅଭିଜ୍ଞତା ପାଇଁ, ଆମେ ଆପଣଙ୍କୁ ଏକ ଅପଡେଟ୍ ବ୍ରାଉଜର୍ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ସୁପାରିଶ କରୁଛୁ (କିମ୍ବା ଇଣ୍ଟରନେଟ୍ ଏକ୍ସପ୍ଲୋରରରେ ସୁସଙ୍ଗତତା ମୋଡ୍ ବନ୍ଦ କରନ୍ତୁ)। ଏହି ସମୟ ମଧ୍ୟରେ, ନିରନ୍ତର ସମର୍ଥନ ସୁନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ସାଇଟ୍‌କୁ ଷ୍ଟାଇଲ୍ ଏବଂ JavaScript ବିନା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିବୁ।
ମାକ୍ରୋପୋରସ୍ କଣିକା ପାଇବା ପାଇଁ କିଛି ପରିବର୍ତ୍ତନ ସହିତ ଏକ ସୋଲ୍-ଜେଲ୍ ପଦ୍ଧତି ଦ୍ୱାରା ଛିଦ୍ରଯୁକ୍ତ ସିଲିକା କଣିକା ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା। ଏହି କଣିକାଗୁଡ଼ିକୁ ପଲିଷ୍ଟାଇରିନ୍ (PMP) ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟର N-ଫିନାଇଲ୍ମାଲେଇମାଇଡ୍ ଇଣ୍ଟରକଲେସନ୍ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିବା ପାଇଁ N-ଫିନାଇଲ୍ମାଲେଇମାଇଡ୍-ମିଥାଇଲ୍ଭିନାଇଲିସୋସାଇନେଟ୍ (PMI) ଏବଂ ଷ୍ଟାଇରିନ୍ ସହିତ ରିଭର୍ସିବଲ୍ ଆଡିସନ୍ ଫ୍ରାଗ୍ମେଣ୍ଟେସନ୍ ଚେନ୍ ଟ୍ରାନ୍ସଫର୍ (RAFT) ପଲିମରାଇଜେସନ୍ ଦ୍ୱାରା ଉତ୍ପନ୍ନ କରାଯାଇଥିଲା। ସଂକୀର୍ଣ୍ଣ-ବୋର୍ ଷ୍ଟେନଲେସ୍ ଷ୍ଟିଲ୍ ସ୍ତମ୍ଭ (100 × 1.8 mm id) ସ୍ଲରି ପ୍ୟାକିଂ ଦ୍ୱାରା ପ୍ୟାକ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ପାଞ୍ଚଟି ପେପ୍ଟାଇଡ୍ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, leucine enkephalin) କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା) ଏବଂ ମାନବ ସେରମ୍ ଆଲବୁମିନ୍ (HAS) ର ଟ୍ରିପସିନ୍ ପାଚନ ସହିତ ଗଠିତ ଏକ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ମିଶ୍ରଣର PMP ସ୍ତମ୍ଭ ପୃଥକୀକରଣ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା। ସର୍ବୋତ୍ତମ ନିର୍ଗମନ ପରିସ୍ଥିତିରେ, ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ମିଶ୍ରଣର ସୈଦ୍ଧାନ୍ତିକ ପ୍ଲେଟ୍ ଗଣନା 280,000 ପ୍ଲେଟ୍/m² ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଉଚ୍ଚ। ବିକଶିତ ସ୍ତମ୍ଭର ପୃଥକୀକରଣ କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତାକୁ N-ଫିନାଇଲ୍ମାଲେଇମାଇଡ୍-ମିଥାଇଲ୍ମାଲେଇମାଇଡ୍ ସହିତ ତୁଳନା କରିବା। ବାଣିଜ୍ୟିକ ଆସେଣ୍ଟିସ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସ୍ RP-ଆମାଇଡ୍ ସ୍ତମ୍ଭରେ, ଏହା ଦେଖାଯାଇଥିଲା ଯେ ପୃଥକୀକରଣ ଦକ୍ଷତା ଏବଂ ସମାଧାନ ଦୃଷ୍ଟିରୁ PMP ସ୍ତମ୍ଭର ପୃଥକୀକରଣ କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ବାଣିଜ୍ୟିକ ସ୍ତମ୍ଭ ଅପେକ୍ଷା ଉନ୍ନତ ଥିଲା।
ସାମ୍ପ୍ରତିକ ବର୍ଷଗୁଡ଼ିକରେ, ଜୈବ ଔଷଧ ଶିଳ୍ପ ଏକ ବିସ୍ତାରିତ ବିଶ୍ୱ ବଜାରରେ ପରିଣତ ହୋଇଛି ଯାହାର ବଜାର ଅଂଶରେ ଯଥେଷ୍ଟ ବୃଦ୍ଧି ଘଟିଛି। ଜୈବ ଔଷଧ ଶିଳ୍ପର ବିସ୍ଫୋରକ ବୃଦ୍ଧି ସହିତ 1,2,3, ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍‌ର ବିଶ୍ଳେଷଣ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଆକାଂକ୍ଷିତ। ଲକ୍ଷ୍ୟ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ବ୍ୟତୀତ, ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ସଂଶ୍ଳେଷଣ ସମୟରେ ଅନେକ ଅଶୁଦ୍ଧତା ସୃଷ୍ଟି ହୁଏ, ତେଣୁ ଇଚ୍ଛିତ ଶୁଦ୍ଧତାର ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ପାଇବା ପାଇଁ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫିକ୍ ବିଶୋଧନ ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ। ଗୋଟିଏ ନମୁନାରେ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ଭାବରେ ଚିହ୍ନଟଯୋଗ୍ୟ ପ୍ରଜାତି ସଂଖ୍ୟା ବହୁଳ ଥିବାରୁ ଶରୀର ତରଳ, ଟିସୁ ଏବଂ କୋଷଗୁଡ଼ିକରେ ପ୍ରୋଟିନ୍‌ର ବିଶ୍ଳେଷଣ ଏବଂ ଚରିତ୍ରୀକରଣ ଏକ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଚ୍ୟାଲେଞ୍ଜିଂ କାର୍ଯ୍ୟ। ଯଦିଓ ଗଣ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମେଟ୍ରି ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍ କ୍ରମୀକରଣ ପାଇଁ ଏକ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଉପକରଣ, ଯଦି ଏପରି ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ ଗୋଟିଏ ପାସ୍‌ରେ ଗଣ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମିଟରରେ ଇଞ୍ଜେକ୍ଟ କରାଯାଏ, ତେବେ ପୃଥକୀକରଣ ଆଦର୍ଶ ହେବ ନାହିଁ। MS ବିଶ୍ଳେଷଣ ପୂର୍ବରୁ ତରଳ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି (LC) ପୃଥକୀକରଣ କାର୍ଯ୍ୟକାରୀ କରି ଏହି ସମସ୍ୟାକୁ ହ୍ରାସ କରାଯାଇପାରିବ, ଯାହା ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ସମୟରେ ଗଣ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମିଟରରେ ପ୍ରବେଶ କରୁଥିବା ବିଶ୍ଳେଷକଙ୍କ ସଂଖ୍ୟାକୁ ହ୍ରାସ କରିବ 4,5,6। ଏହା ସହିତ, ତରଳ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ପୃଥକୀକରଣ ସମୟରେ, ବିଶ୍ଳେଷକଗୁଡ଼ିକୁ ସଂକୀର୍ଣ୍ଣ ଅଞ୍ଚଳରେ କେନ୍ଦ୍ରିତ କରାଯାଇପାରିବ, ଯାହା ଦ୍ୱାରା ଏହି ବିଶ୍ଳେଷକଗୁଡ଼ିକୁ କେନ୍ଦ୍ରିତ କରାଯାଇପାରିବ ଏବଂ MS ଚିହ୍ନଟ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତାକୁ ଉନ୍ନତ କରାଯାଇପାରିବ। ତରଳ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି (LC) ଗତ ଦଶନ୍ଧି ମଧ୍ୟରେ ଯଥେଷ୍ଟ ଅଗ୍ରଗତି କରିଛି ଏବଂ ପ୍ରୋଟିଓମିକ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣରେ ଏକ ଲୋକପ୍ରିୟ କୌଶଳ ହୋଇସାରିଛି7,8,9,10।
ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ମିଶ୍ରଣର ଶୁଦ୍ଧିକରଣ ଏବଂ ପୃଥକୀକରଣ ପାଇଁ ବିପରୀତ-ଫେଜ୍ ତରଳ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି (RP-LC) ବହୁଳ ଭାବରେ ଅକ୍ଟାଡେସିଲ୍-ପରିବର୍ତ୍ତିତ ସିଲିକା (ODS)କୁ ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରି ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ11,12,13। ତଥାପି, RP ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟଗୁଡ଼ିକ ସେମାନଙ୍କର ଜଟିଳ ଗଠନ ଏବଂ ଆମ୍ଫିଫିଲିକ୍ ପ୍ରକୃତି 14,15 ଯୋଗୁଁ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍‌ର ସନ୍ତୋଷଜନକ ପୃଥକୀକରଣ ପ୍ରଦାନ କରେ ନାହିଁ। ତେଣୁ, ଏହି ବିଶ୍ଳେଷଣଗୁଡ଼ିକ ସହିତ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ଏବଂ ସଂରକ୍ଷଣ କରିବା ପାଇଁ ଧ୍ରୁବୀୟ ଏବଂ ଅଣ-ଧ୍ରୁବୀୟ ଅଂଶ ସହିତ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିବା ପାଇଁ ସ୍ୱତନ୍ତ୍ର ଭାବରେ ଡିଜାଇନ୍ ହୋଇଥିବା ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟଗୁଡ଼ିକ ଆବଶ୍ୟକ। ମିଶ୍ରିତ-ମୋଡ୍ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି, ଯାହା ମଲ୍ଟିମୋଡାଲ୍ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ପ୍ରଦାନ କରେ, ପେପ୍ଟାଇଡ୍, ପ୍ରୋଟିନ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଜଟିଳ ମିଶ୍ରଣର ପୃଥକୀକରଣ ପାଇଁ RP-LC ର ବିକଳ୍ପ ହୋଇପାରେ। ଅନେକ ମିଶ୍ରିତ-ମୋଡ୍ ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଛି, ଏବଂ ଏହି ପର୍ଯ୍ୟାୟଗୁଡ଼ିକ ସହିତ ପ୍ୟାକ୍ ହୋଇଥିବା ସ୍ତମ୍ଭଗୁଡ଼ିକୁ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍ ପୃଥକୀକରଣ ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଛି17,18,19,20,21। ମିଶ୍ରିତ-ମୋଡ୍ ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟ (WAX/RPLC, HILIC/RPLC, ଧ୍ରୁବୀୟ ଅନ୍ତର୍କାଲେସନ୍/RPLC) ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍ ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ। ଧ୍ରୁବୀୟ ଏବଂ ଅଣ-ଧ୍ରୁବୀୟ ଗୋଷ୍ଠୀର ଉପସ୍ଥିତି ଯୋଗୁଁ ପୃଥକୀକରଣ 22,23,24,25,26,27,28 । ସେହିପରି, ସହ-ସଂଯୋଜିତ ଧ୍ରୁବୀୟ ଗୋଷ୍ଠୀ ସହିତ ଧ୍ରୁବୀୟ ଅନ୍ତର୍କଲାଟିଂ ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟଗୁଡ଼ିକ ଧ୍ରୁବୀୟ ଏବଂ ଅଣ-ଧ୍ରୁବୀୟ ବିଶ୍ଳେଷଣକାରୀଙ୍କ ପାଇଁ ଭଲ ପୃଥକୀକରଣ ଶକ୍ତି ଏବଂ ଅନନ୍ୟ ଚୟନଶୀଳତା ଦେଖାଏ, କାରଣ ପୃଥକୀକରଣ ବିଶ୍ଳେଷଣକାରୀ ଏବଂ ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟ ମଧ୍ୟରେ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ଉପରେ ନିର୍ଭର କରେ । ବହୁମୁଖୀ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା 29, 30, 31, 32 । ସମ୍ପ୍ରତି, ଝାଙ୍ଗ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ । 30 ଏକ ଡୋଡେସିଲ୍-ସମାପ୍ତ ପଲିଆମାଇନ୍ ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିଥିଲା ​​ଏବଂ ହାଇଡ୍ରୋକାର୍ବନ, ଆଣ୍ଟିଡିପ୍ରେସାଣ୍ଟ, ଫ୍ଲାଭୋନଏଡ୍ସ, ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓସାଇଡ୍ସ, ଏଷ୍ଟ୍ରୋଜେନ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଅନେକ ବିଶ୍ଳେଷଣକୁ ସଫଳତାର ସହିତ ପୃଥକ କରିଥିଲା। ପୋଲାର ଇଣ୍ଟରକାଲେଟରରେ ଧ୍ରୁବୀୟ ଏବଂ ଅଣ-ଧ୍ରୁବୀୟ ଗୋଷ୍ଠୀ ଅଛି, ତେଣୁ ଏହାକୁ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ସ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନଗୁଡ଼ିକୁ ପୃଥକ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ ଯେଉଁଥିରେ ଉଭୟ ଜଳଫୋବିକ୍ ଏବଂ ଜଳଫିଲିକ୍ ଅଂଶ ଅଛି। ପୋଲାର-ସଂଯୁକ୍ତ ସ୍ତମ୍ଭ (ଯଥା, ଆମାଇଡ୍-ସଂଯୁକ୍ତ C18 ସ୍ତମ୍ଭ) ବାଣିଜ୍ୟିକ ଭାବରେ Ascentis Express RP-Amide ସ୍ତମ୍ଭ ନାମରେ ଉପଲବ୍ଧ, କିନ୍ତୁ ଏହି ସ୍ତମ୍ଭଗୁଡ଼ିକ କେବଳ ଆମାଇନ୍ 33 ର ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ।
ବର୍ତ୍ତମାନର ଅଧ୍ୟୟନରେ, HSA ର ପେପ୍ଟାଇଡ୍ସ ଏବଂ ଟ୍ରିପସିନ୍ ଡାଇଜେଷ୍ଟଗୁଡ଼ିକୁ ପୃଥକ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ପୋଲାର-ଏମ୍ବେଡେଡ୍ ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟ (N-ଫିନାଇଲ୍‌ମାଲେଇମାଇଡ୍-ଏମ୍ବେଡେଡ୍ ପଲିଷ୍ଟାଇନ୍) ପ୍ରସ୍ତୁତ ଏବଂ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା। ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟ ନିମ୍ନଲିଖିତ ରଣନୀତି ବ୍ୟବହାର କରି ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରସ୍ତୁତି ପ୍ରୋଟୋକଲରେ କିଛି ପରିବର୍ତ୍ତନ ସହିତ ଆମର ପୂର୍ବ ପ୍ରକାଶନରେ ଦିଆଯାଇଥିବା ପ୍ରକ୍ରିୟା ଅନୁସାରେ ଛିଦ୍ର ସିଲିକା କଣିକା ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା। ୟୁରିଆ, ପଲିଥିଲିନ୍ ଗ୍ଲାଇକୋଲ୍ (PEG), TMOS, ପାଣି ଆସେଟିକ୍ ଏସିଡ୍ ର ଅନୁପାତକୁ ବଡ଼ ଛିଦ୍ର ଆକାର ସହିତ ସିଲିକା କଣିକା ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିବା ପାଇଁ ସନ୍ତୁଳିତ କରାଯାଇଥିଲା। ଦ୍ୱିତୀୟତଃ, ଏକ ନୂତନ ଲିଗାଣ୍ଡ, ଫିନାଇଲ୍‌ମାଲେଇମାଇଡ୍-ମିଥାଇଲ୍ ଭିନାଇଲ୍ ଆଇସୋସାଇନେଟ୍, ସଂଶ୍ଳେଷିତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଏକ ପୋଲାର ଏମ୍ବେଡେଡ୍ ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିବା ପାଇଁ ସିଲିକା କଣିକାଗୁଡ଼ିକୁ ବ୍ୟୁତ୍ପନ୍ନ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ହୋଇଥିବା ପ୍ୟାକିଂ ସ୍କିମ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଫଳାଫଳ ହୋଇଥିବା ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟକୁ ଏକ ଷ୍ଟେନଲେସ୍ ଷ୍ଟିଲ୍ ସ୍ତମ୍ଭ (100 × 1.8 mm id) ରେ ପ୍ୟାକ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ସ୍ତମ୍ଭ ମଧ୍ୟରେ ଏକ ସମଜାତୀୟ ଶଯ୍ୟା ଗଠନ ହେବା ନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ ସ୍ତମ୍ଭ ପ୍ୟାକିଂକୁ ଯାନ୍ତ୍ରିକ କମ୍ପନ ସହିତ ସହାୟତା କରାଯାଏ। ପାଞ୍ଚଟି ପେପ୍ଟାଇଡ୍ସ ବିଶିଷ୍ଟ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ମିଶ୍ରଣର ପ୍ୟାକ୍ ହୋଇଥିବା ସ୍ତମ୍ଭ ପୃଥକୀକରଣ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରନ୍ତୁ; (ଗ୍ଲାଇ-ଟାୟାର, ଗ୍ଲାଇ-ଲେଉ-ଟାୟାର, ଗ୍ଲାଇ-ଗ୍ଲାଇ-ଟାୟାର-ଆର୍ଗ, ଟାଇର-ଇଲେ-ଗ୍ଲାଇ-ସେର-ଆର୍ଗ, ଲ୍ୟୁସିନ୍ ଏନକେଫାଲିନ୍) ଏବଂ ମାନବ ସେରମ୍ ଆଲବୁମିନ୍ (HAS) ର ଟ୍ରିପ୍ସିନ୍ ଡାଇଜେଷ୍ଟ। HSA ର ପେପଟାଇଡ୍ ମିଶ୍ରଣ ଏବଂ ଟ୍ରିପ୍ସିନ୍ ଡାଇଜେଷ୍ଟ ଭଲ ରିଜୋଲ୍ୟୁସନ୍ ଏବଂ ଦକ୍ଷତା ସହିତ ପୃଥକ ହୋଇଥିବା ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା। PMP ସ୍ତମ୍ଭର ପୃଥକୀକରଣ କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତାକୁ Ascentis Express RP-Amide ସ୍ତମ୍ଭ ସହିତ ତୁଳନା କରାଯାଇଥିଲା। PMP ସ୍ତମ୍ଭରେ ଉଭୟ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍ ଭଲ ରିଜୋଲ୍ୟୁସନ୍ ଏବଂ ଦକ୍ଷତା ଥିବା ପରିଲକ୍ଷିତ ହୋଇଥିଲା, ଯାହା Ascentis Express RP-Amide ସ୍ତମ୍ଭ ଅପେକ୍ଷା ଅଧିକ ଦକ୍ଷ ଥିଲା।
PEG (ପଲିଥିଇଲିନ୍ ଗ୍ଲାଇକଲ୍), ୟୁରିଆ, ଆସେଟିକ୍ ଏସିଡ୍, ଟ୍ରାଇମେଥୋକ୍ସି ଅର୍ଥୋସିଲିକେଟ୍ (TMOS), ଟ୍ରାଇମିଥାଇଲ୍ କ୍ଲୋରୋସିଲେନ୍ (TMCS), ଟ୍ରିପ୍ସିନ୍, ହ୍ୟୁମାନ୍ ସେରମ୍ ଆଲବୁମିନ୍ (HSA), ଆମୋନିୟମ୍ କ୍ଲୋରାଇଡ୍, ୟୁରିଆ, ହେକ୍ସେନ ମିଥାଇଲଡିସିଲାଜେନ୍ (HMDS), ମେଥାକ୍ରିଲୋୟଲ୍ କ୍ଲୋରାଇଡ୍ (MC), ଷ୍ଟାଇରିନ୍, 4-ହାଇଡ୍ରୋକ୍ସି-ଟେମ୍ପୋ, ବେଞ୍ଜୋୟଲ୍ ପେରୋକ୍ସାଇଡ୍ (BPO), HPLC ଗ୍ରେଡ୍ ଆସେଟୋନିଟ୍ରାଇଲ୍ (ACN), ମିଥାନଲ୍, 2-ପ୍ରୋପାନୋଲ୍, ଏବଂ ଆସେଟୋନ୍ ସିଗମା-ଆଲଡ୍ରିଚ୍ (ସେଣ୍ଟ ଲୁଇସ୍, MO, USA) ରୁ କିଣାଯାଇଛି।
ୟୁରିଆ (8 ଗ୍ରାମ), ପଲିଥିଲିନ୍ ଗ୍ଲାଇକୋଲ୍ (8 ଗ୍ରାମ), ଏବଂ 0.01 N ଆସେଟିକ୍ ଏସିଡ୍ ର 8 mL ମିଶ୍ରଣକୁ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଘାଣ୍ଟାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ତା’ପରେ ବରଫ-ଥଣ୍ଡା ଅବସ୍ଥାରେ 24 mL TMOS ସେଥିରେ ଯୋଡାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ମିଶ୍ରଣକୁ 40°C ରେ 6 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଏବଂ ତା’ପରେ 120°C ରେ 8 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଏକ ଷ୍ଟେନଲେସ୍ ଷ୍ଟିଲ୍ ଅଟୋକ୍ଲେଭ୍ ରେ ଗରମ କରାଯାଇଥିଲା। ପାଣି ଢାଳି ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଅବଶିଷ୍ଟ ସାମଗ୍ରୀକୁ 70°C ରେ 12 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଶୁଖାଯାଇଥିଲା। ଶୁଖିଲା ନରମ ପଦାର୍ଥକୁ ଏକ ଚୁଲିରେ ମସୃଣ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 550°C ରେ 12 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ କ୍ୟାଲସାଇନ୍ କରାଯାଇଥିଲା। କଣିକା ଆକାର, ଛିଦ୍ର ଆକାର ଏବଂ ପୃଷ୍ଠ କ୍ଷେତ୍ରରେ ପୁନଃଉତ୍ପାଦନଶୀଳତା ପରୀକ୍ଷା କରିବା ପାଇଁ ତିନୋଟି ବ୍ୟାଚ୍ ପ୍ରସ୍ତୁତ ଏବଂ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରାଯାଇଥିଲା।
ସିଲିକା କଣିକାଗୁଡ଼ିକର ପୃଷ୍ଠ ପରିବର୍ତ୍ତନ ପୂର୍ବ-ସଂଶ୍ଳେଷିତ ଲିଗାଣ୍ଡ ଫିନାଇଲମାଲେଇମାଇଡ-ମିଥାଇଲଭିନାଇଲିସୋସାଇନେଟ୍ (PCMP) ସହିତ ଏବଂ ତା'ପରେ ଷ୍ଟାଇରିନ୍ ସହିତ ରେଡିଆଲ୍ ପଲିମରାଇଜେସନ୍ ଦ୍ୱାରା, ଏକ ଧ୍ରୁବୀୟ ଗୋଷ୍ଠୀ-ଧାରଣକାରୀ ଯୌଗିକ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା। ସମଷ୍ଟି ଏବଂ ପଲିଷ୍ଟାଇରିନ୍ ଶୃଙ୍ଖଳ ପାଇଁ ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟ। ପ୍ରସ୍ତୁତି ପ୍ରକ୍ରିୟା ନିମ୍ନରେ ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇଛି।
ଶୁଖିଲା ଟୋଲୁଇନରେ N-ଫିନାଇଲମାଲେଇମାଇଡ (200 ମିଗ୍ରା) ଏବଂ ମିଥାଇଲ ଭାଇନାଇଲ ଆଇସୋସାଇନେଟ (100 ମିଗ୍ରା) ଦ୍ରବୀଭୂତ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ଫିନାଇଲମାଲେଇମାଇଡ-ମିଥାଇଲ ଭାଇନାଇଲ ଆଇସୋସାଇନେଟ କୋପଲିମର (PMCP) ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଫ୍ଲାସ୍କରେ 0.1 ମିଲି 2,2′-ଆଜୋଇସୋବ୍ୟୁଟିରୋନିଟ୍ରାଇଲ (AIBN) ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା। ମିଶ୍ରଣକୁ 60°C ରେ 3 ​​ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଗରମ କରାଯାଇଥିଲା, ଫିଲ୍ଟର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 40°C ରେ 3 ​​ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଏକ ଚୁଲିରେ ଶୁଖାଯାଇଥିଲା।
ଶୁଖିଲା ସିଲିକା କଣିକା (2 ଗ୍ରାମ) ଶୁଖିଲା ଟୋଲୁଇନ୍ (100 ମିଲି) ରେ ବିସ୍ତାରିତ ହୋଇଥିଲା, 500 ମିଲି ଗୋଲ ତଳ ଫ୍ଲାସ୍କରେ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଘୁରାଇ ଏବଂ ସୋନିକେଟ କରାଯାଇଥିଲା। PMPC (10 ମିଲିଗ୍ରାମ) ଟୋଲୁଇନ୍ ରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ ଏକ ଡ୍ରପିଂ ଫନେଲ୍ ମାଧ୍ୟମରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଫ୍ଲାସ୍କରେ ଡ୍ରପ୍ୱାଇଜ୍ ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା। ମିଶ୍ରଣକୁ 8 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 100°C ରେ ରିଫ୍ଲକ୍ସ କରାଯାଇଥିଲା, ଆସିଟୋନ୍ ସହିତ ଫିଲ୍ଟର ଏବଂ ଧୋଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ 60°C ରେ 3 ​​ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଶୁଖାଯାଇଥିଲା। ତାପରେ, PMCP-ବନ୍ଧିତ ସିଲିକା କଣିକା (100 ଗ୍ରାମ) ଟୋଲୁଇନ୍ (200 ମିଲି) ରେ ଦ୍ରବୀଭୂତ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ 100 µL ଡିବ୍ୟୁଟିଲଟିନ୍ ଡାଇଲାଉରେଟ୍ ଏକ ଉତ୍ପ୍ରକାଶକ ଭାବରେ ଉପସ୍ଥିତିରେ 4-ହାଇଡ୍ରୋକ୍ସି-ଟେମ୍ପୋ (2 ମିଲି) ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା। ମିଶ୍ରଣକୁ 8 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 50°C ରେ ଘୁରାଇ, 3 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 50°C ରେ ଫିଲ୍ଟର ଏବଂ ଶୁଖାଯାଇଥିଲା।
ଷ୍ଟାଇରିନ୍ (1 mL), ବେଞ୍ଜୋୟଲ୍ ପେରୋକ୍ସାଇଡ୍ BPO (0.5 mL), ଏବଂ TEMPO-PMCP-ସଂଲଗ୍ନ ସିଲିକା କଣିକା (1.5 ଗ୍ରାମ) ଟୋଲୁଇନ୍‌ରେ ବିଛାଡ଼ି ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ୍ ସହିତ ପରିଷ୍କାର କରାଯାଇଥିଲା। ଷ୍ଟାଇରିନ୍‌ର ପଲିମରାଇଜେସନ୍ 100°C ରେ 12 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ କରାଯାଇଥିଲା। ଫଳସ୍ୱରୂପ ଉତ୍ପାଦକୁ ମିଥାନଲ୍ ସହିତ ଧୋଇ ରାତାରାତି 60°C ରେ ଶୁଖାଯାଇଥିଲା। ସାମଗ୍ରିକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଯୋଜନା ଚିତ୍ର 1 ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି।
ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ 10-3 Torr ରୁ କମ୍ ଅବଶିଷ୍ଟ ଚାପ ପାଇବା ପାଇଁ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 393 K ରେ ଗ୍ୟାସ୍ ଡିଗ୍ରେସ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ମୋଟ ଛିଦ୍ର ପରିମାଣ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ P/P0 = 0.99 ଆପେକ୍ଷିକ ଚାପରେ ଶୋଷିତ N2 ପରିମାଣ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ସ୍କାନିଂ ଇଲେକ୍ଟ୍ରନ୍ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପି (ହିଟାଚି ହାଇ ଟେକ୍ନୋଲୋଜିସ୍, ଟୋକିଓ, ଜାପାନ) ସହିତ ଖାଲି ଏବଂ ଲିଗାଣ୍ଡ-ବନ୍ଧିତ ସିଲିକା କଣିକାଗୁଡ଼ିକର ଆକାର ବିଜ୍ଞାନ ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା। ଶୁଖିଲା ନମୁନା (ଖାଲି ସିଲିକା ଏବଂ ଲିଗାଣ୍ଡ-ବନ୍ଧିତ ସିଲିକା କଣିକା) ଆଡେସିଭ୍ କାର୍ବନ ଟେପ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଏକ ଆଲୁମିନିୟମ୍ ସ୍ତମ୍ଭରେ ରଖାଯାଇଥିଲା। Q150T ସ୍ପଟର୍ କୋଟର୍ ବ୍ୟବହାର କରି ନମୁନାଗୁଡ଼ିକ ଉପରେ ସୁନା ପ୍ଲେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକ ଉପରେ 5 nm Au ସ୍ତର ଜମା କରାଯାଇଥିଲା। ଏହା କମ୍ ଭୋଲଟେଜ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ପ୍ରକ୍ରିୟା ଦକ୍ଷତାକୁ ଉନ୍ନତ କରେ ଏବଂ ସୂକ୍ଷ୍ମ ଶସ୍ୟ, ଥଣ୍ଡା ସ୍ପଟର୍ ପ୍ରଦାନ କରେ। ମୌଳିକ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ଏକ ଥର୍ମୋ ଇଲେକ୍ଟ୍ରନ୍ (ୱାଲ୍ଥାମ୍, MA, USA) ଫ୍ଲାସ୍ EA1112 ମୌଳିକ ବିଶ୍ଳେଷକ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। କଣିକା ଆକାର ବଣ୍ଟନ ପାଇବା ପାଇଁ ଏକ ମାଲଭର୍ନ (ୱର୍ସେଷ୍ଟରଶାୟାର, UK) ମାଷ୍ଟରସାଇଜର 2000 କଣିକା ଆକାର ବିଶ୍ଳେଷକ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ନଗ୍ନ ସିଲିକା କଣିକା ଏବଂ ଲିଗାଣ୍ଡ-ବନ୍ଧିତ ସିଲିକା କଣିକା (ପ୍ରତ୍ୟେକ 5 ମିଲି) 5 ମିଲି ଆଇସୋପ୍ରୋପାନୋଲରେ ବିସ୍ତାରିତ ହୋଇଥିଲା, 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ସୋନିକେଟ କରାଯାଇଥିଲା, 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଘୂର୍ଣ୍ଣିତ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ମାଷ୍ଟରସାଇଜରର ଅପ୍ଟିକାଲ୍ ବେଞ୍ଚରେ ରଖାଯାଇଥିଲା। 30 ରୁ 800 ଡିଗ୍ରୀ ସେଲସିୟସ୍ ତାପମାତ୍ରା ପରିସର ମଧ୍ୟରେ ପ୍ରତି ମିନିଟ୍ 5 ଡିଗ୍ରୀ ସେଲସିୟସ୍ ହାରରେ ଥର୍ମୋଗ୍ରାଭିମେଟ୍ରିକ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା।
ଗ୍ଲାସ୍-ରେଖାଯୁକ୍ତ ଷ୍ଟେନଲେସ୍ ଷ୍ଟିଲ୍ ସରୁ-ବୋର୍ ସ୍ତମ୍ଭଗୁଡ଼ିକର ପରିମାଣ (100 × 1.8 ମିମି id) ସ୍ଲରି ପ୍ୟାକିଂ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରି ପ୍ୟାକ୍ କରାଯାଇଥିଲା, ରେଫରେନ୍ସରେ ବ୍ୟବହୃତ ସମାନ ପ୍ରକ୍ରିୟା ପ୍ରୟୋଗ କରି। 31. ଏକ ଷ୍ଟେନଲେସ୍ ଷ୍ଟିଲ୍ ସ୍ତମ୍ଭ (ଗ୍ଲାସ୍-ଲାଇନ୍, 100 × 1.8 mm id) ଯେଉଁଥିରେ 1 µm ଫ୍ରିଟ୍ ଧାରଣ କରି ଏକ ଆଉଟଲେଟ୍ ଫିଟିଂ ସହିତ ଏକ ସ୍ଲରି ପ୍ୟାକର୍ (ଅଲଟେକ୍ ଡିଅରଫିଲ୍ଡ, IL, USA) ସହିତ ସଂଯୋଗ କରାଯାଇଥିଲା। 1.2 mL ମିଥାନଲରେ 150 mg ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟକୁ ସସପେଣ୍ଡ କରି ଏକ ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟ ସ୍ଲରି ପ୍ରସ୍ତୁତ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ଏହାକୁ ଷ୍ଟୋରେଜ୍ ସ୍ତମ୍ଭକୁ ପଠାନ୍ତୁ। ମିଥାନଲକୁ ସ୍ଲରି ଦ୍ରାବକ ଏବଂ ପ୍ରୋପେଲିଂ ଦ୍ରାବକ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 100 MP, 15 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 80 MP ଏବଂ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 60 MP ଚାପ ପ୍ରୟୋଗ କରି କ୍ରମାନୁସାରେ ସ୍ତମ୍ଭ ପୂରଣ କରନ୍ତୁ। ପ୍ୟାକିଂ ସମୟରେ, ସ୍ତମ୍ଭର ସମାନ ପ୍ୟାକିଂ ସୁନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ ଦୁଇଟି GC ସ୍ତମ୍ଭ ସେକର (ଅଲଟେକ୍, ଡିଅରଫିଲ୍ଡ, IL, USA) ସହିତ ଯାନ୍ତ୍ରିକ କମ୍ପନ ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଇଥିଲା। ସ୍ତମ୍ଭ ମଧ୍ୟରେ କୌଣସି କ୍ଷତିକୁ ରୋକିବା ପାଇଁ ସ୍ଲରି ପ୍ୟାକର୍ ବନ୍ଦ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ଧୀରେ ଧୀରେ ଚାପ ଛାଡି ଦିଅନ୍ତୁ। ସ୍ତମ୍ଭକୁ ସ୍ଲରି ପ୍ୟାକିଂ ୟୁନିଟ୍ ରୁ ବିଚ୍ଛିନ୍ନ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ଏହାର କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ଯାଞ୍ଚ କରିବା ପାଇଁ ଇନଲେଟ୍ ଏବଂ LC ସିଷ୍ଟମ ସହିତ ଅନ୍ୟ ଏକ ଫିଟିଂ ସଂଯୋଗ କରନ୍ତୁ।
ଏକ LC ପମ୍ପ (10AD Shimadzu, ଜାପାନ), 50nL ଇଞ୍ଜେକ୍ସନ ଲୁପ୍ ସହିତ ଇଞ୍ଜେକ୍ଟର (Valco (USA) C14 W.05), ମେମ୍ବ୍ରାନ୍ ଡିଗାସର୍ (Shimadzu DGU-14A), UV-VIS କ୍ୟାପିଲାରି ୱିଣ୍ଡୋ ନିର୍ମିତ ହୋଇଥିଲା | ସ୍ୱତନ୍ତ୍ର µLC ଡିଭାଇସ୍ ଡିଟେକ୍ଟର (UV-2075) ଏବଂ ଗ୍ଲାସ୍-ଲାଇନ୍ ମାଇକ୍ରୋକଲମ୍ | ଅତିରିକ୍ତ ସ୍ତମ୍ଭ ବ୍ୟାଣ୍ଡ ପ୍ରସାରଣର ପ୍ରଭାବକୁ କମ କରିବା ପାଇଁ ବହୁତ ସଂକୀର୍ଣ୍ଣ ଏବଂ ଛୋଟ ସଂଯୋଗକାରୀ ଟ୍ୟୁବିଂ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ | ପ୍ୟାକେଜିଂ ପରେ, ରିଡୁସିଂ ୟୁନିଅନର 1/16″ ଆଉଟଲେଟରେ କ୍ୟାପିଲାରି (50 μm id 365 ଏବଂ ରିଡୁସିଂ ୟୁନିଅନ୍ କ୍ୟାପିଲାରି (50 μm) ସ୍ଥାପିତ ହୋଇଥିଲା | Multichro 2000 ସଫ୍ଟୱେର୍ ବ୍ୟବହାର କରି ତଥ୍ୟ ସଂଗ୍ରହ ଏବଂ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫିକ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ କରାଯାଇଥିଲା | UV ଅବଶୋଷଣ ପାଇଁ 254 nm ବିଶ୍ଳେଷଣରେ ମନିଟରିଂ କରାଯାଇଥିଲା | କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫିକ୍ ତଥ୍ୟ OriginPro8 (Northampton, MA) ଦ୍ୱାରା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |
ମାନବ ସିରମ୍ ରୁ ଆଲବୁମିନ୍, ଲାଇଓଫାଇଲାଇଜ୍ଡ ପାଉଡର, ≥ 96% (ଆଗାରୋଜ୍ ଜେଲ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍) 3 ମିଗ୍ରା ଟ୍ରିପସିନ୍ (1.5 ମିଗ୍ରା), 4.0 ମିଗ୍ରା ୟୁରିଆ (1 ମିଲି), ଏବଂ 0.2 ମିଗ୍ରା ଆମୋନିୟମ୍ ବାଇକାର୍ବୋନେଟ୍ (1 ମିଲି) ସହିତ ମିଶ୍ରିତ। ଦ୍ରବଣକୁ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଘାଣ୍ଟାଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ 37°C ରେ 6 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଜଳ ସ୍ନାନରେ ରଖାଯାଇଥିଲା, ତାପରେ 0.1% TFA ର 1 ମି.ଲି. ସହିତ ଶାନ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା। ଦ୍ରବଣକୁ ଛାଣି 4°C ତଳେ ସଂରକ୍ଷଣ କରନ୍ତୁ।
PMP ସ୍ତମ୍ଭରେ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ମିଶ୍ରଣ ଏବଂ HSA ଟ୍ରିପସିନ୍ ଡାଇଜେଷ୍ଟର ପୃଥକୀକରଣକୁ ପୃଥକ ଭାବରେ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା। PMP ସ୍ତମ୍ଭ ଦ୍ୱାରା HSA ର ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ମିଶ୍ରଣ ଏବଂ ଟ୍ରିପସିନ୍ ଡାଇଜେଷ୍ଟର ପୃଥକୀକରଣ ଯାଞ୍ଚ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକୁ Ascentis Express RP-Amide ସ୍ତମ୍ଭ ସହିତ ତୁଳନା କରନ୍ତୁ। ତତ୍ତ୍ୱଗତ ପ୍ଲେଟ୍ ସଂଖ୍ୟା ନିମ୍ନଲିଖିତ ଭାବରେ ଗଣନା କରାଯାଇଛି:
ଖାଲି ସିଲିକା କଣିକା ଏବଂ ଲିଗାଣ୍ଡ-ବନ୍ଧିତ ସିଲିକା କଣିକାର SEM ପ୍ରତିଛବିଗୁଡ଼ିକ ଚିତ୍ର 2 ରେ ଦେଖାଯାଇଛି। ଖାଲି ସିଲିକା କଣିକା (A, B) ର SEM ପ୍ରତିଛବିଗୁଡ଼ିକ ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ, ଆମର ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନ ପରିବର୍ତ୍ତେ, ଏହି କଣିକାଗୁଡ଼ିକ ଗୋଲାକାର ଯେଉଁଥିରେ କଣିକାଗୁଡ଼ିକ ଲମ୍ବା କିମ୍ବା ଅନିୟମିତ ପ୍ରତିସମତା ଅଛି। ଲିଗାଣ୍ଡ-ବନ୍ଧିତ ସିଲିକା କଣିକା (C, D) ର ପୃଷ୍ଠ ଖାଲି ସିଲିକା କଣିକା ଅପେକ୍ଷା ମସୃଣ, ଯାହା ସିଲିକା କଣିକାର ପୃଷ୍ଠରେ ପଲିଷ୍ଟାଇରିନ୍ ଚେନର ଆବରଣ ହେତୁ ହୋଇପାରେ।
ଖାଲି ସିଲିକା କଣିକା (A, B) ଏବଂ ଲିଗାଣ୍ଡ-ବନ୍ଧିତ ସିଲିକା କଣିକା (C, D) ର ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋନ ମାଇକ୍ରୋସ୍କପ୍ ପ୍ରତିଛବି ସ୍କାନିଂ।
ଖାଲି ସିଲିକା କଣିକା ଏବଂ ଲିଗାଣ୍ଡ-ବନ୍ଧିତ ସିଲିକା କଣିକାର କଣିକା ଆକାର ବଣ୍ଟନ ଚିତ୍ର 3(A) ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି। ଆୟତନ-ଆଧାରିତ କଣିକା ଆକାର ବଣ୍ଟନ ବକ୍ରଗୁଡ଼ିକ ଦର୍ଶାଇଛନ୍ତି ଯେ ରାସାୟନିକ ପରିବର୍ତ୍ତନ ପରେ ସିଲିକା କଣିକାର ଆକାର ବୃଦ୍ଧି ପାଇଛି (ଚିତ୍ର 3A)। ବର୍ତ୍ତମାନର ଅଧ୍ୟୟନ ଏବଂ ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ସିଲିକା କଣିକାର କଣିକା ଆକାର ବଣ୍ଟନ ତଥ୍ୟକୁ ସାରଣୀ 1(A) ରେ ତୁଳନା କରାଯାଇଛି। PMP ର ଆୟତନ-ଆଧାରିତ କଣିକା ଆକାର, d(0.5), 3.36 μm, ଆମର ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନ ତୁଳନାରେ ad(0.5) ମୂଲ୍ୟ 3.05 μm (ପଲିଷ୍ଟାଇରିନ୍-ବନ୍ଧିତ ସିଲିକା କଣିକା) ସହିତ 34। ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ମିଶ୍ରଣରେ PEG, ୟୁରିଆ, TMOS ଏବଂ ଆସେଟିକ୍ ଏସିଡର ଭିନ୍ନ ଅନୁପାତ ହେତୁ ଏହି ବ୍ୟାଚରେ ଆମର ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନ ତୁଳନାରେ ଏକ ସଂକୀର୍ଣ୍ଣ କଣିକା ଆକାର ବଣ୍ଟନ ଥିଲା। PMP ପର୍ଯ୍ୟାୟର କଣିକା ଆକାର ଆମେ ପୂର୍ବରୁ ଅଧ୍ୟୟନ କରିଥିବା ପଲିଷ୍ଟାଇରିନ୍-ବନ୍ଧିତ ସିଲିକା କଣିକା ପର୍ଯ୍ୟାୟ ଅପେକ୍ଷା ଟିକିଏ ବଡ଼। ଏହାର ଅର୍ଥ ହେଉଛି ଷ୍ଟାଇରିନ୍ ସହିତ ସିଲିକା କଣିକାର ପୃଷ୍ଠ କାର୍ଯ୍ୟକାରିତା କେବଳ ସିଲିକା ପୃଷ୍ଠରେ ଏକ ପଲିଷ୍ଟାଇରିନ୍ ସ୍ତର (0.97 μm) ଜମା କରିଥିଲା, ଯେତେବେଳେ PMP ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ସ୍ତର ଘନତା 1.38 µm ଥିଲା।
ଖାଲି ସିଲିକା କଣିକା ଏବଂ ଲିଗାଣ୍ଡ-ବନ୍ଧିତ ସିଲିକା କଣିକାର କଣିକା ଆକାର ବଣ୍ଟନ (A) ଏବଂ ଛିଦ୍ର ଆକାର ବଣ୍ଟନ (B)।
ବର୍ତ୍ତମାନର ଅଧ୍ୟୟନର ସିଲିକା କଣିକାର ଛିଦ୍ର ଆକାର, ଛିଦ୍ର ଆୟତନ ଏବଂ ପୃଷ୍ଠ କ୍ଷେତ୍ରଫଳ ସାରଣୀ 1(B) ରେ ଦିଆଯାଇଛି। ଖାଲି ସିଲିକା କଣିକା ଏବଂ ଲିଗାଣ୍ଡ-ବନ୍ଧିତ ସିଲିକା କଣିକାର PSD ପ୍ରୋଫାଇଲ୍ ଚିତ୍ର 3(B) ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି। ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ଆମର ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନ ସହିତ ତୁଳନୀୟ। ଖାଲି ଏବଂ ଲିଗାଣ୍ଡ-ବନ୍ଧିତ ସିଲିକା କଣିକାର ଛିଦ୍ର ଆକାର ଯଥାକ୍ରମେ 310 ଏବଂ 241, ଯାହା ସୂଚିତ କରେ ଯେ ରାସାୟନିକ ପରିବର୍ତ୍ତନ ପରେ ଛିଦ୍ର ଆକାର 69 ହ୍ରାସ ପାଏ, ଯେପରି ସାରଣୀ 1(B) ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି, ଏବଂ ବକ୍ର ପରିବର୍ତ୍ତନ ଚିତ୍ର 3(B) ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି। ସେହିପରି, ରାସାୟନିକ ପରିବର୍ତ୍ତନ ପରେ ସିଲିକା କଣିକାର ଛିଦ୍ର ଆୟତନ 0.67 ରୁ 0.58 cm3/g କୁ ହ୍ରାସ ପାଇଛି। ବର୍ତ୍ତମାନ ଅଧ୍ୟୟନ କରାଯାଇଥିବା ସିଲିକା କଣିକାର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପୃଷ୍ଠ କ୍ଷେତ୍ରଫଳ 116 m2/g, ଯାହା ଆମର ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନ (124 m2/g) ସହିତ ତୁଳନୀୟ। ସାରଣୀ 1(B) ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଥିବା ପରି, ସିଲିକା କଣିକାର ପୃଷ୍ଠ କ୍ଷେତ୍ରଫଳ (m2/g) ମଧ୍ୟ 116 m2/g ରୁ ହ୍ରାସ ପାଇଛି। ରାସାୟନିକ ପରିବର୍ତ୍ତନ ପରେ 105 ବର୍ଗ ମିଟର/ଗ୍ରାମ।
ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟର ମୌଳିକ ବିଶ୍ଳେଷଣର ଫଳାଫଳ ସାରଣୀ 2 ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି। ବର୍ତ୍ତମାନ ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟର କାର୍ବନ ଲୋଡିଂ 6.35%, ଯାହା ଆମର ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନର କାର୍ବନ ଲୋଡିଂ (ପଲିଷ୍ଟାଇରିନ୍ ବଣ୍ଡେଡ୍ ସିଲିକା କଣିକା, ଯଥାକ୍ରମେ 7.93%35 ଏବଂ 10.21%) ତୁଳନାରେ କମ୍। 42. ବର୍ତ୍ତମାନ ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟର କାର୍ବନ ଲୋଡିଂ କମ୍, କାରଣ ବର୍ତ୍ତମାନର SP ପ୍ରସ୍ତୁତିରେ, ଷ୍ଟାଇରିନ୍ ବ୍ୟତୀତ, କିଛି ପୋଲାର ଲିଗାଣ୍ଡ ଯେପରିକି ଫିନାଇଲ୍ମାଲେଇମାଇଡ୍-ମିଥାଇଲ୍ଭିନାଇଲିସୋସାଇନେଟ୍ (PCMP) ଏବଂ 4-ହାଇଡ୍ରୋକ୍ସି-ଟେମ୍ପୋ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନରେ ଯଥାକ୍ରମେ ନାଇଟ୍ରୋଜେନ୍ ଓଜନ ଦ୍ୱାରା 0.1735 ଏବଂ 0.85% ତୁଳନାରେ ବର୍ତ୍ତମାନ ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟର ନାଇଟ୍ରୋଜେନ୍ ଓଜନ ପ୍ରତିଶତ 2.21%। ଏହାର ଅର୍ଥ ହେଉଛି ଫିନାଇଲ୍ମାଲେଇମାଇଡ୍ ଯୋଗୁଁ ବର୍ତ୍ତମାନ ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ନାଇଟ୍ରୋଜେନର wt % ଅଧିକ। ସେହିପରି, ଉତ୍ପାଦ (4) ଏବଂ (5) ର କାର୍ବନ ଲୋଡିଂ ଯଥାକ୍ରମେ 2.7% ଏବଂ 2.9% ଥିଲା, ଯେତେବେଳେ ଚୂଡ଼ାନ୍ତ ଉତ୍ପାଦ (6) ର କାର୍ବନ ଲୋଡିଂ 6.35% ଥିଲା, ଯେପରି ସାରଣୀ 2 ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି। ଓଜନ ହ୍ରାସ PMP ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟ ସହିତ ଯାଞ୍ଚ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ TGA ବକ୍ର ଚିତ୍ର 4 ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି। TGA ବକ୍ର 8.6% ଓଜନ ହ୍ରାସ ଦର୍ଶାଉଛି, ଯାହା କାର୍ବନ ଲୋଡିଂ (6.35%) ସହିତ ଉତ୍ତମ ସମାନ କାରଣ ଲିଗାଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକରେ କେବଳ C ନୁହେଁ ବରଂ N, O, ଏବଂ H ମଧ୍ୟ ଥାଏ।
ସିଲିକା କଣିକାଗୁଡ଼ିକର ପୃଷ୍ଠ ପରିବର୍ତ୍ତନ ପାଇଁ ଫିନାଇଲମାଲେଇମାଇଡ-ମିଥାଇଲଭିନାଇଲିସୋସାଇନେଟ୍ ଲିଗାଣ୍ଡକୁ ବାଛି ଦିଆଯାଇଥିଲା କାରଣ ଏଥିରେ ପୋଲାର ଫିନାଇଲମାଲେଇମାଇଡ ଗୋଷ୍ଠୀ ଏବଂ ଭିନାଇଲିସୋସାଇନେଟ୍ ଗୋଷ୍ଠୀ ଅଛି। ଭିନାଇଲ ଆଇସୋସାଇନେଟ୍ ଗୋଷ୍ଠୀଗୁଡ଼ିକ ଜୀବନ୍ତ ରାଡିକାଲ୍ ପଲିମରାଇଜେସନ୍ ଦ୍ୱାରା ଷ୍ଟାଇରିନ୍ ସହିତ ଆହୁରି ପ୍ରତିକ୍ରିୟା କରିପାରିବେ। ଦ୍ୱିତୀୟ କାରଣ ହେଉଛି ଏକ ଗୋଷ୍ଠୀ ପ୍ରବେଶ କରିବା ଯାହାର ବିଶ୍ଳେଷଣକାରୀ ସହିତ ଏକ ମଧ୍ୟମ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ଅଛି ଏବଂ ବିଶ୍ଳେଷଣକାରୀ ଏବଂ ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟ ମଧ୍ୟରେ କୌଣସି ଦୃଢ଼ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଷ୍ଟାଟିକ୍ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ନାହିଁ, କାରଣ ଫିନାଇଲମାଲେଇମାଇଡ୍ ଅଂଶର ସାଧାରଣ pH ରେ କୌଣସି ଭର୍ଚୁଆଲ୍ ଚାର୍ଜ ନାହିଁ। ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟର ଧ୍ରୁବତାକୁ ଷ୍ଟାଇରିନର ସର୍ବୋତ୍ତମ ପରିମାଣ ଏବଂ ମୁକ୍ତ ରାଡିକାଲ୍ ପଲିମରାଇଜେସନ୍ ର ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମୟ ଦ୍ୱାରା ନିୟନ୍ତ୍ରିତ କରାଯାଇପାରିବ। ପ୍ରତିକ୍ରିୟାର ଶେଷ ପଦକ୍ଷେପ (ମୁକ୍ତ-ରାଡିକାଲ୍ ପଲିମରାଇଜେସନ୍) ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଏବଂ ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟର ଧ୍ରୁବତାକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିପାରିବ। ଏହି ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟଗୁଡ଼ିକର କାର୍ବନ ଲୋଡିଂ ଯାଞ୍ଚ କରିବା ପାଇଁ ମୌଳିକ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ଏହା ଦେଖାଯାଇଥିଲା ଯେ ଷ୍ଟାଇରିନର ପରିମାଣ ଏବଂ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସମୟ ବୃଦ୍ଧି କରିବା ଦ୍ୱାରା ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟର କାର୍ବନ ଲୋଡିଂ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥିଲା ଏବଂ ବିପରୀତ। ଷ୍ଟାଇରିନର ବିଭିନ୍ନ ସାନ୍ଦ୍ରତା ସହିତ ପ୍ରସ୍ତୁତ SP ଗୁଡ଼ିକର ବିଭିନ୍ନ କାର୍ବନ ଲୋଡିଂ ଅଛି। ପୁଣି, ଏହି ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟଗୁଡ଼ିକୁ ଷ୍ଟେନଲେସ୍ ଷ୍ଟିଲ୍ ସ୍ତମ୍ଭରେ ଲୋଡ୍ କରନ୍ତୁ ଏବଂ ସେମାନଙ୍କର ଯାଞ୍ଚ କରନ୍ତୁ। କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା (ଚୟନଶୀଳତା, ରିଜୋଲ୍ୟୁସନ, N ମୂଲ୍ୟ, ଇତ୍ୟାଦି)। ଏହି ପରୀକ୍ଷଣଗୁଡ଼ିକ ଉପରେ ଆଧାର କରି, ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ପୋଲାରଟି ଏବଂ ଭଲ ବିଶ୍ଳେଷଣାତ୍ମକ ପ୍ରତିଧାରଣ ସୁନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ PMP ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ଡ ଫର୍ମୁଲେସନ୍ ଚୟନ କରାଯାଇଥିଲା।
ପାଞ୍ଚଟି ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ମିଶ୍ରଣ (ଗ୍ଲାଇ-ଟାୟାର, ଗ୍ଲାଇ-ଲିଉ-ଟାୟାର, ଗ୍ଲାଇ-ଗ୍ଲାଇ-ଟାୟାର-ଆର୍ଗ, ଟାଇର-ଇଲେ-ଗ୍ଲାଇ-ସେର-ଆର୍ଗ, ଲ୍ୟୁସିନ୍ ଏନକେଫାଲିନ୍) ମଧ୍ୟ ଏକ ମୋବାଇଲ୍ ଫେଜ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଏକ PMP ସ୍ତମ୍ଭ ବ୍ୟବହାର କରି ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା; 80 μL/ମିନିଟ୍ ପ୍ରବାହ ହାରରେ 60/40 (v/v) ଆସେଟୋନିଟ୍ରାଇଲ୍/ଜଳ (0.1% TFA)। ସର୍ବୋତ୍ତମ ନିର୍ଗମନ ପରିସ୍ଥିତିରେ, ପ୍ରତି ସ୍ତମ୍ଭ (100 × 1.8 mm id) ର ସୈଦ୍ଧାନ୍ତିକ ପ୍ଲେଟ୍ ସଂଖ୍ୟା (N) ହେଉଛି 20,000 ± 100 (200,000 ପ୍ଲେଟ୍/m²)। ସାରଣୀ 3 ତିନୋଟି PMP ସ୍ତମ୍ଭ ପାଇଁ N ମୂଲ୍ୟ ପ୍ରଦାନ କରେ ଏବଂ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାମଗୁଡ଼ିକୁ ଚିତ୍ର 5A ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି। ଉଚ୍ଚ ପ୍ରବାହ ହାର (700 μL/ମିନିଟ୍) ରେ ଏକ PMP ସ୍ତମ୍ଭ ଉପରେ ଦ୍ରୁତ ବିଶ୍ଳେଷଣ, ଗୋଟିଏ ମିନିଟ୍ ମଧ୍ୟରେ ପାଞ୍ଚଟି ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ନିଷ୍କ୍ରିୟ କରାଯାଇଥିଲା, N ମୂଲ୍ୟ ବହୁତ ଭଲ ଥିଲା, ପ୍ରତି ସ୍ତମ୍ଭରେ 13,500 ± 330 (100 × 1.8 mm id), 135,000 ପ୍ଲେଟ୍/ମି (ଚିତ୍ର 5B) ସହିତ ସମାନ। ତିନୋଟି ସମାନ ଆକାରର ସ୍ତମ୍ଭ (100 × 1.8 mm id) ଯାଞ୍ଚ କରିବା ପାଇଁ ତିନୋଟି ଭିନ୍ନ PMP ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟ ସହିତ ପ୍ୟାକ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରଜନନକ୍ଷମତା। ପ୍ରତ୍ୟେକ ସ୍ତମ୍ଭ ପାଇଁ ବିଶ୍ଳେଷଣାତ୍ମକ ସାନ୍ଦ୍ରତାକୁ ସର୍ବୋତ୍ତମ ନିର୍ଗମନ ଅବସ୍ଥା ଏବଂ ସୈଦ୍ଧାନ୍ତିକ ପ୍ଲେଟ ସଂଖ୍ୟା N ଏବଂ ପ୍ରତିଧାରଣ ସମୟ ବ୍ୟବହାର କରି ରେକର୍ଡ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା ଦ୍ୱାରା ପ୍ରତ୍ୟେକ ସ୍ତମ୍ଭରେ ସମାନ ପରୀକ୍ଷଣ ମିଶ୍ରଣକୁ ପୃଥକ କରାଯାଇପାରିବ। PMP ସ୍ତମ୍ଭ ପାଇଁ ପ୍ରଜନନକ୍ଷମତା ତଥ୍ୟ ସାରଣୀ 4 ରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି। PMP ସ୍ତମ୍ଭର ପ୍ରଜନନକ୍ଷମତା ସାରଣୀ 3 ରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି, ବହୁତ କମ୍ %RSD ମୂଲ୍ୟ ସହିତ ଭଲ ଭାବରେ ସମ୍ପର୍କିତ।
PMP ସ୍ତମ୍ଭ (B) ଏବଂ Ascentis Express RP-Amide ସ୍ତମ୍ଭ (A) ରେ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ମିଶ୍ରଣର ପୃଥକୀକରଣ; ମୋବାଇଲ୍ ଫେଜ୍ 60/40 ACN/H2O (TFA 0.1%), PMP ସ୍ତମ୍ଭ ପରିମାପ (100 × 1.8 mm id); ବିଶ୍ଳେଷଣାତ୍ମକ ଯୌଗିକଗୁଡ଼ିକର ନିର୍ଗମନ କ୍ରମ: 1 (Gly-Tyr), 2 (Gly-Leu-Tyr), 3 (Gly-Gly-Tyr-Arg), 4 (Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg) ଏବଂ 5 (leucine) ଏସିଡ୍ ଏନକେଫାଲିନ୍))।
ଉଚ୍ଚ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ ତରଳ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫିରେ ମାନବ ସେରମ୍ ଆଲବୁମିନର ଟ୍ରିପ୍ଟିକ୍ ଡାଇଜେଷ୍ଟଗୁଡ଼ିକୁ ପୃଥକ କରିବା ପାଇଁ ଏକ PMP ସ୍ତମ୍ଭ (100 × 1.8 mm id) ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା। ଚିତ୍ର 6 ରେ ଥିବା କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାମ ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ ନମୁନାଟି ଭଲ ଭାବରେ ପୃଥକ ହୋଇଛି ଏବଂ ରିଜୋଲ୍ୟୁସନ ବହୁତ ଭଲ। 100 µL/ମିନିଟ୍ ପ୍ରବାହ ହାର, ମୋବାଇଲ୍ ଫେଜ୍ 70/30 ଆସେଟୋନିଟ୍ରାଇଲ୍/ପାଣି ଏବଂ 0.1% TFA ବ୍ୟବହାର କରି HSA ଡାଇଜେଷ୍ଟଗୁଡ଼ିକୁ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାମ (ଚିତ୍ର 6) ରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି, HSA ଡାଇଜେଷ୍ଟକୁ 17 ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ସହିତ ସମାନ 17 ଶିଖରରେ ବିଭକ୍ତ କରାଯାଇଛି। HSA ଡାଇଜେଷ୍ଟରେ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଶିଖରର ପୃଥକୀକରଣ ଦକ୍ଷତା ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ସାରଣୀ 5 ରେ ଦିଆଯାଇଛି।
PMP ସ୍ତମ୍ଭରେ HSA (100 × 1.8 mm id) ର ଏକ ଟ୍ରିପ୍ଟିକ୍ ଡାଇଜେଷ୍ଟ ପୃଥକ କରାଯାଇଥିଲା; ପ୍ରବାହ ହାର (100 µL/ମିନିଟ୍), ମୋବାଇଲ୍ ଫେଜ୍ 60/40 ଆସେଟୋନିଟ୍ରାଇଲ୍/ପାଣି 0.1% TFA ସହିତ।
ଯେଉଁଠାରେ L ହେଉଛି ସ୍ତମ୍ଭ ଲମ୍ବ, η ହେଉଛି ମୋବାଇଲ ପର୍ଯ୍ୟାୟର ସାନ୍ଦ୍ରତା, ΔP ହେଉଛି ସ୍ତମ୍ଭ ପଛ ଚାପ, ଏବଂ u ହେଉଛି ମୋବାଇଲ ପର୍ଯ୍ୟାୟର ରେଖୀୟ ବେଗ। PMP ସ୍ତମ୍ଭର ପାରଗମ୍ୟତା 2.5 × 10-14 m2 ଥିଲା, ପ୍ରବାହ ହାର 25 μL/ମିନିଟ୍ ଥିଲା, ଏବଂ 60/40 v/v ACN/ଜଳ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। PMP ସ୍ତମ୍ଭର ପାରଗମ୍ୟତା (100 × 1.8 mm id) ଆମର ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନ ସହିତ ସମାନ ଥିଲା। Ref.34. ଉପର ଛିଦ୍ରଯୁକ୍ତ କଣିକା ସହିତ ପରିପୂର୍ଣ୍ଣ ସ୍ତମ୍ଭର ପାରଗମ୍ୟତା ହେଉଛି: 1.3 μm କଣିକା ପାଇଁ 1.7 × 10-15, 1.7 μm କଣିକା ପାଇଁ 3.1 × 10-15, 5.2 × 10-15 ଏବଂ 2.6 μm କଣିକା ପାଇଁ 2.5 × 10-14 m2 5 μm କଣିକା ପାଇଁ 43. ତେଣୁ, PMP ପର୍ଯ୍ୟାୟର ପାରଗମ୍ୟତା 5 μm ସହିତ ସମାନ। କୋର-ଖୋଳ କଣିକା।
ଯେଉଁଠାରେ Wx ହେଉଛି କ୍ଲୋରୋଫର୍ମରେ ପ୍ୟାକ୍ ହୋଇଥିବା ସ୍ତମ୍ଭର ଓଜନ, Wy ହେଉଛି ମିଥାନଲ୍ ସହିତ ପ୍ୟାକ୍ ହୋଇଥିବା ସ୍ତମ୍ଭର ଓଜନ, ଏବଂ ρ ହେଉଛି ଦ୍ରାବକଙ୍କ ଘନତା। ମିଥାନଲ୍ (ρ = 0.7866) ଏବଂ କ୍ଲୋରୋଫର୍ମ (ρ = 1.484) ର ଘନତା। ଆମେ ପୂର୍ବରୁ ଅଧ୍ୟୟନ କରିଥିବା SILICA PARICLES-C18 ସ୍ତମ୍ଭ (100 × 1.8 mm id) 34 ଏବଂ C18-ୟୁରିଆ ସ୍ତମ୍ଭ 31 ର ମୋଟ ପୋରୋସିଟି ଯଥାକ୍ରମେ 0.63 ଏବଂ 0.55 ଥିଲା। ଏହାର ଅର୍ଥ ହେଉଛି ୟୁରିଆ ଲିଗାଣ୍ଡର ଉପସ୍ଥିତି ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟର ପାରଗମ୍ୟତାକୁ ହ୍ରାସ କରେ। ଅନ୍ୟପକ୍ଷରେ, PMP ସ୍ତମ୍ଭ (100 × 1.8 mm id) ର ମୋଟ ପୋରୋସିଟି 0.60। PMP ସ୍ତମ୍ଭର ପାରଗମ୍ୟତା C18-ବନ୍ଧିତ ସିଲିକା କଣିକା ସହିତ ପ୍ୟାକ୍ ହୋଇଥିବା ସ୍ତମ୍ଭ ଅପେକ୍ଷା କମ୍ କାରଣ C18-ପ୍ରକାର ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ C18 ଲିଗାଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ସିଲିକା କଣିକା ସହିତ ରେଖୀୟ ଶୃଙ୍ଖଳ ଭାବରେ ସଂଲଗ୍ନ ଥାଏ, ଯେତେବେଳେ ପଲିଷ୍ଟାଇରିନ୍ ପ୍ରକାରର ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟ, ଏହା ଚାରିପାଖରେ ଏକ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ଘନ ପଲିମର ସ୍ତର ଗଠିତ ହୁଏ। ଏକ ସାଧାରଣ ପରୀକ୍ଷଣରେ, ସ୍ତମ୍ଭ ପୋରୋସିଟି ଏହିପରି ଗଣନା କରାଯାଏ:
ଚିତ୍ର 7A,B ରେ Van Deemter ପ୍ଲଟର ସମାନ ଇଲୁସନ୍ ଅବସ୍ଥା (ଯଥା, 60/40 ACN/H2O ଏବଂ 0.1% TFA) ବ୍ୟବହାର କରି PMP ସ୍ତମ୍ଭ (100 × 1.8 mm id) ଏବଂ Ascentis Express RP-Amide ସ୍ତମ୍ଭ (100 × 1.8 mm id) ଦେଖାଯାଇଛି। ଚୟନିତ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ମିଶ୍ରଣ (Gly-Tyr, Gly-Leu-Tyr, Gly-Gly-Tyr-Arg, Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg, Leucine Enkephalin) 20 µL/ ରେ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା। ଉଭୟ ସ୍ତମ୍ଭ ପାଇଁ ସର୍ବନିମ୍ନ ପ୍ରବାହ ହାର 800 µL/ମିନିଟ୍। PMP ସ୍ତମ୍ଭ ଏବଂ Ascentis Express RP-Amide ସ୍ତମ୍ଭ ପାଇଁ ସର୍ବୋତ୍ତମ ପ୍ରବାହ ହାର (80 µL/ମିନିଟ୍) ରେ ସର୍ବନିମ୍ନ HETP ମୂଲ୍ୟ ଯଥାକ୍ରମେ 2.6 µm ଏବଂ 3.9 µm ଥିଲା। HETP ମୂଲ୍ୟ ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ PMP ସ୍ତମ୍ଭ (100 × 1.8 mm id) ର ପୃଥକୀକରଣ ଦକ୍ଷତା ବାଣିଜ୍ୟିକ ଭାବରେ ଉପଲବ୍ଧ Ascentis Express RP-Amide ସ୍ତମ୍ଭ (100 × 1.8 mm id) ଅପେକ୍ଷା ବହୁତ ଭଲ। ଚିତ୍ର 7(A) ରେ ଥିବା ଭାନ୍ ଡିଏମ୍ଟର ପ୍ଲଟ୍ ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ ବର୍ଦ୍ଧିତ ପ୍ରବାହ ସହିତ N ମୂଲ୍ୟ ହ୍ରାସ ଆମର ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନ ତୁଳନାରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ନୁହେଁ। PMP ସ୍ତମ୍ଭର ଉଚ୍ଚ ପୃଥକୀକରଣ ଦକ୍ଷତା (100 × 1.8 mm id) Ascentis Express RP-Amide ସ୍ତମ୍ଭ ତୁଳନାରେ କଣିକା ଆକୃତି, ଆକାର ଏବଂ ବର୍ତ୍ତମାନର କାର୍ଯ୍ୟ34 ରେ ବ୍ୟବହୃତ ଜଟିଳ ସ୍ତମ୍ଭ ପ୍ୟାକିଂ ପ୍ରକ୍ରିୟାରେ ଉନ୍ନତି ଉପରେ ଆଧାରିତ।
(A) 0.1% TFA ସହିତ 60/40 ACN/H2O ରେ PMP ସ୍ତମ୍ଭ (100 × 1.8 mm id) ବ୍ୟବହାର କରି ପ୍ରାପ୍ତ ଭାନ୍ ଡିଏମ୍ଟର ପ୍ଲଟ୍ (HETP vs ମୋବାଇଲ୍ ଫେଜ୍ ରେଖୀୟ ବେଗ)। (B) 0.1% TFA ସହିତ 60/40 ACN/H2O ରେ Ascentis Express RP-Amide ସ୍ତମ୍ଭ (100 × 1.8 mm id) ବ୍ୟବହାର କରି ପ୍ରାପ୍ତ ଭାନ୍ ଡିଏମ୍ଟର ପ୍ଲଟ୍ (HETP vs ମୋବାଇଲ୍ ଫେଜ୍ ରେଖୀୟ ବେଗ)।
ଉଚ୍ଚ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ ତରଳ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫିରେ ମାନବ ସେରମ୍ ଆଲବୁମିନ୍ (HAS) ର ସିନ୍ଥେଟିକ୍ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ମିଶ୍ରଣ ଏବଂ ଟ୍ରିପ୍ସିନ୍ ଡାଇଜେଷ୍ଟଗୁଡ଼ିକୁ ପୃଥକ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ପୋଲାର-ଏମ୍ବେଡେଡ୍ ପଲିଷ୍ଟାଇନ୍ ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟ ପ୍ରସ୍ତୁତ ଏବଂ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା। ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ମିଶ୍ରଣ ପାଇଁ PMP ସ୍ତମ୍ଭଗୁଡ଼ିକର କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା ପୃଥକୀକରଣ ଦକ୍ଷତା ଏବଂ ସମାଧାନରେ ଉତ୍କୃଷ୍ଟ। PMP ସ୍ତମ୍ଭଗୁଡ଼ିକର ଉନ୍ନତ ପୃଥକୀକରଣ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା ବିଭିନ୍ନ କାରଣ ଯୋଗୁଁ ହୋଇଛି, ଯେପରିକି ସିଲିକା କଣିକାର କଣିକା ଆକାର ଏବଂ ଛିଦ୍ର ଆକାର, ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟର ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ସଂଶ୍ଳେଷଣ ଏବଂ ଜଟିଳ ସ୍ତମ୍ଭ ପ୍ୟାକିଂ। ଉଚ୍ଚ ପୃଥକୀକରଣ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା ସହିତ, ଉଚ୍ଚ ପ୍ରବାହ ହାରରେ କମ୍ ସ୍ତମ୍ଭ ପଛ ଚାପ ଏହି ସ୍ଥିର ପର୍ଯ୍ୟାୟର ଆଉ ଏକ ସୁବିଧା। PMP ସ୍ତମ୍ଭଗୁଡ଼ିକ ଭଲ ପ୍ରଜନନଶୀଳତା ପ୍ରଦର୍ଶନ କରନ୍ତି ଏବଂ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ମିଶ୍ରଣର ବିଶ୍ଳେଷଣ ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରୋଟିନ୍ ର ଟ୍ରିପ୍ସିନ୍ ପାଚନ ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ। ଆମେ ଏହି ସ୍ତମ୍ଭକୁ ପ୍ରାକୃତିକ ଉତ୍ପାଦ, ଔଷଧୀୟ ଉଦ୍ଭିଦରୁ ଜୈବ ସକ୍ରିୟ ଯୌଗିକ ଏବଂ ତରଳ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫିରେ ଫଙ୍ଗାଲ୍ ନିଷ୍କାସନକୁ ପୃଥକ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ଚାହୁଁଛୁ। ଭବିଷ୍ୟତରେ, ପ୍ରୋଟିନ୍ ଏବଂ ମୋନୋକ୍ଲୋନାଲ୍ ଆଣ୍ଟିବଡି ପୃଥକୀକରଣ ପାଇଁ PMP ସ୍ତମ୍ଭଗୁଡ଼ିକର ମଧ୍ୟ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯିବ।
ଫିଲ୍ଡ, ଜେକେ, ୟୁର୍ବି, ଏମ୍ଆର, ଲାଉ, ଜେ., ଥୋଗରସେନ, ଏଚ୍. ଏବଂ ପିଟରସନ, ପି. ରିଭର୍ସଡ୍ ଫେଜ୍ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି ଭାଗ I ଦ୍ୱାରା ପେପ୍ଟାଇଡ୍ ପୃଥକୀକରଣ ପ୍ରଣାଳୀ ଉପରେ ଗବେଷଣା: ଏକ ସ୍ତମ୍ଭ ଚରିତ୍ରୀକରଣ ପ୍ରୋଟୋକଲର ବିକାଶ। ଜେ. କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି.1603, 113–129.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2019.05.038 (2019)।
ଗୋମେଜ୍, ବି. ଏଟ୍ ଅନ୍ୟମାନେ। ସଂକ୍ରାମକ ରୋଗର ଚିକିତ୍ସା ପାଇଁ ଡିଜାଇନ୍ ହୋଇଥିବା ଉନ୍ନତ ସକ୍ରିୟ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ସ। ବାୟୋଟେକ୍ନୋଲୋଜି। ଆଡଭାନ୍ସଡ୍। 36(2), 415-429। https://doi.org/10.1016/j.biotechadv.2018.01.004 (2018)।
ଭ୍ଲିଘେ, ପି., ଲିସୋସ୍କି, ଭି., ମାର୍ଟିନେଜ୍, ଜେ. ଏବଂ କ୍ରେଷ୍ଟଚାଟିସ୍କି, ଏମ୍. ସିନ୍ଥେଟିକ୍ ଥେରାପୁଟିକ୍ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ସ: ବିଜ୍ଞାନ ଏବଂ ବଜାର। ଔଷଧ ଆବିଷ୍କାର।୧୫ (୧-୨) ଆଜି, ୪୦-୫୬।https://doi.org/10.1016/j.drudis.2009.10.009 (2010)।
ଜୀ, ଏଫ୍., ସ୍ମିଥ୍, ଆରଡି ଏବଂ ସେନ୍, ୱାଇ. ଆଡଭାନ୍ସଡ୍ ପ୍ରୋଟିଓମିକ୍ ଲିକ୍ୱିଡ୍ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି.ଜେ. କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି.ଏ ୧୨୬୧, ୭୮–୯୦ (୨୦୧୨)।
ଲିଉ, ଡବ୍ଲୁ. ଏଟ୍ ଅନ୍ୟମାନେ। ଉନ୍ନତ ତରଳ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି-ମାସ୍ ସ୍ପେକ୍ଟ୍ରୋମେଟ୍ରି ବ୍ୟାପକ ଭାବରେ ଲକ୍ଷ୍ୟଭେଦ ମେଟାବୋଲୋମିକ୍ସ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିଓମିକ୍ସ.ଆନସ୍.ଚିମ୍.ଆକ୍ଟା 1069, 89–97 (2019)କୁ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରିବାକୁ ସକ୍ଷମ କରିଥାଏ।
ଚେସନ୍ଟ, ଏସଏମ ଏବଂ ସାଲିସବରୀ, ଜେଜେ ଔଷଧ ବିକାଶରେ ୟୁଏଚପିଏଲସିର ଭୂମିକା। ଜେ. ସେପ୍ଟେମ୍ବର ବିଜ୍ଞାନ 30(8), 1183-1190 (2007)।
ଉ, ଏନ. ଏବଂ କ୍ଲାଉସେନ, ଏଏମ ଦ୍ରୁତ ପୃଥକୀକରଣ ପାଇଁ ଅଲ୍ଟ୍ରାହାଇ ପ୍ରେସର ତରଳ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫିର ମୌଳିକ ଏବଂ ବ୍ୟବହାରିକ ଦିଗ। ଜେ. ସେପ୍ଟେମ୍ବର. ବିଜ୍ଞାନ.30(8), 1167-1182. https://doi.org/10.1002/jssc.200700026 (2007)।
ରେନ୍, ଏସଏ ଏବଂ ଚେଲିଟେଚେଫ୍, ପି. ଔଷଧ ବିକାଶରେ ଅଲ୍ଟ୍ରା-ହାଇ ପରଫରମାନ୍ସ ଲିକ୍ୱିଡ୍ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫିର ପ୍ରୟୋଗ। ଜେ. କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି.୧୧୧୯(୧-୨), ୧୪୦-୧୪୬.https://doi.org/10.1016/j.chroma.2006.02.052 (୨୦୦୬)।
ଗୁ, ଏଚ୍. ଏଟ୍ ଅଲ୍। ଏଣ୍ଟେରୋଭାଇରସ୍‌ର ଦକ୍ଷ ବିଶୋଧନ ପାଇଁ ତେଲ-ଇନ୍-ୱାଟର ହାଇ ଇଣ୍ଟର୍ନାଲ ଫେଜ୍ ଇମଲ୍ସନ୍‌ରୁ ପ୍ରସ୍ତୁତ ମୋନୋଲିଥିକ୍ ମାକ୍ରୋପୋରସ୍ ହାଇଡ୍ରୋଜେଲ୍। କେମିକାଲ୍। ବ୍ରିଟେନ୍। ଜେ। ୪୦୧, ୧୨୬୦୫୧ (୨୦୨୦)।
ଶି, ୱାଇ., ସିଆଙ୍ଗ, ଆର., ହର୍ଭାଥ, ସି. ଏବଂ ୱିଲକିନ୍ସ, ଜେଏ ପ୍ରୋଟିଓମିକ୍ସରେ ତରଳ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫିର ଭୂମିକା। ଜେ. କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି। ଏ ୧୦୫୩(୧-୨), ୨୭-୩୬ (୨୦୦୪)।
ଫେକେଟେ, ଏସ୍., ଭ୍ୟୁଥେ, ଜେ.-ଏଲ. ଏବଂ ଗୁଇଲାର୍ମେ, ଡି. ଚିକିତ୍ସା ପେପ୍ଟାଇଡ୍ସ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନର ବିପରୀତ-ଫେଜ୍ ତରଳ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି ପୃଥକୀକରଣରେ ଉଦୀୟମାନ ଧାରା: ତତ୍ତ୍ୱ ଏବଂ ପ୍ରୟୋଗ। ଜେ. ଫାର୍ମାସି। ବାୟୋମେଡିକାଲ୍ ସାଇନ୍ସ। ଆନୁସ୍। 69, 9-27 (2012)।
ଗିଲାର, ଏମ୍., ଅଲିଭୋଭା, ପି., ଡାଲି, AE ଏବଂ ଗେବଲର, ଜେସି ପ୍ରଥମ ଏବଂ ଦ୍ୱିତୀୟ ପୃଥକୀକରଣ ପରିମାଣରେ ଭିନ୍ନ pH ମୂଲ୍ୟ ବ୍ୟବହାର କରି ଏକ RP-RP-HPLC ସିଷ୍ଟମ ବ୍ୟବହାର କରି ପେପ୍ଟାଇଡଗୁଡ଼ିକର ଦୁଇ-ପରିମାଣ ପୃଥକୀକରଣ। ଜେ. ସେପ୍ଟେମ୍ବର. Sci.28(14), 1694-1703 (2005)।
ଫେଲେଟି, ଏସ୍. ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ। C18 ଉପ-2 μm ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଏବଂ ପୃଷ୍ଠ ଛିଦ୍ରଯୁକ୍ତ କଣିକା ସହିତ ପ୍ୟାକ୍ ହୋଇଥିବା ଉଚ୍ଚ-ଦକ୍ଷତା କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫିକ୍ ସ୍ତମ୍ଭଗୁଡ଼ିକର ଗଣ ସ୍ଥାନାନ୍ତର ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟ ଏବଂ ଗତିଜ କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତା ଅନୁସନ୍ଧାନ କରାଯାଇଥିଲା। ଜେ. ସେପ୍ଟେମ୍ବର. ବିଜ୍ଞାନ.43 (9-10), 1737-1745 (2020)।
ପିଓଭେସାନା, ଏସ୍. ଏଟ୍ ଅଲ୍। ଉଦ୍ଭିଦ ଜୈବ ସକ୍ରିୟ ପେପ୍ଟାଇଡ୍ସର ପୃଥକୀକରଣ, ଚିହ୍ନଟ ଏବଂ ବୈଧକରଣରେ ସାମ୍ପ୍ରତିକ ଧାରା ଏବଂ ବିଶ୍ଳେଷଣାତ୍ମକ ଚ୍ୟାଲେଞ୍ଜ।anus.biological anus.Chemical.410(15), 3425–3444.https://doi.org/10.1007/s00216-018-0852-x (2018)।
ମୁଏଲର, ଜେବି ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ। ଜୀବନ ରାଜ୍ୟର ପ୍ରୋଟିଓମିକ୍ ଭୂଦୃଶ୍ୟ। ପ୍ରକୃତି 582(7813), 592-596। https://doi.org/10.1038/s41586-020-2402-x (2020)।
ଡେଲୁକା, ସି. ଏଟ୍ ଅଲ୍।ପ୍ରିପେରେଟିଭ୍ ଲିକ୍ୱିଡ୍ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି ଦ୍ୱାରା ଚିକିତ୍ସା ପେପ୍ଟାଇଡ୍ସର ଡାଉନଷ୍ଟ୍ରିମ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ।ମଲିକ୍ୟୁଲ୍ (ବାସେଲ୍, ସ୍ୱିଜରଲ୍ୟାଣ୍ଡ) 26(15), 4688(2021)।
ୟାଙ୍ଗ, ୱାଇ. ଏବଂ ଗେଙ୍ଗ, ଏକ୍ସ. ମିଶ୍ରିତ-ମୋଡ୍ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି ଏବଂ ବାୟୋପଲିମର୍ସରେ ଏହାର ପ୍ରୟୋଗ। ଜେ. କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି। ଏ 1218(49), 8813–8825 (2011)।
ଝାଓ, ଜି., ଡଙ୍ଗ୍, ଏକ୍ସ.-ୱାଇ. ଏବଂ ସନ୍, ୱାଇ. ମିଶ୍ରିତ-ମୋଡ୍ ପ୍ରୋଟିନ୍ କ୍ରୋମାଟୋଗ୍ରାଫି ପାଇଁ ଲିଗାଣ୍ଡସ୍: ନୀତି, ଚରିତ୍ରୀକରଣ ଏବଂ ଡିଜାଇନ୍। ଜେ. ବାୟୋଟେକ୍ନୋଲୋଜି.୧୪୪(୧), ୩-୧୧ (୨୦୦୯)।