សូមអរគុណសម្រាប់ការចូលមើលគេហទំព័រ Nature.com។ កំណែកម្មវិធីរុករកដែលអ្នកកំពុងប្រើមានការគាំទ្រ CSS មានកំណត់។ ដើម្បីទទួលបានបទពិសោធន៍ល្អបំផុត យើងសូមណែនាំឱ្យអ្នកប្រើកម្មវិធីរុករកដែលបានធ្វើបច្ចុប្បន្នភាព (ឬបិទរបៀបឆបគ្នានៅក្នុង Internet Explorer)។ ទន្ទឹមនឹងនេះ ដើម្បីធានាបាននូវការគាំទ្រជាបន្តបន្ទាប់ យើងនឹងបង្ហាញគេហទំព័រដោយគ្មានរចនាប័ទ្ម និង JavaScript។
ការធ្វើកោសល្យវិច័យរាវ (LB) គឺជាគោលគំនិតមួយដែលកំពុងទទួលបានប្រជាប្រិយភាពយ៉ាងឆាប់រហ័សនៅក្នុងវិស័យជីវវេជ្ជសាស្ត្រ។ គោលគំនិតនេះភាគច្រើនផ្អែកលើការរកឃើញបំណែកនៃ DNA ក្រៅកោសិកាដែលកំពុងចរាចរ (ccfDNA) ដែលភាគច្រើនត្រូវបានបញ្ចេញជាបំណែកតូចៗបន្ទាប់ពីការស្លាប់កោសិកានៅក្នុងជាលិកាផ្សេងៗ។ បំណែកមួយចំនួនតូចនៃបំណែកទាំងនេះមានប្រភពមកពីជាលិកា ឬសារពាង្គកាយបរទេស (បរទេស)។ នៅក្នុងការងារបច្ចុប្បន្ន យើងបានអនុវត្តគោលគំនិតនេះទៅលើខ្យង ដែលជាប្រភេទសត្វឆ្មាំដែលត្រូវបានគេស្គាល់ថាមានសមត្ថភាពច្រោះទឹកសមុទ្រខ្ពស់របស់វា។ យើងប្រើសមត្ថភាពរបស់ខ្យងដើម្បីដើរតួជាតម្រងធម្មជាតិដើម្បីចាប់យកបំណែក DNA បរិស្ថានពីប្រភពផ្សេងៗគ្នាដើម្បីផ្តល់ព័ត៌មានអំពីជីវៈចម្រុះនៃប្រព័ន្ធអេកូឡូស៊ីឆ្នេរសមុទ្រសមុទ្រ។ លទ្ធផលរបស់យើងបង្ហាញថា hemolymph របស់ខ្យងមានបំណែក DNA ដែលមានទំហំខុសៗគ្នាយ៉ាងខ្លាំង ចាប់ពី 1 ដល់ 5 kb។ ការធ្វើលំដាប់លំដោយកាំភ្លើងខ្លីបានបង្ហាញថាបំណែក DNA មួយចំនួនធំមានប្រភពដើមពីអតិសុខុមប្រាណបរទេស។ ក្នុងចំណោមនោះ យើងបានរកឃើញបំណែក DNA ពីបាក់តេរី បុរាណ និងវីរុស រួមទាំងវីរុសដែលគេដឹងថាឆ្លងដល់ម្ចាស់ផ្ទះជាច្រើនប្រភេទដែលត្រូវបានរកឃើញជាទូទៅនៅក្នុងប្រព័ន្ធអេកូឡូស៊ីសមុទ្រឆ្នេរសមុទ្រ។ សរុបមក ការសិក្សារបស់យើងបង្ហាញថា គោលគំនិតនៃ LB ដែលអនុវត្តចំពោះខ្យងតំណាងឱ្យប្រភពចំណេះដឹងដ៏សម្បូរបែប ប៉ុន្តែមិនទាន់ត្រូវបានរុករកអំពីភាពចម្រុះនៃអតិសុខុមប្រាណនៅក្នុងប្រព័ន្ធអេកូឡូស៊ីឆ្នេរសមុទ្រ។
ផលប៉ះពាល់នៃការប្រែប្រួលអាកាសធាតុ (CC) ទៅលើជីវៈចម្រុះនៃប្រព័ន្ធអេកូឡូស៊ីសមុទ្រ គឺជាវិស័យស្រាវជ្រាវដែលកំពុងរីកចម្រើនយ៉ាងឆាប់រហ័ស។ ការឡើងកំដៅផែនដីមិនត្រឹមតែបង្កភាពតានតឹងខាងសរីរវិទ្យាសំខាន់ៗប៉ុណ្ណោះទេ ប៉ុន្តែវាថែមទាំងជំរុញដែនកំណត់វិវត្តនៃស្ថេរភាពកម្ដៅនៃសារពាង្គកាយសមុទ្រ ដែលប៉ះពាល់ដល់ជម្រករបស់ប្រភេទសត្វមួយចំនួន ដែលជំរុញឱ្យពួកគេស្វែងរកលក្ខខណ្ឌអំណោយផលជាង [1, 2]។ បន្ថែមពីលើការប៉ះពាល់ដល់ជីវៈចម្រុះនៃមេតាហ្សូអាន CC រំខានដល់តុល្យភាពដ៏ឆ្ងាញ់នៃអន្តរកម្មរវាងម៉ាស៊ីន និងអតិសុខុមប្រាណ។ ជំងឺបាក់តេរីក្នុងអតិសុខុមប្រាណនេះបង្កការគំរាមកំហែងយ៉ាងធ្ងន់ធ្ងរដល់ប្រព័ន្ធអេកូឡូស៊ីសមុទ្រ ព្រោះវាធ្វើឱ្យសារពាង្គកាយសមុទ្រងាយនឹងឆ្លងមេរោគ [3, 4]។ គេជឿថា SS ដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការស្លាប់យ៉ាងច្រើន ដែលជាបញ្ហាធ្ងន់ធ្ងរសម្រាប់ការគ្រប់គ្រងប្រព័ន្ធអេកូឡូស៊ីសមុទ្រសកល [5, 6]។ នេះគឺជាបញ្ហាសំខាន់មួយដោយផ្អែកលើផលប៉ះពាល់សេដ្ឋកិច្ច អេកូឡូស៊ី និងអាហារូបត្ថម្ភរបស់ប្រភេទសត្វសមុទ្រជាច្រើន។ នេះជាការពិតជាពិសេសសម្រាប់សត្វខ្យងពីរដែលរស់នៅក្នុងតំបន់ប៉ូល ដែលផលប៉ះពាល់នៃ CK មានភាពបន្ទាន់ និងធ្ងន់ធ្ងរជាង [6, 7]។ តាមពិត សត្វខ្យងពីរដូចជា Mytilus spp. ត្រូវបានគេប្រើប្រាស់យ៉ាងទូលំទូលាយដើម្បីតាមដានផលប៉ះពាល់នៃ CC ទៅលើប្រព័ន្ធអេកូឡូស៊ីសមុទ្រ។ មិនគួរឱ្យភ្ញាក់ផ្អើលទេ ជីវសញ្ញាណមួយចំនួនធំត្រូវបានបង្កើតឡើងដើម្បីតាមដានសុខភាពរបស់ពួកគេ ដែលជារឿយៗប្រើវិធីសាស្រ្តពីរកម្រិតដែលពាក់ព័ន្ធនឹងជីវសញ្ញាណមុខងារដោយផ្អែកលើសកម្មភាពអង់ស៊ីម ឬមុខងារកោសិកាដូចជាភាពរស់រានមានជីវិតកោសិកា និងសកម្មភាព phagocytic [8]។ វិធីសាស្រ្តទាំងនេះក៏រួមបញ្ចូលការវាស់វែងនៃកំហាប់នៃសូចនាករសម្ពាធជាក់លាក់ដែលកកកុញនៅក្នុងជាលិកាទន់បន្ទាប់ពីការស្រូបយកទឹកសមុទ្រក្នុងបរិមាណច្រើន។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ សមត្ថភាពច្រោះខ្ពស់ និងប្រព័ន្ធឈាមរត់ពាក់កណ្តាលបើកចំហនៃសត្វស្លាបពីរវ៉ាល់ផ្តល់ឱកាសដើម្បីបង្កើតជីវសញ្ញាណ hemolymph ថ្មីដោយប្រើគោលគំនិតនៃការធ្វើកោសល្យវិច័យរាវ (LB) ដែលជាវិធីសាស្រ្តសាមញ្ញ និងមានការឈ្លានពានតិចតួចបំផុតចំពោះការគ្រប់គ្រងអ្នកជំងឺ។ គំរូឈាម [9, 10]។ ទោះបីជាម៉ូលេគុលចរាចរជាច្រើនប្រភេទអាចរកបាននៅក្នុង LB របស់មនុស្សក៏ដោយ គោលគំនិតនេះភាគច្រើនផ្អែកលើការវិភាគលំដាប់ DNA នៃបំណែក DNA ក្រៅកោសិកា (ccfDNA) ដែលចរាចរនៅក្នុងប្លាស្មា។ តាមពិតទៅ វត្តមាននៃ DNA ដែលចរាចរនៅក្នុងប្លាស្មារបស់មនុស្សត្រូវបានគេដឹងចាប់តាំងពីពាក់កណ្តាលសតវត្សរ៍ទី 20 [11] ប៉ុន្តែវាគឺមានតែនៅក្នុងប៉ុន្មានឆ្នាំថ្មីៗនេះទេដែលការមកដល់នៃវិធីសាស្រ្តលំដាប់ខ្ពស់បាននាំឱ្យមានការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យគ្លីនិកដោយផ្អែកលើ ccfDNA។ វត្តមាននៃបំណែក DNA ដែលចរាចរទាំងនេះគឺដោយសារតែការបញ្ចេញអកម្មនៃ DNA ហ្សែន (នុយក្លេអ៊ែរ និងមីតូខនឌ្រី) បន្ទាប់ពីការងាប់កោសិកា។ ចំពោះបុគ្គលដែលមានសុខភាពល្អ កំហាប់ ccfDNA ជាធម្មតាមានកម្រិតទាប (<10 ng/mL) ប៉ុន្តែអាចកើនឡើង 5-10 ដងចំពោះអ្នកជំងឺដែលមានជំងឺផ្សេងៗ ឬទទួលរងនូវភាពតានតឹង ដែលបណ្តាលឱ្យខូចខាតជាលិកា។ ចំពោះបុគ្គលដែលមានសុខភាពល្អ កំហាប់ ccfDNA ជាធម្មតាមានកម្រិតទាប (<10 ng/mL) ប៉ុន្តែអាចកើនឡើង 5-10 ដងចំពោះអ្នកជំងឺដែលមានជំងឺផ្សេងៗ ឬទទួលរងនូវភាពតានតឹង ដែលបណ្តាលឱ្យខូចខាតជាលិកា។ У здоровых людей концентрация вккДНК в норме низкая (<10 нг/мл), но может повышаться в 5–10 рсльруы патологией или подвергающихся стрессу, приводящему к повреждению тканей. ចំពោះមនុស្សដែលមានសុខភាពល្អ កំហាប់ cccDNA ជាធម្មតាមានកម្រិតទាប (<10 ng/mL) ប៉ុន្តែវាអាចកើនឡើង 5-10 ដងចំពោះអ្នកជំងឺដែលមានរោគសាស្ត្រផ្សេងៗ ឬស្ថិតក្រោមភាពតានតឹងដែលនាំឱ្យខូចខាតជាលិកា។在健康个体中，ccfDNA的浓度通常较低（<10 ng/mL），但在患有各种病理或承受压力的患孅5倍，从而导致组织损伤។在健康个体中，ccfdna的浓度较低（（<10 ng/ml）但在各种病理或承受压力悏5-10倍，从而组织。。损伤损伤损伤损伤损伤损伤损伤损伤Концентрации ccfDNA обычно низкие (<10 нг/мл) у здоровых людей, но могут быть увеличены в 5-10 раиз у различными патологиями или стрессом, что приводит к повреждению тканей. កំហាប់ ccfDNA ជាធម្មតាមានកម្រិតទាប (<10 ng/ml) ចំពោះបុគ្គលដែលមានសុខភាពល្អ ប៉ុន្តែអាចកើនឡើង 5-10 ដងចំពោះអ្នកជំងឺដែលមានរោគសាស្ត្រ ឬភាពតានតឹងផ្សេងៗ ដែលបណ្តាលឱ្យខូចខាតជាលិកា។ទំហំនៃបំណែក ccfDNA មានភាពខុសគ្នាយ៉ាងទូលំទូលាយ ប៉ុន្តែជាធម្មតាមានចាប់ពី 150 ទៅ 200 bp។ [12]។ ការវិភាគ ccfDNA ដែលទាញយកដោយខ្លួនឯង ពោលគឺ ccfDNA ពីកោសិកាម៉ាស៊ីនធម្មតា ឬដែលបានបំលែង អាចត្រូវបានប្រើដើម្បីរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន និងអេពីហ្សែនដែលមាននៅក្នុងហ្សែននុយក្លេអ៊ែរ និង/ឬមីតូខនឌ្រី ដោយហេតុនេះជួយគ្រូពេទ្យជ្រើសរើសការព្យាបាលដែលផ្តោតលើម៉ូលេគុលជាក់លាក់ [13]។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ccfDNA អាចទទួលបានពីប្រភពបរទេសដូចជា ccfDNA ពីកោសិកាគភ៌អំឡុងពេលមានផ្ទៃពោះ ឬពីសរីរាង្គដែលបានប្តូរ [14,15,16,17]។ ccfDNA ក៏ជាប្រភពព័ត៌មានសំខាន់មួយសម្រាប់រកឃើញវត្តមាននៃអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកនៃភ្នាក់ងារបង្ករោគ (បរទេស) ដែលអនុញ្ញាតឱ្យមានការរកឃើញដោយមិនរាតត្បាតនៃការឆ្លងមេរោគរីករាលដាលដែលមិនត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណដោយវប្បធម៌ឈាម ដោយជៀសវាងការធ្វើកោសល្យវិច័យរាតត្បាតនៃជាលិកាដែលឆ្លងមេរោគ [18]។ ការសិក្សាថ្មីៗបានបង្ហាញថា ឈាមមនុស្សមានប្រភពព័ត៌មានដ៏សម្បូរបែបដែលអាចប្រើដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណភ្នាក់ងារបង្ករោគដោយវីរុស និងបាក់តេរី ហើយប្រហែល 1% នៃ ccfDNA ដែលរកឃើញនៅក្នុងប្លាស្មារបស់មនុស្សមានប្រភពដើមបរទេស [19]។ ការសិក្សាទាំងនេះបង្ហាញថា ជីវៈចម្រុះនៃមីក្រូជីវសាស្រ្តដែលចរាចរក្នុងសារពាង្គកាយមួយអាចត្រូវបានវាយតម្លៃដោយប្រើការវិភាគ ccfDNA។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ រហូតមកដល់ថ្មីៗនេះ គោលគំនិតនេះត្រូវបានប្រើប្រាស់ទាំងស្រុងលើមនុស្ស និងក្នុងកម្រិតតិចជាងនេះលើសត្វឆ្អឹងខ្នងដទៃទៀត [20, 21]។
នៅក្នុងឯកសារនេះ យើងប្រើសក្តានុពល LB ដើម្បីវិភាគ ccfDNA នៃ Aulacomya atra ដែលជាប្រភេទសត្វភាគខាងត្បូងដែលត្រូវបានរកឃើញជាទូទៅនៅក្នុងកោះ Kerguelen អនុអង់តាក់ទិក ដែលជាក្រុមកោះនៅលើខ្ពង់រាបធំមួយដែលបានបង្កើតឡើង 35 លានឆ្នាំមុន។ ការផ្ទុះភ្នំភ្លើង។ ដោយប្រើប្រព័ន្ធពិសោធន៍ក្នុងវីត្រូ យើងបានរកឃើញថាបំណែក DNA នៅក្នុងទឹកសមុទ្រត្រូវបានស្រូបយកយ៉ាងឆាប់រហ័សដោយខ្យង ហើយចូលទៅក្នុងបន្ទប់ hemolymph ។ ការធ្វើលំដាប់កាំភ្លើងខ្លីបានបង្ហាញថា hemolymph ccfDNA របស់ខ្យងមានបំណែក DNA ដែលមានប្រភពដើមផ្ទាល់ខ្លួន និងមិនមែនដោយខ្លួនឯង រួមទាំងបាក់តេរីស៊ីមប៊ីយ៉ូទិក និងបំណែក DNA ពីជីវមណ្ឌលធម្មតានៃប្រព័ន្ធអេកូឡូស៊ីសមុទ្រឆ្នេរសមុទ្រភ្នំភ្លើងត្រជាក់។ Hemolymph ccfDNA ក៏មានលំដាប់មេរោគដែលទទួលបានពីមេរោគដែលមានជួរម៉ាស៊ីនផ្សេងៗគ្នា។ យើងក៏បានរកឃើញបំណែក DNA ពីសត្វពហុកោសិកាដូចជាត្រីឆ្អឹង ផ្កាសមុទ្រ សារាយ និងសត្វល្អិត។ សរុបមក ការសិក្សារបស់យើងបង្ហាញថាគំនិត LB អាចត្រូវបានអនុវត្តដោយជោគជ័យចំពោះសត្វឆ្អឹងខ្នងសមុទ្រ ដើម្បីបង្កើតបញ្ជីហ្សែនដ៏សម្បូរបែបនៅក្នុងប្រព័ន្ធអេកូឡូស៊ីសមុទ្រ។
ត្រី Mytilus platensis (M. platensis) និងត្រី Aulacomya atra (A. atra) ពេញវ័យ (ប្រវែង 55-70 ម.ម) ត្រូវបានប្រមូលពីច្រាំងថ្មចោទនៃសមុទ្រព័រតូរបារាំង (049°21.235 ខាងត្បូង, 070°13.490 ខាងកើត)។ កោះ Kerguelen ក្នុងខែធ្នូ ឆ្នាំ 2018។ ខ្យងពណ៌ខៀវពេញវ័យផ្សេងទៀត (Mytilus spp.) ត្រូវបានទទួលពីអ្នកផ្គត់ផ្គង់ពាណិជ្ជកម្ម (PEI Mussel King Inc., កោះ Prince Edward, ប្រទេសកាណាដា) ហើយដាក់ក្នុងធុងដែលមានខ្យល់ចេញចូល (4°C) ដែលគ្រប់គ្រងសីតុណ្ហភាព ដែលមានផ្ទុកទឹកប្រៃសិប្បនិម្មិត 32‰ ចំនួន 10–20 លីត្រ។ (អំបិលសមុទ្រសិប្បនិម្មិត Reef Crystal, Instant Ocean, Virginia, USA)។ សម្រាប់ការពិសោធន៍នីមួយៗ ប្រវែង និងទម្ងន់នៃសំបកនីមួយៗត្រូវបានវាស់។
ពិធីការចូលប្រើប្រាស់ដោយសេរីសម្រាប់កម្មវិធីនេះអាចរកបានតាមអ៊ីនធឺណិត (https://doi.org/10.17504/protocols.io.81wgb6z9olpk/v1)។ ជាសង្ខេប ឈាមកក LB ត្រូវបានប្រមូលពីសាច់ដុំ abductor ដូចដែលបានពិពណ៌នា [22]។ ឈាមកកត្រូវបានធ្វើឱ្យច្បាស់លាស់ដោយការបង្វិលនៅ 1200 × g រយៈពេល 3 នាទី សារធាតុរាវខាងលើត្រូវបានកក (-20°C) រហូតដល់ការប្រើប្រាស់។ សម្រាប់ការញែក និងការបន្សុទ្ធ cfDNA គំរូ (1.5-2.0 ml) ត្រូវបានរលាយ និងដំណើរការដោយប្រើឧបករណ៍ NucleoSnap cfDNA (Macherey-Nagel, Bethlehen, PA) ស្របតាមការណែនាំរបស់អ្នកផលិត។ ccfDNA ត្រូវបានរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព -80°C រហូតដល់ការវិភាគបន្ថែម។ នៅក្នុងការពិសោធន៍មួយចំនួន ccfDNA ត្រូវបានញែក និងបន្សុទ្ធដោយប្រើឧបករណ៍ស៊ើបអង្កេត DNA QIAamp (QIAGEN, Toronto, Ontario, Canada)។ DNA ដែលបានបន្សុទ្ធត្រូវបានវាស់វែងដោយប្រើវិធីសាស្ត្រ PicoGreen ស្តង់ដារ។ ការចែកចាយបំណែកនៃ ccfDNA ដាច់ដោយឡែកត្រូវបានវិភាគដោយវិធីសាស្ត្រអេឡិចត្រូផូរីសសរសៃឈាមដោយប្រើឧបករណ៍វិភាគជីវសាស្ត្រ Agilent 2100 (Agilent Technologies Inc., Santa Clara, CA) ដោយប្រើឧបករណ៍ High Sensitivity DNA Kit។ ការវិភាគត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើគំរូ ccfDNA ទំហំ 1 µl ស្របតាមការណែនាំរបស់អ្នកផលិត។
ចំពោះការរៀបលំដាប់នៃបំណែក ccfDNA នៃអេម៉ូលីមហ្វ មជ្ឈមណ្ឌលស្រាវជ្រាវ Génome Québec (ម៉ុងត្រេអាល់ កេបិច កាណាដា) បានរៀបចំបណ្ណាល័យកាំភ្លើងខ្លីដោយប្រើឧបករណ៍ Illumina DNA Mix នៃឧបករណ៍ Illumina MiSeq PE75។ ឧបករណ៍ភ្ជាប់ស្តង់ដារ (BioO) ត្រូវបានប្រើប្រាស់។ ឯកសារទិន្នន័យឆៅអាចរកបានពីបណ្ណសារអានលំដាប់ NCBI (SRR8924808 និង SRR8924809)។ គុណភាពអានមូលដ្ឋានត្រូវបានវាយតម្លៃដោយប្រើ FastQC [23]។ Trimmomatic [24] ត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការកាត់ឧបករណ៍ភ្ជាប់ និងការអានដែលមានគុណភាពអន់។ ការអានកាំភ្លើងខ្លីដែលមានចុងផ្គូផ្គងត្រូវបានបញ្ចូលគ្នា FLASH ទៅក្នុងការអានតែមួយដែលវែងជាងជាមួយនឹងការត្រួតស៊ីគ្នាអប្បបរមា 20 bp ដើម្បីជៀសវាងភាពមិនស៊ីគ្នា [25]។ ការអានដែលបានបញ្ចូលគ្នាត្រូវបានបញ្ចូលចំណារពន្យល់ជាមួយ BLASTN ដោយប្រើមូលដ្ឋានទិន្នន័យ NCBI Taxonomy ដែលមានវ៉ាល់ពីរ (តម្លៃ e < 1e−3 និងភាពដូចគ្នា 90%) ហើយការបិទបាំងលំដាប់នៃភាពស្មុគស្មាញទាបត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើ DUST [26]។ ការអានដែលបានបញ្ចូលគ្នាត្រូវបានបញ្ចូលចំណារពន្យល់ជាមួយ BLASTN ដោយប្រើមូលដ្ឋានទិន្នន័យ NCBI Taxonomy ដែលមានវ៉ាល់ពីរ (តម្លៃ e < 1e−3 និងភាពដូចគ្នា 90%) ហើយការបិទបាំងលំដាប់នៃភាពស្មុគស្មាញទាបត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើ DUST [26]។ Объединенные чтения были аннотированы с помощью BLASTN с использованием базы данных таксономии двуслтвор (значение e < 1e-3 និង 90% гомологии), а маскирование последовательностей низкой сложности было выпольностей низкой сложности было выпольнеспсмо [២៦] ។ ការអានដែលបានប្រមូលផ្តុំត្រូវបានបញ្ចូលចំណារពន្យល់ជាមួយ BLASTN ដោយប្រើមូលដ្ឋានទិន្នន័យចំណាត់ថ្នាក់ bivalve NCBI (តម្លៃ e < 1e-3 និងភាពដូចគ្នា 90%) ហើយការបិទបាំងលំដាប់ស្មុគស្មាញទាបត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើ DUST [26]។使用双壳类NCBI 分类数据库（e 值< 1e-3 和90% 同源性）用BLASTN 注释合并的读数，并使进行低复杂度序列的掩蔽។使用双壳类 ncbi 分类（（<1e-3和90%同源）用用用注释合并读数，并俽用注释合并读数，并俽6甶复杂度序列的。。 掩蔽掩蔽掩蔽掩蔽掩蔽掩蔽掩蔽潩蔽掩掩蔽掩蔽Объединенные чтения были аннотированы с помощью BLASTN с использованием таксономической базы даннылвсвус NCBI (значение e <1e-3 និង 90% гомологии), а маскирование последовательностей низкой сложности было выпосьностей низкой сложности было выпосьненней [២៦] ។ ការអានដែលបានប្រមូលផ្តុំត្រូវបានបញ្ចូលចំណារពន្យល់ជាមួយ BLASTN ដោយប្រើមូលដ្ឋានទិន្នន័យចំណាត់ថ្នាក់ NCBI bivalve (តម្លៃ e <1e-3 និងភាពដូចគ្នា 90%) ហើយការបិទបាំងលំដាប់ស្មុគស្មាញទាបត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើ DUST [26]។ការអានត្រូវបានបែងចែកជាពីរក្រុម៖ ទាក់ទងនឹងលំដាប់ bivalve (នៅទីនេះហៅថាការអានដោយខ្លួនឯង) និងមិនទាក់ទងគ្នា (ការអានមិនមែនដោយខ្លួនឯង)។ ក្រុមពីរត្រូវបានផ្គុំដោយឡែកពីគ្នាដោយប្រើ MEGAHIT ដើម្បីបង្កើត contigs [27]។ ទន្ទឹមនឹងនេះ ការចែកចាយ taxonomic នៃការអាន microbiome ភពផ្សេងត្រូវបានចាត់ថ្នាក់ដោយប្រើ Kraken2 [28] និងតំណាងជាក្រាហ្វិកដោយតារាងចំណិត Krona នៅលើ Galaxy [29, 30]។ kmers ល្អបំផុតត្រូវបានកំណត់ថាជា kmers-59 ពីការពិសោធន៍បឋមរបស់យើង។ បន្ទាប់មក ការតភ្ជាប់ដោយខ្លួនឯងត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណដោយការតម្រឹមជាមួយ BLASTN (មូលដ្ឋានទិន្នន័យ NCBI ទ្វេវ៉ាល់ តម្លៃ e < 1e−10 និងភាពដូចគ្នា 60%) សម្រាប់ចំណារពន្យល់ចុងក្រោយ។ បន្ទាប់មក ការតភ្ជាប់ដោយខ្លួនឯងត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណដោយការតម្រឹមជាមួយ BLASTN (មូលដ្ឋានទិន្នន័យ NCBI ទ្វេវ៉ាល់ តម្លៃ e < 1e−10 និងភាពដូចគ្នា 60%) សម្រាប់ចំណារពន្យល់ចុងក្រោយ។ Затем собственные контиги были идентифицированы путем сопоставления с BLASTN (база данныюх двуствор чата двуствор чата) значение e <1e-10 и гомология 60%) для окончательной аннотации ។ បន្ទាប់មក ការជាប់គ្នាដោយខ្លួនឯងត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណដោយការផ្គូផ្គងជាមួយ BLASTN (មូលដ្ឋានទិន្នន័យវ៉ាល់ទ្វេរបស់ NCBI តម្លៃ e <1e-10 និងភាពដូចគ្នា 60%) សម្រាប់ការចំណារពន្យល់ចុងក្រោយ។然后通过与BLASTN (双壳贝类NCBI 数据库，e 值< 1e-10 和60%同源性)对齐来识别自身重叠群以进行最终注释។然后通过与BLASTN (双壳贝类NCBI 数据库，e 值< 1e-10 和60% Затем были идентифицированы собственные контиги для окончательной аннотации путем сопоставления NBI с для двустворчатых моллюсков, значение e <1e-10 និង гомология 60%) ។ បន្ទាប់មក ការតភ្ជាប់ដោយខ្លួនឯងត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណសម្រាប់ការកំណត់ចំណាំចុងក្រោយដោយផ្គូផ្គងជាមួយ BLASTN (មូលដ្ឋានទិន្នន័យវ៉ាល់ទ្វេ NCBI តម្លៃ e <1e-10 និងភាពដូចគ្នា 60%)។ ក្នុងពេលជាមួយគ្នានេះ ទំនាក់ទំនងក្រុមមិនមែនខ្លួនឯងត្រូវបានបន្ថែមចំណារពន្យល់ជាមួយ BLASTN (មូលដ្ឋានទិន្នន័យ nt NCBI តម្លៃ e < 1e−10 និងភាពដូចគ្នា 60%)។ ក្នុងពេលជាមួយគ្នានេះ ទំនាក់ទំនងក្រុមមិនមែនខ្លួនឯងត្រូវបានបន្ថែមចំណារពន្យល់ជាមួយ BLASTN (មូលដ្ឋានទិន្នន័យ nt NCBI តម្លៃ e < 1e−10 និងភាពដូចគ្នា 60%)។ Параллельно чужеродные групповые контиги были аннотированы с помощью BLASTN (база данных nt NCBI, зна<чиоя-1гоме 60%)។ ក្នុងពេលជាមួយគ្នានេះ តំណភ្ជាប់ក្រុមបរទេសត្រូវបានបន្ថែមចំណារពន្យល់ជាមួយ BLASTN (មូលដ្ឋានទិន្នន័យ NT NCBI តម្លៃ e <1e-10 និងភាពដូចគ្នា 60%)។平行地，用BLASTN（nt NCBI 数据库，e值<1e-10和60%同源性）注释非自身组重叠群។平行地，用BLASTN（nt NCBI 数据库，e值<1e-10和60%同源性）注释非自身组重叠群។ Параллельно контиги, не относящиеся к собственной группе, были аннотированы с помощью BLASTN (базачни nt BIненны) <1e-10 និង гомология 60%)។ ក្នុងពេលជាមួយគ្នានេះ តំណភ្ជាប់ក្រុមមិនមែនខ្លួនឯងត្រូវបានបន្ថែមចំណារពន្យល់ជាមួយ BLASTN (មូលដ្ឋានទិន្នន័យ nt NCBI តម្លៃ e <1e-10 និងភាពដូចគ្នា 60%)។ BLASTX ក៏ត្រូវបានធ្វើឡើងលើ contigs មិនមែនខ្លួនឯងដោយប្រើមូលដ្ឋានទិន្នន័យ ncBI ប្រូតេអ៊ីន nr និង RefSeq (តម្លៃ e < 1e−10 និង homology 60%)។ BLASTX ក៏ត្រូវបានធ្វើឡើងលើ contigs មិនមែនខ្លួនឯងដោយប្រើមូលដ្ឋានទិន្នន័យ ncBI ប្រូតេអ៊ីន nr និង RefSeq (តម្លៃ e < 1e−10 និង homology 60%)។ BLASTX также был проведен на несамостоятельных контигах с использованием баз данных белка nr и RefSeq NCBI (зна <1eчение) гомология 60%) ។ BLASTX ក៏ត្រូវបានអនុវត្តលើ contig មិនមែនខ្លួនឯងដោយប្រើមូលដ្ឋានទិន្នន័យប្រូតេអ៊ីន nr និង RefSeq NCBI (តម្លៃ e < 1e-10 និង homology 60%)។还使用nr 和RefSeq 蛋白NCBI 数据库对非自身重叠群进行了BLASTX（e 值< 1e-10 和60% 倧源）។还使用nr 和RefSeq 蛋白NCBI 数据库对非自身重叠群进行了BLASTX（e 值< 1e-10 和60% 倧源）។ BLASTX также выполняли на несамостоятельных контигах с использованием баз данных белка nr и RefSeq NCBI (значиогоме зналиогом 60%)។ BLASTX ក៏ត្រូវបានអនុវត្តលើ contig មិនមែនខ្លួនឯងដោយប្រើមូលដ្ឋានទិន្នន័យប្រូតេអ៊ីន nr និង RefSeq NCBI (តម្លៃ e <1e-10 និង homology 60%)។អាងនៃសំណុំដែលមិនមែនជាសំណុំដោយខ្លួនឯងនៃ BLASTN និង BLASTX តំណាងឲ្យសំណុំចុងក្រោយ (សូមមើលឯកសារបន្ថែម)។
ប្រាយមឺរដែលប្រើសម្រាប់ PCR ត្រូវបានរាយក្នុងតារាង S1។ អង់ស៊ីម Taq DNA polymerase (Bio Basic Canada, Markham, ON) ត្រូវបានប្រើដើម្បីពង្រីកហ្សែនគោលដៅ ccfDNA។ លក្ខខណ្ឌប្រតិកម្មដូចខាងក្រោមត្រូវបានប្រើ៖ ការខូចទ្រង់ទ្រាយនៅសីតុណ្ហភាព 95°C រយៈពេល 3 នាទី 95°C រយៈពេល 1 នាទី កំណត់សីតុណ្ហភាពចំហុយរយៈពេល 1 នាទី ការពន្លូតនៅសីតុណ្ហភាព 72°C រយៈពេល 1 នាទី 35 វដ្ត និងចុងក្រោយ 72°C ក្នុងរយៈពេល 10 នាទី។ ផលិតផល PCR ត្រូវបានបំបែកដោយអេឡិចត្រូផូរេស៊ីសក្នុងជែល agarose (1.5%) ដែលមានសារធាតុ SYBRTM Safe DNA Gel Stain (Invitrogen, Burlington, ON, Canada) នៅវ៉ុល 95 V។
ខ្យង (Mytilus spp.) ត្រូវបានសម្របខ្លួនក្នុងទឹកសមុទ្រដែលមានអុកស៊ីសែន 500 មីលីលីត្រ (32 PSU) រយៈពេល 24 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 4°C។ DNA ប្លាស្មីតដែលមានសារធាតុបញ្ចូលដែលអ៊ិនកូដលំដាប់ cDNA galectin-7 របស់មនុស្ស (លេខចូល NCBI L07769) ត្រូវបានបន្ថែមទៅក្នុងដបក្នុងកំហាប់ចុងក្រោយ 190 μg/μl។ ខ្យងដែលត្រូវបានភ្ញាស់ក្រោមលក្ខខណ្ឌដូចគ្នាដោយមិនចាំបាច់បន្ថែម DNA គឺជាការគ្រប់គ្រង។ ធុងត្រួតពិនិត្យទីបីមាន DNA ដោយគ្មានខ្យង។ ដើម្បីតាមដានគុណភាព DNA នៅក្នុងទឹកសមុទ្រ សំណាកទឹកសមុទ្រ (20 μl; ធ្វើម្តងទៀតបីដង) ត្រូវបានយកចេញពីធុងនីមួយៗនៅពេលវេលាដែលបានកំណត់។ សម្រាប់ការតាមដាន DNA ប្លាស្មីត ខ្យង LB ត្រូវបានប្រមូលផលនៅពេលវេលាដែលបានកំណត់ ហើយវិភាគដោយ qPCR និង ddPCR។ ដោយសារតែមាតិកាអំបិលខ្ពស់នៃទឹកសមុទ្រ សារធាតុ aliquots ត្រូវបានពនលាយក្នុងទឹកដែលមានគុណភាព PCR (1:10) មុនពេលការវិភាគ PCR ទាំងអស់។
ការវិភាគ PCR ដំណក់ទឹកឌីជីថល (ddPCR) ត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើពិធីការ BioRad QX200 (Mississauga, Ontario, កាណាដា)។ ប្រើទម្រង់សីតុណ្ហភាពដើម្បីកំណត់សីតុណ្ហភាពល្អបំផុត (តារាង S1)។ ដំណក់ទឹកត្រូវបានបង្កើតដោយប្រើម៉ាស៊ីនបង្កើតដំណក់ទឹក QX200 (BioRad)។ ddPCR ត្រូវបានអនុវត្តដូចខាងក្រោម៖ ៩៥°C រយៈពេល ៥ នាទី ៥០ វដ្ត ៩៥°C រយៈពេល ៣០ វិនាទី និងសីតុណ្ហភាព annealing ដែលបានផ្តល់ឱ្យរយៈពេល ១ នាទី និង ៧២°C រយៈពេល ៣០ វិនាទី ៤°C រយៈពេល ៥ នាទី និង ៩០°C ក្នុងរយៈពេល ៥ នាទី។ ចំនួនដំណក់ទឹក និងប្រតិកម្មវិជ្ជមាន (ចំនួនច្បាប់ចម្លង/µl) ត្រូវបានវាស់ដោយប្រើឧបករណ៍អានដំណក់ទឹក QX200 (BioRad)។ គំរូដែលមានដំណក់ទឹកតិចជាង ១០,០០០ ត្រូវបានបដិសេធ។ ការគ្រប់គ្រងលំនាំមិនត្រូវបានអនុវត្តរាល់ពេលដែល ddPCR ត្រូវបានដំណើរការទេ។
qPCR ត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើ Rotor-Gene® 3000 (Corbett Research, Sydney, Australia) និងប្រាយម័រជាក់លាក់ LGALS7។ ការធ្វើតេស្ត PCR បរិមាណទាំងអស់ត្រូវបានអនុវត្តក្នុងបរិមាណ 20 µl ដោយប្រើឧបករណ៍ QuantiFast SYBR Green PCR Kit (QIAGEN)។ qPCR ត្រូវបានចាប់ផ្តើមជាមួយនឹងការភ្ញាស់រយៈពេល 15 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 95°C បន្ទាប់មកដោយវដ្តចំនួន 40 នៅសីតុណ្ហភាព 95°C រយៈពេល 10 វិនាទី និងនៅសីតុណ្ហភាព 60°C រយៈពេល 60 វិនាទីជាមួយនឹងការប្រមូលទិន្នន័យមួយ។ ខ្សែកោងរលាយត្រូវបានបង្កើតឡើងដោយប្រើការវាស់វែងជាបន្តបន្ទាប់នៅសីតុណ្ហភាព 95°C រយៈពេល 5 វិនាទី 65°C រយៈពេល 60 វិនាទី និង 97°C នៅចុងបញ្ចប់នៃ qPCR។ qPCR នីមួយៗត្រូវបានអនុវត្តជាបីដង លើកលែងតែគំរូត្រួតពិនិត្យ។
ដោយសារតែខ្យងត្រូវបានគេស្គាល់ដោយសារអត្រាច្រោះខ្ពស់របស់វា ដំបូងយើងបានស៊ើបអង្កេតថាតើពួកវាអាចច្រោះ និងរក្សាទុកបំណែក DNA ដែលមាននៅក្នុងទឹកសមុទ្របានដែរឬទេ។ យើងក៏ចាប់អារម្មណ៍ផងដែរថាតើបំណែកទាំងនេះកកកុញនៅក្នុងប្រព័ន្ធឡាំហ្វាទិចពាក់កណ្តាលបើកចំហរបស់ពួកវាឬអត់។ យើងបានដោះស្រាយបញ្ហានេះដោយពិសោធន៍ដោយតាមដានជោគវាសនានៃបំណែក DNA រលាយដែលបានបន្ថែមទៅក្នុងធុងខ្យងខៀវ។ ដើម្បីសម្រួលដល់ការតាមដានបំណែក DNA យើងបានប្រើ DNA ប្លាស្មីតបរទេស (មិនមែនខ្លួនឯង) ដែលមានហ្សែន galectin-7 របស់មនុស្ស។ ddPCR តាមដានបំណែក DNA ប្លាស្មីតនៅក្នុងទឹកសមុទ្រ និងខ្យង។ លទ្ធផលរបស់យើងបង្ហាញថា ប្រសិនបើបរិមាណបំណែក DNA នៅក្នុងទឹកសមុទ្រនៅតែថេរតាមពេលវេលា (រហូតដល់ 7 ថ្ងៃ) ក្នុងករណីដែលគ្មានខ្យង នោះនៅក្នុងវត្តមាននៃខ្យង កម្រិតនេះស្ទើរតែបាត់ទៅវិញទាំងស្រុងក្នុងរយៈពេល 8 ម៉ោង (រូបភាពទី 1a,b)។ បំណែកនៃ DNA ខាងក្រៅត្រូវបានរកឃើញយ៉ាងងាយស្រួលក្នុងរយៈពេល 15 នាទីនៅក្នុងសារធាតុរាវក្នុងសន្ទះបិទបើក និង hemolymph (រូបភាពទី 1c)។ បំណែកទាំងនេះនៅតែអាចត្រូវបានរកឃើញរហូតដល់ 4 ម៉ោងបន្ទាប់ពីការប៉ះពាល់។ សកម្មភាពច្រោះនេះទាក់ទងនឹងបំណែក DNA គឺអាចប្រៀបធៀបទៅនឹងសកម្មភាពច្រោះរបស់បាក់តេរី និងសារាយ [31]។ លទ្ធផលទាំងនេះបង្ហាញថា ខ្យងអាចច្រោះ និងប្រមូលផ្តុំ DNA បរទេសនៅក្នុងផ្នែកសារធាតុរាវរបស់វា។
កំហាប់ទាក់ទងនៃ DNA ប្លាស្មីតនៅក្នុងទឹកសមុទ្រនៅក្នុងវត្តមាន (A) ឬអវត្តមាន (B) នៃខ្យង ដែលវាស់ដោយ ddPCR។ នៅក្នុង A លទ្ធផលត្រូវបានបង្ហាញជាភាគរយ ដោយព្រំដែននៃប្រអប់តំណាងឱ្យភាគរយទី 75 និងទី 25។ ខ្សែកោងលោការីតដែលបានរៀបចំត្រូវបានបង្ហាញជាពណ៌ក្រហម ហើយផ្ទៃដែលមានស្រមោលពណ៌ប្រផេះតំណាងឱ្យចន្លោះជឿជាក់ 95%។ នៅក្នុង B ខ្សែក្រហមតំណាងឱ្យមធ្យមភាគ ហើយខ្សែពណ៌ខៀវតំណាងឱ្យចន្លោះជឿជាក់ 95% សម្រាប់កំហាប់។ C ការប្រមូលផ្តុំនៃ DNA ប្លាស្មីតនៅក្នុងសារធាតុរាវអេម៉ូលីម និងវ៉ាល់របស់ខ្យងនៅពេលវេលាផ្សេងៗគ្នាបន្ទាប់ពីការបន្ថែម DNA ប្លាស្មីត។ លទ្ធផលត្រូវបានបង្ហាញជាច្បាប់ចម្លងដាច់ខាតដែលរកឃើញ/mL (±SE)។
បន្ទាប់មក យើងបានស៊ើបអង្កេតប្រភពដើមនៃ ccfDNA នៅក្នុងខ្យងដែលប្រមូលបានពីគ្រែខ្យងនៅលើកោះ Kerguelen ដែលជាក្រុមកោះដាច់ស្រយាលមួយដែលមានឥទ្ធិពលមនុស្សមានកម្រិត។ ចំពោះគោលបំណងនេះ cccDNA ពី hemolymphs របស់ខ្យងត្រូវបានញែកដាច់ពីគ្នា និងបន្សុទ្ធដោយវិធីសាស្ត្រដែលត្រូវបានគេប្រើជាទូទៅដើម្បីបន្សុទ្ធ cccDNA របស់មនុស្ស [32, 33]។ យើងបានរកឃើញថាកំហាប់ hemolymph ccfDNA ជាមធ្យមនៅក្នុងខ្យងគឺស្ថិតនៅក្នុងជួរ hemolymph ទាបមីក្រូក្រាមក្នុងមួយមីលីលីត្រ (សូមមើលតារាង S2 ព័ត៌មានបន្ថែម)។ ជួរនៃកំហាប់នេះគឺធំជាងមនុស្សដែលមានសុខភាពល្អ (ណាណូក្រាមទាបក្នុងមួយមីលីលីត្រ) ប៉ុន្តែក្នុងករណីកម្រ ចំពោះអ្នកជំងឺមហារីក កម្រិតនៃ ccfDNA អាចឈានដល់មីក្រូក្រាមជាច្រើនក្នុងមួយមីលីលីត្រ [34, 35]។ ការវិភាគនៃការចែកចាយទំហំនៃ hemolymph ccfDNA បានបង្ហាញថាបំណែកទាំងនេះមានទំហំខុសៗគ្នាយ៉ាងខ្លាំង ចាប់ពី 1000 bp ដល់ 1000 bp រហូតដល់ 5000 bp (រូបភាពទី 2)។ លទ្ធផលស្រដៀងគ្នានេះត្រូវបានទទួលដោយប្រើឧបករណ៍ស៊ើបអង្កេត QIAamp ដែលមានមូលដ្ឋានលើស៊ីលីកា ដែលជាវិធីសាស្ត្រដែលត្រូវបានគេប្រើជាទូទៅក្នុងវិទ្យាសាស្ត្រកោសល្យវិច្ច័យ ដើម្បីញែក និងបន្សុទ្ធ DNA ហ្សែនយ៉ាងឆាប់រហ័សពីគំរូ DNA ដែលមានកំហាប់ទាប រួមទាំង ccfDNA [36]។
អេឡិចត្រូហ្វូក្រាម ccfDNA តំណាងនៃអេម៉ូលីមហ្វរបស់ខ្យង។ ស្រង់ចេញជាមួយឧបករណ៍ NucleoSnap Plasma Kit (ខាងលើ) និងឧបករណ៍ស៊ើបអង្កេត DNA QIAamp។ ខ. គំនូសវីយូឡុងបង្ហាញពីការចែកចាយកំហាប់ ccfDNA របស់អេម៉ូលីមហ្វ (±SE) នៅក្នុងខ្យង។ ខ្សែខ្មៅ និងក្រហមតំណាងឱ្យមេឌីយ៉ាន និងក្វាទីលទីមួយ និងទីបីរៀងៗខ្លួន។
ប្រហែល 1% នៃ ccfDNA នៅក្នុងមនុស្ស និងសត្វព្រូនមានប្រភពមកពីបរទេស [21, 37]។ ដោយផ្អែកលើប្រព័ន្ធឈាមរត់ពាក់កណ្តាលបើកចំហនៃសត្វខ្យងពីរប្រភេទ ទឹកសមុទ្រសម្បូរទៅដោយមីក្រូសរីរាង្គ និងការចែកចាយទំហំនៃខ្យង ccfDNA យើងបានសន្និដ្ឋានថា ccfDNA នៃខ្យង hemolymph អាចមាន DNA មីក្រូសរីរាង្គដ៏សម្បូរបែប និងចម្រុះ។ ដើម្បីសាកល្បងសម្មតិកម្មនេះ យើងបានរៀបចំលំដាប់ ccfDNA នៃខ្យង hemolymph ពីសំណាក Aulacomya atra ដែលប្រមូលបានពីកោះ Kerguelen ដែលផ្តល់លទ្ធផលជាង 10 លានដង ដែលក្នុងនោះ 97.6% បានឆ្លងកាត់ការគ្រប់គ្រងគុណភាព។ បន្ទាប់មក ការអានត្រូវបានចាត់ថ្នាក់តាមប្រភពដោយខ្លួនឯង និងមិនមែនដោយខ្លួនឯង ដោយប្រើមូលដ្ឋានទិន្នន័យខ្យងពីរប្រភេទ BLASTN និង NCBI (រូបភាព S1 ព័ត៌មានបន្ថែម)។
ចំពោះមនុស្ស ទាំង DNA នុយក្លេអ៊ែរ និងមីតូខនឌ្រីអាចត្រូវបានបញ្ចេញទៅក្នុងចរន្តឈាម [38]។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ នៅក្នុងការសិក្សាបច្ចុប្បន្ននេះ វាមិនអាចពិពណ៌នាលម្អិតអំពី DNA ហ្សែននុយក្លេអ៊ែររបស់ខ្យងបានទេ ដោយសារតែហ្សែន A. atra មិនទាន់ត្រូវបានតម្រៀប ឬពិពណ៌នា។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ យើងអាចកំណត់អត្តសញ្ញាណបំណែក ccfDNA មួយចំនួនដែលមានប្រភពដើមរបស់យើងដោយប្រើបណ្ណាល័យ bivalve (រូបភាព S2 ព័ត៌មានបន្ថែម)។ យើងក៏បានបញ្ជាក់ពីវត្តមាននៃបំណែក DNA ដែលមានប្រភពដើមរបស់យើងដោយការពង្រីក PCR ដោយផ្ទាល់នៃហ្សែន A. atra ទាំងនោះដែលត្រូវបានតម្រៀប (រូបភាពទី 3)។ ស្រដៀងគ្នានេះដែរ ដោយសារតែហ្សែនមីតូខនឌ្រីរបស់ A. atra មាននៅក្នុងមូលដ្ឋានទិន្នន័យសាធារណៈ យើងអាចរកឃើញភស្តុតាងសម្រាប់វត្តមាននៃបំណែក ccfDNA មីតូខនឌ្រីនៅក្នុង hemolymph របស់ A. atra។ វត្តមាននៃបំណែក DNA មីតូខនឌ្រីត្រូវបានបញ្ជាក់ដោយការពង្រីក PCR (រូបភាពទី 3)។
ហ្សែនមីតូខនឌ្រីជាច្រើនប្រភេទមានវត្តមាននៅក្នុងអេម៉ូលីមហ្វរបស់ A. atra (ចំណុចក្រហម - លេខស្តុក៖ SRX5705969) និង M. platensis (ចំណុចពណ៌ខៀវ - លេខស្តុក៖ SRX5705968) ដែលបានពង្រីកដោយ PCR។ រូបភាពដកស្រង់ចេញពី Breton et al., 2011 B ការពង្រីកសារធាតុរាវអេម៉ូលីមហ្វពី A. atra រក្សាទុកនៅលើក្រដាស FTA។ ប្រើដាល់ទំហំ 3 ម.ម ដើម្បីបន្ថែមដោយផ្ទាល់ទៅក្នុងបំពង់ PCR ដែលមានល្បាយ PCR។
ដោយសារមាតិកាអតិសុខុមប្រាណដ៏ច្រើននៅក្នុងទឹកសមុទ្រ ដំបូងឡើយយើងបានផ្តោតលើការកំណត់លក្ខណៈនៃលំដាប់ DNA អតិសុខុមប្រាណនៅក្នុងឈាម។ ដើម្បីធ្វើដូចនេះ យើងប្រើយុទ្ធសាស្ត្រពីរផ្សេងគ្នា។ យុទ្ធសាស្ត្រទីមួយបានប្រើ Kraken2 ដែលជាកម្មវិធីចាត់ថ្នាក់លំដាប់ដែលមានមូលដ្ឋានលើក្បួនដោះស្រាយ ដែលអាចកំណត់អត្តសញ្ញាណលំដាប់អតិសុខុមប្រាណជាមួយនឹងភាពត្រឹមត្រូវដែលអាចប្រៀបធៀបទៅនឹង BLAST និងឧបករណ៍ផ្សេងទៀត [28]។ ការអានជាង 6719 ត្រូវបានកំណត់ថាមានប្រភពដើមពីបាក់តេរី ខណៈពេលដែល 124 និង 64 គឺមកពី archaea និងវីរុសរៀងៗខ្លួន (រូបភាពទី 4)។ បំណែក DNA របស់បាក់តេរីដែលមានច្រើនបំផុតគឺ Firmicutes (46%), Proteobacteria (27%) និង Bacteroidetes (17%) (រូបភាពទី 4a)។ ការចែកចាយនេះគឺស្របនឹងការសិក្សាពីមុនអំពីអតិសុខុមប្រាណខ្យងសមុទ្រពណ៌ខៀវ [39, 40]។ Gammaproteobacteria គឺជាថ្នាក់សំខាន់នៃ Proteobacteria (44%) រួមទាំង Vibrionales ជាច្រើន (រូបភាពទី 4b)។ វិធីសាស្ត្រ ddPCR បានបញ្ជាក់ពីវត្តមាននៃបំណែក DNA Vibrio នៅក្នុង ccfDNA នៃ A. atra hemolymph (រូបភាពទី 4c) [41]។ ដើម្បីទទួលបានព័ត៌មានបន្ថែមអំពីប្រភពដើមបាក់តេរីនៃ ccfDNA វិធីសាស្រ្តបន្ថែមមួយត្រូវបានអនុវត្ត (រូបភាព S2 ព័ត៌មានបន្ថែម)។ ក្នុងករណីនេះ ការអានដែលត្រួតស៊ីគ្នាត្រូវបានផ្គុំជាការអានដែលមានគូ ហើយត្រូវបានចាត់ថ្នាក់ថាជាប្រភពមកពីខ្លួនឯង (សំបកពីរ) ឬមិនមែនខ្លួនឯងដោយប្រើ BLASTN និងតម្លៃ e 1e−3 និងចំណុចកាត់ផ្តាច់ដែលមានភាពដូចគ្នា >90%។ ក្នុងករណីនេះ ការអានដែលត្រួតស៊ីគ្នាត្រូវបានផ្គុំជាការអានដែលមានគូ ហើយត្រូវបានចាត់ថ្នាក់ថាជាប្រភពមកពីខ្លួនឯង (សំបកពីរ) ឬមិនមែនខ្លួនឯងដោយប្រើ BLASTN និងតម្លៃ e 1e−3 និងចំណុចកាត់ផ្តាច់ដែលមានភាពដូចគ្នា >90%។ В этом случае перекрывающиеся чтения были собраны как чтения с парными концами и были классифицирова (двустворчатые моллюски) или чужие по происхождению с использованием BLASTN и значения e 1e-3 и отсечиония % сельзованием ក្នុងករណីនេះ ការអានដែលត្រួតស៊ីគ្នាត្រូវបានប្រមូលជាការអានដែលមានគូ ហើយត្រូវបានចាត់ថ្នាក់ថាជាការអានដើម (ទ្វេវ៉ាល់) ឬមិនមែនដើមដោយប្រើ BLASTN និងតម្លៃ e 1e-3 និងចំណុចកាត់ផ្តាច់ជាមួយនឹងភាពដូចគ្នា >90%។在这种情况下，重叠的读数组装为配对末端读数，并使用BLASTN 和1e-3的e 值和> 90%同源性的截止值分类为自身（双壳类）或非自身来源។在这种情况下，重叠读数组装为配末端读数，使用使用使用 blastn和 - 1 和90% 同源性的分类自身（双壳类）非自身。。。。。 В этом случае перекрывающиеся чтения были собраны как чтения с парными концами и классифицироввсбетка (двустворчатые моллюски) или несобственные по происхождению с использованием значений e BLASTN и 1e-3го и 9 пгороло ក្នុងករណីនេះ ការអានដែលត្រួតស៊ីគ្នាត្រូវបានប្រមូលជាការអានដែលមានគូ ហើយត្រូវបានចាត់ថ្នាក់ជារបស់ផ្ទាល់ខ្លួន (សំបកពីរ) ឬមិនមែនដើមដោយប្រើតម្លៃ e BLASTN និង 1e-3 និងកម្រិត homology >90%។ដោយសារតែហ្សែន A. atra មិនទាន់ត្រូវបានដាក់លំដាប់នៅឡើយទេ យើងបានប្រើយុទ្ធសាស្ត្រផ្គុំ de novo នៃឧបករណ៍ផ្គុំ MEGAHIT Next Generation Sequencing (NGS)។ សរុបចំនួន 147,188 contigs ត្រូវបានកំណត់ថាជាប្រភព (bivalves) ដែលពឹងផ្អែក។ contigs ទាំងនេះត្រូវបានបំបែកដោយតម្លៃ e-value នៃ 1e-10 ដោយប្រើ BLASTN និង BLASTX។ យុទ្ធសាស្ត្រនេះអនុញ្ញាតឱ្យយើងកំណត់អត្តសញ្ញាណបំណែកដែលមិនមែនជា bivalve ចំនួន 482 ដែលមាននៅក្នុង A. atra ccfDNA។ បំណែក DNA ទាំងនេះជាងពាក់កណ្តាល (57%) ត្រូវបានទទួលពីបាក់តេរី ជាចម្បងពី symbionts នៃព្រុយត្រី រួមទាំង symbionts sulfotrophic និងពី symbionts នៃព្រុយត្រី Solemya velum (រូបភាពទី 5)។
ភាពសម្បូរបែបដែលទាក់ទងនៅកម្រិតប្រភេទ។ B ភាពចម្រុះនៃអតិសុខុមប្រាណនៃពពួកបាក់តេរីសំខាន់ពីរ (Firmicutes និង Proteobacteria)។ ការពង្រីកតំណាងនៃ ddPCR C Vibrio spp. A. បំណែកនៃហ្សែន 16S rRNA (ពណ៌ខៀវ) នៅក្នុង hemolymphs atra បី។
ការវិភាគសរុបចំនួន ៤៨២ នៃបណ្តុំហ្សែនដែលប្រមូលបានត្រូវបានធ្វើឡើង។ ទម្រង់ទូទៅនៃការចែកចាយចំណាត់ថ្នាក់នៃចំណារពន្យល់បណ្តុំហ្សែនមេតាហ្សេណូមិក (ប្រូការីយ៉ូត និងអឺការីយ៉ូត)។ ខ. ការចែកចាយលម្អិតនៃបំណែក DNA បាក់តេរីដែលត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណដោយ BLASTN និង BLASTX។
ការវិភាគ Kraken2 ក៏បានបង្ហាញផងដែរថា ccfDNA របស់ខ្យងមានផ្ទុកបំណែក DNA បុរាណ រួមទាំងបំណែក DNA របស់ Euryarchaeota (65%), Crenarchaeota (24%) និង Thaurmarcheota (11%) (រូបភាពទី 6a)។ វត្តមាននៃបំណែក DNA ដែលមានប្រភពមកពី Euryarchaeota និង Crenarchaeota ដែលពីមុនត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងសហគមន៍អតិសុខុមប្រាណនៃខ្យងកាលីហ្វ័រញ៉ា មិនគួរជាការភ្ញាក់ផ្អើលនោះទេ [42]។ ទោះបីជា Euryarchaeota ជារឿយៗត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងលក្ខខណ្ឌធ្ងន់ធ្ងរក៏ដោយ ឥឡូវនេះវាត្រូវបានគេទទួលស្គាល់ថាទាំង Euryarchaeota និង Crenarcheota គឺជា prokaryotes ទូទៅបំផុតនៅក្នុងបរិស្ថាន cryogenic សមុទ្រ [43, 44]។ វត្តមាននៃអតិសុខុមប្រាណមេតាននៅក្នុងខ្យងមិនមែនជារឿងគួរឱ្យភ្ញាក់ផ្អើលនោះទេ ដោយសារតែរបាយការណ៍ថ្មីៗអំពីការលេចធ្លាយមេតានយ៉ាងទូលំទូលាយពីការលេចធ្លាយបាតនៅលើខ្ពង់រាប Kerguelen [45] និងការផលិតមេតានអតិសុខុមប្រាណដែលអាចកើតមានត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅឯឆ្នេរសមុទ្រនៃកោះ Kerguelen [46]។
បន្ទាប់មក ការយកចិត្តទុកដាក់របស់យើងបានប្តូរទៅការអានពីវីរុស DNA។ តាមដែលយើងដឹង នេះគឺជាការសិក្សាក្រៅគោលដៅលើកដំបូងអំពីមាតិកាវីរុសនៃខ្យង។ ដូចដែលរំពឹងទុក យើងបានរកឃើញបំណែក DNA នៃបាក់តេរី (Caudovirales) (រូបភាពទី 6b)។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ DNA វីរុសទូទៅបំផុតបានមកពីក្រុមវីរុសនុយក្លេអូស៊ីតូ ដែលត្រូវបានគេស្គាល់ផងដែរថាជាវីរុស DNA ធំស៊ីតូប្លាស្មិកនុយក្លេអ៊ែរ (NCLDV) ដែលមានហ្សែនធំបំផុតនៃវីរុសណាមួយ។ នៅក្នុងក្រុមវីរុសនេះ លំដាប់ DNA ភាគច្រើនជាកម្មសិទ្ធិរបស់គ្រួសារ Mimimidoviridae (58%) និង Poxviridae (21%) ដែលម្ចាស់ផ្ទះធម្មជាតិរបស់វារួមមានសត្វឆ្អឹងខ្នង និងសត្វអាត្រូដូដូ ខណៈពេលដែលសមាមាត្រតូចមួយនៃលំដាប់ DNA ទាំងនេះជាកម្មសិទ្ធិរបស់សារាយវីរុសវិទ្យាដែលគេស្គាល់។ ឆ្លងដល់សារាយ eukaryotic សមុទ្រ។ លំដាប់ទាំងនេះក៏ត្រូវបានទទួលពីវីរុស Pandora ដែលជាវីរុសយក្សដែលមានទំហំហ្សែនធំបំផុតនៃពូជវីរុសដែលគេស្គាល់។ គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ណាស់ ជួរនៃម្ចាស់ផ្ទះដែលគេដឹងថាឆ្លងមេរោគ ដូចដែលបានកំណត់ដោយលំដាប់ hemolymph ccfDNA គឺមានទំហំធំល្មម (រូបភាព S3 ព័ត៌មានបន្ថែម)។ វារួមបញ្ចូលទាំងមេរោគដែលឆ្លងសត្វល្អិតដូចជា Baculoviridae និង Iridoviridae ក៏ដូចជាមេរោគដែលឆ្លងអាម៉ូអេបា សារាយ និងសត្វឆ្អឹងខ្នង។ យើងក៏បានរកឃើញលំដាប់ដែលត្រូវគ្នានឹងហ្សែន Pithovirus sibericum ផងដែរ។ Pitoviruses (ត្រូវបានគេស្គាល់ផងដែរថាជា "មេរោគ zombie") ត្រូវបានញែកដាច់ពីគេពី permafrost អាយុ 30,000 ឆ្នាំនៅស៊ីបេរី [47]។ ដូច្នេះ លទ្ធផលរបស់យើងគឺស្របនឹងរបាយការណ៍មុនៗដែលបង្ហាញថាមិនមែនគ្រប់ប្រភេទមេរោគទំនើបទាំងនេះផុតពូជទេ [48] ហើយមេរោគទាំងនេះអាចមានវត្តមាននៅក្នុងប្រព័ន្ធអេកូឡូស៊ីសមុទ្រ subarctic ដាច់ស្រយាល។
ជាចុងក្រោយ យើងបានធ្វើតេស្តដើម្បីមើលថាតើយើងអាចរកឃើញបំណែក DNA ពីសត្វពហុកោសិកាផ្សេងទៀតបានដែរឬទេ។ សរុបមក បំណែកបរទេសចំនួន 482 ត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណដោយ BLASTN និង BLASTX ជាមួយបណ្ណាល័យ nt, nr និង RefSeq (ហ្សែន និងប្រូតេអ៊ីន)។ លទ្ធផលរបស់យើងបង្ហាញថា ក្នុងចំណោមបំណែកបរទេសនៃ ccfDNA របស់សត្វពហុកោសិកា DNA នៃឆ្អឹងមានច្រើនជាងគេ (រូបភាពទី 5)។ បំណែក DNA ពីសត្វល្អិត និងប្រភេទសត្វដទៃទៀតក៏ត្រូវបានរកឃើញផងដែរ។ ផ្នែកធំមួយនៃបំណែក DNA មិនទាន់ត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណនៅឡើយទេ ប្រហែលជាដោយសារតែការតំណាងមិនគ្រប់គ្រាន់នៃប្រភេទសត្វសមុទ្រមួយចំនួនធំនៅក្នុងមូលដ្ឋានទិន្នន័យហ្សែនបើប្រៀបធៀបទៅនឹងប្រភេទសត្វលើដី [49]។
នៅក្នុងឯកសារនេះ យើងអនុវត្តគោលគំនិត LB ទៅលើខ្យង ដោយអះអាងថា ការថតលំដាប់ ccfDNA របស់ខ្យងអាចផ្តល់នូវការយល់ដឹងអំពីសមាសភាពនៃប្រព័ន្ធអេកូឡូស៊ីឆ្នេរសមុទ្រសមុទ្រ។ ជាពិសេស យើងបានរកឃើញថា ១) ខ្យងមានកំហាប់ខ្ពស់ (កម្រិតមីក្រូក្រាម) នៃបំណែក DNA ដែលចរាចរក្នុងបរិមាណច្រើន (~1-5 kb)។ ២) បំណែក DNA ទាំងនេះគឺឯករាជ្យ និងមិនឯករាជ្យ។ ៣) ក្នុងចំណោមប្រភពបរទេសនៃបំណែក DNA ទាំងនេះ យើងបានរកឃើញ DNA របស់បាក់តេរី បុរាណវិទ្យា និងវីរុស ក៏ដូចជា DNA របស់សត្វពហុកោសិកាផ្សេងទៀត។ ៤) ការប្រមូលផ្តុំបំណែក ccfDNA បរទេសទាំងនេះនៅក្នុងខ្យងកើតឡើងយ៉ាងឆាប់រហ័ស និងរួមចំណែកដល់សកម្មភាពច្រោះខាងក្នុងរបស់ខ្យង។ សរុបមក ការសិក្សារបស់យើងបង្ហាញថា គោលគំនិតនៃ LB ដែលរហូតមកដល់ពេលនេះត្រូវបានអនុវត្តជាចម្បងនៅក្នុងវិស័យជីវវេជ្ជសាស្ត្រ អ៊ិនកូដប្រភពចំណេះដឹងដ៏សម្បូរបែប ប៉ុន្តែមិនទាន់បានរុករក ដែលអាចប្រើដើម្បីយល់កាន់តែច្បាស់អំពីអន្តរកម្មរវាងប្រភេទសត្វឆ្មាំ និងបរិស្ថានរបស់វា។
បន្ថែមពីលើសត្វព្រូន ការញែកចេញ ccfDNA ត្រូវបានរាយការណ៍នៅក្នុងថនិកសត្វ រួមទាំងកណ្ដុរ ឆ្កែ ឆ្មា និងសេះ [50, 51, 52]។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ តាមចំណេះដឹងរបស់យើង ការសិក្សារបស់យើងគឺជាលើកដំបូងដែលរាយការណ៍អំពីការរកឃើញ និងការរៀបចំលំដាប់នៃ ccfDNA នៅក្នុងប្រភេទសត្វសមុទ្រដែលមានប្រព័ន្ធចរាចរបើកចំហ។ លក្ខណៈពិសេសកាយវិភាគសាស្ត្រ និងសមត្ថភាពច្រោះរបស់ខ្យងនេះ យ៉ាងហោចណាស់អាចពន្យល់បានមួយផ្នែកអំពីលក្ខណៈទំហំខុសៗគ្នានៃបំណែក DNA ដែលចរាចរបើប្រៀបធៀបទៅនឹងប្រភេទសត្វដទៃទៀត។ ចំពោះមនុស្ស បំណែក DNA ភាគច្រើនដែលចរាចរក្នុងឈាមគឺជាបំណែកតូចៗដែលមានទំហំចាប់ពី 150 ដល់ 200 bp ជាមួយនឹងកំពូលអតិបរមា 167 bp [34, 53]។ ផ្នែកតូចមួយ ប៉ុន្តែសំខាន់នៃបំណែក DNA មានទំហំចន្លោះពី 300 ទៅ 500 bp ហើយប្រហែល 5% វែងជាង 900 bp [54]។ មូលហេតុនៃការចែកចាយទំហំនេះគឺថា ប្រភពសំខាន់នៃ ccfDNA នៅក្នុងប្លាស្មាកើតឡើងជាលទ្ធផលនៃការស្លាប់កោសិកា ទាំងដោយសារតែការស្លាប់កោសិកា ឬដោយសារតែការស្លាប់កោសិកានៃកោសិកា hematopoietic ដែលចរាចរនៅក្នុងបុគ្គលដែលមានសុខភាពល្អ ឬដោយសារតែ apoptosis នៃកោសិកាដុំសាច់ចំពោះអ្នកជំងឺមហារីក (ត្រូវបានគេស្គាល់ថាជា DNA ដុំសាច់ចរាចរ)។ ការចែកចាយទំហំនៃ hemolymph ccfDNA ដែលយើងបានរកឃើញនៅក្នុងខ្យងមានចាប់ពី 1000 ដល់ 5000 bp ដែលបង្ហាញថាខ្យង ccfDNA មានប្រភពដើមខុសគ្នា។ នេះគឺជាសម្មតិកម្មឡូជីខល ដោយសារខ្យងមានប្រព័ន្ធសរសៃឈាមពាក់កណ្តាលបើកចំហ និងរស់នៅក្នុងបរិស្ថានទឹកសមុទ្រដែលមានកំហាប់ខ្ពស់នៃ DNA ហ្សែនមីក្រូប។ តាមពិតទៅ ការពិសោធន៍មន្ទីរពិសោធន៍របស់យើងដោយប្រើ DNA ពីខាងក្រៅបានបង្ហាញថាខ្យងប្រមូលផ្តុំបំណែក DNA នៅក្នុងទឹកសមុទ្រ យ៉ាងហោចណាស់បន្ទាប់ពីពីរបីម៉ោង ពួកវាត្រូវបានរលួយបន្ទាប់ពីការស្រូបយកកោសិកា និង/ឬបញ្ចេញ និង/ឬរក្សាទុកនៅក្នុងអង្គការផ្សេងៗ។ ដោយសារភាពកម្រនៃកោសិកា (ទាំងប្រូការីយ៉ូត និងអឺការីយ៉ូត) ការប្រើប្រាស់បន្ទប់សន្ទះបិទបើកនឹងកាត់បន្ថយបរិមាណ ccfDNA ពីប្រភពខ្លួនឯង ក៏ដូចជាពីប្រភពបរទេសផងដែរ។ ដោយពិចារណាលើសារៈសំខាន់នៃភាពស៊ាំពីកំណើតរបស់កោសិកាពីរវ៉ាល់ និងចំនួនដ៏ច្រើននៃកោសិកាហ្វាហ្គោស៊ីតដែលកំពុងចរាចរ យើងបានសន្និដ្ឋានបន្ថែមទៀតថា សូម្បីតែ ccfDNA បរទេសក៏សម្បូរទៅដោយកោសិកាហ្វាហ្គោស៊ីតដែលកំពុងចរាចរ ដែលប្រមូលផ្តុំ DNA បរទេសនៅពេលទទួលទានអតិសុខុមប្រាណ និង/ឬកំទេចកំទីកោសិកា។ សរុបមក លទ្ធផលរបស់យើងបង្ហាញថា ccfDNA នៃអេម៉ូលីមហ្វីលពីរវ៉ាល់ គឺជាឃ្លាំងព័ត៌មានម៉ូលេគុលតែមួយគត់ និងពង្រឹងឋានៈរបស់ពួកវាជាប្រភេទសត្វឆ្មាំ។
ទិន្នន័យរបស់យើងបង្ហាញថា ការរៀបលំដាប់ និងការវិភាគបំណែក hemolymph ccfDNA ដែលមានប្រភពមកពីបាក់តេរីអាចផ្តល់ព័ត៌មានសំខាន់ៗអំពីរុក្ខជាតិបាក់តេរីម្ចាស់ផ្ទះ និងបាក់តេរីដែលមាននៅក្នុងប្រព័ន្ធអេកូឡូស៊ីសមុទ្រជុំវិញ។ បច្ចេកទេសរៀបលំដាប់បានបង្ហាញពីលំដាប់នៃបាក់តេរី commensal A. atra gill ដែលនឹងត្រូវបានខកខានប្រសិនបើវិធីសាស្ត្រកំណត់អត្តសញ្ញាណ rRNA 16S ធម្មតាត្រូវបានប្រើ ដែលមួយផ្នែកដោយសារតែភាពលំអៀងនៃបណ្ណាល័យយោង។ តាមពិតទៅ ការប្រើប្រាស់ទិន្នន័យ LB របស់យើងដែលប្រមូលបានពី M. platensis នៅក្នុងស្រទាប់ខ្យងដូចគ្នានៅ Kerguelen បានបង្ហាញថាសមាសធាតុនៃ symbionts បាក់តេរីដែលទាក់ទងនឹងខ្យងគឺដូចគ្នាសម្រាប់ប្រភេទខ្យងទាំងពីរ (រូបភាព S4 ព័ត៌មានបន្ថែម)។ ភាពស្រដៀងគ្នានៃខ្យងពីរផ្សេងគ្នាខាងហ្សែនអាចឆ្លុះបញ្ចាំងពីសមាសធាតុនៃសហគមន៍បាក់តេរីនៅក្នុងស្រទាប់ត្រជាក់ ស្ពាន់ធ័រ និងភ្នំភ្លើងនៃ Kerguelen [55, 56, 57, 58]។ កម្រិតខ្ពស់នៃអតិសុខុមប្រាណកាត់បន្ថយស្ពាន់ធ័រត្រូវបានពិពណ៌នាយ៉ាងល្អនៅពេលប្រមូលផលខ្យងពីតំបន់ឆ្នេរសមុទ្រដែលមានជីវសាស្រ្តរំខាន [59] ដូចជាឆ្នេរសមុទ្រ Port-au-France។ លទ្ធភាពមួយទៀតគឺថា រុក្ខជាតិខ្យងដែលរស់នៅជាក្រុមអាចរងផលប៉ះពាល់ដោយការចម្លងតាមផ្ដេក [60, 61]។ ការស្រាវជ្រាវបន្ថែមគឺត្រូវការដើម្បីកំណត់ទំនាក់ទំនងរវាងបរិស្ថានសមុទ្រ ផ្ទៃបាតសមុទ្រ និងសមាសភាពនៃបាក់តេរីស៊ីមេទ្រីនៅក្នុងខ្យង។ ការសិក្សាទាំងនេះកំពុងដំណើរការ។
ប្រវែង និងកំហាប់នៃ hemolymph ccfDNA ភាពងាយស្រួលនៃការបន្សុទ្ធរបស់វា និងគុណភាពខ្ពស់ដើម្បីអនុញ្ញាតឱ្យមានការរៀបចំលំដាប់កាំភ្លើងខ្លីយ៉ាងឆាប់រហ័ស គឺជាគុណសម្បត្តិមួយចំនួននៃការប្រើប្រាស់ mussel ccfDNA ដើម្បីវាយតម្លៃជីវចម្រុះនៅក្នុងប្រព័ន្ធអេកូឡូស៊ីឆ្នេរសមុទ្រសមុទ្រ។ វិធីសាស្រ្តនេះមានប្រសិទ្ធភាពជាពិសេសសម្រាប់ការកំណត់លក្ខណៈសហគមន៍មេរោគ (viromes) នៅក្នុងប្រព័ន្ធអេកូឡូស៊ីដែលបានផ្តល់ឱ្យ [62, 63]។ មិនដូចបាក់តេរី archaea និង eukaryotes ទេ ហ្សែនមេរោគមិនមានហ្សែនអភិរក្ស phylogenetic ដូចជាលំដាប់ 16S ទេ។ លទ្ធផលរបស់យើងបង្ហាញថា ការធ្វើកោសល្យវិច័យរាវពីប្រភេទសូចនាករដូចជា mussels អាចត្រូវបានប្រើដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណបំណែកមេរោគ ccfDNA មួយចំនួនធំដែលគេដឹងថាឆ្លងដល់ម្ចាស់ផ្ទះដែលជាធម្មតារស់នៅក្នុងប្រព័ន្ធអេកូឡូស៊ីសមុទ្រឆ្នេរសមុទ្រ។ នេះរួមបញ្ចូលទាំងមេរោគដែលគេដឹងថាឆ្លងដល់ protozoa, arthropods, សត្វល្អិត, រុក្ខជាតិ និងមេរោគបាក់តេរី (ឧទាហរណ៍ bacteriophages)។ ការចែកចាយស្រដៀងគ្នានេះត្រូវបានរកឃើញនៅពេលដែលយើងពិនិត្យមើល virome hemolymph ccfDNA នៃ mussels ពណ៌ខៀវ (M. platensis) ដែលប្រមូលបានក្នុងស្រទាប់ mussel ដូចគ្នានៅ Kerguelen (តារាង S2 ព័ត៌មានបន្ថែម)។ ការធ្វើលំដាប់ស៊ីក្វេនដោយកាំភ្លើងខ្លីនៃ ccfDNA គឺពិតជាវិធីសាស្រ្តថ្មីមួយដែលទទួលបានសន្ទុះក្នុងការសិក្សាអំពីវីរ៉ុមរបស់មនុស្ស ឬប្រភេទសត្វដទៃទៀត [21, 37, 64]។ វិធីសាស្រ្តនេះមានប្រយោជន៍ជាពិសេសសម្រាប់ការសិក្សាអំពីវីរុស DNA ដែលមានខ្សែពីរជាន់ ព្រោះគ្មានហ្សែនតែមួយត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងចំណោមវីរុស DNA ដែលមានខ្សែពីរជាន់ទាំងអស់ ដែលតំណាងឱ្យថ្នាក់វីរុសចម្រុះ និងទូលំទូលាយបំផុតនៅក្នុងទីក្រុងបាល់ទីម័រ [65]។ ទោះបីជាវីរុសភាគច្រើនទាំងនេះនៅតែមិនទាន់ចាត់ថ្នាក់ ហើយអាចរួមបញ្ចូលវីរុសមកពីផ្នែកដែលមិនស្គាល់ទាំងស្រុងនៃពិភពវីរុសក៏ដោយ [66] យើងបានរកឃើញថាវីរ៉ុម និងជួរម៉ាស៊ីននៃខ្យង A. atra និង M. platensis ស្ថិតនៅចន្លោះប្រភេទសត្វទាំងពីរ។ ស្រដៀងគ្នានេះដែរ (សូមមើលរូបភាព S3 ព័ត៌មានបន្ថែម)។ ភាពស្រដៀងគ្នានេះមិនមែនជារឿងគួរឱ្យភ្ញាក់ផ្អើលនោះទេ ព្រោះវាអាចឆ្លុះបញ្ចាំងពីកង្វះការជ្រើសរើសក្នុងការទទួលយក DNA ដែលមាននៅក្នុងបរិស្ថាន។ ការសិក្សានាពេលអនាគតដោយប្រើ RNA ដែលបានបន្សុទ្ធគឺត្រូវការជាចាំបាច់នាពេលបច្ចុប្បន្នដើម្បីកំណត់លក្ខណៈវីរ៉ុម RNA។
នៅក្នុងការសិក្សារបស់យើង យើងបានប្រើបំពង់បង្ហូរទិន្នន័យដ៏ម៉ត់ចត់មួយដែលត្រូវបានកែសម្រួលចេញពីការងាររបស់ Kowarski និងសហការី [37] ដែលបានប្រើការលុបពីរជំហាននៃការអាន និង contigs ដែលប្រមូលផ្តុំគ្នាមុន និងក្រោយពេលការផ្គុំ ccfDNA ដើម ដែលបណ្តាលឱ្យមានសមាមាត្រខ្ពស់នៃការអានដែលមិនបានគូសផែនទី។ ដូច្នេះ យើងមិនអាចច្រានចោលថាការអានដែលមិនបានគូសផែនទីមួយចំនួនទាំងនេះអាចនៅតែមានប្រភពដើមរបស់វាបានទេ ជាចម្បងដោយសារតែយើងមិនមានហ្សែនយោងសម្រាប់ប្រភេទខ្យងនេះ។ យើងក៏បានប្រើបំពង់បង្ហូរទិន្នន័យនេះផងដែរ ពីព្រោះយើងមានការព្រួយបារម្ភអំពី chimeras រវាងការអានដោយខ្លួនឯង និងមិនមែនដោយខ្លួនឯង និងប្រវែងអានដែលបង្កើតឡើងដោយ Illumina MiSeq PE75។ ហេតុផលមួយទៀតសម្រាប់ការអានដែលមិនបានគូសផែនទីភាគច្រើនគឺថា អតិសុខុមប្រាណសមុទ្រភាគច្រើន ជាពិសេសនៅតំបន់ដាច់ស្រយាលដូចជា Kerguelen មិនត្រូវបានបញ្ចូលចំណារពន្យល់ទេ។ យើងបានប្រើ Illumina MiSeq PE75 ដោយសន្មតថាប្រវែងបំណែក ccfDNA ស្រដៀងនឹង ccfDNA របស់មនុស្ស។ សម្រាប់ការសិក្សានាពេលអនាគត ដោយសារលទ្ធផលរបស់យើងបង្ហាញថា hemolymph ccfDNA មានការអានយូរជាងមនុស្ស និង/ឬថនិកសត្វ យើងសូមណែនាំឱ្យប្រើវេទិកាលំដាប់ដែលសមស្របសម្រាប់បំណែក ccfDNA វែងជាង។ ការអនុវត្តនេះនឹងធ្វើឱ្យវាកាន់តែងាយស្រួលក្នុងការកំណត់អត្តសញ្ញាណសូចនាករបន្ថែមទៀតសម្រាប់ការវិភាគកាន់តែស៊ីជម្រៅ។ ការទទួលបានលំដាប់ហ្សែននុយក្លេអ៊ែរ A. atra ពេញលេញដែលមិនអាចរកបាននាពេលបច្ចុប្បន្នក៏នឹងជួយសម្រួលដល់ការសម្គាល់ ccfDNA ពីប្រភពខ្លួនឯង និងប្រភពមិនមែនខ្លួនឯងផងដែរ។ ដោយសារការស្រាវជ្រាវរបស់យើងបានផ្តោតលើលទ្ធភាពនៃការអនុវត្តគោលគំនិតនៃការធ្វើកោសល្យវិច័យរាវទៅលើខ្យង យើងសង្ឃឹមថា ដោយសារគោលគំនិតនេះត្រូវបានប្រើប្រាស់ក្នុងការស្រាវជ្រាវនាពេលអនាគត ឧបករណ៍ និងបំពង់ថ្មីៗនឹងត្រូវបានបង្កើតឡើងដើម្បីបង្កើនសក្តានុពលនៃវិធីសាស្ត្រនេះដើម្បីសិក្សាពីភាពចម្រុះនៃអតិសុខុមប្រាណនៃខ្យង។
ក្នុងនាមជាសញ្ញាសម្គាល់ជីវសាស្ត្រគ្លីនិកដែលមិនរាតត្បាត កម្រិតប្លាស្មារបស់មនុស្សខ្ពស់នៃ ccfDNA ត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងជំងឺផ្សេងៗ ការខូចខាតជាលិកា និងស្ថានភាពស្ត្រេស [67,68,69]។ ការកើនឡើងនេះត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការបញ្ចេញបំណែក DNA ដែលមានប្រភពដើមរបស់វាបន្ទាប់ពីការខូចខាតជាលិកា។ យើងបានដោះស្រាយបញ្ហានេះដោយប្រើភាពតានតឹងកម្ដៅស្រួចស្រាវ ដែលក្នុងនោះខ្យងត្រូវបានប៉ះពាល់នឹងសីតុណ្ហភាព 30°C ជាបណ្តោះអាសន្ន។ យើងបានធ្វើការវិភាគនេះលើខ្យងបីប្រភេទផ្សេងគ្នាក្នុងការពិសោធន៍ឯករាជ្យចំនួនបី។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ យើងមិនបានរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរណាមួយនៅក្នុងកម្រិត ccfDNA បន្ទាប់ពីភាពតានតឹងកម្ដៅស្រួចស្រាវទេ (សូមមើលរូបភាព S5 ព័ត៌មានបន្ថែម)។ ការរកឃើញនេះអាចពន្យល់បានយ៉ាងហោចណាស់មួយផ្នែកអំពីការពិតដែលថាខ្យងមានប្រព័ន្ធឈាមរត់ពាក់កណ្តាលបើកចំហ និងប្រមូលផ្តុំ DNA បរទេសមួយចំនួនធំដោយសារតែសកម្មភាពច្រោះខ្ពស់របស់វា។ ម្យ៉ាងវិញទៀត ខ្យងដូចជាសត្វឆ្អឹងខ្នងជាច្រើនដែរ អាចមានភាពធន់នឹងការខូចខាតជាលិកាដែលបង្កឡើងដោយភាពតានតឹង ដោយហេតុនេះកំណត់ការបញ្ចេញ ccfDNA នៅក្នុង hemolymph របស់វា [70, 71]។
រហូតមកដល់បច្ចុប្បន្ន ការវិភាគ DNA នៃជីវចម្រុះនៅក្នុងប្រព័ន្ធអេកូឡូស៊ីក្នុងទឹកភាគច្រើនផ្តោតទៅលើការឌិកូដមេតាបាកូដ DNA បរិស្ថាន (eDNA)។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ វិធីសាស្រ្តនេះជាធម្មតាមានកម្រិតក្នុងការវិភាគជីវចម្រុះនៅពេលដែលប្រើប្រាយម័រ។ ការប្រើប្រាស់ការរៀបលំដាប់កាំភ្លើងខ្លីជៀសវាងដែនកំណត់នៃ PCR និងការជ្រើសរើសដោយលំអៀងនៃសំណុំប្រាយម័រ។ ដូច្នេះ ក្នុងន័យមួយ វិធីសាស្រ្តរបស់យើងគឺនៅជិតវិធីសាស្រ្តរៀបលំដាប់កាំភ្លើងខ្លី eDNA ដែលមានទិន្នផលខ្ពស់ដែលទើបប្រើថ្មីៗនេះ ដែលអាចរៀបលំដាប់ DNA ដែលបែកខ្ញែកដោយផ្ទាល់ និងវិភាគសារពាង្គកាយស្ទើរតែទាំងអស់ [72, 73]។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ មានបញ្ហាជាមូលដ្ឋានមួយចំនួនដែលបែងចែក LB ពីវិធីសាស្រ្ត eDNA ស្តង់ដារ។ ជាការពិតណាស់ ភាពខុសគ្នាសំខាន់រវាង eDNA និង LB គឺការប្រើប្រាស់ម៉ាស៊ីនតម្រងធម្មជាតិ។ ការប្រើប្រាស់ប្រភេទសត្វសមុទ្រដូចជាអេប៉ុង និងសត្វស្លាបពីរស្រទាប់ (Dresseina spp.) ជាតម្រងធម្មជាតិសម្រាប់សិក្សា eDNA ត្រូវបានរាយការណ៍ [74, 75]។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការសិក្សារបស់ Dreissena បានប្រើការធ្វើកោសល្យវិច័យជាលិកាដែល DNA ត្រូវបានស្រង់ចេញ។ ការវិភាគ ccfDNA ពី LB មិនតម្រូវឱ្យមានការធ្វើកោសល្យវិច័យជាលិកា ឧបករណ៍ឯកទេស និងជួនកាលថ្លៃ និងភស្តុភារដែលទាក់ទងនឹង eDNA ឬការធ្វើកោសល្យវិច័យជាលិកានោះទេ។ តាមពិតទៅ ថ្មីៗនេះយើងបានរាយការណ៍ថា ccfDNA ពី LB អាចត្រូវបានរក្សាទុក និងវិភាគជាមួយនឹងការគាំទ្រ FTA ដោយមិនចាំបាច់រក្សាខ្សែសង្វាក់ត្រជាក់ ដែលជាបញ្ហាប្រឈមដ៏ធំមួយសម្រាប់ការស្រាវជ្រាវនៅតំបន់ដាច់ស្រយាល [76]។ ការស្រង់ចេញ ccfDNA ពីការធ្វើកោសល្យវិច័យរាវក៏សាមញ្ញដែរ និងផ្តល់នូវ DNA ដែលមានគុណភាពខ្ពស់សម្រាប់ការវិភាគលំដាប់កាំភ្លើងខ្លី និងការវិភាគ PCR។ នេះគឺជាគុណសម្បត្តិដ៏អស្ចារ្យមួយដោយសារតែដែនកំណត់បច្ចេកទេសមួយចំនួនដែលទាក់ទងនឹងការវិភាគ eDNA [77]។ ភាពសាមញ្ញ និងតម្លៃទាបនៃវិធីសាស្ត្រយកគំរូក៏សមរម្យជាពិសេសសម្រាប់កម្មវិធីត្រួតពិនិត្យរយៈពេលវែងផងដែរ។ បន្ថែមពីលើសមត្ថភាពច្រោះខ្ពស់របស់វា លក្ខណៈពិសេសដ៏ល្បីមួយទៀតនៃសត្វខ្យងពីរប្រភេទគឺសមាសធាតុគីមី mucopolysaccharide នៃទឹករំអិលរបស់វា ដែលជំរុញការស្រូបយកមេរោគ [78, 79]។ នេះធ្វើឱ្យសត្វខ្យងពីរប្រភេទជាតម្រងធម្មជាតិដ៏ល្អសម្រាប់កំណត់លក្ខណៈជីវៈចម្រុះ និងផលប៉ះពាល់នៃការប្រែប្រួលអាកាសធាតុនៅក្នុងប្រព័ន្ធអេកូឡូស៊ីក្នុងទឹកដែលបានផ្តល់ឱ្យ។ ទោះបីជាវត្តមាននៃបំណែក DNA ដែលមានប្រភពមកពីម៉ាស៊ីនអាចត្រូវបានគេមើលឃើញថាជាដែនកំណត់នៃវិធីសាស្ត្របើប្រៀបធៀបទៅនឹង eDNA ក៏ដោយ ការចំណាយដែលទាក់ទងនឹងការមាន ccfDNA ដើមបែបនេះបើប្រៀបធៀបទៅនឹង eDNA គឺអាចយល់បានក្នុងពេលដំណាលគ្នាសម្រាប់ព័ត៌មានយ៉ាងច្រើនដែលមានសម្រាប់ការសិក្សាសុខភាព។ អុហ្វសិតម៉ាស៊ីន។ នេះរួមបញ្ចូលទាំងវត្តមាននៃលំដាប់មេរោគដែលបញ្ចូលទៅក្នុងហ្សែនរបស់ម៉ាស៊ីនម៉ាស៊ីន។ នេះមានសារៈសំខាន់ជាពិសេសសម្រាប់ខ្យង ដោយសារវត្តមាននៃមេរោគ retroviruses មហារីកឈាមដែលបញ្ជូនផ្ដេកនៅក្នុងខ្យងពីរស្រទាប់ [80, 81]។ គុណសម្បត្តិមួយទៀតរបស់ LB លើ eDNA គឺថាវាកេងប្រវ័ញ្ចសកម្មភាព phagocytic នៃកោសិកាឈាមដែលចរាចរនៅក្នុង hemolymph ដែលលេបត្របាក់អតិសុខុមប្រាណ (និងហ្សែនរបស់វា)។ phagocytosis គឺជាមុខងារសំខាន់នៃកោសិកាឈាមនៅក្នុងខ្យងពីរស្រទាប់ [82]។ ជាចុងក្រោយ វិធីសាស្ត្រនេះទាញយកអត្ថប្រយោជន៍ពីសមត្ថភាពច្រោះខ្ពស់នៃខ្យង (ជាមធ្យម 1.5 លីត្រ/ម៉ោងនៃទឹកសមុទ្រ) និងចរាចរពីរថ្ងៃ ដែលបង្កើនការលាយបញ្ចូលគ្នានៃស្រទាប់ទឹកសមុទ្រផ្សេងៗគ្នា ដែលអនុញ្ញាតឱ្យមានការចាប់យក eDNA ខុសប្រក្រតី។ [83, 84]។ ដូច្នេះ ការវិភាគ ccfDNA របស់ខ្យងគឺជាមធ្យោបាយគួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍មួយដោយផ្អែកលើផលប៉ះពាល់អាហារូបត្ថម្ភ សេដ្ឋកិច្ច និងបរិស្ថានរបស់ខ្យង។ ស្រដៀងគ្នាទៅនឹងការវិភាគ LB ដែលប្រមូលបានពីមនុស្ស វិធីសាស្ត្រនេះក៏បើកលទ្ធភាពនៃការវាស់វែងការផ្លាស់ប្តូរហ្សែន និងអេពីហ្សែននៅក្នុង DNA របស់ម៉ាស៊ីនដើម្បីឆ្លើយតបទៅនឹងសារធាតុខាងក្រៅ។ ឧទាហរណ៍ បច្ចេកវិទ្យាស៊ីក្វេនជំនាន់ទីបីអាចត្រូវបានគ្រោងទុកដើម្បីអនុវត្តការវិភាគមេទីឡាស្យុងទូទាំងហ្សែននៅក្នុង ccfDNA ដើមដោយប្រើស៊ីក្វេនណាណូផ័រ។ ដំណើរការនេះគួរតែត្រូវបានសម្របសម្រួលដោយការពិតដែលថាប្រវែងនៃបំណែក ccfDNA របស់ខ្យងគឺឆបគ្នាយ៉ាងល្អឥតខ្ចោះជាមួយនឹងវេទិកាស៊ីក្វេនដែលបានអានយូរដែលអនុញ្ញាតឱ្យមានការវិភាគមេទីឡាស្យុង DNA ទូទាំងហ្សែនពីការដំណើរការស៊ីក្វេនតែមួយដោយមិនចាំបាច់មានការបំលែងគីមី។85,86] នេះគឺជាលទ្ធភាពគួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍មួយ ដូចដែលវាត្រូវបានបង្ហាញថាលំនាំមេទីឡាស្យុង DNA ឆ្លុះបញ្ចាំងពីការឆ្លើយតបទៅនឹងភាពតានតឹងបរិស្ថាន និងនៅតែបន្តកើតមានលើមនុស្សជំនាន់ជាច្រើន។ ដូច្នេះ វាអាចផ្តល់នូវការយល់ដឹងដ៏មានតម្លៃអំពីយន្តការមូលដ្ឋានដែលគ្រប់គ្រងការឆ្លើយតបបន្ទាប់ពីការប៉ះពាល់នឹងការប្រែប្រួលអាកាសធាតុ ឬការបំពុល [87]។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការប្រើប្រាស់ LB មិនមែនគ្មានដែនកំណត់នោះទេ។ មិនចាំបាច់និយាយទេ នេះតម្រូវឱ្យមានវត្តមាននៃប្រភេទសត្វសូចនាករនៅក្នុងប្រព័ន្ធអេកូឡូស៊ី។ ដូចដែលបានរៀបរាប់ខាងលើ ការប្រើប្រាស់ LB ដើម្បីវាយតម្លៃជីវចម្រុះនៃប្រព័ន្ធអេកូឡូស៊ីដែលបានផ្តល់ឱ្យក៏តម្រូវឱ្យមានបំពង់ជីវព័ត៌មានវិទ្យាដ៏ម៉ត់ចត់មួយដែលគិតគូរពីវត្តមាននៃបំណែក DNA ពីប្រភព។ បញ្ហាធំមួយទៀតគឺភាពអាចរកបាននៃហ្សែនយោងសម្រាប់ប្រភេទសត្វសមុទ្រ។ គេសង្ឃឹមថាគំនិតផ្តួចផ្តើមដូចជាគម្រោងហ្សែនថនិកសត្វសមុទ្រ និងគម្រោង Fish10k ដែលទើបបង្កើតថ្មី [88] នឹងជួយសម្រួលដល់ការវិភាគបែបនេះនាពេលអនាគត។ ការអនុវត្តគំនិត LB ទៅលើសារពាង្គកាយចិញ្ចឹមតម្រងសមុទ្រក៏ឆបគ្នាជាមួយនឹងការរីកចម្រើនចុងក្រោយបំផុតនៅក្នុងបច្ចេកវិទ្យាលំដាប់លំដោយ ដែលធ្វើឱ្យវាស័ក្តិសមសម្រាប់ការអភិវឌ្ឍជីវសញ្ញាណពហុអូមដើម្បីផ្តល់ព័ត៌មានសំខាន់ៗអំពីសុខភាពជម្រកសមុទ្រជាការឆ្លើយតបទៅនឹងភាពតានតឹងបរិស្ថាន។
ទិន្នន័យស៊ីក្វេនហ្សែនត្រូវបានដាក់ទុកក្នុងបណ្ណសារអានស៊ីក្វេន NCBI https://www.ncbi.nlm.nih.gov/sra/SRR8924808 ក្រោមគម្រោង Bioprojects SRR8924808។
Brierley AS, Kingsford MJ ផលប៉ះពាល់នៃការប្រែប្រួលអាកាសធាតុលើជីវិតសមុទ្រ និងប្រព័ន្ធអេកូឡូស៊ី។ Cole Biology. 2009; 19: P602–P614។
Gissi E, Manea E, Mazaris AD, Fraschetti S, Almpanidou V, Bevilacqua S, et al. ពិចារណាពីផលប៉ះពាល់រួមបញ្ចូលគ្នានៃការប្រែប្រួលអាកាសធាតុ និងភាពតានតឹងក្នុងស្រុកផ្សេងទៀតលើបរិស្ថានសមុទ្រ។ បរិស្ថានវិទ្យាសាស្ត្រទូទៅ។ 2021;755:142564។
Carella F, Antuofermo E, Farina S, Salati F, Mandas D, Prado P, et al ។ ) វិទ្យាសាស្ត្រដំបូងនៃខែមីនា។ ឆ្នាំ ២០២០; ៧:៤៨ ។
Seront L, Nicastro CR, Zardi GI, Goberville E. ការអត់ធ្មត់កំដៅទាបក្រោមលក្ខខណ្ឌស្ត្រេសកំដៅម្តងហើយម្តងទៀតពន្យល់ពីអត្រាមរណភាពខ្ពស់នៅរដូវក្តៅរបស់ខ្យងខៀវ។ របាយការណ៍វិទ្យាសាស្ត្រឆ្នាំ ២០១៩; ៩:១៧៤៩៨។
Fey SB, Siepielski AM, Nussle S, Cervantes-Yoshida K, Hwan JL, Huber ER, et al. ការផ្លាស់ប្តូរថ្មីៗនៃភាពញឹកញាប់ មូលហេតុ និងវិសាលភាពនៃការស្លាប់របស់សត្វ។ Proc Natl Acad Sci USA. 2015;112:1083-8.
Scarpa F, Sanna D, Azzena I, Mughetti D, Cerruti F, Hosseini S, et al ។ ភ្នាក់ងារបង្ករោគមិនជាក់លាក់ជាច្រើនប្រភេទអាចបណ្តាលឱ្យមានការស្លាប់ដ៏ធំនៃ Pinna nobilis ។ ជីវិត។ ឆ្នាំ ២០២០; ១០:២៣៨ ។
Bradley M, Coutts SJ, Jenkins E, O'Hara TM. ផលប៉ះពាល់ដែលអាចកើតមាននៃការប្រែប្រួលអាកាសធាតុលើជំងឺសត្វដែលឆ្លងពីសត្វនៅតំបន់អាកទិក។ Int J Circumpolar health. 2005; 64:468–77.
Beyer J., Greene NW, Brooks S., Allan IJ, Ruus A., Gomez T. et al. ខ្យងខៀវ (Mytilus edulis spp.) ជាសារពាង្គកាយសញ្ញាក្នុងការត្រួតពិនិត្យការបំពុលឆ្នេរសមុទ្រ៖ ការពិនិត្យឡើងវិញ។ Mar Environ Res 2017; 130:338-65។
Siravegna G, Marsoni S, Siena S, Bardelli A. ការរួមបញ្ចូលការធ្វើកោសល្យវិច័យរាវក្នុងការព្យាបាលជំងឺមហារីក។ Nat Rev Clean Oncol. 2017; 14:531–48។
Wan JCM, Massie C, Garcia-Corbacho J, Mouliere F, Brenton JD, Caldas C, et al. ភាពចាស់ទុំនៃការធ្វើកោសល្យវិច័យរាវ៖ អនុញ្ញាតឱ្យ DNA ដុំសាច់ចរាចរ។ Nat Rev Cancer. 2017;17:223–38។
Mandel P., Metais P. អាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកនៅក្នុងប្លាស្មារបស់មនុស្ស។ កំណត់ហេតុនៃកិច្ចប្រជុំរបស់ក្រុមហ៊ុនបុត្រសម្ព័ន្ធ Soc Biol។ ឆ្នាំ 1948; 142:241-3។
Bronkhorst AJ, Ungerer W, Holdenrieder S. តួនាទីថ្មីមួយសម្រាប់ DNA ដែលគ្មានកោសិកាជាសញ្ញាសម្គាល់ម៉ូលេគុលសម្រាប់ការព្យាបាលជំងឺមហារីក។ ការវាស់បរិមាណនៃការវិភាគជីវម៉ូឡា។ 2019;17:100087។
Ignatiadis M., Sledge GW, Jeffrey SS ការធ្វើកោសល្យវិច័យរាវចូលទៅក្នុងគ្លីនិក - បញ្ហាការអនុវត្ត និងបញ្ហាប្រឈមនាពេលអនាគត។ Nat Rev Clin Oncol. 2021; 18:297–312។
Lo YM, Corbetta N., Chamberlain PF, Rai W., Sargent IL, Redman CW និងអ្នកដទៃទៀត។ ឌីអិនអេរបស់គភ៌មាននៅក្នុងប្លាស្មា និងសេរ៉ូមរបស់ម្តាយ។ Lancet. 1997; 350:485-7។
Mufarray MN, Wong RJ, Shaw GM, Stevenson DK, Quake SR ការសិក្សាអំពីដំណើរនៃការមានផ្ទៃពោះ និងផលវិបាករបស់វាដោយប្រើ RNA ក្រៅកោសិកាដែលចរាចរក្នុងឈាមរបស់ស្ត្រីអំឡុងពេលមានផ្ទៃពោះ។ Dopediatrics. 2020;8:605219.
Ollerich M, Sherwood K, Keown P, Schütz E, Beck J, Stegbauer J, និងអ្នកដទៃទៀត។ ការធ្វើកោសល្យវិច័យរាវ៖ ឌីអិនអេដែលគ្មានកោសិកាអ្នកបរិច្ចាគត្រូវបានប្រើដើម្បីរកឃើញដំបៅអាឡូហ្សែននៅក្នុងតម្រងនោមដែលបានប្តូរ។ Nat Rev Nephrol. 2021; 17:591–603។
Juan FC, Lo YM នវានុវត្តន៍ក្នុងការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យមុនពេលសម្រាលកូន៖ ការចាត់ថ្នាក់ហ្សែនប្លាស្មារបស់ម្តាយ។ Anna MD. 2016;67:419-32។
Gu W, Deng X, Lee M, Sucu YD, Arevalo S, Stryke D, et al. ការរកឃើញភ្នាក់ងារបង្ករោគយ៉ាងរហ័សជាមួយនឹងការធ្វើលំដាប់មេតាហ្សែនជំនាន់ក្រោយនៃសារធាតុរាវក្នុងរាងកាយដែលឆ្លងមេរោគ។ Nat Medicine. 2021;27:115-24.
ពេលវេលាបង្ហោះ៖ ថ្ងៃទី ១៤ ខែសីហា ឆ្នាំ ២០២២
