Nature.com ପରିଦର୍ଶନ କରିବା ପାଇଁ ଆପଣଙ୍କୁ ଧନ୍ୟବାଦ। ଆପଣ ବ୍ୟବହାର କରୁଥିବା ବ୍ରାଉଜର ସଂସ୍କରଣରେ ସୀମିତ CSS ସମର୍ଥନ ଅଛି। ସର୍ବୋତ୍ତମ ଅଭିଜ୍ଞତା ପାଇଁ, ଆମେ ଆପଣଙ୍କୁ ଏକ ଅପଡେଟ୍ ବ୍ରାଉଜର୍ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ସୁପାରିଶ କରୁଛୁ (କିମ୍ବା ଇଣ୍ଟରନେଟ୍ ଏକ୍ସପ୍ଲୋରରରେ ସୁସଙ୍ଗତତା ମୋଡ୍ ଅକ୍ଷମ କରନ୍ତୁ)। ଏହି ସମୟ ମଧ୍ୟରେ, ନିରନ୍ତର ସମର୍ଥନ ସୁନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ସାଇଟ୍‌କୁ ଷ୍ଟାଇଲ୍ ଏବଂ JavaScript ବିନା ରେଣ୍ଡର କରିବୁ।
ତରଳ ବାୟୋପ୍ସି (LB) ଏକ ଧାରଣା ଯାହା ଜୈବ ଚିକିତ୍ସା କ୍ଷେତ୍ରରେ ଦ୍ରୁତ ଗତିରେ ଲୋକପ୍ରିୟତା ହାସଲ କରୁଛି। ଏହି ଧାରଣା ମୁଖ୍ୟତଃ ବିଭିନ୍ନ ଟିସୁରେ କୋଷ ମୃତ୍ୟୁ ପରେ ଛୋଟ ଖଣ୍ଡ ଭାବରେ ମୁକ୍ତ ହୋଇଥିବା ପରିବାହୀ ବାହ୍ୟକୋଷୀୟ DNA (ccfDNA) ଖଣ୍ଡ ଚିହ୍ନଟ ଉପରେ ଆଧାରିତ। ଏହି ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଏକ ଛୋଟ ଅଂଶ ବିଦେଶୀ (ବିଦେଶୀ) ଟିସୁ କିମ୍ବା ଜୀବରୁ ଉତ୍ପନ୍ନ ହୁଏ। ବର୍ତ୍ତମାନର କାର୍ଯ୍ୟରେ, ଆମେ ଏହି ଧାରଣାକୁ ମସେଲ୍ ଉପରେ ପ୍ରୟୋଗ କରିଛୁ, ଏକ ସେଣ୍ଟିନେଲ୍ ପ୍ରଜାତି ଯାହା ସେମାନଙ୍କର ଉଚ୍ଚ ସମୁଦ୍ର ଜଳ ପରିଷ୍କାର କ୍ଷମତା ପାଇଁ ଜଣାଶୁଣା। ଆମେ ମସେଲ୍ ର କ୍ଷମତାକୁ ବ୍ୟବହାର କରି ବିଭିନ୍ନ ଉତ୍ସରୁ ପରିବେଶଗତ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ କ୍ୟାପଚର କରି ସାମୁଦ୍ରିକ ଉପକୂଳୀୟ ଇକୋସିଷ୍ଟମର ଜୈବ ବିବିଧତା ବିଷୟରେ ସୂଚନା ପ୍ରଦାନ କରୁ। ଆମର ଫଳାଫଳ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ମସେଲ୍ ହେମୋଲିମ୍ଫରେ DNA ଖଣ୍ଡ ଥାଏ ଯାହା ଆକାରରେ ବହୁତ ଭିନ୍ନ, 1 ରୁ 5 kb ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ। ସଟଗନ୍ ସିକୋଇନ୍ସିଂ ଦେଖାଇଲା ଯେ ବହୁ ସଂଖ୍ୟକ DNA ଖଣ୍ଡ ବିଦେଶୀ ମାଇକ୍ରୋବାୟମ୍ ଉତ୍ପତ୍ତିର। ସେମାନଙ୍କ ମଧ୍ୟରେ, ଆମେ ଜୀବାଣୁ, ଆର୍କିଆ ଏବଂ ଭାଇରସରୁ DNA ଖଣ୍ଡ ପାଇଲୁ, ଯେଉଁଥିରେ ଉପକୂଳୀୟ ସାମୁଦ୍ରିକ ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ସାଧାରଣତଃ ମିଳୁଥିବା ବିଭିନ୍ନ ହୋଷ୍ଟକୁ ସଂକ୍ରମିତ କରିବା ପାଇଁ ଜଣାଶୁଣା ଭାଇରସ ମଧ୍ୟ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। ଶେଷରେ, ଆମର ଅଧ୍ୟୟନ ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ ମସେଲ୍‌ମାନଙ୍କ ଉପରେ ପ୍ରୟୋଗ ହୋଇଥିବା LB ଧାରଣା ସାମୁଦ୍ରିକ ଉପକୂଳବର୍ତ୍ତୀ ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ଅଣୁଜୀବ ବିବିଧତା ବିଷୟରେ ଜ୍ଞାନର ଏକ ସମୃଦ୍ଧ କିନ୍ତୁ ଏପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଅନ୍ୱେଷଣିତ ଉତ୍ସକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ।
ସାମୁଦ୍ରିକ ପରିସଂସ୍ଥାର ଜୈବ ବିବିଧତା ଉପରେ ଜଳବାୟୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ (CC)ର ପ୍ରଭାବ ଗବେଷଣାର ଏକ ଦ୍ରୁତ ବଢୁଥିବା କ୍ଷେତ୍ର। ବିଶ୍ୱ ଉଷ୍ଣତା କେବଳ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଶାରୀରିକ ଚାପ ସୃଷ୍ଟି କରେ ନାହିଁ, ବରଂ ସାମୁଦ୍ରିକ ଜୀବମାନଙ୍କର ତାପଜ ସ୍ଥିରତାର ବିବର୍ତ୍ତନମୂଳକ ସୀମାକୁ ମଧ୍ୟ ଠେଲି ଦିଏ, ଅନେକ ପ୍ରଜାତିର ବାସସ୍ଥାନକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରେ, ସେମାନଙ୍କୁ ଅଧିକ ଅନୁକୂଳ ପରିସ୍ଥିତି ଖୋଜିବାକୁ ପ୍ରେରଣା ଦିଏ [1, 2]। ମେଟାଜୋଆନ୍‌ମାନଙ୍କର ଜୈବ ବିବିଧତାକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିବା ସହିତ, CC ହୋଷ୍ଟ-ମାଇକ୍ରୋବାୟ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟାର ନାଜୁକ ସନ୍ତୁଳନକୁ ବିପର୍ଯ୍ୟସ୍ତ କରେ। ଏହି ମାଇକ୍ରୋବାୟ ଡିସବ୍ୟାକ୍ଟେରୋସିସ୍ ସାମୁଦ୍ରିକ ପରିସଂସ୍ଥା ପାଇଁ ଏକ ଗମ୍ଭୀର ବିପଦ ସୃଷ୍ଟି କରେ କାରଣ ଏହା ସାମୁଦ୍ରିକ ଜୀବମାନଙ୍କୁ ସଂକ୍ରାମକ ରୋଗଜୀବାଣୁ ପ୍ରତି ଅଧିକ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ କରିଥାଏ [3, 4]। ଏହା ବିଶ୍ୱାସ କରାଯାଏ ଯେ SS ଗଣ ମୃତ୍ୟୁରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ, ଯାହା ବିଶ୍ୱ ସାମୁଦ୍ରିକ ପରିସଂସ୍ଥାର ପରିଚାଳନା ପାଇଁ ଏକ ଗମ୍ଭୀର ସମସ୍ୟା [5, 6]। ଏହା ଅନେକ ସାମୁଦ୍ରିକ ପ୍ରଜାତିଗୁଡ଼ିକର ଆର୍ଥିକ, ପରିବେଶଗତ ଏବଂ ପୁଷ୍ଟିକର ପ୍ରଭାବକୁ ଦୃଷ୍ଟିରେ ରଖି ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ସମସ୍ୟା। ଏହା ବିଶେଷକରି ମେରୁ ଅଞ୍ଚଳରେ ରହୁଥିବା ବାଇଭାଲ୍ଭ ପାଇଁ ସତ୍ୟ, ଯେଉଁଠାରେ CK ର ପ୍ରଭାବ ଅଧିକ ତୁରନ୍ତ ଏବଂ ଗମ୍ଭୀର [6, 7]। ପ୍ରକୃତରେ, ବାଇଭାଲ୍ଭ ଯେପରିକି Mytilus spp। ସାମୁଦ୍ରିକ ଇକୋସିଷ୍ଟମ ଉପରେ CCର ପ୍ରଭାବ ନିରୀକ୍ଷଣ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟାପକ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ। ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟର କଥା ନୁହେଁ, ସେମାନଙ୍କର ସ୍ୱାସ୍ଥ୍ୟ ନିରୀକ୍ଷଣ କରିବା ପାଇଁ ଅପେକ୍ଷାକୃତ ଭାବରେ ବହୁ ସଂଖ୍ୟକ ବାୟୋମାର୍କର ବିକଶିତ ହୋଇଛି, ପ୍ରାୟତଃ ଏନଜାଇମାଟିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ କିମ୍ବା କୋଷ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା ଏବଂ ଫାଗୋସାଇଟିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ [8] ଭଳି କୋଷୀୟ କାର୍ଯ୍ୟକାରକମାନଙ୍କୁ ନେଇ ଏକ ଦୁଇ-ସ୍ତରୀୟ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ। ଏହି ପଦ୍ଧତିଗୁଡ଼ିକରେ ସମୁଦ୍ର ଜଳର ବହୁ ପରିମାଣର ଅବଶୋଷଣ ପରେ ନରମ ଟିସୁରେ ଜମା ହୋଇଥିବା ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଚାପ ସୂଚକଗୁଡ଼ିକର ସାନ୍ଦ୍ରତାର ମାପ ମଧ୍ୟ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। ତଥାପି, ବାଇଭାଲଭର ଉଚ୍ଚ ଫିଲ୍ଟେରେସନ କ୍ଷମତା ଏବଂ ଅର୍ଦ୍ଧ-ଖୋଲା ସଂଚାଳନ ପ୍ରଣାଳୀ ତରଳ ବାୟୋପସି (LB) ଧାରଣା ବ୍ୟବହାର କରି ନୂତନ ହେମୋଲିମ୍ଫ ବାୟୋମାର୍କର ବିକାଶ କରିବାର ସୁଯୋଗ ପ୍ରଦାନ କରେ, ଯାହା ରୋଗୀ ପରିଚାଳନା ପାଇଁ ଏକ ସରଳ ଏବଂ ସର୍ବନିମ୍ନ ଆକ୍ରମଣାତ୍ମକ ପଦ୍ଧତି। ରକ୍ତ ନମୁନା [9, 10]। ଯଦିଓ ମାନବ LB ରେ ଅନେକ ପ୍ରକାରର ସଂଚାଳନ ଅଣୁ ମିଳିପାରିବ, ଏହି ଧାରଣା ମୁଖ୍ୟତଃ ପ୍ଲାଜମାରେ ସଂଚାଳନ ବାହ୍ୟକୋଷୀୟ DNA (ccfDNA) ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର DNA କ୍ରମ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଉପରେ ଆଧାରିତ। ପ୍ରକୃତରେ, ମାନବ ପ୍ଲାଜମାରେ ପରିଚଳିତ DNA ର ଉପସ୍ଥିତି 20 ଶତାବ୍ଦୀର ମଧ୍ୟଭାଗରୁ ଜଣାଶୁଣା [11], କିନ୍ତୁ ଏହା କେବଳ ସାମ୍ପ୍ରତିକ ବର୍ଷଗୁଡ଼ିକରେ ହାଇ-ଥ୍ରୁପୁଟ୍ ସିକୋଏନ୍ସିଂ ପଦ୍ଧତିର ଆଗମନ ଦ୍ୱାରା ccfDNA ଉପରେ ଆଧାରିତ କ୍ଲିନିକାଲ୍ ନିର୍ଣ୍ଣୟ ହୋଇପାରିଛି। ଏହି ପରିଚଳିତ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଉପସ୍ଥିତି ଆଂଶିକ ଭାବରେ କୋଷ ମୃତ୍ୟୁ ପରେ ଜିନୋମିକ୍ DNA (ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟର ଏବଂ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍) ର ନିଷ୍କ୍ରିୟ ମୁକ୍ତି ପାଇଁ କାରଣ। ସୁସ୍ଥ ବ୍ୟକ୍ତିମାନଙ୍କଠାରେ, ccfDNA ର ସାନ୍ଦ୍ରତା ସାଧାରଣତଃ କମ୍ (<10 ng/mL) ଥାଏ କିନ୍ତୁ ବିଭିନ୍ନ ରୋଗରେ ପୀଡିତ କିମ୍ବା ଚାପର ଶିକାର ରୋଗୀଙ୍କ କ୍ଷେତ୍ରରେ ଏହା 5-10 ଗୁଣ ବୃଦ୍ଧି ପାଇପାରେ, ଯାହା ଫଳରେ ଟିସୁ କ୍ଷତି ହୁଏ। ସୁସ୍ଥ ବ୍ୟକ୍ତିମାନଙ୍କଠାରେ, ccfDNA ର ସାନ୍ଦ୍ରତା ସାଧାରଣତଃ କମ୍ (<10 ng/mL) ଥାଏ କିନ୍ତୁ ବିଭିନ୍ନ ରୋଗରେ ପୀଡିତ କିମ୍ବା ଚାପର ଶିକାର ରୋଗୀଙ୍କ କ୍ଷେତ୍ରରେ ଏହା 5-10 ଗୁଣ ବୃଦ୍ଧି ପାଇପାରେ, ଯାହା ଫଳରେ ଟିସୁ କ୍ଷତି ହୁଏ। У здоровых людей маря вккДНК в умеме низкая (<10 нг / гир), но может повышаться в 5-10 раз у больных с различной патоголией или подвергающихся аву, при приящемсу к поврежиди ସୁସ୍ଥ ଲୋକଙ୍କଠାରେ, cccDNA ର ସାନ୍ଦ୍ରତା ସାଧାରଣତଃ କମ୍ (<10 ng/mL), କିନ୍ତୁ ବିଭିନ୍ନ ରୋଗ କିମ୍ବା ଚାପରେ ଥିବା ରୋଗୀଙ୍କ କ୍ଷେତ୍ରରେ ଏହା 5-10 ଗୁଣ ବୃଦ୍ଧି ପାଇପାରେ ଯାହା ଟିସୁ କ୍ଷତିର କାରଣ ହୁଏ।在健康个体中， ccfDNA 的浓度通常较低（ <10 ng / mL ），但在患有各种病理或承受压力的患者中可增加 5-10 倍，从而导致组织损伤。10 ng 个体 c ccfdna 的 浓度 较 低 10 10 ng / mlКонцентрации ccfDNA обикно низкие (<10 нг / у) у здоровых людей, но могут быть увеличены в 5-10 раз у акинов с различными пидологиями или чисом, что при имитит к повреждению тканей। ସୁସ୍ଥ ବ୍ୟକ୍ତିମାନଙ୍କ ମଧ୍ୟରେ ccfDNA ସାନ୍ଦ୍ରତା ସାଧାରଣତଃ କମ୍ (<10 ng/ml) ଥାଏ, କିନ୍ତୁ ବିଭିନ୍ନ ରୋଗ କିମ୍ବା ଚାପ ଥିବା ରୋଗୀଙ୍କ କ୍ଷେତ୍ରରେ ଏହା 5-10 ଗୁଣ ବୃଦ୍ଧି ପାଇପାରେ, ଯାହା ଫଳରେ ଟିସୁ କ୍ଷତି ହୁଏ।ccfDNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଆକାର ବ୍ୟାପକ ଭାବରେ ଭିନ୍ନ ହୋଇଥାଏ, କିନ୍ତୁ ସାଧାରଣତଃ 150 ରୁ 200 bp ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ହୋଇଥାଏ। [12]। ସ୍ୱ-ଉତ୍ପନ୍ନ ccfDNA, ଅର୍ଥାତ୍, ସାଧାରଣ କିମ୍ବା ରୂପାନ୍ତରିତ ହୋଷ୍ଟ କୋଷରୁ ccfDNA, ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟର ଏବଂ/କିମ୍ବା ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଜିନୋମରେ ଉପସ୍ଥିତ ଜେନେଟିକ୍ ଏବଂ ଏପିଜେନେଟିକ୍ ପରିବର୍ତ୍ତନଗୁଡ଼ିକୁ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ, ଯାହା ଦ୍ଵାରା କ୍ଲିନିସିଆନମାନଙ୍କୁ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଆଣବିକ-ଲକ୍ଷ୍ୟଯୁକ୍ତ ଚିକିତ୍ସା ଚୟନ କରିବାରେ ସାହାଯ୍ୟ କରାଯାଏ [13]। ତଥାପି, ଗର୍ଭାବସ୍ଥାରେ ଭ୍ରୁଣ କୋଷରୁ କିମ୍ବା ପ୍ରତିରୋପିତ ଅଙ୍ଗରୁ ccfDNA ପରି ବିଦେଶୀ ଉତ୍ସରୁ ccfDNA ପ୍ରାପ୍ତ କରାଯାଇପାରିବ [14,15,16,17]। ccfDNA ମଧ୍ୟ ଏକ ସଂକ୍ରାମକ ଏଜେଣ୍ଟ (ବିଦେଶୀ) ର ନ୍ୟୁକ୍ଲିକ୍ ଏସିଡର ଉପସ୍ଥିତି ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ସୂଚନାର ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଉତ୍ସ, ଯାହା ରକ୍ତ ସଂସ୍କୃତି ଦ୍ୱାରା ଚିହ୍ନଟ ହୋଇନଥିବା ବ୍ୟାପକ ସଂକ୍ରମଣର ଅଣ-ଆକ୍ରମଣାତ୍ମକ ଚିହ୍ନଟକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ, ସଂକ୍ରମିତ ଟିସୁର ଆକ୍ରମଣାତ୍ମକ ବାୟୋପ୍ସିକୁ ଏଡାଏ [18]। ସାମ୍ପ୍ରତିକ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ପ୍ରକୃତରେ ଦେଖାଯାଇଛି ଯେ ମାନବ ରକ୍ତରେ ଏକ ସମୃଦ୍ଧ ସୂଚନା ଉତ୍ସ ଅଛି ଯାହା ଭାଇରାଲ୍ ଏବଂ ଜୀବାଣୁ ରୋଗଜୀବାଣୁ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ, ଏବଂ ମାନବ ପ୍ଲାଜ୍ମାରେ ମିଳୁଥିବା ccfDNA ର ପ୍ରାୟ 1% ବିଦେଶୀ ଉତ୍ସ [19]। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନଗୁଡ଼ିକ ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ ଜୀବର ପରିଚଳିତ ମାଇକ୍ରୋବାଇଓମର ଜୈବ ବିବିଧତାକୁ ccfDNA ବିଶ୍ଳେଷଣ ବ୍ୟବହାର କରି ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇପାରିବ। ତଥାପି, ବର୍ତ୍ତମାନ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ, ଏହି ଧାରଣା କେବଳ ମଣିଷମାନଙ୍କଠାରେ ଏବଂ କିଛି ପରିମାଣରେ, ଅନ୍ୟ ମେରୁଦଣ୍ଡୀ ପ୍ରାଣୀଙ୍କଠାରେ ବ୍ୟବହୃତ ହେଉଥିଲା [20, 21]।
ବର୍ତ୍ତମାନର ପତ୍ରିକାରେ, ଆମେ Aulacomya atra ର ccfDNA ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିବା ପାଇଁ LB ସମ୍ଭାବନା ବ୍ୟବହାର କରୁ, ଏହା ଏକ ଦକ୍ଷିଣ ପ୍ରଜାତି ଯାହା ସାଧାରଣତଃ ସବଆଣ୍ଟାର୍କଟିକ୍ କେରଗୁଲେନ୍ ଦ୍ୱୀପପୁଞ୍ଜରେ ଦେଖାଯାଏ, ଏହା 35 ନିୟୁତ ବର୍ଷ ପୂର୍ବେ ଗଠିତ ଏକ ବଡ଼ ମାଳଭୂମି ଉପରେ ଥିବା ଦ୍ୱୀପପୁଞ୍ଜର ଏକ ଗୋଷ୍ଠୀ। ଜ୍ୱାଳାମୁଖୀ ଉଦ୍ଗିରଣ। ଏକ ଇନ୍ ଭିଟ୍ରୋ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ପ୍ରଣାଳୀ ବ୍ୟବହାର କରି, ଆମେ ପାଇଲୁ ଯେ ସମୁଦ୍ର ଜଳରେ ଥିବା DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ମସେଲ୍ ଦ୍ୱାରା ଶୀଘ୍ର ଗ୍ରହଣ କରାଯାଏ ଏବଂ ହେମୋଲିମ୍ଫ କମ୍ପାର୍ଟମେଣ୍ଟରେ ପ୍ରବେଶ କରେ। ସଟଗନ୍ ସିକୋଇନ୍ସିଂ ଦେଖାଇଛି ଯେ ମସେଲ୍ ହେମୋଲିମ୍ଫ ccfDNA ରେ ଏହାର ନିଜସ୍ୱ ଏବଂ ଅଣ-ସ୍ୱତ୍ତ୍ୱ ଉତ୍ପତ୍ତିର DNA ଖଣ୍ଡ ଅଛି, ଯେଉଁଥିରେ ସହଜୀବାଣୁ ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ଏବଂ ଥଣ୍ଡା ଜ୍ୱାଳାମୁଖୀ ସାମୁଦ୍ରିକ ଉପକୂଳୀୟ ଇକୋସିଷ୍ଟମର ସାଧାରଣ ବାୟୋମରୁ DNA ଖଣ୍ଡ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। ହେମୋଲିମ୍ଫ ccfDNA ରେ ବିଭିନ୍ନ ହୋଷ୍ଟ ରେଞ୍ଜ ସହିତ ଭାଇରସ୍ ରୁ ପ୍ରାପ୍ତ ଭାଇରାଲ୍ କ୍ରମ ମଧ୍ୟ ଅଛି। ଆମେ ହାଡ଼ ମାଛ, ସମୁଦ୍ର ଆନିମୋନ୍, ଶୈବାଳ ଏବଂ କୀଟପତଙ୍ଗ ଭଳି ବହୁକୋଷୀୟ ପ୍ରାଣୀରୁ DNA ଖଣ୍ଡ ମଧ୍ୟ ପାଇଲୁ। ଶେଷରେ, ଆମର ଅଧ୍ୟୟନ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ସାମୁଦ୍ରିକ ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ଏକ ସମୃଦ୍ଧ ଜିନୋମିକ୍ ସଂଗ୍ରହ ସୃଷ୍ଟି କରିବା ପାଇଁ LB ଧାରଣାକୁ ସାମୁଦ୍ରିକ ଅଭେଦକ ପ୍ରାଣୀମାନଙ୍କ ଉପରେ ସଫଳତାର ସହିତ ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଇପାରିବ।
ବୟସ୍କ (୫୫-୭୦ ମିମି ଲମ୍ବା) ମାଇଟିଲସ୍ ପ୍ଲାଟେନ୍ସିସ୍ (ଏମ୍. ପ୍ଲାଟେନ୍ସିସ୍) ଏବଂ ଆଉଲାକୋମ୍ୟା ଆଟ୍ରା (ଏ. ଆଟ୍ରା) ପୋର୍ଟ-ଓ-ଫ୍ରାନ୍ସର ଇଣ୍ଟରଟାଡାଲ୍ ପଥୁରିଆ କୂଳରୁ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା (୦୪୯°୨୧.୨୩୫ ଦକ୍ଷିଣ, ୦୭୦°୧୩.୪୯୦ ପୂର୍ବ।)। ଡିସେମ୍ବର ୨୦୧୮ରେ କେରଗୁଲେନ୍ ଦ୍ୱୀପପୁଞ୍ଜ। ଅନ୍ୟ ବୟସ୍କ ନୀଳ ମସେଲ୍ସ (ମାଇଟିଲସ୍ ସ୍ପପ୍) ଏକ ବାଣିଜ୍ୟିକ ଯୋଗାଣକାରୀ (PEI ମସେଲ୍ କିଙ୍ଗ୍ ଇନକର୍ପୋରେଟେଡ୍, ପ୍ରିନ୍ସ ଏଡୱାର୍ଡ ଆଇଲ୍ୟାଣ୍ଡ, କାନାଡା) ଠାରୁ ପ୍ରାପ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ୧୦-୨୦ ଲିଟର ୩୨‰ କୃତ୍ରିମ ବ୍ରିନ ଧାରଣ କରିଥିବା ଏକ ତାପମାତ୍ରା ନିୟନ୍ତ୍ରିତ (୪° ସେଲ୍ସିୟସ୍) ବାୟୁଗତ ଟାଙ୍କିରେ ରଖାଯାଇଥିଲା। (କୃତ୍ରିମ ସମୁଦ୍ର ଲୁଣ ରିଫ୍ କ୍ରିଷ୍ଟାଲ୍, ଇନଷ୍ଟାଣ୍ଟ ଓସନ୍, ଭର୍ଜିନିଆ, ଆମେରିକା)। ପ୍ରତ୍ୟେକ ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ, ବ୍ୟକ୍ତିଗତ କଙ୍କାଳର ଲମ୍ବ ଏବଂ ଓଜନ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା।
ଏହି କାର୍ଯ୍ୟକ୍ରମ ପାଇଁ ଏକ ମାଗଣା ଖୋଲା ପ୍ରବେଶ ପ୍ରୋଟୋକଲ ଅନଲାଇନରେ ଉପଲବ୍ଧ (https://doi.org/10.17504/protocols.io.81wgb6z9olpk/v1)। ସଂକ୍ଷେପରେ, ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇଥିବା ପରି ଅପହରଣକାରୀ ମାଂସପେଶୀରୁ LB ହେମୋଲିମ୍ଫ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା [22]। ହେମୋଲିମ୍ଫକୁ 3 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 1200×g ରେ ସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଗେସନ୍ ଦ୍ୱାରା ସ୍ପଷ୍ଟ କରାଯାଇଥିଲା, ସୁପରନାଟାଣ୍ଟକୁ ବ୍ୟବହାର ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଫ୍ରିଜ୍ କରାଯାଇଥିଲା (-20°C)। cfDNA ର ପୃଥକୀକରଣ ଏବଂ ବିଶୋଧନ ପାଇଁ, ନିର୍ମାତାଙ୍କ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଅନୁଯାୟୀ NucleoSnap cfDNA କିଟ୍ (Macherey-Nagel, Bethlehen, PA) ବ୍ୟବହାର କରି ନମୁନା (1.5-2.0 ml) ତରଳାଇ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ କରାଯାଇଥିଲା। ପରବର୍ତ୍ତୀ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ccfDNA -80°C ରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। କିଛି ପରୀକ୍ଷଣରେ, QIAamp DNA ତଦନ୍ତକାରୀ କିଟ୍ (QIAGEN, ଟୋରଣ୍ଟୋ, ଓଣ୍ଟାରିଓ, କାନାଡା) ବ୍ୟବହାର କରି ccfDNA କୁ ପୃଥକ ଏବଂ ବିଶୋଧନ କରାଯାଇଥିଲା। ଏକ ମାନକ PicoGreen ପରୀକ୍ଷା ବ୍ୟବହାର କରି ବିଶୋଧିତ DNA ପରିମାଣ କରାଯାଇଥିଲା। ପୃଥକ ccfDNA ର ଖଣ୍ଡ ବଣ୍ଟନକୁ ଏକ ଉଚ୍ଚ ସମ୍ବେଦନଶୀଳତା DNA କିଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରି Agilent 2100 ବାୟୋଆନାଲାଇଜର (Agilent Technologies Inc., Santa Clara, CA) ବ୍ୟବହାର କରି କୈଶିକ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଦ୍ୱାରା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ନିର୍ମାତାଙ୍କ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଅନୁଯାୟୀ ccfDNA ନମୁନାର 1 µl ବ୍ୟବହାର କରି ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା।
ହେମୋଲିମ୍ଫ ccfDNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର କ୍ରମ ପାଇଁ, Génome Québec (Montreal, Quebec, Canada) Illumina MiSeq PE75 କିଟ୍‌ର Illumina DNA Mix କିଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ସଟଗନ୍ ଲାଇବ୍ରେରୀ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିଥିଲେ। ଏକ ମାନକ ଆଡାପ୍ଟର (BioO) ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। NCBI ସିକ୍ୱେନ୍ସ ରିଡ୍ ଆର୍କାଇଭ୍ (SRR8924808 ଏବଂ SRR8924809) ରୁ କଞ୍ଚା ଡାଟା ଫାଇଲ୍ ଉପଲବ୍ଧ। FastQC [23] ବ୍ୟବହାର କରି ମୌଳିକ ପଠନ ଗୁଣବତ୍ତା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା। କ୍ଲିପିଂ ଆଡାପ୍ଟର ଏବଂ ଖରାପ ଗୁଣବତ୍ତା ପଠନ ପାଇଁ ଟ୍ରିମୋମାଟିକ୍ [24] ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଛି। ମେଳ ନ ହେବା ପାଇଁ ପେୟାରଡ୍ ଏଣ୍ଡ ସହିତ ସଟଗନ୍ ପଠନଗୁଡ଼ିକୁ FLASH କୁ 20 bp ର ସର୍ବନିମ୍ନ ଓଭରଲାପ୍ ସହିତ ଲମ୍ବା ଏକକ ପଠନରେ ମିଶ୍ରଣ କରାଯାଇଥିଲା [25]। ଏକ ବାଇଭାଲ୍ଭ NCBI ଟ୍ୟାକ୍ସୋନୋମି ଡାଟାବେସ୍ (e ମୂଲ୍ୟ < 1e−3 ଏବଂ 90% ହୋମୋଲୋଜି) ବ୍ୟବହାର କରି BLASTN ସହିତ ମିଶ୍ରିତ ପାଠଗୁଡ଼ିକୁ ଆନୋଟେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ DUST [26] ବ୍ୟବହାର କରି କମ୍-ଜଟିଳତା କ୍ରମଗୁଡ଼ିକର ମାସ୍କିଂ କରାଯାଇଥିଲା। ଏକ ବାଇଭାଲ୍ଭ NCBI ଟ୍ୟାକ୍ସୋନୋମି ଡାଟାବେସ୍ (e ମୂଲ୍ୟ < 1e−3 ଏବଂ 90% ହୋମୋଲୋଜି) ବ୍ୟବହାର କରି BLASTN ସହିତ ମିଶ୍ରିତ ପାଠଗୁଡ଼ିକୁ ଆନୋଟେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ DUST [26] ବ୍ୟବହାର କରି କମ୍-ଜଟିଳତା କ୍ରମଗୁଡ଼ିକର ମାସ୍କିଂ କରାଯାଇଥିଲା। Объединенные чтения были аннотированя с помощу BLASTN с использованием басы конных так такомоми двустворч чатх моллюсков NCBI (значение e <1e-3 и 90% ସଶୋଲୋଗии) выполнено с использованием DUST [26] | NCBI ବାଇଭାଲ୍ଭ ଟ୍ୟାକ୍ସୋନୋମି ଡାଟାବେସ୍ (e ମୂଲ୍ୟ < 1e-3 ଏବଂ 90% ହୋମୋଲୋଜି) ବ୍ୟବହାର କରି ପୁଲ୍ ହୋଇଥିବା ପାଠଗୁଡ଼ିକୁ BLASTN ସହିତ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ DUST [26] ବ୍ୟବହାର କରି କମ୍ ଜଟିଳତା କ୍ରମ ମାସ୍କିଂ କରାଯାଇଥିଲା।使用双壳类 NCBI 分类数据库（ e 值 <1e-3 和 90% 同源性）用 ବ୍ଲାଷ୍ଟନ UST DUST [26] 进行低复杂度序列的掩蔽。使用 双 c ncbi 分类 （（（ <1e-3 和 90% 同源） 使用 使用 使用 ଧୂଳି [26] 进行 复杂度 序列 的。。。。 使用 使用 掩蔽 掩蔽 掩蔽 掩蔽 掩蔽Объединенные чтения были аннотированя с помощью BLASTN с использованием так такомической басы чырных двустворч чатх моллюсков NCBI (значение e <1e-3 и 90% ସଜ୍ଲୋଭии) выполнено с использованием DUST [26] | NCBI ବାଇଭାଲ୍ଭ ଟ୍ୟାକ୍ସୋନୋମିକ୍ ଡାଟାବେସ୍ (e ମୂଲ୍ୟ <1e-3 ଏବଂ 90% ହୋମୋଲୋଜି) ବ୍ୟବହାର କରି ପୁଲ୍ ହୋଇଥିବା ପାଠଗୁଡ଼ିକୁ BLASTN ସହିତ ଆନୋଟେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ DUST [26] ବ୍ୟବହାର କରି କମ୍ ଜଟିଳତା କ୍ରମ ମାସ୍କିଂ କରାଯାଇଥିଲା।ପଠନଗୁଡ଼ିକୁ ଦୁଇଟି ଗୋଷ୍ଠୀରେ ବିଭକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା: ବାଇଭାଲ୍ଭ କ୍ରମ ସହିତ ଜଡିତ (ଏଠାରେ ସ୍ୱୟଂ-ପଠନ କୁହାଯାଏ) ଏବଂ ଅସମ୍ପର୍କିତ (ଅଣ-ସ୍ୱ-ପଠନ)। କଣ୍ଟିଗ୍ସ ସୃଷ୍ଟି କରିବା ପାଇଁ MEGAHIT ବ୍ୟବହାର କରି ଦୁଇଟି ଗୋଷ୍ଠୀକୁ ପୃଥକ ଭାବରେ ଏକତ୍ରିତ କରାଯାଇଥିଲା [27]। ଏହି ସମୟରେ, ଏଲିଏନ୍ ମାଇକ୍ରୋବାୟୋମ୍ ପଠନର ବର୍ଗୀକରଣ ବଣ୍ଟନକୁ Kraken2 [28] ବ୍ୟବହାର କରି ବର୍ଗୀକରଣ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ Galaxy [29, 30] ରେ ଏକ Krona ପାଇ ଚାର୍ଟ ଦ୍ୱାରା ଗ୍ରାଫିକ୍ ଭାବରେ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରାଯାଇଥିଲା। ଆମର ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ପରୀକ୍ଷଣରୁ ସର୍ବୋତ୍ତମ kmers kmers-59 ହେବା ପାଇଁ ସ୍ଥିର କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ ଏକ ଚୂଡ଼ାନ୍ତ ଆନୋଟେଶନ୍ ପାଇଁ BLASTN (bivalve NCBI ଡାଟାବେସ୍, e ମୂଲ୍ୟ < 1e−10 ଏବଂ 60% homology) ସହିତ ଆଲାଇନ୍ମେଣ୍ଟ୍ ଦ୍ୱାରା ସ୍ୱୟଂ କଣ୍ଟିଗ୍ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ ଏକ ଚୂଡ଼ାନ୍ତ ଆନୋଟେଶନ୍ ପାଇଁ BLASTN (bivalve NCBI ଡାଟାବେସ୍, e ମୂଲ୍ୟ < 1e−10 ଏବଂ 60% homology) ସହିତ ଆଲାଇନ୍ମେଣ୍ଟ୍ ଦ୍ୱାରା ସ୍ୱୟଂ କଣ୍ଟିଗ୍ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିଲା। ЗАТЕМ собственные бастиги были идентифицирован путем сопоставления с BLASTN ତା'ପରେ ଅନ୍ତିମ ଆନୋଟେସନ୍ ପାଇଁ BLASTN (NCBI ବାଇଭାଲ୍ଭ ଡାଟାବେସ୍, e ମୂଲ୍ୟ <1e-10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ସହିତ ମେଳ କରି ସ୍ୱୟଂ-ସଂଘଟନଗୁଡ଼ିକୁ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିଲା।AST ବ୍ଲାଷ୍ଟ （双壳贝类 NCBI 数据库， e 值 <1e-10 和 60% 同源性）对齐来识别自身重叠群以进行最终注释。AST ବ୍ଲାଷ୍ଟ （双壳贝类 NCBI 数据库， e 值 <1e-10 和 60% Затем были идентифицированя собственные мартиги для окончательной аннотации путем сопоставления с Бластн ତା'ପରେ BLASTN (NCBI ବାଇଭାଲ୍ଭ ଡାଟାବେସ୍, e ମୂଲ୍ୟ <1e-10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ସହିତ ମେଳ କରି ଚୂଡ଼ାନ୍ତ ବ୍ୟାଖ୍ୟା ପାଇଁ ସ୍ୱୟଂ-ସଂଘଟନଗୁଡ଼ିକୁ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିଲା। ସମାନ୍ତରାଳ ଭାବରେ, ଅଣ-ସ୍ୱୟଂ ଗୋଷ୍ଠୀ କଣ୍ଟିଗଗୁଡ଼ିକୁ BLASTN (nt NCBI ଡାଟାବେସ୍, e ମୂଲ୍ୟ < 1e−10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ସହିତ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରାଯାଇଥିଲା। ସମାନ୍ତରାଳ ଭାବରେ, ଅଣ-ସ୍ୱୟଂ ଗୋଷ୍ଠୀ କଣ୍ଟିଗଗୁଡ଼ିକୁ BLASTN (nt NCBI ଡାଟାବେସ୍, e ମୂଲ୍ୟ < 1e−10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ସହିତ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରାଯାଇଥିଲା। Параллельно чужеродные групповые кыртиги были аннотированя с помощуу ବ୍ଲାଷ୍ଟନ ସମାନ୍ତରାଳ ଭାବରେ, ବିଦେଶୀ ଗୋଷ୍ଠୀ କଣ୍ଟିଗଗୁଡ଼ିକୁ BLASTN (NT NCBI ଡାଟାବେସ୍, e ମୂଲ୍ୟ <1e-10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ସହିତ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରାଯାଇଥିଲା।AST ବ୍ଲାଷ୍ଟନ୍ NC NCBI 数据库， e 值 <1e-10 和 60% 同源性）注释非自身组重叠群。AST ବ୍ଲାଷ୍ଟନ୍ NC NCBI 数据库， e 值 <1e-10 和 60% 同源性）注释非自身组重叠群。 Параллельно ксартиги, не относящиеся к собственной группе, были аннотирован с помощуу ବ୍ଲାଷ୍ଟନ ସମାନ୍ତରାଳ ଭାବରେ, ଅଣ-ସ୍ୱୟଂ ଗୋଷ୍ଠୀ କଣ୍ଟିଗଗୁଡ଼ିକୁ BLASTN (nt NCBI ଡାଟାବେସ୍, e ମୂଲ୍ୟ <1e-10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ସହିତ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରାଯାଇଥିଲା। nr ଏବଂ RefSeq ପ୍ରୋଟିନ୍ NCBI ଡାଟାବେସ୍ (e ମୂଲ୍ୟ < 1e−10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ବ୍ୟବହାର କରି ନନସେଲ୍ଫ କଣ୍ଟିଗ୍ ଉପରେ BLASTX ମଧ୍ୟ ପରିଚାଳିତ ହୋଇଥିଲା। nr ଏବଂ RefSeq ପ୍ରୋଟିନ୍ NCBI ଡାଟାବେସ୍ (e ମୂଲ୍ୟ < 1e−10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ବ୍ୟବହାର କରି ନନସେଲ୍ଫ କଣ୍ଟିଗ୍ ଉପରେ BLASTX ମଧ୍ୟ ପରିଚାଳିତ ହୋଇଥିଲା। ବ୍ଲାଷ୍ଟକ୍ସ ଟାକже был проведен на امамостоятельных кстигах с использованием базанных белка nr һәм RefSeq NCBI (значение e <1e-10 и идология 60%)। nr ଏବଂ RefSeq NCBI ପ୍ରୋଟିନ୍ ଡାଟାବେସ୍ (e ମୂଲ୍ୟ < 1e-10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ବ୍ୟବହାର କରି ଅଣ-ସ୍ୱୟଂ କଣ୍ଟିଗ୍ ଉପରେ BLASTX ମଧ୍ୟ କରାଯାଇଥିଲା।还使用 nr 和 RefSeq 蛋白 NCBI 数据库对非自身重叠群进行了 BLASTX （e 值 <1e-10 和 60% 同源性）。还使用 nr 和 RefSeq 蛋白 NCBI 数据库对非自身重叠群进行了 BLASTX （e 值 <1e-10 和 60% 同源性）。 ବ୍ଲାଷ୍ଟକ୍ସ также виполняли на амамостоятельных кститигах с использованием базанных белка nr һәм RefSeq NCBI (значение e <1e-10 и идология 60%)। nr ଏବଂ RefSeq NCBI ପ୍ରୋଟିନ୍ ଡାଟାବେସ୍ (e ମୂଲ୍ୟ <1e-10 ଏବଂ 60% ହୋମୋଲୋଜି) ବ୍ୟବହାର କରି ଅଣ-ସ୍ୱୟଂ କଣ୍ଟିଗ୍ ଉପରେ BLASTX ମଧ୍ୟ କରାଯାଇଥିଲା।ଅଣ-ସ୍ୱୟଂ-କଣ୍ଟିଗ୍‌ଗୁଡ଼ିକର BLASTN ଏବଂ BLASTX ପୁଲ୍ ଶେଷ କଣ୍ଟିଗ୍‌ଗୁଡ଼ିକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରନ୍ତି (ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଫାଇଲ୍ ଦେଖନ୍ତୁ)।
PCR ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ପ୍ରାଇମରଗୁଡ଼ିକ ଟେବୁଲ S1 ରେ ତାଲିକାଭୁକ୍ତ। ccfDNA ଟାର୍ଗେଟ ଜିନ୍ କୁ ବୃଦ୍ଧି କରିବା ପାଇଁ Taq DNA ପଲିମରେଜ୍ (ବାୟୋ ବେସିକ୍ କାନାଡା, ମାର୍କହାମ୍, ON) ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ନିମ୍ନଲିଖିତ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ଅବସ୍ଥା ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା: 3 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 95°C ରେ ଡିନାଚୁରେସନ୍, 1 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 95°C, 1 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 1 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଆନିଲିଂ ତାପମାତ୍ରା ସେଟ୍, 72°C ରେ 1 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଲମ୍ବା, 35 ଚକ୍ର, ଏବଂ ଶେଷରେ 10 ମିନିଟ୍ ମଧ୍ୟରେ 72°C। । PCR ଉତ୍ପାଦଗୁଡ଼ିକୁ 95 V ରେ SYBRTM ସେଫ୍ DNA ଜେଲ୍ ସ୍ଟେନ୍ (ଇନଭିଟ୍ରୋଜେନ୍, ବର୍ଲିଙ୍ଗଟନ୍, ON, କାନାଡା) ଧାରଣ କରିଥିବା ଆଗାରୋଜ୍ ଜେଲ୍ (1.5%) ରେ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେସିସ୍ ଦ୍ୱାରା ପୃଥକ କରାଯାଇଥିଲା।
ମସେଲ୍ସ (Mytilus spp.) କୁ 4°C ତାପମାତ୍ରାରେ 24 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 500 ml ଅକ୍ସିଜେନଯୁକ୍ତ ସମୁଦ୍ର ଜଳ (32 PSU) ରେ ଅଭ୍ୟସ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା। ମାନବ ଗାଲେକ୍ଟିନ୍-7 cDNA କ୍ରମ (NCBI ଆକ୍ସେସନ୍ ନମ୍ବର L07769) ଏନକୋଡିଂ କରୁଥିବା ଏକ ଇନସର୍ଟ ଥିବା ପ୍ଲାଜମିଡ୍ DNA କୁ 190 μg/μl ର ଶେଷ ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ ଭାଏଲରେ ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା। DNA ଯୋଗ ନକରି ସମାନ ପରିସ୍ଥିତିରେ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ ମସେଲ୍ କୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରାଯାଇଥିଲା। ତୃତୀୟ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଟାଙ୍କିରେ ମସେଲ୍ ବିନା DNA ଥିଲା। ସମୁଦ୍ର ଜଳରେ DNA ର ଗୁଣବତ୍ତା ନିରୀକ୍ଷଣ କରିବା ପାଇଁ, ସୂଚିତ ସମୟରେ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଟାଙ୍କିରୁ ସମୁଦ୍ର ଜଳ ନମୁନା (20 μl; ତିନୋଟି ପୁନରାବୃତ୍ତି) ନିଆଯାଇଥିଲା। ପ୍ଲାଜମିଡ୍ DNA ଟ୍ରେସେବିଲିଟି ପାଇଁ, ସୂଚିତ ସମୟରେ LB ମସେଲ୍ ଅମଳ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ qPCR ଏବଂ ddPCR ଦ୍ୱାରା ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ସମୁଦ୍ର ଜଳର ଉଚ୍ଚ ଲୁଣ ପରିମାଣ ଯୋଗୁଁ, ସମସ୍ତ PCR ପରୀକ୍ଷା ପୂର୍ବରୁ PCR ଗୁଣବତ୍ତା ପାଣିରେ (1:10) ଆଲିକୋଟ୍ କୁ ପୃଥକ କରାଯାଇଥିଲା।
ଡିଜିଟାଲ୍ ଡ୍ରପ୍ଲେଟ୍ PCR (ddPCR) BioRad QX200 ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ (ମିସିସାଗା, ଅଣ୍ଟାରୟୋ, କାନାଡା) ବ୍ୟବହାର କରି କରାଯାଇଥିଲା। ସର୍ବୋତ୍ତମ ତାପମାତ୍ରା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ତାପମାତ୍ରା ପ୍ରୋଫାଇଲ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ (ଟେବୁଲ S1)। QX200 ଡ୍ରପ୍ ଜେନେରେଟର୍ (BioRad) ବ୍ୟବହାର କରି ଡ୍ରପ୍ ସୃଷ୍ଟି କରାଯାଇଥିଲା। ddPCR ନିମ୍ନଲିଖିତ ଭାବରେ କରାଯାଇଥିଲା: 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 95°C, 30 ସେକେଣ୍ଡ ପାଇଁ 95°C ର 50 ଚକ୍ର ଏବଂ 1 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଏକ ପ୍ରଦତ୍ତ ଆନିଲିଂ ତାପମାତ୍ରା ଏବଂ 30 ସେକେଣ୍ଡ ପାଇଁ 72°C, 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 4°C ଏବଂ 5 ମିନିଟ୍ ମଧ୍ୟରେ 90°C। QX200 ଡ୍ରପ୍ ରିଡର୍ (BioRad) ବ୍ୟବହାର କରି ଡ୍ରପ୍ ସଂଖ୍ୟା ଏବଂ ସକାରାତ୍ମକ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା (କପି ସଂଖ୍ୟା/µl) ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। 10,000 ରୁ କମ୍ ଡ୍ରପ୍ଟ ଥିବା ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ ପ୍ରତ୍ୟାଖ୍ୟାନ କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରତ୍ୟେକ ଥର ddPCR ଚଲାଯିବା ସମୟରେ ପାଟର୍ନ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରାଯାଇ ନଥିଲା।
qPCR ରୋଟର-ଜିନ୍® 3000 (କର୍ବେଟ୍ ରିସର୍ଚ୍ଚ, ସିଡନୀ, ଅଷ୍ଟ୍ରେଲିଆ) ଏବଂ LGALS7 ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପ୍ରାଇମର ବ୍ୟବହାର କରି କରାଯାଇଥିଲା। ସମସ୍ତ ପରିମାଣାତ୍ମକ PCR ଗୁଡ଼ିକ QuantiFast SYBR ଗ୍ରୀନ୍ PCR କିଟ୍ (QIAGEN) ବ୍ୟବହାର କରି 20 μl ରେ କରାଯାଇଥିଲା। qPCR 95°C ରେ 15 ମିନିଟ୍ ଇନକ୍ୟୁବେସନ୍ ସହିତ ଆରମ୍ଭ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ ତା'ପରେ 95°C ରେ 10 ସେକେଣ୍ଡ ପାଇଁ 40 ଚକ୍ର ଏବଂ 60 ସେକେଣ୍ଡ ପାଇଁ 60 ସେକେଣ୍ଡ ପାଇଁ ଗୋଟିଏ ଡାଟା ସଂଗ୍ରହ ସହିତ। 5 ସେକେଣ୍ଡ ପାଇଁ 95°C, 60 ସେକେଣ୍ଡ ପାଇଁ 65°C ଏବଂ qPCR ଶେଷରେ 97°C ରେ କ୍ରମିକ ମାପ ବ୍ୟବହାର କରି ତରଳାଇବା କର୍ଭ ସୃଷ୍ଟି କରାଯାଇଥିଲା। ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ନମୁନା ବ୍ୟତୀତ ପ୍ରତ୍ୟେକ qPCR ତ୍ରିପ୍ରତିଲିପିରେ କରାଯାଇଥିଲା।
ଯେହେତୁ ମସେଲ୍ ସେମାନଙ୍କର ଉଚ୍ଚ ଫିଲ୍ଟେରେସନ୍ ହାର ପାଇଁ ଜଣାଶୁଣା, ଆମେ ପ୍ରଥମେ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିଥିଲୁ ଯେ ସେମାନେ ସମୁଦ୍ର ପାଣିରେ ଥିବା DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ଫିଲ୍ଟର ଏବଂ ଧରି ରଖିପାରିବେ କି ନାହିଁ। ଏହି ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ସେମାନଙ୍କର ଅର୍ଦ୍ଧ-ଖୋଲା ଲିମ୍ଫାଟିକ୍ ସିଷ୍ଟମରେ ଜମା ହୁଏ କି ନାହିଁ ତାହା ମଧ୍ୟ ଆମେ ଜାଣିବାକୁ ଆଗ୍ରହୀ ଥିଲୁ। ନୀଳ ମସେଲ୍ ଟ୍ୟାଙ୍କରେ ଯୋଡାଯାଇଥିବା ଦ୍ରବଣୀୟ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଭାଗ୍ୟକୁ ଟ୍ରାକିଂ କରି ଆମେ ଏହି ସମସ୍ୟାର ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ସମାଧାନ କରିଥିଲୁ। DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଟ୍ରାକିଂକୁ ସହଜ କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ମାନବ ଗାଲେକ୍ଟିନ୍-7 ଜିନ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା ବିଦେଶୀ (ସ୍ୱୟଂ ନୁହେଁ) ପ୍ଲାଜମିଡ୍ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ। ddPCR ସମୁଦ୍ର ପାଣି ଏବଂ ମସେଲ୍ ରେ ପ୍ଲାଜମିଡ୍ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ଚିହ୍ନଟ କରେ। ଆମର ଫଳାଫଳ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ଯଦି ମସେଲ୍ ଅନୁପସ୍ଥିତିରେ ସମୁଦ୍ର ପାଣିରେ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ପରିମାଣ ସମୟ ସହିତ (7 ଦିନ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ) ତୁଳନାତ୍ମକ ଭାବରେ ସ୍ଥିର ରହିଥାଏ, ତେବେ ମସେଲ୍ ଉପସ୍ଥିତିରେ ଏହି ସ୍ତର ପ୍ରାୟ 8 ଘଣ୍ଟା ମଧ୍ୟରେ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ଅଦୃଶ୍ୟ ହୋଇଯାଏ (ଚିତ୍ର 1a,b)। ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ଭାଲଭୁଲାର୍ ତରଳ ଏବଂ ହେମୋଲିମ୍ଫରେ 15 ମିନିଟ୍ ମଧ୍ୟରେ ବାହ୍ୟ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ସହଜରେ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 1c)। ଏହି ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ଏକ୍ସପୋଜର ହେବା ପରେ 4 ଘଣ୍ଟା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇପାରିବ। ଡିଏନଏ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ସମ୍ବନ୍ଧରେ ଏହି ଫିଲ୍ଟରିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଜୀବାଣୁ ଏବଂ ଶୈବାଳର ଫିଲ୍ଟରିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ସହିତ ତୁଳନୀୟ [31]। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ମସେଲ୍ ସେମାନଙ୍କ ତରଳ ଅଂଶରେ ବିଦେଶୀ ଡିଏନଏକୁ ଫିଲ୍ଟର ଏବଂ ସଂଗ୍ରହ କରିପାରିବେ।
ddPCR ଦ୍ୱାରା ମସେଲ୍‌ର ଉପସ୍ଥିତି (A) କିମ୍ବା ଅନୁପସ୍ଥିତି (B)ରେ ସମୁଦ୍ର ଜଳରେ ପ୍ଲାଜମିଡ୍ DNA ର ଆପେକ୍ଷିକ ସାନ୍ଦ୍ରତା। A ରେ, ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକୁ ଶତକଡ଼ା ଭାବରେ ପ୍ରକାଶ କରାଯାଇଛି, ବାକ୍ସଗୁଡ଼ିକର ସୀମା 75ତମ ଏବଂ 25ତମ ଶତକଡ଼ାକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରୁଛି। ଫିଟ୍ ହୋଇଥିବା ଲଗାରିଦମିକ୍ ବକ୍ରକୁ ଲାଲ ରଙ୍ଗରେ ଦର୍ଶାଯାଇଛି, ଏବଂ ଧୂସର ରଙ୍ଗରେ ଛାଇ ହୋଇଥିବା କ୍ଷେତ୍ର 95% ଆତ୍ମବିଶ୍ୱାସ ବ୍ୟବଧାନକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରୁଛି। B ରେ, ଲାଲ ରେଖା ମଧ୍ୟମାକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରୁଛି ଏବଂ ନୀଳ ରେଖା ସାନ୍ଦ୍ରତା ପାଇଁ 95% ଆତ୍ମବିଶ୍ୱାସ ବ୍ୟବଧାନକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରୁଛି। C ପ୍ଲାଜମିଡ୍ DNA ଯୋଗ କରିବା ପରେ ବିଭିନ୍ନ ସମୟରେ ମସେଲ୍‌ର ହେମୋଲିମ୍ଫ ଏବଂ ଭଲଭୁଲାର୍ ତରଳ ପଦାର୍ଥରେ ପ୍ଲାଜମିଡ୍ DNA ର ସଂଗ୍ରହ। ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ କପି ଚିହ୍ନଟ/mL (±SE) ଭାବରେ ଉପସ୍ଥାପିତ କରାଯାଇଛି।
ପରବର୍ତ୍ତୀ ସମୟରେ, ଆମେ କେରଗୁଲେନ୍ ଦ୍ୱୀପପୁଞ୍ଜର ଏକ ଦୂରବର୍ତ୍ତୀ ଦ୍ୱୀପପୁଞ୍ଜର ମସେଲ୍ ଶଯ୍ୟାରୁ ସଂଗୃହୀତ ମସେଲ୍‌ରେ ccfDNA ର ଉତ୍ପତ୍ତି ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିଥିଲୁ, ଯାହା ସୀମିତ ମାନବଜାତୀୟ ପ୍ରଭାବ ସହିତ ଏକ ଦୂରବର୍ତ୍ତୀ ଦ୍ୱୀପପୁଞ୍ଜ ଥିଲା। ଏହି ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟରେ, ମସେଲ୍‌ ହେମୋଲିମ୍ଫରୁ cccDNA କୁ ପୃଥକ ଏବଂ ବିଶୁଦ୍ଧ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା ସାଧାରଣତଃ ମାନବ cccDNA କୁ ବିଶୁଦ୍ଧ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ପଦ୍ଧତି ଦ୍ୱାରା [32, 33]। ଆମେ ପାଇଲୁ ଯେ ମସେଲ୍‌ରେ ହାରାହାରି ହେମୋଲିମ୍ଫ ccfDNA ସାନ୍ଦ୍ରତା ପ୍ରତି ml ହେମୋଲିମ୍ଫ ରେଞ୍ଜରେ କମ୍ ମାଇକ୍ରୋଗ୍ରାମ୍ (ସାରଣୀ S2, ପରିପୂରକ ସୂଚନା ଦେଖନ୍ତୁ)। ଏହି ସାନ୍ଦ୍ରତାର ପରିସର ସୁସ୍ଥ ଲୋକଙ୍କ ତୁଳନାରେ ବହୁତ ବଡ଼ (ପ୍ରତି ମିଲିଲିଟରରେ କମ୍ ନାନୋଗ୍ରାମ୍), କିନ୍ତୁ ବିରଳ କ୍ଷେତ୍ରରେ, କର୍କଟ ରୋଗୀଙ୍କ କ୍ଷେତ୍ରରେ, ccfDNA ର ସ୍ତର ପ୍ରତି ମିଲିଲିଟରରେ ଅନେକ ମାଇକ୍ରୋଗ୍ରାମ୍ [34, 35] ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ପହଞ୍ଚିପାରେ। ହେମୋଲିମ୍ଫ ccfDNA ର ଆକାର ବଣ୍ଟନର ଏକ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଦେଖାଇଲା ଯେ ଏହି ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ଆକାରରେ ବହୁତ ଭିନ୍ନ, 1000 bp ରୁ 1000 bp ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ। 5000 bp ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ (ଚିତ୍ର 2)। ସିଲିକା-ଆଧାରିତ QIAamp ତଦନ୍ତକାରୀ କିଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ସମାନ ଫଳାଫଳ ପ୍ରାପ୍ତ ହୋଇଥିଲା, ଏହା ଏକ ପଦ୍ଧତି ଯାହା ସାଧାରଣତଃ ଫୋରେନସିକ୍ ବିଜ୍ଞାନରେ ccfDNA [36] ସମେତ କମ୍ ସାନ୍ଦ୍ରତା DNA ନମୁନାରୁ ଜିନୋମିକ୍ DNAକୁ ଦ୍ରୁତ ଭାବରେ ପୃଥକ ଏବଂ ବିଶୁଦ୍ଧ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ।
ମସେଲ୍ ହେମୋଲିମ୍ଫର ପ୍ରତିନିଧି ccfDNA ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫୋରେଗ୍ରାମ। NucleoSnap ପ୍ଲାଜ୍ମା କିଟ୍ (ଉପର) ଏବଂ QIAamp DNA ତଦନ୍ତକାରୀ କିଟ୍ ସହିତ ନିଷ୍କାସିତ। B ଭାୟୋଲିନ୍ ପ୍ଲଟ୍ ମସେଲ୍‌ରେ ହେମୋଲିମ୍ଫ ccfDNA ସାନ୍ଦ୍ରତା (±SE) ବଣ୍ଟନ ଦର୍ଶାଉଛି। କଳା ଏବଂ ଲାଲ ରେଖାଗୁଡ଼ିକ ଯଥାକ୍ରମେ ମଧ୍ୟମା ଏବଂ ପ୍ରଥମ ଏବଂ ତୃତୀୟ କ୍ୱାର୍ଟାଇଲ୍‌କୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରନ୍ତି।
ମଣିଷ ଏବଂ ପ୍ରାଇମେଟ୍‌ମାନଙ୍କରେ ପ୍ରାୟ 1% ccfDNA ର ଏକ ବିଦେଶୀ ଉତ୍ସ ଅଛି [21, 37]। ବାଇଭାଲ୍ଭଙ୍କ ଅର୍ଦ୍ଧ-ଖୋଲା ସଂଚାଳନ ପ୍ରଣାଳୀ, ଅଣୁଜୀବ-ସମୃଦ୍ଧ ସମୁଦ୍ର ଜଳ ଏବଂ ମସେଲ୍ ccfDNA ର ଆକାର ବଣ୍ଟନକୁ ଦୃଷ୍ଟିରେ ରଖି, ଆମେ ଅନୁମାନ କରିଥିଲୁ ଯେ ମସେଲ୍ ହେମୋଲିମ୍ଫ ccfDNA ରେ ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ DNA ର ଏକ ସମୃଦ୍ଧ ଏବଂ ବିବିଧ ପୁଲ ଥାଇପାରେ। ଏହି ପରିକଳ୍ପନା ପରୀକ୍ଷା କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ କେରଗୁଲେନ୍ ଦ୍ୱୀପପୁଞ୍ଜରୁ ସଂଗୃହୀତ Aulacomya atra ନମୁନାରୁ ହେମୋଲିମ୍ଫ ccfDNA କ୍ରମବଦ୍ଧ କରିଥିଲୁ, ଯାହା 10 ନିୟୁତରୁ ଅଧିକ ପାଠ୍ୟ ପ୍ରଦାନ କରିଥିଲା, ଯାହା ମଧ୍ୟରୁ 97.6% ଗୁଣବତ୍ତା ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ପାସ୍ କରିଥିଲା। ତା'ପରେ BLASTN ଏବଂ NCBI ବାଇଭାଲ୍ଭ ଡାଟାବେସ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ପଠନଗୁଡ଼ିକୁ ସ୍ୱୟଂ ଏବଂ ଅଣ-ସ୍ୱ ଉତ୍ସ ଅନୁସାରେ ବର୍ଗୀକୃତ କରାଯାଇଥିଲା (ଚିତ୍ର S1, ପରିପୂରକ ସୂଚନା)।
ମଣିଷମାନଙ୍କଠାରେ, ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟର ଏବଂ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଡିଏନଏ ଉଭୟ ରକ୍ତପ୍ରବାହରେ ମୁକ୍ତ ହୋଇପାରେ [38]। ତଥାପି, ବର୍ତ୍ତମାନର ଅଧ୍ୟୟନରେ, A. atra ଜିନୋମକୁ କ୍ରମିକ କିମ୍ବା ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇ ନଥିବାରୁ ମସେଲ୍‌ମାନଙ୍କର ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟର ଜିନୋମିକ୍ DNA ବିଷୟରେ ବିସ୍ତୃତ ଭାବରେ ବର୍ଣ୍ଣନା କରିବା ସମ୍ଭବ ନଥିଲା। ତଥାପି, ଆମେ ବାଇଭାଲ୍ଭ ଲାଇବ୍ରେରୀ (ଚିତ୍ର S2, ପରିପୂରକ ସୂଚନା) ବ୍ୟବହାର କରି ଆମର ନିଜସ୍ୱ ଉତ୍ପତ୍ତିର ଅନେକ ccfDNA ଖଣ୍ଡ ଚିହ୍ନଟ କରିପାରିଲୁ। ଆମେ ସେହି A. atra ଜିନଗୁଡ଼ିକର ନିର୍ଦ୍ଦେଶିତ PCR ପ୍ରବର୍ଦ୍ଧନ ଦ୍ୱାରା ଆମର ନିଜସ୍ୱ ଉତ୍ପତ୍ତିର DNA ଖଣ୍ଡର ଉପସ୍ଥିତି ମଧ୍ୟ ନିଶ୍ଚିତ କରିଥିଲୁ ଯାହା କ୍ରମିକ କରାଯାଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 3)। ସେହିପରି, A. atraର ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଜିନୋମ୍ ସାର୍ବଜନୀନ ଡାଟାବେସରେ ଉପଲବ୍ଧ ଥିବାରୁ, A. atraର ହେମୋଲିମ୍ଫରେ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ccfDNA ଖଣ୍ଡର ଉପସ୍ଥିତି ପାଇଁ ପ୍ରମାଣ ମିଳିପାରିବ। PCR ପ୍ରବର୍ଦ୍ଧନ ଦ୍ୱାରା ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ DNA ଖଣ୍ଡର ଉପସ୍ଥିତି ନିଶ୍ଚିତ କରାଯାଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 3)।
PCR ଦ୍ୱାରା ବର୍ଦ୍ଧିତ A. atra (ଲାଲ ବିନ୍ଦୁ - ଷ୍ଟକ୍ ନମ୍ବର: SRX5705969) ଏବଂ M. platensis (ନୀଳ ବିନ୍ଦୁ - ଷ୍ଟକ୍ ନମ୍ବର: SRX5705968) ର ହେମୋଲିମ୍ଫରେ ବିଭିନ୍ନ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆଲ୍ ଜିନ୍ ଉପସ୍ଥିତ ଥିଲେ। Breton et al., 2011 B ରୁ ଗ୍ରହଣ କରାଯାଇଥିବା ଚିତ୍ର A. atra ରୁ ହେମୋଲିମ୍ଫ ସୁପରନାଟାଣ୍ଟର ବର୍ଦ୍ଧନ FTA କାଗଜରେ ସଂରକ୍ଷିତ। PCR ମିଶ୍ରଣ ଧାରଣ କରିଥିବା PCR ଟ୍ୟୁବରେ ସିଧାସଳଖ ଯୋଡିବା ପାଇଁ 3 mm ପଞ୍ଚ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ।
ସମୁଦ୍ର ଜଳରେ ପ୍ରଚୁର ପରିମାଣରେ ମାଇକ୍ରୋବାୟମ୍ ବିଷୟବସ୍ତୁ ଥିବାରୁ, ଆମେ ପ୍ରଥମେ ହେମୋଲିମ୍ଫରେ ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ଡିଏନଏ କ୍ରମର ଚରିତ୍ରୀକରଣ ଉପରେ ଧ୍ୟାନ ଦେଇଥିଲୁ। ଏହା କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ଦୁଇଟି ଭିନ୍ନ ରଣନୀତି ବ୍ୟବହାର କରୁଛୁ। ପ୍ରଥମ ରଣନୀତିରେ Kraken2 ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା, ଏକ ଆଲଗୋରିଦମ୍-ଆଧାରିତ କ୍ରମ ବର୍ଗୀକରଣ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ରମ ଯାହା BLAST ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ଉପକରଣ ସହିତ ତୁଳନୀୟ ସଠିକତା ସହିତ ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ କ୍ରମଗୁଡ଼ିକୁ ଚିହ୍ନଟ କରିପାରିବ [28]। 6719 ରୁ ଅଧିକ ପାଠ୍ୟ ଜୀବାଣୁ ଉତ୍ପତ୍ତିର ବୋଲି ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା, ଯେତେବେଳେ 124 ଏବଂ 64 ଯଥାକ୍ରମେ ଆର୍କିଆ ଏବଂ ଭାଇରସରୁ ଥିଲା (ଚିତ୍ର 4)। ସବୁଠାରୁ ପ୍ରଚୁର ପରିମାଣରେ ଜୀବାଣୁ ଡିଏନଏ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ଥିଲା Firmicutes (46%), Proteobacteria (27%), ଏବଂ Bacteroidetes (17%) (ଚିତ୍ର 4a)। ଏହି ବଣ୍ଟନ ସାମୁଦ୍ରିକ ନୀଳ ମସେଲ୍ ମାଇକ୍ରୋବାୟୋମ୍ [39, 40] ର ପୂର୍ବ ଅଧ୍ୟୟନ ସହିତ ସୁସଙ୍ଗତ। ଗାମାପ୍ରୋଟୋବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ ପ୍ରୋଟିଓବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ (44%) ର ମୁଖ୍ୟ ଶ୍ରେଣୀ ଥିଲା, ଯେଉଁଥିରେ ଅନେକ Vibrionales (ଚିତ୍ର 4b) ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। ddPCR ପଦ୍ଧତି A. atra hemolymph (ଚିତ୍ର 4c) [41] ର ccfDNA ରେ Vibrio DNA ଖଣ୍ଡର ଉପସ୍ଥିତି ନିଶ୍ଚିତ କରିଥିଲା। ccfDNA ର ଜୀବାଣୁ ଉତ୍ପତ୍ତି ବିଷୟରେ ଅଧିକ ସୂଚନା ପାଇବା ପାଇଁ, ଏକ ଅତିରିକ୍ତ ପଦ୍ଧତି ଗ୍ରହଣ କରାଯାଇଥିଲା (ଚିତ୍ର S2, ପରିପୂରକ ସୂଚନା)। ଏହି କ୍ଷେତ୍ରରେ, ଓଭରଲାପ୍ ହୋଇଥିବା ପାଠଗୁଡ଼ିକୁ ପେୟାରଡ୍-ଏଣ୍ଡ ପାଠ ଭାବରେ ଏକତ୍ରିତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ BLASTN ଏବଂ 1e−3 ର e ମୂଲ୍ୟ ଏବଂ > 90% ହୋମୋଲୋଜି ସହିତ ଏକ କଟଅଫ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ସ୍ୱୟଂ (ଦ୍ୱିଭାଲଭ) କିମ୍ବା ଅଣସ୍ୱ ଉତ୍ପତ୍ତି ଭାବରେ ବର୍ଗୀକୃତ କରାଯାଇଥିଲା। ଏହି କ୍ଷେତ୍ରରେ, ଓଭରଲାପ୍ ହୋଇଥିବା ପାଠଗୁଡ଼ିକୁ ପେୟାରଡ୍-ଏଣ୍ଡ ପାଠ ଭାବରେ ଏକତ୍ରିତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ BLASTN ଏବଂ 1e−3 ର e ମୂଲ୍ୟ ଏବଂ > 90% ହୋମୋଲୋଜି ସହିତ ଏକ କଟଅଫ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ସ୍ୱୟଂ (ଦ୍ୱିଭାଲଭ) କିମ୍ବା ଅଣସ୍ୱ ଉତ୍ପତ୍ତି ଭାବରେ ବର୍ଗୀକୃତ କରାଯାଇଥିଲା। В этом случае перекрывающиеся чтения были собраня как чтения с парными концами и были миссифицирован как собственные (двустворч чее моллюски) или чужие по происхождению с сспользове с гомогогией> 90% ଏହି କ୍ଷେତ୍ରରେ, ଓଭରଲାପିଂ ପଠନଗୁଡ଼ିକୁ ପେୟାର-ଏଣ୍ଡେଡ୍ ପଠନ ଭାବରେ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ BLASTN ଏବଂ e ମୂଲ୍ୟ 1e-3 ଏବଂ କଟଅଫ୍ > 90% ହୋମୋଲୋଜି ସହିତ ବ୍ୟବହାର କରି ଦେଶୀୟ (ବିଭାଲଭ) କିମ୍ବା ଅଣ-ମୌଳିକ ଭାବରେ ବର୍ଗୀକୃତ କରାଯାଇଥିଲା।在这种情况下，重叠的读数组装为配对末端读数，并使用 ବ୍ଲାଷ୍ଟ 和 1e-3 的 e 值和> 90% 同源性的截止值分类为自身（双壳类）或非自身来源。ବ୍ଲାଷ୍ଟନ 和 1e-3 的 的 90> 90% 同源性 种 90 90 90 自身。。。。。。。。。 自身。。。。。。。。。 90 使用 90 使用 使用 使用 90 В этом случае перекрывающиеся чтения были собраня как чтения с парными концами и асисифицирован как собственные (двустворч чате моллюски) или нес чробобственные по происхождению с испольчовы киologogии> 90% ଏହି କ୍ଷେତ୍ରରେ, ଓଭରଲାପିଂ ପଠନଗୁଡ଼ିକୁ ଯୋଡା-ଶେଷ ପଠନ ଭାବରେ ସଂଗ୍ରହ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ e BLASTN ଏବଂ 1e-3 ମୂଲ୍ୟ ଏବଂ ଏକ ହୋମୋଲୋଜି ସୀମା >90% ବ୍ୟବହାର କରି ନିଜସ୍ୱ (ଦ୍ୱିଭାଲଭ) କିମ୍ବା ଅଣ-ମୌଳିକ ଭାବରେ ବର୍ଗୀକୃତ କରାଯାଇଥିଲା।ଯେହେତୁ A. atra ଜିନୋମ ଏପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ କ୍ରମବଦ୍ଧ ହୋଇନାହିଁ, ଆମେ MEGAHIT Next Generation Sequencing (NGS) ଆସେମ୍ବଲରର de novo ଆସେମ୍ବଲି ରଣନୀତି ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ। ମୋଟ 147,188 କଣ୍ଟିଗକୁ ଉତ୍ପତ୍ତିର ନିର୍ଭରଶୀଳ (bivalves) ଭାବରେ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଛି। ଏହି କଣ୍ଟିଗଗୁଡ଼ିକୁ BLASTN ଏବଂ BLASTX ବ୍ୟବହାର କରି 1e-10 ର e-ମୂଲ୍ୟ ସହିତ ବିସ୍ଫୋରଣ କରାଯାଇଥିଲା। ଏହି ରଣନୀତି ଆମକୁ A. atra ccfDNA ରେ ଉପସ୍ଥିତ 482 ଅଣ-bivalve ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ଚିହ୍ନଟ କରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦେଇଥିଲା। ଏହି DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଅଧାରୁ ଅଧିକ (57%) ଜୀବାଣୁରୁ ପ୍ରାପ୍ତ ହୋଇଥିଲା, ମୁଖ୍ୟତଃ ଗିଲ୍ ସିମ୍ବିୟଣ୍ଟରୁ, ସଲଫୋଟ୍ରୋଫିକ୍ ସିମ୍ବିୟଣ୍ଟ ସମେତ, ଏବଂ ଗିଲ୍ ସିମ୍ବିୟଣ୍ଟ ସୋଲେମ୍ୟା ଭେଲମ୍ (ଚିତ୍ର 5) ରୁ।
ପ୍ରକାର ସ୍ତରରେ ଆପେକ୍ଷିକ ପ୍ରଚୁରତା। B ଦୁଇଟି ମୁଖ୍ୟ ଫାଇଲା (ଫର୍ମିକ୍ୟୁଟ୍ସ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିଓବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆ) ର ସୂକ୍ଷ୍ମଜୀବ ବିବିଧତା। ddPCR C Vibrio spp ର ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ ପ୍ରଶସ୍ତିକରଣ। A. ତିନୋଟି ଆଟ୍ରା ହେମୋଲିମ୍ଫରେ 16S rRNA ଜିନ୍ (ନୀଳ) ର ଖଣ୍ଡ।
ମୋଟ ୪୮୨ଟି ସଂଗୃହିତ କଣ୍ଟିଗ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ମେଟାଜେନୋମିକ୍ କଣ୍ଟିଗ୍ ଆନୋଟେସନ୍ (ପ୍ରୋକାରିଓଟ୍ସ ଏବଂ ୟୁକାରିଓଟ୍ସ) ର ଟ୍ୟାକ୍ସୋନୋମିକ୍ ବଣ୍ଟନର ସାଧାରଣ ପ୍ରୋଫାଇଲ୍। B BLASTN ଏବଂ BLASTX ଦ୍ୱାରା ଚିହ୍ନଟ ହୋଇଥିବା ଜୀବାଣୁ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ବିସ୍ତୃତ ବଣ୍ଟନ।
Kraken2 ବିଶ୍ଳେଷଣରୁ ଏହା ମଧ୍ୟ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ମସେଲ୍ ccfDNA ରେ ଆର୍କିଏଲ୍ DNA ଖଣ୍ଡ ରହିଛି, ଯେଉଁଥିରେ Euryarchaeota (65%), Crenarchaeota (24%), ଏବଂ Thaurmarcheota (11%) ର DNA ଖଣ୍ଡ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ (ଚିତ୍ର 6a)। ପୂର୍ବରୁ କାଲିଫର୍ନିଆର ମସେଲ୍‌ର ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ସମ୍ପ୍ରଦାୟରେ ମିଳୁଥିବା Euryarchaeota ଏବଂ Crenarchaeota ରୁ ପ୍ରାପ୍ତ DNA ଖଣ୍ଡର ଉପସ୍ଥିତି ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ହେବା ଉଚିତ୍ ନୁହେଁ [42]। ଯଦିଓ Euryarchaeota ପ୍ରାୟତଃ ଅତ୍ୟନ୍ତ ପରିସ୍ଥିତି ସହିତ ଜଡିତ, ଏହା ବର୍ତ୍ତମାନ ସ୍ୱୀକୃତ ହୋଇଛି ଯେ Euryarchaeota ଏବଂ Crenarcheota ଉଭୟ ସାମୁଦ୍ରିକ କ୍ରାୟୋଜେନିକ୍ ପରିବେଶରେ ସବୁଠାରୁ ସାଧାରଣ ପ୍ରୋକାରିଓଟ୍ ମଧ୍ୟରୁ ଗୋଟିଏ [43, 44]। କେର୍ଗୁଲେନ୍ ମାଳଭୂମି [45] ରେ ତଳ ଲିକ୍ ରୁ ବ୍ୟାପକ ମିଥେନ ଲିକ୍ ଏବଂ କେର୍ଗୁଲେନ୍ ଦ୍ୱୀପପୁଞ୍ଜର ଉପକୂଳରେ ପରିଲକ୍ଷିତ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ମିଥେନ ଉତ୍ପାଦନର ସମ୍ପ୍ରତି ରିପୋର୍ଟକୁ ଦୃଷ୍ଟିରେ ରଖି, ମସେଲ୍‌ରେ ମିଥାନୋଜେନିକ୍ ଅଣୁଜୀବଙ୍କ ଉପସ୍ଥିତି ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ନୁହେଁ [46]।
ତା’ପରେ ଆମର ଧ୍ୟାନ DNA ଭାଇରସରୁ ପଠନ ଉପରେ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ ହେଲା। ଆମର ଜ୍ଞାନ ଅନୁସାରେ, ଏହା ମସେଲ୍‌ର ଭାଇରସ ବିଷୟବସ୍ତୁର ପ୍ରଥମ ଅଫ-ଟାର୍ଗେଟ୍ ଅଧ୍ୟୟନ। ଆଶା ଅନୁଯାୟୀ, ଆମେ ବ୍ୟାକ୍ଟିରୋଫେଜ୍ (କୌଡୋଭାଇରାଲେସ୍) ର DNA ଖଣ୍ଡ ପାଇଲୁ (ଚିତ୍ର 6b)। ତଥାପି, ସବୁଠାରୁ ସାଧାରଣ ଭାଇରସ DNA ନ୍ୟୁକ୍ଲିଓସାଇଟୋଭାଇରସର ଏକ ଫାଇଲମ୍ ରୁ ଆସିଥାଏ, ଯାହାକୁ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟର ସାଇଟୋପ୍ଲାଜମିକ୍ ଲାର୍ଜ DNA ଭାଇରସ (NCLDV) ମଧ୍ୟ କୁହାଯାଏ, ଯାହାର ଯେକୌଣସି ଭାଇରସର ସବୁଠାରୁ ବଡ଼ ଜିନୋମ୍ ଅଛି। ଏହି ଫାଇଲମ୍ ମଧ୍ୟରେ, ଅଧିକାଂଶ DNA କ୍ରମ ମିମିମିଡୋଭିରିଡେ (58%) ଏବଂ ପୋକ୍ସଭିରିଡେ (21%) ପରିବାରର, ଯାହାର ପ୍ରାକୃତିକ ହୋଷ୍ଟରେ ମେରୁଦଣ୍ଡୀ ଏବଂ ଆର୍ଥ୍ରୋପଡ୍ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ, ଯେତେବେଳେ ଏହି DNA କ୍ରମର ଏକ ଛୋଟ ଅଂଶ ଜଣା ଭାଇରୋଲୋଜିକାଲ୍ ଶୈବାଳର। ସାମୁଦ୍ରିକ ୟୁକାରିଓଟିକ୍ ଶୈବାଳକୁ ସଂକ୍ରମିତ କରେ। କ୍ରମଗୁଡ଼ିକ ପାଣ୍ଡୋରା ଭାଇରସରୁ ମଧ୍ୟ ପ୍ରାପ୍ତ ହୋଇଥିଲା, ଯେକୌଣସି ଜଣା ଭାଇରସ ଜେନେରାର ସର୍ବାଧିକ ଜିନୋମ୍ ଆକାରର ବିଶାଳ ଭାଇରସ। ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ଭାବରେ, ହେମୋଲିମ୍ଫ ccfDNA କ୍ରମ ଦ୍ୱାରା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିବା ଭାଇରସ ଦ୍ୱାରା ସଂକ୍ରମିତ ବୋଲି ଜଣାଶୁଣା ହୋଷ୍ଟଗୁଡ଼ିକର ପରିସର ତୁଳନାତ୍ମକ ଭାବରେ ବଡ଼ ଥିଲା (ଚିତ୍ର S3, ପରିପୂରକ ସୂଚନା)। ଏଥିରେ ବାକୁଲୋଭିରିଡେ ଏବଂ ଇରିଡୋଭିରିଡେ ଭଳି କୀଟପତଙ୍ଗକୁ ସଂକ୍ରମିତ କରୁଥିବା ଭାଇରସ ଏବଂ ଆମିବା, ଶୈବାଳ ଏବଂ ମେରୁଦଣ୍ଡୀ ପ୍ରାଣୀମାନଙ୍କୁ ସଂକ୍ରମିତ କରୁଥିବା ଭାଇରସ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। ଆମେ ପିଥୋଭାଇରସ୍ ସାଇବେରିକମ୍ ଜିନୋମ୍ ସହିତ ମେଳ ଖାଉଥିବା କ୍ରମ ମଧ୍ୟ ପାଇଲୁ। ପିଟୋଭାଇରସ୍ ("ଜୋମ୍ବି ଭାଇରସ୍" ଭାବରେ ମଧ୍ୟ ଜଣାଶୁଣା) ପ୍ରଥମେ ସାଇବେରିଆର 30,000 ବର୍ଷ ପୁରୁଣା ପରମାଫ୍ରଷ୍ଟରୁ ପୃଥକ କରାଯାଇଥିଲା [47]। ତେଣୁ, ଆମର ଫଳାଫଳ ପୂର୍ବ ରିପୋର୍ଟ ସହିତ ସମାନ ଯାହା ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ ଏହି ଭାଇରସ୍‌ର ସମସ୍ତ ଆଧୁନିକ ପ୍ରଜାତି ବିଲୁପ୍ତ ହୋଇନାହାଁନ୍ତି [48] ଏବଂ ଏହି ଭାଇରସ୍ ଦୂରବର୍ତ୍ତୀ ସବଆର୍କ୍ଟିକ୍ ସାମୁଦ୍ରିକ ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ଉପସ୍ଥିତ ଥାଇପାରନ୍ତି।
ଶେଷରେ, ଆମେ ଅନ୍ୟ ବହୁକୋଷୀ ପ୍ରାଣୀଙ୍କ ଠାରୁ DNA ଖଣ୍ଡ ପାଇପାରିବୁ କି ନାହିଁ ତାହା ଦେଖିବା ପାଇଁ ପରୀକ୍ଷା କରିଥିଲୁ। nt, nr ଏବଂ RefSeq ଲାଇବ୍ରେରୀ (ଜିନୋମିକ୍ ଏବଂ ପ୍ରୋଟିନ୍) ସହିତ BLASTN ଏବଂ BLASTX ଦ୍ୱାରା ମୋଟ 482 ବିଦେଶୀ କଣ୍ଟିଗ୍ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇଥିଲା। ଆମର ଫଳାଫଳ ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ ବହୁକୋଷୀ ପ୍ରାଣୀଙ୍କ ccfDNA ର ବିଦେଶୀ ଖଣ୍ଡ ମଧ୍ୟରେ ହାଡ଼ ହାଡ଼ର DNA ପ୍ରମୁଖ (ଚିତ୍ର 5)। କୀଟପତଙ୍ଗ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ପ୍ରଜାତିରୁ DNA ଖଣ୍ଡ ମଧ୍ୟ ମିଳିଛି। DNA ଖଣ୍ଡର ଏକ ଆପେକ୍ଷିକ ବଡ଼ ଅଂଶ ଚିହ୍ନଟ କରାଯାଇ ନାହିଁ, ସମ୍ଭବତଃ ସ୍ଥଳଜ ପ୍ରଜାତି ତୁଳନାରେ ଜିନୋମିକ୍ ଡାଟାବେସରେ ବହୁ ସଂଖ୍ୟକ ସାମୁଦ୍ରିକ ପ୍ରଜାତିଙ୍କ ଅଣ୍ଡାଦାନ ହେତୁ [49]।
ବର୍ତ୍ତମାନର ପତ୍ରିକାରେ, ଆମେ ମସେଲ୍ ପାଇଁ LB ଧାରଣା ପ୍ରୟୋଗ କରୁଛୁ, ଯୁକ୍ତି ଦେଉଛୁ ଯେ ହେମୋଲିମ୍ଫ ccfDNA ସଟ୍ ସିକୋଇନ୍ସିଂ ସାମୁଦ୍ରିକ ଉପକୂଳବର୍ତ୍ତୀ ଇକୋସିଷ୍ଟମର ଗଠନ ବିଷୟରେ ଅନ୍ତର୍ଦୃଷ୍ଟି ପ୍ରଦାନ କରିପାରିବ। ବିଶେଷକରି, ଆମେ ପାଇଲୁ ଯେ 1) ମସେଲ୍ ହେମୋଲିମ୍ଫରେ ତୁଳନାତ୍ମକ ଭାବରେ ଉଚ୍ଚ ସାନ୍ଦ୍ରତା (ମାଇକ୍ରୋଗ୍ରାମ ସ୍ତର) ଅପେକ୍ଷାକୃତ ବଡ଼ (~1-5 kb) ପରିଚଳିତ DNA ଖଣ୍ଡ ରହିଛି; 2) ଏହି DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ସ୍ୱାଧୀନ ଏବଂ ଅଣ-ସ୍ୱାଧୀନ 3) ଏହି DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ବିଦେଶୀ ଉତ୍ସ ମଧ୍ୟରୁ, ଆମେ ଜୀବାଣୁ, ଆର୍କିଏଲ୍ ଏବଂ ଭାଇରାଲ୍ DNA, ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ବହୁକୋଷୀୟ ପ୍ରାଣୀଙ୍କ DNA ପାଇଲୁ; 4) ହେମୋଲିମ୍ଫରେ ଏହି ବିଦେଶୀ ccfDNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ସଂଗ୍ରହ ଦ୍ରୁତ ଗତିରେ ଘଟେ ଏବଂ ମସେଲ୍‌ଗୁଡ଼ିକର ଆଭ୍ୟନ୍ତରୀଣ ଫିଲ୍ଟରିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପରେ ଯୋଗଦାନ କରେ। ଶେଷରେ, ଆମର ଅଧ୍ୟୟନ ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ LB ଧାରଣା, ଯାହା ଏପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ମୁଖ୍ୟତଃ ଜୈବ ଔଷଧ କ୍ଷେତ୍ରରେ ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଇଛି, ଏକ ସମୃଦ୍ଧ କିନ୍ତୁ ଅନ୍ୱେଷିତ ଜ୍ଞାନର ଉତ୍ସକୁ ଏନକୋଡ୍ କରେ ଯାହାକୁ ସେଣ୍ଟିନେଲ୍ ପ୍ରଜାତି ଏବଂ ସେମାନଙ୍କ ପରିବେଶ ମଧ୍ୟରେ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟାକୁ ଭଲ ଭାବରେ ବୁଝିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ।
ପ୍ରାଇମେଟ୍ ବ୍ୟତୀତ, ମୂଷା, କୁକୁର, ବିଲେଇ ଏବଂ ଘୋଡା ସମେତ ସ୍ତନ୍ୟପାୟୀ ପ୍ରାଣୀମାନଙ୍କରେ ccfDNA ବିଚ୍ଛିନ୍ନତା ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଛି [50, 51, 52]। ତଥାପି, ଆମ ଜ୍ଞାନ ଅନୁସାରେ, ଆମର ଅଧ୍ୟୟନ ହେଉଛି ପ୍ରଥମ ଯେଉଁଠାରେ ଖୋଲା ସଞ୍ଚାଳନ ପ୍ରଣାଳୀ ସହିତ ସାମୁଦ୍ରିକ ପ୍ରଜାତିରେ ccfDNA ଚିହ୍ନଟ ଏବଂ କ୍ରମିକତା ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଛି। ମସେଲ୍‌ମାନଙ୍କର ଏହି ଶରୀରଗତ ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟ ଏବଂ ଫିଲ୍ଟରିଂ କ୍ଷମତା, ଅତି କମରେ, ଅନ୍ୟ ପ୍ରଜାତି ତୁଳନାରେ ସଞ୍ଚାଳନ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ବିଭିନ୍ନ ଆକାରର ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟଗୁଡ଼ିକୁ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରିପାରେ। ମଣିଷମାନଙ୍କଠାରେ, ରକ୍ତରେ ସଞ୍ଚାଳନ ହେଉଥିବା ଅଧିକାଂଶ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ 150 ରୁ 200 bp ଆକାରର ଛୋଟ ଖଣ୍ଡ। ସର୍ବାଧିକ 167 bp [34, 53] ସହିତ। DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଏକ ଛୋଟ କିନ୍ତୁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଅଂଶ 300 ରୁ 500 bp ଆକାରର, ଏବଂ ପ୍ରାୟ 5% 900 bp ରୁ ଅଧିକ ଲମ୍ବା। [54]। ଏହି ଆକାର ବଣ୍ଟନର କାରଣ ହେଉଛି ଯେ ପ୍ଲାଜମାରେ ccfDNAର ମୁଖ୍ୟ ଉତ୍ସ କୋଷ ମୃତ୍ୟୁର ଫଳସ୍ୱରୂପ ଘଟେ, ସୁସ୍ଥ ବ୍ୟକ୍ତିମାନଙ୍କରେ ପରିଚାଳିତ ହେମାଟୋପୋଏଟିକ୍ କୋଷଗୁଡ଼ିକର ନେକ୍ରୋସିସ୍ ଯୋଗୁଁ କିମ୍ବା କର୍କଟ ରୋଗୀଙ୍କ (ଯାହାକୁ ପରିଚାଳିତ ଟ୍ୟୁମର DNA କୁହାଯାଏ) ଟ୍ୟୁମର କୋଷଗୁଡ଼ିକର ଆପୋପ୍ଟୋସିସ୍ ଯୋଗୁଁ। , ctDNA)। ମସେଲ୍‌ମାନଙ୍କରେ ଆମେ ପାଇଥିବା ହେମୋଲିମ୍ଫ ccfDNAର ଆକାର ବଣ୍ଟନ 1000 ରୁ 5000 bp ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଥିଲା, ଯାହା ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ମସେଲ୍‌ମାନଙ୍କର ccfDNA ର ଏକ ଭିନ୍ନ ଉତ୍ପତ୍ତି ଅଛି। ଏହା ଏକ ତାର୍କିକ ପରିକଳ୍ପନା, କାରଣ ମସେଲ୍‌ମାନଙ୍କର ଏକ ଅର୍ଦ୍ଧ-ଖୋଲା ଭାସ୍କୁଲାର୍ ସିଷ୍ଟମ୍ ଥାଏ ଏବଂ ସେମାନେ ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ଜିନୋମିକ୍ DNA ର ଉଚ୍ଚ ସାନ୍ଦ୍ରତା ଧାରଣ କରୁଥିବା ସାମୁଦ୍ରିକ ଜଳୀୟ ପରିବେଶରେ ରୁହନ୍ତି। ପ୍ରକୃତରେ, ବାହ୍ୟ DNA ବ୍ୟବହାର କରି ଆମର ପ୍ରୟୋଗଶାଳା ପରୀକ୍ଷଣରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ମସେଲ୍‌ମାନେ ସମୁଦ୍ର ଜଳରେ DNA ଖଣ୍ଡ ସଂଗ୍ରହ କରନ୍ତି, ଅତି କମରେ କିଛି ଘଣ୍ଟା ପରେ ସେଗୁଡ଼ିକ କୋଷୀୟ ଗ୍ରହଣ ପରେ ଏବଂ/ଅଥବା ମୁକ୍ତ ଏବଂ/ଅଥବା ବିଭିନ୍ନ ସଂଗଠନରେ ସଂରକ୍ଷଣ ପରେ କ୍ଷୟ ହୋଇଯାଏ। କୋଷଗୁଡ଼ିକର ବିରଳତା (ଉଭୟ ପ୍ରୋକାରିଓଟିକ୍ ଏବଂ ୟୁକାରିଓଟିକ୍)କୁ ଦୃଷ୍ଟିରେ ରଖି, ଇଣ୍ଟ୍ରାଭାଲଭୁଲାର୍ କମ୍ପାର୍ଟମେଣ୍ଟଗୁଡ଼ିକର ବ୍ୟବହାର ସ୍ୱ-ଉତ୍ତର ଏବଂ ବିଦେଶୀ ଉତ୍ସରୁ ccfDNA ପରିମାଣକୁ ହ୍ରାସ କରିବ। ବାଇଭାଲ୍ଭ ଜନ୍ମଗତ ପ୍ରତିରକ୍ଷା ଶକ୍ତିର ଗୁରୁତ୍ୱ ଏବଂ ବହୁ ସଂଖ୍ୟକ ପ୍ରସାରିତ ଫାଗୋସାଇଟର ଗୁରୁତ୍ୱକୁ ବିଚାର କରି, ଆମେ ଆହୁରି ଅନୁମାନ କରିଥିଲୁ ଯେ ବିଦେଶୀ ccfDNA ମଧ୍ୟ ସୂକ୍ଷ୍ମଜୀବ ଏବଂ/କିମ୍ବା କୋଷୀୟ ଅବଶେଷ ଗ୍ରହଣ କରିବା ପରେ ବିଦେଶୀ DNA ସଂଗ୍ରହ କରୁଥିବା ପ୍ରସାରିତ ଫାଗୋସାଇଟରେ ସମୃଦ୍ଧ ହୋଇଥାଏ। ଏକତ୍ରିତ ଭାବରେ, ଆମର ଫଳାଫଳ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ବାଇଭାଲ୍ଭ ହେମୋଲିମ୍ଫ ccfDNA ଆଣବିକ ସୂଚନାର ଏକ ଅନନ୍ୟ ଭଣ୍ଡାର ଏବଂ ଏକ ସେଣ୍ଟିନେଲ୍ ପ୍ରଜାତି ଭାବରେ ସେମାନଙ୍କର ସ୍ଥିତିକୁ ସୁଦୃଢ଼ ​​କରେ।
ଆମର ତଥ୍ୟ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ଜୀବାଣୁରୁ ପ୍ରାପ୍ତ ହେମୋଲିମ୍ଫ ccfDNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର କ୍ରମ ଏବଂ ବିଶ୍ଳେଷଣ ହୋଷ୍ଟ ଜୀବାଣୁ ଉଦ୍ଭିଦ ଏବଂ ଆଖପାଖ ସାମୁଦ୍ରିକ ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ଉପସ୍ଥିତ ଜୀବାଣୁ ବିଷୟରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ସୂଚନା ପ୍ରଦାନ କରିପାରିବ। ସଟ୍ କ୍ରମ କୌଶଳଗୁଡ଼ିକ କମନ୍ସଲ୍ ଜୀବାଣୁ A. atra ଗିଲ୍‌ର କ୍ରମ ପ୍ରକାଶ କରିଛି ଯାହା ପାରମ୍ପରିକ 16S rRNA ଚିହ୍ନଟ ପଦ୍ଧତି ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥାନ୍ତା, ଏକ ରେଫରେନ୍ସ ଲାଇବ୍ରେରୀ ପକ୍ଷପାତିତା ଯୋଗୁଁ। ପ୍ରକୃତରେ, କେର୍ଗୁଲେନ୍‌ରେ ସମାନ ମସେଲ୍ ସ୍ତରର M. ପ୍ଲାଟେନ୍ସିସ୍ ରୁ ସଂଗୃହିତ LB ତଥ୍ୟର ଆମର ବ୍ୟବହାର ଦର୍ଶାଇଛି ଯେ ଗିଲ୍-ସମ୍ବନ୍ଧିତ ଜୀବାଣୁ ସିମ୍ବିଆଣ୍ଟଗୁଡ଼ିକର ଗଠନ ଉଭୟ ମସେଲ୍ ପ୍ରଜାତି ପାଇଁ ସମାନ ଥିଲା (ଚିତ୍ର S4, ପରିପୂରକ ସୂଚନା)। ଦୁଇଟି ଜେନେଟିକାଲ୍ ଭିନ୍ନ ମସେଲ୍‌ର ଏହି ସମାନତା କେର୍ଗୁଲେନ୍‌ର ଥଣ୍ଡା, ସଲଫର୍ସ୍ ଏବଂ ଜ୍ୱାଳାମୁଖୀ ଜମାରେ ଜୀବାଣୁ ସମ୍ପ୍ରଦାୟର ଗଠନକୁ ପ୍ରତିଫଳିତ କରିପାରେ [55, 56, 57, 58]। ପୋର୍ଟ-ଅ-ଫ୍ରାନ୍ସର ଉପକୂଳ ଭଳି ବାୟୋଟର୍ବଟେଡ୍ ଉପକୂଳୀୟ ଅଞ୍ଚଳ [59] ରୁ ମସେଲ୍ ଅମଳ କରିବା ସମୟରେ ସଲଫର- ହ୍ରାସକାରୀ ଅଣୁଜୀବମାନଙ୍କର ଉଚ୍ଚ ସ୍ତର ଭଲ ଭାବରେ ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇଛି। ଆଉ ଏକ ସମ୍ଭାବନା ହେଉଛି ଯେ କମେନସାଲ୍ ମସେଲ୍ ଫ୍ଲୋରା ଭୂସମାନ୍ତର ପ୍ରସାରଣ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରଭାବିତ ହୋଇପାରେ [60, 61]। ସାମୁଦ୍ରିକ ପରିବେଶ, ସମୁଦ୍ର ପୃଷ୍ଠ ଏବଂ ମସେଲ୍‌ରେ ସହଜୀବାଣୁ ଜୀବାଣୁର ଗଠନ ମଧ୍ୟରେ ସମ୍ପର୍କ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ଅଧିକ ଗବେଷଣା ଆବଶ୍ୟକ। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନଗୁଡ଼ିକ ବର୍ତ୍ତମାନ ଚାଲିଛି।
ହେମୋଲିମ୍ଫ ccfDNA ର ଲମ୍ବ ଏବଂ ସାନ୍ଦ୍ରତା, ଏହାର ସହଜ ବିଶୋଧନ ଏବଂ ଦ୍ରୁତ ଶଟଗନ୍ ସିକୋଇନ୍ସିଂକୁ ଅନୁମତି ଦେବା ପାଇଁ ଉଚ୍ଚ ଗୁଣବତ୍ତା ହେଉଛି ସାମୁଦ୍ରିକ ଉପକୂଳବର୍ତ୍ତୀ ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ଜୈବ ବିବିଧତା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା ପାଇଁ ମସେଲ୍ ccfDNA ବ୍ୟବହାର କରିବାର ଅନେକ ସୁବିଧା ମଧ୍ୟରୁ କିଛି। ଏହି ପଦ୍ଧତି ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ଭାଇରଲ୍ ସମ୍ପ୍ରଦାୟ (ଭାଇରୋମ୍)କୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରିବା ପାଇଁ ବିଶେଷ ଭାବରେ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ [62, 63]। ଜୀବାଣୁ, ଆର୍କିଆ ଏବଂ ୟୁକାରିଓଟ୍ସ ପରି, ଭାଇରଲ୍ ଜିନୋମରେ 16S କ୍ରମ ପରି ଫାଇଲୋଜେନେଟିକାଲି ସଂରକ୍ଷିତ ଜିନ୍ ଥାଏ ନାହିଁ। ଆମର ଫଳାଫଳ ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ ମସେଲ୍ ଭଳି ସୂଚକ ପ୍ରଜାତିରୁ ତରଳ ବାୟୋପ୍ସି ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରେ ଯାହା ସାଧାରଣତଃ ଉପକୂଳବର୍ତ୍ତୀ ସାମୁଦ୍ରିକ ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ବାସ କରୁଥିବା ହୋଷ୍ଟମାନଙ୍କୁ ସଂକ୍ରମିତ କରିବା ପାଇଁ ଜଣାଶୁଣା ccfDNA ଭାଇରମ୍ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ। ଏଥିରେ ପ୍ରୋଟୋଜୋଆ, ଆର୍ଥ୍ରୋପଡ୍, କୀଟପତଙ୍ଗ, ଉଦ୍ଭିଦ ଏବଂ ଜୀବାଣୁ ଭାଇରସ୍ (ଯଥା, ବ୍ୟାକ୍ଟେରିଆଫେଜ୍) ସଂକ୍ରମିତ କରିବା ପାଇଁ ଜଣାଶୁଣା ଭାଇରମ୍ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। କେରଗୁଲେନ୍ (ସାରଣୀ S2, ପରିପୂରକ ସୂଚନା) ରେ ସମାନ ମସେଲ୍ ସ୍ତରରେ ସଂଗୃହିତ ନୀଳ ମସେଲ୍ (M. ପ୍ଲାଟେନ୍ସିସ୍) ର ହେମୋଲିମ୍ଫ ccfDNA ଭାଇରୋମ୍ ପରୀକ୍ଷା କରିବା ସମୟରେ ସମାନ ବଣ୍ଟନ ମିଳିଥିଲା। ccfDNA ର ସଟଗନ୍ ସିକୋଇନ୍ସିଂ ପ୍ରକୃତରେ ମଣିଷ କିମ୍ବା ଅନ୍ୟ ପ୍ରଜାତି [21, 37, 64] ର ଭାଇରୋମ୍ ଅଧ୍ୟୟନରେ ଗତି ହାସଲ କରୁଥିବା ଏକ ନୂତନ ପଦ୍ଧତି। ଏହି ପଦ୍ଧତି ଡବଲ୍-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡେଡ୍ DNA ଭାଇରସ୍ ଅଧ୍ୟୟନ ପାଇଁ ବିଶେଷ ଭାବରେ ଉପଯୋଗୀ, କାରଣ ବାଲ୍ଟିମୋରରେ ସବୁଠାରୁ ବିବିଧ ଏବଂ ବ୍ୟାପକ ଶ୍ରେଣୀର ଭାଇରସ୍ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରୁଥିବା ସମସ୍ତ ଡବଲ୍-ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡେଡ୍ DNA ଭାଇରସ୍ ମଧ୍ୟରେ କୌଣସି ଗୋଟିଏ ଜିନ୍ ସଂରକ୍ଷିତ ନାହିଁ [65]। ଯଦିଓ ଏହି ଭାଇରସ୍ ମଧ୍ୟରୁ ଅଧିକାଂଶ ଅବର୍ଗୀକୃତ ରହିଛି ଏବଂ ଭାଇରାଲ୍ ଜଗତର ଏକ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଅଜଣା ଅଂଶରୁ ଭାଇରସ୍ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରିପାରେ [66], ଆମେ ଦେଖିଲୁ ଯେ ମସେଲ୍ A. atra ଏବଂ M. platensis ର ଭାଇରୋମ୍ ଏବଂ ହୋଷ୍ଟ ପରିସର ଦୁଇଟି ପ୍ରଜାତି ମଧ୍ୟରେ ପଡ଼ିଥାଏ। ସମାନ ଭାବରେ (ଚିତ୍ର S3 ଦେଖନ୍ତୁ, ଅତିରିକ୍ତ ସୂଚନା)। ଏହି ସମାନତା ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ନୁହେଁ, କାରଣ ଏହା ପରିବେଶରେ ଉପସ୍ଥିତ DNA ଗ୍ରହଣରେ ଚୟନଶୀଳତାର ଅଭାବକୁ ପ୍ରତିଫଳିତ କରିପାରେ। RNA ଭାଇରୋମ୍ କୁ ଚିହ୍ନିତ କରିବା ପାଇଁ ବର୍ତ୍ତମାନ ପରିଷ୍କୃତ RNA ବ୍ୟବହାର କରି ଭବିଷ୍ୟତ ଅଧ୍ୟୟନ ଆବଶ୍ୟକ।
ଆମର ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଆମେ କୱାର୍ସ୍କି ଏବଂ ସହକର୍ମୀଙ୍କ କାର୍ଯ୍ୟରୁ ଗ୍ରହଣ କରାଯାଇଥିବା ଏକ ଅତ୍ୟନ୍ତ କଠୋର ପାଇପଲାଇନ ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ [37], ଯେଉଁମାନେ ଦେଶୀୟ ccfDNA ର ସମାବେଶ ପୂର୍ବରୁ ଏବଂ ପରେ ପୁଲ୍ ହୋଇଥିବା ରିଡ୍ ଏବଂ କଣ୍ଟିଗ୍ସର ଦୁଇ-ପଦକ୍ଷେପ ଡିଲିଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲେ, ଯାହା ଫଳରେ ଅନମ୍ୟାପ୍ ହୋଇଥିବା ରିଡ୍ସର ଏକ ଉଚ୍ଚ ଅନୁପାତ ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିଲା। ତେଣୁ, ଆମେ ଏହି ଅନମ୍ୟାପ୍ ହୋଇଥିବା ରିଡ୍ ମଧ୍ୟରୁ କିଛିର ଏବେ ବି ନିଜସ୍ୱ ଉତ୍ପତ୍ତି ଥାଇପାରେ ବୋଲି ବାଦ ଦେଇପାରିବୁ ନାହିଁ, ମୁଖ୍ୟତଃ କାରଣ ଆମର ଏହି ମସେଲ ପ୍ରଜାତି ପାଇଁ ଏକ ସନ୍ଦର୍ଭ ଜିନୋମ୍ ନାହିଁ। ଆମେ ଏହି ପାଇପଲାଇନ ମଧ୍ୟ ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ କାରଣ ଆମେ ସ୍ୱୟଂ ଏବଂ ଅଣ-ସ୍ୱୟଂ ପଠନ ମଧ୍ୟରେ କାଇମେରା ଏବଂ ଇଲୁମିନା MiSeq PE75 ଦ୍ୱାରା ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିବା ପଠନ ଲମ୍ବ ବିଷୟରେ ଚିନ୍ତିତ ଥିଲୁ। ଅଧିକାଂଶ ଅଚାନକ ପାଠନର ଆଉ ଏକ କାରଣ ହେଉଛି ଯେ ଅଧିକାଂଶ ସାମୁଦ୍ରିକ ଜୀବାଣୁ, ବିଶେଷକରି କେରଗୁଲେନ୍ ଭଳି ଦୂରବର୍ତ୍ତୀ ଅଞ୍ଚଳରେ, ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରାଯାଇ ନାହିଁ। ଆମେ ଇଲୁମିନା MiSeq PE75 ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ, ccfDNA ଖଣ୍ଡ ଲମ୍ବ ମାନବ ccfDNA ସହିତ ସମାନ ବୋଲି ଧରି ନେଇ। ଭବିଷ୍ୟତ ଅଧ୍ୟୟନ ପାଇଁ, ଆମର ଫଳାଫଳ ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ ହେମୋଲିମ୍ଫ ccfDNA ମଣିଷ ଏବଂ/କିମ୍ବା ସ୍ତନ୍ୟପାୟୀ ପ୍ରାଣୀଙ୍କ ତୁଳନାରେ ଅଧିକ ସମୟ ପଠନ କରେ, ଆମେ ଏକ କ୍ରମିକ ପ୍ଲାଟଫର୍ମ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ସୁପାରିଶ କରୁଛୁ ଯାହା ଲମ୍ବା ccfDNA ଖଣ୍ଡ ପାଇଁ ଉପଯୁକ୍ତ। ଏହି ଅଭ୍ୟାସ ଗଭୀର ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ଅଧିକ ସୂଚକ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ବହୁତ ସହଜ କରିବ। ବର୍ତ୍ତମାନ ଅନୁପଲବ୍ଧ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ A. atra ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟର ଜିନୋମ୍ କ୍ରମ ପାଇବା ଦ୍ୱାରା ସ୍ୱୟଂ ଏବଂ ଅଣ-ସ୍ୱ ଉତ୍ସରୁ ccfDNA ର ପାର୍ଥକ୍ୟକୁ ମଧ୍ୟ ବହୁତ ସହଜ କରାଯିବ। ଆମର ଗବେଷଣା ତରଳ ବାୟୋପ୍ସିର ଧାରଣାକୁ ମସେଲ୍ସରେ ପ୍ରୟୋଗ କରିବାର ସମ୍ଭାବନା ଉପରେ ଧ୍ୟାନ ଦେଇଛି, ଆମେ ଆଶା କରୁଛୁ ଯେ ଭବିଷ୍ୟତ ଗବେଷଣାରେ ଏହି ଧାରଣା ବ୍ୟବହୃତ ହେଉଥିବାରୁ, ମସେଲ୍ସଙ୍କ ସୂକ୍ଷ୍ମ ବିବିଧତା ଅଧ୍ୟୟନ କରିବା ପାଇଁ ଏହି ପଦ୍ଧତିର ସମ୍ଭାବନାକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିବା ପାଇଁ ନୂତନ ଉପକରଣ ଏବଂ ପାଇପଲାଇନ ବିକଶିତ ହେବ। ସାମୁଦ୍ରିକ ଇକୋସିଷ୍ଟମ।
ଏକ ଅଣ-ଆକ୍ରମଣକାରୀ କ୍ଲିନିକାଲ ବାୟୋମାର୍କର ଭାବରେ, ccfDNA ର ବୃଦ୍ଧି ହୋଇଥିବା ମାନବ ପ୍ଲାଜ୍ମା ସ୍ତର ବିଭିନ୍ନ ରୋଗ, ଟିସୁ କ୍ଷତି ଏବଂ ଚାପ ଅବସ୍ଥା ସହିତ ଜଡିତ [67,68,69]। ଏହି ବୃଦ୍ଧି ଟିସୁ କ୍ଷତି ପରେ ନିଜସ୍ୱ ଉତ୍ପତ୍ତିର DNA ଖଣ୍ଡ ମୁକ୍ତ ହେବା ସହିତ ଜଡିତ। ଆମେ ଏହି ସମସ୍ୟାକୁ ତୀବ୍ର ଉତ୍ତାପ ଚାପ ବ୍ୟବହାର କରି ସମାଧାନ କରିଥିଲୁ, ଯେଉଁଥିରେ ମସେଲଗୁଡ଼ିକୁ 30 °C ତାପମାତ୍ରାରେ ସଂକ୍ଷିପ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା। ଆମେ ତିନୋଟି ସ୍ୱାଧୀନ ପରୀକ୍ଷଣରେ ତିନୋଟି ଭିନ୍ନ ପ୍ରକାରର ମସେଲ ଉପରେ ଏହି ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିଥିଲୁ। ତଥାପି, ଆମେ ତୀବ୍ର ଉତ୍ତାପ ଚାପ ପରେ ccfDNA ସ୍ତରରେ କୌଣସି ପରିବର୍ତ୍ତନ ପାଇଲୁ ନାହିଁ (ଚିତ୍ର S5, ଅତିରିକ୍ତ ସୂଚନା ଦେଖନ୍ତୁ)। ଏହି ଆବିଷ୍କାର ଅତି କମରେ, ଏହି ସତ୍ୟକୁ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରିପାରେ ଯେ ମସେଲମାନଙ୍କର ଏକ ଅର୍ଦ୍ଧ-ଖୋଲା ସଂଚାଳନ ପ୍ରଣାଳୀ ଅଛି ଏବଂ ସେମାନଙ୍କର ଉଚ୍ଚ ଫିଲ୍ଟରିଂ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଯୋଗୁଁ ବହୁ ପରିମାଣରେ ବିଦେଶୀ DNA ସଂଗ୍ରହ କରନ୍ତି। ଅନ୍ୟପକ୍ଷରେ, ମସେଲ, ଅନେକ ଅମେରୁଦଣ୍ଡୀ ପ୍ରାଣୀଙ୍କ ପରି, ଚାପ-ପ୍ରେରିତ ଟିସୁ କ୍ଷତି ପ୍ରତି ଅଧିକ ପ୍ରତିରୋଧୀ ହୋଇପାରେ, ଯାହା ଫଳରେ ସେମାନଙ୍କର ହେମୋଲିମ୍ଫରେ ccfDNA ମୁକ୍ତ ହେବା ସୀମିତ ହୁଏ [70, 71]।
ଆଜି ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ, ଜଳୀୟ ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ଜୈବ ବିବିଧତାର DNA ବିଶ୍ଳେଷଣ ମୁଖ୍ୟତଃ ପରିବେଶଗତ DNA (eDNA) ମେଟାବାର୍କୋଡିଂ ଉପରେ ଧ୍ୟାନ ଦେଇଛି। ତଥାପି, ପ୍ରାଇମର ବ୍ୟବହାର କରାଯିବା ସମୟରେ ଜୈବ ବିବିଧତା ବିଶ୍ଳେଷଣରେ ଏହି ପଦ୍ଧତି ସାଧାରଣତଃ ସୀମିତ। ବନ୍ଧୁକ ଚାଳନର ବ୍ୟବହାର PCR ର ସୀମା ଏବଂ ପ୍ରାଇମର ସେଟର ପକ୍ଷପାତୀ ଚୟନକୁ ଦୂର କରିଥାଏ। ତେଣୁ, ଏକ ଅର୍ଥରେ, ଆମର ପଦ୍ଧତି ସମ୍ପ୍ରତି ବ୍ୟବହୃତ ହାଇ-ଥ୍ରୁପୁଟ୍ eDNA ସଟଗନ୍ ସିକ୍ୱେନସି LB ରୁ ccfDNA ର ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ଟିସୁ ବାୟୋପ୍ସି, eDNA କିମ୍ବା ଟିସୁ ବାୟୋପ୍ସି ସହିତ ଜଡିତ ବିଶେଷ ଏବଂ କେତେକ ସମୟରେ ମହଙ୍ଗା ଉପକରଣ ଏବଂ ଲଜିଷ୍ଟିକ୍ସ ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ ନାହିଁ। ପ୍ରକୃତରେ, ଆମେ ସମ୍ପ୍ରତି ରିପୋର୍ଟ କରିଛୁ ଯେ LB ରୁ ccfDNA କୁ ଏକ କୋଲ୍ଡ ଚେନ୍ ବଜାୟ ନ ରଖି FTA ସମର୍ଥନ ସହିତ ସଂରକ୍ଷଣ ଏବଂ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇପାରିବ, ଯାହା ଦୂରବର୍ତ୍ତୀ ଅଞ୍ଚଳରେ ଗବେଷଣା ପାଇଁ ଏକ ପ୍ରମୁଖ ଚ୍ୟାଲେଞ୍ଜ [76]। ତରଳ ବାୟୋପ୍ସିରୁ ccfDNA ର ନିଷ୍କାସନ ମଧ୍ୟ ସରଳ ଏବଂ ବନ୍ଧୁକ କ୍ରମ ଏବଂ PCR ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ ଉଚ୍ଚ ଗୁଣବତ୍ତାର DNA ପ୍ରଦାନ କରେ। eDNA ବିଶ୍ଳେଷଣ ସହିତ ଜଡିତ କିଛି ବୈଷୟିକ ସୀମାବଦ୍ଧତାକୁ ଦୃଷ୍ଟିରେ ରଖି ଏହା ଏକ ବଡ଼ ସୁବିଧା [77]। ନମୁନା ପଦ୍ଧତିର ସରଳତା ଏବଂ କମ୍ ମୂଲ୍ୟ ଦୀର୍ଘକାଳୀନ ନିରୀକ୍ଷଣ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ରମ ପାଇଁ ମଧ୍ୟ ଉପଯୁକ୍ତ। ସେମାନଙ୍କର ଉଚ୍ଚ ଫିଲ୍ଟରିଂ କ୍ଷମତା ସହିତ, ବାଇଭାଲ୍ଭଗୁଡ଼ିକର ଆଉ ଏକ ଜଣାଶୁଣା ବୈଶିଷ୍ଟ୍ୟ ହେଉଛି ସେମାନଙ୍କର ମ୍ୟୁକୋସର ରାସାୟନିକ ମ୍ୟୁକୋପଲିସାକାରାଇଡ୍ ରଚନା, ଯାହା ଭାଇରସ୍ ର ଅବଶୋଷଣକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରେ [78, 79]। ଏହା ବାଇଭାଲ୍ଭଗୁଡ଼ିକୁ ଏକ ଆଦର୍ଶ ପ୍ରାକୃତିକ ଫିଲ୍ଟର କରିଥାଏ ଯାହା ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଜଳୀୟ ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ଜୈବବିବିଧତା ଏବଂ ଜଳବାୟୁ ପରିବର୍ତ୍ତନର ପ୍ରଭାବକୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରିଥାଏ। ଯଦିଓ ହୋଷ୍ଟ-ଉତ୍ପନ୍ନ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଉପସ୍ଥିତି eDNA ତୁଳନାରେ ପଦ୍ଧତିର ଏକ ସୀମା ଭାବରେ ଦେଖାଯାଇପାରେ, eDNA ତୁଳନାରେ ଏପରି ଏକ ଦେଶୀୟ ccfDNA ରହିବା ସହିତ ଜଡିତ ଖର୍ଚ୍ଚ ସ୍ୱାସ୍ଥ୍ୟ ଅଧ୍ୟୟନ ପାଇଁ ଉପଲବ୍ଧ ବିପୁଳ ପରିମାଣର ସୂଚନା ପାଇଁ ଏକକାଳୀନ ବୁଝାମଣାଯୋଗ୍ୟ। ଅଫସେଟ୍ ହୋଷ୍ଟ। ଏଥିରେ ହୋଷ୍ଟ ହୋଷ୍ଟର ଜିନୋମରେ ସଂଯୁକ୍ତ ଭାଇରସ୍ କ୍ରମର ଉପସ୍ଥିତି ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। ଏହା ବିଶେଷକରି ମସେଲ୍ ପାଇଁ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ, ବାଇଭାଲ୍ଭରେ ଭୂସମାନ୍ତର ଭାବରେ ସଂକ୍ରମିତ ଲ୍ୟୁକେମିକ୍ ରେଟ୍ରୋଭାଇରସ୍ ଉପସ୍ଥିତିକୁ ଦୃଷ୍ଟିରେ ରଖି [80, 81]। eDNA ତୁଳନାରେ LBର ଆଉ ଏକ ସୁବିଧା ହେଉଛି ଯେ ଏହା ହେମୋଲିମ୍ଫରେ ରକ୍ତ କୋଷଗୁଡିକର ପରିଚଳନ ଫାଗୋସାଇଟିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପକୁ ଶୋଷଣ କରେ, ଯାହା ଅଣୁଜୀବ (ଏବଂ ସେମାନଙ୍କର ଜିନୋମ) ଗ୍ରାସ କରେ। ଫାଗୋସାଇଟୋସିସ୍ ହେଉଛି ବାଇଭାଲ୍ଭରେ ରକ୍ତ କୋଷଗୁଡିକର ମୁଖ୍ୟ କାର୍ଯ୍ୟ [82]। ଶେଷରେ, ଏହି ପଦ୍ଧତି ମସେଲ୍‌ର ଉଚ୍ଚ ଫିଲ୍ଟରିଂ କ୍ଷମତା (ହାରାହାରି 1.5 ଲି/ଘଣ୍ଟା ସମୁଦ୍ର ଜଳ) ଏବଂ ଦୁଇ-ଦିନର ସଞ୍ଚାଳନର ଲାଭ ଉଠାଇଥାଏ, ଯାହା ସମୁଦ୍ର ଜଳର ବିଭିନ୍ନ ସ୍ତରର ମିଶ୍ରଣକୁ ବୃଦ୍ଧି କରେ, ଯାହା ହେଟେରୋଲୋଗସ୍ eDNA କ୍ୟାପଚରକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ। [83, 84]। ତେଣୁ, ମସେଲ୍ ccfDNA ବିଶ୍ଳେଷଣ ହେଉଛି ମସେଲ୍‌ର ପୁଷ୍ଟିକର, ଆର୍ଥିକ ଏବଂ ପରିବେଶଗତ ପ୍ରଭାବକୁ ଦୃଷ୍ଟିରେ ରଖି ଏକ ଆକର୍ଷଣୀୟ ରାସ୍ତା। ମଣିଷଠାରୁ ସଂଗୃହିତ LB ବିଶ୍ଳେଷଣ ପରି, ଏହି ପଦ୍ଧତି ବାହ୍ୟ ପଦାର୍ଥର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ହୋଷ୍ଟ DNA ରେ ଜେନେଟିକ୍ ଏବଂ ଏପିଜେନେଟିକ୍ ପରିବର୍ତ୍ତନ ମାପ କରିବାର ସମ୍ଭାବନାକୁ ମଧ୍ୟ ଖୋଲିଥାଏ। ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ନାନୋପୋର ସିକୋଇନ୍ସିଂ ବ୍ୟବହାର କରି ଦେଶୀୟ ccfDNA ରେ ଜିନୋମ୍-ୱାଇଡ୍ ମିଥାଇଲେସନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିବା ପାଇଁ ତୃତୀୟ-ପିଢ଼ିର ସିକୋଇଲେସନ୍ ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟାକୁ କଳ୍ପନା କରାଯାଇପାରିବ। ଏହି ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ଏହି ସତ୍ୟ ଦ୍ୱାରା ସହଜ କରାଯିବା ଉଚିତ ଯେ ମସେଲ୍ ccfDNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଲମ୍ବ ଦୀର୍ଘ-ପଠିତ ସିକୋଇଲେସନ୍ ପ୍ଲାଟଫର୍ମ ସହିତ ଆଦର୍ଶ ଭାବରେ ସୁସଙ୍ଗତ ଯାହା ରାସାୟନିକ ପରିବର୍ତ୍ତନର ଆବଶ୍ୟକତା ବିନା ଏକକ ସିକୋଇଲେସନ୍‌ରୁ ଜିନୋମ୍-ୱାଇଡ୍ DNA ମିଥାଇଲେସନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ।85,86] ଏହା ଏକ ଆକର୍ଷଣୀୟ ସମ୍ଭାବନା, କାରଣ ଏହା ଦେଖାଯାଇଛି ଯେ DNA ମିଥାଇଲେସନ୍ ଢାଞ୍ଚା ପରିବେଶଗତ ଚାପର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ପ୍ରତିଫଳିତ କରେ ଏବଂ ଅନେକ ପିଢ଼ି ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଜାରି ରହେ। ତେଣୁ, ଏହା ଜଳବାୟୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କିମ୍ବା ପ୍ରଦୂଷକଙ୍କ ସଂସ୍ପର୍ଶରେ ଆସିବା ପରେ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପରିଚାଳନା କରୁଥିବା ଅନ୍ତର୍ନିହିତ ଯନ୍ତ୍ରପାତି ବିଷୟରେ ମୂଲ୍ୟବାନ ଅନ୍ତର୍ଦୃଷ୍ଟି ପ୍ରଦାନ କରିପାରିବ [87]। ତଥାପି, LB ର ବ୍ୟବହାର ସୀମାହୀନ ନୁହେଁ। କହିବା ବାହୁଲ୍ୟ ଯେ, ଏଥିପାଇଁ ଇକୋସିଷ୍ଟମରେ ସୂଚକ ପ୍ରଜାତିଗୁଡ଼ିକର ଉପସ୍ଥିତି ଆବଶ୍ୟକ। ଉପରେ ଉଲ୍ଲେଖ କରାଯାଇଥିବା ପରି, ଏକ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଇକୋସିଷ୍ଟମର ଜୈବ ବିବିଧତା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ ପାଇଁ LB ବ୍ୟବହାର କରିବା ପାଇଁ ଏକ କଠୋର ଜୈବ ସୂଚନା ପାଇପଲାଇନର ମଧ୍ୟ ଆବଶ୍ୟକତା ଅଛି ଯାହା ଉତ୍ସରୁ DNA ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକର ଉପସ୍ଥିତିକୁ ବିଚାରକୁ ନେଇଥାଏ। ଆଉ ଏକ ପ୍ରମୁଖ ସମସ୍ୟା ହେଉଛି ସାମୁଦ୍ରିକ ପ୍ରଜାତି ପାଇଁ ସନ୍ଦର୍ଭ ଜିନୋମର ଉପଲବ୍ଧତା। ଆଶା କରାଯାଉଛି ଯେ ସାମୁଦ୍ରିକ ସ୍ତନ୍ୟପାୟୀ ଜିନୋମ୍ ପ୍ରକଳ୍ପ ଏବଂ ସମ୍ପ୍ରତି ପ୍ରତିଷ୍ଠିତ Fish10k ପ୍ରକଳ୍ପ [88] ପରି ପଦକ୍ଷେପ ଭବିଷ୍ୟତରେ ଏପରି ବିଶ୍ଳେଷଣକୁ ସହଜ କରିବ। ସାମୁଦ୍ରିକ ଫିଲ୍ଟର-ଫିଡିଂ ଜୀବମାନଙ୍କ ପାଇଁ LB ଧାରଣାର ପ୍ରୟୋଗ କ୍ରମିକ ପ୍ରଯୁକ୍ତିବିଦ୍ୟାର ସର୍ବଶେଷ ଅଗ୍ରଗତି ସହିତ ମଧ୍ୟ ସୁସଙ୍ଗତ, ଯାହା ପରିବେଶଗତ ଚାପ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ସାମୁଦ୍ରିକ ବାସସ୍ଥାନର ସ୍ୱାସ୍ଥ୍ୟ ବିଷୟରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ସୂଚନା ପ୍ରଦାନ କରିବା ପାଇଁ ମଲ୍ଟି-ଓହମ୍ ବାୟୋମାର୍କର ବିକାଶ ପାଇଁ ଏହାକୁ ଉପଯୁକ୍ତ କରିଥାଏ।
ଜିନୋମ୍ ସିକୋଏନ୍ସିଂ ତଥ୍ୟକୁ ବାୟୋପ୍ରୋଜେକ୍ଟସ୍ SRR8924808 ଅଧୀନରେ NCBI ସିକୋଏନ୍ସି ରିଡ୍ ଆର୍କାଇଭ୍ https://www.ncbi.nlm.nih.gov/sra/SRR8924808 ରେ ଜମା କରାଯାଇଛି।
ବ୍ରିୟର୍ଲି ଏଏସ୍, କିଙ୍ଗସଫୋର୍ଡ ଏମ୍ଜେ ସାମୁଦ୍ରିକ ଜୀବନ ଏବଂ ଇକୋସିଷ୍ଟମ ଉପରେ ଜଳବାୟୁ ପରିବର୍ତ୍ତନର ପ୍ରଭାବ। କୋଲ୍ ବାୟୋଲୋଜି। ୨୦୦୯; ୧୯: ପି୬୦୨–ପି୬୧୪।
ଗିସି ଇ, ମାନିଆ ଇ, ମାଜାରିସ୍ ଏଡି, ଫ୍ରାସ୍ଚେଟି ଏସ୍, ଆଲମ୍ପାନିଡୋ ଭି, ବେଭିଲାକ୍ୱା ଏସ୍, ଇତ୍ୟାଦି। ସାମୁଦ୍ରିକ ପରିବେଶ ଉପରେ ଜଳବାୟୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ସ୍ଥାନୀୟ ଚାପର ମିଳିତ ପ୍ରଭାବକୁ ବିଚାର କରନ୍ତୁ। ସାଧାରଣ ବୈଜ୍ଞାନିକ ପରିବେଶ। 2021;755:142564।
କାରେଲା ଏଫ୍, ଆଣ୍ଟୁଏଫର୍ମୋ ଇ, ଫରିନା ଏସ୍, ସାଲାଟି ଏଫ୍, ମାଣ୍ଡାସ୍ ଡି, ପ୍ରାଦୋ ପି, ଇତ୍ୟାଦି | ) ମାର୍ଚ୍ଚ ପ୍ରଥମ ବିଜ୍ଞାନ | 2020; 7: 48
ସେରଣ୍ଟ ଏଲ୍, ନିକାଷ୍ଟ୍ରୋ ସିଆର, ଜାର୍ଡି ଜିଆଇ, ଗୋବରଭିଲ୍ ଇ। ପୁନରାବୃତ୍ତି ଉତ୍ତାପ ଚାପ ପରିସ୍ଥିତିରେ ହ୍ରାସିତ ଉତ୍ତାପ ସହନଶୀଳତା ନୀଳ ମସେଲ୍‌ମାନଙ୍କର ଉଚ୍ଚ ଗ୍ରୀଷ୍ମ ମୃତ୍ୟୁହାରକୁ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରେ। ବୈଜ୍ଞାନିକ ରିପୋର୍ଟ ୨୦୧୯; ୯:୧୭୪୯୮।
ଫେ ଏସବି, ସିପିଏଲସ୍କି ଏଏମ, ନୁସଲେ ଏସ, ସର୍ଭାଣ୍ଟେସ-ୟୋଶିଦା କେ, ହ୍ୱାନ ଜେଏଲ, ହୁବର ଇଆର, ଇତ୍ୟାଦି। ପ୍ରାଣୀ ମୃତ୍ୟୁର ଆବୃତ୍ତି, କାରଣ ଏବଂ ପରିମାଣରେ ସାମ୍ପ୍ରତିକ ପରିବର୍ତ୍ତନ। ପ୍ରୋକ୍ ନାଟଲ୍ ଆକାଡ୍ ସାଇ ୟୁଏସଏ। 2015;112:1083-8।
ସ୍କାରପା ଏଫ୍, ସାନ୍ନା ଡି, ଆଜେନା I, ମୁଗେଟ୍ଟି ଡି, ସେରୁଟି ଏଫ୍, ହୋସେନି ଏସ୍, ଇତ୍ୟାଦି | ଏକାଧିକ ଅଣ-ପ୍ରଜାତି-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ପାଥୋଜେନ ହୁଏତ ପିନ୍ନା ନୋବିଲିସ୍ ର ବହୁ ମୃତ୍ୟୁ ଘଟାଇଥାଇପାରେ | ଜୀବନ 2020; 10: 238
ବ୍ରାଡଲି ଏମ, କାଉଟ୍ସ ଏସଜେ, ଜେନକିନ୍ସ ଇ, ଓ'ହାରା ଟିଏମ। ଆର୍କଟିକ୍ ଜୁନୋଟିକ୍ ରୋଗ ଉପରେ ଜଳବାୟୁ ପରିବର୍ତ୍ତନର ସମ୍ଭାବ୍ୟ ପ୍ରଭାବ। ଇଣ୍ଟ ଜେ ସର୍କମ୍ପୋଲାର ସ୍ୱାସ୍ଥ୍ୟ। ୨୦୦୫; ୬୪:୪୬୮-୭୭।
ବେୟର ଜେ., ଗ୍ରୀନ ଏନଡବ୍ଲୁ, ବ୍ରୁକ୍ସ ଏସ., ଆଲାନ ଆଇଜେ, ରୁସ ଏ., ଗୋମେଜ୍ ଟି. ଇତ୍ୟାଦି। ଉପକୂଳ ପ୍ରଦୂଷଣ ତଦାରଖରେ ସଙ୍କେତ ଜୀବ ଭାବରେ ନୀଳ ମସେଲ୍ସ (ମାଇଟିଲସ୍ ଏଡୁଲିସ୍ ଏସ୍ପିପି.): ଏକ ସମୀକ୍ଷା। ମାର୍ ପରିବେଶ ରେସ୍ ୨୦୧୭; ୧୩୦:୩୩୮-୬୫।
ସିରାଭେଗ୍ନା ଜି, ମାର୍ସୋନି ଏସ୍, ସିଆନା ଏସ୍, ବାର୍ଡେଲି ଏ. କର୍କଟ ଚିକିତ୍ସାରେ ତରଳ ବାୟୋପ୍ସିର ସମନ୍ୱୟ। ନାଟ୍ ରେଭ କ୍ଲିନ୍ ଅନକୋଲ୍। ୨୦୧୭; ୧୪:୫୩୧–୪୮।
ୱାନ୍ ଜେସିଏମ୍, ମାସି ସି, ଗାର୍ସିଆ-କର୍ବାଚୋ ଜେ, ମୌଲିଏର ଏଫ୍, ବ୍ରେଣ୍ଟନ୍ ଜେଡି, କାଲଡାସ୍ ସି, ଇତ୍ୟାଦି। ତରଳ ବାୟୋପସି ପରିପକ୍ୱତା: ଟ୍ୟୁମର ଡିଏନଏକୁ ପରିଚଳନ କରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ। ନାଟ୍ ରେଭ କ୍ୟାନସର। ୨୦୧୭;୧୭:୨୨୩–୩୮।
ମାଣ୍ଡେଲ ପି., ମେଟାଇସ୍ ପି. ମାନବ ପ୍ଲାଜମାରେ ନ୍ୟୁକ୍ଲିକ୍ ଏସିଡ୍। ସୋକ୍ ବାୟୋଲ୍ ସହାୟକ କମ୍ପାନୀଗୁଡ଼ିକର ବୈଠକ ବିବରଣୀ। ୧୯୪୮; ୧୪୨:୨୪୧-୩।
ବ୍ରୋଙ୍କୋର୍ଷ୍ଟ ଏଜେ, ଅନଗେରର ଡବ୍ଲୁ, ହୋଲ୍ଡେନରିଡର ଏସ। କର୍କଟ ଚିକିତ୍ସା ପାଇଁ ଏକ ଆଣବିକ ଚିହ୍ନକ ଭାବରେ କୋଷ-ମୁକ୍ତ ଡିଏନଏ ପାଇଁ ଏକ ନୂତନ ଭୂମିକା। ବାୟୋମୋଲାର ବିଶ୍ଳେଷଣର ପରିମାଣ। 2019;17:100087।
ଇଗ୍ନାଟିଆଡିସ୍ ​​ଏମ., ସ୍ଲେଜ୍ ଜିଡବ୍ଲୁ, ଜେଫ୍ରି ଏସଏସ ଲିକ୍ୱିଡ୍ ବାୟୋପସି କ୍ଲିନିକ୍‌ରେ ପ୍ରବେଶ କରିଛନ୍ତି - କାର୍ଯ୍ୟାନ୍ୱୟନ ସମସ୍ୟା ଏବଂ ଭବିଷ୍ୟତର ଚ୍ୟାଲେଞ୍ଜ। ନାଟ୍ ରେଭ କ୍ଲିନ୍ ଅନକଲ୍। 2021; 18:297–312।
ଲୋ ୱାଇଏମ୍, କର୍ବେଟା ଏନ୍., ଚାମ୍ବରଲେନ୍ ପିଏଫ୍, ରାଇ ଡବ୍ଲୁ., ସାର୍ଜେଣ୍ଟ ଆଇଏଲ୍, ରେଡମ୍ୟାନ୍ ସିଡବ୍ଲୁ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ। ମାତୃ ପ୍ଲାଜ୍ମା ଏବଂ ସିରମ୍‌ରେ ଭ୍ରୁଣ ଡିଏନ୍ଏ ଉପସ୍ଥିତ। ଲାନସେଟ୍। ୧୯୯୭; ୩୫୦:୪୮୫-୭।
ମୁଫାରେ ଏମଏନ, ଓଙ୍ଗ ଆରଜେ, ଶ ଜିଏମ, ଷ୍ଟିଭେନସନ ଡିକେ, କ୍ୱେକ ଏସଆର ଗର୍ଭାବସ୍ଥାରେ ମହିଳାଙ୍କ ରକ୍ତରେ ପରିଚଳିତ ବାହ୍ୟକୋଷୀୟ ଆରଏନଏ ବ୍ୟବହାର କରି ଗର୍ଭାବସ୍ଥା ଏବଂ ଏହାର ଜଟିଳତା ଉପରେ ଅଧ୍ୟୟନ। ଡୋପିଡିଆଟ୍ରିକ୍ସ। 2020;8:605219।
ଓଲେରିଚ୍ ଏମ୍, ଶେରଉଡ୍ କେ, କେଉନ୍ ପି, ସ୍କୁଟ୍ଜ୍ ଇ, ବେକ୍ ଜେ, ଷ୍ଟେଗବାଉର୍ ଜେ, ଇତ୍ୟାଦି। ତରଳ ବାୟୋପସି: ବୃକକ୍ ପ୍ରତିରୋପଣରେ ଆଲୋଜେନିକ୍ କ୍ଷତ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ଦାତା କୋଷ-ମୁକ୍ତ ଡିଏନଏ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ। ନାଟ୍ ରେଭ୍ ନେଫ୍ରୋଲ୍। ୨୦୨୧; ୧୭:୫୯୧–୬୦୩।
ଜୁଆନ୍ ଏଫସି, ଲୋ ୱାଇଏମ ପ୍ରିନେଟାଲ୍ ଡାଇଗ୍ନୋଷ୍ଟିକ୍ସରେ ନବସୃଜନ: ମାତୃ ପ୍ଲାଜ୍ମା ଜିନୋମ୍ ସିକୋଏନ୍ସିଙ୍ଗ। ଆନ୍ନା ଏମଡି। 2016;67:419-32।
ଗୁ ଡବ୍ଲୁ, ଡେଙ୍ଗ୍ ଏକ୍ସ, ଲି ଏମ୍, ସୁକୁ ୱାଇଡି, ଆରେଭାଲୋ ଏସ୍, ଷ୍ଟ୍ରାଇକ୍ ଡି, ଇତ୍ୟାଦି। ସଂକ୍ରମିତ ଶାରୀରିକ ତରଳ ପଦାର୍ଥର ପରବର୍ତ୍ତୀ ପିଢ଼ିର ମେଟାଜେନୋମିକ୍ କ୍ରମ ସହିତ ଦ୍ରୁତ ରୋଗଜୀବାଣୁ ଚିହ୍ନଟ। ନାଟ୍ ମେଡିସିନ୍। 2021;27:115-24।