“Küçük bir grup düşünceli ve özverili vatandaşın dünyayı değiştirebileceğinden asla şüphe duymayın. Aslında, dünyayı değiştirebilecek tek yer orasıdır.”
Cureus'un misyonu, araştırma makalesi göndermenin pahalı, karmaşık ve zaman alıcı olabildiği, uzun süredir devam eden tıp yayıncılığı modelini değiştirmektir.
Trombosit açısından zengin plazma/PRP, doku yenilenmesi, trombosit aktivasyonu, glikoz proliferatif tedavisi, trombositler, proliferatif tedavi
Bu makaleyi şu şekilde alıntılayın: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, ve diğerleri (17 Mayıs 2022) Glikozun trombosit sayısı ve hacmi üzerindeki etkisi: rejeneratif tıp için çıkarımlar. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Trombosit açısından zengin plazma (PRP) ve hipertonik glikoz çözeltileri, rejeneratif tıpta enjeksiyon için yaygın olarak kullanılmaktadır, bazen birlikte. Hipertonik glikozun trombosit lizisi ve aktivasyonu üzerindeki etkisi daha önce bildirilmemiştir. Yüksek glikoz konsantrasyonlarının trombosit ve eritrosit sayımları ile PRP ve tam kan (WB) içindeki hücre hacimleri üzerindeki etkisini test ettik. PRP veya tam kan ile karıştırılan tüm glikoz karışımlarında, kısmi lizise uygun olarak, trombosit sayısında hızlı ve kısmi bir azalma meydana geldi. İlk dakikadan sonra trombosit sayılarının sabit kalması, kalan trombositlerin aşırı (>2000 mOsm) hipertonisiteye hızla uyum sağladığını göstermektedir. İlk dakikadan sonra trombosit sayılarının sabit kalması, kalan trombositlerin aşırı (>2000 mOsm) hipertonisiteye hızla uyum sağladığını göstermektedir. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю аккомодацию остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. İlk dakikadan sonra trombosit sayısı sabit kaldı; bu da kalan trombositlerin aşırı (>2000 mOsm) hipertonisiteye hızla uyum sağladığını gösteriyor.第一分钟后，血小板计数保持稳定,表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm (mOsm)2000 mOsm. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю адаптацию остаточных тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. İlk dakikadan sonra trombosit sayısı sabit kaldı; bu da kalan trombositlerin aşırı (>2000 mOsm) hiperozmolar duruma hızla adapte olduğunu gösteriyor.%25 ve üzeri glukoz konsantrasyonları, ortalama trombosit hacminde (MPV) önemli bir artışa neden olarak trombosit aktivasyonunun erken bir aşamasını göstermiştir. Trombosit lizisinin mi yoksa aktivasyonunun mu meydana geldiğini ve hipertonik glukoz enjeksiyonunun tek başına veya PRP ile birlikte ek klinik fayda sağlayıp sağlamayacağını belirlemek için daha fazla çalışmaya ihtiyaç vardır.
1950'lerde Amerikalı cerrah George Hackett, tendonlara ve bağlara proliferatif bir çözelti enjekte ederek birçok hastada eklem ve sırt ağrısını kalıcı olarak hafifletebileceğini keşfetti. Tavşanlar üzerinde yaptığı deneyler, proliferatif terapi olarak adlandırdığı tedavinin tendonların büyümesine ve güçlenmesine neden olduğunu gösterdi. Histolojik çalışmalar, bu süreçte yeni kolajen üretildiğini doğruladı [1].
İlk birkaç on yılda birçok farklı dağıtım çözümü denendi. 1990'lara gelindiğinde, çoğu uygulayıcı yüksek glikoz konsantrasyonlarının en güvenli ve etkili yöntem olduğunu düşünüyordu. Bununla birlikte, etki mekanizması hala belirsizliğini koruyor.
Hackett'in çalışmasını takiben 20. yüzyılda çok az klinik çalışma yapıldı. Bununla birlikte, 2000'li yıllarda ilgi yeniden canlandı ve bel ağrısı [2], diz osteoartriti [3] ve lateral epikondilit [4] tedavisi için proliferatif terapiye yönelik birkaç başarılı klinik çalışma tamamlandı.
Doku yenilenmesi kök hücrelerin katılımını gerektirir. Bu nedenle, yüksek glikoz konsantrasyonlarının bir şekilde kök hücrelerin göçünü, çoğalmasını ve farklılaşmasını tetiklemesi gerekir. Hipotezimiz, trombositlerin haberci görevi görebileceği ve yüksek glikoz konsantrasyonlarının trombositlerin sitokin ve büyüme faktörleri salgılamasına neden olarak, özellikle kök hücrelerin yüksek glikoz konsantrasyonlu bölgelere göçünü teşvik eden yenilenme süreçlerini destekleyebileceğidir.
Trombosit aktivasyonu her zaman hücre içi kalsiyum artışından önce gelir [5]. Liu ve arkadaşları 2008 yılında, yüksek glikoz seviyelerinin plazma membranındaki geçici reseptör potansiyeli kanonik tip 6 (TRPC6) kanallarının aktivitesini artırdığını ve bunun da trombositlere kalsiyum iyonlarının akışına yol açtığını göstermiştir [6]. Başka bir çalışma, mikrotübül marjinal bölgesinin kalsiyum iyonlarına maruz kalmasının, marjinal bölgenin gevşemesine, genişlemesine ve deformasyonuna neden olduğunu ve bunun da şeklin diskten küresel hale dönüşmesine ve sonuç olarak ortalama trombosit hacminin (MPV) oluşmasına yol açtığını göstermiştir [7].
Bu çalışmadaki hipotezimiz, trombositlerin yüksek glikoz konsantrasyonlarına maruz kalmasının mikrotübül marjinal bölgesini ve hücre içi ortamı etkileyerek MPV'de artışa yol açtığıdır.
Çalışmanın ayrıntıları açıklandıktan ve örnekler alınmadan önce tüm katılımcılar bilgilendirilmiş onam formunu imzaladılar. Bu çalışmada, eritrosit (eritrosit) sayısı ve kırmızı kan hücrelerinin ortalama korpusküler hacminin (MCV) karşılaştırmaya dahil edilebilmesi için yalnızca hematokrit değeri %2'den yüksek olan PRP örnekleri kullanıldı.
Çalışma dört aşamada gerçekleştirildi; ilk aşama PRP, kalan aşamalar ise tam kan idi (Tablo 1). Daha önce açıklandığı gibi [8], tüm bağıl santrifüj kuvvetleri (RCF, g-kuvveti), santrifüj şırıngasındaki kan sütununun orta noktasından (Rmid, cm cinsinden) hesaplandı. Trombosit duyarlılığının bir göstergesi olarak MPV'yi ve potansiyel trombosit lizisinin bir göstergesi olarak trombosit sayısını kullanmayı tercih ettik; bunların her ikisi de standart hematoloji analizörlerinde kolayca ölçülebilir.
İlk aşamada, 47 gönüllü kan örneği verdi: bir tüp etilendiamintetraasetik asit (EDTA) ve bir tüp PRP tam kan örneği (sodyum sitrat (NaCl, %3) ile antikoagüle edilmiş) (Tablo 1). Sallayıcıyı hemen tüpe yerleştirin. EDTA örneklerinde üçlü olarak tam kan sayımı (CBC) yapıldı ve NaCl örnekleri de üçlü olarak CBC analizi için analiz edildi ve ardından PRP, yukarıda açıklanan çeşitli yöntemlerle hazırlandı [8]. Tüm PRP örnekleri 900-1000 g'de santrifüj edilerek hazırlandı. Her PRP örneği bir vorteks karıştırıcıda 5-10 saniye karıştırıldıktan sonra, beş adet 0,5 ml'lik kısım tüplere bölündü.
Trombosit maruziyetinin yüksek glikoz konsantrasyonları üzerindeki etkisini değerlendirmek için, %0, %5, %12,5, %25 ve %50 glikoz içeren sudan eşit miktarlarda (0,5 ml) trombosit örnekleriyle karıştırılarak %0, %2,5, %6,25, %12,5 ve %25 glikoz karışımı konsantrasyonları elde edildi ve tüpler 15 dakika boyunca bir test tüpü çalkalayıcısında karıştırıldı. Her karışımın TAC değeri 15 dakika sonra üçlü olarak analiz edildi. Her tüp için trombosit sayısı (PLT), eritrosit sayısı, MCV ve MPV ortalamaları alındı ​​ve tüm PRP örnekleri için ortalama trombosit sayısı, eritrosit sayısı, MCV ve MPV hesaplandı.
Veri toplama işleminin ilk aşaması tamamlandıktan sonra, D50W ilavesinden sonra PRP trombositlerinde trombosit hacminde önemli bir artış gözlemledik. PRP trombositleri kandaki tüm trombositleri temsil etmeyebilir ve PRP ortamı tam kan ortamından farklıdır. Bu nedenle, tam kana D50W eklenmesinin etkisini incelemek için ikinci bir aşama denemesi yapmaya karar verdik.
İkinci tur için, Analiz bölümünde açıklandığı gibi, ilk serinin sonuçlarına dayanarak 30 kişilik bir örneklem büyüklüğü seçtik. Bu seride 20 gönüllü kan örneği verdi (Tablo 1). 3 ml'lik bir şırıngaya 1,8 ml tam kan çekildi ve 0,2 ml %40 NaCl ile antikoagüle edildi. Tam kan şırıngası, vorteks karıştırıcı ile beş saniye karıştırıldı ve tam kan sayımı (CBC) üçlü olarak analiz edildi. Analizden sonra, antikoagüle edilmiş kana 5 ml'lik bir şırıngaya 2 ml %50 glikoz eklendi (nihai glikoz konsantrasyonu yaklaşık %25 (D25) idi) ve 30 dakika boyunca çalkalama tüpüne yerleştirildi. 30 dakika sonra, D25/CBC şırıngalarındaki tam kan örnekleri üçlü olarak analiz edildi. Şırınga başına trombosit sayısı, eritrosit sayısı, MCV ve MPV ortalaması alındı ​​ve glikoz eklenmeden önce ve sonra her örnek için ortalama PLT, eritrosit sayısı, MCV ve MPV hesaplandı.
Minimal invaziv enjeksiyon nedeniyle proliferatif glukoz tedavisi sırasında tam kanda bulunan trombositler genellikle hipertonik glukoza maruz kaldığından ve PRP'nin enjeksiyondan hemen önce hipertonik glukozla birleştirilmesi yaygın olmadığından, Bölüm 1'de hipertonik glukozun tam kanla kombinasyonunu incelemeye karar verdik. Üçüncü ve dördüncü aşamalarda, 20 gönüllü kan antikoagülanları için 7-8 ml ACD-A (trisodyum sitrat (22,0 g/l), sitrik asit (8,0 g/l) ve glukoz (24,5 g/l) içeren asit, dekstroz sitrat çözeltisi) bağışladı (Tablo 1). MPV'de artışla ilişkili eşik yüzdesini belirlemek için yalnızca %12,5'ten büyük glukoz karışımları kullanıldı. Üçüncü aşamada, bir test tüpüne 1 ml kan konuldu. Ardından, tüpe sırasıyla %15, %20 ve %25'lik nihai glikoz konsantrasyonları elde etmek için 1 ml %30, %40 veya %50 glikoz eklenerek kan, vorteks karıştırıcıda 10 saniye boyunca karıştırıldı. Glikozlu kan örnekleri, karıştırma işleminden hemen sonra ve 30 dakika boyunca her iki dakikada bir tekrarlanarak tam kan sayımı (CBC) için analiz edildi.
İlk karıştırma sırasında, 1:1 oranında hipertonik glikoz ve WB veya PRP eklenmesi, trombositleri birkaç saniye boyunca %25'in üzerinde konsantrasyonlara maruz bırakır. Dördüncü adımda, minimum başlangıç ​​tepe konsantrasyonlarıyla hipertonik glikozun etkisini değerlendirmek ve glikozun etkisinin üst sınırını test etmek için, D25W veya D50W'ye sadece az miktarda kan ekledik. Bir tüpe 1 ml D25W veya D50W koyun ve numuneyi 10 saniye boyunca vorteksleyerek 0,2 ml WB ekleyin. Bu durumlarda, kan, Faz 3'te olduğu gibi nihai konsantrasyonun %50 üzerinde değil, yaklaşık %20 üzerinde bir konsantrasyonda glikoza maruz bırakıldı ve sonuç olarak nihai glikoz konsantrasyonları %20,8 ve %41,6 oldu. Karıştırılmış numuneler, 3. adımda olduğu gibi aynı zaman aralığında analiz edildi.
Her glikoz seyreltme serisinin ilk adımında, pilot çalışma için uygun örneklem büyüklüğü olduğu için 30 örnek alındı ​​[9]. Her fazın sonunda (ilk faz dahil), bir popülasyonda sürekli sonuç değişkeninin ortalamasını tahmin etmek için gereken örneklem büyüklüğünü belirlemek için kullanılan formülü kullanarak örneklem büyüklüğünün yeterliliğini değerlendirin. Formül n = Z² x SD² /E². Bu denklemde Z, Z-skoru, SD standart sapma ve E istenen hatadır [10]. Alfa değerimiz 0,05 olup, bu da 1,96'lık bir Z değerine karşılık gelir ve %5'lik bir hata bekliyoruz. Bu nedenle n = (1,96² x SD²)/5² olarak hesaplıyoruz. Sonuçlar, her aşama için gereken örneklem büyüklüğünün toplanan gerçek sayıdan daha küçük olduğunu gösterdi.
1, 3 ve 4. dönemlerde birden fazla glikoz konsantrasyonu kullanıldığında, farklı glikoz konsantrasyonlarının etkisi, zaman 0 ile her bir sonraki zaman arasındaki kesirli değişim karşılaştırılarak analiz edildi (1. dönem 15 dakika, 3. dönem 15 dakika ve 4. dönem 15 saniye, ardından her iki dakikada bir). Her zaman dilimi için değişim oranları, verilerin Shapiro-Wilk normallik testi ile belirlendiği üzere normal dağılıma uymaması nedeniyle Mann-Whitney U testi kullanılarak karşılaştırıldı. Birinci, üçüncü ve dördüncü adımlarda (toplam beş) birkaç grubun (beş) 1'e 1 analizi yapıldığından, istenen alfa değerini ≤0,01 ancak ≤0,05 olmayacak şekilde ayarlamak için Bonferroni düzeltmesi uygulandı.
Hipertonik dekstrozun tüm konsantrasyonlarında trombosit sayısında azalma ve %12,5'in üzerindeki dekstroz konsantrasyonunda PRP trombositlerinde MPV'de artış: PRP trombosit sayıları, bazal tam kana kıyasla konsantrasyona bağlı olarak bir ila beş kat arttı (gösterilmemiştir). Hipertonik dekstrozun tüm konsantrasyonlarında trombosit sayısında azalma ve %12,5'in üzerindeki dekstroz konsantrasyonunda PRP trombositlerinde MPV'de artış: PRP trombosit sayıları, kullanılan yönteme bağlı olarak (gösterilmemiştir), bazal tam kana kıyasla konsantrasyona bağlı olarak bir ila beş kat arttı. Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы ve увеличение MPV в тромбоцитах PRP при концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз по сравнению с исходной цельной кровью, в зависимости yöntemden (hiçbir şekilde). Hipertonik dekstroz konsantrasyonlarının tümünde trombosit sayısında azalma ve >%12,5 dekstroz konsantrasyonunda PRP trombositlerinde MPV'de artış: PRP trombosit sayısı, kullanılan yönteme bağlı olarak, bazal tam kana kıyasla 1-5 kat arttı (gösterilmemiştir). ).在> 12.5%增加:与基线全血相比,PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍,因方法而异(未描述）。 %12,5'in üzerindeki glikoz konsantrasyonunda, yüksek glikoz konsantrasyonu kan sayısını azaltır, PRP kan MPV'si artar: bazal tam kan ile karşılaştırıldığında, PRP kan sayısı konsantrasyonun (açıklanmamış) 1 ila 5 katı kadar artar. Konut kredileri >12,5% ve konut kredileri için uygun krediler тромбоцитов, а MPV в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- 5 кратных концентраций по сравнению с исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (hiçbir описано). Glukoz konsantrasyonları >%12,5 olduğunda, tüm hipertansif glukoz konsantrasyonları trombosit sayısını azalttı ve PRP trombositlerinde MPV'yi artırdı: PRP trombosit sayısı, kullanılan yönteme bağlı olarak (açıklandığı gibi), bazal tam kan konsantrasyonlarına kıyasla 1 ila 5 kat arttı.Şekil 1, su ile seyreltme sonrasında trombosit sayısının yaklaşık %75 azaldığını ve farklı glikoz konsantrasyonlarıyla 15 dakika seyreltme sonrasında ise bazal PRP'ye ve hacim düzeltmesi yapılmış 1:1 seyreltmeye (hacim düzeltmesi ile 1- k1). k -1 üreme).1 üreme) kıyasla %20-30 azaldığını göstermektedir.
Her seyreltmedeki hücre sayısı, seyreltmeden önceki orijinal sayının bir kesri olarak ifade edilir.
MPV, PRP üretimi sırasında minimal düzeyde azaldı; su veya glikozda ( %25 PRP glikoz karışımları dahil) %12,5'lik seyreltme konsantrasyonlarında daha fazla değişiklik olmadı ve %50 glikoz çözeltisinde seyreltmeden sonra %20'den fazla arttı (Şekil 2). Buna karşılık, eritrositler H2O dışındaki herhangi bir seyreltmede hacimlerinde önemli bir değişiklik göstermedi.
Her seyreltmedeki hücrelerin ortalama hacmi, seyreltme öncesi orijinal hacmin yüzdesi olarak ifade edilir.
%50 glukoza maruz bırakılan (ve %25 glukoz ile formüle edilen) BC'de de benzer ancak daha az belirgin bir trombosit sayısında azalma ve CVR'de artış gözlemlendi. Tablo 2, %50 dekstrozda seyreltilmiş tam kandaki hücre sayılarını ve hücre hacimlerini, %50 dekstrozda seyreltilmiş faz 1 PRP verileriyle karşılaştırmaktadır. Kırmızı kan hücresi sayısındaki ve kırmızı kan hücresi MCV'sindeki değişiklikler belirgin değildi ve dikkatimizi bu konuya odaklamadık.
SD = standart sapma, MD = gruplar arasındaki ortalama fark, SE = ortalama farkın standart sapması, RBC = eritrositler, PLT = trombositler, PRP = trombosit açısından zengin plazma, WB = tam kan
WB'ye D50W eklendikten sonra, seyreltme oranına göre ayarlanmış trombosit kaybı yüzdesi %7,7 (310±73'e karşı 286±96) iken, D50W'de PRP seyreltmesinde bu oran %17,8 (664±348'e karşı 544±277) idi. MPV WB %16,8 artarken (10,1 ± 0,5'ten 11,8 ± 0,6'ya), MPV PRP %26 arttı (9,2 ± 0,8'e karşı 11,6 ± 0,7). Trombosit sayısındaki azalma ve MPV artışındaki ortalama farklılıklar PRP ile anlamlı derecede daha fazla olmasına rağmen, WB içindeki trombosit sayısındaki azalmadaki değişiklikler neredeyse anlamlıydı (310 ± 73'ten 286 ± 96'ya (%-7,7); p = 0,06) ve MPV'deki artış anlamlıydı (10,1 ± 0,5'ten 11,8 ± 0,6'ya (+16,8) p < 0,001). Trombosit sayısındaki azalma ve MPV artışındaki ortalama farklılıklar PRP ile anlamlı derecede daha fazla olmasına rağmen, WB içindeki trombosit sayısındaki azalmadaki değişiklikler neredeyse anlamlıydı (310 ± 73'ten 286 ± 96'ya (%-7,7); p = 0,06) ve MPV'deki artış anlamlıydı (10,1 ± 0,5'ten 11,8 ± 0,6'ya (+16,8) p < 0,001).Trombosit sayısındaki azalma ve CVR artışındaki ortalama farklılıklar PRP ile anlamlı derecede daha büyük olmasına rağmen, WB içindeki trombosit sayısındaki azalmadaki değişiklikler neredeyse anlamlıydı (310 ± 73'ten 286 ± 96'ya (%-7,7); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (10,1 ± 0,5 ila 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). MPV'deki artış anlamlıydı (10,1 ± 0,5'ten 11,8 ± 0,6'ya (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大,但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (%-7,7);p = 0,06）ve MPV的增加是显着的（10,1 ± 0,5 ve 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < .001).尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 但 内血小板 计数10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）。WB'deki trombosit sayısındaki azalmadaki değişim neredeyse anlamlıydı (310 ± 73'ten 286 ± 96'ya (%-7,7); p = 0,06), ancak PRP'de trombosit sayısındaki azalma ve MPV artışında anlamlı derecede daha büyük ortalama farklar vardı ve MPV'deki artış anlamlıydı.(10,1 ± 0,5 ila 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (10.1 ± 0.5'ten 11.8 ± 0.6'ya (+16.8) p < 0.001).
MPV'de anlamlı bir değişiklik görmek için %20'lik bir son glikoz konsantrasyonu gerekiyordu, ancak MPV'deki değişiklik %25'lik son konsantrasyonda daha belirgindi. Trombosit kaybı, ilk düşüşten sonra stabilize oldu. CVR'de başlangıçta keskin bir düşüş gözlemledik, ancak CVR, %25'lik son glikoz konsantrasyonunda hızla eski haline döndü; bu, %20 ve %15'lik son glikoz konsantrasyonlarında gözlemlenen CVR seviyelerinden anlamlı derecede daha yüksekti (Şekil 3 ve Tablo 3'ün solunda; gölgeli kutular, 0,01'lik Bonferroni düzeltmesiyle p-değerlerini ≤ alfa olarak gösterir). Ayrıca, 0-15 saniyelik ilk fazda gözlemlenen ve daha sonra sabit kalan (15 saniyeden 30 dakikaya kadar; Tablo 4'ün solunda) PLT sayısında da başlangıçta keskin bir düşüş oldu.
Tam kana çeşitli konsantrasyonlarda glikoz eklenmesi, MPV'de başlangıçta hızlı bir düşüşe ve ardından konsantrasyona bağlı olarak %20'den fazla bir iyileşmeye neden oldu. Açıklamada seyreltme sonrası glikoz konsantrasyonu gösterilmektedir. D15, D20 ve D25 1:1 seyreltme ile, D21 ve D41 ise 1:5 seyreltme ile gerçekleştirilmiştir.
Tablo 4, hipertonik glukozda seyreltildiğinde trombosit sayısındaki değişimi göstermektedir. 1:1 seyreltme ve 1:5 seyreltmede trombosit sayısındaki ani düşüş arasında doza bağımlı bir ilişki gözlemledik. 1:1 seyreltmeleri tek bir grup olarak 1:5 seyreltmelerle karşılaştırdığımızda, 1:1 grubunda trombosit sayısındaki ani düşüş 1:5 grubuna göre daha azdı (66±48.000 (%23) karşılık 99±69.000 (%37), p = 0,014). İlk ölçüm noktasındaki ilk düşüşten sonra, glukozun yüzdesi olarak trombosit sayısı stabilize oldu (Şekil 4).
Tam kan, glikoza 1:1 oranında eklendiğinde trombosit sayısı yaklaşık %25 oranında azalır. Ancak, tam kan 1:5 oranında eklendiğinde azalma çok daha fazla, yaklaşık %50 olmuştur.
%41 glikoz, MPV'yi %25 veya %21'e göre daha hızlı ve daha belirgin bir şekilde artırdı. MPV sonuçları Şekil 3'te gösterilmiştir. Diğer tüm seyreltmelerde, %50 glikoz ilavesinden sonra MPV'de ani bir ilk azalma gözlenmedi. %25 glikoz kullanıldığında (son seyreltmede glikoz konsantrasyonu %20,8), MPV'deki değişim, 1:1 seyreltmede %20 glikozdaki değişime benzerdi (Şekil 3). MPV'deki değişimler başlangıçta %41 karışım konsantrasyonunda %25'e göre daha büyük olsa da, 16 dakika sonra %41 ve %25 arasındaki MPV farkı artık anlamlı değildi (Tablo 3, sağ). Ayrıca, %25 glikozun MPV'yi %20,8'den daha etkili bir şekilde artırması da ilginçtir.
Bu in vitro çalışma hipotezimizi kısmen doğruladı. Bu çalışma, dekstroz ilavesiyle kısmi trombosit lizisine yol açabileceğini, trombositlerin aşırı hipertonisiteye hızla uyum sağladığını ve %25'in üzerindeki hipertonik dekstroz konsantrasyonlarına yanıt olarak MPV'de önemli bir artış olduğunu göstermiştir. Bu çalışma, dekstroz ilavesiyle kısmi trombosit lizisine yol açabileceğini, trombositlerin aşırı hipertonisiteye hızla uyum sağladığını ve %25'in üzerindeki hipertonik dekstroz konsantrasyonlarına yanıt olarak MPV'de önemli bir artış olduğunu göstermiştir. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодацию тромбоцитов до экстремального гипертонуса ve значительное повышение MPV в ответ на гипертоническую концентрацию deкстрозы > %25. Dekstroz ile kısmi trombosit lizisine, aşırı hipertonisiteye hızlı trombosit adaptasyonuna ve %25'in üzerindeki hipertonik dekstroz seviyelerine yanıt olarak MPV'de önemli bir artışa neden olabileceği gösterilmiştir.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> %25'i MPV'ye aktarılıyor.它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 极端 高渗 , 以及响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。. Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой, быструю адаптацию тромбоцитов к экстремальному гипертонусу ve значительное увеличение MPV в ответ на концентрацию гипертонической глюкозы > %25. Bu çalışma, glikoz karışımları tarafından kısmi trombosit lizisine yol açma potansiyelini, aşırı hipertonisiteye hızlı trombosit adaptasyonunu ve %25'in üzerindeki hipertonik glikoza yanıt olarak MPV'de önemli bir artışı göstermektedir.İlk artış, %41,6 glikoz maruziyetinde maksimum seviyeye ulaştı, ancak MPV'deki artış, maruziyetten yaklaşık 20 dakika sonra %25 glikoz maruziyetine yaklaştı.
Trombosit konsantrasyonu glikozdan etkilenir. Glikozun tüm seyreltmelerinde trombosit miktarının azaldığını fark ettik. PRP serisinin H2O (%0) seyreltmelerinde trombosit sayısındaki keskin düşüş, ozmotik lizis ile ilişkili olabilir. Alternatif olarak, bu trombosit kümelenmesinden kaynaklanan bir artefakt olabilir, ancak bu, bu seyreltmede MPV değişikliğinin olmamasıyla çelişmektedir. Bu bulgu, bazı trombositlerin hipoosmolariteye karşı çok hassas olduğu anlamına gelir.
Glukozun tüm 1:1 seyreltmelerinde, D5W'de (252 mOsm'de hipotonik) bile trombosit miktarı %20-30 oranında azaldı; bu, glukozun spesifik ozmotik olmayan bir etkisine işaret edebilir, çünkü hem trombosit hem de MPV, glukoz konsantrasyonunun D5W'den D25W'ye üç kat artmasına rağmen değişmeden kaldı. Aslında, trombosit konsantrasyonları artan ozmolarite ile hafifçe artma eğilimindeydi.
1:1 ve 1:5 seyreltmeler arasındaki trombosit sayısındaki azalma, çözünme etkisinin başlangıç ​​ve son glikoz konsantrasyonuna bağlı olduğunu göstermektedir. Eğer sadece başlangıç ​​konsantrasyonuna bağlı olsaydı, 1:1 konsantrasyonlar arasında trombosit azalmasında bir fark görmeyi beklerdik. Ama görmüyoruz. Eğer lizis etkisi sadece son glikoz konsantrasyonuna bağlı olsaydı, %20'lik 1:1 seyreltme ile %20,8'lik 1:5 seyreltme arasında çok fazla fark beklemezdik. Yine de bunu başardık.
Trombosit lizisi nedeniyle trombosit kaybı meydana gelirse, kısmi bir lizat oluşur ve ardından sitokinler ve büyüme faktörleri hücre dışı ortama salınır. Birçok çalışma, trombosit lizatının proliferasyon çözümü olarak PRP kadar etkili olduğunu göstermiştir [11]. PRP'nin kendisinin de proliferasyon tedavisinde etkili bir çözüm olduğu gösterilmiştir [12-14].
İnaktif trombositler, çeşitli iç yapılarla güçlendirilmiş bir disk şeklinde dolaşır. Aktivasyon sırasında, daha küresel veya amip benzeri bir şekil alırlar ve bu da hacim artışına neden olur. Hacim artışı, açık tübül sisteminin (OCS) ekstrüzyonu ve membrana ekzositik granüllerin eklenmesi sonucu oluşan yüzey alanında bir artışı gerektirir. Hipertonik glikozun neden olduğu MPV artışının bu mekanizmalardan birini mi yoksa her ikisini mi içerdiği henüz belirlenmemiştir, ancak ikincisi ise, MPV'deki artış degranülasyonu gösterir.
Bu çalışma, PRP veya tam kan trombositlerinin yüksek glikoz konsantrasyonlarına maruz kalmasının, sırasıyla %25 ve %41,6 glikoz konsantrasyonlarında 15 dakika içinde MPV'de artışa neden olduğunu göstermiştir.
Trombosit MPV'sindeki artış, kalsiyum akışına yanıt olarak çevredeki mikrotübül yumaklarının genişlemesinden kaynaklanıyor olabilir. Liu ve ark. Glukozun, trombosit TRPC6 kanalı aracılığıyla kalsiyum akışına aracılık ettiği gösterilmiştir [6]. Hipotezimiz, glukozun mikrotübül yumaklarının gevşemesine neden olarak MPV'de artışa ve trombosit duyarlılığının ve/veya aktivasyonunun artmasına yol açtığıdır. Bununla birlikte, sonuçlarımıza bakılırsa, bu hikayenin sadece bir parçasıdır. Testlerimizde, D25W'nin altındaki hiçbir konsantrasyon MPV'de artışa neden olmadı. %12,5 ile %25 arasındaki glukoz konsantrasyonlarına maruz kalmayı test etmediğimiz göz önüne alındığında, faz 1 sonuçlarımız, bu glukoz konsantrasyon aralığında MPV'de artışa yol açan bir eşik olabileceğini düşündürmektedir. 3. ve 4. aşamalardaki daha ileri testler, %20-25 glukozun bunun için eşik olduğunu gösterdi, ancak bunun neden olduğu hala belirsizdir.
Santrifüj işleminden sonra MPV'de yaklaşık %9'luk bir azalma da gözlemledik. MPV'deki bu azalmanın, santrifüjün eritrosit tabakasında hapsolmuş daha büyük ve daha yoğun trombositlerden kaynaklanıp kaynaklanmadığı net değildir. Bu gözlem, PRP trombositlerinin tam kan trombositlerinin daha küçük ve daha az yoğun bir alt kümesi olduğunu ima edebileceğinden, klinisyenler için önemli olabilir.
Önceki bir çalışmada, manuel yöntemlerle PRP hazırlamanın ucuz olduğunu gösterdik [8]. Eğer glikoz doku trombositlerini veya PRP'yi duyarlı hale getirerek aktivasyona daha yatkın hale getirirse veya PRP kısmi lizat özellikleriyle üretilirse, bu rejenerasyonu artırabilir ve tedavi ihtiyacını azaltabilir. Bu nedenle, PRP ve yüksek konsantrasyonlu glikozun kombinasyonu, tek başına PRP veya glikozdan daha uygun maliyetli olabilir.
Çalışmamızın birkaç eksikliği bulunmaktadır. Birincisi, farklı yöntemlerle elde edilen PRP'yi kullandık. Bu, çelişkili sonuçlara yol açabilir. İkincisi, trombosit aktivasyonunun gerçekleşip gerçekleşmediğini daha doğru bir şekilde belirlemek için örneklerimizin hiçbirinde biyokimyasal analiz yapamadık. Alfa granül degranülasyonunun derecesini veya varlığını daha iyi anlamak için P-selektin, trombosit faktör 4, monositik trombosit agregatları veya diğer trombosit aktivasyon belirteçlerini ölçmek isterdik, ancak bu çalışmanın kapsamı dışındadır. Üçüncüsü, glukoza maruz kalan trombositlerdeki MPV artışının mikrotübül yumakları üzerindeki etkiden kaynaklandığını elektron mikroskobu veya diğer yöntemlerle doğrulayamadık.
WB veya PRP'nin %25 glukoz ile karışımları MPV'yi artırarak trombosit aktivasyonunun başlangıcını işaret etti, ancak bu çalışma agregasyon veya degranülasyonun ilerlemesini göstermedi. Hipertonik glukoz karışımı trombosit kaybına neden oldu, bu da muhtemelen litik bir etkiyi temsil etmektedir. Trombositlerin kısmi aktivasyonu veya lizisi, trombosit enjeksiyonundan sonra doku rejenerasyonuna neden olabilir. Bu değişikliklerin hangi klinik sonuçlara yol açabileceği net değildir. Daha ileri çalışmalar, aktivasyon veya lizisin daha doğru ölçümlerini göstermiş ve WB veya PRP ile hipertonik glukoz karışımlarının farklı klinik etkilerini değerlendirmiştir.
Glukoz proliferatif tedavisi, hızla yaygınlaşan ve klinik araştırmaları destekleyen basit ve ucuz bir rejeneratif tedavi yöntemidir. Bu çalışma, doğrulanması halinde proliferatif tedavinin rejeneratif mekanizmasının bir bölümünü anlamamıza yardımcı olabilecek fizyolojik bir mekanizma önermektedir.
Missouri Üniversitesi, Kansas City Tıp Fakültesi, Biyomedikal ve Sağlık Bilişimi Bölümü, Kansas City, ABD
İnsan Denekler: Bu çalışmaya katılan tüm katılımcılar onay vermiş veya vermemiştir. Uluslararası Hücresel Tıp Derneği (ICMS) ICMS-2017-003 numaralı onayı vermiştir. Aşağıdaki protokol, Uluslararası Hücresel Tıp Derneği Kurumsal İnceleme Kurulu tarafından daha fazla kullanım için onaylanmıştır: Başlık: Temel CBC trombosit sayısına dayalı trombosit açısından zengin plazma ilaç veriminin hesaplanması. Hayvan Denekler: Tüm yazarlar, bu çalışmada hiçbir hayvan veya dokunun yer almadığını doğrulamıştır. Çıkar Çatışmaları: ICMJE Tekdüzen Açıklama Formuna uygun olarak, tüm yazarlar aşağıdakileri beyan eder: Ödeme/hizmet bilgileri: Tüm yazarlar, sunulan çalışma için herhangi bir kuruluştan mali destek almadıklarını beyan eder. Mali İlişkiler: Tüm yazarlar, sunulan çalışmayla ilgilenebilecek herhangi bir kuruluşla şu anda veya son üç yıl içinde mali ilişkilerinin olmadığını beyan eder. Diğer İlişkiler: Tüm yazarlar, sunulan çalışmayı etkileyebilecek başka hiçbir ilişki veya faaliyetin olmadığını beyan eder.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K ve diğerleri (17 Mayıs 2022) Glikozun trombosit sayısı ve hacmi üzerindeki etkisi: rejeneratif tıp için çıkarımlar. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Telif hakkı 2022 Harrison ve diğerleri. Bu, Creative Commons Attribution Lisansı CC-BY 4.0 koşulları altında dağıtılan açık erişimli bir makaledir. Orijinal yazar ve kaynağın belirtilmesi koşuluyla, herhangi bir ortamda sınırsız kullanım, dağıtım ve çoğaltmaya izin verilir.