“Twijfel er nooit aan dat een kleine groep bedachtzame, toegewijde burgers de wereld kan veranderen. Sterker nog, het is de enige groep die dat kan.”
De missie van Cureus is om het aloude model van medische publicaties te veranderen, waarin het indienen van onderzoek duur, complex en tijdrovend kan zijn.
Bloedplaatjesrijk plasma/PRP, weefselregeneratie, bloedplaatjesactivering, glucoseproliferatietherapie, bloedplaatjes, proliferatietherapie
Citeer dit artikel als: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17 mei 2022) Het effect van glucose op het aantal en volume van bloedplaatjes: implicaties voor regeneratieve geneeskunde. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Bloedplaatjesrijk plasma (PRP) en hypertone glucoseoplossingen worden vaak gebruikt voor injectie in de regeneratieve geneeskunde, soms in combinatie. Het effect van hypertone glucose op de lysis en activering van bloedplaatjes is niet eerder beschreven. Wij hebben het effect van verhoogde glucoseconcentraties op het aantal bloedplaatjes en erytrocyten, evenals op het celvolume, in PRP en volbloed (WB) onderzocht. Bij alle glucosemengsels gemengd met PRP of volbloed trad een snelle, gedeeltelijke afname van het aantal bloedplaatjes op, wat consistent is met gedeeltelijke lysis. Na de eerste minuut bleef het aantal bloedplaatjes stabiel, wat erop wijst dat de resterende bloedplaatjes zich snel aanpasten aan de extreme hypertoniciteit (>2000 mOsm). Na de eerste minuut bleef het aantal bloedplaatjes stabiel, wat erop wijst dat de resterende bloedplaatjes zich snel aanpasten aan de extreme hypertoniciteit (>2000 mOsm). Als u een van de beste manieren vindt om dit te doen, kunt u dit doen быструю аккомодацию остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Na de eerste minuut bleef het aantal bloedplaatjes stabiel, wat wijst op een snelle aanpassing van de resterende bloedplaatjes aan de extreme hypertoniciteit (>2000 mOsm).2000 mOsm）高渗状态。2000 mOsm）高渗状态。 Als u een van de beste manieren vindt om dit te doen, kunt u dit doen быструю адаптацию остаточных тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. Na de eerste minuut bleef het aantal bloedplaatjes stabiel, wat wijst op een snelle aanpassing van de resterende bloedplaatjes aan de extreme (>2000 mOsm) hyperosmolare toestand.Glucoseconcentraties van 25% en hoger resulteerden in een significante toename van het gemiddelde plaatjesvolume (MPV), wat wijst op een vroeg stadium van plaatjesactivering. Verder onderzoek is nodig om te bepalen of plaatjeslysis of -activering optreedt en of injectie met hypertonische glucose, al dan niet in combinatie met PRP, aanvullende klinische voordelen kan opleveren.
In de jaren vijftig ontdekte de Amerikaanse chirurg George Hackett dat hij bij veel patiënten gewrichts- en rugpijn permanent kon verlichten door een proliferatieve oplossing in pezen en ligamenten te injecteren. Zijn experimenten met konijnen toonden aan dat de behandeling, die hij proliferatieve therapie noemde, ervoor zorgde dat de pezen groter en sterker werden. Histologisch onderzoek heeft bevestigd dat er tijdens dit proces nieuw collageen wordt geproduceerd [1].
In de eerste decennia werden veel verschillende toedieningsmethoden uitgeprobeerd. Tegen de jaren negentig beschouwden de meeste artsen hoge glucoseconcentraties als de veiligste en meest effectieve methode. Het werkingsmechanisme blijft echter onduidelijk.
Na het werk van Hackett werden er in de 20e eeuw weinig klinische studies uitgevoerd. In de jaren 2000 ontstond er echter hernieuwde belangstelling en werden er verschillende succesvolle klinische onderzoeken naar proliferatieve therapie afgerond voor de behandeling van lage rugpijn [2], artrose van de knie [3] en laterale epicondylitis [4].
Weefselregeneratie vereist de deelname van stamcellen. Daarom moeten hoge glucoseconcentraties op de een of andere manier de migratie, replicatie en differentiatie van stamcellen stimuleren. We veronderstellen dat bloedplaatjes als boodschappers kunnen fungeren en dat hoge glucoseconcentraties ertoe kunnen leiden dat bloedplaatjes cytokinen en groeifactoren afgeven, waardoor regeneratieve processen worden bevorderd, met name de migratie van stamcellen naar gebieden met hoge glucoseconcentraties.
De activering van bloedplaatjes gaat altijd vooraf aan een toename van intracellulair calcium [5]. Liu et al. toonden in 2008 aan dat hoge glucoseconcentraties de activiteit van transient receptor potential canonical type 6 (TRPC6)-kanalen in het plasmamembraan verhogen, wat leidt tot een influx van calciumionen in bloedplaatjes [6]. Een andere studie toonde aan dat blootstelling van de marginale zone van de microtubuli aan calciumionen ontspanning, expansie en vervorming van de marginale zone veroorzaakt, wat op zijn beurt een verandering in vorm teweegbrengt van schijfvormig naar bolvormig, resulterend in een gemiddeld bloedplaatjesvolume (MPV) [7].
Onze hypothese in deze studie is dat blootstelling van bloedplaatjes aan hoge glucoseconcentraties de marginale zone van de microtubuli en het intracellulaire milieu beïnvloedt, wat leidt tot een toename van het MPV (microtubule marginal volume).
Alle deelnemers ondertekenden een formulier voor geïnformeerde toestemming nadat de details van het onderzoek waren uitgelegd en voordat ze de monsters ontvingen. In dit onderzoek werden alleen PRP-monsters met een hematocriet van meer dan 2% gebruikt, zodat het aantal erytrocyten (erytrocyten) en het gemiddelde corpusculaire volume van rode bloedcellen (MCV) ter vergelijking konden worden meegenomen.
Het onderzoek werd in vier fasen uitgevoerd. De eerste fase betrof PRP en de resterende fasen betroffen volbloed (Tabel 1). Zoals eerder beschreven [8], werden alle relatieve centrifugale krachten (RCF, g-kracht) berekend vanuit het middelpunt (Rmid, in cm) van de bloedkolom in de centrifugespuit. We kozen ervoor om MPV te gebruiken als marker voor plaatjessensibilisatie en het aantal plaatjes als indicator voor mogelijke plaatjeslysis. Beide kunnen eenvoudig worden gemeten met standaard hematologische analyzers.
In de eerste fase doneerden 47 vrijwilligers bloedmonsters: één buisje met ethyleendiaminetetraazijnzuur (EDTA) en één PRP-volbloedmonster (geanticoaguleerd met natriumcitraat (NaCl, 3%)) (Tabel 1). Plaats de schudder onmiddellijk in het buisje. Een volledig bloedbeeld (CBC) werd in drievoud uitgevoerd op de EDTA-monsters, en de NaCl-monsters werden in drievoud geanalyseerd voor CBC-analyse. Vervolgens werd PRP bereid volgens verschillende hierboven beschreven methoden [8]. Alle PRP-monsters werden bereid door centrifugatie bij 900-1000 g. Meng elk PRP-monster 5-10 seconden met een vortexmixer en verdeel vervolgens vijf porties van 0,5 ml over de buisjes.
Om het effect van blootstelling aan bloedplaatjes op verhoogde glucoseconcentraties te evalueren, werden gelijke hoeveelheden (0,5 ml) van 0%, 5%, 12,5%, 25% en 50% glucose in water gemengd met bloedplaatjesmonsters om concentraties van 0%, 2,5%, 6,25%, 12,5% en 25% van het glucosemengsel te verkrijgen. De buizen werden vervolgens 15 minuten lang geschud op een reageerbuisapparaat. De totale antigeenconcentratie (TAC) van elk mengsel werd na 15 minuten in drievoud geanalyseerd. Het aantal bloedplaatjes (PLT), het aantal rode bloedcellen (RBC), de gemiddelde celvolume (MCV) en het gemiddelde celvolume (MPV) werden voor elke buis gemiddeld. Vervolgens werden de gemiddelde waarden voor het aantal bloedplaatjes, het aantal rode bloedcellen, de MCV en de MPV berekend voor alle PRP-monsters.
Na de eerste fase van de gegevensverzameling constateerden we een significante toename van het bloedplaatjesvolume in PRP-bloedplaatjes na toevoeging van D50W. PRP-bloedplaatjes vertegenwoordigen niet noodzakelijkerwijs alle bloedplaatjes in het bloed, en het PRP-medium verschilt van het WB-medium. Daarom besloten we een tweede fase van het onderzoek uit te voeren naar het effect van de toevoeging van D50W aan volbloed.
Voor de tweede ronde kozen we een steekproefomvang van 30 op basis van de resultaten van de eerste reeks, zoals beschreven in de sectie Analyse. In deze reeks doneerden 20 vrijwilligers bloedmonsters (Tabel 1). Volbloed (1,8 ml) werd afgenomen met een spuit van 3 ml en geanticoaguleerd met 0,2 ml 40% NaCl. De volbloedspuit werd vijf seconden gemengd met een vortexmixer en het complete bloedbeeld (CBC) werd in drievoud geanalyseerd. Na analyse werd aan het geanticoaguleerde bloed 2 ml 50% glucose toegevoegd in een spuit van 5 ml (de uiteindelijke glucoseconcentratie was ongeveer 25% (D25)) en gedurende 30 minuten in een schudbuis geplaatst. Na 30 minuten werden de D25/CBC in de volbloedspuiten in drievoud geanalyseerd. Het aantal bloedplaatjes, het aantal rode bloedcellen, de MCV en de MPV per spuit werden gemiddeld, en de gemiddelde waarden voor bloedplaatjes, rode bloedcellen, MCV en MPV werden berekend voor elk monster vóór en na toevoeging van glucose.
Omdat bloedplaatjes in volbloed tijdens proliferatieve glucosetherapie vaak worden blootgesteld aan hypertonische glucose vanwege de minimaal invasieve injectie, en het niet gebruikelijk is om PRP vlak voor de injectie te combineren met hypertonische glucose, hebben we besloten om hypertonische glucose in combinatie met volbloed te bestuderen in paragraaf 1, stap drie en vier. In elke fase doneerden 20 vrijwilligers 7-8 ml ACD-A (zuur dat trinatriumcitraat (22,0 g/l), citroenzuur (8,0 g/l) en glucose (24,5 g/l) bevat, en dextrosecitraatoplossing) als bloedanticoagulans (tabel 1). Alleen mengsels met een glucosegehalte hoger dan 12,5% werden gebruikt om het drempelpercentage te bepalen dat geassocieerd is met een toename van MPV. In de derde fase wordt 1 ml bloed in een reageerbuisje gedaan. Meng vervolgens het bloed gedurende 10 seconden met een vortexmixer door 1 ml 30%, 40% of 50% glucose aan het buisje toe te voegen, zodat een uiteindelijke glucoseconcentratie van respectievelijk 15%, 20% en 25% wordt verkregen. De glucosebloedmonsters werden direct na het mengen geanalyseerd op een volledig bloedbeeld (CBC) en dit werd elke twee minuten gedurende 30 minuten herhaald.
Tijdens de eerste mengfase wordt door de toevoeging van een 1:1 mengsel van hypertone glucose en volbloed (WB) of PRP de bloedplaatjes gedurende enkele seconden blootgesteld aan concentraties boven de 25%. In de vierde stap, om het effect van hypertone glucose met minimale initiële piekconcentraties te evalueren en de bovengrens van het glucose-effect te testen, voegden we slechts een kleine hoeveelheid bloed toe aan D25W of D50W. Doe 1 ml D25W of D50W in een buisje en voeg 0,2 ml WB toe terwijl het monster gedurende 10 seconden wordt gevortexd. In deze gevallen werd het bloed blootgesteld aan glucose met een concentratie die ongeveer 20% hoger was dan de uiteindelijke concentratie, in plaats van 50% hoger dan de uiteindelijke concentratie zoals in fase 3, wat resulteerde in uiteindelijke glucoseconcentraties van 20,8% en 41,6%. Gemengde monsters werden geanalyseerd met hetzelfde tijdsinterval als in stap 3.
In de eerste stap van elke glucoseverdunningsreeks werden 30 monsters genomen, aangezien dit de geschikte steekproefomvang was voor de pilotstudie [9]. Aan het einde van elke fase (inclusief de eerste fase) werd de adequaatheid van de steekproefomvang geëvalueerd met behulp van de formule die gebruikt wordt om de benodigde steekproefomvang te bepalen voor het schatten van het gemiddelde van de continue uitkomstvariabele in één populatie. Formule n = Z² x SD² / E². In deze vergelijking is Z de Z-score, SD de standaarddeviatie en E de gewenste fout [10]. Onze alfa is 0,05, wat overeenkomt met een Z-waarde van 1,96, en we verwachten een fout van 5 (in procenten). Daarom lossen we op voor n = (1,96² x SD²) / 52. De resultaten toonden aan dat de vereiste steekproefomvang voor elke fase kleiner was dan het werkelijke aantal verzamelde monsters.
Tijdens de perioden 1, 3 en 4, waarbij meer dan één glucoseconcentratie werd gebruikt, werd het effect van de verschillende glucoseconcentraties geanalyseerd door de fractionele verandering te vergelijken tussen tijdstip 0 en elk volgend tijdstip (fase 1 na 15 minuten, periode 3 na 15 minuten en 4 na 15 seconden, en vervolgens elke twee minuten). De veranderingssnelheden voor elke tijdsperiode werden vergeleken met behulp van de Mann-Whitney U-test, omdat de gegevens geen normale verdeling volgden, zoals vastgesteld door de Shapiro-Wilk normaliteitstest. Aangezien in de eerste, derde en vierde stap (vijf in totaal) een één-op-één-analyse van verschillende groepen (vijf) werd uitgevoerd, werd een Bonferroni-correctie toegepast om de gewenste alfa-waarde aan te passen tot ≤0,01, maar niet ≤0,05.
Vermindering van het aantal bloedplaatjes bij alle concentraties hypertone dextrose en een toename van MPV in PRP-bloedplaatjes bij een dextroseconcentratie van >12,5%: het aantal bloedplaatjes in PRP steeg met een tot vijf keer de concentratie ten opzichte van volbloed bij aanvang, afhankelijk van de gebruikte methode (niet weergegeven). Verlaging van het aantal bloedplaatjes bij alle concentraties hypertone dextrose en een toename van MPV in PRP-bloedplaatjes bij een dextroseconcentratie van >12,5%: het aantal bloedplaatjes in PRP steeg met een tot vijf keer de concentratie ten opzichte van volbloed bij aanvang, afhankelijk van de gebruikte methode (niet weergegeven). Gebruik een van de beste manieren om uw geld te verdienen en MPV-apparaat in PRP-apparaat percentages > 12,5%: waarde van de PRP-waarde in 1-5 stappen met een waarde van 1-5% цельной кровью, in зависимости от метода (niet показано). Een verlaagd aantal bloedplaatjes bij alle hypertone dextroseconcentraties en een verhoogd MPV in PRP-bloedplaatjes bij een dextroseconcentratie van >12,5%: het aantal bloedplaatjes in PRP nam 1-5 keer toe ten opzichte van de uitgangswaarde in volbloed, afhankelijk van de methode (niet weergegeven). ).MPV > 12,5%增加:与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未描述）。 Bij een glucoseconcentratie van >12,5% verlaagt de hoge glucoseconcentratie het aantal bloedcellen, terwijl de MPV van het PRP-bloed toeneemt: vergeleken met de normale bloedwaarden neemt het aantal bloedcellen in het PRP-bloed toe met een factor 1 tot 5, afhankelijk van de concentratie (niet beschreven). Hogere rentepercentages >12,5% een MPV-apparaat in PRP: PRP-systeem met 1- tot 5-componenten vermogen исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (niet описано ). Bij glucoseconcentraties >12,5% verlaagden alle hypertensieve glucoseconcentraties het aantal bloedplaatjes en verhoogden ze de MPV in PRP-bloedplaatjes: het aantal PRP-bloedplaatjes nam 1 tot 5 keer toe in vergelijking met de uitgangswaarden in volbloed, afhankelijk van de methode (zoals beschreven).Figuur 1 laat zien dat het aantal bloedplaatjes met bijna 75% afnam na verdunning in water en met 20-30% na 15 minuten verdunning met verschillende glucoseconcentraties, vergeleken met de basislijn PRP en een 1:1 verdunning gecorrigeerd voor volume (1- k1 met volumecorrectie). k -1 breeding).
Het aantal cellen in elke verdunning wordt uitgedrukt als een fractie van het oorspronkelijke aantal vóór de verdunning.
Het MPV nam minimaal af tijdens de PRP-productie, zonder verdere verandering in de verdunningsconcentraties tot 12,5% in water of glucose (inclusief 25% PRP-glucosemengsels), en nam met meer dan 20% toe na verdunning in een 50% glucoseoplossing (Fig. 2). Daarentegen vertoonden erytrocyten geen significante volumeverandering bij enige verdunning behalve in H2O.
Het gemiddelde celvolume in elke verdunning wordt uitgedrukt als een percentage van het oorspronkelijke volume vóór verdunning.
Een vergelijkbare, maar minder uitgesproken afname van het aantal bloedplaatjes en een toename van de CVR werden waargenomen in BC blootgesteld aan 50% glucose (om te formuleren met 25% glucose). Tabel 2 vergelijkt het aantal cellen en het celvolume in volbloed verdund in 50% dextrose met fase 1 PRP-gegevens verdund in 50% dextrose. Veranderingen in het aantal rode bloedcellen en het MCV van rode bloedcellen waren niet duidelijk en vormden niet het focuspunt van onze aandacht.
SD = standaarddeviatie, MD = gemiddeld verschil tussen groepen, SE = standaarddeviatie van het gemiddelde verschil, RBC = erytrocyten, PLT = bloedplaatjes, PRP = plaatjesrijk plasma, WB = volbloed
Na toevoeging van D50W aan WB bedroeg het percentage voor verdunning gecorrigeerde bloedplaatjesverlies 7,7% (310±73 versus 286±96), vergeleken met 17,8% voor PRP-verdunning in D50W (664±348 versus 544±277). De MPV van WB nam toe met 16,8% (van 10,1 ± 0,5 tot 11,8 ± 0,6), terwijl de MPV van PRP toenam met 26% (9,2 ± 0,8 versus 11,6 ± 0,7). Hoewel de gemiddelde verschillen in zowel de afname van het aantal bloedplaatjes als de toename van de MPV significant groter waren bij PRP, waren de veranderingen in de afname van het aantal bloedplaatjes binnen WB bijna significant (310 ± 73 tot 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) en was de toename van de MPV significant (10,1 ± 0,5 tot 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Hoewel de gemiddelde verschillen in zowel de afname van het aantal bloedplaatjes als de toename van de MPV significant groter waren bij PRP, waren de veranderingen in de afname van het aantal bloedplaatjes binnen WB bijna significant (310 ± 73 tot 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) en was de toename van de MPV significant (10,1 ± 0,5 tot 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Hoewel de gemiddelde verschillen in zowel de afname van het aantal bloedplaatjes als de toename van de CVR significant groter waren bij PRP, waren de veranderingen in de afname van het aantal bloedplaatjes binnen WB bijna significant (310 ± 73 tot 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).увеличение MPV-kwaliteit (van 10,1 ± 0,5 tot 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). De toename in MPV was significant (van 10,1 ± 0,5 naar 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB MPV (310 ± 73 ± 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < .001)尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 , 但 但 内血小板 计数减少 的 几乎 是 显着 的 (（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%); p = .06）和MPV 的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）。De verandering in de afname van het aantal bloedplaatjes in het volbloed was bijna significant (van 310 ± 73 naar 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), hoewel PRP significant grotere gemiddelde verschillen vertoonde in de afname van het aantal bloedplaatjes en de toename van MPV. De toename van MPV was significant.(van 10,1 ± 0,5 tot 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (van 10,1 ± 0,5 tot 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Een eindconcentratie van 20% glucose was nodig om een ​​significante verandering in MPV te zien, maar de verandering in MPV was meer uitgesproken bij een eindconcentratie van 25%. Het bloedplaatjesverlies stabiliseerde na de aanvankelijke daling. We constateerden een aanvankelijk scherpe daling van de CVR, maar de CVR herstelde zich snel bij een eindconcentratie van 25% glucose, wat significant hoger was dan de CVR-waarden die werden waargenomen bij eindconcentraties van 20% en 15% glucose (Figuur 3 en links van Tabel 3; gearceerde vakjes. p-waarden ≤ alfa met een Bonferroni-correctie van 0,01). Er was ook een aanvankelijk scherpe daling van het aantal bloedplaatjes, waargenomen in de beginfase van 0-15 seconden, waarna het stabiel bleef (van 15 seconden tot 30 minuten; links van tabel 4).
Toevoeging van verschillende glucoseconcentraties aan volbloed resulteerde in een aanvankelijke snelle daling van het MPV, gevolgd door een concentratieafhankelijk herstel van meer dan 20%. De legenda toont de glucoseconcentratie na verdunning. D15, D20 en D25 werden uitgevoerd met een verdunning van 1:1. D21 en D41 werden uitgevoerd met een verdunning van 1:5.
Tabel 4 toont de verandering in het aantal bloedplaatjes bij verdunning in hypertonische glucose. We observeerden een dosisafhankelijke relatie tussen de onmiddellijke daling van het aantal bloedplaatjes bij een verdunning van 1:1 en bij een verdunning van 1:5. Bij vergelijking van de 1:1-verdunningen als één groep met de 1:5-verdunningen, vertoonde de 1:1-groep een kleinere onmiddellijke daling van het aantal bloedplaatjes dan de 1:5-groep: 66 ± 48.000 (23%) versus 99 ± 69.000 (37%) (p = 0,014) in de 1:5-groep. Na een aanvankelijke daling bij het eerste meetpunt stabiliseerde het aantal bloedplaatjes als percentage van de glucose (Fig. 4).
Wanneer volbloed in een verhouding van 1:1 aan glucose wordt toegevoegd, neemt het aantal bloedplaatjes met ongeveer 25% af. Bij een verhouding van 1:5 was de afname echter veel groter: ongeveer 50%.
Een glucoseconcentratie van 41% zorgde voor een snellere en dramatischer toename van MPV dan 25% of 21%. De MPV-resultaten worden weergegeven in figuur 3. Bij alle andere verdunningen werd na toevoeging van 50% glucose geen onmiddellijke initiële afname van MPV waargenomen. Bij gebruik van 25% glucose (glucoseconcentratie 20,8% bij de uiteindelijke verdunning) was de verandering in MPV vergelijkbaar met de verandering bij 20% glucose bij een verdunning van 1:1 (figuur 3). Hoewel de veranderingen in MPV aanvankelijk groter waren bij de gemengde concentratie van 41% dan bij 25%, was het verschil in MPV tussen 41% en 25% na 16 minuten niet langer significant (tabel 3, rechts). Het is ook interessant dat 25% glucose de MPV effectiever verhoogde dan 20,8%.
Deze in vitro-studie bevestigde onze hypothese gedeeltelijk. Het toonde aan dat gedeeltelijke lysis van bloedplaatjes door toevoeging van dextrose mogelijk was, dat bloedplaatjes zich snel aanpasten aan extreme hypertoniciteit en dat het MPV significant steeg als reactie op concentraties van hypertonische dextrose van meer dan 25%. Het toonde aan dat gedeeltelijke lysis van bloedplaatjes door toevoeging van dextrose mogelijk was, dat bloedplaatjes zich snel aanpasten aan extreme hypertoniciteit en dat het MPV significant steeg als reactie op concentraties van hypertonische dextrose van meer dan 25%. Als u een probleem met het gebruik van een product wilt, kunt u dit doen аккомодацию тромбоцитов экстремального MPV-vermogen en vermogen van MPV met een vermogen van > 25%. Het toonde aan dat er sprake was van mogelijke gedeeltelijke plaatjeslysis door dextrose, snelle aanpassing van de bloedplaatjes aan extreme hypertoniciteit en een significante toename van het MPV als reactie op hypertone dextroseconcentraties van >25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板> 25% MPV-producten voor MPV's它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 极端 高渗, 以及响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Het gebruik van een product met een hoge resolutie адаптацию тромбоцитов кэкстремальному MPV-vermogen en vermogen van MPV met een vermogen van > 25%. Het toont potentiële gedeeltelijke plaatjeslysis door glucosemengsels, snelle plaatjesaanpassing aan extreme hypertoniciteit en een significante toename van MPV als reactie op hypertonische glucose >25%.De initiële toename was maximaal bij een glucoseblootstelling van 41,6%, maar de toename in MPV benaderde een glucoseblootstelling van 25% ongeveer 20 minuten na de blootstelling.
De concentratie van bloedplaatjes wordt beïnvloed door glucose. We merkten op dat de hoeveelheid bloedplaatjes afnam bij alle verdunningen van glucose. Een scherpe daling van het aantal bloedplaatjes in H2O (0%)-verdunningen van de PRP-reeks kan verband houden met osmotische lysis. Het zou echter ook een artefact kunnen zijn veroorzaakt door bloedplaatjesklontering, maar dit staat in contrast met het ontbreken van MPV-verandering bij deze verdunning. Deze bevinding betekent dat sommige bloedplaatjes zeer gevoelig zijn voor hypo-osmolariteit.
Bij alle 1:1 verdunningen van glucose nam de hoeveelheid PLT met 20-30% af, zelfs bij D5W (hypotoon bij 252 mOsm), wat kan duiden op een specifiek niet-osmotisch effect van glucose, aangezien zowel PLT als MPV onveranderd bleven bij een drievoudige verhoging van de glucoseconcentratie van D5W tot D25W. Sterker nog, de PLT-concentraties vertoonden een lichte stijging bij toenemende osmolariteit.
De afname van het aantal bloedplaatjes tussen verdunningen van 1:1 en 1:5 betekent dat het oplossende effect afhangt van de begin- en eindconcentratie van glucose. Als het alleen afhing van de beginconcentratie, dan zou men een verschil in bloedplaatjesreductie verwachten tussen verdunningen van 1:1. Maar dat zien we niet. Als het lyse-effect alleen afhing van de eindconcentratie van glucose, dan zouden we weinig verschil verwachten tussen een 20% 1:1 verdunning en een 20,8% 1:5 verdunning. En toch zagen we dat verschil.
Als er bloedplaatjesverlies optreedt als gevolg van bloedplaatjeslysis, wordt een gedeeltelijk lysaat gevormd, waarna cytokinen en groeifactoren in de extracellulaire omgeving vrijkomen. Verschillende onderzoeken hebben aangetoond dat bloedplaatjeslysaat bijna net zo effectief is als PRP als proliferatieoplossing [11]. PRP zelf is een effectieve oplossing gebleken voor de behandeling van proliferatie [12-14].
Inactieve bloedplaatjes circuleren in de vorm van een schijf, versterkt met verschillende interne structuren. Tijdens activering nemen ze een meer bolvormige of amoebe-achtige vorm aan, wat resulteert in een toename van het volume. Deze volumetoename vereist een toename van het oppervlak, wat het gevolg is van de extrusie van het open tubulusstelsel (OCS) en de toevoeging van exocytische granules aan het membraan. Het moet nog worden vastgesteld of de door hypertonische glucose geïnduceerde toename van het MPV (mean platelet volume) één of beide van deze mechanismen betreft, maar als het laatste het geval is, zou een toename van het MPV duiden op degranulatie.
Uit dit onderzoek bleek dat blootstelling aan hoge glucoseconcentraties op PRP of bloedplaatjes in volbloed resulteerde in een toename van MPV binnen 15 minuten bij een glucoseconcentratie van respectievelijk 25% en 41,6%.
De toename van de MPV van bloedplaatjes kan te wijten zijn aan de verwijding van de omliggende microtubuli-kluwen als reactie op calciuminstroom. Liu et al. hebben aangetoond dat glucose calciuminstroom medieert via het TRPC6-kanaal van bloedplaatjes [6]. Onze hypothese is dat glucose de ontspanning van microtubuli-kluwen induceert, wat leidt tot een toename van de MPV en sensibilisatie en/of activering van bloedplaatjes. Echter, afgaande op onze resultaten is dit slechts een deel van het verhaal. In onze tests resulteerde geen enkele concentratie onder D25W in een toename van de MPV. Aangezien we blootstelling aan glucoseconcentraties tussen 12,5% en 25% niet hebben getest, suggereren onze fase 1-resultaten dat er mogelijk een drempelwaarde in dit bereik van glucoseconcentraties bestaat die leidt tot een toename van de MPV. Verdere tests in fase 3 en 4 toonden aan dat 20-25% glucose de drempelwaarde hiervoor lijkt te zijn, maar het blijft onduidelijk waarom.
We observeerden ook een afname van ongeveer 9% in MPV na centrifugatie. Het is niet duidelijk of deze afname in MPV te wijten is aan grotere en dichtere bloedplaatjes die vastzitten in de rode bloedcellaag van de centrifuge. Deze observatie kan belangrijk zijn voor artsen, omdat het zou kunnen impliceren dat PRP-bloedplaatjes een kleinere en minder dichte subgroep van bloedplaatjes in volbloed vormen.
In een eerder onderzoek hebben we aangetoond dat de bereiding van PRP met handmatige methoden goedkoop is [8]. Als glucose de bloedplaatjes in het weefsel of PRP gevoeliger maakt, waardoor ze vatbaarder worden voor activering, of als PRP wordt geproduceerd met gedeeltelijke lysaateigenschappen, kan dit de regeneratie bevorderen en de behoefte aan therapie verminderen. Daarom kan de combinatie van PRP en sterk geconcentreerde glucose kosteneffectiever zijn dan PRP of glucose afzonderlijk.
Ons onderzoek kent een aantal tekortkomingen. Ten eerste hebben we PRP gebruikt dat op verschillende manieren is verkregen. Dit kan leiden tot tegenstrijdige resultaten. Ten tweede konden we geen biochemische analyse van onze monsters uitvoeren om nauwkeuriger vast te stellen of er sprake was van plaatjesactivering. We zouden graag P-selectine, plaatjesfactor 4, monocytaire plaatjesaggregaten of andere markers van plaatjesactivering willen meten om de mate of aanwezigheid van degranulatie van alfagranulen beter te begrijpen, maar dit valt buiten het bestek van dit onderzoek. Ten derde konden we met elektronenmicroscopie of andere methoden niet bevestigen dat de toename van MPV in aan glucose blootgestelde plaatjes te wijten was aan het effect op microtubulaire kluwen.
Mengsels van volbloed (WB) of PRP met 25% glucose verhoogden de MPV (Mean Platelet Volume), wat wijst op het begin van de activering van bloedplaatjes, hoewel deze studie geen progressie van aggregatie of degranulatie aantoonde. Het hypertone glucosemengsel resulteerde in bloedplaatjesverlies, mogelijk een lytisch effect. Gedeeltelijke activering of lysis van bloedplaatjes kan weefselregeneratie veroorzaken na injectie met bloedplaatjes. Het is niet duidelijk welke klinische gevolgen deze veranderingen kunnen hebben. Verdere studies hebben nauwkeurigere metingen van activering of lysis aangetoond en de verschillende klinische effecten van hypertone glucosemengsels met WB of PRP geëvalueerd.
Glucoseproliferatietherapie is een eenvoudige en goedkope regeneratieve therapie die zich snel uitbreidt en klinisch onderzoek ondersteunt. Deze studie suggereert een fysiologisch mechanisme dat, indien bevestigd, ons zou kunnen helpen een deel van het regeneratieve mechanisme van proliferatietherapie te begrijpen.
Biomedische en gezondheidsinformatica aan de Universiteit van Missouri, Kansas City School of Medicine, Kansas City, VS
Menselijke proefpersonen: Alle deelnemers aan dit onderzoek hebben wel of geen toestemming gegeven. De International Society for Cellular Medicine heeft goedkeuring verleend onder ICMS-2017-003. Het volgende protocol is goedgekeurd voor verder gebruik door de Institutional Review Board van de International Society for Cellular Medicine: Titel: Berekening van de opbrengst van geneesmiddelen uit plaatjesrijk plasma op basis van de baseline bloedplaatjestelling. Dierlijke proefpersonen: Alle auteurs bevestigen dat er geen dieren of weefsels bij dit onderzoek betrokken waren. Belangenconflicten: In overeenstemming met het ICMJE Uniform Disclosure Form verklaren alle auteurs het volgende: Betalings-/dienstverleningsinformatie: Alle auteurs verklaren dat zij geen financiële steun van enige organisatie hebben ontvangen voor het ingediende werk. Financiële relaties: Alle auteurs verklaren dat zij momenteel of in de afgelopen drie jaar geen financiële relaties hebben met enige organisatie die mogelijk geïnteresseerd is in het ingediende werk. Overige relaties: Alle auteurs verklaren dat er geen andere relaties of activiteiten zijn die van invloed kunnen zijn op het ingediende werk.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al. (17 mei 2022) Het effect van glucose op het aantal en volume van bloedplaatjes: implicaties voor regeneratieve geneeskunde. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Copyright 2022 Harrison et al. Dit is een open access-artikel dat is gepubliceerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License CC-BY 4.0. Onbeperkt gebruik, verspreiding en reproductie in elk medium is toegestaan, mits de oorspronkelijke auteur en bron worden vermeld.