“Đừng bao giờ nghi ngờ rằng một nhóm nhỏ những công dân tận tâm, có suy nghĩ thấu đáo có thể thay đổi thế giới. Thực tế, đó là thế giới duy nhất có thể làm được điều đó.”
Sứ mệnh của Cureus là thay đổi mô hình xuất bản y khoa lâu đời, trong đó việc nộp bài nghiên cứu có thể tốn kém, phức tạp và mất nhiều thời gian.
Huyết tương giàu tiểu cầu/PRP, tái tạo mô, hoạt hóa tiểu cầu, liệu pháp tăng sinh glucose, tiểu cầu, liệu pháp tăng sinh
Trích dẫn bài báo này như sau: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17 tháng 5 năm 2022) Tác dụng của glucose đối với số lượng và thể tích tiểu cầu: ý nghĩa đối với y học tái tạo. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Huyết tương giàu tiểu cầu (PRP) và dung dịch glucose ưu trương thường được sử dụng để tiêm trong y học tái tạo, đôi khi được sử dụng cùng nhau. Tác dụng của glucose ưu trương đối với sự phân giải và hoạt hóa tiểu cầu chưa được báo cáo trước đây. Chúng tôi đã thử nghiệm tác dụng của nồng độ glucose cao đối với số lượng tiểu cầu và hồng cầu, cũng như thể tích tế bào trong PRP và máu toàn phần (WB). Sự giảm một phần nhanh chóng về số lượng tiểu cầu đã xảy ra với tất cả các hỗn hợp glucose được trộn với PRP hoặc máu toàn phần, phù hợp với hiện tượng phân giải một phần. Sau phút đầu tiên, số lượng tiểu cầu vẫn ổn định, cho thấy sự thích nghi nhanh chóng của các tiểu cầu còn lại với tình trạng tăng áp suất thẩm thấu cực độ (>2000 mOsm). Sau phút đầu tiên, số lượng tiểu cầu vẫn ổn định, cho thấy sự thích nghi nhanh chóng của các tiểu cầu còn lại với tình trạng tăng áp suất thẩm thấu cực độ (>2000 mOsm). Bạn có thể sử dụng một số công cụ có thể giúp bạn có được một khoản vay phù hợp với nhu cầu của bạn аккомодацию остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Sau phút đầu tiên, số lượng tiểu cầu vẫn ổn định, cho thấy sự thích nghi nhanh chóng của các tiểu cầu còn lại với tình trạng tăng áp suất thẩm thấu cực độ (>2000 mOsm).2000 mOsm) 高渗状态。2000 mOsm) Bạn có thể sử dụng một số công cụ có thể giúp bạn có được một khoản vay phù hợp với nhu cầu của bạn остаточных тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. Sau phút đầu tiên, số lượng tiểu cầu vẫn ổn định, cho thấy sự thích nghi nhanh chóng của các tiểu cầu còn lại với trạng thái siêu thẩm thấu cực độ (>2000 mOsm).Nồng độ glucose từ 25% trở lên dẫn đến sự gia tăng đáng kể thể tích tiểu cầu trung bình (MPV), cho thấy giai đoạn đầu của quá trình hoạt hóa tiểu cầu. Cần có thêm các nghiên cứu để xác định xem liệu hiện tượng tan rã hay hoạt hóa tiểu cầu có xảy ra hay không và liệu việc tiêm glucose ưu trương đơn thuần hoặc kết hợp với PRP có mang lại lợi ích lâm sàng bổ sung hay không.
Vào những năm 1950, bác sĩ phẫu thuật người Mỹ George Hackett đã phát hiện ra rằng ông có thể làm giảm đau khớp và đau lưng vĩnh viễn ở nhiều bệnh nhân bằng cách tiêm một dung dịch tăng sinh vào gân và dây chằng. Các thí nghiệm của ông trên thỏ cho thấy phương pháp điều trị mà ông gọi là liệu pháp tăng sinh đã khiến gân to ra và chắc khỏe hơn. Các nghiên cứu mô học đã xác nhận rằng collagen mới được sản xuất trong quá trình này [1].
Trong vài thập kỷ đầu, nhiều giải pháp phân phối khác nhau đã được thử nghiệm. Đến những năm 1990, hầu hết các chuyên gia đều cho rằng nồng độ glucose cao là phương pháp an toàn và hiệu quả nhất. Tuy nhiên, cơ chế hoạt động vẫn chưa rõ ràng.
Rất ít nghiên cứu lâm sàng được tiến hành trong thế kỷ 20 sau công trình của Hackett. Tuy nhiên, vào những năm 2000, sự quan tâm được khơi dậy trở lại và một số thử nghiệm lâm sàng thành công về liệu pháp tăng sinh đã được hoàn thành để điều trị đau lưng dưới [2], viêm xương khớp gối [3] và viêm mỏm khuỷu ngoài [4].
Quá trình tái tạo mô cần sự tham gia của tế bào gốc. Do đó, nồng độ glucose cao phải bằng cách nào đó kích thích sự di chuyển, nhân lên và biệt hóa của tế bào gốc. Chúng tôi giả thuyết rằng tiểu cầu có thể hoạt động như những chất truyền tin và nồng độ glucose cao có thể khiến tiểu cầu giải phóng cytokine và các yếu tố tăng trưởng, từ đó thúc đẩy các quá trình tái tạo, đặc biệt là sự di chuyển của tế bào gốc đến các vùng có nồng độ glucose cao.
Sự hoạt hóa tiểu cầu luôn xảy ra trước khi lượng canxi nội bào tăng lên [5]. Liu et al. vào năm 2008 đã chỉ ra rằng nồng độ glucose cao làm tăng hoạt động của các kênh thụ thể tiềm năng thoáng qua loại 6 (TRPC6) trong màng huyết tương, dẫn đến dòng ion canxi đi vào tiểu cầu [6]. Một nghiên cứu khác cho thấy rằng việc tiếp xúc vùng rìa của vi ống với các ion canxi gây ra sự giãn nở, mở rộng và biến dạng của vùng rìa, từ đó gây ra sự thay đổi hình dạng từ dạng đĩa sang dạng hình cầu, dẫn đến thể tích tiểu cầu trung bình (MPV) [7].
Giả thuyết của chúng tôi trong nghiên cứu này là việc tiếp xúc tiểu cầu với nồng độ glucose cao sẽ ảnh hưởng đến vùng rìa vi ống và môi trường nội bào, dẫn đến sự gia tăng MPV.
Tất cả người tham gia đều ký vào mẫu chấp thuận tham gia nghiên cứu sau khi được giải thích chi tiết về nghiên cứu và trước khi nhận mẫu. Trong nghiên cứu này, chỉ sử dụng các mẫu PRP có chỉ số hematocrit lớn hơn 2% để có thể bao gồm số lượng hồng cầu và thể tích trung bình của hồng cầu (MCV) để so sánh.
Nghiên cứu được tiến hành trong bốn giai đoạn, giai đoạn đầu tiên là PRP và các giai đoạn còn lại là máu toàn phần (Bảng 1). Như đã mô tả trước đây [8], tất cả các lực ly tâm tương đối (RCF, g-force) được tính toán từ điểm giữa (Rmid, tính bằng cm) của cột máu trong ống tiêm ly tâm. Chúng tôi chọn sử dụng MPV làm dấu hiệu của sự nhạy cảm của tiểu cầu và số lượng tiểu cầu làm chỉ số của sự tan rã tiểu cầu tiềm tàng, cả hai đều có thể dễ dàng đo được trên các máy phân tích huyết học tiêu chuẩn.
Trong giai đoạn đầu, 47 tình nguyện viên đã hiến tặng mẫu máu—một ống axit ethylenediaminetetraacetic (EDTA) và một mẫu máu toàn phần PRP (được chống đông bằng natri citrate (NaCl, 3%)) (Bảng 1). Đặt ngay dụng cụ lắc vào ống. Xét nghiệm công thức máu toàn phần (CBC) được thực hiện trên các mẫu EDTA theo ba lần lặp lại, và các mẫu NaCl được phân tích theo ba lần lặp lại để phân tích CBC, sau đó PRP được chuẩn bị bằng các phương pháp khác nhau được mô tả ở trên [8]. Tất cả các mẫu PRP được chuẩn bị bằng cách ly tâm ở 900–1000 g. Trộn từng mẫu PRP trên máy trộn xoáy trong 5–10 giây, sau đó chia thành năm phần 0,5 ml vào các ống.
Để đánh giá tác động của việc tiếp xúc với tiểu cầu lên nồng độ glucose tăng cao, lượng bằng nhau (0,5 ml) của dung dịch glucose trong nước với nồng độ 0%, 5%, 12,5%, 25% và 50% được trộn với các mẫu tiểu cầu để thu được hỗn hợp glucose có nồng độ 0%, 2,5%, 6,25%, 12,5% và 25%, sau đó trộn đều các ống nghiệm trên máy lắc ống nghiệm trong 15 phút. Tổng hoạt độ đông máu (TAC) của mỗi hỗn hợp được phân tích ba lần sau 15 phút. Số lượng tiểu cầu (PLT), số lượng hồng cầu (RBC), thể tích trung bình hồng cầu (MCV) và thể tích trung bình tiểu cầu (MPV) được tính trung bình cho mỗi ống nghiệm, và giá trị trung bình của số lượng tiểu cầu, số lượng hồng cầu, MCV và MPV được tính cho tất cả các mẫu huyết tương giàu tiểu cầu (PRP).
Sau khi hoàn thành giai đoạn thu thập dữ liệu đầu tiên, chúng tôi nhận thấy thể tích tiểu cầu trong huyết tương giàu tiểu cầu (PRP) tăng đáng kể sau khi thêm dung dịch D50W. Tuy nhiên, tiểu cầu trong PRP không nhất thiết đại diện cho tất cả tiểu cầu trong máu, và môi trường nuôi cấy PRP khác với môi trường nuôi cấy máu toàn phần (WB). Do đó, chúng tôi quyết định tiến hành thử nghiệm giai đoạn hai về tác dụng của việc thêm dung dịch D50W vào máu toàn phần.
Đối với vòng thứ hai, chúng tôi đã chọn cỡ mẫu là 30 dựa trên kết quả từ loạt thí nghiệm đầu tiên, như đã mô tả trong phần Phân tích. Trong loạt thí nghiệm này, 20 tình nguyện viên đã hiến tặng mẫu máu (Bảng 1). Máu toàn phần (1,8 ml) được hút vào ống tiêm 3 ml và được chống đông bằng 0,2 ml dung dịch NaCl 40%. Ống tiêm máu toàn phần được trộn đều trong năm giây bằng máy trộn xoáy và xét nghiệm công thức máu toàn phần (CBC) được phân tích ba lần. Sau khi phân tích, máu đã được chống đông được thêm vào 2 ml dung dịch glucose 50% trong ống tiêm 5 ml (nồng độ glucose cuối cùng khoảng 25% (D25)) và đặt trong ống lắc trong 30 phút. Sau 30 phút, mẫu D25/CBC trong ống tiêm máu toàn phần được phân tích ba lần. Số lượng tiểu cầu, số lượng hồng cầu, MCV và MPV trên mỗi ống tiêm được tính trung bình, và giá trị trung bình của PLT, RBC, MCV và MPV được tính cho mỗi mẫu trước và sau khi thêm glucose.
Vì tiểu cầu trong máu toàn phần thường tiếp xúc với glucose ưu trương trong quá trình điều trị glucose tăng sinh do tiêm xâm lấn tối thiểu, và việc kết hợp PRP với glucose ưu trương ngay trước khi tiêm không phổ biến, nên chúng tôi quyết định nghiên cứu glucose ưu trương kết hợp với máu toàn phần trong Phần 1, Bước 3 và 4. Ở mỗi giai đoạn, 20 tình nguyện viên hiến tặng 7-8 ml ACD-A (axit chứa trisodium citrate (22,0 g/l), axit citric (8,0 g/l) và glucose (24,5 g/l), dung dịch dextrose citrate) để chống đông máu (Bảng 1). Chỉ sử dụng hỗn hợp glucose có nồng độ lớn hơn 12,5% để xác định ngưỡng phần trăm liên quan đến sự tăng MPV. Ở giai đoạn thứ ba, 1 ml máu được cho vào ống nghiệm. Sau đó, trộn đều máu bằng máy trộn xoáy trong 10 giây bằng cách thêm 1 ml dung dịch glucose 30%, 40% hoặc 50% vào ống nghiệm để thu được nồng độ glucose cuối cùng tương ứng là 15%, 20% và 25%. Các mẫu máu glucose được phân tích bằng phương pháp công thức máu toàn phần (CBC) ngay sau khi trộn và lặp lại cứ sau hai phút trong 30 phút.
Trong quá trình trộn ban đầu, việc thêm glucose ưu trương tỷ lệ 1:1 và WB hoặc PRP làm cho tiểu cầu tiếp xúc với nồng độ trên 25% trong vài giây. Ở bước thứ tư, để đánh giá tác dụng của glucose ưu trương với nồng độ đỉnh ban đầu tối thiểu và kiểm tra giới hạn trên của tác dụng của glucose, chúng tôi chỉ thêm một lượng nhỏ máu vào D25W hoặc D50W. Cho 1 ml D25W hoặc D50W vào ống nghiệm và thêm 0,2 ml WB trong khi lắc đều mẫu trong 10 giây. Trong những trường hợp này, máu tiếp xúc với glucose ở nồng độ cao hơn khoảng 20% ​​so với nồng độ cuối cùng, thay vì cao hơn 50% so với nồng độ cuối cùng như ở Giai đoạn 3, dẫn đến nồng độ glucose cuối cùng là 20,8% và 41,6%. Các mẫu đã trộn được phân tích trong cùng khoảng thời gian như ở bước 3.
Trong bước đầu tiên của mỗi chuỗi pha loãng glucose, 30 mẫu được lấy vì đây là kích thước mẫu phù hợp cho nghiên cứu thí điểm [9]. Vào cuối mỗi giai đoạn (bao gồm cả giai đoạn đầu tiên), hãy đánh giá tính đầy đủ của kích thước mẫu bằng cách sử dụng công thức được dùng để xác định kích thước mẫu cần thiết để ước tính giá trị trung bình của biến kết quả liên tục trong một quần thể. Công thức n = Z2 x SD2 /E2. Trong phương trình này, Z là điểm Z, SD là độ lệch chuẩn và E là sai số mong muốn [10]. Mức alpha của chúng tôi là 0,05, tương ứng với giá trị Z là 1,96 và chúng tôi kỳ vọng sai số là 5 (tính theo phần trăm). Do đó, chúng tôi giải phương trình để tìm n = (1,962 x SD2)/52. Kết quả cho thấy kích thước mẫu cần thiết cho mỗi giai đoạn nhỏ hơn số lượng thực tế được thu thập.
Trong các giai đoạn 1, 3 và 4 sử dụng nhiều hơn một nồng độ glucose, ảnh hưởng của các nồng độ glucose khác nhau được phân tích bằng cách so sánh sự thay đổi tỷ lệ giữa thời điểm 0 và mỗi thời điểm tiếp theo (giai đoạn 1 ở 15 phút, giai đoạn 3 ở 15 phút và giai đoạn 4 ở 15 giây, sau đó cứ sau hai phút). Tốc độ thay đổi cho mỗi khoảng thời gian được so sánh bằng phép thử Mann-Whitney U vì dữ liệu không tuân theo phân phối chuẩn được xác định bằng phép thử chuẩn Shapiro-Wilk. Vì phân tích 1-to-1 của một số nhóm (năm nhóm) được thực hiện trong bước đầu tiên, thứ ba và thứ tư (tổng cộng năm nhóm), nên hiệu chỉnh Bonferroni đã được thực hiện để điều chỉnh giá trị alpha mong muốn thành ≤0,01 nhưng không ≤0,05.
Giảm số lượng tiểu cầu với tất cả các nồng độ dextrose ưu trương và tăng MPV trong tiểu cầu PRP ở nồng độ dextrose >12,5%: Số lượng tiểu cầu PRP tăng từ một đến năm lần so với máu toàn phần ban đầu, tùy thuộc vào phương pháp (không được minh họa). Giảm số lượng tiểu cầu với tất cả các nồng độ dextrose ưu trương và tăng MPV trong tiểu cầu PRP ở nồng độ dextrose >12,5%: Số lượng tiểu cầu PRP tăng từ một đến năm lần so với máu toàn phần ban đầu, tùy thuộc vào phương pháp (không được minh họa). Bạn có thể sử dụng tài khoản của mình để có được tài khoản dành cho xe MPV và xe MPV của bạn sử dụng PRP để đạt được lợi ích декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз по сравнению с исходной цельной кровью, в зависимости от метода (không (показано). Số lượng tiểu cầu giảm ở tất cả các nồng độ dextrose ưu trương và MPV tăng trong tiểu cầu PRP ở nồng độ dextrose >12,5%: Số lượng tiểu cầu PRP tăng gấp 1-5 lần so với máu toàn phần ban đầu, tùy thuộc vào phương pháp (không hiển thị). ).在> 12,5% Các nhà đầu tư: PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未描述）。 Ở nồng độ glucose >12,5%, nồng độ glucose cao làm giảm số lượng tế bào máu, MPV máu PRP tăng lên: so với 与基线全血, số lượng tế bào máu PRP tăng từ 1 đến 5 lần ở nồng độ (không được mô tả). Tỷ lệ tín dụng >12,5% tỷ lệ tín dụng Vì vậy, một MPV có thể sử dụng PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- до 5-кратных концентраций по сравнению с исходными концентрациями цельной крови, в bạn không cần phải làm gì cả (không phải описано ). Ở nồng độ glucose >12,5%, tất cả các nồng độ glucose gây tăng huyết áp đều làm giảm số lượng tiểu cầu và tăng MPV trong tiểu cầu PRP: Số lượng tiểu cầu PRP tăng gấp 1 đến 5 lần so với nồng độ trong máu toàn phần ở mức cơ bản, tùy thuộc vào phương pháp (như đã mô tả).Hình 1 cho thấy số lượng tiểu cầu giảm gần 75% sau khi pha loãng trong nước và giảm 20-30% sau 15 phút pha loãng với các nồng độ glucose khác nhau so với PRP ban đầu và độ pha loãng 1:1 được điều chỉnh theo thể tích (1- k1 với hiệu chỉnh thể tích). k -1 nuôi cấy).1 nuôi cấy).
Số lượng tế bào trong mỗi độ pha loãng được biểu thị dưới dạng phân số so với số lượng ban đầu trước khi pha loãng.
MPV giảm tối thiểu trong quá trình sản xuất PRP, mà không có sự thay đổi nào nữa về nồng độ pha loãng xuống 12,5% trong nước hoặc glucose (bao gồm cả hỗn hợp PRP glucose 25%) và tăng hơn 20% sau khi pha loãng trong dung dịch glucose 50% (Hình 2). Ngược lại, hồng cầu không cho thấy sự thay đổi đáng kể về thể tích ở bất kỳ độ pha loãng nào khác ngoài H2O.
Thể tích trung bình của tế bào trong mỗi dung dịch pha loãng được biểu thị bằng phần trăm so với thể tích ban đầu trước khi pha loãng.
Quan sát thấy sự giảm tương tự nhưng ít rõ rệt hơn về số lượng tiểu cầu và sự gia tăng CVR ở nhóm BC tiếp xúc với 50% glucose (để pha chế với 25% glucose). Bảng 2 so sánh số lượng tế bào và thể tích tế bào trong máu toàn phần pha loãng trong 50% dextrose với dữ liệu PRP giai đoạn 1 pha loãng trong 50% dextrose. Sự thay đổi về số lượng hồng cầu và MCV hồng cầu không rõ ràng và không phải là trọng tâm chú ý của chúng tôi.
SD = độ lệch chuẩn, MD = sự khác biệt trung bình giữa các nhóm, SE = độ lệch chuẩn của sự khác biệt trung bình, RBC = hồng cầu, PLT = tiểu cầu, PRP = huyết tương giàu tiểu cầu, WB = máu toàn phần
Sau khi thêm D50W vào WB, tỷ lệ mất tiểu cầu được điều chỉnh theo độ pha loãng là 7,7% (310±73 so với 286±96) so với 17,8% khi pha loãng PRP trong D50W (664±348 so với 544±277). MPV WB tăng 16,8% (từ 10,1 ± 0,5 lên 11,8 ± 0,6), trong khi MPV PRP tăng 26% (9,2 ± 0,8 so với 11,6 ± 0,7). Mặc dù sự khác biệt trung bình về cả mức giảm số lượng tiểu cầu và mức tăng MPV đều lớn hơn đáng kể với PRP, nhưng sự thay đổi về mức giảm số lượng tiểu cầu trong WB gần như có ý nghĩa thống kê (310 ± 73 đến 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) và mức tăng MPV có ý nghĩa thống kê (10,1 ± 0,5 đến 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Mặc dù sự khác biệt trung bình về cả mức giảm số lượng tiểu cầu và mức tăng MPV đều lớn hơn đáng kể với PRP, nhưng sự thay đổi về mức giảm số lượng tiểu cầu trong WB gần như có ý nghĩa thống kê (310 ± 73 đến 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) và mức tăng MPV có ý nghĩa thống kê (10,1 ± 0,5 đến 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Mặc dù sự khác biệt trung bình về cả mức giảm số lượng tiểu cầu và mức tăng CVR đều lớn hơn đáng kể với PRP, nhưng sự thay đổi về mức giảm số lượng tiểu cầu trong WB cũng gần như có ý nghĩa thống kê (310 ± 73 đến 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (từ 10,1 ± 0,5 đến 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Sự gia tăng MPV là đáng kể (từ 10,1 ± 0,5 đến 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Công ty cung cấp PRP cho MPV内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7%)；p = 0,06)和MPV的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < .001)。尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 , 但 但 内血小板 计数减少 的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = 0,06)和MPV 的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001)。Sự thay đổi về mức giảm số lượng tiểu cầu trong máu toàn phần gần như có ý nghĩa thống kê (từ 310 ± 73 xuống 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), mặc dù huyết tương giàu tiểu cầu (PRP) có sự khác biệt trung bình lớn hơn đáng kể về mức giảm số lượng tiểu cầu và tăng MPV, và sự tăng MPV là có ý nghĩa thống kê.(từ 10,1 ± 0,5 đến 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (từ 10,1 ± 0,5 đến 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Nồng độ glucose cuối cùng là 20% mới thấy sự thay đổi đáng kể về MPV, nhưng sự thay đổi MPV rõ rệt hơn ở nồng độ cuối cùng là 25%. Sự mất tiểu cầu ổn định sau khi giảm ban đầu. Chúng tôi ghi nhận sự giảm mạnh ban đầu về CVR, tuy nhiên, CVR nhanh chóng được phục hồi ở nồng độ glucose cuối cùng là 25%, cao hơn đáng kể so với mức CVR quan sát được ở nồng độ glucose cuối cùng là 20% và 15% (Hình 3 và bên trái Bảng 3; các ô được tô bóng). (chỉ ra giá trị p ≤ alpha với hiệu chỉnh Bonferroni là 0,01). Cũng có sự giảm mạnh ban đầu về số lượng PLT, được quan sát trong giai đoạn đầu từ 0-15 giây, và sau đó duy trì ổn định (từ 15 giây đến 30 phút; bên trái bảng 4).
Việc thêm các nồng độ glucose khác nhau vào máu toàn phần dẫn đến sự giảm nhanh ban đầu của MPV, sau đó là sự phục hồi phụ thuộc vào nồng độ với mức phục hồi hơn 20%. Chú thích cho thấy nồng độ glucose sau khi pha loãng. D15, D20 và D25 được thực hiện ở tỷ lệ pha loãng 1:1. D21 và D41 được thực hiện ở tỷ lệ pha loãng 1:5.
Bảng 4 cho thấy sự thay đổi số lượng tiểu cầu khi pha loãng trong dung dịch glucose ưu trương. Chúng tôi quan sát thấy mối quan hệ phụ thuộc liều lượng giữa sự giảm tức thì số lượng tiểu cầu ở độ pha loãng 1:1 và ở độ pha loãng 1:5. So sánh nhóm pha loãng 1:1 với nhóm pha loãng 1:5, nhóm 1:1 có sự giảm tức thì số lượng tiểu cầu ít hơn nhóm 1:5 (66±48.000 (23%) so với 99±69.000 (37%), p = 0,014) ở nhóm 1:5. Sau khi giảm ban đầu ở điểm đo đầu tiên, số lượng tiểu cầu tính theo phần trăm glucose ổn định (Hình 4).
Khi thêm máu toàn phần vào glucose theo tỷ lệ 1:1, số lượng tiểu cầu giảm khoảng 25%. Tuy nhiên, khi thêm máu toàn phần theo tỷ lệ 1:5, mức giảm lớn hơn nhiều – khoảng 50%.
Nồng độ glucose 41% làm tăng MPV nhanh hơn và rõ rệt hơn so với 25% hoặc 21%. Kết quả MPV được thể hiện trong Hình 3. Ở tất cả các độ pha loãng khác, không quan sát thấy sự giảm MPV ban đầu ngay lập tức sau khi thêm glucose 50%. Khi sử dụng glucose 25% (nồng độ glucose 20,8% ở độ pha loãng cuối cùng), sự thay đổi MPV tương đương với sự thay đổi khi sử dụng glucose 20% ở độ pha loãng 1:1 (Hình 3). Mặc dù sự thay đổi MPV ban đầu lớn hơn ở nồng độ hỗn hợp 41% so với 25%, nhưng sự khác biệt về MPV giữa 41% và 25% sau 16 phút không còn đáng kể (Bảng 3, bên phải). Điều thú vị là glucose 25% làm tăng MPV hiệu quả hơn so với 20,8%.
Nghiên cứu trong ống nghiệm này đã phần nào xác nhận giả thuyết của chúng tôi. Nó cho thấy khả năng tan một phần tiểu cầu do pha trộn dextrose, sự thích nghi nhanh chóng của tiểu cầu với tình trạng ưu trương cực độ, và sự gia tăng đáng kể MPV khi phản ứng với nồng độ dextrose ưu trương > 25%. Nó cho thấy khả năng tan một phần tiểu cầu do pha trộn dextrose, sự thích nghi nhanh chóng của tiểu cầu với tình trạng ưu trương cực độ, và sự gia tăng đáng kể MPV khi phản ứng với nồng độ dextrose ưu trương > 25%. Bạn có thể sử dụng các công cụ hỗ trợ để có được một khoản vay phù hợp với bạn một người có thể làm được điều đó Người ta đang sử dụng MPV để đạt được mức tăng trưởng > 25%. Nó cho thấy khả năng tan một phần tiểu cầu với dextrose, khả năng thích nghi nhanh chóng của tiểu cầu với tình trạng tăng áp suất thẩm thấu cực độ, và sự gia tăng đáng kể MPV khi phản ứng với nồng độ dextrose tăng áp suất thẩm thấu >25%.Bạn có thể làm điều đó bằng cách sử dụng công cụ này. 25% 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。Bạn có thể làm được điều đó không?响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой, быструю адаптацию тромбоцитов к экстремальному гипертонусу và значительное увеличение MPV ở mức cao hơn 25%. Nó cho thấy khả năng phân giải một phần tiểu cầu bởi hỗn hợp glucose, sự thích nghi nhanh chóng của tiểu cầu với tình trạng tăng áp suất thẩm thấu cực độ, và sự gia tăng đáng kể MPV khi phản ứng với glucose tăng áp suất thẩm thấu >25%.Sự gia tăng ban đầu đạt mức tối đa ở nồng độ glucose 41,6%, nhưng mức tăng MPV đạt gần 25% sau khoảng 20 phút tiếp xúc với glucose.
Nồng độ tiểu cầu bị ảnh hưởng bởi glucose. Chúng tôi nhận thấy lượng tiểu cầu giảm ở tất cả các độ pha loãng glucose. Sự giảm mạnh số lượng tiểu cầu trong dung dịch H2O (0%) của chuỗi PRP có thể liên quan đến hiện tượng tan máu do thẩm thấu. Mặt khác, đây cũng có thể là một hiện tượng giả tạo do sự vón cục của tiểu cầu, nhưng điều này trái ngược với việc không có sự thay đổi MPV ở độ pha loãng này. Phát hiện này có nghĩa là một số tiểu cầu rất nhạy cảm với tình trạng giảm áp suất thẩm thấu.
Trong tất cả các dung dịch pha loãng glucose 1:1, lượng tiểu cầu (PLT) giảm 20-30%, ngay cả với dung dịch D5W (nhược trương ở 252 mOsm), điều này có thể cho thấy tác dụng không thẩm thấu đặc hiệu của glucose, vì cả PLT và MPV đều không thay đổi khi nồng độ glucose tăng gấp ba lần từ D5W lên D25W. Trên thực tế, nồng độ PLT có xu hướng tăng nhẹ khi độ thẩm thấu tăng.
Sự giảm số lượng tiểu cầu (PLT) giữa độ pha loãng 1:1 và 1:5 cho thấy hiệu ứng hòa tan phụ thuộc vào nồng độ glucose ban đầu và cuối cùng. Nếu nó chỉ phụ thuộc vào nồng độ ban đầu, thì người ta sẽ kỳ vọng thấy sự khác biệt trong mức giảm PLT giữa các nồng độ 1:1. Nhưng chúng ta không thấy điều đó. Nếu hiệu ứng ly giải chỉ phụ thuộc vào nồng độ glucose cuối cùng, thì chúng ta không kỳ vọng nhiều sự khác biệt giữa độ pha loãng 20% ​​ở tỷ lệ 1:1 và độ pha loãng 20,8% ở tỷ lệ 1:5. Tuy nhiên, chúng ta đã làm được điều đó.
Nếu xảy ra hiện tượng mất tiểu cầu do tan tiểu cầu, một phần dịch tan sẽ được hình thành, sau đó các cytokine và yếu tố tăng trưởng được giải phóng vào môi trường ngoại bào. Một số nghiên cứu đã chỉ ra rằng dịch tan tiểu cầu gần như hiệu quả như PRP như một dung dịch tăng sinh [11]. Bản thân PRP đã được chứng minh là một giải pháp hiệu quả cho việc điều trị tăng sinh [12-14].
Tiểu cầu không hoạt động lưu thông trong máu dưới dạng đĩa được gia cố bởi một số cấu trúc bên trong. Trong quá trình hoạt hóa, chúng có hình dạng tròn hoặc giống amip hơn, dẫn đến tăng thể tích. Sự tăng thể tích này đòi hỏi sự tăng diện tích bề mặt, là kết quả của sự hình thành hệ thống ống mở (OCS) và sự bổ sung các hạt xuất bào vào màng tế bào. Vẫn cần xác định xem sự tăng MPV do glucose ưu trương gây ra có liên quan đến một hoặc cả hai cơ chế này hay không, nhưng nếu là cơ chế thứ hai, thì sự tăng MPV sẽ cho thấy sự giải phóng hạt.
Nghiên cứu này cho thấy rằng việc tiếp xúc với nồng độ glucose cao trên tiểu cầu huyết tương giàu tiểu cầu (PRP) hoặc tiểu cầu máu toàn phần dẫn đến sự gia tăng MPV trong vòng 15 phút với nồng độ glucose lần lượt là 25% và 41,6%.
Sự gia tăng MPV tiểu cầu có thể là do sự giãn nở của các đám rối vi ống xung quanh để đáp ứng với dòng canxi. Liu et al. Glucose đã được chứng minh là trung gian cho dòng canxi đi qua kênh TRPC6 của tiểu cầu [6]. Giả thuyết của chúng tôi là glucose gây ra sự giãn nở của các đám rối vi ống, dẫn đến sự gia tăng MPV và sự nhạy cảm và/hoặc hoạt hóa tiểu cầu. Tuy nhiên, dựa trên kết quả của chúng tôi, đây chỉ là một phần của câu chuyện. Trong các thử nghiệm của chúng tôi, không có nồng độ nào dưới D25W dẫn đến sự gia tăng MPV. Vì chúng tôi chưa thử nghiệm tiếp xúc với nồng độ glucose từ 12,5% đến 25%, kết quả giai đoạn 1 của chúng tôi cho thấy có thể có một ngưỡng trong phạm vi nồng độ glucose này dẫn đến sự gia tăng MPV. Thử nghiệm tiếp theo ở giai đoạn 3 và 4 cho thấy glucose 20-25% dường như là ngưỡng này, nhưng lý do tại sao vẫn chưa rõ ràng.
Chúng tôi cũng quan sát thấy MPV giảm khoảng 9% sau khi ly tâm. Hiện chưa rõ liệu sự giảm MPV này có phải do các tiểu cầu lớn hơn và đặc hơn bị giữ lại trong lớp hồng cầu của máy ly tâm hay không. Quan sát này có thể quan trọng đối với các bác sĩ lâm sàng vì nó có thể ngụ ý rằng tiểu cầu trong huyết tương giàu tiểu cầu (PRP) là một tập hợp con nhỏ hơn và ít đặc hơn của tiểu cầu trong máu toàn phần (WB).
Trong một nghiên cứu trước đây, chúng tôi đã chỉ ra rằng việc chuẩn bị PRP bằng phương pháp thủ công có giá thành thấp [8]. Nếu glucose làm tăng độ nhạy cảm của tiểu cầu mô hoặc PRP, khiến chúng dễ bị kích hoạt hơn, hoặc nếu PRP được sản xuất với các đặc tính ly giải một phần, điều này có thể tăng cường tái tạo và giảm nhu cầu điều trị. Do đó, sự kết hợp giữa PRP và glucose nồng độ cao có thể tiết kiệm chi phí hơn so với chỉ sử dụng PRP hoặc glucose riêng lẻ.
Nghiên cứu của chúng tôi có một số hạn chế. Thứ nhất, chúng tôi sử dụng PRP thu được từ nhiều phương pháp khác nhau. Điều này có thể dẫn đến kết quả mâu thuẫn. Thứ hai, chúng tôi không thể thực hiện phân tích sinh hóa bất kỳ mẫu nào để xác định chính xác hơn liệu sự hoạt hóa tiểu cầu có xảy ra hay không. Chúng tôi muốn đo P-selectin, yếu tố tiểu cầu 4, cụm tiểu cầu đơn nhân hoặc các dấu hiệu khác của sự hoạt hóa tiểu cầu để hiểu rõ hơn về mức độ hoặc sự hiện diện của sự giải phóng hạt alpha, nhưng điều này nằm ngoài phạm vi của nghiên cứu này. Thứ ba, chúng tôi không thể xác nhận bằng kính hiển vi điện tử hoặc các phương pháp khác rằng sự gia tăng MPV trong tiểu cầu tiếp xúc với glucose là do tác động lên các đám rối vi ống.
Hỗn hợp WB hoặc PRP với glucose 25% làm tăng MPV, báo hiệu sự khởi phát hoạt hóa tiểu cầu, mặc dù nghiên cứu này không chứng minh được sự tiến triển của quá trình kết tập hoặc giải phóng hạt. Hỗn hợp glucose ưu trương dẫn đến mất tiểu cầu, có thể biểu hiện tác dụng ly giải. Hoạt hóa một phần hoặc ly giải tiểu cầu có thể gây tái tạo mô sau khi tiêm tiểu cầu. Hiện chưa rõ những thay đổi này có thể dẫn đến hậu quả lâm sàng nào. Các nghiên cứu sâu hơn đã chứng minh được các phép đo chính xác hơn về hoạt hóa hoặc ly giải và đã đánh giá các tác dụng lâm sàng khác nhau của hỗn hợp glucose ưu trương với WB hoặc PRP.
Liệu pháp tăng sinh bằng glucose là một liệu pháp tái tạo đơn giản và không tốn kém, đang nhanh chóng được mở rộng và hỗ trợ nghiên cứu lâm sàng. Nghiên cứu này đề xuất một cơ chế sinh lý, nếu được xác nhận, có thể giúp chúng ta hiểu được một phần cơ chế tái tạo của liệu pháp tăng sinh.
Khoa Tin học Y sinh và Sức khỏe tại Trường Y thuộc Đại học Missouri, Kansas City, Kansas City, Hoa Kỳ.
Đối tượng nghiên cứu là con người: Tất cả những người tham gia nghiên cứu này đều đã đồng ý hoặc không đồng ý tham gia. Hiệp hội Y học Tế bào Quốc tế đã cấp phép ICMS-2017-003. Nghị định thư sau đây đã được Hội đồng Đánh giá Đạo đức của Hiệp hội Y học Tế bào Quốc tế phê duyệt để sử dụng tiếp: Tiêu đề: Tính toán hiệu suất thuốc huyết tương giàu tiểu cầu dựa trên số lượng tiểu cầu cơ bản trong xét nghiệm công thức máu toàn phần. Đối tượng nghiên cứu là động vật: Tất cả các tác giả đều xác nhận rằng không có động vật hoặc mô nào được sử dụng trong nghiên cứu này. Xung đột lợi ích: Theo Mẫu Khai báo Thống nhất của ICMJE, tất cả các tác giả đều tuyên bố như sau: Thông tin thanh toán/dịch vụ: Tất cả các tác giả đều tuyên bố rằng họ không nhận được hỗ trợ tài chính từ bất kỳ tổ chức nào cho công trình đã nộp. Quan hệ tài chính: Tất cả các tác giả đều tuyên bố rằng hiện tại hoặc trong ba năm qua họ không có quan hệ tài chính với bất kỳ tổ chức nào có thể quan tâm đến công trình đã nộp. Các mối quan hệ khác: Tất cả các tác giả đều tuyên bố rằng không có mối quan hệ hoặc hoạt động nào khác có thể ảnh hưởng đến công trình đã nộp.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al. (17 tháng 5 năm 2022) Tác dụng của glucose đối với số lượng và thể tích tiểu cầu: ý nghĩa đối với y học tái tạo. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Bản quyền 2022 Harrison và cộng sự. Đây là bài báo được truy cập mở, phân phối theo các điều khoản của Giấy phép Ghi công của Creative Commons CC-BY 4.0. Việc sử dụng, phân phối và sao chép không giới hạn trên mọi phương tiện đều được cho phép, miễn là tác giả và nguồn gốc ban đầu được ghi nhận.