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혈소판 풍부 혈장(PRP), 조직 재생, 혈소판 활성화, 포도당 증식 요법, 혈소판, 증식 요법
이 논문을 다음과 같이 인용하십시오: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (2022년 5월 17일) 혈소판 수 및 부피에 대한 포도당의 영향: 재생 의학에 대한 함의. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
혈소판 풍부 혈장(PRP)과 고장성 포도당 용액은 재생 의학에서 주사제로 흔히 사용되며, 때로는 함께 사용되기도 합니다. 고장성 포도당이 혈소판 용해 및 활성화에 미치는 영향은 지금까지 보고된 바 없습니다. 본 연구에서는 고농도 포도당이 PRP와 전혈(WB)의 혈소판 및 적혈구 수, 그리고 세포 부피에 미치는 영향을 조사했습니다. 모든 포도당 혼합물을 PRP 또는 전혈에 혼합했을 때 혈소판 수가 빠르게 부분적으로 감소하는 현상이 관찰되었으며, 이는 부분적인 용해와 일치하는 소견입니다. 첫 1분이 지난 후 혈소판 수는 안정적으로 유지되었는데, 이는 잔류 혈소판이 극심한 고장성 환경(>2000 mOsm)에 빠르게 적응했음을 시사합니다. 첫 1분이 지난 후 혈소판 수는 안정적으로 유지되었는데, 이는 잔류 혈소판이 극심한 고장성 환경(>2000 mOsm)에 빠르게 적응했음을 시사합니다. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструу аккомодация остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000mm) гипертонуса. 첫 1분이 지난 후 혈소판 수는 안정적으로 유지되었는데, 이는 잔류 혈소판이 극심한 고장성 환경(>2000 mOsm)에 빠르게 적응했음을 나타냅니다.第一分钟后, 血small板计数保持稳定, 表明残余血small板迅速适应极端（> 2000 mOsm） 高渗状态.2000mOsm) 높은 발열량. После первой minуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструу адаптация остаточных тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состояния. 첫 1분이 지난 후 혈소판 수는 안정적으로 유지되었는데, 이는 잔류 혈소판이 극심한 고삼투압 상태(>2000 mOsm)에 빠르게 적응했음을 나타냅니다.25% 이상의 포도당 농도에서 평균 혈소판 용적(MPV)이 유의하게 증가했는데, 이는 혈소판 활성화의 초기 단계를 나타냅니다. 혈소판 용해 또는 활성화가 발생하는지, 그리고 고장성 포도당 주사 단독 또는 PRP와의 병용이 추가적인 임상적 이점을 제공하는지 여부를 확인하기 위해서는 추가 연구가 필요합니다.
1950년대 미국 외과의사 조지 해킷은 힘줄과 인대에 증식 용액을 주입하여 많은 환자의 관절 및 허리 통증을 영구적으로 완화할 수 있다는 사실을 발견했습니다. 토끼를 대상으로 한 그의 실험에서는 그가 증식 요법이라고 명명한 치료법이 힘줄을 확대하고 강화시키는 것으로 나타났습니다. 조직학적 연구를 통해 이 과정에서 새로운 콜라겐이 생성된다는 사실이 확인되었습니다[1].
초창기 수십 년 동안 다양한 포도당 투여 방식이 시도되었습니다. 1990년대에 이르러서는 대부분의 의료진이 고농도 포도당 투여가 가장 안전하고 효과적인 방법이라고 여겼습니다. 그러나 작용 기전은 여전히 ​​불분명합니다.
Hackett의 작업 이후 20세기에는 임상 연구가 거의 수행되지 않았습니다. 그러나 2000년대에는 관심이 다시 높아졌고 요통[2], 무릎 골관절염[3], 외측 상과염[4] 치료를 위한 증식 요법의 성공적인 임상 시험이 여러 차례 완료되었습니다.
조직 재생에는 줄기세포의 참여가 필수적입니다. 따라서 고농도의 포도당은 줄기세포의 이동, 증식 및 분화를 유도해야 합니다. 본 연구에서는 혈소판이 신호전달물질 역할을 하며, 고농도의 포도당이 혈소판의 사이토카인 및 성장인자 방출을 촉진하여 재생 과정, 특히 줄기세포의 고농도 포도당 부위로의 이동을 유도할 수 있다는 가설을 제시합니다.
혈소판 활성화는 항상 세포 내 칼슘 증가에 선행합니다[5]. Liu 등은 2008년에 높은 ​​포도당 수치가 세포막의 TRPC6(transient receptor potential canonical type 6) 채널 활성을 증가시켜 혈소판으로 칼슘 이온이 유입되도록 한다는 것을 보여주었습니다[6]. 또 다른 연구에서는 미세소관 변연부가 칼슘 이온에 노출되면 변연부가 이완, 팽창 및 변형되어 원반형에서 구형으로 모양이 변하고 결과적으로 평균 혈소판 부피(MPV)가 증가한다는 것을 보여주었습니다[7].
본 연구의 가설은 혈소판이 고농도의 포도당에 노출되면 미세소관 주변부와 세포 내 환경에 영향을 미쳐 평균 혈소판 용적(MPV)이 증가한다는 것입니다.
모든 참가자는 연구 내용에 대한 설명을 들은 후, 샘플을 받기 전에 사전 동의서에 서명했습니다. 본 연구에서는 적혈구 수(erythroid count)와 평균 적혈구 용적(MCV)을 비교 분석에 포함하기 위해 헤마토크리트(hematocrit)가 2% 이상인 PRP 샘플만 사용했습니다.
이 연구는 4단계로 진행되었으며, 첫 번째 단계는 PRP였고 나머지 단계는 전혈을 사용했습니다(표 1). 이전에 설명한 바와 같이 [8], 모든 상대 원심력(RCF, g-force)은 원심분리기에서 혈액 기둥의 중간점(Rmid, cm)을 기준으로 계산했습니다. 우리는 혈소판 감작의 지표로 MPV를, 잠재적 혈소판 용해의 지표로 혈소판 수를 사용하기로 했는데, 이 두 가지 모두 표준 혈액 분석기에서 쉽게 측정할 수 있습니다.
첫 번째 단계에서는 47명의 자원자가 혈액 샘플을 기증했습니다. 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)이 함유된 튜브 1개와 PRP 전혈 샘플(구연산나트륨(NaCl, 3%)으로 항응고 처리) 1개를 기증했습니다(표 1). 튜브에 즉시 로커를 넣습니다. EDTA 샘플에 대해서는 3회, NaCl 샘플에 대해서는 3회씩 전혈구 검사(CBC)를 실시한 후, 위에서 설명한 다양한 방법으로 PRP를 준비했습니다[8]. 모든 PRP 샘플은 900~1000g에서 원심분리하여 준비했습니다. 각 PRP 샘플을 볼텍스 믹서로 5~10초 동안 혼합한 후, 0.5ml씩 5개의 튜브에 나누어 담습니다.
혈소판 노출이 혈당 농도 상승에 미치는 영향을 평가하기 위해, 0%, 5%, 12.5%, 25%, 50% 포도당 수용액 0.5ml를 혈소판 샘플과 혼합하여 0%, 2.5%, 6.25%, 12.5%, 25% 농도의 포도당 혼합액을 제조하고, 시험관 진탕기에서 15분간 진탕했습니다. 각 혼합액의 총 항산화능(TAC)은 15분 후 3회 반복 측정했습니다. 각 시험관의 혈소판 수(PLT), 적혈구 수, 평균 적혈구 용적(MCV), 평균 혈소판 용적(MPV)을 평균하고, 모든 PRP 샘플에 대한 평균 혈소판 수, 적혈구 수, MCV, MPV를 계산했습니다.
1차 데이터 수집이 완료된 후, D50W를 첨가했을 때 PRP 혈소판의 부피가 유의미하게 증가하는 것을 확인했습니다. 그러나 PRP 혈소판이 혈액 내 모든 혈소판을 대표하는 것은 아니며, PRP 배양액은 전혈 배양액과 다르기 때문에, 전혈에 D50W를 첨가했을 때의 효과를 확인하기 위한 2차 임상시험을 진행하기로 결정했습니다.
두 번째 실험에서는 첫 번째 실험 결과를 바탕으로 분석 섹션에서 설명한 대로 표본 크기를 30으로 설정했습니다. 이 실험에서는 20명의 자원자가 혈액 샘플을 제공했습니다(표 1). 전혈(1.8ml)을 3ml 주사기에 채취하고 40% NaCl 용액 0.2ml를 첨가하여 항응고 처리했습니다. 전혈이 담긴 주사기를 볼텍스 믹서로 5초간 혼합한 후, 3회 반복하여 CBC를 분석했습니다. 분석 후, 항응고 처리된 혈액에 5ml 주사기에 담긴 50% 포도당 용액 2ml를 첨가하고(최종 포도당 농도는 약 25%(D25)), 진탕 튜브에 넣어 30분간 반응시켰습니다. 30분 후, 전혈이 담긴 주사기의 D25/CBC 용액을 3회 반복하여 분석했습니다. 각 주사기별 혈소판 수, 적혈구 수, 평균 적혈구 용적(MCV), 평균 혈소판 용적(MPV)을 평균하여 계산하고, 포도당 첨가 전후의 각 샘플에 대한 평균 PLT, RBC 수, MCV, MPV를 산출했습니다.
최소 침습적 주사로 인해 증식성 포도당 요법 중 전혈 내 혈소판이 고장성 포도당에 노출되는 경우가 흔하고, 주사 직전에 PRP와 고장성 포도당을 병용하는 경우는 드물기 때문에, 본 연구에서는 1절 3단계와 4단계에서 전혈과 고장성 포도당을 병용하는 방식을 연구하기로 결정하였다. 각 단계에서 20명의 자원자가 혈액 항응고제인 ACD-A(트리소듐 시트레이트(22.0g/l), 시트르산(8.0g/l), 포도당(24.5g/l)을 함유한 산성 용액, 덱스트로스 시트르산염 용액) 7-8ml를 기증하였다(표 1). MPV 증가와 관련된 역치 백분율을 결정하기 위해 12.5% ​​이상의 포도당 혼합물만 사용하였다. 3단계에서는 혈액 1ml를 시험관에 넣었다. 그런 다음 30%, 40%, 또는 50% 포도당 용액 1ml를 시험관에 첨가하여 최종 포도당 농도가 각각 15%, 20%, 25%가 되도록 와류 혼합기에서 10초 동안 혈액을 혼합했습니다. 포도당 혈액 샘플은 혼합 직후 CBC 분석을 실시하고, 이후 30분 동안 2분 간격으로 반복했습니다.
초기 혼합 과정에서 1:1 비율의 고장성 포도당 용액과 전혈(WB) 또는 혈소판 풍부 혈장(PRP)을 첨가하면 혈소판이 수 초 동안 25% 이상의 농도에 노출됩니다. 4단계에서는 초기 최고 농도를 최소화하면서 고장성 포도당의 효과를 평가하고 포도당 효과의 상한값을 확인하기 위해 D25W 또는 D50W에 소량의 혈액만 첨가했습니다. 튜브에 D25W 또는 D50W 1ml를 넣고 전혈 0.2ml를 첨가한 후 10초 동안 볼텍싱했습니다. 이 경우 혈액은 3단계에서처럼 최종 농도보다 50% 높은 농도가 아니라 약 20% 높은 농도의 포도당에 노출되어 최종 포도당 농도가 각각 20.8%와 41.6%가 되었습니다. 혼합된 샘플은 3단계와 동일한 시간 간격으로 분석했습니다.
각 포도당 희석 시리즈의 첫 번째 단계에서는 파일럿 연구에 적합한 표본 크기인 30개의 샘플을 채취했습니다[9]. 각 단계(첫 번째 단계 포함)가 끝날 때마다, 한 모집단에서 연속 결과 변수의 평균을 추정하는 데 필요한 표본 크기를 결정하는 데 사용되는 공식을 사용하여 표본 크기의 적절성을 평가했습니다. 공식은 n = Z² x SD² /E²입니다. 이 공식에서 Z는 Z-점수, SD는 표준 편차, E는 원하는 오차입니다[10]. 우리의 알파는 0.05이며, 이는 Z 값 1.96에 해당하고, 예상 오차는 5%입니다. 따라서 n = (1.96² x SD²)/5²를 계산합니다. 결과는 각 단계에 필요한 표본 크기가 실제로 수집된 표본 수보다 작다는 것을 보여주었습니다.
1, 3, 4단계에서는 여러 가지 포도당 농도를 사용하여 각 포도당 농도의 효과를 분석했습니다. 이를 위해 0시점과 이후 각 시점(1단계: 15분, 3단계: 15분, 4단계: 15초, 이후 2분 간격) 사이의 변화율을 비교했습니다. 데이터가 Shapiro-Wilk 정규성 검정에서 정규 분포를 따르지 않는 것으로 나타났기 때문에, 각 시점의 변화율 비교에는 Mann-Whitney U 검정을 사용했습니다. 1, 3, 4단계(총 5개 그룹)에서 여러 그룹(총 5개)에 대한 1:1 분석을 수행했으므로, Bonferroni 보정을 적용하여 유의수준 α를 ≤0.01(≤0.05는 아님)로 조정했습니다.
고장성 포도당 용액의 모든 농도에서 혈소판 수가 감소하고, 12.5% ​​이상의 포도당 농도에서 PRP 혈소판의 평균 혈소판 용적(MPV)이 증가했습니다. PRP 혈소판 수는 기준 전혈 농도에 비해 1~5배 증가했으며, 측정 방법에 따라 차이가 있었습니다(그림에는 나타나지 않음). 고장성 포도당 용액의 모든 농도에서 혈소판 수가 감소하고, 12.5% ​​이상의 포도당 농도에서 PRP 혈소판의 평균 혈소판 용적(MPV)이 증가했습니다. PRP 혈소판 수는 기준 전혈 농도에 비해 1~5배 증가했으며, 측정 방법에 따라 차이가 있었습니다(그림에는 나타나지 않음). Уменьшение количества tромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV в тромбоцитах PRP при концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз по сравнения с исходной цельной 크로비, в зависимости от metода (не показано). 모든 고장성 포도당 농도에서 혈소판 수가 감소하고 12.5% ​​이상의 포도당 농도에서 PRP 혈소판의 평균 혈소판 용적(MPV)이 증가했습니다. PRP 혈소판 수는 측정 방법에 따라 기준 전혈 대비 1~5배 증가했습니다(결과는 제시되지 않음). ).에서> 12.5%의 葡萄糖浓비율이 낮고, 所有浓비율이 높은 高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 血small板中MPV 增加：与基线全血比，PRP血小板计数从浓島 1 倍上升到5倍，因方法而异（未描述）. 12.5% ​​이상의 포도당 농도에서 고농도의 포도당은 혈구 수를 감소시키고, PRP 혈액 MPV는 증가합니다. 기저 전혈과 비교했을 때, PRP 혈구 수는 농도에 비해 1~5배 증가합니다(자세한 설명은 생략). При концентрациях глукозы >12,5% все концентрации гипертонической глукозы снижали количество тромбоцитов, а MPV повышали в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- до 5-кратных концеntраций по сравнения с исходными концентрациями цельной 크로비, в зависимости от metода (не описано). 포도당 농도가 12.5%를 초과하면 모든 고혈압성 포도당 농도에서 혈소판 수가 감소하고 PRP 혈소판의 MPV가 증가했습니다. PRP 혈소판 수는 방법에 따라 기준 전혈 농도에 비해 1~5배 증가했습니다(설명 참조).그림 1은 혈소판 수가 물에 희석했을 때 기준 PRP 및 부피를 보정한 1:1 희석액(1:1, 부피 보정 포함)에 비해 거의 75% 감소했고, 다양한 농도의 포도당으로 15분 동안 희석했을 때는 20~30% 감소했음을 보여줍니다.
각 희석액의 세포 수는 희석 전 원래 세포 수에 대한 분수로 표시됩니다.
MPV는 PRP 생산 과정에서 희석 농도를 12.5% ​​물 또는 포도당(25% PRP 포도당 혼합물 포함)으로 더 이상 변경하지 않고도 최소한으로 감소했으며, 50% 포도당 용액으로 희석한 후에는 20% 이상 증가했습니다(그림 2). 대조적으로 적혈구는 H2O 이외의 다른 희석 농도에서 부피에 유의미한 변화를 보이지 않았습니다.
각 희석액에 포함된 세포의 평균 부피는 희석 전 원래 부피에 대한 백분율로 표시됩니다.
50% 포도당(25% 포도당 제형화용)에 노출된 BC에서도 혈소판 수치의 감소와 CVR의 증가가 관찰되었지만, 그 정도는 이전보다 덜 두드러졌습니다. 표 2는 50% 포도당에 희석한 전혈의 세포 수와 세포 부피를 50% 포도당에 희석한 1상 PRP 데이터와 비교한 것입니다. 적혈구 수와 적혈구 평균 용적(MCV)의 변화는 뚜렷하지 않았으며, 본 연구의 주요 관심사가 아니었습니다.
SD = 표준편차, MD = 그룹 간 평균 차이, SE = 평균 차이의 표준편차, RBC = 적혈구, PLT = 혈소판, PRP = 혈소판 풍부 혈장, WB = 전혈
WB에 D50W를 첨가한 후 희석 보정 혈소판 손실률은 7.7%(310±73% 대 286±96%)였으며, PRP를 D50W로 희석했을 때는 17.8%(664±348% 대 544±277%)였습니다. MPV WB는 16.8%(10.1±0.5에서 11.8±0.6으로) 증가했고, MPV PRP는 26%(9.2±0.8에서 11.6±0.7으로) 증가했습니다. PRP를 사용했을 때 혈소판 수 감소와 MPV 증가 모두에서 평균 차이가 유의미하게 더 컸지만, WB 내 혈소판 수 감소 변화는 유의미한 수준에 근접했고(310 ± 73에서 286 ± 96으로(-7.7%); p = .06), MPV 증가는 유의미했습니다(10.1 ± 0.5에서 11.8 ± 0.6으로(+16.8) p < .001). PRP를 사용했을 때 혈소판 수 감소와 MPV 증가 모두에서 평균 차이가 유의미하게 더 컸지만, WB 내 혈소판 수 감소 변화는 유의미한 수준에 근접했고(310 ± 73에서 286 ± 96으로(-7.7%); p = .06), MPV 증가는 유의미했습니다(10.1 ± 0.5에서 11.8 ± 0.6으로(+16.8) p < .001).PRP를 사용했을 때 혈소판 수 감소와 CVR 증가 모두에서 평균 차이가 유의미하게 더 컸지만, WB 내 혈소판 수 감소 변화는 유의미한 수준에 근접했습니다(310 ± 73에서 286 ± 96으로(-7.7%); p = 0.06).увеличение MPV было значительным (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). MPV의 증가는 유의미했습니다(10.1 ± 0.5에서 11.8 ± 0.6으로 (+16.8), p < 0.001).尽管PRP는 血small板计数减少및MPV 增加方face的平均差异显着更大，但WB 内血小板计数减少的变化几乎是显着的(310±) 73 至286 ± 96 (-7.7%); p = .06) 및 MPV 적(10.1 ± 0.5 ± 11.8 ± 0.6 (+16.8) p < .001).尽管 PRP 는 血小板 计数 와 와 增加 方face 的 平均 差异 显着 大 ， 但 但 内血작은板 计数 减少 的 几乎 是显着 的 ((310 ± 73 至 286 ± 96 (-7.7%) ; p = .06) 및 MPV 의 增加是显着 的 (10.1 ± 0.5 ± 11.8 ± 0.6 (+16.8) p < .001).전혈 내 혈소판 수 감소 변화는 유의미한 수준에 근접했지만(310 ± 73에서 286 ± 96으로(-7.7%); p = 0.06), 혈소판 풍부 혈장(PRP)은 혈소판 수 감소 및 평균 혈소판 용적(MPV) 증가에서 유의미한 차이를 보였다. 특히 MPV 증가는 통계적으로 유의미했다.(от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (10.1 ± 0.5에서 11.8 ± 0.6으로 (+16.8), p < 0.001).
MPV의 유의미한 변화를 관찰하기 위해서는 최종 포도당 농도가 20%여야 했지만, 25% 농도에서는 MPV 변화가 더욱 두드러지게 나타났습니다. 혈소판 감소는 초기 감소 후 안정화되었습니다. CVR은 초기에는 급격히 감소했지만, 최종 포도당 농도가 25%일 때 빠르게 회복되었으며, 이는 최종 포도당 농도가 20% 및 15%일 때 관찰된 CVR 수준보다 유의미하게 높았습니다(그림 3 및 표 3 좌측의 음영 상자 참조. p값은 Bonferroni 보정 0.01을 적용한 α 이하임을 나타냅니다). 또한, 혈소판 수는 초기 0~15초 동안 급격히 감소한 후 15초에서 30분까지 안정적으로 유지되었습니다(표 4 좌측 참조).
전혈에 다양한 농도의 포도당을 첨가했을 때, MPV는 초기에 급격히 감소한 후 농도에 비례하여 20% 이상 회복되었다. 범례는 희석 후 포도당 농도를 나타낸다. D15, D20, D25는 1:1 희석으로, D21과 D41은 1:5 희석으로 진행되었다.
표 4는 고장성 포도당 용액에 희석했을 때 혈소판 수의 변화를 보여줍니다. 1:1 희석과 1:5 희석에서 혈소판 수의 즉각적인 감소는 용량 의존적인 관계를 보였습니다. 1:1 희석군과 1:5 희석군을 비교했을 때, 1:1 희석군의 혈소판 수 즉각적인 감소율은 66±48,000(23%) 대 99±69,000(37%)으로 1:5 희석군보다 낮았습니다(p = 0.014). 첫 번째 측정 시점에서 초기 감소 후, 포도당 대비 혈소판 수는 안정화되었습니다(그림 4).
전혈을 포도당과 1:1 비율로 첨가하면 혈소판 수가 약 25% 감소합니다. 그러나 전혈을 1:5 비율로 첨가하면 감소율은 훨씬 더 높아져 약 50%에 달합니다.
41% 포도당은 25% 또는 21%보다 MPV를 더 빠르고 극적으로 증가시켰습니다. MPV 결과는 그림 3에 나타나 있습니다. 다른 모든 희석 농도에서는 50% 포도당을 첨가한 후 MPV의 즉각적인 초기 감소는 관찰되지 않았습니다. 25% 포도당(최종 희석 농도에서 포도당 농도 20.8%)을 사용했을 때, MPV 변화는 1:1 희석에서 20% 포도당을 사용했을 때의 변화와 유사했습니다(그림 3). 41% 혼합 농도에서 MPV 변화가 초기에는 25%보다 컸지만, 16분 후에는 41%와 25% 사이의 MPV 차이가 더 이상 유의미하지 않았습니다(표 3, 오른쪽). 또한 25% 포도당이 20.8%보다 MPV를 더 효과적으로 증가시켰다는 점도 주목할 만합니다.
이번 시험관 내 연구는 우리의 가설을 부분적으로 확인시켜 주었습니다. 이는 포도당 혼합에 의한 부분적인 혈소판 용해 가능성, 극심한 고장성에 대한 혈소판의 빠른 적응, 그리고 25% 이상의 고장성 포도당 농도에 대한 반응으로 평균 혈소판 용적(MPV)의 상당한 증가를 보여주었습니다. 이는 포도당 혼합에 의한 부분적인 혈소판 용해 가능성, 극심한 고장성에 대한 혈소판의 빠른 적응, 그리고 25% 이상의 고장성 포도당 농도에 대한 반응으로 평균 혈소판 용적(MPV)의 상당한 증가를 보여주었습니다. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов primесьу декстрозы, быструу аккомодация тромбоцитов до экстремального гипертоного гипертонуса и значительное повышение MPV в ответ на гипертоническуу концентрация декстрозы > 25%. 이 연구는 포도당에 의한 부분적인 혈소판 용해 가능성, 극심한 고장성에 대한 혈소판의 빠른 적응, 그리고 25% 이상의 고장성 포도당 농도에 대한 반응으로 평균 혈소판 용적(MPV)의 유의미한 증가를 보여주었습니다.它显示가 발행하는 매체는 25%입니다. 최고의 고품질 MPV 显着上升.它 显示 atur 过 葡萄糖 潜在 的 PART分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 极端 高渗 , 以及 响应> 25% 浓titude高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。 Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глукозой, быструу аadaptацив тромбоцитов к экстремальному гипертонусу и значительное увеличение MPV в ответ на концентрациу гипертонической глукозы > 25%. 이는 포도당 혼합물에 의한 부분적인 혈소판 용해 가능성, 극심한 고장성에 대한 혈소판의 빠른 적응, 그리고 25% 이상의 고장성 포도당에 대한 반응으로 평균 혈소판 용적(MPV)이 크게 증가하는 것을 보여줍니다.초기 증가율은 포도당 노출 41.6%에서 최대였지만, MPV 증가율은 노출 후 약 20분 만에 포도당 노출 25%에 근접했습니다.
혈소판 농도는 포도당의 영향을 받습니다. 모든 포도당 희석 농도에서 혈소판 수가 감소하는 것을 관찰했습니다. PRP 계열의 H2O(0%) 희석에서 혈소판 수가 급격히 감소하는 것은 삼투압 용해와 관련이 있을 수 있습니다. 또는 혈소판 응집으로 인한 인공적인 현상일 수도 있지만, 이는 해당 희석 농도에서 평균 혈소판 용적(MPV)에 변화가 없다는 점과 상반됩니다. 이러한 결과는 일부 혈소판이 저삼투압에 매우 민감하다는 것을 의미합니다.
모든 1:1 포도당 희석액에서 혈소판 수는 D5W(저장액, 252mOsm)에서도 20~30% 감소했는데, 이는 포도당의 특이적인 비삼투성 효과를 시사할 수 있다. 왜냐하면 포도당 농도가 3배 증가했을 때(D5W에서 D25W로) 혈소판 수와 평균 혈소판 용적(MPV)은 변화가 없었기 때문이다. 실제로 혈소판 농도는 삼투압이 증가함에 따라 약간 증가하는 경향을 보였다.
1:1 희석과 1:5 희석 사이의 혈소판 감소는 용해 효과가 초기 및 최종 포도당 농도에 따라 달라진다는 것을 의미합니다. 만약 용해 효과가 초기 농도에만 의존한다면, 1:1 희석 농도 사이에서 혈소판 감소에 차이가 나타날 것으로 예상할 수 있습니다. 하지만 그렇지 않습니다. 용해 효과가 최종 포도당 농도에만 의존한다면, 20% 1:1 희석과 20.8% 1:5 희석 사이에 큰 차이가 없을 것으로 예상됩니다. 그럼에도 불구하고 우리는 그러한 차이를 발견했습니다.
혈소판 용해로 인해 혈소판 손실이 발생하면 부분 용해액이 형성되고, 그 후 사이토카인과 성장 인자가 세포외 환경으로 방출됩니다. 여러 연구에서 혈소판 용해액이 증식 용액으로서 PRP만큼 효과적이라는 사실이 밝혀졌습니다[11]. PRP 자체도 증식 치료에 효과적인 용액임이 입증되었습니다[12-14].
비활성 혈소판은 여러 내부 구조로 강화된 원반 형태로 순환합니다. 활성화되면 구형 또는 아메바 모양으로 변형되어 부피가 증가합니다. 부피 증가는 표면적 증가를 필요로 하는데, 이는 개방 세관 시스템(OCS)의 돌출과 세포막에 외분비 과립이 추가됨으로써 발생합니다. 고장성 포도당에 의해 유도되는 평균 혈소판 용적(MPV) 증가가 이러한 기전 중 하나 또는 둘 다를 포함하는지는 아직 밝혀지지 않았지만, 후자의 경우 MPV 증가는 탈과립을 나타낼 것입니다.
본 연구는 PRP 또는 전혈 혈소판에 고농도의 포도당을 노출시켰을 때, 포도당 농도가 각각 25%와 41.6%일 때 15분 이내에 MPV가 증가하는 것을 보여주었습니다.
혈소판 MPV의 증가는 칼슘 유입에 대한 반응으로 주변 미세소관 엉킴이 확장된 결과일 수 있습니다. Liu 등은 포도당이 혈소판 TRPC6 채널을 통해 칼슘 유입을 매개한다는 것을 보여주었습니다[6]. 우리의 가설은 포도당이 미세소관 엉킴의 이완을 유도하여 MPV 증가 및 혈소판 민감화 및/또는 활성화를 초래한다는 것입니다. 그러나 우리의 결과로 판단컨대, 이는 전체 설명의 일부일 뿐입니다. 우리의 실험에서 D25W 미만의 농도에서는 MPV 증가가 나타나지 않았습니다. 12.5%에서 25% 사이의 포도당 농도에 대한 노출 실험을 수행하지 않았다는 점을 고려할 때, 1단계 결과는 이 범위의 포도당 농도에서 MPV 증가를 유발하는 역치가 존재할 가능성을 시사합니다. 3단계와 4단계의 추가 실험에서는 20~25%의 포도당이 이러한 역치인 것으로 나타났지만, 그 이유는 아직 불분명합니다.
원심분리 후 MPV가 약 9% 감소하는 것도 관찰되었습니다. 이러한 MPV 감소가 원심분리기의 적혈구층에 포획된 더 크고 밀도가 높은 혈소판 때문인지는 확실하지 않습니다. 그러나 이 관찰 결과는 PRP 혈소판이 전혈 혈소판보다 크기가 작고 밀도가 낮은 하위 집단일 가능성을 시사하므로 임상의에게 중요한 의미를 가질 수 있습니다.
이전 연구에서 우리는 수동 방법을 이용한 PRP 준비가 저렴하다는 것을 보여주었습니다[8]. 만약 포도당이 조직 혈소판이나 PRP를 민감하게 만들어 활성화에 더 쉽게 반응하게 하거나, PRP가 부분 용해 특성을 갖도록 생산된다면, 이는 재생을 촉진하고 치료 필요성을 줄일 수 있습니다. 따라서 PRP와 고농축 포도당의 조합은 PRP 또는 포도당 단독보다 비용 효율적일 수 있습니다.
본 연구에는 몇 가지 한계점이 있습니다. 첫째, 여러 가지 다른 방법으로 얻은 PRP를 사용했기 때문에 결과가 상충될 수 있습니다. 둘째, 혈소판 활성화 여부를 보다 정확하게 판단하기 위해 샘플에 대한 생화학적 분석을 수행하지 못했습니다. 알파 과립 탈과립의 정도 또는 존재 여부를 더 잘 이해하기 위해 P-셀렉틴, 혈소판 인자 4, 단핵구 혈소판 응집체 또는 기타 혈소판 활성화 지표를 측정하고 싶지만, 이는 본 연구의 범위를 벗어납니다. 셋째, 포도당에 노출된 혈소판에서 평균 혈소판 용적(MPV) 증가가 미세소관 엉킴에 대한 영향 때문인지 전자 현미경이나 다른 방법을 통해 확인할 수 없었습니다.
전혈(WB) 또는 혈소판 풍부 혈장(PRP)을 25% 포도당과 혼합했을 때 평균 혈소판 용적(MPV)이 증가하여 혈소판 활성화가 시작되었음을 알 수 있었지만, 본 연구에서는 혈소판 응집이나 탈과립의 진행은 관찰되지 않았습니다. 고장성 포도당 혼합물은 혈소판 손실을 유발했는데, 이는 용해 효과를 나타내는 것일 수 있습니다. 혈소판의 부분적인 활성화 또는 용해는 혈소판 주입 후 조직 재생을 유발할 수 있습니다. 이러한 변화가 임상적으로 어떤 결과를 초래할지는 아직 명확하지 않습니다. 후속 연구에서는 활성화 또는 용해를 보다 정확하게 측정하고, 고장성 포도당 혼합물과 전혈 또는 PRP의 다양한 임상적 효과를 평가했습니다.
포도당 증식 치료는 간단하고 저렴한 재생 치료법으로, 임상 연구가 빠르게 확대되고 있습니다. 본 연구는 증식 치료의 재생 메커니즘 일부를 이해하는 데 도움이 될 수 있는 생리학적 기전을 제시하며, 이 기전이 확인된다면 치료에 대한 이해에 중요한 단서를 제공할 수 있을 것입니다.
미국 미주리 대학교 캔자스시티 의과대학 생의학 및 보건 정보학과
인간 대상: 본 연구의 모든 참가자는 동의했거나 동의하지 않았습니다. 국제 세포의학회(International Society for Cellular Medicine)는 ICMS-2017-003 승인을 발행했습니다. 다음 프로토콜은 국제 세포의학회 기관윤리위원회(Institutional Review Board)의 승인을 받아 추가 연구에 사용될 예정입니다. 제목: 기저 혈액검사(CBC) 혈소판 수치를 기반으로 한 혈소판 풍부 혈장(PRP) 약물 수율 계산. 동물 대상: 모든 저자는 본 연구에 동물이나 조직이 사용되지 않았음을 확인했습니다. 이해 충돌: 모든 저자는 ICMJE 통일 공개 양식에 따라 다음과 같이 선언합니다. 지불/서비스 정보: 모든 저자는 제출된 연구와 관련하여 어떠한 기관으로부터도 재정적 지원을 받지 않았음을 선언합니다. 재정적 관계: 모든 저자는 현재 또는 지난 3년 동안 제출된 연구에 관심을 가질 수 있는 어떠한 기관과도 재정적 관계가 없음을 선언합니다. 기타 관계: 모든 저자는 제출된 연구에 영향을 미칠 수 있는 다른 관계나 활동이 없음을 선언합니다.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K 등 (2022년 5월 17일) 혈소판 수 및 부피에 대한 포도당의 영향: 재생 의학에 대한 함의. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© 2022 Harrison et al. 본 논문은 크리에이티브 커먼즈 저작자표시 라이선스 CC-BY 4.0 조건에 따라 배포되는 오픈 액세스 논문입니다. 원저자 및 출처를 명시하는 조건 하에 모든 매체에서 무제한 사용, 배포 및 복제가 허용됩니다.