«No dubtis mai que un petit grup de ciutadans reflexius i dedicats pot canviar el món. De fet, és l'únic que hi ha.»
La missió de Cureus és canviar el model de publicació mèdica de llarga data, en què la presentació d'investigacions pot ser costosa, complexa i requereix molt de temps.
Plasma ric en plaquetes/prp, regeneració tissular, activació plaquetària, teràpia proliferativa de glucosa, plaquetes, teràpia proliferativa
Citeu aquest article com: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17 de maig de 2022) L'efecte de la glucosa en el recompte i volum de plaquetes: implicacions per a la medicina regenerativa. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
El plasma ric en plaquetes (PRP) i les solucions de glucosa hipertònica s'utilitzen habitualment per a la injecció en medicina regenerativa, de vegades junts. L'efecte de la glucosa hipertònica sobre la lisi i l'activació plaquetària no s'havia descrit anteriorment. Vam provar l'efecte de concentracions elevades de glucosa sobre el recompte de plaquetes i eritròcits, així com els volums cel·lulars en PRP i sang sencera (WB). Es va produir una ràpida reducció parcial del recompte de plaquetes amb totes les mescles de glucosa barrejades amb PRP o sang sencera, d'acord amb la lisi parcial. Després del primer minut, el recompte de plaquetes es va mantenir estable, cosa que suggereix una ràpida acomodació de les plaquetes residuals a una hipertonicitat extrema (> 2000 mOsm). Després del primer minut, el recompte de plaquetes es va mantenir estable, cosa que suggereix una ràpida acomodació de les plaquetes residuals a una hipertonicitat extrema (> 2000 mOsm). После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на зывает на юцимы боставалось остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Després del primer minut, el recompte de plaquetes es va mantenir estable, cosa que indica una ràpida acomodació de les plaquetes residuals a una hipertonicitat extrema (> 2000 mOsm).第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态。2000 mOsm）高渗状态。 После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на зывает на ююпаы остаточных тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. Després del primer minut, el recompte de plaquetes es va mantenir estable, cosa que indica una ràpida adaptació de les plaquetes residuals a l'estat hiperosmolar extrem (>2000 mOsm).Concentracions de glucosa del 25% o superiors van provocar un augment significatiu del volum plaquetari mitjà (VPM), cosa que indica una fase primerenca de l'activació plaquetària. Calen més estudis per determinar si es produeix lisi o activació plaquetària i si la injecció hipertònica de glucosa sola o en combinació amb PRP pot proporcionar un benefici clínic addicional.
A la dècada del 1950, el cirurgià estatunidenc George Hackett va descobrir que podia alleujar permanentment el dolor articular i d'esquena en molts pacients injectant una solució proliferativa als tendons i lligaments. Els seus experiments amb conills van mostrar que el tractament, que va anomenar teràpia proliferativa, feia que els tendons s'engrandissin i s'enfortissin. Estudis histològics han confirmat que es produeix nou col·lagen durant aquest procés [1].
Durant les primeres dècades, es van provar moltes solucions de distribució diferents. A la dècada del 1990, la majoria dels professionals consideraven que les altes concentracions de glucosa eren el mètode més segur i eficaç. Tanmateix, el mecanisme d'acció encara no està clar.
Al segle XX es van dur a terme pocs estudis clínics després del treball de Hackett. Tanmateix, a la dècada del 2000 hi va haver un renovat interès i es van completar diversos assajos clínics reeixits de teràpia proliferativa per al tractament del dolor lumbar [2], l'artrosi de genoll [3] i l'epicondilitis lateral [4].
La regeneració de teixits requereix la participació de cèl·lules mare. Per tant, altes concentracions de glucosa han d'induir d'alguna manera la migració, la replicació i la diferenciació de les cèl·lules mare. La nostra hipòtesi és que les plaquetes poden actuar com a missatgeres i que altes concentracions de glucosa poden fer que les plaquetes alliberin citocines i factors de creixement, promovent així els processos regeneratius, especialment la migració de cèl·lules mare a zones amb altes concentracions de glucosa.
L'activació plaquetària sempre precedeix un augment del calci intracel·lular [5]. Liu et al. van demostrar el 2008 que els nivells alts de glucosa augmenten l'activitat dels canals de tipus canònic 6 del receptor potencial transitori (TRPC6) a la membrana plasmàtica, cosa que provoca una afluència d'ions de calci a les plaquetes [6]. Un altre estudi va demostrar que l'exposició de la zona marginal dels microtúbuls als ions de calci provoca relaxació, expansió i deformació de la zona marginal, cosa que al seu torn provoca un canvi de forma de disc a esfèrica, donant lloc al volum plaquetari mitjà (VPM) [7].
La nostra hipòtesi en aquest estudi és que l'exposició de plaquetes a altes concentracions de glucosa afecta la zona marginal dels microtúbuls i l'entorn intracel·lular, provocant un augment del MPV.
Tots els participants van signar un formulari de consentiment informat després que se'ls expliquessin els detalls de l'estudi i abans de rebre les mostres. En aquest estudi, només es van utilitzar mostres de PRP amb un hematòcrit superior al 2% per tal de poder incloure el recompte d'eritròcits i el volum corpuscular mitjà de glòbuls vermells (VCM) per a la comparació.
L'estudi es va dur a terme en quatre fases, la primera fase va ser PRP i les fases restants van ser sang sencera (Taula 1). Com s'ha descrit anteriorment [8], totes les forces centrífugues relatives (RCF, força g) es van calcular a partir del punt mitjà (Rmid, en cm) de la columna de sang a la xeringa centrífuga. Vam optar per utilitzar el MPV com a marcador de sensibilització plaquetària i el recompte de plaquetes com a indicador de possible lisi plaquetària, ambdues es poden mesurar fàcilment en analitzadors hematològics estàndard.
En la primera fase, 47 voluntaris van donar mostres de sang: un tub d'àcid etilendiaminotetraacètic (EDTA) i una mostra de sang completa de PRP (anticoagulada amb citrat de sodi (NaCl, 3%)) (Taula 1). Col·loqueu el balancín al tub immediatament. Es va realitzar un recompte sanguini complet (CBC) de les mostres d'EDTA per triplicat, i les mostres de NaCl es van analitzar per triplicat per a l'anàlisi CBC, i després es va preparar PRP mitjançant diversos mètodes descrits anteriorment [8]. Totes les mostres de PRP es van preparar per centrifugació a 900–1000 g. Barregeu cada mostra de PRP en un mesclador de vòrtex durant 5-10 segons i després dividiu cinc alíquotes de 0,5 ml en tubs.
Per avaluar l'efecte de l'exposició a les plaquetes sobre les concentracions elevades de glucosa, es van barrejar quantitats iguals (0,5 ml) de glucosa al 0%, 5%, 12,5%, 25% i 50% en aigua amb mostres de plaquetes per obtenir concentracions del 0%, 2,5%, 6,25%, 12,5% i 25% de la barreja de glucosa i es van barrejar els tubs en un agitador de tubs d'assaig durant 15 minuts. El TAC de cada barreja es va analitzar per triplicat després de 15 min. Es va fer la mitjana del recompte de plaquetes (PLT), el recompte de glòbuls vermells, el MCV i el MPV per a cada tub, i es van calcular les mitjanes del recompte de plaquetes, el recompte de glòbuls vermells, el MCV i el MPV per a totes les mostres de PRP.
Després de completar la primera fase de recollida de dades, vam observar un augment significatiu del volum plaquetari en les plaquetes de PRP després de l'addició de D50W. Les plaquetes de PRP no representen necessàriament totes les plaquetes de la sang, i el medi PRP és diferent del medi WB. Per tant, vam decidir dur a terme un segon assaig de fase per avaluar l'efecte d'afegir D50W a sang sencera.
Per a la segona ronda, vam triar una mida de mostra de 30 basant-nos en els resultats de la primera sèrie, tal com es descriu a la secció Anàlisi. En aquesta sèrie, 20 voluntaris van donar mostres de sang (Taula 1). Es va extreure sang sencera (1,8 ml) en una xeringa de 3 ml i es va anticoagular amb 0,2 ml de NaCl al 40%. La xeringa de sang sencera es va barrejar durant cinc segons amb un mesclador vortex i es va analitzar el CBC per triplicat. Després de l'anàlisi, es va afegir sang anticoagulada a 2 ml de glucosa al 50% en una xeringa de 5 ml (la concentració final de glucosa va ser d'aproximadament el 25% (D25)) i es va col·locar en un tub d'agitació durant 30 minuts. Després de 30 minuts, es van analitzar per triplicat D25/CBC en xeringues WB. Es va fer la mitjana del recompte de plaquetes, el recompte de eritròcits, el VCM i el VMP per xeringa, i es van calcular les mitjanes de PLT, recompte de eritròcits, VCM i VMP per a cada mostra abans i després d'afegir glucosa.
Com que les plaquetes de sang sencera solen estar exposades a glucosa hipertònica durant la teràpia proliferativa amb glucosa a causa de la injecció mínimament invasiva, i no és habitual combinar PRP amb glucosa hipertònica just abans de la injecció, vam decidir estudiar la glucosa hipertònica en combinació amb WB a la Secció 1. Pas tres i quatre. A cada etapa, 20 voluntaris van donar 7-8 ml d'ACD-A (àcid que conté citrat trisòdic (22,0 g/l), àcid cítric (8,0 g/l) i glucosa (24,5 g/l), solució de citrat de dextrosa) per a anticoagulants sanguinis (Taula 1). Només es van utilitzar mescles de glucosa superiors al 12,5% per determinar el percentatge llindar associat amb un augment del MPV. A la tercera etapa, es col·loca 1 ml de sang en un tub d'assaig. A continuació, barregeu la sang en un mesclador vortex durant 10 segons afegint 1 ml de glucosa al 30%, glucosa al 40% o glucosa al 50% al tub per obtenir una concentració final de glucosa del 15%, 20% i 25%, respectivament. Les mostres de sang amb glucosa es van analitzar per detectar hemograma complet immediatament després de la barreja i es van repetir cada dos minuts durant 30 minuts.
Durant la barreja inicial, l'addició de glucosa hipertònica 1:1 i WB o PRP exposa les plaquetes a concentracions superiors al 25% durant diversos segons. En el quart pas, per avaluar l'efecte de la glucosa hipertònica amb concentracions màximes inicials mínimes i provar el límit superior de l'efecte de la glucosa, només vam afegir una petita quantitat de sang a D25W o D50W. Es va col·locar 1 ml de D25W o D50W en un tub i es va afegir 0,2 ml de WB mentre es va agitar la mostra amb vòrtex durant 10 segons. En aquests casos, la sang es va exposar a glucosa a una concentració aproximadament un 20% per sobre de la concentració final, en lloc d'un 50% per sobre de la concentració final com a la Fase 3, donant lloc a concentracions finals de glucosa del 20,8% i el 41,6%. Les mostres barrejades es van analitzar al mateix interval de temps que al pas 3.
En el primer pas de cada sèrie de dilució de glucosa, es van prendre 30 mostres, ja que aquesta era la mida de mostra adequada per a l'estudi pilot [9]. Al final de cada fase (inclosa la primera fase), s'ha d'avaluar l'adequació de la mida de la mostra mitjançant la fórmula utilitzada per determinar la mida de mostra necessària per estimar la mitjana de la variable de resultat contínua en una població. Fórmula n = Z2 x SD2 /E2. En aquesta equació, Z és la puntuació Z, la SD és la desviació estàndard i E és l'error desitjat [10]. La nostra alfa és de 0,05, que correspon a un valor Z d'1,96, i esperem un error de 5 (en percentatge). Per tant, resolem per n = (1,962 x SD2)/52. Els resultats van mostrar que la mida de mostra necessària per a cada etapa era menor que el nombre real recollit.
Durant els períodes 1, 3 i 4 utilitzant més d'una concentració de glucosa, es va analitzar l'efecte de diferents concentracions de glucosa comparant el canvi fraccionari entre el temps 0 i cada temps posterior (fase 1 als 15 minuts, període 3 als 15 minuts) i quatre als 15 segons, i després cada dos minuts. Les taxes de canvi per a cada període de temps es van comparar mitjançant la prova U de Mann-Whitney perquè les dades no seguien una distribució normal determinada per la prova de normalitat de Shapiro-Wilk. Com que es va realitzar una anàlisi 1 a 1 de diversos grups (cinc) en el primer, tercer i quart passos (cinc en total), es va realitzar una correcció de Bonferroni per ajustar el valor alfa desitjat a ≤0,01 però no ≤0,05.
Reducció del recompte de plaquetes amb totes les concentracions de dextrosa hipertònica i un augment del MPV en plaquetes de PRP a una concentració de dextrosa > 12,5%: el recompte de plaquetes de PRP va augmentar d'una a cinc vegades la concentració en comparació amb la sang sencera basal, variant segons el mètode (no representat). Reducció del recompte de plaquetes amb totes les concentracions de dextrosa hipertònica i un augment del MPV en plaquetes de PRP a una concentració de dextrosa >12,5%: el recompte de plaquetes de PRP va augmentar d'una a cinc vegades la concentració en comparació amb la sang sencera basal, variant segons el mètode (no representat). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстроцитов при всех концентрациях гипертонической декстроцитов MP тромбоцитах PRP при концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличирало1-пь 5 сравнению с исходной цельной кровью, в зависимости от метода (не показано). Disminució del recompte de plaquetes a totes les concentracions hipertòniques de dextrosa i augment del MPV en plaquetes de PRP a una concentració de dextrosa >12,5%: el recompte de plaquetes de PRP va augmentar d'1 a 5 vegades en comparació amb la sang sencera basal, depenent del mètode (no es mostra). ).在> 12,5% 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，丰度数，PRP 板度的高渗葡萄糖降低血小板计数，丰度的高渗增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法，因方法／而氏浓度的1 A una concentració de glucosa >12,5%, l'alta concentració de glucosa redueix el recompte sanguini, el MPV sanguini de PRP augmenta: en comparació amb l'ús de 与基线全血, el recompte sanguini de PRP augmenta d'1 a 5 vegades superior a la concentració (no descrit). При концентрациях глюкозы >12,5% все концентрации гипертонической глюкозы снижтали кослвиции тромбоцитов, а MPV повышали в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от51--ра оты концентраций по сравнению с исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от мето (no descrit). A concentracions de glucosa > 12,5%, totes les concentracions de glucosa hipertensiva van disminuir el recompte de plaquetes i van augmentar el MPV en les plaquetes de PRP: el recompte de plaquetes de PRP va augmentar d'1 a 5 vegades en comparació amb les concentracions basals en sang sencera, depenent del mètode (tal com es descriu).La figura 1 mostra que el nombre de plaquetes va disminuir gairebé un 75% després de la dilució en aigua i entre un 20 i un 30% després de 15 minuts de dilució amb diferents concentracions de glucosa en comparació amb el PRP basal i una dilució 1:1 ajustada per volum (1-k1 amb correcció de volum). k-1 cria).1 cria).
El nombre de cèl·lules en cada dilució s'expressa com una fracció del nombre original abans de la dilució.
El MPV va disminuir mínimament durant la producció de PRP, sense més canvis en les concentracions de dilució fins al 12,5% en aigua o glucosa (incloses les mescles de glucosa PRP al 25%), i va augmentar més d'un 20% després de la dilució en una solució de glucosa al 50% (Fig. 2). En canvi, els eritròcits no van mostrar cap canvi significatiu de volum en cap dilució que no fos l'H2O.
El volum mitjà de cèl·lules en cada dilució s'expressa com a percentatge del volum original abans de la dilució.
Es va observar una reducció similar, però menys pronunciada, del recompte de plaquetes i un augment de la CVR en fàrmacs de sang completa exposats a glucosa al 50% (per formular amb glucosa al 25%). La Taula 2 compara el nombre i els volums cel·lulars en sang completa diluïda en dextrosa al 50% amb les dades de PRP de fase 1 diluïdes en dextrosa al 50%. Els canvis en el recompte de glòbuls vermells i el volum mitjà de glòbuls vermells no eren evidents i no van ser el centre de la nostra atenció.
DE = desviació estàndard, DM = diferència de mitjanes entre grups, EE = desviació estàndard de la diferència de mitjanes, RBC = eritròcits, PLT = plaquetes, PRP = plasma ric en plaquetes, WB = sang sencera
Després d'afegir D50W a WB, el percentatge de pèrdua de plaquetes ajustada a la dilució va ser del 7,7% (310 ± 73 vs. 286 ± 96) en comparació amb el 17,8% per a la dilució de PRP en D50W (664 ± 348 vs. 544 ± 277). El MPV de WB va augmentar un 16,8% (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6), mentre que el MPV de PRP va augmentar un 26% (9,2 ± 0,8 vs. 11,6 ± 0,7). Tot i que les diferències mitjanes tant en la reducció del recompte de plaquetes com en l'augment del MPV van ser significativament més grans amb PRP, els canvis en la reducció del recompte de plaquetes dins del grup blanc de sang van ser gairebé significatius (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) i l'augment del MPV va ser significatiu (10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Tot i que les diferències mitjanes tant en la reducció del recompte de plaquetes com en l'augment del MPV van ser significativament més grans amb PRP, els canvis en la reducció del recompte de plaquetes dins del grup blanc de sang van ser gairebé significatius (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) i l'augment del MPV va ser significatiu (10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Tot i que les diferències mitjanes tant en la reducció del recompte de plaquetes com en l'augment de la RCV van ser significativament més grans amb PRP, els canvis en la disminució del recompte de plaquetes dins del grup blanc de sang van ser gairebé significatius (310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). l'augment del MPV va ser significatiu (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7%)；p = ,06）MPV的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）.尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 但 但 轆 冡敏 氡敝 异减少 的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = 0,06）和MPV 的增昊＄增昊＄增昊＄增昊＄增± 0,5 到 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).El canvi en la reducció del recompte de plaquetes dins de la zona blanca va ser gairebé significatiu (de 310 ± 73 a 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), tot i que el PRP va tenir diferències mitjanes significativament més grans en la disminució del recompte de plaquetes i l'augment del MPV, i l'augment del MPV va ser significatiu.(de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (de 10,1 ± 0,5 a 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Es requeria una concentració final de glucosa al 20% per veure un canvi significatiu en el MPV, però el canvi en el MPV va ser més pronunciat a la concentració final del 25%. La pèrdua de plaquetes es va estabilitzar després del descens inicial. Vam observar una disminució inicial pronunciada de la CVR, però la CVR es va restaurar ràpidament a la concentració final de glucosa del 25%, que era significativament més alta que els nivells de CVR observats a les concentracions finals de glucosa del 20% i 15% (Fig. 3 i a l'esquerra de la Taula 3; requadres ombrejats). indiquen valors de p ≤ alfa amb una correcció de Bonferroni de 0,01). També hi va haver una forta caiguda inicial en el nombre de PLT, observada a la fase inicial de 0-15 s, i després es va mantenir estable (de 15 s a 30 min; esquerra de la taula 4).
L'addició de diverses concentracions de glucosa a la sang sencera va provocar una disminució ràpida inicial del MPV seguida d'una recuperació dependent de la concentració de més del 20%. La llegenda mostra la concentració de glucosa després de la dilució. D15, D20 i D25 es van dur a terme en una dilució 1:1. D21 i D41 es van dur a terme en una dilució 1:5.
La taula 4 mostra el canvi en el recompte de plaquetes quan es dilueix en glucosa hipertònica. Vam observar una relació dependent de la dosi entre la disminució immediata del nombre de PLT a la dilució 1:1 i a la dilució 1:5. En comparar les dilucions 1:1 com un sol grup amb les dilucions 1:5, el grup 1:1 va tenir una disminució immediata del recompte de plaquetes inferior al grup 1:5 66 ± 48.000 (23%) enfront de 99 ± 69.000 (37%)., p = 0,014) al grup 1:5. Després d'una disminució inicial en el primer punt de mesura, el recompte de plaquetes com a percentatge de glucosa es va estabilitzar (Fig. 4).
Quan s'afegeix sang sencera a glucosa en una proporció d'1:1, el recompte de plaquetes es redueix aproximadament en un 25%. No obstant això, quan s'afegeix sang sencera en una proporció d'1:5, la reducció va ser molt més gran, aproximadament un 50%.
La glucosa al 41% va augmentar el VPM més ràpidament i de manera més dràstica que la del 25% o el 21%. Els resultats del VPM es mostren a la Figura 3. En totes les altres dilucions, no es va observar cap disminució inicial immediata del VPM després de l'addició de glucosa al 50%. Quan es va utilitzar glucosa al 25% (concentració de glucosa del 20,8% a la dilució final), el canvi en el VPM va ser comparable al canvi en la glucosa al 20% a una dilució 1:1 (Fig. 3). Tot i que els canvis en el VPM van ser inicialment més grans a la concentració mixta del 41% que al 25%, la diferència en el VPM entre el 41% i el 25% després de 16 minuts ja no va ser significativa (Taula 3, dreta). També és interessant que la glucosa al 25% va augmentar el VPM de manera més eficaç que el 20,8%.
Aquest estudi in vitro va confirmar parcialment la nostra hipòtesi. Va mostrar una possible lisi parcial de plaquetes per la barreja de dextrosa, una ràpida acomodació de les plaquetes a una hipertonicitat extrema i un augment significatiu del MPV en resposta a concentracions > 25% de dextrosa hipertònica. Va mostrar una possible lisi parcial de plaquetes per la barreja de dextrosa, una ràpida acomodació de les plaquetes a una hipertonicitat extrema i un augment significatiu del MPV en resposta a concentracions > 25% de dextrosa hipertònica. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю одакцитов тромбоцитов до экстремального гипертонуса и значительное повышение MPV в ответ на гипичерток концентрацию декстрозы > 25%. Va mostrar una possible lisi plaquetària parcial amb dextrosa, una acomodació plaquetària ràpida a hipertonicitat extrema i un augment significatiu del MPV en resposta a nivells hipertònics de dextrosa > 25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25% 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 在 适庯 垫 枫縏枫响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой, быстрауюп тромбоцитов к экстремальному гипертонусу i значительное увеличение MPV en ответ на контраценце гипертонической глюкозы > 25%. Mostra una possible lisi plaquetària parcial per mescles de glucosa, una ràpida adaptació plaquetària a la hipertonicitat extrema i un augment significatiu del MPV en resposta a la glucosa hipertònica >25%.L'augment inicial va ser màxim amb una exposició a la glucosa del 41,6%, però l'augment del MPV es va aproximar a una exposició a la glucosa del 25% aproximadament 20 minuts després de l'exposició.
La concentració de plaquetes es veu afectada per la glucosa. Vam observar que la quantitat de PLT disminuïa en totes les dilucions de glucosa. Una forta disminució del nombre de plaquetes en dilucions d'H2O (0%) de la sèrie PRP pot estar associada amb la lisi osmòtica. Alternativament, això podria ser un artefacte causat per l'aglomeració plaquetària, però això contrasta amb la manca de canvi de MPV en aquesta dilució. Aquesta troballa significa que algunes plaquetes són molt sensibles a la hipoosmolaritat.
En totes les dilucions 1:1 de glucosa, la quantitat de PLT va disminuir entre un 20 i un 30%, fins i tot per D5W (hipotònica a 252 mOsm), cosa que pot indicar un efecte no osmòtic específic de la glucosa, ja que tant la PLT com el MPV es van mantenir sense canvis amb un augment triple de la concentració de glucosa de D5W a D25W. De fet, les concentracions de PLT van tendir a augmentar lleugerament amb l'augment de l'osmolaritat.
La disminució de la PLT entre dilucions 1:1 i 1:5 significa que l'efecte de dissolució depèn de la concentració inicial i final de glucosa. Si depengués només de la concentració inicial, s'esperaria veure una diferència en la reducció de la PLT entre concentracions 1:1. Però no ho fem. Si l'efecte de lisi depèn només de la concentració final de glucosa, no esperem gaire diferència entre una dilució 1:1 del 20% i una dilució 1:5 del 20,8%. I tot i així ho vam aconseguir.
Si es produeix una pèrdua de plaquetes a causa de la lisi plaquetària, es forma un lisat parcial, després del qual les citocines i els factors de creixement s'alliberen al medi extracel·lular. Diversos estudis han demostrat que el lisat plaquetari és gairebé tan eficaç com el PRP com a solució de proliferació [11]. S'ha demostrat que el PRP en si mateix és una solució eficaç per al tractament de la proliferació [12-14].
Les plaquetes inactives circulen en forma de disc reforçat amb diverses estructures internes. Durant l'activació, adopten una forma més esfèrica o d'ameba, cosa que provoca un augment de volum. L'augment de volum requereix un augment de la superfície, que és el resultat de l'extrusió del sistema tubular obert (SCO) i l'addició de grànuls exocítics a la membrana. Queda per determinar si l'augment del MPV induït per la glucosa hipertònica implica un o tots dos mecanismes, però si és el segon, un augment del MPV indicaria desgranulació.
Aquest estudi va demostrar que l'exposició a altes concentracions de glucosa en PRP o plaquetes de sang completa va provocar un augment del MPV en 15 minuts amb una concentració de glucosa del 25% i el 41,6%, respectivament.
L'augment del MPV plaquetari pot ser degut a la dilatació dels cabdells de microtúbuls circumdants en resposta a l'afluència de calci. Liu et al. S'ha demostrat que la glucosa media l'afluència de calci a través del canal TRPC6 plaquetari [6]. La nostra hipòtesi és que la glucosa indueix la relaxació dels cabdells de microtúbuls, cosa que provoca un augment del MPV i la sensibilització i/o activació plaquetària. Tanmateix, a jutjar pels nostres resultats, això només és una part de la història. A les nostres proves, cap concentració per sota de D25W va resultar en un augment del MPV. Atès que no hem provat l'exposició a concentracions de glucosa entre el 12,5% i el 25%, els nostres resultats de la fase 1 suggereixen que hi pot haver un llindar en aquest rang de concentracions de glucosa que condueixi a un augment del MPV. Proves addicionals en les etapes 3 i 4 van mostrar que el 20-25% de glucosa sembla ser el llindar per a això, però encara no està clar per què.
També vam observar una disminució d'aproximadament el 9% del volum màxim de cèl·lules mare després de la centrifugació. No està clar si aquesta disminució del volum màxim de cèl·lules mare es deu a plaquetes més grans i denses atrapades a la capa d'eritròcits de la centrífuga. Aquesta observació pot ser important per als clínics, ja que pot implicar que les plaquetes de PRP són un subconjunt més petit i menys dens de les plaquetes de sang blanca.
En un estudi previ, vam demostrar que la preparació de PRP mitjançant mètodes manuals és econòmica [8]. Si la glucosa sensibilitza les plaquetes del teixit o el PRP, fent-los més susceptibles a l'activació, o si el PRP es produeix amb propietats de lisat parcial, això pot millorar la regeneració i reduir la necessitat de teràpia. Per tant, la combinació de PRP i glucosa altament concentrada pot ser més rendible que el PRP o la glucosa sols.
El nostre estudi té diverses deficiències. En primer lloc, utilitzem PRP obtingut a partir de diversos mètodes diferents. Això pot conduir a resultats contradictoris. En segon lloc, no vam poder realitzar una anàlisi bioquímica de cap de les nostres mostres per determinar amb més precisió si s'havia produït l'activació plaquetària. Ens agradaria mesurar la P-selectina, el factor plaquetari 4, els agregats plaquetaris monocítics o altres marcadors d'activació plaquetària per entendre millor el grau o la presència de desgranulació dels grànuls alfa, però això està fora de l'abast d'aquest estudi. En tercer lloc, no vam poder confirmar mitjançant microscòpia electrònica o altres mètodes que l'augment del MPV en plaquetes exposades a la glucosa fos degut a l'efecte sobre els cabdells dels microtúbuls.
Les mescles de WB o PRP amb un 25% de glucosa van augmentar el MPV, cosa que indica l'inici de l'activació plaquetària, tot i que aquest estudi no va demostrar la progressió de l'agregació o la desgranulació. La barreja de glucosa hipertònica va provocar la pèrdua de plaquetes, possiblement representant un efecte lític. L'activació parcial o la lisi de les plaquetes pot causar la regeneració tissular després de la injecció de plaquetes. No està clar quines conseqüències clíniques poden comportar aquests canvis. Estudis posteriors han demostrat mesures més precises de l'activació o la lisi i han avaluat els diferents efectes clínics de les mescles de glucosa hipertònica amb WB o PRP.
La teràpia proliferativa amb glucosa és una teràpia regenerativa senzilla i econòmica que s'està expandint ràpidament i que dóna suport a la recerca clínica. Aquest estudi suggereix un mecanisme fisiològic que, si es confirma, podria ajudar-nos a comprendre part del mecanisme regeneratiu de la teràpia proliferativa.
Informàtica Biomèdica i de la Salut a la Facultat de Medicina de la Universitat de Missouri, Kansas City, Kansas City, EUA
Subjectes humans: Tots els participants en aquest estudi van donar o no el seu consentiment. La Societat Internacional de Medicina Cel·lular ha emès l'aprovació ICMS-2017-003. El següent protocol ha estat aprovat per al seu ús posterior pel Comitè de Revisió Institucional de la Societat Internacional de Medicina Cel·lular: Títol: Càlcul del rendiment de fàrmacs plasmàtics rics en plaquetes basat en el recompte de plaquetes CBC basal. Subjectes animals: Tots els autors van confirmar que no hi van participar animals ni teixits en aquest estudi. Conflictes d'interès: D'acord amb el Formulari de Divulgació Uniforme de l'ICMJE, tots els autors declaren el següent: Informació de pagament/servei: Tots els autors declaren que no van rebre suport financer de cap organització pel treball presentat. Relacions financeres: Tots els autors declaren que actualment ni en els darrers tres anys no tenen relacions financeres amb cap organització que pugui estar interessada en el treball presentat. Altres relacions: Tots els autors declaren que no hi ha altres relacions o activitats que puguin afectar el treball presentat.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al. (17 de maig de 2022) L'efecte de la glucosa sobre el recompte i el volum de plaquetes: implicacions per a la medicina regenerativa. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Copyright 2022 Harrison et al. Aquest és un article d'accés obert distribuït sota els termes de la llicència Creative Commons Attribution License CC-BY 4.0. Es permet l'ús, la distribució i la reproducció il·limitades en qualsevol mitjà, sempre que s'acrediti l'autor i la font originals.