„Nikdy nepochybujte o tom, že malá skupina přemýšlivých a oddaných občanů může změnit svět. Ve skutečnosti je to jediná skupina, která tam je.“
Posláním Cureus je změnit dlouhodobý model publikování lékařských prací, v němž může být zasílání výzkumných prací drahé, složité a časově náročné.
Plazma bohatá na krevní destičky/prp, regenerace tkání, aktivace krevních destiček, glukózoproliferativní terapie, krevní destičky, proliferativní terapie
Citujte tento článek jako: Harrison TE, Bowler J, Reeves K a kol. (17. května 2022) Vliv glukózy na počet a objem krevních destiček: důsledky pro regenerativní medicínu. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Plazma bohatá na krevní destičky (PRP) a hypertonické roztoky glukózy se běžně používají k injekčnímu podávání v regenerativní medicíně, někdy i společně. Vliv hypertonické glukózy na lýzu a aktivaci krevních destiček nebyl dosud popsán. Testovali jsme vliv zvýšených koncentrací glukózy na počet krevních destiček a erytrocytů, stejně jako na objem buněk v PRP a plné krvi (WB). U všech směsí glukózy smíchaných s PRP nebo plnou krví došlo k rychlému částečnému snížení počtu krevních destiček, což je v souladu s částečnou lýzou. Po první minutě zůstal počet krevních destiček stabilní, což naznačuje rychlou akomodaci zbytkových krevních destiček k extrémní (>2000 mOsm) hypertonicitě. Po první minutě zůstal počet krevních destiček stabilní, což naznačuje rychlou akomodaci zbytkových krevních destiček k extrémní (>2000 mOsm) hypertonicitě. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает называет аккомодацию остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Po první minutě zůstal počet krevních destiček stabilní, což naznačuje rychlou akomodaci zbytkových krevních destiček na extrémní (>2000 mOsm) hypertonicitu.第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态。2000 mOsm）高渗状态。 После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает называет адаптацию остаточных тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гипетросмолярному Po první minutě zůstal počet krevních destiček stabilní, což naznačuje rychlou adaptaci zbytkových krevních destiček na extrémní (>2000 mOsm) hyperosmolární stav.Koncentrace glukózy 25 % a vyšší vedly k významnému zvýšení průměrného objemu krevních destiček (MPV), což naznačuje rané stádium aktivace krevních destiček. Jsou zapotřebí další studie, které by zjistily, zda dochází k lýze nebo aktivaci krevních destiček a zda hypertonická injekce glukózy samotná nebo v kombinaci s PRP může poskytnout další klinický přínos.
V 50. letech 20. století americký chirurg George Hackett zjistil, že u mnoha pacientů může trvale zmírnit bolesti kloubů a zad injekcí proliferativního roztoku do šlach a vazů. Jeho experimenty na králících ukázaly, že léčba, kterou nazval proliferativní terapií, způsobila zvětšení a zesílení šlach. Histologické studie potvrdily, že během tohoto procesu se vytváří nový kolagen [1].
Během prvních několika desetiletí bylo vyzkoušeno mnoho různých distribučních řešení. V 90. letech 20. století většina lékařů považovala vysoké koncentrace glukózy za nejbezpečnější a nejúčinnější metodu. Mechanismus účinku však zůstává nejasný.
Ve 20. století bylo po Hackettově práci provedeno jen málo klinických studií. V roce 2000 se však zájem obnovil a bylo dokončeno několik úspěšných klinických studií proliferativní terapie pro léčbu bolesti dolní části zad [2], osteoartrózy kolene [3] a laterální epikondylitidy [4].
Regenerace tkání vyžaduje účast kmenových buněk. Vysoké koncentrace glukózy proto musí nějakým způsobem indukovat migraci, replikaci a diferenciaci kmenových buněk. Předpokládáme, že krevní destičky mohou působit jako poslové a že vysoké koncentrace glukózy mohou způsobit uvolňování cytokinů a růstových faktorů krevními destičkami, čímž podporují regenerační procesy, zejména migraci kmenových buněk do oblastí s vysokou koncentrací glukózy.
Aktivace krevních destiček vždy předchází zvýšení intracelulárního vápníku [5]. Liu a kol. v roce 2008 prokázali, že vysoké hladiny glukózy zvyšují aktivitu kanálů TRPC6 (transient receptor potential canonical type 6) v plazmatické membráně, což vede k přílivu vápenatých iontů do krevních destiček [6]. Jiná studie ukázala, že vystavení marginální zóny mikrotubulů vápenatým iontům způsobuje relaxaci, expanzi a deformaci marginální zóny, což následně způsobuje změnu tvaru z diskového na kulovitý, což má za následek střední objem krevních destiček (MPV) [7].
Naše hypotéza v této studii je, že vystavení krevních destiček vysokým koncentracím glukózy ovlivňuje marginální zónu mikrotubulů a intracelulární prostředí, což vede ke zvýšení MPV.
Všichni účastníci podepsali informovaný souhlas poté, co jim byly vysvětleny podrobnosti studie a před odběrem vzorků. V této studii byly použity pouze vzorky PRP s hematokritem vyšším než 2 %, aby mohly být pro srovnání zahrnuty počty erytrocytů a průměrný korpuskulární objem červených krvinek (MCV).
Studie byla provedena ve čtyřech fázích, první fází byla PRP a zbývajícími fázemi byla plná krev (tabulka 1). Jak bylo popsáno dříve [8], všechny relativní odstředivé síly (RCF, g-síla) byly vypočítány ze středu (Rmid, v cm) krevního sloupce v odstředivé stříkačce. Jako marker senzibilizace krevních destiček jsme zvolili MPV a jako indikátor potenciální lýzy krevních destiček počet krevních destiček, přičemž obojí lze snadno měřit na standardních hematologických analyzátorech.
V první fázi darovalo 47 dobrovolníků vzorky krve – jednu zkumavku s kyselinou ethylendiamintetraoctovou (EDTA) a jeden vzorek plné krve s PRP (antikoagulovaný citrátem sodným (NaCl, 3 %)) (tabulka 1). Kolébku ihned vložte do zkumavky. Kompletní krevní obraz (CBC) byl proveden u vzorků s EDTA ve třech opakováních a vzorky NaCl byly analyzovány ve třech opakováních pro analýzu CBC a poté byla PRP připravena různými metodami popsanými výše [8]. Všechny vzorky PRP byly připraveny centrifugací při 900–1000 g. Každý vzorek PRP byl smíchán na vortexovém mixéru po dobu 5–10 sekund a poté byl pět 0,5ml alikvotních podílů rozdělen do zkumavek.
Pro vyhodnocení vlivu expozice krevním destičkám na zvýšené koncentrace glukózy byla se vzorky krevních destiček smíchána stejná množství (0,5 ml) roztoku glukózy 0 %, 5 %, 12,5 %, 25 % a 50 % ve vodě za účelem získání koncentrací směsi glukózy 0 %, 2,5 %, 6,25 %, 12,5 % ​​a 25 % a zkumavky byly míchány na třepačce po dobu 15 minut. Hodnota TAC každé směsi byla po 15 minutách analyzována trojmo. Pro každou zkumavku byl zprůměrován počet krevních destiček (PLT), počet erytrocytů, MCV a MPV a pro všechny vzorky PRP byl vypočítán průměrný počet krevních destiček, počet erytrocytů, MCV a MPV.
Po dokončení první fáze sběru dat jsme zaznamenali významný nárůst objemu krevních destiček v PRP destičkách po přidání D50W. Krevní destičky PRP nemusí nutně reprezentovat všechny krevní destičky v krvi a PRP médium se liší od média WB. Proto jsme se rozhodli provést druhou fázi studie účinku přidání D50W do plné krve.
Pro druhé kolo jsme na základě výsledků z první série, jak je popsáno v části Analýza, zvolili velikost vzorku 30. V této sérii darovalo 20 dobrovolníků vzorky krve (tabulka 1). Plná krev (1,8 ml) byla odebrána do 3ml stříkačky a antikoagulována 0,2 ml 40% NaCl. Stříkačka s plnou krví byla pět sekund mísena vortexovým mixérem a kompletní krevní obraz (CBC) byl analyzován třikrát. Po analýze byla antikoagulovaná krev přidána ke 2 ml 50% glukózy v 5ml stříkačce (konečná koncentrace glukózy byla přibližně 25 % (D25)) a umístěna na 30 minut do třepačky. Po 30 minutách byly D25/CBC ve stříkačkách WB analyzovány třikrát. Byl zprůměrován počet krevních destiček, počet erytrocytů, MCV a MPV na stříkačku a pro každý vzorek před a po přidání glukózy byly vypočteny průměrné hodnoty PLT, počtu erytrocytů, MCV a MPV.
Protože krevní destičky v plné krvi jsou během proliferativní glukózové terapie v důsledku minimálně invazivní injekce běžně vystaveny hypertonické glukóze a není běžné kombinovat PRP s hypertonickou glukózou těsně před injekcí, rozhodli jsme se v kapitole 1, kroku tři a čtyři, studovat hypertonickou glukózu v kombinaci s WB. V každé fázi 20 dobrovolníků darovalo 7–8 ml ACD-A (kyselina obsahující citrát trisodný (22,0 g/l), kyselinu citronovou (8,0 g/l) a glukózu (24,5 g/l), roztok citrátu dextrózy) pro krevní antikoagulancia (tabulka 1). Pro stanovení prahového procenta spojeného se zvýšením MPV byly použity pouze směsi glukózy s obsahem vyšším než 12,5 %. Ve třetí fázi se do zkumavky umístí 1 ml krve. Poté se krev míchala na vortexovém mixéru po dobu 10 sekund přidáním 1 ml 30% glukózy, 40% glukózy nebo 50% glukózy do zkumavky, aby se dosáhlo konečné koncentrace glukózy 15 %, 20 % a 25 %. Vzorky krve s obsahem glukózy byly analyzovány na kompletní krevní obraz ihned po smíchání a opakovány každé dvě minuty po dobu 30 minut.
Během počátečního míchání přidání hypertonické glukózy a WB nebo PRP v poměru 1:1 vystaví krevní destičky koncentracím nad 25 % po dobu několika sekund. Ve čtvrtém kroku, abychom vyhodnotili účinek hypertonické glukózy s minimálními počátečními vrcholovými koncentracemi a otestovali horní hranici účinku glukózy, přidali jsme do D25W nebo D50W pouze malé množství krve. Do zkumavky jsme umístili 1 ml D25W nebo D50W a za současného míchání vzorku na vortexu po dobu 10 sekund jsme přidali 0,2 ml WB. V těchto případech byla krev vystavena glukóze v koncentraci přibližně o 20 % vyšší, než je konečná koncentrace, a ne o 50 % vyšší, než je konečná koncentrace jako ve fázi 3, což vedlo ke konečným koncentracím glukózy 20,8 % a 41,6 %. Smíšené vzorky byly analyzovány ve stejném časovém intervalu jako v kroku 3.
V prvním kroku každé série ředění glukózy bylo odebráno 30 vzorků, protože se jednalo o vhodnou velikost vzorku pro pilotní studii [9]. Na konci každé fáze (včetně první fáze) vyhodnoťte adekvátnost velikosti vzorku pomocí vzorce použitého k určení velikosti vzorku potřebné k odhadu průměru spojité výstupní proměnné v jedné populaci. Vzorec n = Z2 x SD2 /E2. V této rovnici je Z Z-skóre, SD je směrodatná odchylka a E je požadovaná chyba [10]. Naše alfa je 0,05, což odpovídá hodnotě Z 1,96, a očekáváme chybu 5 (v procentech). Proto řešíme pro n = (1,962 x SD2)/52. Výsledky ukázaly, že velikost vzorku potřebná pro každou fázi byla menší než skutečný počet shromážděných vzorků.
Během období 1, 3 a 4 s použitím více než jedné koncentrace glukózy byl vliv různých koncentrací glukózy analyzován porovnáním frakční změny mezi časem 0 a každým následujícím časem (fáze 1 v 15 minutách, období 3 v 15 minutách a čtyřikrát v 15 sekundách, poté každé dvě minuty.) Rychlosti změn pro každé časové období byly porovnány pomocí Mann-Whitneyho U-testu, protože data neodpovídala normálnímu rozdělení stanovenému Shapiro-Wilkovým testem normality. Vzhledem k tomu, že v prvním, třetím a čtvrtém kroku (celkem pět) byla provedena analýza 1:1 několika skupin (pěti), byla provedena Bonferroniho korekce pro úpravu požadované hodnoty alfa na ≤0,01, ale ne ≤0,05.
Snížení počtu krevních destiček u všech koncentrací hypertonické dextrózy a zvýšení MPV v krevních destičkách PRP při koncentraci dextrózy >12,5 %: Počet krevních destiček PRP se zvýšil z jednonásobku na pětinásobek koncentrace ve srovnání s výchozí plnou krví, v závislosti na metodě (není znázorněno). Snížení počtu krevních destiček u všech koncentrací hypertonické dextrózy a zvýšení MPV v krevních destičkách PRP při koncentraci dextrózy >12,5 %: Počet krevních destiček PRP se zvýšil z jednonásobku na pětinásobek koncentrace ve srovnání s výchozí plnou krví, v závislosti na metodě (není znázorněno). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической зекинской декиях MPV v тромбоцитах PRP при концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP-5увелитов PRP-5увелит сравнению с исходной цельной кровью, v зависимости от метода (не показано). Snížený počet krevních destiček při všech hypertonických koncentracích dextrózy a zvýšený MPV v krevních destičkách PRP při koncentraci dextrózy >12,5 %: Počet krevních destiček PRP se zvýšil 1–5krát ve srovnání s výchozí hodnotou plné krve, v závislosti na metodě (není ukázáno). ).在> 12,5 % 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数MP／PRP 迸增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5倍，因方法而异＂(未描述）。 Při koncentraci glukózy >12,5 % snižuje vysoká koncentrace glukózy krevní obraz, zvyšuje se MPV krve po PRP: ve srovnání s 与基线全血 se krevní obraz po PRP zvyšuje 1 až 5krát oproti koncentraci (není popsáno). При концентрациях глюкозы >12,5 % za концентрации гипертонической глюкозты снижал тромбоцитов, а MPV повышали в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивокто1с5 концентраций по сравнению с исходными концентрациями цельной крови, в зависиотомостиди описано). Při koncentracích glukózy >12,5 % všechny hypertenzní koncentrace glukózy snížily počet krevních destiček a zvýšily MPV u krevních destiček s PRP: počet krevních destiček s PRP se zvýšil 1 až 5krát ve srovnání s výchozími koncentracemi v plné krvi, v závislosti na metodě (jak je popsáno).Obrázek 1 ukazuje, že počet krevních destiček se po zředění ve vodě snížil o téměř 75 % a po 15 minutách ředění s různými koncentracemi glukózy o 20–30 % ve srovnání s výchozí PRP a ředěním 1:1 upraveným podle objemu (1–k1 s korekcí objemu). k –1 ředění).1 ředění).
Počet buněk v každém ředění je vyjádřen jako zlomek původního počtu před ředěním.
MPV se během produkce PRP minimálně snížil, bez další změny koncentrací ředění na 12,5 % ve vodě nebo glukóze (včetně 25% směsí PRP s glukózou) a po ředění v 50% roztoku glukózy se zvýšil o více než 20 % (obr. 2). Naproti tomu erytrocyty nevykazovaly žádnou významnou změnu objemu při žádném jiném ředění než H2O.
Průměrný objem buněk v každém ředění je vyjádřen jako procento původního objemu před ředěním.
Podobné, ale méně výrazné snížení počtu krevních destiček a zvýšení CVR byly pozorovány u krve prsu vystavené 50% glukóze (pro formulaci s 25% glukózou). Tabulka 2 porovnává počty buněk a objemy buněk v plné krvi zředěné v 50% dextróze s daty fáze 1 PRP zředěnými v 50% dextróze. Změny v počtu červených krvinek a středním objemu červených krvinek (MCV) nebyly zřejmé a nebyly předmětem naší pozornosti.
SD = směrodatná odchylka, MD = průměrný rozdíl mezi skupinami, SE = směrodatná odchylka průměrného rozdílu, RBC = erytrocyty, PLT = krevní destičky, PRP = plazma bohatá na krevní destičky, WB = plná krev
Po přidání D50W k WB byla procentuální ztráta krevních destiček upravená o ředění 7,7 % (310 ± 73 vs. 286 ± 96) ve srovnání se 17,8 % u ředění PRP v D50W (664 ± 348 vs. 544 ± 277). MPV WB se zvýšil o 16,8 % (z 10,1 ± 0,5 na 11,8 ± 0,6), zatímco MPV PRP se zvýšil o 26 % (9,2 ± 0,8 vs. 11,6 ± 0,7). Ačkoli průměrné rozdíly ve snížení počtu krevních destiček i zvýšení MPV byly u PRP významně větší, změny ve snížení počtu krevních destiček v rámci WB byly téměř statisticky významné (310 ± 73 až 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06) a zvýšení MPV bylo statisticky významné (10,1 ± 0,5 až 11,8 ± 0,6 (+16,8), p < 0,001). Ačkoli průměrné rozdíly ve snížení počtu krevních destiček i zvýšení MPV byly u PRP významně větší, změny ve snížení počtu krevních destiček v rámci WB byly téměř statisticky významné (310 ± 73 až 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06) a zvýšení MPV bylo statisticky významné (10,1 ± 0,5 až 11,8 ± 0,6 (+16,8), p < 0,001).Přestože průměrné rozdíly ve snížení počtu krevních destiček i zvýšení CVR byly u PRP významně větší, změny v poklesu počtu krevních destiček v rámci WB byly téměř statisticky významné (310 ± 73 až 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Zvýšení MPV bylo statisticky významné (z 10,1 ± 0,5 na 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7 %)；p = 0,06）和MP的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 衡氰 忽衡氰 冿轆 佀 冿 衡 氆 冿减少 的 几乎 是 显着 的 （（（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7 %) ； p = 0,06）和MPV 的增劍 10 杯± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Změna v poklesu počtu krevních destiček v rámci WB byla téměř statisticky významná (z 310 ± 73 na 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06), ačkoli PRP měla významně větší průměrné rozdíly v poklesu počtu krevních destiček a zvýšení MPV a zvýšení MPV bylo statisticky významné.(от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (z 10,1 ± 0,5 na 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Pro dosažení významné změny MPV byla nutná konečná koncentrace glukózy 20 %, ale změna MPV byla výraznější při konečné koncentraci 25 %. Úbytek krevních destiček se po počátečním poklesu stabilizoval. Zaznamenali jsme počáteční prudký pokles CVR, nicméně CVR se rychle obnovila při konečné koncentraci glukózy 25 %, což bylo významně vyšší než hladiny CVR pozorované při konečných koncentracích glukózy 20 % a 15 % (obr. 3 a vlevo od tabulky 3; stínované rámečky). Označují p-hodnoty ≤ alfa s Bonferroniho korekcí 0,01). Došlo také k počátečnímu prudkému poklesu počtu PLT, pozorovanému v počáteční fázi 0–15 s, který poté zůstal stabilní (od 15 s do 30 min; vlevo od tabulky 4).
Přidání různých koncentrací glukózy do plné krve vedlo k počátečnímu rychlému poklesu MPV, po kterém následovalo koncentračně závislé zotavení o více než 20 %. Legenda ukazuje koncentraci glukózy po ředění. D15, D20 a D25 byly provedeny v ředění 1:1. D21 a D41 byly provedeny v ředění 1:5.
Tabulka 4 ukazuje změnu počtu krevních destiček po ředění hypertonickou glukózou. Pozorovali jsme na dávce závislý vztah mezi okamžitým poklesem počtu PLT při ředění 1:1 a při ředění 1:5. Při porovnání ředění 1:1 jako jedné skupiny s ředěním 1:5 došlo ve skupině 1:1 k okamžitému poklesu počtu krevních destiček menšímu než ve skupině 1:5, a to 66 ± 48 000 (23 %) oproti 99 ± 69 000 (37 %), p = 0,014) ve skupině 1:5. Po počátečním poklesu v prvním bodě měření se počet krevních destiček jako procento glukózy stabilizoval (obr. 4).
Pokud se plná krev přidá ke glukóze v poměru 1:1, počet krevních destiček se sníží přibližně o 25 %. Pokud však byla plná krev přidána v poměru 1:5, bylo snížení mnohem větší – přibližně o 50 %.
Výsledky pro 41% glukózu zvýšily MPV rychleji a dramatičtěji než pro 25% nebo 21% MPV jsou znázorněny na obrázku 3. U všech ostatních ředění nebyl po přidání 50% glukózy pozorován okamžitý počáteční pokles MPV. Při použití 25% glukózy (koncentrace glukózy 20,8 % při konečném ředění) byla změna MPV srovnatelná se změnou 20% glukózy při ředění 1:1 (obr. 3). Ačkoli byly změny MPV zpočátku větší při 41% směsné koncentraci než při 25%, rozdíl v MPV mezi 41 % a 25 % po 16 minutách již nebyl významný (tabulka 3, vpravo). Je také zajímavé, že 25% glukóza zvýšila MPV účinněji než 20,8 %.
Tato studie in vitro částečně potvrdila naši hypotézu. Ukázala se potenciální parciální lýza krevních destiček příměsí dextrózy, rychlá akomodace krevních destiček do extrémní hypertonicity a významný vzestup MPV v reakci na > 25% koncentrace hypertonické dextrózy. Ukázala se potenciální parciální lýza krevních destiček příměsí dextrózy, rychlá akomodace krevních destiček do extrémní hypertonicity a významný vzestup MPV v reakci na > 25% koncentrace hypertonické dextrózy. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозты, быстру аккомодацию тромбоцитов до экстремального гипертонуса и значительное повышное повышеное гипертоническую концентрацию декстрозы > 25 %. Ukázala se potenciální parciální lýza krevních destiček dextrózou, rychlá akomodace krevních destiček do extrémní hypertonicity a významný nárůst MPV v reakci na hypertonické hladiny dextrózy >25 %.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25 % 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适庌 枥板 快速 适庌 枥极 的 枥板响应> 25 % 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。。 Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой,стюкозой адаптацию тромбоцитов к экстремальному гипертонусу a значительное увеличениетвание MPV концентрацию гипертонической глюкозы > 25 %. Ukazuje potenciální částečnou lýzu krevních destiček glukózovými směsmi, rychlou adaptaci krevních destiček na extrémní hypertonicitu a významné zvýšení MPV v reakci na hypertonickou glukózu >25 %.Počáteční zvýšení bylo maximální při expozici glukóze 41,6 %, ale zvýšení MPV se přiblížilo 25 % expozice glukóze přibližně 20 minut po expozici.
Koncentrace krevních destiček je ovlivněna glukózou. Všimli jsme si, že množství PLT se snížilo při všech ředěních glukózy. Prudký pokles počtu krevních destiček v ředěních H2O (0%) v sérii PRP může být spojen s osmotickou lýzou. Alternativně by se mohlo jednat o artefakt způsobený shlukováním krevních destiček, ale to je v kontrastu s absencí změny MPV při tomto ředění. Toto zjištění znamená, že některé krevní destičky jsou velmi citlivé na hypoosmolaritu.
Ve všech ředěních glukózy 1:1 se množství PLT snížilo o 20–30 %, a to i do D5W (hypotonický tlak při 252 mOsm), což může naznačovat specifický neosmotický účinek glukózy, jelikož jak PLT, tak MPV zůstaly při trojnásobném zvýšení koncentrace glukózy z D5W na D25W nezměněny. Koncentrace PLT měly ve skutečnosti tendenci se s rostoucí osmolaritou mírně zvyšovat.
Pokles PLT mezi ředěními 1:1 a 1:5 znamená, že rozpouštěcí účinek závisí na počáteční a konečné koncentraci glukózy. Pokud by závisel pouze na počáteční koncentraci, pak by se očekával rozdíl ve snížení PLT mezi koncentracemi 1:1. Ale neočekáváme to. Pokud lyzační účinek závisí pouze na konečné koncentraci glukózy, pak neočekáváme velký rozdíl mezi 20% ředěním 1:1 a 20,8% ředěním 1:5. A přesto se nám to podařilo.
Pokud dojde ke ztrátě krevních destiček v důsledku lýzy krevních destiček, vytvoří se částečný lyzát, po kterém se do extracelulárního prostředí uvolní cytokiny a růstové faktory. Několik studií ukázalo, že lyzát krevních destiček je téměř stejně účinný jako PRP jako proliferační roztok [11]. Samotná PRP se ukázala jako účinný roztok pro léčbu proliferace [12-14].
Neaktivní krevní destičky cirkulují ve formě disku vyztuženého několika vnitřními strukturami. Během aktivace nabývají kulovitějšího nebo amébovějšího tvaru, což vede ke zvětšení objemu. Zvětšení objemu vyžaduje zvětšení povrchu, což je výsledkem extruze systému otevřených tubulů (OCS) a přidání exocytárních granulí k membráně. Zbývá zjistit, zda zvýšení MPV indukované hypertonickou glukózou zahrnuje jeden nebo oba tyto mechanismy, ale pokud se jedná o druhý mechanismus, pak by zvýšení MPV naznačovalo degranulaci.
Tato studie ukázala, že vystavení vysokým koncentracím glukózy na PRP nebo krevních destičkách vedlo ke zvýšení MPV během 15 minut s koncentrací glukózy o 25 %, respektive 41,6 %.
Zvýšení MPV krevních destiček může být způsobeno dilatací okolních spletí mikrotubulů v reakci na přítok vápníku. Liu a kol. Bylo prokázáno, že glukóza zprostředkovává přítok vápníku přes kanál TRPC6 krevních destiček [6]. Naše hypotéza je, že glukóza indukuje relaxaci spletí mikrotubulů, což vede ke zvýšení MPV a senzibilizaci a/nebo aktivaci krevních destiček. Soudě dle našich výsledků je to však jen část příběhu. V našich testech žádná koncentrace pod D25W nevedla ke zvýšení MPV. Vzhledem k tomu, že jsme netestovali expozici koncentracím glukózy mezi 12,5 % a 25 %, naše výsledky fáze 1 naznačují, že v tomto rozmezí koncentrací glukózy může existovat prahová hodnota, která vede ke zvýšení MPV. Další testování ve fázích 3 a 4 ukázalo, že prahovou hodnotou pro to se zdá být 20–25 % glukózy, ale zůstává nejasné proč.
Také jsme po centrifugaci pozorovali ~9% pokles MPV. Není jasné, zda je tento pokles MPV způsoben většími a hustšími krevními destičkami zachycenými ve vrstvě červených krvinek centrifugy. Toto pozorování může být pro klinické lékaře důležité, protože může naznačovat, že PRP krevní destičky jsou menší a méně hustou podskupinou WB krevních destiček.
V předchozí studii jsme ukázali, že manuální příprava PRP je levná [8]. Pokud glukóza senzibilizuje tkáňové krevní destičky nebo PRP, čímž je činí náchylnějšími k aktivaci, nebo pokud je PRP produkován s částečnými vlastnostmi lyzátu, může to zlepšit regeneraci a snížit potřebu terapie. Kombinace PRP a vysoce koncentrované glukózy proto může být nákladově efektivnější než samotná PRP nebo glukóza.
Naše studie má několik nedostatků. Zaprvé, používáme PRP získaný několika různými metodami. To může vést ke protichůdným výsledkům. Zadruhé, nebyli jsme schopni provést biochemickou analýzu žádného z našich vzorků, abychom přesněji určili, zda došlo k aktivaci krevních destiček. Rádi bychom změřili P-selektin, krevní faktor 4, agregáty monocytárních krevních destiček nebo jiné markery aktivace krevních destiček, abychom lépe porozuměli stupni nebo přítomnosti degranulace alfa granulí, ale to přesahuje rámec této studie. Zatřetí, nebyli jsme schopni elektronovou mikroskopií ani jinými metodami potvrdit, že zvýšení MPV v krevních destičkách vystavených glukóze bylo způsobeno účinkem na spleti mikrotubulů.
Směsi WB nebo PRP s 25% glukózou zvýšily MPV, což signalizovalo nástup aktivace krevních destiček, ačkoli tato studie neprokázala progresi agregace nebo degranulace. Hypertonická směs glukózy vedla ke ztrátě krevních destiček, což pravděpodobně představuje lytický účinek. Částečná aktivace nebo lýza krevních destiček může po injekci krevních destiček způsobit regeneraci tkáně. Není jasné, k jakým klinickým důsledkům mohou tyto změny vést. Další studie prokázaly přesnější měření aktivace nebo lýzy a vyhodnotily různé klinické účinky hypertonických směsí glukózy s WB nebo PRP.
Glukózoproliferativní terapie je jednoduchá a levná regenerační terapie, která se rychle rozvíjí a podporuje klinický výzkum. Tato studie naznačuje fyziologický mechanismus, který by nám, pokud bude potvrzen, mohl pomoci pochopit část regeneračního mechanismu proliferativní terapie.
Biomedicínská a zdravotnická informatika na University of Missouri, Kansas City School of Medicine, Kansas City, USA
Lidské subjekty: Všichni účastníci této studie udělili nebo neudělili souhlas. Mezinárodní společnost pro buněčnou medicínu vydala schválení ICMS-2017-003. Následující protokol byl schválen pro další použití Institucionální etické komisí Mezinárodní společnosti pro buněčnou medicínu: Název: Výpočet výtěžku léčiva z plazmy bohaté na krevní destičky na základě výchozího počtu krevních destiček v celkové krvi. Zvířecí subjekty: Všichni autoři potvrdili, že do této studie nebyla zapojena žádná zvířata ani tkáně. Střet zájmů: V souladu s jednotným formulářem pro zveřejňování informací ICMJE všichni autoři prohlašují následující: Informace o platbách/službách: Všichni autoři prohlašují, že za předloženou práci neobdrželi finanční podporu od žádné organizace. Finanční vztahy: Všichni autoři prohlašují, že v současné době ani v posledních třech letech nemají finanční vztahy s žádnou organizací, která by mohla mít zájem o předloženou práci. Jiné vztahy: Všichni autoři prohlašují, že neexistují žádné jiné vztahy ani aktivity, které by mohly ovlivnit předloženou práci.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K a kol. (17. května 2022) Vliv glukózy na počet a objem krevních destiček: důsledky pro regenerativní medicínu. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Copyright 2022 Harrison a kol. Toto je článek s otevřeným přístupem distribuovaný za podmínek licence Creative Commons Attribution CC-BY 4.0. Neomezené použití, distribuce a reprodukce v jakémkoli médiu je povolena za předpokladu uvedení původního autora a zdroje.