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Plättchenreiches Plasma/PRP, Geweberegeneration, Thrombozytenaktivierung, Glukose-Proliferationstherapie, Thrombozyten, Proliferationstherapie
Zitieren Sie diesen Artikel als: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17. Mai 2022) Der Einfluss von Glukose auf Thrombozytenzahl und -volumen: Auswirkungen auf die regenerative Medizin. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Plättchenreiches Plasma (PRP) und hypertone Glukoselösungen werden in der regenerativen Medizin häufig zur Injektion verwendet, manchmal auch zusammen. Der Einfluss hypertoner Glukose auf die Thrombozytenlyse und -aktivierung wurde bisher nicht beschrieben. Wir untersuchten den Einfluss erhöhter Glukosekonzentrationen auf die Thrombozyten- und Erythrozytenzahl sowie das Zellvolumen in PRP und Vollblut. Bei allen mit PRP oder Vollblut gemischten Glukosemischungen trat eine schnelle partielle Reduktion der Thrombozytenzahl auf, was mit einer partiellen Lyse vereinbar ist. Nach der ersten Minute blieb die Thrombozytenzahl stabil, was auf eine schnelle Anpassung der verbleibenden Thrombozyten an eine extreme (> 2000 mOsm) Hypertonie hindeutet. Nach der ersten Minute blieb die Thrombozytenzahl stabil, was auf eine schnelle Anpassung der verbleibenden Thrombozyten an eine extreme (> 2000 mOsm) Hypertonie hindeutet. Nach ein paar Minuten kam es zu stabilen Thrombozyten, die aufgrund der extremen Thrombozytose verursacht wurden (>2000 мОсм) гипертонуса. Nach der ersten Minute blieb die Thrombozytenzahl stabil, was auf eine schnelle Anpassung der verbleibenden Thrombozyten an eine extreme (> 2000 mOsm) Hypertonie hindeutet.第一分钟后,血小板计数保持稳定,表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态.2000 mOsm）高渗状态。 Nach ein paar Minuten waren die Thrombozyten stabil, was zu einer Anpassung der Thrombozyte seit dem letzten Jahr (>2000) führte мОсм) гиперосмолярному состоянию. Nach der ersten Minute blieb die Thrombozytenzahl stabil, was auf eine schnelle Anpassung der verbleibenden Thrombozyten an den extremen (> 2000 mOsm) hyperosmolaren Zustand hindeutet.Glukosekonzentrationen von 25 % und mehr führten zu einem signifikanten Anstieg des mittleren Thrombozytenvolumens (MPV), was auf ein frühes Stadium der Thrombozytenaktivierung hindeutet. Weitere Studien sind erforderlich, um festzustellen, ob eine Thrombozytenlyse oder -aktivierung stattfindet und ob die Injektion hypertoner Glukose allein oder in Kombination mit PRP einen zusätzlichen klinischen Nutzen bieten kann.
In den 1950er Jahren entdeckte der amerikanische Chirurg George Hackett, dass er Gelenk- und Rückenschmerzen bei vielen Patienten dauerhaft lindern konnte, indem er eine proliferative Lösung in Sehnen und Bänder injizierte. Seine Experimente an Kaninchen zeigten, dass die Behandlung, die er proliferative Therapie nannte, die Sehnen vergrößerte und stärkte. Histologische Untersuchungen bestätigten, dass dabei neues Kollagen produziert wird [1].
In den ersten Jahrzehnten wurden viele verschiedene Verteilungslösungen ausprobiert. In den 1990er Jahren betrachteten die meisten Ärzte hohe Glukosekonzentrationen als die sicherste und wirksamste Methode. Der Wirkmechanismus ist jedoch noch immer unklar.
Im 20. Jahrhundert wurden nach Hacketts Arbeit nur wenige klinische Studien durchgeführt. In den 2000er Jahren erwachte jedoch das Interesse an der proliferativen Therapie erneut, und es wurden mehrere erfolgreiche klinische Studien zur Behandlung von Rückenschmerzen [2], Kniearthrose [3] und lateraler Epicondylitis [4] durchgeführt.
Die Geweberegeneration erfordert die Beteiligung von Stammzellen. Hohe Glukosekonzentrationen müssen daher die Migration, Replikation und Differenzierung von Stammzellen induzieren. Wir gehen davon aus, dass Thrombozyten als Botenstoffe fungieren und hohe Glukosekonzentrationen die Freisetzung von Zytokinen und Wachstumsfaktoren durch Thrombozyten bewirken und so regenerative Prozesse, insbesondere die Migration von Stammzellen in Bereiche mit hohen Glukosekonzentrationen, fördern.
Die Aktivierung von Thrombozyten geht stets einem Anstieg des intrazellulären Kalziumspiegels voraus [5]. Liu et al. zeigten 2008, dass hohe Glukosespiegel die Aktivität von transienten Rezeptorpotential-Kanälen Typ 6 (TRPC6) in der Plasmamembran erhöhen, was zu einem Einstrom von Kalziumionen in die Thrombozyten führt [6]. Eine weitere Studie zeigte, dass die Exposition der Mikrotubuli-Marginalzone gegenüber Kalziumionen zu deren Entspannung, Ausdehnung und Deformation führt, was wiederum eine Formänderung von scheibenförmig zu kugelförmig bewirkt, was zu einem mittleren Thrombozytenvolumen (MPV) führt [7].
Unsere Hypothese in dieser Studie ist, dass die Exposition von Blutplättchen gegenüber hohen Glukosekonzentrationen die Randzone der Mikrotubuli und die intrazelluläre Umgebung beeinflusst, was zu einer Erhöhung des MPV führt.
Alle Teilnehmer unterzeichneten nach der Erläuterung der Studiendetails und vor Erhalt der Proben eine Einverständniserklärung. In dieser Studie wurden ausschließlich PRP-Proben mit einem Hämatokritwert über 2 % verwendet, um die Erythrozytenzahl und das mittlere korpuskuläre Volumen der roten Blutkörperchen (MCV) zum Vergleich heranziehen zu können.
Die Studie wurde in vier Phasen durchgeführt. Die erste Phase umfasste PRP, die weiteren Phasen Vollblut (Tabelle 1). Wie bereits beschrieben [8], wurden alle relativen Zentrifugalkräfte (RCF, g-Kraft) ausgehend vom Mittelpunkt (Rmid, in cm) der Blutsäule in der Zentrifugalspritze berechnet. Wir wählten MPV als Marker für die Thrombozytensensibilisierung und die Thrombozytenzahl als Indikator für eine mögliche Thrombozytenlyse. Beide Werte lassen sich mit Standard-Hämatologie-Analysegeräten problemlos messen.
In der ersten Phase spendeten 47 Freiwillige Blutproben – ein Röhrchen Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) und eine PRP-Vollblutprobe (antikoaguliert mit Natriumcitrat (NaCl, 3 %)) (Tabelle 1). Setzen Sie den Schüttler sofort in das Röhrchen. Ein komplettes Blutbild (CBC) wurde an den EDTA-Proben in dreifacher Ausführung durchgeführt, die NaCl-Proben wurden ebenfalls in dreifacher Ausführung für die CBC-Analyse analysiert. Anschließend wurde PRP mit verschiedenen oben beschriebenen Methoden hergestellt [8]. Alle PRP-Proben wurden durch Zentrifugation bei 900–1000 g hergestellt. Mischen Sie jede PRP-Probe 5–10 Sekunden lang auf einem Vortex-Mischer und teilen Sie sie anschließend in fünf 0,5-ml-Aliquots in Röhrchen auf.
Um den Einfluss der Thrombozytenexposition auf erhöhte Glukosekonzentrationen zu bewerten, wurden gleiche Mengen (0,5 ml) von 0 %, 5 %, 12,5 %, 25 % und 50 % Glukose in Wasser mit Thrombozytenproben gemischt, um Konzentrationen von 0 %, 2,5 %, 6,25 %, 12,5 % und 25 % der Glukosemischung zu erhalten. Die Röhrchen wurden 15 Minuten lang auf einem Reagenzglasschüttler geschüttelt. Der TAC jeder Mischung wurde nach 15 Minuten dreifach analysiert. Thrombozytenzahl (PLT), RBC-Zahl, MCV und MPV wurden für jedes Röhrchen gemittelt, und die mittleren Thrombozytenzahlen, RBC-Zahlen, MCV und MPV wurden für alle PRP-Proben berechnet.
Nach Abschluss der ersten Phase der Datenerhebung stellten wir nach Zugabe von D50W einen signifikanten Anstieg des Thrombozytenvolumens in PRP-Thrombozyten fest. PRP-Thrombozyten repräsentieren nicht zwangsläufig alle Thrombozyten im Blut, und das PRP-Medium unterscheidet sich vom Vollblutmedium. Daher beschlossen wir, die Wirkung der Zugabe von D50W zum Vollblut in einer zweiten Phase zu untersuchen.
Für die zweite Runde wählten wir basierend auf den Ergebnissen der ersten Serie eine Stichprobengröße von 30, wie im Abschnitt „Analyse“ beschrieben. In dieser Serie spendeten 20 Freiwillige Blutproben (Tabelle 1). Vollblut (1,8 ml) wurde in eine 3-ml-Spritze aufgezogen und mit 0,2 ml 40%iger NaCl antikoaguliert. Das Vollblut der Spritze wurde 5 Sekunden lang mit einem Vortex-Mixer gemischt und das CBC wurde dreifach analysiert. Nach der Analyse wurde das antikoagulierte Blut zu 2 ml 50%iger Glucose in einer 5-ml-Spritze hinzugefügt (die endgültige Glucosekonzentration betrug ungefähr 25 % (D25)) und 30 Minuten lang in ein Schüttelröhrchen gegeben. Nach 30 Minuten wurden D25/CBC in den WB-Spritzen dreifach analysiert. Thrombozytenzahl, RBC-Zahl, MCV und MPV pro Spritze wurden gemittelt und die mittleren PLT, RBC-Zahl, MCV und MPV wurden für jede Probe vor und nach der Glucosezugabe berechnet.
Da Blutplättchen im Vollblut während der proliferativen Glukosetherapie aufgrund minimalinvasiver Injektionen häufig hypertoner Glukose ausgesetzt sind und es nicht üblich ist, PRP direkt vor der Injektion mit hypertoner Glukose zu kombinieren, beschlossen wir, in Abschnitt 1, Schritt drei und vier, hypertonische Glukose in Kombination mit WB zu untersuchen. In jeder Phase spendeten 20 Freiwillige 7–8 ml ACD-A (Säure mit Trinatriumcitrat (22,0 g/l), Zitronensäure (8,0 g/l) und Glukose (24,5 g/l), Dextrosecitratlösung) als Blutgerinnungsmittel (Tabelle 1). Zur Bestimmung des Schwellenprozentsatzes, der mit einem Anstieg des MPV einhergeht, wurden nur Glukosemischungen mit einem Gehalt von über 12,5 % verwendet. Im dritten Schritt wird 1 ml Blut in ein Reagenzglas gegeben. Anschließend wird das Blut 10 Sekunden lang auf einem Vortex-Mischer gemischt, indem jeweils 1 ml 30%ige, 40%ige oder 50%ige Glukoselösung in das Röhrchen gegeben wird, um eine endgültige Glukosekonzentration von 15 %, 20 % bzw. 25 % zu erhalten. Die Blutzuckerproben wurden unmittelbar nach dem Mischen auf ihr großes Blutbild analysiert, und die Analyse wurde 30 Minuten lang alle zwei Minuten wiederholt.
Während des ersten Mischens werden die Blutplättchen durch die Zugabe von hypertoner Glukose und WB oder PRP im Verhältnis 1:1 mehrere Sekunden lang Konzentrationen von über 25 % ausgesetzt. Im vierten Schritt haben wir D25W oder D50W nur ​​eine kleine Menge Blut hinzugefügt, um die Wirkung hypertoner Glukose bei minimalen anfänglichen Spitzenkonzentrationen zu beurteilen und die Obergrenze der Glukosewirkung zu testen. 1 ml D25W oder D50W in ein Röhrchen geben und 0,2 ml WB hinzufügen, während die Probe 10 Sekunden lang gevortext wird. In diesen Fällen wurde das Blut einer Glukosekonzentration ausgesetzt, die etwa 20 % über der Endkonzentration lag, statt 50 % über der Endkonzentration wie in Phase 3, was zu endgültigen Glukosekonzentrationen von 20,8 % und 41,6 % führte. Gemischte Proben wurden im gleichen Zeitintervall wie in Schritt 3 analysiert.
Im ersten Schritt jeder Glukoseverdünnungsreihe wurden 30 Proben entnommen, da dies die angemessene Stichprobengröße für die Pilotstudie war [9]. Bewerten Sie am Ende jeder Phase (einschließlich der ersten Phase) die Angemessenheit der Stichprobengröße mithilfe der Formel zur Bestimmung der erforderlichen Stichprobengröße zur Schätzung des Mittelwerts der kontinuierlichen Ergebnisvariablen in einer Population. Formel n = Z2 x SD2 /E2. In dieser Gleichung ist Z der Z-Score, SD die Standardabweichung und E der gewünschte Fehler [10]. Unser Alpha beträgt 0,05, was einem Z-Wert von 1,96 entspricht, und wir erwarten einen Fehler von 5 (in Prozent). Daher lösen wir nach n = (1,962 x SD2)/52 auf. Die Ergebnisse zeigten, dass die für jede Stufe erforderliche Stichprobengröße kleiner war als die tatsächlich gesammelte Anzahl.
Während der Zeiträume 1, 3 und 4 mit mehr als einer Glukosekonzentration wurde die Wirkung der unterschiedlichen Glukosekonzentrationen analysiert, indem die anteilige Änderung zwischen Zeitpunkt 0 und jedem nachfolgenden Zeitpunkt verglichen wurde (Phase 1 bei 15 Minuten, Zeitraum 3 bei 15 Minuten und vier bei 15 Sekunden, dann alle zwei Minuten.) Die Änderungsraten für jeden Zeitraum wurden mithilfe des Mann-Whitney-U-Tests verglichen, da die Daten keiner Normalverteilung folgten, wie sie durch den Shapiro-Wilk-Normalverteilungstest bestimmt wurde. Da im ersten, dritten und vierten Schritt (insgesamt fünf) eine 1:1-Analyse mehrerer Gruppen (fünf) durchgeführt wurde, wurde eine Bonferroni-Korrektur durchgeführt, um den gewünschten Alpha-Wert auf ≤0,01, aber nicht auf ≤0,05 anzupassen.
Verringerung der Thrombozytenzahl bei allen Konzentrationen hypertoner Dextrose und Anstieg des MPV in PRP-Thrombozyten bei einer Dextrosekonzentration von >12,5 %: Die PRP-Thrombozytenzahl stieg im Vergleich zum Ausgangswert im Vollblut um das Ein- bis Fünffache der Konzentration, je nach Methode (nicht dargestellt). Reduktion der Thrombozytenzahl bei allen Konzentrationen hypertoner Dextrose und Anstieg des MPV in PRP-Thrombozyten bei >12,5 % Dextrosekonzentration: Die PRP-Thrombozytenzahl stieg bei ein- bis fünffacher Konzentration im Vergleich zum Ausgangswert im Vollblut, je nach Methode unterschiedlich (nicht dargestellt). Die Anzahl der Thrombozytenaggregate bei mehreren hypertonischen Konzentrationskonzentrationen und die Verbesserung von MPV in PRP-Konzentrationskonzentrationen > 12,5 %: Die Anzahl der PRP-Thrombozyte wurde im Laufe von 1 bis 5 Jahren nach dem Test mit der angegebenen Methode (nicht erforderlich) festgestellt. Verringerte Thrombozytenzahl bei allen hypertonen Dextrosekonzentrationen und erhöhter MPV in PRP-Thrombozyten bei >12,5 % Dextrosekonzentration: Die PRP-Thrombozytenzahl stieg im Vergleich zum Ausgangswert im Vollblut um das 1- bis 5-Fache, abhängig von der Methode (nicht gezeigt). ).Mehr als 12,5 %增加:与基线全血相比, PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍,因方法而异（未描述）. Bei einer Glukosekonzentration von >12,5 % verringert die hohe Glukosekonzentration das Blutbild, der PRP-Blut-MPV steigt: Im Vergleich zur 与基线全血 erhöht sich das PRP-Blutbild um das 1- bis 5-fache der Konzentration (nicht beschrieben). Bei Konzentrationen von Glukosen >12,5 % in Konzentrationen von hypertonischen Glukosen, die durch Thrombozytenaggregation verursacht wurden, wurde MPV in PRP-Thrombozyten eingesetzt: количество Die PRP-Thrombozyte wurden von 1 bis 5-stufiger Konzentrierung mit unterschiedlichen Konzentrationskonzentrationen auf der Grundlage einer bestimmten Methode (nicht getestet). Beschreibung). Bei Glukosekonzentrationen >12,5 % verringerten alle hypertensiven Glukosekonzentrationen die Thrombozytenzahl und erhöhten den MPV in PRP-Thrombozyten: Die PRP-Thrombozytenzahl stieg im Vergleich zu den Ausgangskonzentrationen im Vollblut je nach Methode um das 1- bis 5-Fache (wie beschrieben).Abbildung 1 zeigt, dass die Anzahl der Blutplättchen nach der Verdünnung in Wasser um fast 75 % und nach 15-minütiger Verdünnung mit unterschiedlichen Glukosekonzentrationen im Vergleich zum PRP-Basiswert und einer volumenkorrigierten 1:1-Verdünnung (1-k1 mit Volumenkorrektur, k-1-Verdünnung).1-Verdünnung) um 20–30 % abnahm.
Die Anzahl der Zellen in jeder Verdünnung wird als Bruchteil der ursprünglichen Anzahl vor der Verdünnung ausgedrückt.
Das MPV nahm während der PRP-Produktion ohne weitere Änderung der Verdünnungskonzentrationen auf 12,5 % in Wasser oder Glukose (einschließlich 25 % PRP-Glukosemischungen) minimal ab und stieg nach Verdünnung in 50 % Glukoselösung um mehr als 20 % an (Abb. 2). Im Gegensatz dazu zeigten Erythrozyten bei keiner anderen Verdünnung als H2O eine signifikante Volumenänderung.
Das durchschnittliche Zellvolumen in jeder Verdünnung wird als Prozentsatz des ursprünglichen Volumens vor der Verdünnung ausgedrückt.
Eine ähnliche, aber weniger ausgeprägte Reduktion der Thrombozytenzahl und ein Anstieg des CVR wurden bei BC beobachtet, die 50 % Glukose ausgesetzt waren (zur Formulierung mit 25 % Glukose). Tabelle 2 vergleicht Zellzahlen und Zellvolumina in Vollblut, verdünnt mit 50 % Dextrose, mit Phase-1-PRP-Daten, verdünnt mit 50 % Dextrose. Veränderungen der RBC-Zahl und des RBC-MCV waren nicht offensichtlich und standen nicht im Fokus unserer Aufmerksamkeit.
SD = Standardabweichung, MD = mittlerer Unterschied zwischen den Gruppen, SE = Standardabweichung des mittleren Unterschieds, RBC = Erythrozyten, PLT = Thrombozyten, PRP = plättchenreiches Plasma, WB = Vollblut
Nach Zugabe von D50W zu WB betrug der prozentuale, verdünnungsbereinigte Thrombozytenverlust 7,7 % (310 ± 73 vs. 286 ± 96) im Vergleich zu 17,8 % bei der PRP-Verdünnung in D50W (664 ± 348 vs. 544 ± 277). Der MPV WB stieg um 16,8 % (von 10,1 ± 0,5 auf 11,8 ± 0,6), während der MPV PRP um 26 % anstieg (9,2 ± 0,8 vs. 11,6 ± 0,7). Obwohl die mittleren Unterschiede sowohl bei der Thrombozytenzahlreduktion als auch bei der MPV-Erhöhung bei PRP signifikant größer waren, waren die Änderungen bei der Thrombozytenzahlreduktion innerhalb von WB nahezu signifikant (310 ± 73 bis 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06) und die MPV-Erhöhung war signifikant (10,1 ± 0,5 bis 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Obwohl die mittleren Unterschiede sowohl bei der Thrombozytenzahlreduktion als auch bei der MPV-Erhöhung bei PRP signifikant größer waren, waren die Änderungen bei der Thrombozytenzahlreduktion innerhalb von WB nahezu signifikant (310 ± 73 bis 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06) und die MPV-Erhöhung war signifikant (10,1 ± 0,5 bis 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Obwohl die mittleren Unterschiede sowohl bei der Thrombozytenzahlreduktion als auch bei der CVR-Erhöhung bei PRP signifikant größer waren, waren die Veränderungen beim Rückgang der Thrombozytenzahl innerhalb von WB nahezu signifikant (310 ± 73 bis 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06).Die MPV-Bewertung wurde erst kürzlich ermittelt (von 10,1 ± 0,5 bis 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). der Anstieg des MPV war signifikant (von 10,1 ± 0,5 auf 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大, 但WB 310 ± 73 ± 286 ± 96 (-7,7 %) (p = 0,06) und MPV 10,1 ± 0,5 ± 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < .001）.尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大, 但 但 内血小板 计数 减少310 ± 73 ± 286 ± 96 (-7,7 %) ； p = .06) und ein MPV-Wert von 10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < .001）。Die Veränderung der Thrombozytenzahlreduktion innerhalb des WB war nahezu signifikant (von 310 ± 73 auf 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06), obwohl PRP signifikant größere mittlere Unterschiede bei der Thrombozytenzahlabnahme und der MPV-Erhöhung aufwies und die MPV-Erhöhung signifikant war.(von 10,1 ± 0,5 bis 11,8 ± 0,6 (+16,8) ð < 0,001). (von 10,1 ± 0,5 auf 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Um eine signifikante Änderung des MPV zu beobachten, war eine Endkonzentration von 20 % Glucose erforderlich, die MPV-Änderung war jedoch bei einer Endkonzentration von 25 % ausgeprägter. Der Thrombozytenverlust stabilisierte sich nach dem anfänglichen Abfall. Wir stellten zunächst einen starken Abfall des CVR fest, der jedoch bei einer Endkonzentration von 25 % Glucose schnell wiederhergestellt wurde und signifikant über den CVR-Werten lag, die bei den Endkonzentrationen von 20 % und 15 % Glucose beobachtet wurden (Abb. 3 und links in Tabelle 3; schattierte Kästen zeigen p-Werte ≤ Alpha mit einer Bonferroni-Korrektur von 0,01 an). Es gab auch einen anfänglichen starken Abfall der PLT-Zahl, der in der Anfangsphase von 0–15 s beobachtet wurde und dann stabil blieb (von 15 s bis 30 min; links in Tabelle 4).
Die Zugabe verschiedener Glukosekonzentrationen zum Vollblut führte zunächst zu einem raschen Abfall des MPV, gefolgt von einer konzentrationsabhängigen Erholung um über 20 %. Die Legende zeigt die Glukosekonzentration nach Verdünnung. D15, D20 und D25 wurden in einer 1:1-Verdünnung durchgeführt. D21 und D41 wurden in einer 1:5-Verdünnung durchgeführt.
Tabelle 4 zeigt die Veränderung der Thrombozytenzahl bei Verdünnung mit hypertoner Glukose. Wir beobachteten eine dosisabhängige Beziehung zwischen dem sofortigen Abfall der Thrombozytenzahl bei der 1:1-Verdünnung und der 1:5-Verdünnung. Vergleicht man die 1:1-Verdünnungen als Einzelgruppe mit den 1:5-Verdünnungen, so zeigte sich in der 1:1-Gruppe ein geringerer sofortiger Abfall der Thrombozytenzahl als in der 1:5-Gruppe (66 ± 48.000 (23 %) gegenüber 99 ± 69.000 (37 %). (p = 0,014) in der 1:5-Gruppe. Nach einem anfänglichen Abfall am ersten Messpunkt stabilisierte sich die Thrombozytenzahl als Prozentsatz der Glukose (Abb. 4).
Wenn Vollblut im Verhältnis 1:1 zu Glukose hinzugefügt wird, verringert sich die Thrombozytenzahl um etwa 25 %. Bei der Zugabe von Vollblut im Verhältnis 1:5 ist die Verringerung jedoch deutlich größer – etwa 50 %.
41 % Glukose erhöhte den MPV schneller und stärker als 25 % oder 21 %. Die MPV-Ergebnisse sind in Abbildung 3 dargestellt. Bei allen anderen Verdünnungen wurde nach Zugabe von 50 % Glukose kein unmittelbarer anfänglicher Rückgang des MPV beobachtet. Bei Verwendung von 25 % Glukose (Glukosekonzentration 20,8 % bei der endgültigen Verdünnung) war die MPV-Änderung vergleichbar mit der Änderung bei 20 % Glukose bei einer 1:1-Verdünnung (Abb. 3). Obwohl die MPV-Änderungen bei der 41 %-Mischkonzentration anfänglich größer waren als bei 25 %, war der Unterschied im MPV zwischen 41 % und 25 % nach 16 Minuten nicht mehr signifikant (Tabelle 3, rechts). Interessant ist auch, dass 25 % Glukose den MPV wirksamer erhöhte als 20,8 %.
Diese In-vitro-Studie hat unsere Hypothese teilweise bestätigt. Es zeigte sich eine mögliche partielle Thrombozytenlyse durch die Beimischung von Dextrose, eine schnelle Anpassung der Thrombozyten an extreme Hypertonie und ein signifikanter Anstieg des MPV als Reaktion auf Konzentrationen von > 25 % hypertoner Dextrose. Es zeigte sich eine mögliche partielle Thrombozytenlyse durch die Beimischung von Dextrose, eine schnelle Anpassung der Thrombozyten an extreme Hypertonie und ein signifikanter Anstieg des MPV als Reaktion auf Konzentrationen von > 25 % hypertoner Dextrose. Auf der Grundlage potenzieller gesundheitsschädlicher Thrombozytenaggregationstests werden Thrombozytenaggregationstests durchgeführt und Thrombozytenaggregationstests für extreme gynäkologische Erkrankungen durchgeführt Erstklassige MPV-Zulassung im Hinblick auf eine Konzentrationskonzentration von > 25 %. Es zeigte sich eine mögliche partielle Thrombozytenlyse mit Dextrose, eine schnelle Thrombozytenakkommodation bei extremer Hypertonie und eine signifikante Erhöhung des MPV als Reaktion auf hypertone Dextrosewerte >25 %.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25 % 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升.它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 极端 高渗, 以及响应> 25 % 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。 Es handelt sich um eine potenzielle klinische Thrombozytose-Therapie, die durch die Anpassung von Thrombozyten an extreme Glukosemittel verursacht wird Erstklassige Bewertung von MPV im Hinblick auf eine Konzentration von 25 %. Es zeigt eine mögliche partielle Thrombozytenlyse durch Glukosemischungen, eine schnelle Thrombozytenanpassung an extreme Hypertonie und eine signifikante Erhöhung des MPV als Reaktion auf hypertonen Glukosespiegel >25 %.Der anfängliche Anstieg war bei 41,6 % Glukoseexposition maximal, der Anstieg des MPV näherte sich jedoch etwa 20 Minuten nach der Exposition einer Glukoseexposition von 25 %.
Die Thrombozytenkonzentration wird durch Glukose beeinflusst. Wir stellten fest, dass die PLT-Menge bei allen Glukoseverdünnungen abnahm. Ein starker Abfall der Thrombozytenzahl in H2O-Verdünnungen (0 %) der PRP-Reihe könnte mit osmotischer Lyse zusammenhängen. Alternativ könnte es sich um ein Artefakt durch Thrombozytenverklumpung handeln, was jedoch im Gegensatz zur fehlenden MPV-Veränderung bei dieser Verdünnung steht. Dieser Befund bedeutet, dass einige Thrombozyten sehr empfindlich auf Hypoosmolarität reagieren.
In allen 1:1-Verdünnungen von Glucose sank die PLT-Menge um 20–30 %, sogar bei D5W (hypotonisch bei 252 mOsm), was auf einen spezifischen nicht-osmotischen Effekt von Glucose hindeuten könnte, da sowohl PLT als auch MPV bei einer dreifachen Konzentrationserhöhung von D5W auf D25W unverändert blieben. Tatsächlich neigten die PLT-Konzentrationen dazu, mit zunehmender Osmolarität leicht anzusteigen.
Der Rückgang der PLT zwischen 1:1- und 1:5-Verdünnungen bedeutet, dass der Auflösungseffekt von der anfänglichen und endgültigen Glukosekonzentration abhängt. Wäre er nur von der anfänglichen Konzentration abhängig, würde man einen Unterschied in der PLT-Reduktion zwischen 1:1-Konzentrationen erwarten. Dies ist jedoch nicht der Fall. Hängt der Lyseeffekt nur von der endgültigen Glukosekonzentration ab, erwarten wir keinen großen Unterschied zwischen einer 20%igen 1:1-Verdünnung und einer 20,8%igen 1:5-Verdünnung. Und trotzdem haben wir es geschafft.
Kommt es durch Thrombozytenlyse zu einem Thrombozytenverlust, bildet sich ein partielles Lysat, woraufhin Zytokine und Wachstumsfaktoren in die extrazelluläre Umgebung freigesetzt werden. Mehrere Studien haben gezeigt, dass Thrombozytenlysat als Proliferationslösung fast genauso wirksam ist wie PRP [11]. PRP selbst hat sich als wirksame Lösung zur Behandlung der Proliferation erwiesen [12-14].
Inaktive Thrombozyten zirkulieren in Form einer Scheibe, die durch mehrere innere Strukturen verstärkt ist. Bei Aktivierung nehmen sie eine eher kugelförmige oder amöbenartige Gestalt an, was zu einer Volumenzunahme führt. Die Volumenzunahme erfordert eine Vergrößerung der Oberfläche, die durch die Extrusion des offenen Tubulussystems (OCS) und die Anlagerung exozytischer Granula an die Membran entsteht. Es bleibt zu klären, ob der durch hypertonen Glucose induzierte Anstieg des MPV einen oder beide dieser Mechanismen beinhaltet. Im letzteren Fall würde ein Anstieg des MPV auf eine Degranulation hinweisen.
Diese Studie zeigte, dass die Einwirkung hoher Glukosekonzentrationen auf PRP oder Vollblutplättchen innerhalb von 15 Minuten zu einem Anstieg des MPV bei einer Glukosekonzentration von 25 % bzw. 41,6 % führte.
Der Anstieg des Thrombozyten-MPV kann auf eine Dilatation der umgebenden Mikrotubuli-Knäuel als Reaktion auf den Kalziumeinstrom zurückzuführen sein. Liu et al. Es wurde gezeigt, dass Glukose den Kalziumeinstrom durch den Thrombozyten-TRPC6-Kanal vermittelt [6]. Unsere Hypothese ist, dass Glukose die Entspannung von Mikrotubuli-Knäueln induziert, was zu einem Anstieg des MPV und der Thrombozytensensibilisierung und/oder -aktivierung führt. Unseren Ergebnissen nach zu urteilen, ist dies jedoch nur ein Teil der Geschichte. In unseren Tests führte keine Konzentration unter D25W zu einem Anstieg des MPV. Da wir keine Exposition gegenüber Glukosekonzentrationen zwischen 12,5 % und 25 % getestet haben, deuten unsere Ergebnisse der Phase 1 darauf hin, dass es in diesem Glukosekonzentrationsbereich einen Schwellenwert geben könnte, der zu einem Anstieg des MPV führt. Weitere Tests in den Phasen 3 und 4 zeigten, dass 20–25 % Glukose der Schwellenwert dafür zu sein scheinen, aber es bleibt unklar, warum.
Wir beobachteten außerdem einen Rückgang des MPV um ca. 9 % nach der Zentrifugation. Es ist unklar, ob dieser Rückgang des MPV auf größere und dichtere Thrombozyten zurückzuführen ist, die in der RBC-Schicht der Zentrifuge eingeschlossen sind. Diese Beobachtung könnte für Kliniker wichtig sein, da sie darauf hindeuten könnte, dass PRP-Thrombozyten eine kleinere und weniger dichte Untergruppe der WB-Thrombozyten darstellen.
In einer früheren Studie haben wir gezeigt, dass die manuelle PRP-Herstellung kostengünstig ist [8]. Sensibilisiert Glukose Gewebeplättchen oder PRP und macht sie dadurch anfälliger für eine Aktivierung, oder wird PRP mit partiellen Lysateigenschaften hergestellt, kann dies die Regeneration fördern und den Therapiebedarf reduzieren. Daher könnte die Kombination von PRP und hochkonzentrierter Glukose kostengünstiger sein als PRP oder Glukose allein.
Unsere Studie weist mehrere Mängel auf. Erstens verwenden wir PRP, das mit verschiedenen Methoden gewonnen wurde. Dies kann zu widersprüchlichen Ergebnissen führen. Zweitens konnten wir keine unserer Proben biochemisch analysieren, um eine Thrombozytenaktivierung genauer zu bestimmen. Wir würden gerne P-Selektin, Plättchenfaktor 4, monozytäre Thrombozytenaggregate oder andere Marker der Thrombozytenaktivierung messen, um das Ausmaß oder das Vorhandensein der Alpha-Granula-Degranulation besser zu verstehen, dies geht jedoch über den Rahmen dieser Studie hinaus. Drittens konnten wir weder mittels Elektronenmikroskopie noch mit anderen Methoden bestätigen, dass der Anstieg des MPV in glucoseexponierten Thrombozyten auf die Wirkung auf Mikrotubuli-Verwicklungen zurückzuführen ist.
Mischungen aus Vollblut oder PRP mit 25 % Glukose erhöhten den MPV und signalisierten damit den Beginn der Thrombozytenaktivierung. Diese Studie zeigte jedoch keine fortschreitende Aggregation oder Degranulation. Die hypertone Glukosemischung führte zu einem Thrombozytenverlust, möglicherweise aufgrund eines lytischen Effekts. Eine partielle Aktivierung oder Lyse von Thrombozyten kann nach der Thrombozyteninjektion zu einer Geweberegeneration führen. Welche klinischen Folgen diese Veränderungen haben können, ist unklar. Weitere Studien haben genauere Messungen der Aktivierung oder Lyse gezeigt und die verschiedenen klinischen Effekte hypertoner Glukosemischungen mit Vollblut oder PRP untersucht.
Die Glukose-Proliferationstherapie ist eine einfache und kostengünstige regenerative Therapie, die sich rasch verbreitet und die klinische Forschung unterstützt. Diese Studie legt einen physiologischen Mechanismus nahe, dessen Bestätigung uns helfen könnte, einen Teil des regenerativen Mechanismus der Proliferationstherapie zu verstehen.
Biomedizinische und Gesundheitsinformatik an der University of Missouri, Kansas City School of Medicine, Kansas City, USA
Menschliche Probanden: Alle Teilnehmer dieser Studie haben ihre Einwilligung gegeben oder nicht. Die International Society for Cellular Medicine hat die Genehmigung ICMS-2017-003 erteilt. Das folgende Protokoll wurde vom Institutional Review Board der International Society for Cellular Medicine zur weiteren Verwendung freigegeben: Titel: Berechnung der Ausbeute an plättchenreichem Plasmamedikamenten basierend auf der Thrombozytenzahl im CBC-Basiswert. Tiere: Alle Autoren haben bestätigt, dass an dieser Studie keine Tiere oder Gewebe beteiligt waren. Interessenkonflikte: In Übereinstimmung mit dem Uniform Disclosure Form des ICMJE erklären alle Autoren Folgendes: Zahlungs-/Dienstleistungsinformationen: Alle Autoren erklären, dass sie für die eingereichte Arbeit keinerlei finanzielle Unterstützung von irgendeiner Organisation erhalten haben. Finanzielle Beziehungen: Alle Autoren erklären, dass sie derzeit oder in den letzten drei Jahren keine finanziellen Beziehungen zu Organisationen hatten, die an der eingereichten Arbeit interessiert sein könnten. Andere Beziehungen: Alle Autoren erklären, dass keine anderen Beziehungen oder Aktivitäten bestehen, die die eingereichte Arbeit beeinträchtigen könnten.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al. (17. Mai 2022) Der Einfluss von Glukose auf Thrombozytenzahl und -volumen: Auswirkungen auf die regenerative Medizin. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
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