"Tvivla aldrig på att en liten grupp eftertänksamma, engagerade medborgare kan förändra världen. Faktum är att det är den enda som finns."
Cureus uppdrag är att förändra den långvariga modellen för medicinsk publicering, där forskningsinlämning kan vara dyr, komplex och tidskrävande.
Trombocytrik plasma/prp, vävnadsregenerering, trombocytaktivering, glukosproliferativ terapi, trombocyter, proliferativ terapi
Citera denna artikel som: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17 maj 2022) Effekten av glukos på trombocytantal och volym: implikationer för regenerativ medicin. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Trombocytrik plasma (PRP) och hypertona glukoslösningar används ofta för injektion inom regenerativ medicin, ibland tillsammans. Effekten av hyperton glukos på trombocytlys och aktivering har inte rapporterats tidigare. Vi testade effekten av förhöjda glukoskoncentrationer på trombocyt- och erytrocytantal, samt cellvolymer i PRP och helblod (WB). En snabb partiell minskning av trombocytantalet inträffade med alla glukosblandningar blandade med PRP eller helblod, vilket överensstämmer med partiell lys. Efter den första minuten förblev trombocytantalet stabilt, vilket tyder på en snabb ackommodation av kvarvarande trombocyter till extrem (>2000 mOsm) hypertonicitet. Efter den första minuten förblev trombocytantalet stabilt, vilket tyder på en snabb ackommodation av kvarvarande trombocyter till extrem (>2000 mOsm) hypertonicitet. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю аккоюдац тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Efter den första minuten förblev trombocytantalet stabilt, vilket indikerar en snabb ackommodation av de kvarvarande trombocyterna till extrem (>2000 mOsm) hypertonicitet.第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态.2000 mOsm）高渗状态. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю адаптацих тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. Efter den första minuten förblev trombocytantalet stabilt, vilket indikerar en snabb anpassning av de kvarvarande trombocyterna till det extrema (>2000 mOsm) hyperosmolära tillståndet.Glukoskoncentrationer på 25 % och högre resulterade i en signifikant ökning av den genomsnittliga trombocytvolymen (MPV), vilket indikerar ett tidigt stadium av trombocytaktivering. Ytterligare studier behövs för att avgöra om trombocytlys eller -aktivering sker och om hyperton glukosinjektion ensamt eller i kombination med PRP kan ge ytterligare klinisk nytta.
På 1950-talet upptäckte den amerikanske kirurgen George Hackett att han permanent kunde lindra led- och ryggsmärtor hos många patienter genom att injicera en proliferativ lösning i senor och ligament. Hans experiment på kaniner visade att behandlingen, som han kallade proliferativ terapi, fick senorna att förstoras och stärkas. Histologiska studier har bekräftat att nytt kollagen produceras under denna process [1].
Under de första decennierna prövades många olika distributionslösningar. På 1990-talet ansåg de flesta läkare att höga koncentrationer av glukos var den säkraste och mest effektiva metoden. Verkningsmekanismen är dock fortfarande oklar.
Få kliniska studier genomfördes under 1900-talet efter Hacketts arbete. Under 2000-talet ökade dock intresset och flera framgångsrika kliniska prövningar av proliferativ terapi slutfördes för behandling av ländryggssmärta [2], knäartros [3] och lateral epikondylit [4].
Vävnadsregenerering kräver deltagande av stamceller. Därför måste höga glukoskoncentrationer på något sätt inducera migration, replikation och differentiering av stamceller. Vi antar att trombocyter kan fungera som budbärare och att höga glukoskoncentrationer kan få trombocyter att frisätta cytokiner och tillväxtfaktorer, och därigenom främja regenerativa processer, särskilt stamcellsmigration till områden med höga glukoskoncentrationer.
Trombocytaktivering föregår alltid en ökning av intracellulärt kalcium [5]. Liu et al. visade 2008 att höga glukosnivåer ökar aktiviteten hos transient receptor potential canonical type 6 (TRPC6) kanaler i plasmamembranet, vilket leder till ett inflöde av kalciumjoner till trombocyter [6]. En annan studie visade att exponering av mikrotubuli marginalzon för kalciumjoner orsakar relaxation, expansion och deformation av marginalzonen, vilket i sin tur orsakar en förändring i form från disk till sfärisk, vilket resulterar i genomsnittlig trombocytvolym (MPV) [7].
Vår hypotes i denna studie är att exponering av trombocyter för höga glukoskoncentrationer påverkar mikrotubulimarginalzonen och den intracellulära miljön, vilket leder till en ökning av MPV.
Alla deltagare undertecknade ett informerat samtyckesformulär efter att studiens detaljer hade förklarats och innan de mottog proverna. I denna studie användes endast PRP-prover med en hematokrit större än 2 % så att erytrocytantal (erytrocyter) och medelblodvolym av röda blodkroppar (MCV) kunde inkluderas för jämförelse.
Studien genomfördes i fyra faser, den första fasen var PRP och de återstående faserna var helblod (tabell 1). Som tidigare beskrivits [8] beräknades alla relativa centrifugalkrafter (RCF, g-kraft) från mittpunkten (Rmid, i cm) av blodpelaren i centrifugalsprutan. Vi valde att använda MPV som en markör för trombocytsensibilisering och trombocytantal som en indikator på potentiell trombocytlys, vilka båda enkelt kan mätas på vanliga hematologianalysatorer.
I den första fasen donerade 47 volontärer blodprover – ett rör med etylendiamintetraättiksyra (EDTA) och ett PRP-helblodsprov (antikoagulerat med natriumcitrat (NaCl, 3 %)) (tabell 1). Placera vippan i röret omedelbart. Fullständig blodstatus (CBC) utfördes på EDTA-prover i triplikat, och NaCl-prover analyserades i triplikat för CBC-analys, och sedan framställdes PRP med olika metoder som beskrivs ovan [8]. Alla PRP-prover framställdes genom centrifugering vid 900–1000 g. Blanda varje PRP-prov på en vortexblandare i 5–10 sekunder, fördela sedan fem 0,5 ml alikvoter i rör.
För att utvärdera effekten av trombocytexponering på förhöjda glukoskoncentrationer blandades lika mängder (0,5 ml) av 0 %, 5 %, 12,5 %, 25 % och 50 % glukos i vatten med trombocytproverna för att erhålla 0 %, 2,5 %, 6,25 %, 12,5 % och 25 % koncentrationer av glukosblandningen, och rören blandades på en provrörsskakare i 15 minuter. TAC för varje blandning analyserades i triplikat efter 15 minuter. Trombocytantal (PLT), erytrocytantal, MCV och MPV beräknades i genomsnitt för varje rör, och medelvärdet av trombocytantal, erytrocytantal, MCV och MPV beräknades för alla PRP-prover.
Efter att den första fasen av datainsamlingen var avslutad noterade vi en signifikant ökning av trombocytvolymen i PRP-trombocyter efter tillsatsen av D50W. PRP-trombocyter representerar inte nödvändigtvis alla trombocyter i blodet, och PRP-medium skiljer sig från WB-medium. Därför beslutade vi att genomföra en andra fasstudie av effekten av att tillsätta D50W till helblod.
För den andra omgången valde vi en provstorlek på 30 baserat på resultaten från den första serien, såsom beskrivs i analysavsnittet. I denna serie donerade 20 volontärer blodprover (tabell 1). Helblod (1,8 ml) togs upp i en 3 ml spruta och antikoagulerades med 0,2 ml 40 % NaCl. Helblodssprutan blandades i fem sekunder med en vortexblandare och CBC analyserades i triplikat. Efter analys tillsattes antikoagulerat blod till 2 ml 50 % glukos i en 5 ml spruta (slutlig glukoskoncentration var cirka 25 % (D25)) och placerades i ett skakrör i 30 minuter. Efter 30 minuter analyserades D25/CBC i WB-sprutor i triplikat. Medelvärdet av trombocytantal, erytrocytantal, MCV och MPV per spruta beräknades, och medelvärdet för PLT, erytrocytantal, MCV och MPV beräknades för varje prov före och efter tillsats av glukos.
Eftersom trombocyter i helblod ofta exponeras för hyperton glukos under proliferativ glukosbehandling på grund av minimalinvasiv injektion, och det inte är vanligt att kombinera PRP med hyperton glukos strax före injektion, beslutade vi att studera hyperton glukos i kombination med WB i avsnitt 1, steg tre och fyra. I varje steg donerade 20 volontärer 7–8 ml ACD-A (syra innehållande trinatriumcitrat (22,0 g/l), citronsyra (8,0 g/l) och glukos (24,5 g/l), dextroscitratlösning) för blodantikoagulantia (tabell 1). Endast glukosblandningar större än 12,5 % användes för att bestämma tröskelprocenten associerad med en ökning av MPV. I det tredje steget placeras 1 ml blod i ett provrör. Blanda sedan blodet i en vortexblandare i 10 sekunder genom att tillsätta 1 ml 30 % glukos, 40 % glukos eller 50 % glukos till röret för att erhålla en slutlig glukoskoncentration på 15 %, 20 % respektive 25 %. Glukosblodprover analyserades för CBC omedelbart efter blandning och upprepades varannan minut i 30 minuter.
Under den initiala blandningen exponerar tillsatsen av 1:1 hyperton glukos och WB eller PRP trombocyterna för koncentrationer över 25 % i flera sekunder. I det fjärde steget, för att utvärdera effekten av hyperton glukos med minimala initiala toppkoncentrationer och testa den övre gränsen för glukoseffekten, tillsatte vi endast en liten mängd blod till D25W eller D50W. Placera 1 ml D25W eller D50W i ett rör och tillsätt 0,2 ml WB medan provet vortexades i 10 sekunder. I dessa fall exponerades blodet för glukos vid en koncentration cirka 20 % över den slutliga koncentrationen, snarare än 50 % över den slutliga koncentrationen som i fas 3, vilket resulterade i slutliga glukoskoncentrationer på 20,8 % och 41,6 %. Blandade prover analyserades med samma tidsintervall som i steg 3.
I det första steget i varje glukosutspädningsserie togs 30 prover eftersom detta var lämplig provstorlek för pilotstudien [9]. I slutet av varje fas (inklusive den första fasen) utvärderas provstorlekens tillräcklighet med hjälp av formeln som används för att bestämma den provstorlek som behövs för att uppskatta medelvärdet av den kontinuerliga utfallsvariabeln i en population. Formel n = Z2 x SD2 /E2. I denna ekvation är Z Z-poängen, SD är standardavvikelsen och E är det önskade felet [10]. Vårt alfavärde är 0,05, vilket motsvarar ett Z-värde på 1,96, och vi förväntar oss ett fel på 5 (i procent). Därför löser vi ut n = (1,962 x SD2)/52. Resultaten visade att den provstorlek som krävdes för varje steg var mindre än det faktiska insamlade antalet.
Under perioderna 1, 3 och 4 med mer än en glukoskoncentration analyserades effekten av olika glukoskoncentrationer genom att jämföra den fraktionella förändringen mellan tid 0 och varje efterföljande tidpunkt (fas 1 vid 15 minuter, period 3 vid 15 minuter) och fyra vid 15 sekunder, sedan varannan minut.) Förändringshastigheterna för varje tidsperiod jämfördes med Mann-Whitney U-test eftersom data inte följde en normalfördelning som bestämdes av Shapiro-Wilk-normalitetstestet. Eftersom en 1-till-1-analys av flera grupper (fem) utfördes i det första, tredje och fjärde steget (totalt fem), utfördes en Bonferroni-korrigering för att justera det önskade alfavärdet till ≤0,01 men inte ≤0,05.
Minskning av trombocytantal med alla koncentrationer av hyperton dextros och en ökning av MPV i PRP-trombocyter vid >12,5 % dextroskoncentration: PRP-trombocytantalet ökade från en till fem gånger koncentrationen jämfört med helblod vid baslinjen, varierande beroende på metod (visas ej). Minskning av trombocytantal med alla koncentrationer av hyperton dextros och en ökning av MPV i PRP-trombocyter vid >12,5 % dextroskoncentration: PRP-trombocytantalet ökade från en till fem gånger koncentrationen jämfört med baslinjevärdet för helblod, varierande beroende på metod (visas ej). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV в RP концентрации декстрозы > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз по сравнению с исходной зависимости от метода (nе показано). Minskat antal trombocyter vid alla hypertona dextroskoncentrationer och ökat MPV i PRP-trombocyter vid >12,5 % dextroskoncentration: PRP-trombocytantalet ökade 1–5 gånger jämfört med helblod vid baslinjen, beroende på metod (visas ej). ).在> 12,5% 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 血数，PRP 血增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方漳，因方漳而 Vid en glukoskoncentration på >12,5 % minskar den höga glukoskoncentrationen blodantalet, PRP-blod-MPV ökar: jämfört med 与基线全血 ökar PRP-blodantalet från 1 till 5 gånger koncentrationen (ej beskriven). При концентрациях глюкозы >12,5% все концентрации гипертонической глюкозы снижали количество MP, повышали в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- till 5-кратных конценсраций исходными концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (nе описано ). Vid glukoskoncentrationer >12,5 % minskade alla hypertensiva glukoskoncentrationer trombocytantalet och ökade MPV i PRP-trombocyter: PRP-trombocytantalet ökade 1 till 5 gånger jämfört med baslinjekoncentrationerna i helblod, beroende på metod (enligt beskrivning).Figur 1 visar att antalet trombocyter minskade med nästan 75 % efter utspädning i vatten och med 20–30 % efter 15 minuters utspädning med olika glukoskoncentrationer jämfört med baslinje-PRP och en 1:1-utspädning justerad för volym (1-k1 med volymkorrigering). k -1 avel).1 avel).
Antalet celler i varje utspädning uttrycks som en bråkdel av det ursprungliga antalet före utspädning.
MPV minskade minimalt under PRP-produktion, utan ytterligare förändring i utspädningskoncentrationer till 12,5 % i vatten eller glukos (inklusive 25 % PRP-glukosblandningar) och ökade med mer än 20 % efter utspädning i 50 % glukoslösning (Fig. 2). Däremot uppvisade erytrocyterna ingen signifikant volymförändring vid någon annan utspädning än H2O.
Den genomsnittliga cellvolymen i varje utspädning uttrycks som en procentandel av den ursprungliga volymen före utspädning.
En liknande men mindre uttalad minskning av trombocytantal och ökning av CVR observerades hos bröstkorg och bröst som exponerades för 50 % glukos (för att formulera med 25 % glukos). Tabell 2 jämför cellantal och cellvolymer i helblod utspätt i 50 % dextros med fas 1 PRP-data utspädda i 50 % dextros. Förändringar i erytrocytantal och erytrocyternas MCV var inte uppenbara och var inte i fokus för vår uppmärksamhet.
SD = standardavvikelse, MD = medelskillnad mellan grupperna, SE = standardavvikelse för medelskillnaden, RBC = erytrocyter, PLT = trombocyter, PRP = trombocytrik plasma, WB = helblod
Efter tillsats av D50W till WB var den procentuella utspädningsjusterade trombocytförlusten 7,7 % (310 ± 73 vs. 286 ± 96) jämfört med 17,8 % för PRP-utspädning i D50W (664 ± 348 vs. 544 ± 277). MPV WB ökade med 16,8 % (från 10,1 ± 0,5 till 11,8 ± 0,6), medan MPV PRP ökade med 26 % (9,2 ± 0,8 vs. 11,6 ± 0,7). Även om de genomsnittliga skillnaderna i både minskning av trombocytantal och ökning av MPV var signifikant större med PRP, var förändringarna i minskning av trombocytantal inom WB nästan signifikanta (310 ± 73 till 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) och ökningen av MPV var signifikant (10,1 ± 0,5 till 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Även om de genomsnittliga skillnaderna i både minskning av trombocytantal och ökning av MPV var signifikant större med PRP, var förändringarna i minskning av trombocytantal inom WB nästan signifikanta (310 ± 73 till 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) och ökningen av MPV var signifikant (10,1 ± 0,5 till 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Även om de genomsnittliga skillnaderna i både minskning av trombocytantal och ökning av CVR var signifikant större med PRP, var förändringarna i minskningen av trombocytantal inom WB nästan signifikanta (310 ± 73 till 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (от 10,1 ± 0,5 till 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Ökningen i MPV var signifikant (från 10,1 ± 0,5 till 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7%)；p = .06）和的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）.尽管 PRP.减少 的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = .06）和MPV 的瀄增嚘（瀝增嚘＄瀝增嚠1. ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）.Förändringen i minskningen av trombocytantalet inom WB var nästan signifikant (från 310 ± 73 till 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), även om PRP hade signifikant större genomsnittliga skillnader i minskning av trombocytantalet och ökning av MPV, och ökningen av MPV var signifikant.(от 10,1 ± 0,5 till 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (från 10,1 ± 0,5 till 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
En slutlig koncentration på 20 % glukos krävdes för att se en signifikant förändring i MPV, men förändringen i MPV var mer uttalad vid den slutliga koncentrationen på 25 %. Trombocytförlusten stabiliserades efter den initiala minskningen. Vi noterade en initial kraftig minskning av CVR, men CVR återställdes snabbt vid den slutliga glukoskoncentrationen på 25 %, vilket var signifikant högre än de CVR-nivåer som observerades vid de slutliga glukoskoncentrationerna på 20 % och 15 % (Fig. 3 och till vänster om tabell 3; skuggade rutor). indikerar p-värden ≤ alfa med en Bonferroni-korrigering på 0,01). Det skedde också en initial kraftig minskning av antalet PLT, observerat i den initiala fasen på 0–15 s, och sedan förblev stabilt (från 15 s till 30 min; vänster om tabell 4).
Tillsats av olika glukoskoncentrationer till helblod resulterade i en initial snabb minskning av MPV följt av en koncentrationsberoende återhämtning på mer än 20 %. Förklaringen visar glukoskoncentrationen efter utspädning. D15, D20 och D25 utfördes i en 1:1-utspädning. D21 och D41 utfördes i en 1:5-utspädning.
Tabell 4 visar förändringen i trombocytantal vid utspädning i hyperton glukos. Vi observerade ett dosberoende samband mellan den omedelbara minskningen av PLT-tal vid 1:1-utspädning och vid 1:5-utspädning. Vid jämförelse av 1:1-utspädningarna som en enda grupp med 1:5-utspädningarna hade 1:1-gruppen en omedelbar minskning av trombocytantalet, mindre än 1:5-gruppen, 66 ± 48 000 (23 %) jämfört med 99 ± 69 000 (37 %). (p = 0,014) i 1:5-gruppen. Efter en initial minskning vid den första mätpunkten stabiliserades trombocytantalet som en procentandel av glukos (Fig. 4).
När helblod tillsätts glukos i förhållandet 1:1 minskar antalet trombocyter med cirka 25 %. Men när helblod tillsattes i förhållandet 1:5 var minskningen mycket större – cirka 50 %.
41 % glukos ökade MPV snabbare och mer dramatiskt än 25 % eller 21 %. MPV-resultaten visas i figur 3. Vid alla andra utspädningar observerades ingen omedelbar initial minskning av MPV efter tillsats av 50 % glukos. Vid användning av 25 % glukos (glukoskoncentration 20,8 % vid den slutliga utspädningen) var förändringen i MPV jämförbar med förändringen i 20 % glukos vid en 1:1-utspädning (figur 3). Även om förändringarna i MPV initialt var större vid den blandade koncentrationen på 41 % än vid 25 %, var skillnaden i MPV mellan 41 % och 25 % efter 16 minuter inte längre signifikant (tabell 3, höger). Det är också intressant att 25 % glukos ökade MPV mer effektivt än 20,8 %.
Denna in vitro-studie bekräftade delvis vår hypotes. Den visade potentiell partiell trombocytlys genom dextrosinblandning, en snabb anpassning av trombocyter till extrem hypertonicitet och en signifikant ökning av MPV som svar på > 25 % koncentrationer av hyperton dextros. Den visade potentiell partiell trombocytlys genom dextrosinblandning, en snabb anpassning av trombocyter till extrem hypertonicitet och en signifikant ökning av MPV som svar på > 25 % koncentrationer av hyperton dextros. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодациц тромби экстремального гипертонуса och значительное повышение MPV в ответ på гипертоническую концентрацию декстрозы > 25%. Den visade potentiell partiell trombocytlys med dextros, snabb trombocytackommodation till extrem hypertonicitet och en signifikant ökning av MPV som svar på hypertoniska dextrosnivåer >25 %.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25 % 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升.它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适庸 极竌响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой, быструю адаптацию тромбоцитов экстремальному гипертонусу och значительное увеличение MPV в ответ på концентрацию гипертонической глюкозы. Den visar potentiell partiell trombocytlys av glukosblandningar, snabb trombocytanpassning till extrem hypertonicitet och en signifikant ökning av MPV som svar på hyperton glukos >25 %.Den initiala ökningen var maximal vid 41,6 % glukosexponering, men ökningen i MPV närmade sig 25 % glukosexponering cirka 20 minuter efter exponering.
Trombocytkoncentrationen påverkas av glukos. Vi noterade att mängden PLT minskade vid alla glukosutspädningar. En kraftig minskning av antalet trombocyter i H2O (0%)-utspädningar av PRP-serien kan vara associerad med osmotisk lys. Alternativt kan detta vara en artefakt orsakad av trombocytklumpning, men detta står i kontrast till avsaknaden av MPV-förändring vid denna utspädning. Detta fynd innebär att vissa trombocyter är mycket känsliga för hypoosmolaritet.
I alla 1:1-utspädningar av glukos minskade mängden PLT med 20–30 %, även med D5W (hypotonisk vid 252 mOsm), vilket kan indikera en specifik icke-osmotisk effekt av glukos, eftersom både PLT och MPV förblev oförändrade vid en trefaldig ökning av glukoskoncentrationen från D5W till D25W. Faktum är att PLT-koncentrationerna tenderade att öka något med ökande osmolaritet.
Minskningen av PLT mellan utspädningar på 1:1 och 1:5 innebär att upplösningseffekten beror på den initiala och slutliga glukoskoncentrationen. Om den bara berodde på den initiala koncentrationen skulle man förvänta sig en skillnad i PLT-reduktion mellan 1:1-koncentrationerna. Men det gör inte vi. Om lyseffekten bara beror på den slutliga glukoskoncentrationen förväntar vi oss inte någon större skillnad mellan en 20 % 1:1-utspädning och en 20,8 % 1:5-utspädning. Och ändå gjorde vi det.
Om trombocytförlust uppstår på grund av trombocytlys bildas ett partiellt lysat, varefter cytokiner och tillväxtfaktorer frigörs till den extracellulära miljön. Flera studier har visat att trombocytlysat är nästan lika effektivt som PRP som en proliferationslösning [11]. PRP i sig har visat sig vara en effektiv lösning för behandling av proliferation [12-14].
Inaktiva trombocyter cirkulerar i form av en skiva förstärkt med flera interna strukturer. Under aktivering antar de en mer sfärisk eller amöbform, vilket resulterar i en volymökning. Volymökningen kräver en ökning av ytan, vilket är resultatet av extruderingen av det öppna tubulisystemet (OCS) och tillsatsen av exocytära granuler till membranet. Det återstår att avgöra om ökningen av MPV inducerad av hyperton glukos involverar en eller båda av dessa mekanismer, men om det är den senare, skulle en ökning av MPV indikera degranulation.
Denna studie visade att exponering för höga glukoskoncentrationer på PRP eller helblodsplättar resulterade i en ökning av MPV inom 15 minuter med en glukoskoncentration på 25 % respektive 41,6 %.
Ökningen av trombocyt-MPV kan bero på dilatation av de omgivande mikrotubulära trassel som svar på kalciuminflöde. Liu et al. Glukos har visat sig mediera kalciuminflöde genom trombocyt-TRPC6-kanalen [6]. Vår hypotes är att glukos inducerar relaxation av mikrotubulära trassel, vilket leder till en ökning av MPV och trombocytsensibilisering och/eller aktivering. Att döma av våra resultat är detta dock bara en del av historien. I våra tester resulterade ingen koncentration under D25W i en ökning av MPV. Med tanke på att vi inte har testat exponering för glukoskoncentrationer mellan 12,5 % och 25 %, tyder våra fas 1-resultat på att det kan finnas ett tröskelvärde inom detta intervall av glukoskoncentrationer som leder till en ökning av MPV. Ytterligare tester i steg 3 och 4 visade att 20–25 % glukos verkar vara tröskelvärdet för detta, men det är fortfarande oklart varför.
Vi observerade också en minskning av MPV på ~9 % efter centrifugering. Det är inte klart om denna minskning av MPV beror på större och tätare trombocyter som är instängda i centrifugens röda blodkroppslager. Denna observation kan vara viktig för kliniker eftersom den kan antyda att PRP-trombocyter är en mindre och mindre tät delmängd av vitblodplättar.
I en tidigare studie visade vi att PRP-beredning med manuella metoder är billig [8]. Om glukos sensibiliserar vävnadsplättar eller PRP, vilket gör dem mer mottagliga för aktivering, eller om PRP produceras med partiella lysategenskaper, kan detta förbättra regenereringen och minska behovet av behandling. Därför kan kombinationen av PRP och högkoncentrerad glukos vara mer kostnadseffektiv än PRP eller glukos ensamt.
Vår studie har flera brister. För det första använder vi PRP erhållen från flera olika metoder. Detta kan leda till motstridiga resultat. För det andra kunde vi inte utföra en biokemisk analys av något av våra prover för att mer exakt avgöra om trombocytaktivering hade inträffat. Vi skulle vilja mäta P-selektin, trombocytfaktor 4, monocytiska trombocytaggregat eller andra markörer för trombocytaktivering för att bättre förstå graden eller förekomsten av alfa-granuldegranulering, men detta ligger utanför ramen för denna studie. För det tredje kunde vi inte bekräfta med elektronmikroskopi eller andra metoder att ökningen av MPV i glukosexponerade trombocyter berodde på effekten på mikrotubuli-trassel.
Blandningar av WB eller PRP med 25 % glukos ökade MPV, vilket signalerar början av trombocytaktivering, även om denna studie inte visade progression av aggregation eller degranulation. Den hypertona glukosblandningen resulterade i trombocytförlust, vilket möjligen representerar en lytisk effekt. Partiell aktivering eller lys av trombocyter kan orsaka vävnadsregenerering efter trombocytinjektion. Det är inte klart vilka kliniska konsekvenser dessa förändringar kan leda till. Ytterligare studier har visat mer noggranna mätningar av aktivering eller lys och har utvärderat de olika kliniska effekterna av hypertona glukosblandningar med WB eller PRP.
Glukosproliferativ terapi är en enkel och billig regenerativ terapi som snabbt expanderar och stödjer klinisk forskning. Denna studie tyder på en fysiologisk mekanism som, om den bekräftas, skulle kunna hjälpa oss att förstå en del av den regenerativa mekanismen för proliferativ terapi.
Biomedicinsk och hälsoinformatik vid University of Missouri, Kansas City School of Medicine, Kansas City, USA
Mänskliga försökspersoner: Alla deltagare i denna studie gav eller gav inte sitt samtycke. International Society for Cellular Medicine har utfärdat godkännande ICMS-2017-003. Följande protokoll har godkänts för vidare användning av Institutional Review Board of the International Society for Cellular Medicine: Titel: Beräkning av läkemedelsutbyte i trombocytrik plasma baserat på baslinjens CBC-trombocytantal. Djurförsökspersoner: Alla författare bekräftade att inga djur eller vävnader var inblandade i denna studie. Intressekonflikter: I enlighet med ICMJE:s enhetliga upplysningsformulär försäkrar alla författare följande: Betalnings-/tjänsteinformation: Alla författare försäkrar att de inte har fått ekonomiskt stöd från någon organisation för det inlämnade arbetet. Ekonomiska relationer: Alla författare försäkrar att de inte för närvarande eller under de senaste tre åren har ekonomiska relationer med någon organisation som kan vara intresserad av det inlämnade arbetet. Andra relationer: Alla författare försäkrar att det inte finns några andra relationer eller aktiviteter som kan påverka det inlämnade arbetet.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al. (17 maj 2022) Effekten av glukos på trombocytantal och volym: implikationer för regenerativ medicin. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Copyright 2022 Harrison et al. Detta är en artikel med öppen åtkomst som distribueras enligt villkoren i Creative Commons Attribution-licensen CC-BY 4.0. Obegränsad användning, distribution och reproduktion i vilket medium som helst är tillåten, förutsatt att den ursprungliga författaren och källan anges.