„Никогаш не се сомневајте дека мала група промислени, посветени граѓани можат да го променат светот. Всушност, тие се единствените таму.“
Мисијата на Cureus е да го промени долгогодишниот модел на медицинско објавување, во кој поднесувањето истражувања може да биде скапо, сложено и да одзема многу време.
Плазма/прп богата со тромбоцити, регенерација на ткива, активирање на тромбоцити, терапија за пролиферација на гликоза, тромбоцити, пролиферативна терапија
Цитирајте ја оваа статија како: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17 мај 2022) Ефектот на гликозата врз бројот и волуменот на тромбоцитите: импликации за регенеративната медицина. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Растворите од плазма богата со тромбоцити (PRP) и хипертоничната гликоза најчесто се користат за инјектирање во регенеративната медицина, понекогаш заедно. Ефектот на хипертоничната гликоза врз лизата и активацијата на тромбоцитите не е претходно објавен. Го тестиравме ефектот на покачените концентрации на гликоза врз бројот на тромбоцити и еритроцити, како и волуменот на клетките во PRP и цела крв (WB). Брзо делумно намалување на бројот на тромбоцити се случи со сите мешавини на гликоза измешани со PRP или цела крв, што е во согласност со делумна лиза. По првата минута, бројот на тромбоцити остана стабилен, што укажува на брзо прилагодување на преостанатите тромбоцити кон екстремна (>2000 mOsm) хипертоничност. По првата минута, бројот на тромбоцити остана стабилен, што укажува на брзо прилагодување на преостанатите тромбоцити кон екстремна (>2000 mOsm) хипертоничност. После првичниот минуты количество тромбоцитов останувалось стабилен, што указува на быструю аккомодацию остаточных тромбоцитов до екстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. По првата минута, бројот на тромбоцити остана стабилен, што укажува на брза акодакција на преостанатите тромбоцити до екстремна (>2000 mOsm) хипертоничност.第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 200 г. mOsm）高渗状态.2000 mOsm）高渗状态. После првичниот минуты количество тромбоцитов останувалось стабилен, што указува на быструю адаптацию остаточных тромбоцитов к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. По првата минута, бројот на тромбоцити остана стабилен, што укажува на брза адаптација на преостанатите тромбоцити кон екстремната (>2000 mOsm) хиперосмоларна состојба.Концентрациите на гликоза од 25% и повеќе резултираа со значително зголемување на просечниот волумен на тромбоцити (MPV), што укажува на рана фаза на активирање на тромбоцитите. Потребни се понатамошни студии за да се утврди дали се јавува лиза или активирање на тромбоцитите и дали хипертонична инјекција на гликоза сама по себе или во комбинација со PRP може да обезбеди дополнителна клиничка корист.
Во 1950-тите, американскиот хирург Џорџ Хакет открил дека може трајно да ги ублажи болките во зглобовите и грбот кај многу пациенти со инјектирање на пролиферативен раствор во тетивите и лигаментите. Неговите експерименти врз зајаци покажале дека третманот, кој тој го нарекол пролиферативна терапија, предизвикува зголемување и зајакнување на тетивите. Хистолошките студии потврдиле дека за време на овој процес се произведува нов колаген [1].
Во текот на првите неколку децении, беа испробани многу различни решенија за дистрибуција. До 1990-тите, повеќето практичари сметаа дека високите концентрации на гликоза се најбезбедниот и најефикасен метод. Сепак, механизмот на дејство останува нејасен.
Во 20 век по работата на Хакет беа спроведени малку клинички студии. Сепак, во 2000-тите имаше обновен интерес и беа завршени неколку успешни клинички испитувања за пролиферативна терапија за третман на болки во долниот дел од грбот [2], остеоартритис на коленото [3] и латерален епикондилитис [4].
Регенерацијата на ткивата бара учество на матични клетки. Затоа, високите концентрации на гликоза мора некако да предизвикаат миграција, репликација и диференцијација на матичните клетки. Претпоставуваме дека тромбоцитите можат да дејствуваат како гласници и дека високите концентрации на гликоза можат да предизвикаат тромбоцитите да ослободуваат цитокини и фактори на раст, со што се поттикнуваат регенеративните процеси, особено миграцијата на матичните клетки во области со високи концентрации на гликоза.
Активацијата на тромбоцитите секогаш претходи на зголемувањето на интрацелуларниот калциум [5]. Лиу и сор. во 2008 година покажаа дека високите нивоа на гликоза ја зголемуваат активноста на каналите со транзиентен рецепторски потенцијал канонски тип 6 (TRPC6) во плазматската мембрана, што доведува до прилив на јони на калциум во тромбоцитите [6]. Друга студија покажа дека изложеноста на маргиналната зона на микротубулите на јони на калциум предизвикува релаксација, експанзија и деформација на маргиналната зона, што пак предизвикува промена на обликот од диск во сферичен, што резултира со просечен волумен на тромбоцити (MPV) [7].
Нашата хипотеза во оваа студија е дека изложеноста на тромбоцитите на високи концентрации на гликоза влијае на маргиналната зона на микротубулите и интрацелуларната средина, што доведува до зголемување на MPV.
Сите учесници потпишаа формулар за информирана согласност откако беа објаснети деталите од студијата и пред да ги добијат примероците. Во оваа студија, беа користени само примероци од PRP со хематокрит поголем од 2%, така што бројот на еритроцити (еритроцити) и средниот корпускуларен волумен на црвените крвни зрнца (MCV) можеа да се вклучат за споредба.
Студијата беше спроведена во четири фази, првата фаза беше PRP, а преостанатите фази беа цела крв (Табела 1). Како што беше претходно опишано [8], сите релативни центрифугални сили (RCF, g-сила) беа пресметани од средната точка (Rmid, во cm) на крвната колона во центрифугалниот шприц. Избравме да го користиме MPV како маркер за сензитизација на тромбоцити, а бројот на тромбоцити како индикатор за потенцијална лиза на тромбоцити, кои и двете можат лесно да се измерат со стандардни хематолошки анализатори.
Во првата фаза, 47 волонтери донираа примероци од крв - една епрувета со етилендиаминтетраоцетна киселина (EDTA) и еден примерок од цела крв од PRP (антикоагулиран со натриум цитрат (NaCl, 3%)) (Табела 1). Веднаш ставете го мерачот во епруветата. Комплетна крвна слика (CBC) беше извршена на примероци од EDTA во три примероци, а примероците од NaCl беа анализирани во три примероци за CBC анализа, а потоа PRP беше подготвен со различни методи опишани погоре [8]. Сите PRP примероци беа подготвени со центрифугирање на 900-1000 g. Измешајте го секој PRP примерок на вртложен миксер 5-10 секунди, а потоа поделете пет аликвоти од 0,5 ml во епрувети.
За да се процени ефектот на изложеноста на тромбоцити врз покачените концентрации на гликоза, еднакви количини (0,5 ml) од 0%, 5%, 12,5%, 25% и 50% гликоза во вода беа измешани со примероци од тромбоцити за да се добијат концентрации од 0%, 2,5%, 6,25%, 12,5% и 25% од смесата за гликоза и епруветите беа измешани на тресење во епрувета 15 минути. TAC на секоја смеса беше анализирана во три примероци по 15 минути. Бројот на тромбоцити (PLT), бројот на црвени крвни зрнца, MCV и MPV беа пресметани во просек за секоја епрувета, а средниот број на тромбоцити, бројот на црвени крвни зрнца, MCV и MPV беа пресметани за сите PRP примероци.
Откако беше завршена првата фаза од собирањето податоци, забележавме значително зголемување на волуменот на тромбоцитите во PRP тромбоцитите по додавањето на D50W. PRP тромбоцитите не мора нужно да ги претставуваат сите тромбоцити во крвта, а PRP медиумот се разликува од WB медиумот. Затоа, решивме да спроведеме втора фаза на испитување на ефектот од додавањето на D50W во полна крв.
За втората рунда, избравме големина на примерок од 30 врз основа на резултатите од првата серија, како што е опишано во делот за анализа. Во оваа серија, 20 волонтери донираа примероци од крв (Табела 1). Цела крв (1,8 ml) беше земена во шприц од 3 ml и антикоагулирана со 0,2 ml 40% NaCl. Шприцот со цела крв беше мешан пет секунди со вртложен миксер и CBC беше анализиран во три примероци. По анализата, антикоагулираната крв беше додадена во 2 ml 50% гликоза во шприц од 5 ml (конечната концентрација на гликоза беше приближно 25% (D25)) и ставена во епрувета за тресење 30 минути. По 30 минути, D25/CBC во WB шприцови беше анализиран во три примероци. Бројот на тромбоцити, бројот на црвени крвни зрнца, MCV и MPV по шприц беа пресметани, а средниот PLT, бројот на црвени крвни зрнца, MCV и MPV беа пресметани за секој примерок пред и по додавањето на гликоза.
Бидејќи тромбоцитите во целата крв често се изложени на хипертонична гликоза за време на пролиферативната терапија со гликоза поради минимално инвазивна инјекција, и не е вообичаено да се комбинира PRP со хипертонична гликоза непосредно пред инјектирањето, решивме да ја проучиме хипертонична гликоза во комбинација со WB во Дел 1. Чекор три и четири. Во секоја фаза, 20 волонтери донираа 7-8 ml ACD-A (киселина што содржи тринатриум цитрат (22,0 g/l), лимонска киселина (8,0 g/l) и гликоза (24,5 g/l), раствор од декстроза цитрат) за антикоагуланси во крвта (Табела 1). Само мешавини од гликоза поголеми од 12,5% беа користени за да се одреди процентот на прагот поврзан со зголемување на MPV. Во третата фаза, 1 ml крв се става во епрувета. Потоа измешајте ја крвта на вртложен миксер 10 секунди со додавање на 1 мл 30% гликоза, 40% гликоза или 50% гликоза во епруветата за да се добие конечна концентрација на гликоза од 15%, 20% и 25%, соодветно. Примероците од крв со гликоза беа анализирани за крвна слика веднаш по мешањето и се повторуваа на секои две минути во тек на 30 минути.
За време на почетното мешање, додавањето на хипертонична гликоза 1:1 и WB или PRP ги изложува тромбоцитите на концентрации над 25% во текот на неколку секунди. Во четвртиот чекор, за да се процени ефектот на хипертонична гликоза со минимални почетни врвни концентрации и да се тестира горната граница на ефектот на гликозата, додадовме само мала количина крв во D25W или D50W. Ставете 1 ml D25W или D50W во епрувета и додадете 0,2 ml WB додека го мешате примерокот во вртежен момент 10 секунди. Во овие случаи, крвта беше изложена на гликоза со концентрација приближно 20% над конечната концентрација, наместо 50% над конечната концентрација како во Фаза 3, што резултираше со конечни концентрации на гликоза од 20,8% и 41,6%. Мешаните примероци беа анализирани во истиот временски интервал како во чекор 3.
Во првиот чекор од секоја серија на разредување на гликоза, беа земени 30 примероци бидејќи ова беше соодветната големина на примерокот за пилот-студијата [9]. На крајот од секоја фаза (вклучувајќи ја и првата фаза), оценете ја соодветноста на големината на примерокот користејќи ја формулата што се користи за да се одреди големината на примерокот потребна за да се процени средната вредност на континуираната променлива на исходот во една популација. Формула n = Z2 x SD2 /E2. Во оваа равенка, Z е Z-резултатот, SD е стандардната девијација, а E е посакуваната грешка [10]. Нашата алфа е 0,05, што одговара на Z вредност од 1,96, и очекуваме грешка од 5 (во проценти). Оттука, решаваме за n = (1,962 x SD2)/52. Резултатите покажаа дека потребната големина на примерокот за секоја фаза беше помала од вистинскиот собран број.
Во периодите 1, 3 и 4, користејќи повеќе од една концентрација на гликоза, ефектот од различните концентрации на гликоза беше анализиран со споредување на фракционата промена помеѓу времето 0 и секое следно време (фаза 1 на 15 минути, период 3 на 15 минути) и четири на 15 секунди, а потоа на секои две минути.) Стапките на промена за секој временски период беа споредени со користење на U-тестот на Ман-Витни, бидејќи податоците не следеа нормална распределба како што е утврдено со тестот за нормалност на Шапиро-Вилк. Бидејќи анализа 1-на-1 на неколку групи (пет) беше извршена во првиот, третиот и четвртиот чекор (вкупно пет), беше извршена корекција на Бонферони за да се прилагоди посакуваната алфа вредност на ≤0,01, но не и ≤0,05.
Намалување на бројот на тромбоцити со сите концентрации на хипертонична декстроза и зголемување на MPV кај PRP тромбоцитите при концентрација на декстроза >12,5%: Бројот на PRP тромбоцити се зголеми од еден до пет пати од концентрацијата во споредба со почетната концентрација на цела крв, варирајќи во зависност од методот (не е прикажано). Намалување на бројот на тромбоцити со сите концентрации на хипертонична декстроза и зголемување на MPV кај PRP тромбоцитите при концентрација на декстроза >12,5%: Бројот на PRP тромбоцити се зголеми од еден до пет пати во споредба со почетната концентрација на цела крв, варирајќи во зависност од методот (не е прикажано). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV во тромбоцитах PRP при концентрации декстрози > 12,5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось во 1-5 разно по сравнени метода (не показано). Намален број на тромбоцити при сите хипертонични концентрации на декстроза и зголемен MPV кај PRP тромбоцитите при концентрација на декстроза >12,5%: Бројот на тромбоцити во PRP се зголемил за 1-5 пати во споредба со почетната вредност на полната крв, во зависност од методот (не е прикажано). ).在> 12,5% 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRPV杰度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRPV增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法輌倍，因方法而 При концентрација на гликоза >12,5%, високата концентрација на гликоза ја намалува крвната слика, MPV на PRP во крвта се зголемува: во споредба со 与基线全血, крвната слика на PRP се зголемува од 1 до 5 пати поголема од концентрацијата (не е опишано). При концентрациях глюкозы >12,5% во сите концентрации гипертонической глюкозы снижали количество тромбоцитов, а MPV повышали в тромбоцити PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось од 1- до 5-контрола концентрациями цельной крови, во зависност од метода (не описано ). При концентрации на гликоза >12,5%, сите хипертензивни концентрации на гликоза го намалија бројот на тромбоцити и го зголемија MPV кај PRP тромбоцитите: Бројот на PRP тромбоцити се зголеми од 1 до 5 пати во споредба со основните концентрации во цела крв, во зависност од методот (како што е опишано).Слика 1 покажува дека бројот на тромбоцити се намалил за речиси 75% по разредувањето во вода и за 20-30% по 15 минути разредување со различни концентрации на гликоза во споредба со основната PRP и разредување 1:1 прилагодено за волумен (1- k1 со корекција на волуменот). k -1 размножување).1 размножување).
Бројот на клетки во секое разредување се изразува како дел од оригиналниот број пред разредувањето.
MPV минимално се намали за време на производството на PRP, без понатамошна промена на концентрациите на разредување до 12,5% во вода или гликоза (вклучувајќи 25% мешавини на PRP гликоза) и се зголеми за повеќе од 20% по разредувањето во 50% раствор на гликоза (Сл. 2). Спротивно на тоа, еритроцитите не покажаа значајна промена на волуменот при кое било разредување освен H2O.
Просечниот волумен на клетките во секое разредување се изразува како процент од оригиналниот волумен пред разредувањето.
Слично, но помалку изразено намалување на бројот на тромбоцити и зголемување на CVR беа забележани кај крвна група изложена на 50% гликоза (за формулирање со 25% гликоза). Табела 2 ги споредува бројот на клетки и волуменот на клетките во полна крв разредена во 50% декстроза со податоците од PRP од фаза 1 разредена во 50% декстроза. Промените во бројот на еритроцити и MCV на еритроцитите не беа очигледни и не беа во фокусот на нашето внимание.
SD = стандардна девијација, MD = средна разлика помеѓу групите, SE = стандардна девијација на средната разлика, RBC = еритроцити, PLT = тромбоцити, PRP = плазма богата со тромбоцити, WB = цела крв
По додавањето на D50W во WB, процентот на губење на тромбоцити прилагодено со разредување беше 7,7% (310 ± 73 наспроти 286 ± 96) во споредба со 17,8% за разредување со PRP во D50W (664 ± 348 наспроти 544 ± 277). MPV WB се зголеми за 16,8% (од 10,1 ± 0,5 на 11,8 ± 0,6), додека MPV PRP се зголеми за 26% (9,2 ± 0,8 наспроти 11,6 ± 0,7). Иако средните разлики и во намалувањето на бројот на тромбоцити и во зголемувањето на MPV беа значително поголеми со PRP, промените во намалувањето на бројот на тромбоцити во рамките на WB беа речиси значајни (310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) и зголемувањето на MPV беше значајно (10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Иако средните разлики и во намалувањето на бројот на тромбоцити и во зголемувањето на MPV беа значително поголеми со PRP, промените во намалувањето на бројот на тромбоцити во рамките на WB беа речиси значајни (310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06) и зголемувањето на MPV беше значајно (10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Иако средните разлики и во намалувањето на бројот на тромбоцити и во зголемувањето на CVR беа значително поголеми со PRP, промените во намалувањето на бројот на тромбоцити во рамките на WB беа речиси значајни (310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (од 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) стр < 0,001). зголемувањето на MPV беше значајно (од 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7%)；p = 0,06）和MPV的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < .001).尽管 ПРП减少 的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = .06）和MPV 的10. ± 0,5 и 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Промената во намалувањето на бројот на тромбоцити во рамките на WB беше речиси значајна (од 310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), иако PRP имаше значително поголеми средни разлики во намалувањето на бројот на тромбоцити и зголемувањето на MPV, а зголемувањето на MPV беше значајно.(од 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (од 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
За да се види значајна промена во MPV, потребна беше конечна концентрација од 20% гликоза, но промената во MPV беше поизразена при конечна концентрација од 25%. Губењето на тромбоцити се стабилизираше по почетното намалување. Забележавме почетно нагло намалување на CVR, меѓутоа, CVR брзо се врати при конечна концентрација на гликоза од 25%, што беше значително повисоко од нивоата на CVR забележани при конечни концентрации на гликоза од 20% и 15% (Сл. 3 и лево од Табела 3; засенчени полиња). означуваат p-вредности ≤ алфа со Бонферони корекција од 0,01). Исто така, имаше почетно нагло намалување на бројот на PLT, забележан во почетната фаза од 0-15 s, а потоа остана стабилен (од 15 s до 30 min; лево од табела 4).
Додавањето на различни концентрации на гликоза во целата крв резултираше со почетно брзо намалување на MPV, проследено со закрепнување зависно од концентрацијата за повеќе од 20%. Легендата ја покажува концентрацијата на гликоза по разредувањето. D15, D20 и D25 беа спроведени во разредување 1:1. D21 и D41 беа спроведени во разредување 1:5.
Табела 4 ја прикажува промената на бројот на тромбоцити кога се разредува во хипертонична гликоза. Забележавме дозно-зависна врска помеѓу моменталниот пад на бројот на PLT при разредување 1:1 и при разредување 1:5. Споредувајќи ги разредувањата 1:1 како единечна група со разредувањата 1:5, групата 1:1 имаше моментално намалување на бројот на тромбоцити помалку од групата 1:5 66 ± 48.000 (23%) наспроти 99 ± 69.000 (37%), p = 0,014) во групата 1:5. По почетниот пад на првата точка на мерење, бројот на тромбоцити како процент на гликоза се стабилизираше (Сл. 4).
Кога цела крв се додава на гликоза во сооднос 1:1, бројот на тромбоцити се намалува за околу 25%. Меѓутоа, кога цела крв се додава во сооднос 1:5, намалувањето беше многу поголемо - околу 50%.
41% гликоза го зголеми MPV побрзо и подраматично од 25% или 21%. Резултатите од MPV се прикажани на Слика 3. Кај сите други разредувања, не е забележано веднаш почетно намалување на MPV по додавањето на 50% гликоза. При употреба на 25% гликоза (концентрација на гликоза 20,8% при конечното разредување), промената во MPV беше споредлива со промената кај 20% гликоза при разредување 1:1 (Сл. 3). Иако промените во MPV првично беа поголеми кај мешаната концентрација од 41% отколку кај 25%, разликата во MPV помеѓу 41% и 25% по 16 минути повеќе не беше значајна (Табела 3, десно). Исто така е интересно што 25% гликоза го зголеми MPV поефикасно од 20,8%.
Оваа ин витро студија делумно ја потврди нашата хипотеза. Покажа потенцијална делумна лиза на тромбоцитите со мешавина од декстроза, брзо прилагодување на тромбоцитите на екстремна хипертоничност и значително зголемување на MPV како одговор на > 25% концентрации на хипертонична декстроза. Покажа потенцијална делумна лиза на тромбоцитите со мешавина од декстроза, брзо прилагодување на тромбоцитите на екстремна хипертоничност и значително зголемување на MPV како одговор на > 25% концентрации на хипертонична декстроза. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодацию тромбоцитов до екстремального гипертонуса и значительное повышение MPV во одговор на гипертоническую концентрация 5%. Покажа потенцијална делумна лиза на тромбоцитите со декстроза, брза акомодација на тромбоцитите до екстремна хипертоничност и значително зголемување на MPV како одговор на хипертонични нивоа на декстроза >25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25% 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适庯 极的响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями со глюкозой, быструю адаптация тромбоцитов к экстремальному гипертонусу и значительное увеличение MPV во одговор на концентрация над 25%. Покажува потенцијална делумна лиза на тромбоцитите од мешавини на гликоза, брза адаптација на тромбоцитите на екстремна хипертоничност и значително зголемување на MPV како одговор на хипертонична гликоза >25%.Првичното зголемување беше максимално при изложеност на гликоза од 41,6%, но зголемувањето на MPV се приближи до 25% изложеност на гликоза приближно 20 минути по изложеноста.
Концентрацијата на тромбоцитите е под влијание на гликозата. Забележавме дека количината на PLT се намалува при сите разредувања на гликоза. Остриот пад на бројот на тромбоцити во разредувањата со H2O (0%) од PRP серијата може да биде поврзан со осмотска лиза. Алтернативно, ова може да биде артефакт предизвикан од згрутчување на тромбоцитите, но ова е во спротивност со недостатокот на промена на MPV при ова разредување. Ова откритие значи дека некои тромбоцити се многу чувствителни на хипоосмоларност.
Во сите разредувања на гликоза 1:1, количината на PLT се намали за 20-30%, дури и за D5W (хипотонично на 252 mOsm), што може да укажува на специфичен неосмотски ефект на гликозата, бидејќи и PLT и MPV останаа непроменети при трикратно зголемување на концентрацијата на гликоза од D5W до D25W. Всушност, концентрациите на PLT имаа тенденција малку да се зголемуваат со зголемување на осмоларноста.
Намалувањето на PLT помеѓу разредувањата 1:1 и 1:5 значи дека ефектот на растворање зависи од почетната и конечната концентрација на гликоза. Ако зависеше само од почетната концентрација, тогаш би се очекувало да се види разлика во намалувањето на PLT помеѓу концентрациите 1:1. Но, ние не очекуваме. Ако ефектот на лиза зависи само од конечната концентрација на гликоза, тогаш не очекуваме голема разлика помеѓу разредување од 20% 1:1 и разредување од 20,8% 1:5. И сепак го направивме тоа.
Доколку дојде до губење на тромбоцити поради лиза на тромбоцитите, се формира делумен лизат, по што цитокините и факторите на раст се ослободуваат во екстрацелуларната средина. Неколку студии покажаа дека лизатот на тромбоцитите е речиси исто толку ефикасен како PRP како и раствор за пролиферација [11]. Самиот PRP се покажа како ефикасно решение за третман на пролиферација [12-14].
Неактивните тромбоцити циркулираат во форма на диск зајакнат со неколку внатрешни структури. За време на активацијата, тие добиваат посферична или амебна форма, што резултира со зголемување на волуменот. Зголемувањето на волуменот бара зголемување на површината, што е резултат на екструзијата на отворениот тубуларен систем (OCS) и додавањето на егзоцитни гранули на мембраната. Останува да се утврди дали зголемувањето на MPV предизвикано од хипертонична гликоза вклучува еден или двата од овие механизми, но ако е вториот, тогаш зголемувањето на MPV би укажувало на дегранулација.
Оваа студија покажа дека изложеноста на високи концентрации на гликоза на PRP или тромбоцити од цела крв резултирала со зголемување на MPV во рок од 15 минути со концентрација на гликоза од 25% и 41,6%, соодветно.
Зголемувањето на тромбоцитниот MPV може да се должи на дилатација на околните заплеткувања на микротубулите како одговор на приливот на калциум. Liu et al. Покажано е дека гликозата посредува во приливот на калциум преку каналот TRPC6 на тромбоцитите [6]. Нашата хипотеза е дека гликозата предизвикува релаксација на заплеткувањата на микротубулите, што доведува до зголемување на MPV и сензибилизација и/или активирање на тромбоцитите. Сепак, судејќи според нашите резултати, ова е само дел од приказната. Во нашите тестови, ниедна концентрација под D25W не резултираше со зголемување на MPV. Со оглед на тоа што не тестиравме изложеност на концентрации на гликоза помеѓу 12,5% и 25%, нашите резултати од фаза 1 сугерираат дека може да постои праг во овој опсег на концентрации на гликоза што доведува до зголемување на MPV. Понатамошното тестирање во фазите 3 и 4 покажа дека 20-25% гликоза се чини дека е прагот за ова, но останува нејасно зошто.
Исто така, забележавме намалување на MPV за ~9% по центрифугирањето. Не е јасно дали ова намалување на MPV се должи на поголемите и погусти тромбоцити заробени во слојот на црвените крвни зрнца на центрифугата. Ова набљудување може да биде важно за клиницистите бидејќи може да имплицира дека PRP тромбоцитите се помала и помалку густа подгрупа на тромбоцитите од белите крвни зрнца.
Во претходна студија, покажавме дека подготовката на PRP со рачни методи е ефтина [8]. Ако гликозата ги сензибилизира тромбоцитите во ткивото или PRP, правејќи ги поподложни на активирање, или ако PRP се произведува со својства на парцијален лизат, ова може да ја подобри регенерацијата и да ја намали потребата од терапија. Затоа, комбинацијата од PRP и високо концентрирана гликоза може да биде поекономична од PRP или гликоза сама по себе.
Нашата студија има неколку недостатоци. Прво, користиме PRP добиен со неколку различни методи. Ова може да доведе до спротивставени резултати. Второ, не бевме во можност да извршиме биохемиска анализа на ниту еден од нашите примероци за попрецизно да утврдиме дали се случила активација на тромбоцити. Би сакале да измериме P-селектин, фактор 4 на тромбоцити, моноцитни агрегати на тромбоцити или други маркери на активација на тромбоцити за подобро да го разбереме степенот или присуството на дегранулација на алфа гранули, но ова е надвор од опсегот на оваа студија. Трето, не бевме во можност да потврдиме со електронска микроскопија или други методи дека зголемувањето на MPV кај тромбоцитите изложени на гликоза се должи на ефектот врз заплеткувањата на микротубулите.
Мешавините од WB или PRP со 25% гликоза го зголемија MPV, сигнализирајќи го почетокот на активација на тромбоцитите, иако оваа студија не покажа прогресија на агрегација или дегранулација. Хипертоничната мешавина од гликоза резултираше со губење на тромбоцити, што веројатно претставува литичен ефект. Делумната активација или лиза на тромбоцитите може да предизвика регенерација на ткивото по инјектирање на тромбоцити. Не е јасно до какви клинички последици можат да доведат овие промени. Понатамошни студии покажаа поточни мерења на активација или лиза и ги евалуираа различните клинички ефекти на хипертонични мешавини од гликоза со WB или PRP.
Гликозно-пролиферативната терапија е едноставна и ефтина регенеративна терапија која брзо се шири и поддржува клинички истражувања. Оваа студија сугерира физиолошки механизам кој, доколку се потврди, би можел да ни помогне да разбереме дел од регенеративниот механизам на пролиферативната терапија.
Биомедицинска и здравствена информатика на Универзитетот во Мисури, Медицински факултет во Канзас Сити, Канзас Сити, САД
Човечки испитаници: Сите учесници во оваа студија дадоа или не дадоа согласност. Меѓународното здружение за клеточна медицина издаде одобрение ICMS-2017-003. Следниот протокол е одобрен за понатамошна употреба од страна на Институционалниот одбор за преглед на Меѓународното здружение за клеточна медицина: Наслов: Пресметка на приносот на лекови во плазма богата со тромбоцити врз основа на основниот број на тромбоцити во крвта. Животински испитаници: Сите автори потврдија дека во оваа студија не биле вклучени животни или ткива. Конфликт на интереси: Во согласност со Единствениот формулар за објавување на ICMJE, сите автори го изјавуваат следново: Информации за плаќање/услуга: Сите автори изјавуваат дека не добиле финансиска поддршка од која било организација за поднесената работа. Финансиски односи: Сите автори изјавуваат дека моментално или во последните три години немаат финансиски односи со која било организација што може да биде заинтересирана за поднесената работа. Други односи: Сите автори изјавуваат дека нема други односи или активности што можат да влијаат на поднесената работа.
Харисон ТЕ, Боулер Ј, Ривс К и др. (17 мај 2022) Ефектот на гликозата врз бројот и волуменот на тромбоцитите: импликации за регенеративната медицина. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Авторски права 2022 Харисон и др. Ова е статија со отворен пристап дистрибуирана според условите на Creative Commons Attribution License CC-BY 4.0. Дозволена е неограничена употреба, дистрибуција и репродукција во кој било медиум, под услов да се наведат оригиналниот автор и извор.