«Ποτέ μην αμφιβάλλετε ότι μια μικρή ομάδα σκεπτόμενων, αφοσιωμένων πολιτών μπορεί να αλλάξει τον κόσμο. Στην πραγματικότητα, είναι η μόνη που υπάρχει εκεί.»
Η αποστολή του Cureus είναι να αλλάξει το μακροχρόνιο μοντέλο των ιατρικών δημοσιεύσεων, στο οποίο η υποβολή έρευνας μπορεί να είναι δαπανηρή, περίπλοκη και χρονοβόρα.
Πλάσμα/prp πλούσιο σε αιμοπετάλια, αναγέννηση ιστών, ενεργοποίηση αιμοπεταλίων, θεραπεία πολλαπλασιασμού γλυκόζης, αιμοπετάλια, θεραπεία πολλαπλασιασμού
Αναφέρετε αυτό το άρθρο ως: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17 Μαΐου 2022) Η επίδραση της γλυκόζης στον αριθμό και τον όγκο των αιμοπεταλίων: επιπτώσεις στην αναγεννητική ιατρική. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Το πλάσμα πλούσιο σε αιμοπετάλια (PRP) και τα υπέρτονα διαλύματα γλυκόζης χρησιμοποιούνται συνήθως για ένεση στην αναγεννητική ιατρική, μερικές φορές μαζί. Η επίδραση της υπέρτονης γλυκόζης στη λύση και ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων δεν έχει αναφερθεί προηγουμένως. Εξετάσαμε την επίδραση των αυξημένων συγκεντρώσεων γλυκόζης στον αριθμό των αιμοπεταλίων και των ερυθροκυττάρων, καθώς και στον όγκο των κυττάρων στο PRP και στο ολικό αίμα (WB). Μια ταχεία μερική μείωση στον αριθμό των αιμοπεταλίων παρατηρήθηκε με όλα τα μείγματα γλυκόζης αναμεμειγμένα με PRP ή ολικό αίμα, γεγονός που συνάδει με μερική λύση. Μετά το πρώτο λεπτό, ο αριθμός των αιμοπεταλίων παρέμεινε σταθερός, υποδηλώνοντας ταχεία προσαρμογή των υπολειμματικών αιμοπεταλίων σε ακραία (>2000 mOsm) υπερτονικότητα. Μετά το πρώτο λεπτό, ο αριθμός των αιμοπεταλίων παρέμεινε σταθερός, υποδηλώνοντας ταχεία προσαρμογή των υπολειμματικών αιμοπεταλίων σε ακραία (>2000 mOsm) υπερτονικότητα. Τελευταία πρώτη λεπτομέρεια θρομβοκύτωσης παραμένει σταθερή, что указывает на быструю аккомодацию остаточных тромбоцитов до экстремального (>2000 mOsm) υπερτονούσα. Μετά το πρώτο λεπτό, ο αριθμός των αιμοπεταλίων παρέμεινε σταθερός, υποδεικνύοντας ταχεία προσαρμογή των υπολειμματικών αιμοπεταλίων σε ακραία (>2000 mOsm) υπερτονικότητα.第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 200 mOsm）高渗状态.2000 mOsm）高渗状态. Τελευταία πρώτη λεπτομέρεια θρομβοκύτωσης παραμένει σταθερή, что указывает на быструю адаптацию остаточных тромбоцитов к экстремальному (>2000 mOsm) гиперосмолярному состоянию. Μετά το πρώτο λεπτό, ο αριθμός των αιμοπεταλίων παρέμεινε σταθερός, υποδεικνύοντας μια ταχεία προσαρμογή των υπολειμματικών αιμοπεταλίων στην ακραία (>2000 mOsm) υπερωσμωτική κατάσταση.Συγκεντρώσεις γλυκόζης 25% και άνω οδήγησαν σε σημαντική αύξηση του μέσου όγκου αιμοπεταλίων (MPV), υποδεικνύοντας ένα πρώιμο στάδιο ενεργοποίησης των αιμοπεταλίων. Απαιτούνται περαιτέρω μελέτες για να προσδιοριστεί εάν συμβαίνει λύση ή ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων και εάν η ένεση υπέρτονης γλυκόζης μόνη της ή σε συνδυασμό με PRP μπορεί να προσφέρει πρόσθετο κλινικό όφελος.
Τη δεκαετία του 1950, ο Αμερικανός χειρουργός Τζορτζ Χάκετ ανακάλυψε ότι μπορούσε να ανακουφίσει μόνιμα από τον πόνο στις αρθρώσεις και την πλάτη σε πολλούς ασθενείς, εγχύοντας ένα πολλαπλασιαστικό διάλυμα σε τένοντες και συνδέσμους. Τα πειράματά του σε κουνέλια έδειξαν ότι η θεραπεία, την οποία ονόμασε πολλαπλασιαστική θεραπεία, προκαλούσε διεύρυνση και ενδυνάμωση των τενόντων. Ιστολογικές μελέτες έχουν επιβεβαιώσει ότι κατά τη διάρκεια αυτής της διαδικασίας παράγεται νέο κολλαγόνο [1].
Κατά τη διάρκεια των πρώτων δεκαετιών, δοκιμάστηκαν πολλές διαφορετικές λύσεις διανομής. Μέχρι τη δεκαετία του 1990, οι περισσότεροι επαγγελματίες υγείας θεωρούσαν τις υψηλές συγκεντρώσεις γλυκόζης ως την ασφαλέστερη και πιο αποτελεσματική μέθοδο. Ωστόσο, ο μηχανισμός δράσης παραμένει ασαφής.
Λίγες κλινικές μελέτες διεξήχθησαν τον 20ό αιώνα μετά το έργο του Hackett. Ωστόσο, τη δεκαετία του 2000 υπήρξε ανανεωμένο ενδιαφέρον και ολοκληρώθηκαν αρκετές επιτυχημένες κλινικές δοκιμές πολλαπλασιαστικής θεραπείας για τη θεραπεία του πόνου στη μέση [2], της οστεοαρθρίτιδας του γόνατος [3] και της πλάγιας επικονδυλίτιδας [4].
Η αναγέννηση των ιστών απαιτεί τη συμμετοχή των βλαστοκυττάρων. Επομένως, οι υψηλές συγκεντρώσεις γλυκόζης πρέπει με κάποιο τρόπο να προκαλούν μετανάστευση, αντιγραφή και διαφοροποίηση των βλαστοκυττάρων. Υποθέτουμε ότι τα αιμοπετάλια μπορεί να λειτουργούν ως αγγελιοφόροι και ότι οι υψηλές συγκεντρώσεις γλυκόζης μπορεί να προκαλούν την απελευθέρωση κυτοκινών και αυξητικών παραγόντων από τα αιμοπετάλια, προωθώντας έτσι τις αναγεννητικές διεργασίες, ιδιαίτερα τη μετανάστευση των βλαστοκυττάρων σε περιοχές με υψηλές συγκεντρώσεις γλυκόζης.
Η ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων προηγείται πάντα της αύξησης του ενδοκυτταρικού ασβεστίου [5]. Οι Liu et al. το 2008 έδειξαν ότι τα υψηλά επίπεδα γλυκόζης αυξάνουν τη δραστηριότητα των παροδικών καναλιών υποδοχέα κανονικού τύπου 6 (TRPC6) στην πλασματική μεμβράνη, γεγονός που οδηγεί σε εισροή ιόντων ασβεστίου στα αιμοπετάλια [6]. Μια άλλη μελέτη έδειξε ότι η έκθεση της οριακής ζώνης των μικροσωληνίσκων σε ιόντα ασβεστίου προκαλεί χαλάρωση, διαστολή και παραμόρφωση της οριακής ζώνης, η οποία με τη σειρά της προκαλεί αλλαγή στο σχήμα από δίσκο σε σφαιρικό, με αποτέλεσμα τον μέσο όγκο αιμοπεταλίων (MPV) [7].
Η υπόθεσή μας σε αυτή τη μελέτη είναι ότι η έκθεση των αιμοπεταλίων σε υψηλές συγκεντρώσεις γλυκόζης επηρεάζει την οριακή ζώνη των μικροσωληνίσκων και το ενδοκυτταρικό περιβάλλον, οδηγώντας σε αύξηση του MPV.
Όλοι οι συμμετέχοντες υπέγραψαν μια ενημερωμένη φόρμα συγκατάθεσης αφού εξηγήθηκαν οι λεπτομέρειες της μελέτης και πριν από την παραλαβή των δειγμάτων. Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιήθηκαν μόνο δείγματα PRP με αιματοκρίτη μεγαλύτερο από 2%, ώστε να συμπεριληφθεί ο αριθμός των ερυθροκυττάρων και ο μέσος όγκος ερυθρών αιμοσφαιρίων (MCV) για σύγκριση.
Η μελέτη διεξήχθη σε τέσσερις φάσεις, η πρώτη φάση ήταν η PRP και οι υπόλοιπες φάσεις ήταν το ολικό αίμα (Πίνακας 1). Όπως περιγράφηκε προηγουμένως [8], όλες οι σχετικές φυγόκεντρες δυνάμεις (RCF, g-force) υπολογίστηκαν από το μέσο σημείο (Rmid, σε cm) της στήλης αίματος στη φυγόκεντρη σύριγγα. Επιλέξαμε να χρησιμοποιήσουμε το MPV ως δείκτη ευαισθητοποίησης αιμοπεταλίων και τον αριθμό αιμοπεταλίων ως δείκτη πιθανής λύσης αιμοπεταλίων, οι οποίοι και οι δύο μπορούν εύκολα να μετρηθούν σε τυπικούς αιματολογικούς αναλυτές.
Στην πρώτη φάση, 47 εθελοντές δώρισαν δείγματα αίματος—ένα σωληνάριο αιθυλενοδιαμινοτετραοξικού οξέος (EDTA) και ένα δείγμα ολικού αίματος PRP (αντιπηκτικό με κιτρικό νάτριο (NaCl, 3%)) (Πίνακας 1). Τοποθετήστε αμέσως το ροκανίδι στο σωληνάριο. Πραγματοποιήθηκε πλήρης αιματολογική εξέταση (CBC) σε δείγματα EDTA εις τριπλούν και τα δείγματα NaCl αναλύθηκαν εις τριπλούν για ανάλυση CBC και στη συνέχεια παρασκευάστηκε PRP με διάφορες μεθόδους που περιγράφονται παραπάνω [8]. Όλα τα δείγματα PRP παρασκευάστηκαν με φυγοκέντρηση στα 900–1000 g. Αναμίξτε κάθε δείγμα PRP σε έναν αναμικτήρα στροβιλισμού για 5–10 δευτερόλεπτα και στη συνέχεια διαιρέστε πέντε κλάσματα των 0,5 ml σε σωληνάρια.
Για την αξιολόγηση της επίδρασης της έκθεσης στα αιμοπετάλια στις αυξημένες συγκεντρώσεις γλυκόζης, ίσες ποσότητες (0,5 ml) γλυκόζης 0%, 5%, 12,5%, 25% και 50% σε νερό αναμίχθηκαν με δείγματα αιμοπεταλίων για να ληφθούν συγκεντρώσεις 0%, 2,5%, 6,25%, 12,5% και 25% του μείγματος γλυκόζης και αναμίχθηκαν οι σωλήνες σε αναδευτήρα δοκιμαστικών σωλήνων για 15 λεπτά. Ο TAC κάθε μείγματος αναλύθηκε εις τριπλούν μετά από 15 λεπτά. Ο αριθμός αιμοπεταλίων (PLT), ο αριθμός ερυθρών αιμοσφαιρίων, ο MCV και ο MPV υπολογίστηκαν κατά μέσο όρο για κάθε σωλήνα και υπολογίστηκαν οι μέσοι όροι αριθμού αιμοπεταλίων, αριθμού ερυθρών αιμοσφαιρίων, MCV και MPV για όλα τα δείγματα PRP.
Μετά την ολοκλήρωση της πρώτης φάσης συλλογής δεδομένων, παρατηρήσαμε σημαντική αύξηση στον όγκο των αιμοπεταλίων στα αιμοπετάλια PRP μετά την προσθήκη D50W. Τα αιμοπετάλια PRP δεν αντιπροσωπεύουν απαραίτητα όλα τα αιμοπετάλια στο αίμα και το μέσο PRP διαφέρει από το μέσο WB. Ως εκ τούτου, αποφασίσαμε να διεξάγουμε μια δοκιμή δεύτερης φάσης για την επίδραση της προσθήκης D50W στο ολικό αίμα.
Για τον δεύτερο γύρο, επιλέξαμε ένα μέγεθος δείγματος 30 ατόμων με βάση τα αποτελέσματα της πρώτης σειράς, όπως περιγράφεται στην ενότητα Ανάλυση. Σε αυτή τη σειρά, 20 εθελοντές δώρισαν δείγματα αίματος (Πίνακας 1). Ολικό αίμα (1,8 ml) ελήφθη σε σύριγγα 3 ml και έλαβε αντιπηκτική αγωγή με 0,2 ml 40% NaCl. Η σύριγγα πλήρους αίματος αναμίχθηκε για πέντε δευτερόλεπτα με έναν αναδευτήρα vortex και η CBC αναλύθηκε εις τριπλούν. Μετά την ανάλυση, το αντιπηκτικό αίμα προστέθηκε σε 2 ml γλυκόζης 50% σε σύριγγα 5 ml (η τελική συγκέντρωση γλυκόζης ήταν περίπου 25% (D25)) και τοποθετήθηκε σε σωλήνα ανακίνησης για 30 λεπτά. Μετά από 30 λεπτά, η D25/CBC σε σύριγγες WB αναλύθηκε εις τριπλούν. Υπολογίστηκε ο μέσος όρος του αριθμού των αιμοπεταλίων, του αριθμού των ερυθρών αιμοσφαιρίων, του MCV και του MPV ανά σύριγγα και υπολογίστηκε η μέση τιμή PLT, του αριθμού των ερυθρών αιμοσφαιρίων, του MCV και του MPV για κάθε δείγμα πριν και μετά την προσθήκη γλυκόζης.
Επειδή τα αιμοπετάλια στο ολικό αίμα εκτίθενται συνήθως σε υπέρτονη γλυκόζη κατά τη διάρκεια της πολλαπλασιαστικής θεραπείας γλυκόζης λόγω της ελάχιστα επεμβατικής ένεσης, και δεν είναι συνηθισμένο να συνδυάζεται η PRP με υπέρτονη γλυκόζη λίγο πριν από την ένεση, αποφασίσαμε να μελετήσουμε την υπέρτονη γλυκόζη σε συνδυασμό με WB στην Ενότητα 1. Βήμα τρία και τέσσερα. Σε κάθε στάδιο, 20 εθελοντές δώρισαν 7-8 ml ACD-A (οξύ που περιέχει κιτρικό τρινάτριο (22,0 g/l), κιτρικό οξύ (8,0 g/l) και γλυκόζη (24,5 g/l), διάλυμα κιτρικής δεξτρόζης) για αντιπηκτικά αίματος (Πίνακας 1). Μόνο μείγματα γλυκόζης μεγαλύτερα από 12,5% χρησιμοποιήθηκαν για τον προσδιορισμό του ποσοστού κατωφλίου που σχετίζεται με την αύξηση του MPV. Στο τρίτο στάδιο, 1 ml αίματος τοποθετείται σε δοκιμαστικό σωλήνα. Στη συνέχεια, αναμίξτε το αίμα σε έναν αναδευτήρα στροβιλισμού για 10 δευτερόλεπτα προσθέτοντας 1 ml γλυκόζης 30%, γλυκόζης 40% ή γλυκόζης 50% στον σωλήνα για να επιτευχθεί τελική συγκέντρωση γλυκόζης 15%, 20% και 25% αντίστοιχα. Τα δείγματα αίματος γλυκόζης αναλύθηκαν για CBC αμέσως μετά την ανάμειξη και επαναλήφθηκαν κάθε δύο λεπτά για 30 λεπτά.
Κατά την αρχική ανάμειξη, η προσθήκη υπέρτονης γλυκόζης 1:1 και WB ή PRP εκθέτει τα αιμοπετάλια σε συγκεντρώσεις άνω του 25% για αρκετά δευτερόλεπτα. Στο τέταρτο βήμα, για να αξιολογήσουμε την επίδραση της υπέρτονης γλυκόζης με ελάχιστες αρχικές μέγιστες συγκεντρώσεις και να ελέγξουμε το ανώτερο όριο της επίδρασης της γλυκόζης, προσθέσαμε μόνο μια μικρή ποσότητα αίματος στο D25W ή D50W. Τοποθετήστε 1 ml D25W ή D50W σε ένα σωληνάριο και προσθέστε 0,2 ml WB ενώ αναδεύετε το δείγμα σε στροβιλισμό για 10 δευτερόλεπτα. Σε αυτές τις περιπτώσεις, το αίμα εκτέθηκε σε γλυκόζη σε συγκέντρωση περίπου 20% πάνω από την τελική συγκέντρωση, αντί για 50% πάνω από την τελική συγκέντρωση όπως στη Φάση 3, με αποτέλεσμα τελικές συγκεντρώσεις γλυκόζης 20,8% και 41,6%. Τα μικτά δείγματα αναλύθηκαν στο ίδιο χρονικό διάστημα όπως στο βήμα 3.
Στο πρώτο βήμα κάθε σειράς αραίωσης γλυκόζης, ελήφθησαν 30 δείγματα, καθώς αυτό ήταν το κατάλληλο μέγεθος δείγματος για την πιλοτική μελέτη [9]. Στο τέλος κάθε φάσης (συμπεριλαμβανομένης της πρώτης φάσης), αξιολογήστε την επάρκεια του μεγέθους του δείγματος χρησιμοποιώντας τον τύπο που χρησιμοποιήθηκε για τον προσδιορισμό του μεγέθους του δείγματος που απαιτείται για την εκτίμηση του μέσου όρου της συνεχούς μεταβλητής αποτελέσματος σε έναν πληθυσμό. Τύπος n = Z2 x SD2 /E2. Σε αυτήν την εξίσωση, το Z είναι η βαθμολογία Z, η SD είναι η τυπική απόκλιση και το E είναι το επιθυμητό σφάλμα [10]. Το άλφα μας είναι 0,05, το οποίο αντιστοιχεί σε τιμή Z 1,96, και αναμένουμε σφάλμα 5 (σε ποσοστό). Ως εκ τούτου, επιλύουμε ως προς n = (1,962 x SD2)/52. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι το μέγεθος του δείγματος που απαιτείται για κάθε στάδιο ήταν μικρότερο από τον πραγματικό αριθμό που συλλέχθηκε.
Κατά τις περιόδους 1, 3 και 4, χρησιμοποιώντας περισσότερες από μία συγκεντρώσεις γλυκόζης, η επίδραση διαφορετικών συγκεντρώσεων γλυκόζης αναλύθηκε συγκρίνοντας την κλασματική μεταβολή μεταξύ του χρόνου 0 και κάθε επόμενου χρόνου (φάση 1 στα 15 λεπτά, περίοδος 3 στα 15 λεπτά) και τέσσερις στα 15 δευτερόλεπτα, στη συνέχεια κάθε δύο λεπτά.) Οι ρυθμοί μεταβολής για κάθε χρονική περίοδο συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας το U-test Mann-Whitney, επειδή τα δεδομένα δεν ακολούθησαν μια κανονική κατανομή όπως προσδιορίστηκε από το τεστ κανονικότητας Shapiro-Wilk. Δεδομένου ότι πραγματοποιήθηκε ανάλυση 1 προς 1 σε αρκετές ομάδες (πέντε) στο πρώτο, τρίτο και τέταρτο βήμα (πέντε συνολικά), πραγματοποιήθηκε διόρθωση Bonferroni για να ρυθμιστεί η επιθυμητή τιμή άλφα σε ≤0,01 αλλά όχι ≤0,05.
Μείωση του αριθμού των αιμοπεταλίων με όλες τις συγκεντρώσεις υπέρτονης δεξτρόζης και αύξηση του MPV στα αιμοπετάλια PRP σε συγκέντρωση δεξτρόζης >12,5%: Ο αριθμός των αιμοπεταλίων PRP αυξήθηκε από μία έως πέντε φορές τη συγκέντρωση σε σύγκριση με το αρχικό ολικό αίμα, ποικίλλοντας ανάλογα με τη μέθοδο (δεν απεικονίζεται). Μείωση του αριθμού των αιμοπεταλίων με όλες τις συγκεντρώσεις υπέρτονης δεξτρόζης και αύξηση του MPV στα αιμοπετάλια PRP σε συγκέντρωση δεξτρόζης >12,5%: Ο αριθμός των αιμοπεταλίων PRP αυξήθηκε από μία έως πέντε φορές τη συγκέντρωση σε σύγκριση με το αρχικό ολικό αίμα, ποικίλλοντας ανάλογα με τη μέθοδο (δεν απεικονίζεται). Уменьшение количества θρομβοcitov σε όλες τις συγκεντρώσεις υπερτονικές δοκιμές και περιορισμούς MPV σε θρομβοκύτταρα PRP σε συγκεντρώσεις θρόμβων > 12,5%: колιчество θρομβοκινήτο PRP αυξάνει σε 1-5 σε 1-5 φορές μέθοδος (не показано). Μειωμένος αριθμός αιμοπεταλίων σε όλες τις υπερτονικές συγκεντρώσεις δεξτρόζης και αυξημένος MPV στα αιμοπετάλια PRP σε συγκέντρωση δεξτρόζης >12,5%: Ο αριθμός αιμοπεταλίων PRP αυξήθηκε 1-5 φορές σε σύγκριση με το αρχικό ολικό αίμα, ανάλογα με τη μέθοδο (δεν φαίνεται). ).在> 12,5% 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRPV增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法輌倍，因方法而 Σε συγκέντρωση γλυκόζης >12,5%, η υψηλή συγκέντρωση γλυκόζης μειώνει την αιματολογική εξέταση, η MPV αίματος PRP αυξάνεται: σε σύγκριση με το 与基线全血, η αιματολογική εξέταση PRP αυξάνεται από 1 έως 5 φορές μεγαλύτερη από τη συγκέντρωση (δεν περιγράφεται). Με συγκεντρώσεις > 12,5% σε όλες τις συγκεντρώσεις концентрациями цельной крови, во εξαρτάται από τη μέθοδο (не описано ). Σε συγκεντρώσεις γλυκόζης >12,5%, όλες οι υπερτασικές συγκεντρώσεις γλυκόζης μείωσαν τον αριθμό των αιμοπεταλίων και αύξησαν τον MPV στα αιμοπετάλια PRP: Ο αριθμός των αιμοπεταλίων PRP αυξήθηκε 1 έως 5 φορές σε σύγκριση με τις αρχικές συγκεντρώσεις ολικού αίματος, ανάλογα με τη μέθοδο (όπως περιγράφεται).Το Σχήμα 1 δείχνει ότι ο αριθμός των αιμοπεταλίων μειώθηκε κατά σχεδόν 75% μετά την αραίωση σε νερό και κατά 20-30% μετά από 15 λεπτά αραίωσης με διαφορετικές συγκεντρώσεις γλυκόζης σε σύγκριση με την αρχική τιμή PRP και αραίωση 1:1 προσαρμοσμένη ως προς τον όγκο (1- k1 με διόρθωση όγκου). k -1 αναπαραγωγή).1 αναπαραγωγή).
Ο αριθμός των κυττάρων σε κάθε αραίωση εκφράζεται ως κλάσμα του αρχικού αριθμού πριν από την αραίωση.
Η MPV μειώθηκε ελάχιστα κατά την παραγωγή PRP, χωρίς περαιτέρω μεταβολή στις συγκεντρώσεις αραίωσης σε 12,5% ​​σε νερό ή γλυκόζη (συμπεριλαμβανομένων μειγμάτων γλυκόζης PRP 25%) και αυξήθηκε κατά περισσότερο από 20% μετά την αραίωση σε διάλυμα γλυκόζης 50% (Εικ. 2). Αντίθετα, τα ερυθροκύτταρα δεν εμφάνισαν σημαντική μεταβολή στον όγκο σε οποιαδήποτε αραίωση εκτός από το H2O.
Ο μέσος όγκος των κυττάρων σε κάθε αραίωση εκφράζεται ως ποσοστό του αρχικού όγκου πριν από την αραίωση.
Μια παρόμοια αλλά λιγότερο έντονη μείωση στον αριθμό των αιμοπεταλίων και αύξηση του CVR παρατηρήθηκαν σε BC που εκτέθηκαν σε 50% γλυκόζη (για τη σύνθεση με 25% γλυκόζη). Ο Πίνακας 2 συγκρίνει τον αριθμό και τον όγκο των κυττάρων σε πλήρες αίμα αραιωμένο σε 50% δεξτρόζη με δεδομένα PRP φάσης 1 αραιωμένα σε 50% δεξτρόζη. Οι αλλαγές στον αριθμό των ερυθρών αιμοσφαιρίων και τον MCV των ερυθρών αιμοσφαιρίων δεν ήταν προφανείς και δεν ήταν το επίκεντρο της προσοχής μας.
SD = τυπική απόκλιση, MD = μέση διαφορά μεταξύ ομάδων, SE = τυπική απόκλιση της μέσης διαφοράς, RBC = ερυθροκύτταρα, PLT = αιμοπετάλια, PRP = πλάσμα πλούσιο σε αιμοπετάλια, WB = ολικό αίμα
Μετά την προσθήκη D50W στο WB, το ποσοστό απώλειας αιμοπεταλίων προσαρμοσμένο στην αραίωση ήταν 7,7% (310±73 έναντι 286±96) σε σύγκριση με 17,8% για την αραίωση PRP στο D50W (664±348 έναντι 544±277). Το MPV WB αυξήθηκε κατά 16,8% (από 10,1 ± 0,5 σε 11,8 ± 0,6), ενώ το MPV PRP αυξήθηκε κατά 26% (9,2 ± 0,8 έναντι 11,6 ± 0,7). Παρόλο που οι μέσες διαφορές τόσο στη μείωση του αριθμού των αιμοπεταλίων όσο και στην αύξηση του MPV ήταν σημαντικά μεγαλύτερες με την PRP, οι αλλαγές στη μείωση του αριθμού των αιμοπεταλίων εντός του WB ήταν σχεδόν σημαντικές (310 ± 73 έως 286 ± 96 (-7,7%), p = 0,06) και η αύξηση του MPV ήταν σημαντική (10,1 ± 0,5 έως 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Παρόλο που οι μέσες διαφορές τόσο στη μείωση του αριθμού των αιμοπεταλίων όσο και στην αύξηση του MPV ήταν σημαντικά μεγαλύτερες με την PRP, οι αλλαγές στη μείωση του αριθμού των αιμοπεταλίων εντός του WB ήταν σχεδόν σημαντικές (310 ± 73 έως 286 ± 96 (-7,7%), p = 0,06) και η αύξηση του MPV ήταν σημαντική (10,1 ± 0,5 έως 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Παρόλο που οι μέσες διαφορές τόσο στη μείωση του αριθμού των αιμοπεταλίων όσο και στην αύξηση του CVR ήταν σημαντικά μεγαλύτερες με την PRP, οι αλλαγές στη μείωση του αριθμού των αιμοπεταλίων εντός του WB ήταν σχεδόν σημαντικές (310 ± 73 έως 286 ± 96 (-7,7%), p = 0,06).увеличение MPV было значительным (από 10,1 ± 0,5 έως 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). η αύξηση του MPV ήταν σημαντική (από 10,1 ± 0,5 σε 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7%)；p = .06）和的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < .001).尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 佡谆 冄减少 的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = .06）和MPV 的嘯 的（1. ± 0,5 έως 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Η μεταβολή στη μείωση του αριθμού των αιμοπεταλίων εντός του WB ήταν σχεδόν σημαντική (από 310 ± 73 σε 286 ± 96 (-7,7%)· p ​​= 0,06), αν και η PRP είχε σημαντικά μεγαλύτερες μέσες διαφορές στη μείωση του αριθμού των αιμοπεταλίων και στην αύξηση του MPV, και η αύξηση του MPV ήταν σημαντική.(από 10,1 ± 0,5 έως 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (από 10,1 ± 0,5 έως 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Απαιτήθηκε τελική συγκέντρωση 20% γλυκόζης για να παρατηρηθεί σημαντική αλλαγή στο MPV, αλλά η αλλαγή στο MPV ήταν πιο έντονη στην τελική συγκέντρωση του 25%. Η απώλεια αιμοπεταλίων σταθεροποιήθηκε μετά την αρχική μείωση. Παρατηρήσαμε μια αρχική απότομη μείωση στο CVR, ωστόσο, το CVR αποκαταστάθηκε ταχέως στην τελική συγκέντρωση γλυκόζης 25%, η οποία ήταν σημαντικά υψηλότερη από τα επίπεδα CVR που παρατηρήθηκαν στις τελικές συγκεντρώσεις γλυκόζης 20% και 15% (Εικ. 3 και αριστερά του Πίνακα 3· σκιασμένα πλαίσια). υποδεικνύουν τιμές p ≤ άλφα με διόρθωση Bonferroni 0,01). Υπήρξε επίσης μια αρχική απότομη πτώση στον αριθμό των PLT, που παρατηρήθηκε στην αρχική φάση των 0-15 s, και στη συνέχεια παρέμεινε σταθερός (από 15 s έως 30 λεπτά· αριστερά του πίνακα 4).
Η προσθήκη διαφόρων συγκεντρώσεων γλυκόζης στο πλήρες αίμα είχε ως αποτέλεσμα μια αρχική ταχεία μείωση του MPV ακολουθούμενη από μια εξαρτώμενη από τη συγκέντρωση ανάκτηση άνω του 20%. Ο υπόμνημα δείχνει τη συγκέντρωση γλυκόζης μετά την αραίωση. Οι αναλύσεις D15, D20 και D25 πραγματοποιήθηκαν σε αραίωση 1:1. Οι αναλύσεις D21 και D41 πραγματοποιήθηκαν σε αραίωση 1:5.
Ο Πίνακας 4 δείχνει την αλλαγή στον αριθμό των αιμοπεταλίων όταν αραιώνεται σε υπέρτονη γλυκόζη. Παρατηρήσαμε μια δοσοεξαρτώμενη σχέση μεταξύ της άμεσης μείωσης των αριθμών PLT στην αραίωση 1:1 και στην αραίωση 1:5. Συγκρίνοντας τις αραιώσεις 1:1 ως μία ομάδα με τις αραιώσεις 1:5, η ομάδα 1:1 είχε άμεση μείωση στον αριθμό των αιμοπεταλίων μικρότερη από την ομάδα 1:5 66±48.000 (23%) έναντι 99±69.000 (37%), p = 0,014) στην ομάδα 1:5. Μετά από μια αρχική πτώση στο πρώτο σημείο μέτρησης, ο αριθμός των αιμοπεταλίων ως ποσοστό γλυκόζης σταθεροποιήθηκε (Εικ. 4).
Όταν το πλήρες αίμα προστίθεται στη γλυκόζη σε αναλογία 1:1, ο αριθμός των αιμοπεταλίων μειώνεται κατά περίπου 25%. Ωστόσο, όταν το πλήρες αίμα προστέθηκε σε αναλογία 1:5, η μείωση ήταν πολύ μεγαλύτερη - περίπου 50%.
Η γλυκόζη 41% αύξησε τον MPV ταχύτερα και πιο δραματικά από το 25% ή 21%. Τα αποτελέσματα του MPV φαίνονται στο Σχήμα 3. Σε όλες τις άλλες αραιώσεις, δεν παρατηρήθηκε άμεση αρχική μείωση του MPV μετά την προσθήκη γλυκόζης 50%. Όταν χρησιμοποιήθηκε γλυκόζη 25% (συγκέντρωση γλυκόζης 20,8% στην τελική αραίωση), η αλλαγή στο MPV ήταν συγκρίσιμη με την αλλαγή στο 20% γλυκόζη σε αραίωση 1:1 (Εικ. 3). Αν και οι αλλαγές στο MPV ήταν αρχικά μεγαλύτερες στη μικτή συγκέντρωση 41% παρά στο 25%, η διαφορά στο MPV μεταξύ 41% και 25% μετά από 16 λεπτά δεν ήταν πλέον σημαντική (Πίνακας 3, δεξιά). Είναι επίσης ενδιαφέρον ότι το 25% γλυκόζη αύξησε τον MPV πιο αποτελεσματικά από το 20,8%.
Αυτή η μελέτη in vitro επιβεβαίωσε εν μέρει την υπόθεσή μας. Έδειξε πιθανή μερική λύση των αιμοπεταλίων από το μείγμα δεξτρόζης, ταχεία προσαρμογή των αιμοπεταλίων σε ακραία υπερτονικότητα και σημαντική αύξηση του MPV σε απόκριση σε συγκεντρώσεις > 25% υπερτονικής δεξτρόζης. Έδειξε πιθανή μερική λύση των αιμοπεταλίων από το μείγμα δεξτρόζης, ταχεία προσαρμογή των αιμοπεταλίων σε ακραία υπερτονικότητα και σημαντική αύξηση του MPV σε απόκριση σε συγκεντρώσεις > 25% υπερτονικής δεξτρόζης. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодацию тромбоцитов до экстремального гипертонуса и значительное повышение MPV в ответ на hypertonicheskuyu concentraciyu 5%. Έδειξε πιθανή μερική λύση των αιμοπεταλίων με δεξτρόζη, ταχεία προσαρμογή των αιμοπεταλίων σε ακραία υπερτονικότητα και σημαντική αύξηση του MPV σε απόκριση σε υπερτονικά επίπεδα δεξτρόζης >25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25% 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适庯 极的响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями со глюкозой, быструю адаптацию тромбоцитов к экстремальному υπερτονούσυ και значительное увеличение MPV в ответ на концентраций глюкозой 25%. Δείχνει πιθανή μερική λύση των αιμοπεταλίων από μείγματα γλυκόζης, ταχεία προσαρμογή των αιμοπεταλίων σε ακραία υπερτονικότητα και σημαντική αύξηση του MPV σε απόκριση σε υπερτονική γλυκόζη >25%.Η αρχική αύξηση ήταν μέγιστη στο 41,6% της έκθεσης στη γλυκόζη, αλλά η αύξηση του MPV πλησίασε το 25% της έκθεσης στη γλυκόζη περίπου 20 λεπτά μετά την έκθεση.
Η συγκέντρωση των αιμοπεταλίων επηρεάζεται από τη γλυκόζη. Παρατηρήσαμε ότι η ποσότητα της PLT μειώθηκε σε όλες τις αραιώσεις γλυκόζης. Μια απότομη πτώση στον αριθμό των αιμοπεταλίων σε αραιώσεις H2O (0%) της σειράς PRP μπορεί να σχετίζεται με οσμωτική λύση. Εναλλακτικά, αυτό θα μπορούσε να είναι ένα τεχνητό φαινόμενο που προκαλείται από τη συσσώρευση αιμοπεταλίων, αλλά αυτό έρχεται σε αντίθεση με την έλλειψη αλλαγής της MPV σε αυτήν την αραίωση. Αυτό το εύρημα σημαίνει ότι ορισμένα αιμοπετάλια είναι πολύ ευαίσθητα στην υποοσμωτικότητα.
Σε όλες τις αραιώσεις γλυκόζης 1:1, η ποσότητα της PLT μειώθηκε κατά 20-30%, ακόμη και κατά D5W (υποτονική στα 252 mOsm), γεγονός που μπορεί να υποδηλώνει μια συγκεκριμένη μη οσμωτική επίδραση της γλυκόζης, καθώς τόσο η PLT όσο και η MPV παρέμειναν αμετάβλητες σε τριπλάσια αύξηση της συγκέντρωσης γλυκόζης από D5W σε D25W. Στην πραγματικότητα, οι συγκεντρώσεις PLT έτειναν να αυξάνονται ελαφρώς με την αύξηση της οσμωτικότητας.
Η μείωση της PLT μεταξύ αραιώσεων 1:1 και 1:5 σημαίνει ότι το φαινόμενο διάλυσης εξαρτάται από την αρχική και την τελική συγκέντρωση γλυκόζης. Αν εξαρτιόταν μόνο από την αρχική συγκέντρωση, τότε θα περίμενε κανείς να δει διαφορά στη μείωση της PLT μεταξύ των συγκεντρώσεων 1:1. Αλλά δεν το κάνουμε. Αν το φαινόμενο λύσης εξαρτάται μόνο από την τελική συγκέντρωση γλυκόζης, τότε δεν περιμένουμε μεγάλη διαφορά μεταξύ μιας αραίωσης 20% 1:1 και μιας αραίωσης 20,8% 1:5. Κι όμως τα καταφέραμε.
Εάν συμβεί απώλεια αιμοπεταλίων λόγω λύσης των αιμοπεταλίων, σχηματίζεται ένα μερικό προϊόν λύσης, μετά το οποίο οι κυτοκίνες και οι αυξητικοί παράγοντες απελευθερώνονται στο εξωκυτταρικό περιβάλλον. Αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι το προϊόν λύσης αιμοπεταλίων είναι σχεδόν εξίσου αποτελεσματικό με το PRP με ένα διάλυμα πολλαπλασιασμού [11]. Το ίδιο το PRP έχει αποδειχθεί ότι είναι ένα αποτελεσματικό διάλυμα για την αντιμετώπιση του πολλαπλασιασμού [12-14].
Τα ανενεργά αιμοπετάλια κυκλοφορούν με τη μορφή δίσκου ενισχυμένου με διάφορες εσωτερικές δομές. Κατά την ενεργοποίηση, αποκτούν ένα πιο σφαιρικό ή αμοιβαδικό σχήμα, με αποτέλεσμα την αύξηση του όγκου. Η αύξηση του όγκου απαιτεί αύξηση της επιφάνειας, η οποία είναι αποτέλεσμα της εξώθησης του συστήματος ανοιχτών σωληναρίων (OCS) και της προσθήκης εξωκυτταρικών κοκκίων στη μεμβράνη. Απομένει να καθοριστεί εάν η αύξηση του MPV που προκαλείται από την υπέρτονη γλυκόζη περιλαμβάνει έναν ή και τους δύο αυτούς μηχανισμούς, αλλά εάν πρόκειται για τον δεύτερο, τότε η αύξηση του MPV θα υποδήλωνε αποκοκκίωση.
Αυτή η μελέτη έδειξε ότι η έκθεση σε υψηλές συγκεντρώσεις γλυκόζης σε PRP ή σε αιμοπετάλια ολικού αίματος είχε ως αποτέλεσμα την αύξηση του MPV εντός 15 λεπτών με συγκέντρωση γλυκόζης 25% και 41,6% αντίστοιχα.
Η αύξηση του MPV των αιμοπεταλίων μπορεί να οφείλεται στη διαστολή των περιβαλλόντων συστάδων των μικροσωληνίσκων σε απόκριση στην εισροή ασβεστίου. Liu et al. Η γλυκόζη έχει αποδειχθεί ότι μεσολαβεί στην εισροή ασβεστίου μέσω του καναλιού TRPC6 των αιμοπεταλίων [6]. Η υπόθεσή μας είναι ότι η γλυκόζη προκαλεί χαλάρωση των συστάδων των μικροσωληνίσκων, οδηγώντας σε αύξηση του MPV και ευαισθητοποίηση ή/και ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων. Ωστόσο, κρίνοντας από τα αποτελέσματά μας, αυτό είναι μόνο ένα μέρος της ιστορίας. Στις δοκιμές μας, καμία συγκέντρωση κάτω από D25W δεν οδήγησε σε αύξηση του MPV. Δεδομένου ότι δεν έχουμε ελέγξει την έκθεση σε συγκεντρώσεις γλυκόζης μεταξύ 12,5% και 25%, τα αποτελέσματα φάσης 1 υποδηλώνουν ότι μπορεί να υπάρχει ένα όριο σε αυτό το εύρος συγκεντρώσεων γλυκόζης που οδηγεί σε αύξηση του MPV. Περαιτέρω δοκιμές στα στάδια 3 και 4 έδειξαν ότι το 20-25% γλυκόζη φαίνεται να είναι το όριο για αυτό, αλλά παραμένει ασαφές γιατί.
Παρατηρήσαμε επίσης μια μείωση ~9% στο MPV μετά τη φυγοκέντρηση. Δεν είναι σαφές εάν αυτή η μείωση στο MPV οφείλεται σε μεγαλύτερα και πυκνότερα αιμοπετάλια που παγιδεύονται στο στρώμα RBC της φυγοκέντρησης. Αυτή η παρατήρηση μπορεί να είναι σημαντική για τους κλινικούς ιατρούς, καθώς μπορεί να υπονοεί ότι τα αιμοπετάλια PRP είναι ένα μικρότερο και λιγότερο πυκνό υποσύνολο των αιμοπεταλίων WB.
Σε μια προηγούμενη μελέτη, δείξαμε ότι η παρασκευή PRP με χειροκίνητες μεθόδους είναι φθηνή [8]. Εάν η γλυκόζη ευαισθητοποιεί τα αιμοπετάλια των ιστών ή το PRP, καθιστώντας τα πιο ευάλωτα στην ενεργοποίηση, ή εάν το PRP παράγεται με ιδιότητες μερικής λύσης, αυτό μπορεί να ενισχύσει την αναγέννηση και να μειώσει την ανάγκη για θεραπεία. Επομένως, ο συνδυασμός PRP και γλυκόζης υψηλής συγκέντρωσης μπορεί να είναι πιο οικονομικά αποδοτικός από το PRP ή τη γλυκόζη μόνο του.
Η μελέτη μας έχει αρκετές αδυναμίες. Πρώτον, χρησιμοποιούμε PRP που λαμβάνεται με διάφορες μεθόδους. Αυτό μπορεί να οδηγήσει σε αντικρουόμενα αποτελέσματα. Δεύτερον, δεν μπορέσαμε να πραγματοποιήσουμε βιοχημική ανάλυση κανενός από τα δείγματά μας για να προσδιορίσουμε με μεγαλύτερη ακρίβεια εάν είχε συμβεί ενεργοποίηση αιμοπεταλίων. Θα θέλαμε να μετρήσουμε την P-σελεκτίνη, τον παράγοντα 4 αιμοπεταλίων, τα συσσωματώματα μονοκυτταρικών αιμοπεταλίων ή άλλους δείκτες ενεργοποίησης αιμοπεταλίων για να κατανοήσουμε καλύτερα τον βαθμό ή την παρουσία αποκοκκίωσης των άλφα κοκκίων, αλλά αυτό είναι πέρα ​​από το πεδίο εφαρμογής αυτής της μελέτης. Τρίτον, δεν μπορέσαμε να επιβεβαιώσουμε με ηλεκτρονική μικροσκοπία ή άλλες μεθόδους ότι η αύξηση του MPV σε αιμοπετάλια που εκτέθηκαν σε γλυκόζη οφειλόταν στην επίδραση στα πλέγματα των μικροσωληνίσκων.
Μείγματα WB ή PRP με 25% γλυκόζη αύξησαν τον MPV, σηματοδοτώντας την έναρξη ενεργοποίησης των αιμοπεταλίων, αν και αυτή η μελέτη δεν κατέδειξε εξέλιξη της συσσωμάτωσης ή της αποκοκκίωσης. Το υπέρτονο μείγμα γλυκόζης είχε ως αποτέλεσμα την απώλεια αιμοπεταλίων, πιθανώς αντιπροσωπεύοντας ένα λυτικό αποτέλεσμα. Η μερική ενεργοποίηση ή λύση των αιμοπεταλίων μπορεί να προκαλέσει αναγέννηση ιστών μετά την ένεση αιμοπεταλίων. Δεν είναι σαφές ποιες κλινικές συνέπειες μπορεί να οδηγήσουν αυτές οι αλλαγές. Περαιτέρω μελέτες έχουν δείξει πιο ακριβείς μετρήσεις ενεργοποίησης ή λύσης και έχουν αξιολογήσει τις διαφορετικές κλινικές επιδράσεις των υπέρτονων μειγμάτων γλυκόζης με WB ή PRP.
Η θεραπεία πολλαπλασιασμού γλυκόζης είναι μια απλή και φθηνή αναγεννητική θεραπεία που επεκτείνεται ραγδαία και υποστηρίζει την κλινική έρευνα. Αυτή η μελέτη υποδηλώνει έναν φυσιολογικό μηχανισμό που, εάν επιβεβαιωθεί, θα μπορούσε να μας βοηθήσει να κατανοήσουμε μέρος του αναγεννητικού μηχανισμού της πολλαπλασιαστικής θεραπείας.
Βιοϊατρική και Πληροφορική Υγείας στο Πανεπιστήμιο του Μιζούρι, Ιατρική Σχολή Κάνσας Σίτι, Κάνσας Σίτι, ΗΠΑ
Άνθρωποι: Όλοι οι συμμετέχοντες σε αυτή τη μελέτη έδωσαν ή δεν έδωσαν τη συγκατάθεσή τους. Η Διεθνής Εταιρεία Κυτταρικής Ιατρικής έχει εκδώσει την έγκριση ICMS-2017-003. Το ακόλουθο πρωτόκολλο έχει εγκριθεί για περαιτέρω χρήση από το Συμβούλιο Θεσμικής Αναθεώρησης της Διεθνούς Εταιρείας Κυτταρικής Ιατρικής: Τίτλος: Υπολογισμός της απόδοσης φαρμάκου πλούσιου σε αιμοπετάλια σε πλάσμα με βάση τον αρχικό αριθμό αιμοπεταλίων στην Κυτταρική Γενική Ιατρική. Ζώα: Όλοι οι συγγραφείς επιβεβαίωσαν ότι δεν συμμετείχαν ζώα ή ιστοί σε αυτή τη μελέτη. Σύγκρουση Συμφερόντων: Σύμφωνα με την Ενιαία Φόρμα Γνωστοποίησης ICMJE, όλοι οι συγγραφείς δηλώνουν τα ακόλουθα: Πληροφορίες πληρωμής/υπηρεσίας: Όλοι οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν έλαβαν οικονομική υποστήριξη από κανέναν οργανισμό για την υποβληθείσα εργασία. Οικονομικές Σχέσεις: Όλοι οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν έχουν επί του παρόντος ή εντός των τελευταίων τριών ετών οικονομικές σχέσεις με κανέναν οργανισμό που μπορεί να ενδιαφέρεται για την υποβληθείσα εργασία. Άλλες Σχέσεις: Όλοι οι συγγραφείς δηλώνουν ότι δεν υπάρχουν άλλες σχέσεις ή δραστηριότητες που μπορεί να επηρεάσουν την υποβληθείσα εργασία.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al. (17 Μαΐου 2022) Η επίδραση της γλυκόζης στον αριθμό και τον όγκο των αιμοπεταλίων: επιπτώσεις στην αναγεννητική ιατρική. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Πνευματικά δικαιώματα 2022 Harrison et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοιχτής πρόσβασης που διανέμεται σύμφωνα με τους όρους της Άδειας Creative Commons Attribution CC-BY 4.0. Επιτρέπεται η απεριόριστη χρήση, διανομή και αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​υπό την προϋπόθεση ότι αναφέρεται ο αρχικός συγγραφέας και η πηγή.