„Niekada neabejokite, kad maža grupė mąstančių, atsidavusių piliečių gali pakeisti pasaulį. Tiesą sakant, tai vienintelė tokia.“
„Cureus“ misija – pakeisti ilgalaikį medicininės publikacijos modelį, kai tyrimų pateikimas gali būti brangus, sudėtingas ir daug laiko reikalaujantis.
Trombocitais praturtinta plazma/prp, audinių regeneracija, trombocitų aktyvacija, gliukozės proliferacinė terapija, trombocitai, proliferacinė terapija
Cituoti šį straipsnį taip: Harrison TE, Bowler J, Reeves K ir kt. (2022 m. gegužės 17 d.) Gliukozės poveikis trombocitų skaičiui ir tūriui: reikšmė regeneracinei medicinai. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Regeneracinėje medicinoje injekcijoms dažniausiai naudojami trombocitais praturtinta plazma (PRP) ir hipertoniniai gliukozės tirpalai, kartais kartu. Hipertoninės gliukozės poveikis trombocitų lizei ir aktyvacijai anksčiau nebuvo aprašytas. Mes ištyrėme padidėjusios gliukozės koncentracijos poveikį trombocitų ir eritrocitų skaičiui, taip pat ląstelių tūriui PRP ir viso kraujo tirpale (WB). Visuose gliukozės mišiniuose, sumaišytuose su PRP arba viso kraujo tirpalu, pastebėtas greitas dalinis trombocitų skaičiaus sumažėjimas, atitinkantis dalinę lizę. Po pirmos minutės trombocitų skaičius išliko stabilus, o tai rodo, kad likę trombocitai greitai prisitaikė prie ekstremalaus (> 2000 mOsm) hipertoniškumo. Po pirmos minutės trombocitų skaičius išliko stabilus, o tai rodo, kad likę trombocitai greitai prisitaikė prie ekstremalaus (> 2000 mOsm) hipertoniškumo. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю аккомоданыстацитою тромбоцитов до экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Po pirmos minutės trombocitų skaičius išliko stabilus, o tai rodo, kad likusių trombocitų koncentracija greitai prisitaikė prie ekstremalaus (> 2000 mOsm) hipertoniškumo.第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态.2000 mOsm）高渗状态. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю адаптацитромостостацитою к экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. Po pirmos minutės trombocitų skaičius išliko stabilus, o tai rodo greitą likusių trombocitų prisitaikymą prie ekstremalios (> 2000 mOsm) hiperosmoliarinės būsenos.25 % ir didesnė gliukozės koncentracija lėmė reikšmingą vidutinio trombocitų tūrio (MPV) padidėjimą, o tai rodo ankstyvą trombocitų aktyvacijos stadiją. Reikia atlikti tolesnius tyrimus, siekiant nustatyti, ar vyksta trombocitų lizė, ar aktyvacija, ir ar hipertoninė gliukozės injekcija, taikoma atskirai arba kartu su PRP, gali suteikti papildomos klinikinės naudos.
Šeštajame dešimtmetyje amerikiečių chirurgas George'as Hackettas atrado, kad daugeliui pacientų gali visam laikui palengvinti sąnarių ir nugaros skausmą, suleisdamas proliferacinį tirpalą į sausgysles ir raiščius. Jo eksperimentai su triušiais parodė, kad gydymas, kurį jis pavadino proliferacine terapija, padidino ir sustiprino sausgysles. Histologiniai tyrimai patvirtino, kad šio proceso metu gaminamas naujas kolagenas [1].
Per pirmuosius kelis dešimtmečius buvo išbandyta daug skirtingų paskirstymo sprendimų. Iki 1990-ųjų dauguma specialistų didelę gliukozės koncentraciją laikė saugiausiu ir veiksmingiausiu metodu. Tačiau veikimo mechanizmas lieka neaiškus.
XX amžiuje po Hacketto darbo atlikta nedaug klinikinių tyrimų. Tačiau 2000-aisiais vėl atsirado susidomėjimas ir atlikti keli sėkmingi proliferacinės terapijos klinikiniai tyrimai, skirti juosmens skausmo [2], kelio osteoartrito [3] ir šoninio epikondilito [4] gydymui.
Audinių regeneracijai reikalingos kamieninės ląstelės. Todėl didelė gliukozės koncentracija kažkaip turi sukelti kamieninių ląstelių migraciją, replikaciją ir diferenciaciją. Mes keliame hipotezę, kad trombocitai gali veikti kaip pasiuntiniai ir kad didelė gliukozės koncentracija gali paskatinti trombocitus išskirti citokinus ir augimo faktorius, taip skatinant regeneracinius procesus, ypač kamieninių ląstelių migraciją į sritis, kuriose yra didelė gliukozės koncentracija.
Trombocitų aktyvacija visada vyksta prieš padidėjusį tarpląstelinį kalcio kiekį [5]. Liu ir kt. 2008 m. parodė, kad didelis gliukozės kiekis padidina trumpalaikio receptoriaus potencialo kanoninio 6 tipo (TRPC6) kanalų aktyvumą plazmos membranoje, o tai lemia kalcio jonų patekimą į trombocitus [6]. Kitas tyrimas parodė, kad mikrovamzdelių ribinės zonos veikimas kalcio jonais sukelia ribinės zonos atsipalaidavimą, išsiplėtimą ir deformaciją, o tai savo ruožtu sukelia formos pasikeitimą iš disko į sferinę, todėl padidėja vidutinis trombocitų tūris (MPV) [7].
Mūsų hipotezė šiame tyrime yra ta, kad trombocitų sąlytis su didelėmis gliukozės koncentracijomis veikia mikrovamzdelių ribinę zoną ir tarpląstelinę aplinką, todėl padidėja MPV.
Visi dalyviai pasirašė informuoto sutikimo formą, paaiškinus tyrimo detales ir prieš gaunant mėginius. Šiame tyrime buvo naudojami tik tie PRP mėginiai, kurių hematokritas buvo didesnis nei 2 %, kad būtų galima palyginti eritrocitų (eritrocitų) skaičių ir vidutinį eritrocitų tūrį (MCV).
Tyrimas buvo atliktas keturiais etapais: pirmasis etapas buvo PRP, o likusios fazės – viso kraujo mėginiai (1 lentelė). Kaip aprašyta anksčiau [8], visos santykinės išcentrinės jėgos (RCF, g jėga) buvo apskaičiuotos pagal kraujo stulpelio vidurio tašką (Rmid, cm) išcentriniame švirkšte. Pasirinkome naudoti MPV kaip trombocitų jautrinimo žymeklį, o trombocitų skaičių – kaip galimos trombocitų lizės rodiklį, nes abu šiuos rodiklius galima lengvai išmatuoti standartiniais hematologijos analizatoriais.
Pirmajame etape 47 savanoriai paaukojo kraujo mėginius – vieną mėgintuvėlį etilendiamintetraacto rūgšties (EDTA) ir vieną PRP viso kraujo mėginį (antikoaguliuotą natrio citratu (NaCl, 3 %)) (1 lentelė). Į mėgintuvėlį nedelsdami įdėkite maišyklę. Pilnas kraujo tyrimas (BKT) buvo atliktas trimis egzemplioriais su EDTA mėginiais, NaCl mėginiai buvo analizuojami trimis egzemplioriais BKT analizei, o tada PRP buvo paruoštas įvairiais aukščiau aprašytais metodais [8]. Visi PRP mėginiai buvo paruošti centrifuguojant 900–1000 g greičiu. Kiekvieną PRP mėginį maišykite sūkuriniame maišytuve 5–10 sekundžių, tada padalinkite penkis 0,5 ml mėginius į mėgintuvėlius.
Norint įvertinti trombocitų poveikio įtaką padidėjusiai gliukozės koncentracijai, su trombocitų mėginiais buvo sumaišyti vienodi kiekiai (0,5 ml) 0 %, 5 %, 12,5 %, 25 % ir 50 % gliukozės tirpalo vandenyje, gaunant 0 %, 2,5 %, 6,25 %, 12,5 % ir 25 % gliukozės mišinio koncentracijas, ir mėgintuvėliai 15 minučių maišomi mėgintuvėlių kratytuve. Kiekvieno mišinio bendros lipidų koncentracijos (TAC) buvo analizuojamos tris kartus po 15 min. Kiekvienam mėgintuvėliui buvo apskaičiuotas trombocitų skaičiaus (PLT), eritrocitų skaičiaus, MCV ir MPV vidurkis, o visiems PRP mėginiams apskaičiuotas vidutinis trombocitų skaičius, eritrocitų skaičius, MCV ir MPV.
Užbaigus pirmąjį duomenų rinkimo etapą, pastebėjome reikšmingą trombocitų tūrio padidėjimą PRP trombocituose, pridėjus D50W. PRP trombocitai nebūtinai atspindi visus trombocitus kraujyje, o PRP terpė skiriasi nuo WB terpės. Todėl nusprendėme atlikti antrąjį D50W pridėjimo prie viso kraujo tyrimą.
Antrajam etapui pasirinkome 30 asmenų imties dydį, remdamiesi pirmosios serijos rezultatais, kaip aprašyta skyriuje „Analizė“. Šioje serijoje 20 savanorių paaukojo kraujo mėginius (1 lentelė). Į 3 ml švirkštą buvo įtrauktas viso kraujo mėginys (1,8 ml) ir antikoaguliuotas 0,2 ml 40 % NaCl. Viso kraujo švirkšto turinys buvo maišomas penkias sekundes sūkuriniu maišytuvu, o bendras kraujo tyrimas buvo atliktas tris kartus. Po analizės antikoaguliuotas kraujas buvo įpiltas į 2 ml 50 % gliukozės 5 ml švirkšte (galutinė gliukozės koncentracija buvo maždaug 25 % (D25)) ir 30 minučių supiltas į kratomąjį mėgintuvėlį. Po 30 minučių D25/BBC WB švirkštuose buvo atliktas tris kartus. Buvo apskaičiuotas trombocitų skaičiaus, eritrocitų skaičiaus, MCV ir MPV vidurkis vienam švirkštui, o vidutinis PLT, eritrocitų skaičiaus, MCV ir MPV buvo apskaičiuotas kiekvienam mėginiui prieš ir po gliukozės pridėjimo.
Kadangi proliferacinės gliukozės terapijos metu dėl minimaliai invazinės injekcijos trombocitai visame kraujyje dažnai yra veikiami hipertoninės gliukozės, ir nėra įprasta derinti PRP su hipertonine gliukoze prieš pat injekciją, nusprendėme 1 skyriuje, trečiame ir ketvirtame etapuose, tirti hipertoninės gliukozės derinį su baltąja etikete. Kiekviename etape 20 savanorių paaukojo 7–8 ml ACD-A (rūgšties, kurios sudėtyje yra trinatrio citrato (22,0 g/l), citrinų rūgšties (8,0 g/l) ir gliukozės (24,5 g/l), dekstrozės citrato tirpalo) kraujo antikoaguliantams (1 lentelė). Nustatant su MPV padidėjimu susijusį slenksčio procentą, buvo naudojami tik mišiniai, kuriuose gliukozės koncentracija buvo didesnė nei 12,5 %. Trečiame etape į mėgintuvėlį įpilama 1 ml kraujo. Tada kraują 10 sekundžių maišykite sūkuriniu maišytuvu, į mėgintuvėlį įpildami 1 ml 30 % gliukozės, 40 % gliukozės arba 50 % gliukozės, kad galutinė gliukozės koncentracija būtų atitinkamai 15 %, 20 % ir 25 %. Gliukozės kiekio kraujyje mėginiai buvo analizuojami dėl bendro kraujo tyrimo iš karto po sumaišymo ir kartojami kas dvi minutes 30 minučių.
Pradinio maišymo metu, pridėjus 1:1 hipertoninės gliukozės ir WB arba PRP, trombocitų koncentracija kelias sekundes padidėja iki didesnės nei 25 %. Ketvirtajame etape, norėdami įvertinti hipertoninės gliukozės poveikį esant minimaliai pradinei didžiausiai koncentracijai ir patikrinti viršutinę gliukozės poveikio ribą, į D25W arba D50W įpylėme tik nedidelį kiekį kraujo. Į mėgintuvėlį įpilame 1 ml D25W arba D50W ir, 10 sekundžių maišydami mėginį sūkuriniame maišytuve, įpilkite 0,2 ml WB. Šiais atvejais kraujas buvo veikiamas gliukozės, kurios koncentracija buvo maždaug 20 % didesnė už galutinę koncentraciją, o ne 50 % didesnė už galutinę koncentraciją, kaip 3 etape, todėl galutinė gliukozės koncentracija buvo 20,8 % ir 41,6 %. Sumaišyti mėginiai buvo analizuojami tuo pačiu laiko intervalu kaip ir 3 etape.
Kiekvieno gliukozės skiedimo serijos pirmajame etape buvo paimta 30 mėginių, nes tai buvo tinkamas imties dydis bandomajam tyrimui [9]. Kiekvieno etapo pabaigoje (įskaitant pirmąjį etapą) įvertinkite imties dydžio tinkamumą, naudodami formulę, naudojamą imties dydžiui, reikalingam vienos populiacijos tęstinio rezultato kintamojo vidurkiui įvertinti, nustatyti. Formulė n = Z2 x SD2 /E2. Šioje lygtyje Z yra Z balas, SD yra standartinis nuokrypis, o E yra pageidaujama paklaida [10]. Mūsų alfa yra 0,05, o tai atitinka Z reikšmę 1,96, o mes tikimės 5 paklaidos (procentais). Todėl sprendžiame, kad n = (1,962 x SD2)/52. Rezultatai parodė, kad kiekvienam etapui reikalingas imties dydis buvo mažesnis nei faktinis surinktų mėginių skaičius.
1, 3 ir 4 laikotarpiais, naudojant daugiau nei vieną gliukozės koncentraciją, skirtingų gliukozės koncentracijų poveikis buvo analizuojamas lyginant dalinį pokytį tarp 0 laiko ir kiekvieno vėlesnio laiko (1 fazė – po 15 minučių, 3 fazė – po 15 minučių ir keturi – po 15 sekundžių, po to kas dvi minutes). Kiekvieno laikotarpio pokyčių greičiai buvo lyginami naudojant Mann-Whitney U testą, nes duomenys neatitiko normalaus skirstinio, nustatyto pagal Shapiro-Wilk normalumo testą. Kadangi pirmame, trečiame ir ketvirtame etapuose (iš viso penkios) buvo atlikta kelių grupių (penkių) 1:1 analizė, buvo atlikta Bonferroni korekcija, siekiant pakoreguoti norimą alfa reikšmę iki ≤0,01, bet ne ≤0,05.
Trombocitų skaičiaus sumažėjimas esant visoms hipertoninės dekstrozės koncentracijoms ir MPV padidėjimas PRP trombocituose esant >12,5% dekstrozės koncentracijai: PRP trombocitų skaičius padidėjo nuo vieno iki penkių kartų, palyginti su pradiniu viso kraujo kiekiu, priklausomai nuo metodo (nepavaizduota). Trombocitų skaičiaus sumažėjimas esant visoms hipertoninės dekstrozės koncentracijoms ir MPV padidėjimas PRP trombocituose esant >12,5 % dekstrozės koncentracijai: PRP trombocitų skaičius padidėjo nuo vieno iki penkių kartų, palyginti su pradine koncentracija kraujyje, priklausomai nuo metodo (nepavaizduota). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV вхпримритов концентрации декстрозы > 12,5 %: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз по сравнению с исхольной кровью, в зависимости от метода (не показано). Sumažėjęs trombocitų skaičius esant visoms hipertoninėms dekstrozės koncentracijoms ir padidėjęs MPV PRP trombocituose esant >12,5% ​​dekstrozės koncentracijai: PRP trombocitų skaičius padidėjo 1–5 kartus, palyginti su pradiniu viso kraujo mėginiu, priklausomai nuo metodo (neparodyta). ).在> 12,5 % 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，䰏VMP 血增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5倍，因方法而异（未描述）. Esant >12,5 % gliukozės koncentracijai, didelė gliukozės koncentracija sumažina kraujo ląstelių kiekį, padidėja PRP kraujo MPV: palyginti su 与基线全血, PRP kraujo ląstelių kiekis padidėja nuo 1 iki 5 kartų, palyginti su koncentracija (neaprašyta). При концентрациях глюкозы >12,5% все концентрации гипертонической глюкозы снижали количество количество тромбо в тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось от 1- до 5-кратных концентраций по сравнесы концентрациями цельной крови, в зависимости от метода (не описано ). Esant >12,5 % gliukozės koncentracijai, visos hipertenzinės gliukozės koncentracijos sumažino trombocitų skaičių ir padidino MPV PRP trombocituose: PRP trombocitų skaičius padidėjo 1–5 kartus, palyginti su pradine koncentracija kraujyje, priklausomai nuo metodo (kaip aprašyta).1 paveiksle parodyta, kad trombocitų skaičius sumažėjo beveik 75 % po praskiedimo vandeniu ir 20–30 % po 15 minučių praskiedimo skirtingomis gliukozės koncentracijomis, palyginti su pradiniu PRP ir 1:1 praskiedimu, pakoreguotu pagal tūrį (1-k1 su tūrio korekcija). k -1 veisimas).1 veisimas).
Kiekvieno praskiedimo ląstelių skaičius išreiškiamas kaip pradinio skaičiaus prieš praskiedimą dalis.
MPV minimaliai sumažėjo PRP gamybos metu, be tolesnių skiedimo koncentracijų pakeitimų iki 12,5 % vandenyje ar gliukozėje (įskaitant 25 % PRP gliukozės mišinius), ir padidėjo daugiau nei 20 % po praskiedimo 50 % gliukozės tirpale (2 pav.). Priešingai, eritrocitai reikšmingo tūrio pokyčio neparodė esant jokiam kitam skiedimui, išskyrus H2O.
Vidutinis ląstelių tūris kiekviename praskiedime išreiškiamas pradinio tūrio prieš praskiedimą procentais.
Panašus, bet mažiau ryškus trombocitų skaičiaus sumažėjimas ir CVR padidėjimas pastebėtas BC, paveiktame 50 % gliukozės (formulėje su 25 % gliukozės). 2 lentelėje palyginamas ląstelių skaičius ir ląstelių tūriai visame kraujyje, praskiestame 50 % dekstrozės tirpalu, su 1 fazės PRP duomenimis, praskiestame 50 % dekstrozės tirpalu. Eritrocitų skaičiaus ir eritrocitų MCV pokyčiai nebuvo akivaizdūs ir nebuvo mūsų dėmesio objektas.
SD = standartinis nuokrypis, MD = vidutinis skirtumas tarp grupių, SE = vidutinio skirtumo standartinis nuokrypis, RBC = eritrocitai, PLT = trombocitai, PRP = trombocitais praturtinta plazma, WB = pilnas kraujas
Pridėjus D50W prie WB, trombocitų netekimo procentas, pakoreguotas pagal praskiedimą, buvo 7,7 % (310 ± 73 ir 286 ± 96), palyginti su 17,8 % vartojant PRP praskiedimą D50W tirpale (664 ± 348 ir 544 ± 277). MPV WB padidėjo 16,8 % (nuo 10,1 ± 0,5 iki 11,8 ± 0,6), o MPV PRP padidėjo 26 % (9,2 ± 0,8 ir 11,6 ± 0,7). Nors vidutiniai trombocitų skaičiaus sumažėjimo ir MPV padidėjimo skirtumai buvo reikšmingai didesni taikant PRP, trombocitų skaičiaus sumažėjimo pokyčiai baltojoje plokštelėje buvo beveik reikšmingi (nuo 310 ± 73 iki 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06), o MPV padidėjimas buvo reikšmingas (nuo 10,1 ± 0,5 iki 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Nors vidutiniai trombocitų skaičiaus sumažėjimo ir MPV padidėjimo skirtumai buvo reikšmingai didesni taikant PRP, trombocitų skaičiaus sumažėjimo pokyčiai baltojoje plokštelėje buvo beveik reikšmingi (nuo 310 ± 73 iki 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06), o MPV padidėjimas buvo reikšmingas (nuo 10,1 ± 0,5 iki 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Nors vidutiniai trombocitų skaičiaus sumažėjimo ir CVR padidėjimo skirtumai buvo reikšmingai didesni taikant PRP, trombocitų skaičiaus sumažėjimo pokyčiai baltojoje plokštelėje buvo beveik reikšmingi (nuo 310 ± 73 iki 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06).увеличение MPV было значительным (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). MPV padidėjimas buvo reikšmingas (nuo 10,1 ± 0,5 iki 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7%)；p = 0,06）和MP的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < .001）.尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 尡 冏减少 的 几乎 是 显着 的 (310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = .06）和MPV 的增劊± 0,5 到 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001）.Trombocitų skaičiaus sumažėjimo pokytis WB ribose buvo beveik statistiškai reikšmingas (nuo 310 ± 73 iki 286 ± 96 (-7,7 %); p = 0,06), nors PRP grupėje vidutiniai trombocitų skaičiaus sumažėjimo ir MPV padidėjimo skirtumai buvo statistiškai reikšmingi, o MPV padidėjimas buvo statistiškai reikšmingas.(nuo 10,1 ± 0,5 iki 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (nuo 10,1 ± 0,5 iki 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
Norint pastebėti reikšmingą MPV pokytį, reikėjo 20 % galutinės gliukozės koncentracijos, tačiau MPV pokytis buvo ryškesnis esant 25 % galutinei koncentracijai. Trombocitų netekimas po pradinio sumažėjimo stabilizavosi. Pastebėjome pradinį staigų CVR sumažėjimą, tačiau CVR greitai atsistatė esant 25 % galutinei gliukozės koncentracijai, kuri buvo žymiai didesnė nei CVR lygiai, stebėti esant 20 % ir 15 % galutinėms gliukozės koncentracijoms (3 pav. ir 3 lentelės kairėje pusėje; užtamsinti langeliai). P reikšmės ≤ alfa su 0,01 Bonferroni korekcija). Taip pat pradinėje 0–15 s fazėje buvo pastebėtas staigus PLT skaičiaus sumažėjimas, kuris vėliau išliko stabilus (nuo 15 s iki 30 min.; 4 lentelės kairėje pusėje).
Į kraują įpylus įvairių koncentracijų gliukozės, MPV iš pradžių greitai sumažėjo, o vėliau, priklausomai nuo koncentracijos, jis atsigavo daugiau nei 20 %. Pažymyje parodyta gliukozės koncentracija po praskiedimo. D15, D20 ir D25 mėginiai buvo atlikti 1:1 praskiedimu. D21 ir D41 mėginiai buvo atlikti 1:5 praskiedimu.
4 lentelėje parodytas trombocitų skaičiaus pokytis, praskiedus hipertoniniu gliukozės tirpalu. Stebėjome nuo dozės priklausomą ryšį tarp tiesioginio PLT skaičiaus sumažėjimo, esant 1:1 ir 1:5 praskiedimui. Lyginant 1:1 praskiedimus kaip vieną grupę su 1:5 praskiedimais, 1:1 grupėje trombocitų skaičius iškart sumažėjo mažiau nei 1:5 grupėje: 66 ± 48 000 (23 %), palyginti su 99 ± 69 000 (37 %). , p = 0,014) 1:5 grupėje. Po pradinio sumažėjimo pirmame matavimo taške trombocitų skaičius, išreikštas gliukozės procentine dalimi, stabilizavosi (4 pav.).
Kai viso kraujo į gliukozę įpilama santykiu 1:1, trombocitų skaičius sumažėja apie 25 %. Tačiau kai viso kraujo įpilama santykiu 1:5, sumažėjimas buvo daug didesnis – apie 50 %.
41 % gliukozės koncentracija padidino MPV greičiau ir dramatiškiau nei 25 % ar 21 %. MPV rezultatai pateikti 3 paveiksle. Visuose kituose skiedimuose, pridėjus 50 % gliukozės, iš karto nepastebėta pradinio MPV sumažėjimo. Naudojant 25 % gliukozės koncentraciją (gliukozės koncentracija galutiniame skiedime buvo 20,8 %), MPV pokytis buvo panašus į 20 % gliukozės pokytį, esant 1:1 skiedimui (3 pav.). Nors iš pradžių MPV pokyčiai buvo didesni esant 41 % mišrios koncentracijos tirpalui nei esant 25 %, MPV skirtumas tarp 41 % ir 25 % po 16 minučių nebebuvo reikšmingas (3 lentelė, dešinėje). Taip pat įdomu tai, kad 25 % gliukozė padidino MPV veiksmingiau nei 20,8 %.
Šis in vitro tyrimas iš dalies patvirtino mūsų hipotezę. Jis parodė galimą dalinę trombocitų lizę dėl dekstrozės mišinio, greitą trombocitų prisitaikymą prie didelio hipertoniškumo ir reikšmingą MPV padidėjimą, reaguojant į > 25 % hipertoninės dekstrozės koncentraciją. Jis parodė galimą dalinę trombocitų lizę dėl dekstrozės mišinio, greitą trombocitų prisitaikymą prie didelio hipertoniškumo ir reikšmingą MPV padidėjimą, reaguojant į > 25 % hipertoninės dekstrozės koncentraciją. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодациальный аккомодациальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодациальный аккомодациаю тромбоцитов гипертонуса и значительное повышение MPV в ответ на гипертоническую концентрацию декстрозы > 25%. Jis parodė galimą dalinę trombocitų lizę su dekstroze, greitą trombocitų akomodaciją iki ekstremalaus hipertoniškumo ir reikšmingą MPV padidėjimą, reaguojant į hipertoninę dekstrozės koncentraciją >25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25 % 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升.它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 忼速 适应 枏响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。. Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой, быструю адаптацию адаптацию экстремальному гипертонусу и значительное увеличение MPV в ответ на концентрацию гипертонической глюкозы > 25%. Tai rodo galimą dalinę trombocitų lizę gliukozės mišiniais, greitą trombocitų adaptaciją prie ekstremalaus hipertoniškumo ir reikšmingą MPV padidėjimą reaguojant į hipertoninę gliukozę >25%.Pradinis padidėjimas buvo maksimalus esant 41,6 % gliukozės ekspozicijai, tačiau MPV padidėjimas priartėjo prie 25 % gliukozės ekspozicijos maždaug po 20 minučių po ekspozicijos.
Gliukozė veikia trombocitų koncentraciją. Pastebėjome, kad PLT kiekis sumažėjo esant visiems gliukozės skiedimams. Staigus trombocitų skaičiaus sumažėjimas PRP serijos H2O (0 %) skiedimuose gali būti susijęs su osmosine lize. Arba tai gali būti artefaktas, kurį sukelia trombocitų atlipimas, tačiau tai prieštarauja MPV pokyčių nebuvimui esant tokiam skiedimui. Šis atradimas reiškia, kad kai kurie trombocitai yra labai jautrūs hipoosmoliariškumui.
Visuose 1:1 gliukozės skiediniuose PLT kiekis sumažėjo 20–30 %, net ir praskiedus D5W (hipotoninis esant 252 mOsm), o tai gali rodyti specifinį neosmosinį gliukozės poveikį, nes ir PLT, ir MPV nepakito, gliukozės koncentracijai padidėjus tris kartus nuo D5W iki D25W. Iš tiesų, PLT koncentracijos turėjo tendenciją šiek tiek didėti didėjant osmoliariškumui.
PLT sumažėjimas tarp 1:1 ir 1:5 skiedimų reiškia, kad tirpimo efektas priklauso nuo pradinės ir galutinės gliukozės koncentracijos. Jei jis priklausytų tik nuo pradinės koncentracijos, tuomet būtų galima tikėtis skirtumo tarp PLT sumažėjimo tarp 1:1 koncentracijų. Tačiau mes tokio skirtumo nematome. Jei lizės efektas priklauso tik nuo galutinės gliukozės koncentracijos, tuomet nesitikime didelio skirtumo tarp 20 % 1:1 skiedimo ir 20,8 % 1:5 skiedimo. Ir vis dėlto mums tai pavyko.
Jei dėl trombocitų lizės netenkama trombocitų, susidaro dalinis lizatas, po kurio citokinai ir augimo faktoriai išsiskiria į tarpląstelinę aplinką. Keletas tyrimų parodė, kad trombocitų lizatas yra beveik toks pat veiksmingas kaip PRP kaip proliferacijos tirpalas [11]. Pats PRP yra veiksmingas proliferacijos gydymo sprendimas [12–14].
Neaktyvūs trombocitai cirkuliuoja disko, sutvirtinto keliomis vidinėmis struktūromis, pavidalu. Aktyvacijos metu jie įgauna sferiškesnę arba amebos formą, todėl padidėja jų tūris. Tūrio padidėjimui reikia padidinti paviršiaus plotą, kuris atsiranda dėl atviros kanalėlių sistemos (OSS) išstūmimo ir egzocitinių granulių pridėjimo prie membranos. Dar reikia išsiaiškinti, ar hipertoninės gliukozės sukeltas MPV padidėjimas apima vieną, ar abu šiuos mechanizmus, bet jei pastarasis, MPV padidėjimas rodytų degranuliaciją.
Šis tyrimas parodė, kad didelės gliukozės koncentracijos poveikis PRP arba viso kraujo trombocitams padidino MPV per 15 minučių, gliukozės koncentracijai atitinkamai 25 % ir 41,6 %.
Trombocitų MPV padidėjimas gali būti susijęs su aplinkinių mikrovamzdelių raizginių išsiplėtimu reaguojant į kalcio antplūdį. Liu ir kt. Nustatyta, kad gliukozė tarpininkauja kalcio antplūdžiui per trombocitų TRPC6 kanalą [6]. Mūsų hipotezė yra ta, kad gliukozė sukelia mikrovamzdelių raizginių atsipalaidavimą, dėl to padidėja MPV ir trombocitų jautrinimas ir (arba) aktyvacija. Tačiau, sprendžiant iš mūsų rezultatų, tai tik dalis istorijos. Mūsų bandymuose nė viena koncentracija, mažesnė nei D25W, nesukėlė MPV padidėjimo. Atsižvelgiant į tai, kad mes netyrėme gliukozės koncentracijos nuo 12,5 % iki 25 %, mūsų 1 fazės rezultatai rodo, kad šiame gliukozės koncentracijų diapazone gali būti riba, dėl kurios padidėja MPV. Tolesni 3 ir 4 etapų tyrimai parodė, kad 20–25 % gliukozės, atrodo, yra šios ribos, tačiau lieka neaišku, kodėl.
Taip pat pastebėjome maždaug 9 % MPV sumažėjimą po centrifugavimo. Neaišku, ar šis MPV sumažėjimas susijęs su didesniais ir tankesniais trombocitais, įstrigusiais centrifugos eritrocitų sluoksnyje. Šis stebėjimas gali būti svarbus gydytojams, nes jis gali reikšti, kad PRP trombocitai yra mažesnis ir mažiau tankus WB trombocitų pogrupis.
Ankstesniame tyrime parodėme, kad PRP paruošimas rankiniu būdu yra nebrangus [8]. Jei gliukozė jautrina audinių trombocitus arba PRP, todėl jie tampa jautresni aktyvacijai, arba jei PRP gaminamas su dalinėmis lizato savybėmis, tai gali sustiprinti regeneraciją ir sumažinti gydymo poreikį. Todėl PRP ir labai koncentruotos gliukozės derinys gali būti ekonomiškai efektyvesnis nei vien PRP arba gliukozė.
Mūsų tyrimas turi keletą trūkumų. Pirma, mes naudojame PRP, gautą keliais skirtingais metodais. Tai gali lemti prieštaringus rezultatus. Antra, negalėjome atlikti biocheminės nė vieno iš mūsų mėginių analizės, kad tiksliau nustatytume, ar įvyko trombocitų aktyvacija. Norėtume išmatuoti P-selektiną, trombocitų faktorių 4, monocitinių trombocitų agregatų ar kitus trombocitų aktyvacijos žymenis, kad geriau suprastume alfa granulių degranuliacijos laipsnį ar buvimą, tačiau tai neįeina į šio tyrimo apimtį. Trečia, elektronine mikroskopija ar kitais metodais negalėjome patvirtinti, kad gliukozės paveiktų trombocitų MPV padidėjimas buvo susijęs su poveikiu mikrovamzdelių raizgaliams.
WB arba PRP mišiniai su 25 % gliukozės padidino MPV, signalizuodami apie trombocitų aktyvacijos pradžią, nors šiame tyrime nenustatyta agregacijos ar degranuliacijos progresavimo. Hipertoninis gliukozės mišinys lėmė trombocitų netekimą, o tai gali reikšti lizinį poveikį. Dalinė trombocitų aktyvacija arba lizė gali sukelti audinių regeneraciją po trombocitų injekcijos. Neaišku, kokias klinikines pasekmes šie pokyčiai gali sukelti. Tolesni tyrimai parodė tikslesnius aktyvacijos ar lizės matavimus ir įvertino skirtingą hipertoninių gliukozės mišinių su WB arba PRP klinikinį poveikį.
Gliukozės proliferacinė terapija yra paprasta ir nebrangi regeneracinė terapija, kuri sparčiai plečiasi ir remia klinikinius tyrimus. Šis tyrimas rodo fiziologinį mechanizmą, kuris, jei bus patvirtintas, galėtų padėti mums suprasti dalį proliferacinės terapijos regeneracinio mechanizmo.
Biomedicinos ir sveikatos informatika Misūrio universitete, Kanzaso miesto medicinos mokykloje, Kanzaso mieste, JAV
Žmonės tiriamieji: Visi šio tyrimo dalyviai davė sutikimą arba nedavė. Tarptautinė ląstelių medicinos draugija išdavė ICMS-2017-003 patvirtinimą. Toliau pateiktas protokolas buvo patvirtintas tolesniam naudojimui Tarptautinės ląstelių medicinos draugijos institucinės peržiūros tarybos: Pavadinimas: Trombocitais praturtintos plazmos vaistų išeigos apskaičiavimas remiantis pradiniu CBC trombocitų skaičiumi. Gyvūnai tiriamieji: Visi autoriai patvirtino, kad šiame tyrime nedalyvavo jokie gyvūnai ar audiniai. Interesų konfliktai: Pagal ICMJE vienodą informacijos atskleidimo formą visi autoriai pareiškia: Mokėjimo / paslaugų informacija: Visi autoriai pareiškia, kad negavo finansinės paramos iš jokios organizacijos pateiktam darbui. Finansiniai ryšiai: Visi autoriai pareiškia, kad šiuo metu ir per pastaruosius trejus metus neturi finansinių ryšių su jokia organizacija, kuri galėtų būti suinteresuota pateiktu darbu. Kiti ryšiai: Visi autoriai pareiškia, kad nėra jokių kitų ryšių ar veiklos, kuri galėtų turėti įtakos pateiktam darbui.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K ir kt. (2022 m. gegužės 17 d.) Gliukozės poveikis trombocitų skaičiui ir tūriui: reikšmė regeneracinei medicinai. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Autorių teisės priklauso Harrison ir kt., 2022 m. Tai yra atviros prieigos straipsnis, platinamas pagal „Creative Commons Attribution“ licencijos CC-BY 4.0 sąlygas. Leidžiamas neribotas naudojimas, platinimas ir atgaminimas bet kokioje terpėje, jei nurodomas originalus autorius ir šaltinis.