„Никога не се съмнявайте, че малка група от замислени, всеотдайни граждани могат да променят света. Всъщност, те са единствените там.“
Мисията на Cureus е да промени дългогодишния модел на медицинско публикуване, при който подаването на научни трудове може да бъде скъпо, сложно и отнемащо време.
Плазма, богата на тромбоцити/prp, тъканна регенерация, активиране на тромбоцитите, глюкозопролиферативна терапия, тромбоцити, пролиферативна терапия
Цитирайте тази статия като: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (17 май 2022 г.) Ефектът на глюкозата върху броя и обема на тромбоцитите: последици за регенеративната медицина. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Разтвори на богата на тромбоцити плазма (PRP) и хипертонични глюкозни разтвори се използват често за инжектиране в регенеративната медицина, понякога заедно. Ефектът на хипертоничната глюкоза върху лизиса и активирането на тромбоцитите не е бил докладван преди това. Тествахме ефекта на повишените концентрации на глюкоза върху броя на тромбоцитите и еритроцитите, както и върху клетъчния обем в PRP и пълна кръв (WB). Бързо частично намаляване на броя на тромбоцитите се наблюдава при всички глюкозни смеси, смесени с PRP или пълна кръв, което е в съответствие с частичния лизис. След първата минута броят на тромбоцитите остава стабилен, което предполага бърза акомодация на остатъчните тромбоцити до екстремна (>2000 mOsm) хипертоничност. След първата минута броят на тромбоцитите остава стабилен, което предполага бърза акомодация на остатъчните тромбоцити до екстремна (>2000 mOsm) хипертоничност. След първите минути броят на тромбоцитите остава стабилен, което показва бързото аккомодиране на окончателните тромбоцити до екстремален (>2000 mOsm) хипертонус. След първата минута броят на тромбоцитите остава стабилен, което показва бърза акомодация на остатъчните тромбоцити до екстремна (>2000 mOsm) хипертоничност.第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm）高渗状态。2000 mOsm）高渗状态。 След първите минути броят на тромбоцитите остава стабилен, което показва бързото адаптиране на окончателните тромбоцити към екстремалното (>2000 mOsm) хиперосмолярно състояние. След първата минута броят на тромбоцитите остава стабилен, което показва бърза адаптация на остатъчните тромбоцити към екстремно (>2000 mOsm) хиперосмоларно състояние.Концентрации на глюкоза от 25% и повече водят до значително увеличение на средния обем на тромбоцитите (MPV), което показва ранен етап на активиране на тромбоцитите. Необходими са допълнителни проучвания, за да се определи дали се случва лизис или активиране на тромбоцитите и дали хипертоничното инжектиране на глюкоза самостоятелно или в комбинация с PRP може да осигури допълнителна клинична полза.
През 50-те години на миналия век американският хирург Джордж Хакет открива, че може трайно да облекчи болките в ставите и гърба при много пациенти, като инжектира пролиферативен разтвор в сухожилията и връзките. Неговите експерименти върху зайци показват, че лечението, което той нарича пролиферативна терапия, кара сухожилията да се уголемят и укрепят. Хистологични изследвания потвърждават, че по време на този процес се произвежда нов колаген [1].
През първите няколко десетилетия бяха изпробвани много различни решения за разпределение. До 90-те години на миналия век повечето практикуващи лекари смятаха високите концентрации на глюкоза за най-безопасния и ефективен метод. Механизмът на действие обаче остава неясен.
През 20-ти век след работата на Хакет са проведени малко клинични проучвания. Въпреки това, през 2000-те години интересът се подновява и са проведени няколко успешни клинични изпитвания на пролиферативна терапия за лечение на болка в долната част на гърба [2], остеоартрит на коляното [3] и латерален епикондилит [4].
Регенерацията на тъканите изисква участието на стволови клетки. Следователно, високите концентрации на глюкоза трябва по някакъв начин да индуцират миграция, репликация и диференциация на стволовите клетки. Предполагаме, че тромбоцитите могат да действат като посредници и че високите концентрации на глюкоза могат да накарат тромбоцитите да освобождават цитокини и растежни фактори, като по този начин насърчават регенеративните процеси, особено миграцията на стволови клетки към области с високи концентрации на глюкоза.
Активирането на тромбоцитите винаги предшества повишаване на вътреклетъчния калций [5]. Liu et al. през 2008 г. показаха, че високите нива на глюкоза повишават активността на каналите за преходен рецепторен потенциал от каноничен тип 6 (TRPC6) в плазмената мембрана, което води до приток на калциеви йони в тромбоцитите [6]. Друго проучване показа, че излагането на маргиналната зона на микротубулите на калциеви йони причинява релаксация, разширяване и деформация на маргиналната зона, което от своя страна води до промяна на формата от дискова към сферична, което води до среден обем на тромбоцитите (MPV) [7].
Нашата хипотеза в това проучване е, че излагането на тромбоцитите на високи концентрации на глюкоза влияе върху маргиналната зона на микротубулите и вътреклетъчната среда, което води до повишаване на MPV.
Всички участници подписаха формуляр за информирано съгласие, след като им бяха обяснени подробностите за проучването и преди получаване на пробите. В това проучване бяха използвани само PRP проби с хематокрит по-голям от 2%, така че броят на еритроцитите и средният корпускуларен обем на червените кръвни клетки (MCV) да могат да бъдат включени за сравнение.
Проучването е проведено в четири фази, като първата фаза е PRP, а останалите фази са пълна кръв (Таблица 1). Както е описано по-рано [8], всички относителни центробежни сили (RCF, g-сила) са изчислени от средната точка (Rmid, в cm) на кръвния стълб в центробежната спринцовка. Избрахме да използваме MPV като маркер за сенсибилизация на тромбоцитите и броя на тромбоцитите като индикатор за потенциален лизис на тромбоцитите, като и двете могат лесно да бъдат измерени на стандартни хематологични анализатори.
В първата фаза 47 доброволци дариха кръвни проби – една епруветка с етилендиаминтетраоцетна киселина (EDTA) и една проба от пълна кръв с PRP (антикоагулирана с натриев цитрат (NaCl, 3%)) (Таблица 1). Поставете люлеещия се механизъм в епруветката незабавно. Пълна кръвна картина (ПКК) беше извършена на EDTA проби в три екземпляра, а пробите с NaCl бяха анализирани в три екземпляра за ПКК анализ, след което PRP беше приготвен по различни методи, описани по-горе [8]. Всички PRP проби бяха приготвени чрез центрофугиране при 900–1000 g. Всяка PRP проба се смесва на вихров миксер за 5–10 секунди, след което се разделят пет аликвотни части от 0,5 ml в епруветки.
За да се оцени ефектът от експозицията на тромбоцитите върху повишените концентрации на глюкоза, равни количества (0,5 ml) от 0%, 5%, 12,5%, 25% и 50% глюкоза във вода бяха смесени с проби от тромбоцити, за да се получат 0%, 2,5%, 6,25%, 12,5% ​​и 25% концентрации на глюкозната смес, и епруветките бяха смесени на клатачка за епруветки в продължение на 15 минути. TAC на всяка смес беше анализиран трикратно след 15 минути. Броят на тромбоцитите (PLT), броят на еритроцитите, MCV и MPV бяха осреднени за всяка епруветка, а средният брой на тромбоцитите, броят на еритроцитите, MCV и MPV бяха изчислени за всички PRP проби.
След завършване на първата фаза от събирането на данни, забелязахме значително увеличение на обема на тромбоцитите в PRP тромбоцитите след добавянето на D50W. PRP тромбоцитите не представляват непременно всички тромбоцити в кръвта, а PRP средата се различава от WB средата. Поради това решихме да проведем втора фаза на изпитване на ефекта от добавянето на D50W към пълна кръв.
За втория кръг избрахме размер на извадката от 30 въз основа на резултатите от първата серия, както е описано в раздела „Анализ“. В тази серия 20 доброволци дариха кръвни проби (Таблица 1). Пълна кръв (1,8 ml) беше изтеглена в 3 ml спринцовка и антикоагулирана с 0,2 ml 40% NaCl. Спринцовката с пълна кръв беше смесена в продължение на пет секунди с вихров миксер и пълната кръвна проба (ПКК) беше анализирана трикратно. След анализа, антикоагулираната кръв беше добавена към 2 ml 50% глюкоза в 5 ml спринцовка (крайната концентрация на глюкоза беше приблизително 25% (D25)) и поставена в епруветка за разклащане за 30 минути. След 30 минути, D25/ПКК в спринцовки с пълнозърнест тест (WB) бяха анализирани трикратно. Броят на тромбоцитите, броят на еритроцитите (RBC), MCV и MPV на спринцовка бяха осреднени и средните PLT, броят на еритроцитите, MCV и MPV бяха изчислени за всяка проба преди и след добавяне на глюкоза.
Тъй като тромбоцитите в пълна кръв обикновено са изложени на хипертонична глюкоза по време на пролиферативна глюкозна терапия поради минимално инвазивно инжектиране и не е обичайно да се комбинира PRP с хипертонична глюкоза непосредствено преди инжектирането, решихме да изследваме хипертоничната глюкоза в комбинация с WB в Раздел 1. Стъпка трета и четвърта. На всеки етап 20 доброволци дариха 7-8 ml ACD-A (киселина, съдържаща тринатриев цитрат (22,0 g/l), лимонена киселина (8,0 g/l) и глюкоза (24,5 g/l), разтвор на декстрозен цитрат) за кръвни антикоагуланти (Таблица 1). Само смеси от глюкоза по-големи от 12,5% бяха използвани за определяне на праговия процент, свързан с повишаване на MPV. На третия етап 1 ml кръв се поставя в епруветка. След това кръвта се разбърква на вихров миксер в продължение на 10 секунди, като се добавят 1 ml 30% глюкоза, 40% глюкоза или 50% глюкоза към епруветката, за да се получи крайна концентрация на глюкоза съответно 15%, 20% и 25%. Кръвните проби с глюкоза са анализирани за пълния кръвен анализ веднага след смесването и са повтаряни на всеки две минути в продължение на 30 минути.
По време на първоначалното смесване, добавянето на 1:1 хипертонична глюкоза и WB или PRP излага тромбоцитите на концентрации над 25% за няколко секунди. В четвъртата стъпка, за да оценим ефекта на хипертоничната глюкоза с минимални начални пикови концентрации и да тестваме горната граница на ефекта на глюкозата, добавихме само малко количество кръв към D25W или D50W. Поставете 1 ml D25W или D50W в епруветка и добавете 0,2 ml WB, докато разбърквате пробата на вортекс в продължение на 10 секунди. В тези случаи кръвта беше изложена на глюкоза в концентрация приблизително 20% над крайната концентрация, а не 50% над крайната концентрация, както във Фаза 3, което доведе до крайни концентрации на глюкоза от 20,8% и 41,6%. Смесените проби бяха анализирани в същия интервал от време, както в стъпка 3.
В първата стъпка от всяка серия разреждания на глюкоза бяха взети 30 проби, тъй като това беше подходящият размер на извадката за пилотното проучване [9]. В края на всяка фаза (включително първата фаза) се оценява адекватността на размера на извадката, като се използва формулата, използвана за определяне на размера на извадката, необходим за оценка на средната стойност на непрекъснатата променлива резултат в една популация. Формула n = Z2 x SD2 /E2. В това уравнение Z е Z-резултатът, SD е стандартното отклонение, а E е желаната грешка [10]. Нашата алфа е 0,05, което съответства на Z стойност от 1,96 и очакваме грешка от 5 (в проценти). Следователно решаваме за n = (1,962 x SD2)/52. Резултатите показват, че размерът на извадката, необходим за всеки етап, е по-малък от действително събрания брой.
По време на периоди 1, 3 и 4, използващи повече от една концентрация на глюкоза, ефектът от различните концентрации на глюкоза беше анализиран чрез сравняване на фракционната промяна между време 0 и всяко следващо време (фаза 1 на 15 минути, период 3 на 15 минути и четири на 15 секунди, след това на всеки две минути.) Скоростите на промяна за всеки времеви период бяха сравнени с помощта на U-теста на Ман-Уитни, тъй като данните не следваха нормално разпределение, определено от теста за нормалност на Шапиро-Уилк. Тъй като в първата, третата и четвъртата стъпка (общо пет) беше извършен анализ 1 към 1 на няколко групи (пет), беше извършена корекция на Бонферони, за да се коригира желаната алфа стойност до ≤0,01, но не ≤0,05.
Намаляване на броя на тромбоцитите при всички концентрации на хипертонична декстроза и повишаване на MPV в PRP тромбоцитите при концентрация на декстроза >12,5%: Броят на PRP тромбоцитите се е увеличил от един до пет пъти концентрацията в сравнение с изходната пълна кръв, като е варирал в зависимост от метода (не е показано). Намаляване на броя на тромбоцитите при всички концентрации на хипертонична декстроза и повишаване на MPV в PRP тромбоцитите при концентрация на декстроза >12,5%: Броят на PRP тромбоцитите се е увеличил от един до пет пъти концентрацията в сравнение с изходната пълна кръв, варирайки в зависимост от метода (не е показано). Увеличение на количеството на тромбоцитите при всички концентрации на хипертонична декстроза и увеличаване на MPV в тромбоцитите на PRP при концентрация на декстроза > 12,5%: броят на тромбоцитите на PRP се увеличи с 1-5 пъти в сравнение с изходната целна кръв, в зависимост от метода (не е показано). Намален брой тромбоцити при всички хипертонични концентрации на декстроза и повишен MPV в PRP тромбоцитите при >12,5% ​​концентрация на декстроза: Броят на PRP тромбоцитите се е увеличил 1-5 пъти в сравнение с изходната пълна кръв, в зависимост от метода (не е показано). ).在> 12,5% 的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 血小板中MPV增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异（未描述）。 При концентрация на глюкоза >12,5% ​​, високата концентрация на глюкоза намалява кръвната картина, а MPV на PRP кръвта се увеличава: в сравнение с 与基线全血, кръвната картина на PRP се увеличава от 1 до 5 пъти спрямо концентрацията (не е описана). При концентрация на глюкоза >12,5% всички концентрации на хипертонична глюкоза намаляват броя на тромбоцитите, а MPV се повишава в тромбоцитите PRP: броят на тромбоцитите PRP се увеличава от 1- до 5-кратни концентрации в сравнение с изходните концентрации на клетъчната кръв, в зависимост от метода (не е описано). При концентрации на глюкоза >12,5%, всички хипертонични концентрации на глюкоза намаляват броя на тромбоцитите и увеличават MPV в PRP тромбоцитите: броят на PRP тромбоцитите се увеличава от 1 до 5 пъти в сравнение с изходните концентрации в пълна кръв, в зависимост от метода (както е описано).Фигура 1 показва, че броят на тромбоцитите е намалял с почти 75% след разреждане във вода и с 20-30% след 15 минути разреждане с различни концентрации на глюкоза в сравнение с изходното ниво на PRP и разреждане 1:1, коригирано за обем (1-k1 с корекция на обема). k -1 разреждане).1 разреждане).
Броят на клетките във всяко разреждане се изразява като част от първоначалния брой преди разреждането.
MPV намалява минимално по време на производството на PRP, без по-нататъшна промяна в концентрациите на разреждане до 12,5% във вода или глюкоза (включително 25% PRP глюкозни смеси) и се увеличава с повече от 20% след разреждане в 50% глюкозен разтвор (фиг. 2). За разлика от това, еритроцитите не показват значителна промяна в обема при никое друго разреждане освен H2O.
Средният обем на клетките във всяко разреждане се изразява като процент от първоначалния обем преди разреждането.
Подобно, но по-слабо изразено намаление на броя на тромбоцитите и повишаване на CVR са наблюдавани при BC, изложени на 50% глюкоза (за формулиране с 25% глюкоза). Таблица 2 сравнява броя на клетките и клетъчния обем в пълна кръв, разредена в 50% декстроза, с данни от фаза 1 PRP, разредени в 50% декстроза. Промените в броя на еритроцитите (RBC) и MCV на RBC не бяха очевидни и не бяха фокус на нашето внимание.
SD = стандартно отклонение, MD = средна разлика между групите, SE = стандартно отклонение на средната разлика, RBC = еритроцити, PLT = тромбоцити, PRP = богата на тромбоцити плазма, WB = пълна кръв
След добавяне на D50W към WB, процентната коригирана за разреждане загуба на тромбоцити е 7,7% (310±73 спрямо 286±96) в сравнение със 17,8% за разреждане на PRP в D50W (664±348 спрямо 544±277). MPV WB се е увеличил с 16,8% (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6), докато MPV PRP се е увеличил с 26% (9,2 ± 0,8 спрямо 11,6 ± 0,7). Въпреки че средните разлики както в намаляването на броя на тромбоцитите, така и в увеличаването на MPV (минимално-процентния обем) са били значително по-големи при PRP, промените в намаляването на броя на тромбоцитите в рамките на WB са били почти значими (310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), а увеличението на MPV е било значимо (10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Въпреки че средните разлики както в намаляването на броя на тромбоцитите, така и в увеличаването на MPV (минимално-процентния обем) са били значително по-големи при PRP, промените в намаляването на броя на тромбоцитите в рамките на WB са били почти значими (310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), а увеличението на MPV е било значимо (10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Въпреки че средните разлики както в намаляването на броя на тромбоцитите, така и в повишаването на CVR са били значително по-големи при PRP, промените в намаляването на броя на тромбоцитите в рамките на WB са били почти значими (310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06).увеличението на MPV беше значително (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Увеличението на MPV беше значително (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的＄(310 ± 73 至286 ± 96 (-7,7%)；p = .06）和MPV的增加是显着的（10,1 ± 0,5 到11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).尽管 PRP 在 血小板 计数 和 和 增加 方面 的 平均 差异 显着 大 ， 但 但 内血小板 计数减少 的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7,7%) ； p = .06）和MPV 的增加是显着的＄(10,1) ± 0,5 ± 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).Промяната в намаляването на броя на тромбоцитите в рамките на WB беше почти значима (от 310 ± 73 до 286 ± 96 (-7,7%); p = 0,06), въпреки че PRP имаше значително по-големи средни разлики в намаляването на броя на тромбоцитите и повишаването на MPV, а повишаването на MPV беше значимо.(от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (от 10,1 ± 0,5 до 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001).
За да се наблюдава значителна промяна в MPV, е необходима крайна концентрация от 20% глюкоза, но промяната в MPV е по-изразена при крайна концентрация от 25%. Загубата на тромбоцити се стабилизира след първоначалния спад. Забелязахме първоначално рязко понижение на CVR, но CVR се възстанови бързо при крайна концентрация на глюкоза от 25%, което беше значително по-високо от нивата на CVR, наблюдавани при крайните концентрации на глюкоза от 20% и 15% (фиг. 3 и вляво от таблица 3; защрихованите полета). p-стойностите ≤ алфа с корекция на Bonferroni от 0,01 показват и първоначален рязък спад в броя на PLT, наблюдаван в началната фаза от 0-15 s, след което остава стабилен (от 15 s до 30 min; вляво от таблица 4).
Добавянето на различни концентрации на глюкоза към пълна кръв доведе до първоначално бързо намаляване на MPV, последвано от зависимо от концентрацията възстановяване с повече от 20%. Легендата показва концентрацията на глюкоза след разреждане. D15, D20 и D25 бяха проведени в разреждане 1:1. D21 и D41 бяха проведени в разреждане 1:5.
Таблица 4 показва промяната в броя на тромбоцитите при разреждане с хипертонична глюкоза. Наблюдавахме дозозависима връзка между незабавното понижение на броя на PLT при разреждане 1:1 и при разреждане 1:5. Сравнявайки разрежданията 1:1 като една група с разрежданията 1:5, групата 1:1 имаше незабавно понижение на броя на тромбоцитите по-малко от групата 1:5 - 66±48 000 (23%) спрямо 99±69 000 (37%), p = 0,014) в групата 1:5. След първоначален спад в първата точка на измерване, броят на тромбоцитите като процент от глюкозата се стабилизира (фиг. 4).
Когато пълна кръв се добави към глюкоза в съотношение 1:1, броят на тромбоцитите се намалява с около 25%. Когато обаче пълна кръв се добави в съотношение 1:5, намалението е много по-голямо – около 50%.
Резултатите от 41% глюкоза увеличи MPV по-бързо и по-драстично от 25% или 21%. Резултатите от MPV са показани на Фигура 3. При всички други разреждания не се наблюдава незабавно първоначално намаление на MPV след добавяне на 50% глюкоза. При използване на 25% глюкоза (концентрация на глюкоза 20,8% при крайното разреждане), промяната в MPV беше сравнима с промяната в 20% глюкоза при разреждане 1:1 (Фиг. 3). Въпреки че промените в MPV първоначално бяха по-големи при 41% смесена концентрация, отколкото при 25%, разликата в MPV между 41% и 25% след 16 минути вече не беше значителна (Таблица 3, вдясно). Интересно е също, че 25% глюкоза увеличи MPV по-ефективно от 20,8%.
Това in vitro проучване частично потвърди нашата хипотеза. Той показа потенциален частичен лизис на тромбоцитите чрез примес на декстроза, бърза акомодация на тромбоцитите до екстремна хипертоничност и значително повишаване на MPV в отговор на > 25% концентрации на хипертонична декстроза. Той показа потенциален частичен лизис на тромбоцитите чрез примес на декстроза, бърза акомодация на тромбоцитите до екстремна хипертоничност и значително повишаване на MPV в отговор на > 25% концентрации на хипертонична декстроза. Той показа потенциален частичен лизис на тромбоцитите примеси декстроза, бърза аккомодация на тромбоцитите до екстремален хипертонус и значително повишаване на MPV в отговор на хипертонична концентрация на декстроза > 25%. Той показа потенциален частичен лизис на тромбоцитите с декстроза, бърза акомодация на тромбоцитите до екстремна хипертоничност и значително повишаване на MPV в отговор на хипертонични нива на декстроза >25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端高渗，以及响应> 25% 浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 极端 高渗 ， 以及响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Той показва потенциален частичен лизис на тромбоцитовите смеси с глюкоза, бърза адаптация на тромбоцитите към екстремалния хипертонус и значително увеличение на MPV в отговор на концентрацията на хипертонична глюкоза > 25%. Това показва потенциален частичен лизис на тромбоцитите от глюкозни смеси, бърза адаптация на тромбоцитите към екстремна хипертоничност и значително повишаване на MPV в отговор на хипертонична глюкоза >25%.Първоначалното увеличение е било максимално при експозиция на глюкоза от 41,6%, но увеличението на MPV достига 25% експозиция на глюкоза приблизително 20 минути след експозицията.
Концентрацията на тромбоцитите се влияе от глюкозата. Забелязахме, че количеството PLT намалява при всички разреждания на глюкозата. Рязкото спадане на броя на тромбоцитите в H2O (0%) разреждания от PRP серията може да е свързано с осмотичен лизис. Алтернативно, това може да е артефакт, причинен от струпване на тромбоцити, но това е в контраст с липсата на промяна в MPV при това разреждане. Това откритие означава, че някои тромбоцити са много чувствителни към хипоосмоларност.
При всички разреждания на глюкоза 1:1, количеството PLT намалява с 20-30%, дори до D5W (хипотонично при 252 mOsm), което може да показва специфичен неосмотичен ефект на глюкозата, тъй като както PLT, така и MPV остават непроменени при трикратно увеличение на концентрацията на глюкоза от D5W до D25W. Всъщност, концентрациите на PLT имат тенденция леко да се увеличават с увеличаване на осмоларността.
Намаляването на PLT между разреждания 1:1 и 1:5 означава, че ефектът на разтваряне зависи от началната и крайната концентрация на глюкоза. Ако зависеше само от началната концентрация, тогава би се очаквала разлика в намаляването на PLT между концентрациите 1:1. Но ние не очакваме. Ако лизисният ефект зависи само от крайната концентрация на глюкоза, тогава не очакваме голяма разлика между 20% разреждане 1:1 и 20,8% разреждане 1:5. И въпреки това го направихме.
Ако възникне загуба на тромбоцити поради лизис на тромбоцитите, се образува частичен лизат, след което цитокини и растежни фактори се освобождават в извънклетъчната среда. Няколко проучвания показват, че тромбоцитният лизат е почти толкова ефективен, колкото PRP като разтвор за пролиферация [11]. Самият PRP е доказано ефективен разтвор за лечение на пролиферация [12-14].
Неактивните тромбоцити циркулират под формата на диск, подсилен с няколко вътрешни структури. По време на активирането си те приемат по-сферична или амебовидна форма, което води до увеличаване на обема. Увеличаването на обема изисква увеличаване на повърхността, което е резултат от екструзията на отворената тубулна система (OCS) и добавянето на екзоцитни гранули към мембраната. Остава да се определи дали увеличението на MPV, предизвикано от хипертонична глюкоза, включва един или и двата механизма, но ако е вторият, тогава увеличението на MPV би показвало дегранулация.
Това проучване показа, че излагането на високи концентрации на глюкоза върху PRP или тромбоцити от пълна кръв води до повишаване на MPV в рамките на 15 минути с концентрация на глюкоза съответно 25% и 41,6%.
Увеличението на MPV на тромбоцитите може да се дължи на разширяване на околните микротубулни сплетения в отговор на калциевия приток. Liu et al. Доказано е, че глюкозата медиира калциевия приток през тромбоцитния TRPC6 канал [6]. Нашата хипотеза е, че глюкозата индуцира отпускане на микротубулните сплетения, което води до повишаване на MPV и сенсибилизация и/или активиране на тромбоцитите. Съдейки по нашите резултати обаче, това е само част от историята. В нашите тестове, никоя концентрация под D25W не е довела до повишаване на MPV. Като се има предвид, че не сме тествали излагане на концентрации на глюкоза между 12,5% и 25%, нашите резултати от фаза 1 показват, че може да има праг в този диапазон от концентрации на глюкоза, който води до повишаване на MPV. По-нататъшни тестове в етапи 3 и 4 показаха, че 20-25% глюкоза изглежда е прагът за това, но остава неясно защо.
Наблюдавахме също така ~9% намаление на MPV след центрофугиране. Не е ясно дали това намаление на MPV се дължи на по-големи и по-плътни тромбоцити, уловени в слоя на еритроцитите на центрофугата. Това наблюдение може да е важно за клиницистите, тъй като може да означава, че PRP тромбоцитите са по-малка и по-малко плътна подгрупа от WB тромбоцитите.
В предишно проучване показахме, че приготвянето на PRP чрез ръчни методи е евтино [8]. Ако глюкозата сенсибилизира тъканните тромбоцити или PRP, правейки ги по-податливи на активиране, или ако PRP се произвежда с частични лизатни свойства, това може да подобри регенерацията и да намали необходимостта от терапия. Следователно, комбинацията от PRP и високо концентрирана глюкоза може да бъде по-рентабилна от самостоятелното приложение на PRP или глюкоза.
Нашето проучване има няколко недостатъка. Първо, използваме PRP, получен по няколко различни метода. Това може да доведе до противоречиви резултати. Второ, не успяхме да извършим биохимичен анализ на нито една от нашите проби, за да определим по-точно дали е настъпила активация на тромбоцитите. Бихме искали да измерим P-селектин, тромбоцитен фактор 4, моноцитни тромбоцитни агрегати или други маркери за активация на тромбоцитите, за да разберем по-добре степента или наличието на дегранулация на алфа гранулите, но това е извън обхвата на това проучване. Трето, не успяхме да потвърдим чрез електронна микроскопия или други методи, че повишаването на MPV в тромбоцитите, изложени на глюкоза, се дължи на ефекта върху сплитанията на микротубулите.
Смеси от WB или PRP с 25% глюкоза повишават MPV, сигнализирайки за началото на активиране на тромбоцитите, въпреки че това проучване не демонстрира прогресия на агрегацията или дегранулацията. Хипертоничната глюкозна смес води до загуба на тромбоцити, което вероятно представлява литичен ефект. Частичното активиране или лизис на тромбоцитите може да причини регенерация на тъканите след инжектиране на тромбоцити. Не е ясно до какви клинични последици могат да доведат тези промени. По-нататъшни проучвания демонстрират по-точни измервания на активирането или лизиса и оценяват различните клинични ефекти на хипертоничните глюкозни смеси с WB или PRP.
Глюкозопролиферативната терапия е проста и евтина регенеративна терапия, която бързо се разраства и подкрепя клиничните изследвания. Това проучване предполага физиологичен механизъм, който, ако бъде потвърден, би могъл да ни помогне да разберем част от регенеративния механизъм на пролиферативната терапия.
Биомедицинска и здравна информатика в Университета на Мисури, Медицински факултет на Канзас Сити, Канзас Сити, САЩ
Човешки субекти: Всички участници в това проучване са дали или не са дали съгласие. Международното дружество за клетъчна медицина е издало одобрение ICMS-2017-003. Следният протокол е одобрен за по-нататъшна употреба от Институционалния съвет за преглед на Международното дружество за клетъчна медицина: Заглавие: Изчисляване на добива на лекарство от богата на тромбоцити плазма въз основа на изходния брой тромбоцити в пълна кръвна картина. Животни субекти: Всички автори потвърдиха, че в това проучване не са участвали животни или тъкани. Конфликт на интереси: В съответствие с Единния формуляр за разкриване на информация на ICMJE, всички автори декларират следното: Информация за плащане/услуга: Всички автори декларират, че не са получили финансова подкрепа от никоя организация за представената работа. Финансови взаимоотношения: Всички автори декларират, че понастоящем или през последните три години нямат финансови взаимоотношения с никоя организация, която може да се интересува от представената работа. Други взаимоотношения: Всички автори декларират, че нямат други взаимоотношения или дейности, които могат да повлияят на представената работа.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al. (17 май 2022 г.) Ефектът на глюкозата върху броя и обема на тромбоцитите: последици за регенеративната медицина. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Авторско право 2022 Harrison et al. Това е статия с отворен достъп, разпространявана съгласно условията на Creative Commons Attribution License CC-BY 4.0. Неограничено използване, разпространение и възпроизвеждане във всякакъв носител са разрешени, при условие че са посочени оригиналният автор и източник.