"Huwag mag-alinlangan na ang isang maliit na grupo ng maalalahanin at dedikadong mga mamamayan ay kayang baguhin ang mundo. Sa katunayan, ito lamang ang naroon."
Ang misyon ni Cureus ay baguhin ang matagal nang modelo ng paglalathala ng medisina, kung saan ang pagsusumite ng pananaliksik ay maaaring maging magastos, kumplikado, at matagal.
Platelet-rich plasma/prp, tissue regeneration, platelet activation, glucose proliferative therapy, mga platelet, proliferative therapy
Banggitin ang artikulong ito bilang: Harrison TE, Bowler J, Reeves K, et al. (Mayo 17, 2022) Ang epekto ng glucose sa bilang at dami ng platelet: mga implikasyon para sa regenerative medicine. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
Ang platelet-rich plasma (PRP) at hypertonic glucose solutions ay karaniwang ginagamit para sa iniksyon sa regenerative medicine, minsan ay magkasama. Ang epekto ng hypertonic glucose sa platelet lysis at activation ay hindi pa naiuulat noon. Sinubukan namin ang epekto ng mataas na konsentrasyon ng glucose sa bilang ng platelet at erythrocyte, pati na rin ang dami ng cell sa PRP at whole blood (WB). Isang mabilis na bahagyang pagbawas sa bilang ng platelet ang naganap sa lahat ng pinaghalong glucose na hinaluan ng PRP o whole blood, na naaayon sa bahagyang lysis. Pagkatapos ng unang minuto, nanatiling matatag ang bilang ng platelet, na nagmumungkahi ng mabilis na akomodasyon ng mga natitirang platelet sa matinding (>2000 mOsm) hypertonicity. Pagkatapos ng unang minuto, nanatiling matatag ang bilang ng platelet, na nagmumungkahi ng mabilis na akomodasyon ng mga natitirang platelet sa matinding (>2000 mOsm) hypertonicity. После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю акктомбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю акктомодациромтостоцх экстремального (>2000 мОсм) гипертонуса. Pagkatapos ng unang minuto, nanatiling matatag ang bilang ng platelet, na nagpapahiwatig ng mabilis na akomodasyon ng mga natitirang platelet sa matinding (>2000 mOsm) hypertonicity.第一分钟后，血小板计数保持稳定，表明残余血小板迅速适应极端（> 2000 mOsm。2000 mOsm）高渗状态。 После первой минуты количество тромбоцитов оставалось стабильным, что указывает на быструю адаптацитов оставалось стабильным экстремальному (>2000 мОсм) гиперосмолярному состоянию. Pagkatapos ng unang minuto, nanatiling matatag ang bilang ng platelet, na nagpapahiwatig ng mabilis na pag-aangkop ng mga natitirang platelet sa sukdulang (>2000 mOsm) hyperosmolar na estado.Ang konsentrasyon ng glucose na 25% pataas ay nagresulta sa isang makabuluhang pagtaas sa mean platelet volume (MPV), na nagpapahiwatig ng isang maagang yugto ng pag-activate ng platelet. Kinakailangan ang mga karagdagang pag-aaral upang matukoy kung ang platelet lysis o activation ay nangyayari at kung ang hypertonic glucose injection lamang o kasama ng PRP ay maaaring magbigay ng karagdagang klinikal na benepisyo.
Noong dekada 1950, natuklasan ng Amerikanong siruhano na si George Hackett na maaari niyang permanenteng mapawi ang pananakit ng kasukasuan at likod sa maraming pasyente sa pamamagitan ng pag-iniksyon ng proliferative solution sa mga tendon at ligament. Ipinakita ng kanyang mga eksperimento sa mga kuneho na ang paggamot, na tinawag niyang proliferative therapy, ay nagiging sanhi ng paglaki at paglakas ng mga tendon. Kinumpirma ng mga pag-aaral sa histolohiya na ang mga bagong collagen ay nalilikha sa prosesong ito [1].
Sa mga unang ilang dekada, maraming iba't ibang solusyon sa pamamahagi ang sinubukan. Pagsapit ng dekada 1990, itinuring ng karamihan sa mga practitioner ang mataas na konsentrasyon ng glucose bilang ang pinakaligtas at pinakamabisang paraan. Gayunpaman, nananatiling hindi malinaw ang mekanismo ng pagkilos.
Kakaunti lamang ang mga klinikal na pag-aaral na isinagawa noong ika-20 siglo kasunod ng mga gawa ni Hackett. Gayunpaman, noong dekada 2000, nagkaroon ng panibagong interes at ilang matagumpay na klinikal na pagsubok ng proliferative therapy ang natapos para sa paggamot ng pananakit ng mababang bahagi ng likod [2], osteoarthritis ng tuhod [3], at lateral epicondylitis [4].
Ang pagbabagong-buhay ng tisyu ay nangangailangan ng pakikilahok ng mga stem cell. Samakatuwid, ang mataas na konsentrasyon ng glucose ay dapat na kahit papaano ay magdulot ng paglipat, replikasyon, at pagkakaiba-iba ng mga stem cell. Ipinapalagay namin na ang mga platelet ay maaaring kumilos bilang mga mensahero at ang mataas na konsentrasyon ng glucose ay maaaring maging sanhi ng paglabas ng mga cytokine at growth factor ng mga platelet, sa gayon ay nagtataguyod ng mga proseso ng pagbabagong-buhay, lalo na ang paglipat ng stem cell sa mga lugar na may mataas na konsentrasyon ng glucose.
Ang pag-activate ng platelet ay palaging nauuna sa pagtaas ng intracellular calcium [5]. Ipinakita nina Liu et al. noong 2008 na ang mataas na antas ng glucose ay nagpapataas ng aktibidad ng transient receptor potential canonical type 6 (TRPC6) channels sa plasma membrane, na humahantong sa pagdagsa ng mga calcium ion sa mga platelet [6]. Ipinakita ng isa pang pag-aaral na ang pagkakalantad ng microtubule marginal zone sa mga calcium ion ay nagdudulot ng pagrerelaks, paglawak, at deformasyon ng marginal zone, na siya namang nagdudulot ng pagbabago sa hugis mula disc patungo sa spherical, na nagreresulta sa mean platelet volume (MPV) [7].
Ang aming hipotesis sa pag-aaral na ito ay ang pagkakalantad ng mga platelet sa mataas na konsentrasyon ng glucose ay nakakaapekto sa marginal zone ng microtubule at intracellular na kapaligiran, na humahantong sa pagtaas ng MPV.
Pumirma ang lahat ng kalahok ng isang informed consent form matapos maipaliwanag ang mga detalye ng pag-aaral at bago matanggap ang mga sample. Sa pag-aaral na ito, tanging ang mga PRP sample na may hematocrit na higit sa 2% ang ginamit upang maisama ang bilang ng erythrocyte (erythrocyte) at ang mean corpuscular volume ng mga pulang selula ng dugo (MCV) para sa paghahambing.
Ang pag-aaral ay isinagawa sa apat na yugto, ang unang yugto ay PRP at ang natitirang mga yugto ay whole blood (Talahanayan 1). Gaya ng nailarawan noon [8], lahat ng relatibong centrifugal forces (RCF, g-force) ay kinalkula mula sa midpoint (Rmid, sa cm) ng blood column sa centrifugal syringe. Pinili naming gamitin ang MPV bilang marker ng platelet sensitization at platelet count bilang tagapagpahiwatig ng potensyal na platelet lysis, na parehong madaling masukat sa mga karaniwang hematology analyzer.
Sa unang yugto, 47 boluntaryo ang nag-donate ng mga sample ng dugo—isang tubo ng ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) at isang PRP whole blood sample (anticoagulated na may sodium citrate (NaCl, 3%)) (Talahanayan 1). Ilagay agad ang rocker sa tubo. Isinagawa ang kumpletong bilang ng dugo (CBC) sa mga sample ng EDTA nang tatlong beses, at sinuri ang mga sample ng NaCl nang tatlong beses para sa pagsusuri ng CBC, at pagkatapos ay inihanda ang PRP gamit ang iba't ibang pamamaraan na inilarawan sa itaas [8]. Lahat ng mga sample ng PRP ay inihanda sa pamamagitan ng centrifugation sa 900–1000 g. Haluin ang bawat sample ng PRP sa isang vortex mixer sa loob ng 5–10 segundo, pagkatapos ay hatiin ang limang 0.5 ml aliquot sa mga tubo.
Upang masuri ang epekto ng pagkakalantad sa platelet sa mataas na konsentrasyon ng glucose, ang pantay na dami (0.5 ml) ng 0%, 5%, 12.5%, 25%, at 50% glucose sa tubig ay hinaluan ng mga sample ng platelet upang makuha ang 0%, 2.5%, 6.25%, 12.5%, at 25% na konsentrasyon ng pinaghalong glucose at hinalo ang mga tubo sa isang test tube shaker sa loob ng 15 minuto. Ang TAC ng bawat pinaghalong sangkap ay sinuri nang tatlong beses pagkatapos ng 15 minuto. Ang bilang ng platelet (PLT), bilang ng RBC, MCV, at MPV ay kinalkula para sa bawat tubo, at ang mean na bilang ng platelet, bilang ng RBC, MCV, at MPV ay kinalkula para sa lahat ng mga sample ng PRP.
Matapos makumpleto ang unang yugto ng pangongolekta ng datos, napansin namin ang isang makabuluhang pagtaas sa dami ng platelet sa mga PRP platelet pagkatapos ng pagdaragdag ng D50W. Hindi kinakailangang kumakatawan ang mga PRP platelet sa lahat ng platelet sa dugo, at ang PRP medium ay naiiba sa WB medium. Samakatuwid, napagpasyahan naming magsagawa ng pangalawang yugto ng pagsubok sa epekto ng pagdaragdag ng D50W sa whole blood.
Para sa ikalawang round, pumili kami ng laki ng sample na 30 batay sa mga resulta mula sa unang serye, gaya ng inilarawan sa seksyon ng Pagsusuri. Sa seryeng ito, 20 boluntaryo ang nag-donate ng mga sample ng dugo (Talahanayan 1). Ang whole blood (1.8 ml) ay kinuha sa isang 3 ml na hiringgilya at nilagyan ng anticoagulate na may 0.2 ml 40% NaCl. Ang whole blood syringe ay hinalo sa loob ng limang segundo gamit ang vortex mixer at ang CBC ay sinuri nang tatlong beses. Pagkatapos ng pagsusuri, ang anticoagulated na dugo ay idinagdag sa 2 ml ng 50% glucose sa isang 5 ml na hiringgilya (ang huling konsentrasyon ng glucose ay humigit-kumulang 25% (D25) at inilagay sa isang shake tube sa loob ng 30 minuto. Pagkatapos ng 30 minuto, ang D25/CBC sa mga WB syringe ay sinuri nang tatlong beses. Ang bilang ng platelet, bilang ng RBC, MCV, at MPV bawat hiringgilya ay na-average, at ang mean PLT, bilang ng RBC, MCV, at MPV ay kinalkula para sa bawat sample bago at pagkatapos magdagdag ng glucose.
Dahil ang mga platelet sa whole blood ay karaniwang nalalantad sa hypertonic glucose habang isinasagawa ang proliferative glucose therapy dahil sa minimally invasive injection, at hindi karaniwan na pagsamahin ang PRP sa hypertonic glucose bago ang injection, napagpasyahan naming pag-aralan ang hypertonic glucose kasama ang WB sa Seksyon 1. Hakbang Tatlo at apat. Sa bawat yugto, 20 boluntaryo ang nag-donate ng 7-8 ml ng ACD-A (acid na naglalaman ng trisodium citrate (22.0 g/l), citric acid (8.0 g/l) at glucose (24.5 g/l), solution dextrose citrate) para sa mga blood anticoagulant (Talahanayan 1). Tanging ang mga pinaghalong glucose na higit sa 12.5% ​​​​ang ginamit upang matukoy ang threshold percentage na nauugnay sa pagtaas ng MPV. Sa ikatlong yugto, 1 ml ng dugo ang inilalagay sa isang test tube. Pagkatapos ay haluin ang dugo sa isang vortex mixer sa loob ng 10 segundo sa pamamagitan ng pagdaragdag ng 1 ml ng 30% glucose, 40% glucose, o 50% glucose sa tubo upang makuha ang pangwakas na konsentrasyon ng glucose na 15%, 20%, at 25%, ayon sa pagkakabanggit. Ang mga sample ng glucose sa dugo ay sinuri para sa CBC kaagad pagkatapos ihalo at inulit bawat dalawang minuto sa loob ng 30 minuto.
Sa unang paghahalo, ang pagdaragdag ng 1:1 hypertonic glucose at WB o PRP ay naglalantad sa mga platelet sa mga konsentrasyon na higit sa 25% sa loob ng ilang segundo. Sa ikaapat na hakbang, upang masuri ang epekto ng hypertonic glucose na may kaunting initial peak concentrations at masubukan ang upper limit ng epekto ng glucose, nagdagdag lamang kami ng kaunting dugo sa D25W o D50W. Maglagay ng 1 ml ng D25W o D50W sa isang tubo at magdagdag ng 0.2 ml ng WB habang ini-vortex ang sample sa loob ng 10 segundo. Sa mga kasong ito, ang dugo ay nalantad sa glucose sa konsentrasyon na humigit-kumulang 20% ​​na mas mataas sa huling konsentrasyon, sa halip na 50% na mas mataas sa huling konsentrasyon tulad ng sa Phase 3, na nagresulta sa panghuling konsentrasyon ng glucose na 20.8% at 41.6%. Ang mga pinaghalong sample ay sinuri sa parehong agwat ng oras tulad ng sa hakbang 3.
Sa unang hakbang ng bawat serye ng glucose dilution, 30 sample ang kinuha dahil ito ang angkop na laki ng sample para sa pilot study [9]. Sa pagtatapos ng bawat yugto (kasama ang unang yugto), suriin ang kasapatan ng laki ng sample gamit ang pormulang ginamit upang matukoy ang laki ng sample na kailangan upang matantya ang mean ng tuloy-tuloy na outcome variable sa isang populasyon. Formula n = Z2 x SD2 /E2. Sa equation na ito, ang Z ay ang Z-score, ang SD ay ang standard deviation, at ang E ay ang ninanais na error [10]. Ang aming alpha ay 0.05, na tumutugma sa Z value na 1.96, at inaasahan namin ang error na 5 (sa porsyento). Kaya naman nilulutas namin ang n = (1.962 x SD2)/52. Ipinakita ng mga resulta na ang laki ng sample na kinakailangan para sa bawat yugto ay mas maliit kaysa sa aktwal na bilang na nakolekta.
Sa mga yugto 1, 3 at 4 na gumagamit ng higit sa isang konsentrasyon ng glucose, sinuri ang epekto ng iba't ibang konsentrasyon ng glucose sa pamamagitan ng paghahambing ng fractional na pagbabago sa pagitan ng oras 0 at bawat kasunod na oras (yugto 1 sa 15 minuto, yugto 3 sa 15 minuto). at apat sa 15 segundo, pagkatapos ay bawat dalawang minuto.) Ang mga rate ng pagbabago para sa bawat yugto ng panahon ay inihambing gamit ang Mann-Whitney U-test dahil ang datos ay hindi sumunod sa isang normal na distribusyon gaya ng tinukoy ng Shapiro-Wilk normality test. Dahil isang 1-to-1 na pagsusuri ng ilang grupo (lima) ang isinagawa sa una, ikatlo at ikaapat na hakbang (lima sa kabuuan), isang pagwawasto ng Bonferroni ang isinagawa upang ayusin ang nais na halaga ng alpha sa ≤0.01 ngunit hindi ≤0.05.
Pagbaba ng bilang ng platelet sa lahat ng konsentrasyon ng hypertonic dextrose at pagtaas ng MPV sa mga PRP platelet sa >12.5% ​​na konsentrasyon ng dextrose: Ang bilang ng PRP platelet ay tumaas mula isa hanggang limang beses na konsentrasyon kumpara sa baseline whole blood, na nag-iiba ayon sa pamamaraan (hindi inilalarawan). Pagbaba ng bilang ng platelet sa lahat ng konsentrasyon ng hypertonic dextrose at pagtaas ng MPV sa mga PRP platelet sa >12.5% ​​​​na konsentrasyon ng dextrose: Ang bilang ng mga PRP platelet ay tumaas mula isa hanggang limang beses ng konsentrasyon kumpara sa baseline whole blood, na nag-iiba ayon sa pamamaraan (hindi inilalarawan). Уменьшение количества тромбоцитов при всех концентрациях гипертонической декстрозы и увеличение MPV sa тромбRPо циприцрациях декстрозы > 12.5%: количество тромбоцитов PRP увеличилось в 1-5 раз по сравнению с исходной цельното кровьзаю, тим (hindi показано). Nabawasan ang bilang ng platelet sa lahat ng hypertonic dextrose concentrations at tumaas na MPV sa PRP platelets sa >12.5% ​​​​dextrose concentration: Ang bilang ng PRP platelet ay tumaas ng 1-5 beses kumpara sa baseline whole blood, depende sa paraan (hindi ipinapakita). ).在> 12.5% ​​的葡萄糖浓度下，所有浓度的高渗葡萄糖降低血小板计数，PRP 血小MP板中增加：与基线全血相比，PRP 血小板计数从浓度的1 倍上升到5 倍，因方法而异／／。 Sa >12.5% ​​​​na konsentrasyon ng glucose, ang mataas na konsentrasyon ng glucose ay nagpapababa sa bilang ng dugo, tumataas ang PRP blood MPV: kumpara sa 与基线全血, ang bilang ng PRP blood ay tumataas mula 1 hanggang 5 beses kaysa sa konsentrasyon (hindi inilarawan). При концентрациях глюкозы >12,5% все концентрации гипертонической глюкозы снижали количество тромбоц MPVлив тромбоцитах PRP: количество тромбоцитов PRP увеличивалось mula sa 1- до 5-кратных концентраций по сравнению с сисхотрация цельной крови, в зависимости от метода (не описано ). Sa konsentrasyon ng glucose na >12.5%, lahat ng altapresyon ng glucose ay nagpababa ng bilang ng platelet at nagpapataas ng MPV sa mga PRP platelet: Ang bilang ng PRP platelet ay tumaas ng 1 hanggang 5 beses kumpara sa baseline na konsentrasyon ng whole blood, depende sa pamamaraan (tulad ng inilarawan).Ipinapakita ng Pigura 1 na ang bilang ng mga platelet ay bumaba ng halos 75% pagkatapos ng pagbabanto sa tubig at ng 20-30% pagkatapos ng 15 minuto ng pagbabanto na may iba't ibang konsentrasyon ng glucose kumpara sa baseline PRP at isang 1:1 na pagbabanto na inayos para sa volume (1-k1 na may pagwawasto ng volume). k-1 breeding).1 breeding).
Ang bilang ng mga selula sa bawat pagbabanto ay ipinapahayag bilang isang bahagi ng orihinal na bilang bago ang pagbabanto.
Ang MPV ay minimal na bumaba sa panahon ng produksyon ng PRP, nang walang karagdagang pagbabago sa konsentrasyon ng dilution sa 12.5% ​​​​sa tubig o glucose (kabilang ang 25% na pinaghalong glucose ng PRP) at tumaas ng higit sa 20% pagkatapos ng dilution sa 50% na solusyon ng glucose (Larawan .2). Sa kabaligtaran, ang mga erythrocyte ay hindi nagpakita ng makabuluhang pagbabago sa volume sa anumang dilution maliban sa H2O.
Ang karaniwang dami ng mga selula sa bawat pagbabanto ay ipinapahayag bilang porsyento ng orihinal na dami bago ang pagbabanto.
Isang katulad ngunit hindi gaanong kapansin-pansing pagbaba sa bilang ng platelet at pagtaas sa CVR ang naobserbahan sa BC na nalantad sa 50% glucose (upang mabuo gamit ang 25% glucose). Inihahambing sa Talahanayan 2 ang bilang ng mga selula at dami ng selula sa whole blood na diluted sa 50% dextrose sa datos ng phase 1 PRP na diluted sa 50% dextrose. Ang mga pagbabago sa bilang ng RBC at RBC MCV ay hindi halata at hindi ang naging pokus ng aming atensyon.
SD = standard deviation, MD = mean difference sa pagitan ng mga grupo, SE = standard deviation ng mean difference, RBC = erythrocytes, PLT = platelets, PRP = platelet rich plasma, WB = whole blood
Matapos idagdag ang D50W sa WB, ang porsyento ng pagkawala ng platelet na na-adjust sa dilution ay 7.7% (310±73 vs. 286±96) kumpara sa 17.8% para sa PRP dilution sa D50W (664±348 vs. 544±277). Ang MPV WB ay tumaas ng 16.8% (mula 10.1 ± 0.5 hanggang 11.8 ± 0.6), habang ang MPV PRP ay tumaas ng 26% (9.2 ± 0.8 vs. 11.6 ± 0.7). Bagama't ang mean differences sa parehong pagbawas ng platelet count at pagtaas ng MPV ay mas malaki nang malaki sa PRP, ang mga pagbabago sa pagbawas ng platelet count sa loob ng WB ay halos makabuluhan (310 ± 73 hanggang 286 ± 96 (-7.7%); p = .06) at ang pagtaas sa MPV ay makabuluhan (10.1 ± 0.5 hanggang 11.8 ± 0.6 (+16.8) p < .001). Bagama't ang mean differences sa parehong pagbawas ng platelet count at pagtaas ng MPV ay mas malaki nang malaki sa PRP, ang mga pagbabago sa pagbawas ng platelet count sa loob ng WB ay halos makabuluhan (310 ± 73 hanggang 286 ± 96 (-7.7%); p = .06) at ang pagtaas sa MPV ay makabuluhan (10.1 ± 0.5 hanggang 11.8 ± 0.6 (+16.8) p < .001).Bagama't ang mean differences sa parehong pagbawas ng platelet count at pagtaas ng CVR ay mas malaki nang malaki sa PRP, ang mga pagbabago sa pagbaba ng platelet count sa loob ng WB ay halos makabuluhan (310 ± 73 hanggang 286 ± 96 (-7.7%); p = 0.06).увеличение MPV было значительным (mula sa 10,1 ± 0,5 hanggang 11,8 ± 0,6 (+16,8) p < 0,001). Ang pagtaas sa MPV ay makabuluhan (mula 10.1 ± 0.5 hanggang 11.8 ± 0.6 (+16.8) p < 0.001).尽管PRP 在血小板计数减少和MPV 增加方面的平均差异显着更大，但WB内血小板计数减少的变化几乎是显着的（310 ± 73 至286 ± 96 (-7.7%)；p = .06）和MPV的增加是显着的（10.1 ± 0.5 到11.8 ± 0.6 (+16.8) p < .001）。PRP PRP的 几乎 是 显着 的 （（（310 ± 73 至 286 ± 96 (-7.7%) ； p = .06）和MPV 的增加是显着的1（10.1 ±8. 0.6 (+16.8) p <.001）.Ang pagbabago sa pagbawas ng bilang ng platelet sa loob ng WB ay halos makabuluhan (mula 310 ± 73 hanggang 286 ± 96 (-7.7%); p = 0.06), bagama't ang PRP ay may mas malaking mean differences sa pagbaba ng bilang ng platelet at pagtaas ng MPV, at ang pagtaas sa MPV ay makabuluhan.(mula sa 10,1 ± 0,5 hanggang 11,8 ± 0,6 (+16,8) р < 0,001). (mula 10.1 ± 0.5 hanggang 11.8 ± 0.6 (+16.8) p < 0.001).
Kinailangan ang pangwakas na konsentrasyon na 20% glucose upang makita ang isang makabuluhang pagbabago sa MPV, ngunit ang pagbabago sa MPV ay mas kapansin-pansin sa pangwakas na konsentrasyon na 25%. Ang pagkawala ng platelet ay naging matatag pagkatapos ng unang pagbaba. Napansin namin ang isang paunang matinding pagbaba sa CVR, gayunpaman, ang CVR ay mabilis na naibalik sa 25% na pangwakas na konsentrasyon ng glucose, na mas mataas nang malaki kaysa sa mga antas ng CVR na naobserbahan sa pangwakas na konsentrasyon ng glucose na 20% at 15% (Larawan 3 at sa kaliwa ng Talahanayan 3; mga may kulay na kahon). nagpapahiwatig ng mga p-value ​​≤ alpha na may koreksyon ng Bonferroni na 0.01). Nagkaroon din ng paunang matinding pagbaba sa bilang ng PLT, na naobserbahan sa paunang yugto ng 0-15 segundo, at pagkatapos ay nanatiling matatag (mula 15 segundo hanggang 30 minuto; kaliwa ng talahanayan 4).
Ang pagdaragdag ng iba't ibang konsentrasyon ng glucose sa buong dugo ay nagresulta sa isang mabilis na pagbaba sa MPV na sinundan ng pagbawi na nakadepende sa konsentrasyon na higit sa 20%. Ipinapakita ng alamat ang konsentrasyon ng glucose pagkatapos ng pagbabanto. Ang D15, D20 at D25 ay isinagawa sa isang 1:1 na pagbabanto. Ang D21 at D41 ay isinagawa sa isang 1:5 na pagbabanto.
Ipinapakita ng Talahanayan 4 ang pagbabago sa bilang ng platelet kapag natunaw sa hypertonic glucose. Naobserbahan namin ang isang dose-dependent na relasyon sa pagitan ng agarang pagbaba ng mga bilang ng PLT sa 1:1 dilution at sa 1:5 dilution. Kung ikukumpara ang 1:1 dilutions bilang isang grupo sa 1:5 dilutions, ang 1:1 group ay nagkaroon ng agarang pagbaba sa bilang ng platelet na mas mababa kaysa sa 1:5 group na 66±48,000 (23%) kumpara sa 99±69,000 (37%), p = 0.014) sa 1:5 group. Pagkatapos ng unang pagbaba sa unang punto ng pagsukat, ang bilang ng platelet bilang porsyento ng glucose ay naging matatag (Fig. 4).
Kapag ang whole blood ay idinagdag sa glucose sa 1:1 ratio, ang bilang ng platelet ay nababawasan ng humigit-kumulang 25%. Gayunpaman, nang ang whole blood ay idinagdag sa ratio na 1:5, ang pagbawas ay mas malaki – humigit-kumulang 50%.
Ang 41% glucose ay nagpataas ng MPV nang mas mabilis at mas kapansin-pansin kaysa sa 25% o 21%. Ang mga resulta ng MPV ay ipinapakita sa Figure 3. Sa lahat ng iba pang mga dilution, walang agarang paunang pagbaba sa MPV ang naobserbahan pagkatapos ng pagdaragdag ng 50% glucose. Kapag gumagamit ng 25% glucose (konsentrasyon ng glucose na 20.8% sa huling dilution), ang pagbabago sa MPV ay maihahambing sa pagbabago sa 20% glucose sa 1:1 dilution (Fig. 3). Bagama't ang mga pagbabago sa MPV ay mas malaki sa simula sa 41% mixed concentration kaysa sa 25%, ang pagkakaiba sa MPV sa pagitan ng 41% at 25% pagkatapos ng 16 na minuto ay hindi na makabuluhan (Talahanayan 3, kanan). Kapansin-pansin din na ang 25% glucose ay mas epektibong nagpataas ng MPV kaysa sa 20.8%.
Bahagyang nakumpirma ng in vitro na pag-aaral na ito ang aming hipotesis. Nagpakita ito ng potensyal na partial platelet lysis sa pamamagitan ng paghahalo ng dextrose, isang mabilis na akomodasyon ng mga platelet sa matinding hypertonicity, at isang makabuluhang pagtaas sa MPV bilang tugon sa > 25% na konsentrasyon ng hypertonic dextrose. Nagpakita ito ng potensyal na partial platelet lysis sa pamamagitan ng paghahalo ng dextrose, isang mabilis na akomodasyon ng mga platelet sa matinding hypertonicity, at isang makabuluhang pagtaas sa MPV bilang tugon sa > 25% na konsentrasyon ng hypertonic dextrose. Он показал потенциальный частичный лизис тромбоцитов примесью декстрозы, быструю аккомодацию тромбоцэтокськов д гипертонуса и значительное повышение MPV sa ответ на гипертоническую концентрацию декстрозы > 25%. Nagpakita ito ng potensyal na partial platelet lysis gamit ang dextrose, mabilis na platelet accommodation hanggang sa matinding hypertonicity, at isang makabuluhang pagtaas sa MPV bilang tugon sa hypertonic dextrose levels na >25%.它显示出通过葡萄糖混合物潜在的部分血小板溶解，血小板快速适应极端速适应极端高店浓度的高渗葡萄糖时MPV 显着上升。它 显示 出 通过 葡萄糖 潜在 的 部分 血小板 溶解 血小板 快速 适应 极端 ，响应> 25% 浓度 高渗 葡萄糖 时 时 mpv 显着。。。。。 Он показывает потенциальный частичный лизис тромбоцитов смесями с глюкозой, быструю адаптацию тромболиктов гипертонусу и значительное увеличение MPV sa ответ на концентрацию гипертонической глюкозы > 25%. Nagpapakita ito ng potensyal na partial platelet lysis dahil sa mga mixture ng glucose, mabilis na pag-aangkop ng platelet sa matinding hypertonicity, at isang makabuluhang pagtaas sa MPV bilang tugon sa hypertonic glucose na >25%.Ang unang pagtaas ay pinakamataas sa 41.6% na pagkakalantad sa glucose, ngunit ang pagtaas sa MPV ay lumapit sa 25% na pagkakalantad sa glucose humigit-kumulang 20 minuto pagkatapos ng pagkakalantad.
Ang konsentrasyon ng mga platelet ay apektado ng glucose. Napansin namin na ang dami ng PLT ay bumaba sa lahat ng dilution ng glucose. Ang isang matinding pagbaba sa bilang ng mga platelet sa H2O (0%) dilutions ng PRP series ay maaaring nauugnay sa osmotic lysis. Bilang kahalili, maaari itong maging isang artifact na dulot ng platelet clumping, ngunit ito ay kabaligtaran ng kawalan ng pagbabago sa MPV sa dilution na ito. Ang natuklasang ito ay nangangahulugan na ang ilang mga platelet ay napaka-sensitibo sa hypoosmolarity.
Sa lahat ng 1:1 dilutions ng glucose, ang dami ng PLT ay bumaba ng 20-30%, kahit na sa D5W (hypotonic sa 252 mOsm), na maaaring magpahiwatig ng isang partikular na non-osmotic effect ng glucose, dahil ang parehong PLT at MPV ay nanatiling hindi nagbabago sa tatlong beses na pagtaas sa konsentrasyon. glucose. mula D5W hanggang D25W. Sa katunayan, ang mga konsentrasyon ng PLT ay may posibilidad na bahagyang tumaas kasabay ng pagtaas ng osmolarity.
Ang pagbaba ng PLT sa pagitan ng 1:1 at 1:5 na mga dilusyon ay nangangahulugan na ang epekto ng pagkatunaw ay nakasalalay sa paunang at panghuling konsentrasyon ng glucose. Kung ito ay nakadepende lamang sa paunang konsentrasyon, aasahan na makakakita ng pagkakaiba sa pagbawas ng PLT sa pagitan ng 1:1 na mga konsentrasyon. Ngunit hindi natin ito ginagawa. Kung ang epekto ng lysis ay nakadepende lamang sa panghuling konsentrasyon ng glucose, hindi natin inaasahan ang malaking pagkakaiba sa pagitan ng 20% ​​1:1 na dilusyon at 20.8% 1:5 na dilusyon. Gayunpaman, nagawa natin ito.
Kung ang pagkawala ng platelet ay nangyayari dahil sa platelet lysis, isang bahagyang lysate ang nabubuo, pagkatapos nito ay inilalabas ang mga cytokine at growth factor sa extracellular environment. Ipinakita ng ilang pag-aaral na ang platelet lysate ay halos kasing epektibo ng PRP bilang isang proliferation solution [11]. Ang PRP mismo ay naipakita na isang epektibong solusyon para sa paggamot ng proliferation [12-14].
Ang mga hindi aktibong platelet ay umiikot sa anyo ng isang disk na pinatibay na may ilang panloob na istruktura. Sa panahon ng pag-activate, nagkakaroon sila ng mas spherical o hugis amoeba, na nagreresulta sa pagtaas ng volume. Ang pagtaas ng volume ay nangangailangan ng pagtaas sa surface area, na resulta ng extrusion ng open tubule system (OCS) at ang pagdaragdag ng exocytic granules sa membrane. Kailangan pang matukoy kung ang pagtaas ng MPV na dulot ng hypertonic glucose ay kinabibilangan ng isa o pareho sa mga mekanismong ito, ngunit kung ang huli, ang pagtaas ng MPV ay magpapakita ng degranulation.
Ipinakita ng pag-aaral na ito na ang pagkakalantad sa mataas na konsentrasyon ng glucose sa PRP o whole blood platelets ay nagresulta sa pagtaas ng MPV sa loob ng 15 minuto na may konsentrasyon ng glucose na 25% at 41.6%, ayon sa pagkakabanggit.
Ang pagtaas ng platelet MPV ay maaaring dahil sa pagluwang ng nakapalibot na mga gusot ng microtubule bilang tugon sa pagdagsa ng calcium. Ipinakita nina Liu et al. na ang glucose ay namamagitan sa pagdagsa ng calcium sa pamamagitan ng platelet TRPC6 channel [6]. Ang aming hipotesis ay ang glucose ay nagdudulot ng pagluwag ng mga gusot ng microtubule, na humahantong sa pagtaas ng MPV at sensitization at/o activation ng platelet. Gayunpaman, batay sa aming mga resulta, bahagi lamang ito ng kwento. Sa aming mga pagsusuri, walang konsentrasyon sa ibaba ng D25W ang nagresulta sa pagtaas ng MPV. Dahil hindi pa namin nasubukan ang pagkakalantad sa mga konsentrasyon ng glucose sa pagitan ng 12.5% ​​​​at 25%, ang aming mga resulta sa phase 1 ay nagmumungkahi na maaaring mayroong isang threshold sa hanay na ito ng mga konsentrasyon ng glucose na humahantong sa pagtaas ng MPV. Ang karagdagang pagsusuri sa mga yugto 3 at 4 ay nagpakita na ang 20-25% na glucose ay tila ang threshold para dito, ngunit nananatiling hindi malinaw kung bakit.
Naobserbahan din namin ang ~9% na pagbaba sa MPV pagkatapos ng centrifugation. Hindi malinaw kung ang pagbabang ito sa MPV ay dahil sa mas malalaki at mas siksik na mga platelet na nakulong sa RBC layer ng centrifuge. Ang obserbasyong ito ay maaaring mahalaga sa mga clinician dahil maaaring ipahiwatig nito na ang mga PRP platelet ay isang mas maliit at hindi gaanong siksik na subset ng mga WB platelet.
Sa isang nakaraang pag-aaral, ipinakita namin na ang paghahanda ng PRP sa pamamagitan ng manu-manong pamamaraan ay mura [8]. Kung ang glucose ay nagpapasensitibo sa mga tissue platelet o PRP, na nagiging mas madaling kapitan ng pag-activate, o kung ang PRP ay nalilikha na may mga katangiang partial lysate, maaari nitong mapahusay ang regeneration at mabawasan ang pangangailangan para sa therapy. Samakatuwid, ang kombinasyon ng PRP at highly concentrated glucose ay maaaring mas matipid kaysa sa PRP o glucose lamang.
Ang aming pag-aaral ay may ilang mga kakulangan. Una, gumagamit kami ng PRP na nakuha mula sa iba't ibang pamamaraan. Maaari itong humantong sa magkasalungat na mga resulta. Pangalawa, hindi namin nagawang magsagawa ng biochemical analysis sa alinman sa aming mga sample upang mas tumpak na matukoy kung naganap ang platelet activation. Nais naming sukatin ang P-selectin, platelet factor 4, monocytic platelet aggregates, o iba pang mga marker ng platelet activation upang mas maunawaan ang antas o presensya ng alpha granule degranulation, ngunit ito ay lampas sa saklaw ng pag-aaral na ito. Pangatlo, hindi namin nakumpirma sa pamamagitan ng electron microscopy o iba pang mga pamamaraan na ang pagtaas ng MPV sa mga glucose-exposed platelet ay dahil sa epekto sa microtubule tangles.
Ang mga halo ng WB o PRP na may 25% glucose ay nagpataas ng MPV, na hudyat ng pagsisimula ng pag-activate ng platelet, bagama't hindi ipinakita ng pag-aaral na ito ang pag-usad ng aggregation o degranulation. Ang hypertonic glucose mixture ay nagresulta sa pagkawala ng platelet, na posibleng kumakatawan sa isang lytic effect. Ang bahagyang pag-activate o lysis ng mga platelet ay maaaring magdulot ng tissue regeneration pagkatapos ng platelet injection. Hindi malinaw kung ano ang mga klinikal na kahihinatnan na maaaring idulot ng mga pagbabagong ito. Ang mga karagdagang pag-aaral ay nagpakita ng mas tumpak na mga sukat ng activation o lysis at sinuri ang iba't ibang klinikal na epekto ng mga hypertonic glucose mixture na may WB o PRP.
Ang glucose proliferative therapy ay isang simple at murang regenerative therapy na mabilis na lumalawak at sumusuporta sa klinikal na pananaliksik. Ang pag-aaral na ito ay nagmumungkahi ng isang mekanismong pisyolohikal na, kung makumpirma, ay makakatulong sa atin na maunawaan ang bahagi ng mekanismong regenerative ng proliferative therapy.
Biomedikal at Impormasyong Pangkalusugan sa Unibersidad ng Missouri, Paaralan ng Medisina ng Kansas City, Kansas City, Estados Unidos
Mga Paksa ng Tao: Lahat ng kalahok sa pag-aaral na ito ay nagbigay o hindi nagbigay ng pahintulot. Ang International Society for Cellular Medicine ay naglabas ng pag-apruba ng ICMS-2017-003. Ang sumusunod na protokol ay inaprubahan para sa karagdagang paggamit ng Institutional Review Board ng International Society for Cellular Medicine: Pamagat: Pagkalkula ng platelet-rich plasma drug yield batay sa baseline CBC platelet count. Mga Paksa ng Hayop: Kinumpirma ng lahat ng mga may-akda na walang mga hayop o tisyu na kasangkot sa pag-aaral na ito. Mga Salungatan ng Interes: Alinsunod sa ICMJE Uniform Disclosure Form, ipinapahayag ng lahat ng mga may-akda ang mga sumusunod: Impormasyon sa pagbabayad/serbisyo: Ipinapahayag ng lahat ng mga may-akda na hindi sila nakatanggap ng suportang pinansyal mula sa anumang organisasyon para sa isinumiteng gawain. Mga Ugnayang Pinansyal: Ipinapahayag ng lahat ng mga may-akda na wala silang kasalukuyang o sa loob ng nakaraang tatlong taon na mga ugnayang pinansyal sa anumang organisasyon na maaaring interesado sa isinumiteng gawain. Iba Pang Mga Relasyon: Ipinapahayag ng lahat ng mga may-akda na walang iba pang mga relasyon o aktibidad na maaaring makaapekto sa isinumiteng gawain.
Harrison TE, Bowler J, Reeves K et al. (Mayo 17, 2022) Ang epekto ng glucose sa bilang at dami ng platelet: mga implikasyon para sa regenerative medicine. Cure 14(5): e25081. doi:10.7759/cureus.25081
© Copyright 2022 Harrison et al. Ito ay isang artikulong open access na ipinamamahagi sa ilalim ng mga tuntunin ng Creative Commons Attribution License CC-BY 4.0. Pinapayagan ang walang limitasyong paggamit, pamamahagi, at pagpaparami sa anumang midyum, basta't ang orihinal na may-akda at pinagmulan ay may kredito.